Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2009. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-11T19:00:17Z No. of bitstreams: 1 2009_DeboraRabelloMesquita.pdf: 2872995 bytes, checksum: c30400791a23e4980f61cb4759a48ee9 (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-03-17T12:21:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_DeboraRabelloMesquita.pdf: 2872995 bytes, checksum: c30400791a23e4980f61cb4759a48ee9 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-03-17T12:21:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_DeboraRabelloMesquita.pdf: 2872995 bytes, checksum: c30400791a23e4980f61cb4759a48ee9 (MD5) Previous issue date: 2009 / Em crianças, as leucemias, predominantemente do tipo aguda, são a forma mais comum de câncer. Informações a respeito das alterações genéticas recorrentes são importantes para a confirmação diagnóstica, caracterização biológica e apresentam grande valor prognóstico nas leucemias. No entanto, no Distrito Federal, não há relatos a respeito de suas freqüências. Utilizando-se as técnicas de obtenção de metáfases a partir do cultivo de células de medula óssea e RT-PCR foram pesquisadas as alterações genéticas recorrentes em 133 pacientes pediátricos portadores de leucemia, no período de 2005 a 2007, correspondendo a 78,70% do total registrado no Hospital de Apoio de Brasília. Observaram-se um total de 88 casos de LLA de linhagem B, 34 de LMA, sete de leucemia aguda bifenotípica e quatro de LMC, correspondendo, respectivamente, a 66,17%, 25,56%, 5,26% e 3,01% do total analisado. Entre os 79 casos com análise cariotípica completa, 47 apresentaram cariótipo normal e 32 outros evidenciaram alterações cromossômicas, sendo: hiperdiploidia (12), hipodiploidia (7), pseudodiploidia (12) e trissomia do 21 (1). Transcritos híbridos recorrentes foram identificados em 17 casos de LLA de linhagem B, sendo BCR/ABL p190 (1), E2A/PBX1 (5), TEL/AML1 (10) e MLL/ENLA1 (1) e em onze de LMA: AML1/ETO (5), PML/RAR (3), CBF /MYH11 (3). Para os transcritos: MLL/AF4, MLL/AF9, MLL/ENLA2 e MLL/ELL, nenhuma amplificação foi observada. Para cada transcrito foi verificada variação no valor das freqüências obtidas ano a ano. Questões relacionadas à heterogeneidade étnica são discutidas, sugerindo-se influência deste fator na variação encontrada. Os valores referentes às freqüências do transcrito TEL/AML1 identificados, no presente trabalho, são inferiores à média de 25% relatada em países industrializados. Análise comparativa da freqüência do referido transcrito é realizada entre países com diferentes graus de industrialização, identificando-se possível correlação entre este fator e a freqüência de TEL/AML1, o que leva a considerar a possibilidade de ocorrência de uma etiologia infecciosa para a leucemia infantil. Não houve concordância entre os resultados obtidos a partir das análises citogenética e molecular. A análise molecular, por RT-PCR, foi considerada como técnica ideal para a detecção de transcritos híbridos, enquanto que a análise citogenética contribuiu para a identificação de alterações cromossômicas numéricas, alterações estruturais não recorrentes e pseudodiploidias sem transcrito correspondente. O trabalho realizado permitiu a instalação de uma Unidade de Diagnóstico Molecular de Leucemias no Distrito Federal, ao possibilitar a incorporação do exame molecular no grupo de exames realizados ao diagnóstico em todos os pacientes com suspeita de leucemia, registrados no Hospital de Apoio de Brasília. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Leukemias, mainly of the acute type, are the most common form of cancer in children. Information about recurrent genetic alterations is important for diagnostic confirmation and biological characterization, and this represents great prognostic value in leukemias. However, in the Federal District there are no reports on their frequency. Using techniques that obtain metaphases from the cultivation of bone marrow cells and RT-PCR, recurrent genetic alterations were studied in 130 pediatric leukemia patients, from 2005 to 2007, corresponding to 78,70% of the total number recorded at the Hospital de Apoio of Brasília. A total of 88 cases of LLA of B lineage, 34 of LMA, seven of acute biphenotypic leukemia and four of LMC were observed, corresponding, respectively, to 66.17%, 25.56%, 5.26% and 3.01% of the whole group analyzed. Among the 79 cases with complete karyotypic analysis, 47 presented a normal karyotype and 31 others showed chromosomal alterations, which were divided thus: hyperdiploidy (12), hypodiploidy (7), pseudodiploidy (12) and trisomy-21 (1). Recurrent hybrid transcripts were identified in 17 cases of LLA of B lineage, and these were BCR/ABL p190 (1), E2A/PBX1 (5), TEL/AML1 (10) and MLL/ENLA1 (1) and in eleven of LMA: AML1/ETO (5), PML/RAR (3), CBF /MYH11 (3). For transcripts MLL/AF4, MLL/AF9, MLL/ENLA2 and MLL/ELL, no amplification was observed. For each transcript there was a variation in the value of frequencies obtained year on year. Questions relating to ethnic heterogeneity are discussed, suggesting that this is a factor in the variation encountered. The values referring to frequencies in the TEL/AML1 transcripts identified in the current work are below the average of 25% reported in industrialized countries. Comparative analysis of the frequency of the transcript is carried out among countries with different levels of industrialization, identifying a possible correlation between this factor and the frequency of TEL/AML1, which leads one to consider the possibility of there being an infectious etiology for child leukemia. There was no match between the results obtained from cytogenetic and from molecular analyses. Molecular analysis, by RT-PCR, was considered to be the ideal technique to detect hybrid transcripts, while cytogenetic analysis helped to identify numerical chromosomal alterations, non-recurrent structural alterations and pseudodyploidies with no corresponding transcript. This work allowed a Molecular Leukemia Diagnosis Unit to be installed in the Federal District, making it possible for the molecular test to be incorporated in the group of tests carried out when diagnosing all patients with suspected leukemia, registered at the Hospital de Apoio of Brasília.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, Programa de Pós-Graduação em Ciências Floretais, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-01-03T13:26:26Z No. of bitstreams: 1 2013_LaissaCasteloSchwingelSiston.pdf: 4394728 bytes, checksum: 75a01fdbec0895d05b5971aaa47591c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-01-03T13:36:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LaissaCasteloSchwingelSiston.pdf: 4394728 bytes, checksum: 75a01fdbec0895d05b5971aaa47591c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-03T13:36:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LaissaCasteloSchwingelSiston.pdf: 4394728 bytes, checksum: 75a01fdbec0895d05b5971aaa47591c9 (MD5) / A conservação de sementes é de suma importância para a preservação da diversidade biológica em bancos de germoplasma. A avaliação da viabilidade das sementes é realizada principalmente através de testes de germinação, porém este não é capaz de detectar danos decorrentes do envelhecimento natural em seus estádios iniciais, minimizando os efeitos da erosão genética ao regenerar a amostra quando muitas sementes do acesso já se encontram mortas. Nesse contexto o objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da deterioração de sementes de Dalbergia nigra por meio do teste de tetrazólio, condutividade elétrica e análises citogenéticas. As sementes coletadas foram envelhecidas artificialmente, sendo mantidas a 42°C por 24, 48, 72 e 96 horas. Posteriormente foram realizados os testes de germinação, tetrazólio, condutividade elétrica e citogenético. O experimento foi realizado com delineamento inteiramente casualizado com 4 repetições de 25 sementes por tratamento, para cada variável analisada, para sementes armazenadas e recém coletadas. A análise estatística foi efetuada por meio de análise de variância entre os tratamentos, seguido pelo teste de Tukey, a 5%. Foi feita a correlação simples entre as variáveis avaliadas e a germinação e também a correlação multivariada, que evidencia o efeito conjunto de variáveis sobre a germinação, utilizando-se modelos de regressão linear, quadráticos e modelos não lineares. Os resultados mostraram que à medida que o tempo de envelhecimento aumentou a germinação diminuiu. Esses dados foram comprovados com o teste de tetrazólio, que apresentou correlação muito alta com a germinação. O teste de condutividade elétrica identificou que um dos lotes de sementes estava com qualidade fisiológica muito baixa, porém, dentro de um mesmo lote, não se mostrou eficiente em distinguir sementes com distintos níveis de qualidade fisiológica. O índice de velocidade de germinação mostrou-se como o teste mais promissor para identificar lotes com perda de qualidade fisiológica. A frequência das anormalidades encontradas na mitose aumentou com o tempo de duração do teste de envelhecimento acelerado, sugerindo que a germinação diminui à medida que a frequência de aberrações cromossômicas aumenta, sendo as anormalidades ponte e cromossomo retardatário as que apresentam efeito mais pronunciado. De acordo com os dados obtidos, sugere-se que, em associação aos testes de germinação seja avaliado também o índice de velocidade de germinação como forma de detecção de envelhecimento de forma precoce. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The conservation of seeds is of utmost importance for the preservation of the biological diversity in germplasm banks. The evaluation of the viability of the seeds is accomplished mainly through germination tests; however, this is not capable to detect related damages of the natural aging in its initial stadiums, minimizing the effects of the genetic erosion when regenerating the sample, when many seeds of the seed lot already meet dead. In this context, the objective of this study was to evaluate the effect of seed deterioration in Dalbergia nigra by the tétrazolium test, electrical conductivity and cytogenetic analyzes. The collected seeds were artificially aged, being kept at 42 ° C for 24, 48, 72 and 96 hours. Subsequently, we performed the germination tests, tétrazolium, electrical conductivity and cytogenetics. The experiment was conducted with a completely randomized design with 4 replications of 25 seeds per treatment for each variable analyzed, stored seeds and newly collected. The statistical analysis was performed by analysis of variance between treatments, followed by Tukey test at 5%. It was made the simple correlation between the variables assessed and germination, and also the multivariate correlation, which reflects the joint effect of variables on the germination, using linear regression models, quadratic and nonlinear models. The results showed that as the aging time increased the germination decreased. These data were confirmed with the tétrazolium test, which showed very high correlation with the germination. The electrical conductivity test identified that one lot of seed were with physiological quality too low, however, within the same batch, did not show efficient to distinguish seeds with different physiological quality levels. The rate of germination speed showed up as the most promising test to identify lots with loss of physiological quality. The frequency of abnormalities found in mitosis increased with the duration of the accelerated aging test, suggesting that the germination decreases as the frequency of chromosomal aberrations decreases, and abnormalities bridge and latecomer chromosome, those that present most pronounced effect. According to the data obtained, it is suggested that, in association to the germination test is also evaluated the rate of germination speed as a way of detecting the premature aging.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-05-06T13:24:18Z No. of bitstreams: 1 2011_CarlosAlbertoPintoSilveira.pdf: 5518240 bytes, checksum: 757cb0184d2aada5bbe9321ff8efa9a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-05-07T13:13:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_CarlosAlbertoPintoSilveira.pdf: 5518240 bytes, checksum: 757cb0184d2aada5bbe9321ff8efa9a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-05-07T13:13:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_CarlosAlbertoPintoSilveira.pdf: 5518240 bytes, checksum: 757cb0184d2aada5bbe9321ff8efa9a3 (MD5) / A leucemia mielóide crônica é doença mieloproliferativa crônica, caracterizada pela presença do cromossomo Filadélfia, que é o resultado da translocação balanceada entre os cromossomos 9 e 22. A conseqüência molecular desta translocação é a formação de um gene híbrido BCR-ABL, que codifica uma proteína quimérica com atividade tirosina quinase, diretamente implicada na patogênese da doença. O mesilato de imatinibe (Glivec®) é um inibidor seletivo dessa enzima. O presente estudo realizou uma análise descritiva, observacional e retrospectiva de pacientes atendidos no ambulatório de Hematologia do Hospital de Base de Brasília, no período compreendido entre maio de 2002 a abril de 2009 e teve como objetivo, avaliar a eficácia do tratamento com mesilato de imatinibe como opção de primeira linha, em portadores de leucemia mielóide crônica em fase crônica, através das respostas hematológica e citogenética, assim como pela avaliação de desfechos de longo prazo, como a sobrevida global e sobrevida livre de progressão para fases mais adiantadas da doença. Cento e cinco pacientes foram elegíveis, sendo que 98 (93,3%) deles, em fase crônica precoce, isto é, menos de um ano entre diagnóstico e início do tratamento. Cinquenta e cinco (70,5%) de 78 pacientes foram classificados como de risco intermediário ou alto risco, de acordo com o escore prognóstico de Sokal. A taxa de resposta hematológica foi de 96,4% ao longo do estudo. Aos doze meses, as respostas citogenéticas maior e completa foram de 71,7% e 65,9%, respectivamente, enquanto aos 48 meses, de 83,7% e de 80,5%, respectivamente. A resposta molecular maior apresentou taxa crescente de resposta acumulada, chegando a 59,5% aos 48 meses. A sobrevida global foi de 92,1% aos 48 meses, com 89,3% dos pacientes apresentando sobrevida livre de progressão para fases mais avançadas da doença, no mesmo período. A resposta citogenética maior aos 12 meses correlacionou-se, significativamente, com a sobrevida global (p = 0,010) e com a sobrevida livre de progressão (p = 0,032). Não houve diferenças significativas nas taxas de resposta citogenética completa aos 12 meses (p = 0,592), na sobrevida global (p = 0,489) e na sobrevida livre de progressão (p = 0,306), de acordo com o escore prognóstico de Sokal. A dose utilizada foi de 400mg ao dia, em média. A medicação foi bem tolerada, com apenas 2 (1,9%) dos pacientes mostrando toxicidade hematológica graus 3 – 4. A mediana de seguimento foi de 23 meses (variação de 3 a 97 meses). Ao término da avaliação 73 (69,5%) dos pacientes ainda faziam uso do mesilato de imatinibe e 32 (30,5%) tinham descontinuado a medicação, sendo que 18 (17.1%), por resposta insatisfatória. O tratamento de pacientes portadores de Leucemia Mielóide Crônica em fase crônica, com mesilato de imatinibe, proporcionou taxas de respostas inferiores às dos principais estudos clínicos, mas relacionou-se com sobrevida livre de progressão e sobrevida global em significativa proporção de pacientes. Seguimento por tempo mais prolongado será necessário para melhor avaliação dos desfechos de sobrevida, dado o relativo curto período de observação. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chronic myeloid leukemia is a myeloproliferative disorder characterized by Philadelphia chromossome, which is the result of a balanced translocation between chromosomes 9 and 22. The molecular consequence of this translocation is a hybrid BCR-ABL gene, which encodes a chimeric protein with tyrosine kinase activity, directly implicated in the pathogenesis of the disease. Imatinib mesylate (Glivec®) is a selective inhibitor of such protein. This was a descriptive, observational and retrospective analysis of patients in Hospital de Base, Brasília-Brazil, followed from May 2002 to April 2009. The aim was to assess the efficacy of imatinib mesylate as front-line therapy in chronic-phase chronic myeloid leukemia patients, with hematologic and cytogenetic response, as well the long-term outcomes, such overall survival and progression-free survival to later stages of the disease. One hundred and five patients were eligible and 98 (93.3%) were in late chronic-phase, that is, less than one year, from the start of therapy. Fifty-five (70.5%) out of 78 patients were in intermediate or high risk group of Sokal score. The hematologic response rate was 96.4% at any time during the observation period. The cumulative rates of major and complete cytogenetic responses at 12 months were 71.7% and 65.9%, respectively, while at 48 months, they were 83.7% and 80.5%, respectively. Molecular response rate improved slowly and steadily over time, reaching 59.5% at 48 months. The 4-year overall survival and progression free survival rates were 92.1% and 89.3%, respectively. Cytogenetic response by 12 months significantly correlated with overall survival (p = 0.010) and progression-free survival (p = 0,032). There were no significant differences in the rates of complete cytogenetic response at 12 months (p = 0.592), in overall survival (p = 0.489) and in progression free survival (p = 0.306), according to Sokal risk score. The dose of imatinib was 400 mg daily on average and the drug was well tolerated, with only 2 (1.9%) patients showing hematological toxicity grades 3-4. The median follow-up was 23 months (range 3 – 97). At the end of the evaluation 73 (69.5%) of patients were still using imatinib mesylate and 32 (30.5%) had discontinued the medication, eighteen (17.1%) for unsatisfactory response. Treatment with imatinib mesilate as frontline therapy in chronic-phase chronic myeloid leukemia patients, induced lower response rates than published data, but was related to satisfactory rates of survival and event-free survival. Best analysis of long-term outcomes requires extended follow-up, given the short observation period.

Sisyrinchium palmifolium L. é a espécie do gênero Sisyrinchium L. que apresenta maior distribuição e abundância na região Sul do Brasil. Este estudo busca melhor compreender a espécie S. palmifolium L. subsp. palmifolium e outras espécies pertencentes ao mesmo clado infragenérico através de análises citogenéticas e moleculares. Foram analisados 15 acessos, incluindo-se quatro espécies do clado IV (S. palmifolium subsp. palmifolium, S. decumbens Ravenna, S. nidulare (Hand.-Mazz.) I.M.Johnst e S. rectilineum Ravenna). As análises citológicas compreenderam determinação de número cromossômico, estudo cariotípico, comportamento meiótico, viabilidade e morfologia de pólen, além do conteúdo de DNA. Três das espécies investigadas tiveram seu número cromossômico determinado pela primeira vez, sendo estas diploides (2n = 2x = 18). Tais espécies apresentaram comportamento meiótico regular e alta viabilidade polínica (acima de 87%). Todas as espécies apresentaram grãos de pólen do tipo oblado esferoidal. Os dados relativos ao tamanho de genoma mostraram uma clara diferença entre as quatro espécies estudadas com valores 2C variando de 2.64 pg em S. decumbens a 5.30 pg em S. rectilineum. Tal variação reflete o tamanho dos cromossomos das espécies analisadas. Resultados preliminares de cariótipo revelaram que em S. decumbens os cromossomos variam de pequenos a médios enquanto S. palmifolium subsp. palmifolium e S. rectilineum possuem cromossomos médios a grandes. Apesar de apresentarem tamanhos cromossômicos diferentes, os cariótipos de S. decumbens, S. palmifolium subsp. palmifolium e de S. rectilineum parecem representar arquiteturas semelhantes, sendo que cromossomos submetacêntricos predominam entre as espécies. disso, observou-se que os cariótipos dessas espécies são simétricos. Com relação a Sisyrinchium decumbens, espécie endêmica do Sul do Brasil e com distribuição restrita, foi realizado o estudo da diversidade genética de três populações. Dados de variabilidade intra e interpopulacionais foram obtidos com marcadores de ISSR. Alto polimorfismo e grande variação genética entre indivíduos nas populações foram observados. Valores de FIS = 0,68 e FST = 0,32 indicaram que a maior parte da variação encontra-se ao nível intrapopulacional e não entre as populações. Esses resultados, associados à PCoA, revelaram importante estruturação genética das populações. O teste de Mantel mostrou não haver correlação entre distâncias genéticas e geográficas. O tipo de dispersão das sementes (barocoria, neste caso) e o comportamento dos polinizadores dessa espécie podem estar contribuindo de maneira significativa para que estas populações se mantenham como entidades separadas. Este estudo revela, de forma inédita, a diversidade e estruturação populacional de uma espécie endêmica de Sisyrinchium. Também é reforçada, pelas análises de número cromossômico e de morfologia do grão de pólen, a forte relação filogenética dessa espécie com S. palmifolium subsp. palmifolium, S. nidulare e S. rectilineum, enquanto que as diferenças no tamanho de genoma e de cromossomos possibilitaram a diferenciação das espécies abordadas. / Sisyrinchium palmifolium L. is the most abundant and widely distributed species within Sisyrinchium L. in southern Brazil. This study aims a better comprehension of S. palmifolium L. subsp. palmifolium and other species belonging to the same infrageneric clade through cytogenetical and molecular analyses. Fifteen accessions were assessed which included four species from the clade IV (S. palmifolium subsp. palmifolium, S. decumbens Ravenna, S. nidulare (Hand.-Mazz.) I.M.Johnst and S. rectilineum Ravenna). Cytological analyses included chromosome number determination, karyotype study, meiotic behaviour, pollen viability and morphology, and DNA content. Three of the investigated species had their chromosome number determined for the first time; all of which were diploids (2n = 2x = 18). These species presented stable meiotic behaviour and high pollen viability (over 87%). All species had oblate spheroidal type pollen grains. Data regarding genome size showed a clear difference between the four studied species, which had 2C values ranging from 2.64 pg in S. decumbens to 5.30 pg em S. rectilineum. Such variation reflects the chromosome sizes of the analysed species. Preliminary karyotype results revealed that in S. decumbens, chromosome sizes range from small to medium whereas S. palmifolium subsp. palmifolium and S. rectilineum have medium to large chromosomes. In spite of having different chromosome sizes, S. decumbens, S. palmifolium subsp. palmifolium and S. rectilineum appear to have similar karyotypic architectures, in which there is a predominance of submetacentric chromosomes among the species. We also found that these species have symmetrical karyotypes. Concerning Sisyrinchium decumbens, an endemic species to southern Brazil with restricted distribution, a study on the genetic diversity of three populations was carried out. Data on intra and interpopulational variability were obtained from ISSR markers. High polymorphism and great genetic variability among individuals within populations were observed. FIS and FST values (0.68 and 0.32, respectively) indicated that genetic variation was mostly found at the intrapopulational level rather than among populations. These results, associated with the PCoA, reveal an important genetic structuring of these populations. Mantel test showed no correlation between genetic and geographic distances. The type of seed dispersal (barochory, in this case) and pollinator behaviour may significantly contribute to this species’s population structure. This study reveals, for the first time, the diversity and population structure of an endemic Sisyrinchium species. By means of chromosome number and pollen grain morphology analyses, the strong phylogenetic relations of this species with S. palmifolium subsp. palmifolium, S. nidulare and S. rectilineum is reinforced, while differences in genome sizes and chromosome sizes enabled the differentiation of the species assessed in this work.

A fibropapilomatose (FP) é uma doença emergente com alta prevalência em tartarugas, caracterizada por múltiplos papilomas, fibromas e fibropapilomas cutâneos ou viscerais. Essa doença foi denominada inicialmente de “green turtle fibropapillomatosis” (GTFP) por ter sido registrada pela primeira vez em tartarugasverdes (Chelonia mydas). Na costa brasileira, o primeiro registro de FP foi em 1986 no Estado do Espírito Santo (ES) e, durante o período de 2000 a 2004, das 4.471 tartarugas-verdes examinadas, 14,96% apresentavam tumores. O agente etiológico da FP nas tartarugas-verdes ainda é incerto, mas acredita-se que seja de caráter multifatorial uma vez que poluição, temperatura da água e outros fatores interferem na ocorrência dos tumores. Um herpesvírus tem sido isolado de fibropapilomas e está presente em 95% das infecções naturais e 100% dos tumores induzidos experimentalmente. O objetivo deste estudo foi investigar a presença e caracterizar o vírus associado à FP em tartarugas-verdes, determinar a carga viral, pigmentação e escore de tumores e verificar a condição corporal das tartarugas; além de fazer a associação entre essas características. Este estudo foi dividido em três manuscritos. No primeiro, documentamos a ocorrência da FP em uma tartaruga-verde no Estado do Rio Grande do Sul (RS). O segundo e o terceiro trabalhos foram realizados com amostras de fibropapilomas de tartarugas-verdes encontradas nos estados do Ceará (CE), Bahia (BA), Espírito Santo (ES) e São Paulo (SP) porque esses estados apresentam uma frequência alta de FP e/ou um grande número de animais capturados em anos anteriores. O segundo estudo relata o sequenciamento de um fragmento de DNA do gene da DNA polimerase do herpesvírus em 38 amostras de fibropapilomas que revelam a ocorrência de seis variantes do vírus no Brasil. O último estudo relata a analise, por PCR e PCR em tempo real, de 175 amostras de fibropapilomas coletados nos estados de CE, BA, ES e SP e faz a associação da carga viral com o tipo de superfície dos tumores (lisa ou verrucosa), presença de pigmentação, condição corporal e escore de tumores nas tartarugas. Quarenta e três amostras foram submetidas à análise histopatológica para determinar o tipo de lesão. Quarente e cinco amostras de pele de tartarugas coletadas na Ilha de Trindade (livre de FP) foram analisadas em busca da presença do vírus. Todas as amostras de Trindade foram negativas para a presença do vírus e 87% das amostras foram positivas na PCR em tempo real. A maioria das amostras (75%) foi coletada de tartarugas sadias, 33% tinham escore de tumores 1, 28% escore 2 e 39% escore 3. Setenta por cento dos tumores eram verrucosos e 41% eram pigmentados. A carga viral máxima foi de 889.674,98 cópias/mg de tumor e animais com tumores de escore 3 apresentaram as mais altas cargas virais. Altas cargas virais também estavam associadas de forma significativa aos animais com fibropapilomatose encontrados mortos em SP e BA e a superfície verrugosa dos tumores nas tartarugas amostradas no CE. / The fibropapillomatosis (FP) is an emerging disease with high prevalence in turtles, characterized by multiple cutaneous or visceral papillomas, fibromas and fibropapillomas. The disease was initially called green turtle fibropapillomatosis (GTFP) because it was first recorded in green turtles (Chelonia mydas). In the Brazilian coast, the FP was first recorded in 1986 in the State of Espirito Santo, and during the period of 2000 until 2004, 14.96% of the 4471 green turtles examined had tumors. The etiologic agent of FP in green turtles is still uncertain, but is believed to be multifactorial, as pollution, water temperature and other factors. A herpesvirus has been isolated from fibropapillomas and is present in 95% of the natural FP and 100% of the experimentally induced tumors. The objective of the present study was to investigate the presence of the virus associated with FP in green turtles and characterize FP lesions, as viral load, pigmentation, body condition and score of tumors, in addition to making the association between these traits. The study was divided into three manuscripts. The first documented the occurrence of FP in green turtles in RS. The second and third study was performed with samples of fibropapillomas of green turtles from the states of Ceará (CE), Bahia (BA), Espírito Santo (ES) and São Paulo (SP) because these states have a high incidence of FP and/or a large number of animals captured in previous years. The second study reports the sequence of a DNA fragment of the herpesvirus from 38 samples of FP, which revealed the occurrence of six virus variants in Brazil. The final study reports the analysis thought PCR and real time PCR of 175 fibropapillomas collected from turtles in the states of CE, BA, ES and SP, and makes the association of viral load with the surface of tumors (smooth or warth), pigmentation, body condition and score of the tumors. Fortythree samples were subjected to histopathological analysis to determine the type of injury and skin samples from 45 turtles collected in the Ilha de Trindade (free FP) were analyzed for the presence of the virus. All samples of the Ilha de Trindade were negative for the virus and 87% of samples were positive in real-time PCR. The majority of the samples (75%) was collected from healthy turtles, 33% had tumors with score 1, 28% score 2 and 39% score 3. Seventy percent of the tumors were warty and 41% were pigmented. The maximum viral load was 889,674.98 copies/mg of tumor and tumors with score 3 had the highest viral loads. High viral loads were also significantly associated with FP from the animals dying in SP and BA, and to tumors with warty surface from the CE.

O gênero Hypericum, originário da Europa e Ásia, apresenta uma ampla distribuição em regiões tropicais e subtropicais e compreende aproximadamente 460 espécies. Destas, 20 têm ocorrência natural no Brasil, e concentram-se principalmente na Região Sul do país. As espécies deste gênero são amplamente utilizadas na medicina popular, devido as suas propriedades antivirais, antimicrobianas e antidepressivas. Devido à possibilidade de se explorar tais propriedades, há necessidade de estudos que auxiliem na compreensão taxonômica das espécies nativas da flora brasileira, buscando melhor entender a citogenética e a biologia floral, a fim de se obter meios que possibilitem incluí-las em programas de melhoramento genético. O presente trabalho teve por objetivos determinar o número cromossômico, analisar a meiose e a fertilidade do pólen em diferentes populações de H. caprifoliatum em comparação com H. cf carinatum, H. polyanthemum e H. perforatum. Um total de 18 populações foram analisadas. Os resultados constituem-se nas primeiras informações citogenéticas para as espécies, com exceção de H. perforatum. Os cromossomos destas espécies são muito pequenos (ca. 1,0 - 2,0 μm), numerosos e de difícil análise. O número cromossômico obtido foi de 2n cerca de (ca.) 48, para H. caprifoliatum e H. cf carinatum, e de 2n=32 para H. perforatum e cerca de 2n=32 para H. polyanthemum. Irregularidades na meiose foram observadas com maior freqüência em H. caprifoliatum e H. cf carinatum. A fertilidade do pólen variou de 42% e 89% entre as populações, sendo que foi observada uma grande variabilidade no tamanho dos grãos entre e dentro de populações, para H. caprifoliatum e H. cf carinatum, sugerindo que estas espécies, assim como outras do gênero, se reproduzem por apomixia. / The genus Hypericum, originated from Europe and Asia, is widely distributed in tropical and subtropical regions and contains around 460 species. From these, 20 occur naturally in Brazil, concentrated in the Southern Region. Hypericum species are widely used in folk medicine, due to their antiviral, antimicrobian and antidepressive properties. In order to explore these properties, studies that help to a better understanding of the Brazilian native species taxonomy, cytogenetics and floral biology are needed, aiming to include these species in genetic breeding programs. The objective of the present work was to determine chromosome numbers and to analyse meiosis and pollen fertility in different H. caprifoliatum populations, in comparison to H. cf carinatum, H. polyanthemum and H. perforatum. A total of 18 populations were studied. The results obtained are the first cytogenetic informations for these species, except H. perforatum. These species chromosomes are very small (ca. 1- 2 μm) in relative large numbers and of difficult analyses. The number of chromosomes was ca. 2n=48 for a H. caprifoliatum e H. cf carinatum, and 2n=32 for H. perforatum and ca. 2n=32 for H. polyanthemum. Meiotic irregularities were more frequent in H. caprifoliatum and H. cf carinatum. Pollen fertility ranged from 42% to 89% among the populations and a great variability in pollen grain sizes was found within and among H. caprifoliatum and H. cf carinatum populations, suggesting that these species, as other of the genus, reproduce by apomixis.

Os objetivos do presente trabalho foram: a) determinar o número cromossômico de diferentes populações de M. ilicifolia ocorrentes no Rio Grande do Sul; b) estimar viabilidade do pólen e o índice meiótico; c) estudar o comportamento meiótico; d) caracterizar sementes desta espécie quanto ao peso e analisar a produção de sementes por fruto.

Submitted by Andre Moraes Queiroz (andre.moraesqueiroz@ufpe.br) on 2015-04-14T15:12:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao Priscilla Luna.pdf: 1463262 bytes, checksum: 5c977c6c66fc1bfae2823dac59d0daf8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T15:12:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao Priscilla Luna.pdf: 1463262 bytes, checksum: 5c977c6c66fc1bfae2823dac59d0daf8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / FACEPE / As frequências de alterações cromossômicas instáveis em linfócitos periféricos são uma poderosa ferramenta para avaliação de dose absorvida em casos de superexposição acidental recente à radiação ionizante. A dosimetria biológica dos campos de nêutrons e sua caracterização física e biofísica ainda é um tema complexo em pesquisas sobre radiação. Deste modo, existe uma necessidade de uma maior compreensão quanto à exposição de nêutrons e sua avaliação de risco. O objetivo deste trabalho foi analisar as frequências de alterações cromossômicas instáveis induzidas por campo misto nêutrons-gama e estabelecer suas curvas dose-resposta. O sangue obtido de um doador saudável foi exposto a duas fontes de campo misto nêutron-gama 241AmBe no Laboratório de Calibração com Nêutrons (LCN - CRCN/NE - PE - Brasil), resultando em doses absorvidas 0,256, 0,412, 0,497, 0,660, 0,723, 0,964 e 1,254Gy. Metáfases mitóticas foram obtidas através da cultura de linfócitos para análise cromossômica. Foi observada uma dependência linear-quadrática entre dose absorvida e as frequências de alterações cromossômicas, apesar de se esperar uma dependência linear para campos mistos nêutron-gama. No entanto, o tipo de radiação utilizada no presente estudo é composto por 50% de vetor gama, possivelmente, uma razão pela qual as curvas dose-resposta observadas sejam linear-quadrática. Além disso, analisando-se a distribuição intercelular, nas doses de 0,256, 0,497 e 1,254Gy, para fragmentos acêntricos e anéis cromossômicos, parece haver uma tendência a uma sobredispersão significativa, enquanto que para os dicêntricos, diferentemente, parece comportar-se melhor como uma distribuição de Poisson. As curvas descritas neste trabalho contribuirão para o desenvolvimento do Laboratório de Dosimetria Biológica (LBD) e serão utilizadas como base para ensaios futuros nas investigações relativas à interação de campos mistos nêutron-gama com sistemas biológicos e à dosimetria biológica.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2765_1.pdf: 1059053 bytes, checksum: d6ca2e42da8b9b7195bfb0cf629ad72c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Os cromossomos B são elementos genéticos adicionais ao complemento normal que se caracterizam por um comportamento não mendeliano de herança e pela falta de homologia com os cromossomos do cariótipo. O gafanhoto Xyleus discoideus angulatus apresenta ampla distribuição no Nordeste Brasileiro além de polimorfismos para cromossomo B.No presente trabalho, foram analisados cromossomos meióticos de diferentes populações de X. d. angulatus com a finalidade de avaliar a prevalência, distribuição e influência do cromossomo B no processo meiótico dessa espécie. Adicionalmente, foi determinada tanto a localização dos sítios de DNAr 18S quanto dos sítios de histonas H3 e H4. Os resultados obtidos revelaram a presença de um único cromossomo B, similar ao X quanto ao tamanho, morfologia, ciclo picnótico e comportamento meiótico, em 29 machos dos 402 exemplares estudados. A presença do cromossomo B foi observada em oito das 11 populações analisadas. Devido a essa ampla distribuição, é provável que o surgimento desse polimorfismo seja antigo. A técnica de FISH permitiu revelar, em indivíduos portadores do cromossomo B, os sítios do gene ribossômico 18S situados na região pericentromérica do cromossomo X e dos bivalentes G3 e M4. Adicionalmente, os resultados utilizando sonda para histonas H3 e H4 mostraram a presença de três sítios localizados nos bivalentes G2, M4 e no cromossomo X. A ausência de sítios dos genes 18S, H3 e H4 no cromossomo B reforçam a hipótese previamente proposta sobre a provável origem autossômica desse elemento extra

Made available in DSpace on 2018-08-02T00:15:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_10679_Tese_13fev_FINAL Marianna Xavier.pdf: 4871982 bytes, checksum: c23d2894eb2c248964934154758a096a (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / A família Echimyidae Gray, 1825 é a mais diversa dos roedores neotropicais, sendo um exemplo de rápida diversificação ecológica e fenotípica ao longo da história evolutiva. Apresenta história taxonômica confusa, com vários nomes genéricos propostos, diversos abandonados, tornando os dados sobre a família e gêneros altamente instáveis. Entretanto, recentes trabalhos envolvendo estudos morfométricos e filogenéticos têm esclarecido as relações entre os membros da família e o diagnóstico das espécies tem sido melhor definido com o auxílio de dados cariotípicos. Dentro da família Echimyidae, Proechimys é o gênero mais complexo e taxonomicamente pouco entendido. Por cerca de um século, foi dividido em dois subgêneros: Trinomys restrito a Mata Atlântica e Proechimys distribuído de Honduras ao sul do Paraguai. Somente em 1996, através de estudos baseados em sequêcias de DNA mitocondrial, Trinomys foi elevado a gênero. Trinomys, por sua vez, é tratado como um dos gêneros mais complexos no leste do Brasil. Os dados cariotípicos presentes na literatura tem revelado que os gêneros Proechimys e Trinomys abrigam uma diversidade maior de táxons do que se reconhece, revelando a necessidade de uma investigação utilizando ferramentas com bom poder discriminatório. O presente trabalho teve como objetivo compilar, reinterpretar e determinar a diversidade cariotípica de Trinomys e Proechimys, associando cariótipos à distribuição geográfica e, por meio de filogenias geradas por sequências de DNA de genes nucleares e mitocondriais, associar clados e cariótipos. O primeiro capítulo aborda um estudo de filogenia molecular e citotaxonomia de Trinomys, no qual cariótipos e sequências de 62 novos exemplares foram somados aos disponíveis na literatura para recuperar filogenias moleculares utilizando os genes citB e vWF, visando avaliar se o cariótipo é um bom marcador para a diagnose dos táxons. Os cariótipos de T. paratus e T. setosus denigratus foram descritos pela primeira vez. A reconstrução filogenética dos dados concatenados recuperou dez linhagens evolutivas com alto suporte, cada qual associada às espécies de Trinomys. Os cariótipos associados a cada clado são distintos entre si, não havendo compartilhamento de formas cariotípicas entre as espécies. Os cariótipos idênticos, aliados à ausência de monofiletismo e baixos valores de divergência genética, não dão suporte à manutenção da divisão entre T. gratiosus gratiosus e T. g. bonafidei, bem como de T. lbispinus minor e T. a. albispinus. Entretanto, confirmam três subespécies para T. setosus: T. s. setosus, T. s. elegans e T. s. denigratus, recuperando o status de denigratus como subespécie válida. Assim, os resultados obtidos reforçam a importância dos dados cariotípicos na caracterização das espécies de Trinomys. O segundo capítulo investiga a variação cariotípica em uma nova espécie de Proechimys do grupo goeldii, sendo analisados os cariótipos e as sequências de DNA mitocondrial de dois exemplares, um com 2n=15 e outro com 2n=17, e reconstruída a filogenia molecular com vários representantes de Proechimys, visando buscar evidências para identificar o mecanismo de evolução cariotípica e a posição filogenética desses espécimes no gênero Proechimys. Verificou-se que os exemplares com 2n=15 e 2n=17 recuperam um clado monofilético dentro do grupo de espécies goeldii, com baixa divergência intraclado (2,26%), distintos de P. goeldii e de P. longicaudatus, com divergência intercalado de 12,78% e 12,06%, respectivamente. Ao contrário do que sugerido na literatura, no qual se sugere que a variação cariotípica é devido a um sistema múltiplo de determinação do sexo do tipo XX:XY1Y2, com 2n=17 exclusivo a machos, nossos dados associados à reinterpretação e análise de todos os dados cariotípicos disponíveis na literatura, confirmou que se trata de um rearranjo em autossômicos, presente em ambos os sexos, e que o cariótipo com 2n=17 seria resultado de um processo de fusão/fissão dos pares 1 e 7 (a partir de um hipotético 2n=18 com todos os cromossomos acrocêntricos) e o cariótipo com 2n=16 seria a forma homomórfica com rearranjo entre 1 e 7. Os cariótipos com 2n=15 e 2n=14 seriam as formas heteromórficas e homomórficas, respectivamente, do rearranjo entre os pares 2 e 3. A divergência genética desse clado é compatível com outros para divergência intraespecífica, envolvendo os indivíduos com 2n=15 e 2n=17, e equivalente à espécie distinta das demais válidas para Proechimys. Os dados reforçam a associação desses exemplares com as espécies que formam o grupo goeldii e ainda que devam pertencer a uma unidade taxonômica distinta, não descrita para Proechimys. O terceiro capítulo avalia a utilização do cariótipo como um marcador específico para o gênero Proechimys com a análise citogenética de 43 novos exemplares, os quais foram incorporados aos disponíveis na literatura, permitindo a compilação de 1125 exemplares cariotipados de Proechimys, com levantamento de 39 cariótipos a ele atribuídos. Também foi gerada uma filogenia molecular dos genes vWF e citB, que recuperou treze linhagens evolutivas, sendo duas ainda não descritas para espécies do gênero. Os cariótipos quando disponíveis foram associados a sua respectiva sequência de DNA na filogenia a fim de verificar se o cariótipo está associado aos clados monofiléticos. O presente estudo mostrou a formação de subclados em alguns táxons, com alto suporte dentro de cada um desses grupos. Em P. cuvieri, o clado A (2n=28/FN=46) apresentou 8,86% de divergência genética entre o clado B (2n=28/FN=48) e de 10,36% em relação ao clado C (sem cariótipo associado), enquanto que o clado B divergiu em 3%, do clado C, sugerindo que A (P. cuvieri, 2n=28/FN=46) é uma unidade taxonômica distinta de B (2n=28/FN=48) e C, que devem representar uma espécie ainda não descrita. Em P. longicaudatus, ocorreu a formação de dois clados divergentes entre si em 10,75%, tendo o clado associado ao cariótipo 2n=28/FN=50 identificado como P. longicaudatus, enquanto que o associado a 2n=28/FN=48,50 deve pertencer a uma unidade taxonômica ainda não descrita. Em P. roberti, o cariótipo 2n=30/FN=56 no clado A mostrou baixa divergência em relação aos clados B (3,31%) e C (2,93%), mas alta divergência em relação ao clado D (6,94%), associado ao cariótipo 2n=30/FN=56, com a morfologia do último par distinta do citótipo A. Nossa análise sugere que o clado D, com distribuição disjunta, alta divergência e cariótipo distinto deva corresponder à uma unidade taxonômica distinta. Proechimys guyannensis se apresentou como a espécie mais complexa devido à grande diversidade cariotípica associada à espécie. A filogenia mostrou três subgrupos: A, B e C, com relativamente baixa divergência, o clado B diverge em 2,45% do clado A, o clado C em 5,22% de B e o clado C em 5,49% de A. Embora baixa diversidade, a monofilia, localização geográfica disjunta e os cariótipos distintos permitiram associar os cariótipos de P. guyannensis: 2n=40/FN=50-52, para o Amapá, Guiana Francesa e Venezuela (clado B); 2n=46/FN=50 para o leste do Amazonas, Roraima e Pará (clado A) e 2n=38/52 ao clado C para o extremo noroeste do Amazonas. Esse último apresenta variações cariotípicas marcantes e a maior divergência com os demais clados, podendo significar uma barreira no intercruzamento desses indivíduos com os dos demais clados. Devido à ausência de resolução filogenético dos basal em P. guyannensis, baixo número de exemplares analisados molecularmente e cariotipados, esforços adicionais são necessários, pois esse táxon pode representar um conjunto de espécies. Representantes de P. steerei não foram cariotipados no presente estudo mas a revisão bibliográfica permitiu associar cada cariótipo a sua respectiva sequência. São reconhecidos os citótipos 2n=24/ FN=40-42, com variações do FN devido a eventos de inversão pericêntrica no par 3. Análise do presente estudo indicou que não há estruturação na distribuição dos cariótipos, podendo se considerar a variação do FN dentro de P. steerei (FN=40, 41, 42) como um polimorfismo cromossômico, sendo FN=41 a forma intermediária entre as duas homomórficas.