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Controle da mancha preta dos frutos cítricos mediante manejo cultural /

Bellotte, José Antônio Miranda. January 2006 (has links)
Orientador: Antonio de Goes / Banca: Nilton Luiz de Souza / Banca: Marcel Bellato Spósito / Resumo: O presente estudo foi desenvolvido em pomares de citros localizados em propriedade comercial na região de Rio Claro-SP e teve como objetivo a determinação do efeito de práticas culturais na redução das fontes de inóculo e, conseqüente diminuição da severidade da mancha preta dos frutos cítricos, causada por Guignardia citricarpa. Desenvolveram-se dois experimentos em áreas distintas. No primeiro ensaio, testou-se a influência de cultivos intercalares, amendoim forrageiro e capim coastcross e posterior roçagem da massa formada sob a copa de laranjeiras 'Natal', na flutuação populacional de ascósporos e na severidade da doença, enquanto que no segundo, foi avaliado o efeito de diferentes tratamentos [(1) uréia 12,5 g/litro; (2) nitrato de cálcio 12,5 g/litro; (3) calcário dolomítico 2 t/ha; (4) microrganismos eficazes 1% do produto ativado; (5) combinação dos produtos comerciais Stuble Aid® + Compostaid® 0,75 mL/litro + 0,75 g/litro e (6) Testemunha] na aceleração da decomposição de folhas de limoeiros 'Siciliano' caídas sob a copa das plantas e na severidade da doença. Concluiu-se que o capim coastcross foi a espécie mais eficiente na supressão da liberação de ascósporos, com conseqüente redução da severidade da doença. No segundo ensaio, os tratamentos representados pela adição de microrganismos foram os mais eficientes na aceleração da decomposição de folhas de limoeiro, porém quanto à severidade da doença, todos os tratamentos apresentaram o mesmo comportamento, com reduções significativas em relação à testemunha. / Abstract: The present research was developed in citrus orchards located in commercial property in Rio Claro - SP region and it had as an objective the determination of the effect of cultural practice in the reduction of the source of inoculum and, consequently the reduction of strictness black spots in citric fruit, caused by Guignardia citricarpa. Two experiments in distinct areas were developed. In the first one, the influence of intercalary culture (peanut and coastcross grass) and later the skim of the a dough formed on the orange trees top 'Natal', in the floating of ascospores and in the strictness of the disease, while in the second experiment, the effect of different treatments were evaluated [(1) urea 12,5 g/liter; (2) calcium nitrate 12,5 g/liter; (3) dolomitic calcareous 2t/ha; (4) efficient microrganisms 1% from the active product; (5) the combination of the commercial products Stuble Aid® + Compostaid® 0,75 mL/liter + 0,75 g/liter and (6) Control] in the acceleration of the 'Siciliano' lemon trees leaves decomposition fallen down on the top trees and in the severity of the disease. It was concluded that the coastcross grass was the most efficient species in the supression of the discharge of the ascospores and in the decrease of the severity disease. In the second experiment, the treatments represented by the addition of microorganisms were the most efficient in the acceleration of the lemon trees leaves decomposition, however as for the severity of the disease, all the treatments presented the same performance, with statistically significative decreases in relation to control. / Mestre
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Controle da mancha preta dos frutos cítricos mediante manejo cultural

Bellotte, José Antônio Miranda [UNESP] 31 March 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-31Bitstream added on 2014-06-13T20:18:19Z : No. of bitstreams: 1 bellotte_jam_me_jabo.pdf: 523569 bytes, checksum: 592afd8fed1a89998777898d47c64765 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo foi desenvolvido em pomares de citros localizados em propriedade comercial na região de Rio Claro-SP e teve como objetivo a determinação do efeito de práticas culturais na redução das fontes de inóculo e, conseqüente diminuição da severidade da mancha preta dos frutos cítricos, causada por Guignardia citricarpa. Desenvolveram-se dois experimentos em áreas distintas. No primeiro ensaio, testou-se a influência de cultivos intercalares, amendoim forrageiro e capim coastcross e posterior roçagem da massa formada sob a copa de laranjeiras 'Natal', na flutuação populacional de ascósporos e na severidade da doença, enquanto que no segundo, foi avaliado o efeito de diferentes tratamentos [(1) uréia 12,5 g/litro; (2) nitrato de cálcio 12,5 g/litro; (3) calcário dolomítico 2 t/ha; (4) microrganismos eficazes 1% do produto ativado; (5) combinação dos produtos comerciais Stuble Aid® + Compostaid® 0,75 mL/litro + 0,75 g/litro e (6) Testemunha] na aceleração da decomposição de folhas de limoeiros 'Siciliano' caídas sob a copa das plantas e na severidade da doença. Concluiu-se que o capim coastcross foi a espécie mais eficiente na supressão da liberação de ascósporos, com conseqüente redução da severidade da doença. No segundo ensaio, os tratamentos representados pela adição de microrganismos foram os mais eficientes na aceleração da decomposição de folhas de limoeiro, porém quanto à severidade da doença, todos os tratamentos apresentaram o mesmo comportamento, com reduções significativas em relação à testemunha. / The present research was developed in citrus orchards located in commercial property in Rio Claro - SP region and it had as an objective the determination of the effect of cultural practice in the reduction of the source of inoculum and, consequently the reduction of strictness black spots in citric fruit, caused by Guignardia citricarpa. Two experiments in distinct areas were developed. In the first one, the influence of intercalary culture (peanut and coastcross grass) and later the skim of the a dough formed on the orange trees top 'Natal', in the floating of ascospores and in the strictness of the disease, while in the second experiment, the effect of different treatments were evaluated [(1) urea 12,5 g/liter; (2) calcium nitrate 12,5 g/liter; (3) dolomitic calcareous 2t/ha; (4) efficient microrganisms 1% from the active product; (5) the combination of the commercial products Stuble Aid® + Compostaid® 0,75 mL/liter + 0,75 g/liter and (6) Control] in the acceleration of the 'Siciliano' lemon trees leaves decomposition fallen down on the top trees and in the severity of the disease. It was concluded that the coastcross grass was the most efficient species in the supression of the discharge of the ascospores and in the decrease of the severity disease. In the second experiment, the treatments represented by the addition of microorganisms were the most efficient in the acceleration of the lemon trees leaves decomposition, however as for the severity of the disease, all the treatments presented the same performance, with statistically significative decreases in relation to control.
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Efeitos de diferentes coberturas mortas obtidas a partir do manejo mecânico com roçadeira lateral na dinâmica populacional de plantas daninhas em citros. / Mulches effect produced through mechanical management with a lateral rotary mower on the population dynamics of weeds on citrus.

San Martin Matheis, Hector Alonso 17 May 2004 (has links)
Com o objetivo de avaliar o efeito da cobertura morta, produzida pelos adubos verdes lab-lab (Dolichos lablab L.), guandu-anão (Cajanus cajan (L.) Millsp), crotálaria (Crotalaria juncea L.), guandu (Cajanus cajan (L.) Millsp), milheto (Pennisetum glaucum (L.) Leeke), uma mistura de três coberturas (D. lablab + C. cajan + C. juncea), e a infestação natural do pomar de laranja, composta principalmente por capim-colonião (Panicum maximum Jacq.), sobre as plantas daninhas, bem como avaliar o efeito destas coberturas sobre as seguintes plantas daninhas: poaia (Richardia brasiliensis Gomes.), capim-colonião, erva-palha (Blainvillea biaristata DC.), falsa-serralha (Emilia sonchifolia (L.) DC.), capim-colchão (Digitaria horizontalis (Retz.) Koel.), corda-de-viola (Ipomea grandifolia (Dammer.) O’Donell), picão-preto (Bidens pilosa L.), guanxuma (Sida santaremnensis H. Monteiro.) e tiririca (Cyperus rotundus (L.) Pers.), em condições de pós e pré-emergência, foram instalados dois experimentos em condições de campo e quatro em condições de casa de vegetação, na Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", Universidade de São Paulo, Departamento de Produção Vegetal, Piracicaba, S.P. O delineamento experimental foi de blocos casualizados para um experimento em campo e blocos casualizados no esquema fatorial para os demais. O manejo mecânico das diferentes vegetações, foi realizado mediante a utilização de roçadeira lateral, marca KAMAQ, modelo NINJA MAC 260 que esta desenhada para projetar o material verde cortado, sobre a projeção da copa da árvore cítrica, formando dessa maneira uma camada de cobertura morta. Os parâmetros avaliados durante a condução dos experimentos, foram os seguintes: avaliações de contagem da infestação de plantas daninhas por vaso e ou por m2 (densidade), determinações de algumas propriedades químicas do solo e avaliações de produção de biomassa das plantas daninhas. Pelos dados obtidos nas condições locais dos experimentos conduzidos pode-se observar que: a utilização de coberturas mortas produzidas pelas distintas vegetações contribui, significativamente, na redução das populações das plantas daninhas, sendo os melhores resultados obtidos com a vegetação natural e a mistura dos adubos verdes; e que a adubação em área total, independentemente da cobertura vegetal utilizada apresenta uma menor densidade de plantas daninhas nas linhas das plantas cítricas. Sendo assim pode se concluir que a utilização de adubos verdes pode contribuir de maneira significativa na redução da comunidade infestante, auxiliando de forma sustentável o manejo integrado de plantas daninhas; além de contribuir com outros benefícios inerentes a utilização dessa prática. / With the objective of evaluating the effect of the mulches produced by the cover crop Dolichos lablab, Cajanus cajan, Crotalaria juncea, Pennisetum glaucum, a mixture of three cover crops (Dolichos lablab + Cajanus cajan + Crotalaria juncea), and a natural infestation in orange tree plantations composed mostly by Panicum maximum on weeds and to evaluate the effect of these cover crop on the following weeds Richardia brasiliensis, Panicum maximum, Blainvillea biaristata, Emilia sonchifolia, Digitaria horizontalis, Ipomea grandifolia, Bidens pilosa, Sida santaremnensis and Cyperus rotundus, in conditions of pos and pre-emergence, two experiments in field conditions and four in greenhouse conditions were carried out at the Superior School of Agricultura "Luiz of Queiroz", University of São Paulo, Plant Production Department, São Paulo, Piracicaba - SP - Brazil. The experimental design used was of randomized blocks for an experiment in the field and randomized blocks in the factorial design for the others. The mechanical management of the different crops was carried out utilizing a KAMAQ lateral rotary mower Ninja Mac 260, designed to throw the cut crops down forming a layer of mulch around the citric plant. The data collected during the experiments were planta/m2 and plant/pot density, determination of some chemical conditions of the soil and weed dry biomass production in g/pot. In the carried out experiments, it could be observed that the use of mulches produced by different crops contributes significantly to reduce weeds. The best results were obtained in a natural infestation and the mixture of three cover crops. The fertilization in the whole area regardless the cover crops, presents a minor density of weeds in the lines of the citric plants. Furthermore, it can be concluded that the use of cover crops contributes widely to reduce weeds, supporting integrated management of weeds and providing with other inherent benefits.
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Variação sazonal da fotossíntese e relações hídricas de laranjeira 'Valência' / Seasonal variation of photosynthesis and water relations of ‘Valencia’ sweet orange plant

Ribeiro, Rafael Vasconcelos 21 July 2006 (has links)
Esse estudo tem como hipótese que a variação sazonal da fotossíntese de laranjeira ‘Valência’ está relacionada a fatores ambientais e endógenos. A menor atividade fotossintética durante os meses frios e secos está possivelmente associada à baixa temperatura e ao acúmulo de reservas, podendo ocorrer mesmo em condições de boa disponibilidade hídrica. A alta atividade fotossintética durante os meses quentes e chuvosos é possivelmente induzida pela maior disponibilidade de recursos naturais (água, energia solar e temperatura) e maior demanda por carboidratos, haja vista que nessa ocasião ocorre fluxo vegetativo intenso. O objetivo foi testar a hipótese acima, avaliando a variação anual de algumas características fisiológicas relacionadas à fotossíntese (trocas gasosas, fluorescência da clorofila, potencial de água no ramo e conteúdo foliar de carboidratos) de laranjeiras ‘Valência’ em condições de campo, em Cordeirópolis (SP). A influência da baixa disponibilidade hídrica sazonal foi verificada comparando-se plantas em condições naturais com plantas sob irrigação. A produção e algumas características biométricas foram avaliadas. A maior atividade fotossintética de laranjeiras ‘Valência’ ocorre durante a primavera, sendo induzida pelo aumento da temperatura e disponibilidade hídrica, enquanto que a menor fotossíntese ocorre durante o inverno, quando há baixa temperatura e deficiência hídrica. Durante o inverno, a menor fotossíntese não é associada ao conteúdo total de reservas foliares. Os valores máximos de assimilação de CO2 são observados na primavera, quando as condições ambientais são intermediárias entre o verão e o inverno e há fluxos vegetativo e reprodutivo nas laranjeiras. A alta demanda de carboidratos por esses drenos causa decréscimos no conteúdo de reservas foliares entre outubro e novembro, possivelmente estimulando a fotossíntese na primavera. Embora a fotossíntese das plantas no verão seja maior que no inverno, a atividade fotossintética não alcança valores próximos aos da primavera por limitações de origem bioquímica e estomática. A menor atividade bioquímica é induzida pela maior temperatura do ar em relação à primavera, em especial durante o período vespertino, enquanto que a limitação de origem estomática é causada pela alta demanda evaporativa do ar no verão. Durante o período quente e chuvoso, a atividade fotoquímica se ajusta às condições ambientais e não limita a fixação de carbono. A menor atividade fotossintética durante o inverno é ocasionada pela menor condutância estomática, devida à baixa temperatura do ar e solo. A ocorrência de deficiência hídrica no inverno causa redução do potencial de água nos ramos, diminuindo ainda mais a condutância estomática. No inverno, há limitação bioquímica da fotossíntese devida à baixa temperatura do ar, indicada pela redução da eficiência instantânea de carboxilação. Em relação ao metabolismo fotoquímico, não há indícios de limitação da fotossíntese. / This study has as hypothesis that the seasonal variation of photosynthesis in ‘Valencia’ sweet orange plant is related to environmental and endogenous factors. The lower photosynthetic activity during cold and dry months is possibly associated to low temperature and accumulation of leaf reserves, occurring even in well-watered plants.The higher photosynthetic activity during warm and rainy months is probably induced by higher availability of natural resources (water, sunlight and temperature) and by carbohydrate demand, since there is intense vegetative flush during this period. The objective was to test the above hyphotesis, evaluating the annual variation of some physiological characteristics related to photosynthesis (gas exchange, chlorophyll fluorescence, stem water potential and leaf carbohydrate content) of ‘Valencia’ sweet orange plants under field conditions, in Cordeirópolis (SP). The influence of low seasonal water availability was verified by comparing plants under natural with irrigated plants. Fruit production and some biometric characteristics were evaluated. The highest photosynthetic activity in ‘Valencia’ sweet orange plants occurred in spring, being induced by increase of temperature and water availability, while the lowest photosynthesis occurred in winter, when there is low temperature and water deficiency. During the winter, the lowest photosynthesis is not associated to the total reserve content in leaves. The maximum CO2 assimilation values are observed in spring, when environmental conditions are intermediate between summer and winter and there are vegetative and reproductive flushes in sweet orange plants. The high demand for carbohydrates in those sinks causes reduction in leaf reserve contents between october and november, probably estimulating the photosynthesis in spring. Although the photosynthesis in summer is higher than in winter, the photosynthetic activity does not reach values close to ones observed in spring due to biochemical and stomatal limitations. The low biochemical activity is induced by higher air temperature when compared to spring, mainly during afternoon, while the stomatal limitation is caused by the high air evaporative demand in summer. During the warm and wet period, the photochemical activity adjusts itself to environmental conditions and does not limit the carbon fixation. The low photosynthetic activity during winter is caused by low stomatal conductance as a consequence of low air and soil temperature. The occurrence of water deficiency in winter causes reduction of stem water potential, which is an additional factor leading to reduced stomatal conductance. In winter, there is biochemical limitation of photosynthesis due to low air temperature, as indicated by reduced instantaneous carboxylation efficiency. Regarding the photochemical metabolism, there are not signs of limitation to photosynthesis.
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Doenças pós-colheita em citros e caracterização da população fúngica em packinghouses e na Ceagesp-SP / Postharvest diseases in citrus and characterization of the fungal population in packinghouses and at Ceagesp-SP

Fischer, Ivan Herman 15 June 2007 (has links)
Este trabalho objetivou caracterizar os danos pós-colheita em frutos de laranja &#39;Valência&#39; e de tangor &#39;Murcott&#39;, destinados à exportação, e em frutos de laranjas &#39;Pêra&#39;, &#39;Lima&#39; e &#39;Natal&#39; e de tangor &#39;Murcott&#39;, destinados ao mercado interno, após diferentes etapas do beneficiamento em packinghouse, em 2004 e 2005 e na Ceagesp-SP em 2006; identificar os pontos críticos e a magnitude de impacto em linhas de beneficiamento de citros dos packinghouses; e caracterizar a micoflora ambiental nos packinghouses e nos pontos de revenda de atacadistas da Ceagesp, assim como a micoflora da superfície de equipamentos e instalações e a presença de isolados de Penicillium spp. resistentes a fungicidas nos packinghouses. Frutos cítricos foram coletados na chegada ao packinghouse, após a pré-lavagem, após o desverdecimento, na banca, no palete e na Ceagesp, e armazenados durante 14 a 21 dias a 25&#176;C e 85-90% de UR. A incidência de injúrias foi avaliada visualmente a cada três dias. Para a avaliação da magnitude de impactos nos pontos de transferência da linha de beneficiamento empregou-se uma esfera instrumentada com registrador de aceleração (G). A micoflora ambiental foi amostrada mediante o método gravimétrico, com placas de Petri, contendo meio batata-dextrose-ágar, abertas por dois minutos. A micoflora de superfície de equipamentos e instalações foi amostrada mediante placas Rodac. Observou-se baixa incidência (<3,5%) de podridões nos frutos destinados à exportação. As principais podridões encontradas em laranja &#39;Valência&#39; e tangor &#39;Murcott&#39; foram a podridão peduncular de Lasiodiplodia e a antracnose, respectivamente. Nos frutos para o mercado interno a incidência de podridões atingiu valores médios entre 12,8% e 36,2%, ao final do armazenamento, sendo o bolor verde a principal doença pós-colheita nos diferentes frutos cítricos. As injúrias mecânicas de oleocelose foram crescentes com o beneficiamento até a banca de embalagem e a aplicação de cera reduziu a incidência de frutos murchos. Na avaliação dos impactos na linha de beneficiamento do packinghouse de exportação, 95% dos impactos variaram entre 30-95 G. Já no packinghouse de mercado interno, 94% dos impactos variaram entre 24-131 G. A população fúngica no ambiente e na superfície do packinghouse de exportação foi de 12,3 e 52,3 ufc/placa, respectivamente, enquanto a população fúngica no packinghouse de mercado interno foi de 46,3 e 68,2 ufc/placa, respectivamente. Posição intermediária aos packinghouses foi observada na Ceagesp, com uma população fúngica ambiental de 25,3 ufc/placa. Cladosporium e Penicillium foram os gêneros fúngicos mais abundantes. A contaminação de &#34;zonas limpas&#34; nos packinghouses (lavagem dos frutos, banca, caixa e contêiner) não foi substancialmente menor que nas &#34;zonas sujas&#34; (recepção dos frutos e primeira seleção). A porcentagem de isolados de P. digitatum resistentes a tiabendazol foi de 25,9 no ambiente e de 30,1 na superfície do packinghouse de exportação, enquanto que para imazalil foi de 1,5 no ambiente e de 16,0 na superfície. No packinghouse de mercado interno, a porcentagem de isolados de P. digitatum resistentes a tiabendazol foi de 51,9 no ambiente e de 39,2 na superfície, enquanto que para imazalil foi de 0,1 e 0,9, respectivamente. / The purposes of this work were a) to characterize postharvest injuries in &#39;Valência&#39; oranges and &#39;Murcott&#39; tangors aimed at the external market, and in &#39;Pêra&#39;, &#39;Lima&#39;, &#39;Natal&#39; oranges and &#39;Murcott&#39; tangors aimed at the internal market after different processing stages in a packinghouse in 2004 and 2005, and at Ceagesp-SP in 2006; b) to identify critical points and impact extent on processing lines in packinghouses; c) to characterize the environmental mycoflora in packinghouses and in retail points at Ceagesp; d) to characterize the superficial mycoflora of equipment and facilities, and e) to characterize the presence of isolated Penicillium spp. resistant to fungicides in packinghouses. Fruits were collected at the packinghouse, at their arrival, after pre-washing and degreening, from the packing table, from the pallet and at Ceagesp. They were stored for 14 to 21 days at 25&#176;C and 85-90% RH. The incidence of injuries was visually evaluated every three days. An instrumented sphere with acceleration register (G) was used to evaluate the extent of impacts at the transference points of the citrus processing line. The environmental mycoflora was sampled according to the gravimetric method, using Petri dishes containing potato-dextrose-agar medium opened for two minutes. The superficial mycoflora on equipment and facilities was sampled with Rodac plates. There was low rot incidence (under 3.5%) in fruits aimed at the external market. The main disease affecting &#39;Valência&#39; oranges and &#39;Murcott&#39; tangors were Lasiodiplodia stem-end rot and anthracnose, respectively. Rots averaged between 12.8% and 36.2% at the end of the storage period in fruits aimed at the internal market, and green mold was the main postharvest disease. Oleocellosis increased along the processing stages until the arrival of fruits at the packing table. Wax application reduced the incidence of wilted fruits. Ninety-five percent of the impacts in the packinghouse processing line in fruits aimed at the external market ranged between 30 and 95 G, while 94% of the impacts in fruits aimed at the internal market ranged between 24 and 131 G. The environmental and the packinghouse superficial fungal population in fruits aimed at the external market were 12.3 and 52.3 cfu/plate, respectively, while these populations in fruits aimed at the internal market were 46.3 and 68.2 cfu/plate, respectively. Intermediate values in relation to packinghouses were observed at Ceagesp, where the environmental fungal population was 25.3 cfu/plate. Cladosporium and Penicillium were the most prevailing genera of fungi. The contamination of &#34;clean zones&#34; in the packinghouses (washing of fruits, packing table, boxes and containers) was not substantially lower than contamination in &#34;dirty zones&#34; (reception of fruits and first selection). The percentage of P. digitatum isolates resistant to thiabendazole was 25.9 in the environment and 30.1 on the packinghouse surface for fruits aimed at the external market, while the corresponding data concerning isolates resistant to imazalil were 1.5 and 16.0, respectively. In the packinghouse of fruits aimed at the internal market, the percentage of isolates of P. digitatum resistant to thiabendazole was 51.9 in the environment and 39.2 on the packinghouse surface, while the corresponding data concerning isolates resistant to imazalil were 0.1 and 0.9, respectively.
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Efeitos de diferentes coberturas mortas obtidas a partir do manejo mecânico com roçadeira lateral na dinâmica populacional de plantas daninhas em citros. / Mulches effect produced through mechanical management with a lateral rotary mower on the population dynamics of weeds on citrus.

Hector Alonso San Martin Matheis 17 May 2004 (has links)
Com o objetivo de avaliar o efeito da cobertura morta, produzida pelos adubos verdes lab-lab (Dolichos lablab L.), guandu-anão (Cajanus cajan (L.) Millsp), crotálaria (Crotalaria juncea L.), guandu (Cajanus cajan (L.) Millsp), milheto (Pennisetum glaucum (L.) Leeke), uma mistura de três coberturas (D. lablab + C. cajan + C. juncea), e a infestação natural do pomar de laranja, composta principalmente por capim-colonião (Panicum maximum Jacq.), sobre as plantas daninhas, bem como avaliar o efeito destas coberturas sobre as seguintes plantas daninhas: poaia (Richardia brasiliensis Gomes.), capim-colonião, erva-palha (Blainvillea biaristata DC.), falsa-serralha (Emilia sonchifolia (L.) DC.), capim-colchão (Digitaria horizontalis (Retz.) Koel.), corda-de-viola (Ipomea grandifolia (Dammer.) O’Donell), picão-preto (Bidens pilosa L.), guanxuma (Sida santaremnensis H. Monteiro.) e tiririca (Cyperus rotundus (L.) Pers.), em condições de pós e pré-emergência, foram instalados dois experimentos em condições de campo e quatro em condições de casa de vegetação, na Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”, Universidade de São Paulo, Departamento de Produção Vegetal, Piracicaba, S.P. O delineamento experimental foi de blocos casualizados para um experimento em campo e blocos casualizados no esquema fatorial para os demais. O manejo mecânico das diferentes vegetações, foi realizado mediante a utilização de roçadeira lateral, marca KAMAQ, modelo NINJA MAC 260 que esta desenhada para projetar o material verde cortado, sobre a projeção da copa da árvore cítrica, formando dessa maneira uma camada de cobertura morta. Os parâmetros avaliados durante a condução dos experimentos, foram os seguintes: avaliações de contagem da infestação de plantas daninhas por vaso e ou por m2 (densidade), determinações de algumas propriedades químicas do solo e avaliações de produção de biomassa das plantas daninhas. Pelos dados obtidos nas condições locais dos experimentos conduzidos pode-se observar que: a utilização de coberturas mortas produzidas pelas distintas vegetações contribui, significativamente, na redução das populações das plantas daninhas, sendo os melhores resultados obtidos com a vegetação natural e a mistura dos adubos verdes; e que a adubação em área total, independentemente da cobertura vegetal utilizada apresenta uma menor densidade de plantas daninhas nas linhas das plantas cítricas. Sendo assim pode se concluir que a utilização de adubos verdes pode contribuir de maneira significativa na redução da comunidade infestante, auxiliando de forma sustentável o manejo integrado de plantas daninhas; além de contribuir com outros benefícios inerentes a utilização dessa prática. / With the objective of evaluating the effect of the mulches produced by the cover crop Dolichos lablab, Cajanus cajan, Crotalaria juncea, Pennisetum glaucum, a mixture of three cover crops (Dolichos lablab + Cajanus cajan + Crotalaria juncea), and a natural infestation in orange tree plantations composed mostly by Panicum maximum on weeds and to evaluate the effect of these cover crop on the following weeds Richardia brasiliensis, Panicum maximum, Blainvillea biaristata, Emilia sonchifolia, Digitaria horizontalis, Ipomea grandifolia, Bidens pilosa, Sida santaremnensis and Cyperus rotundus, in conditions of pos and pre-emergence, two experiments in field conditions and four in greenhouse conditions were carried out at the Superior School of Agricultura "Luiz of Queiroz", University of São Paulo, Plant Production Department, São Paulo, Piracicaba – SP - Brazil. The experimental design used was of randomized blocks for an experiment in the field and randomized blocks in the factorial design for the others. The mechanical management of the different crops was carried out utilizing a KAMAQ lateral rotary mower Ninja Mac 260, designed to throw the cut crops down forming a layer of mulch around the citric plant. The data collected during the experiments were planta/m2 and plant/pot density, determination of some chemical conditions of the soil and weed dry biomass production in g/pot. In the carried out experiments, it could be observed that the use of mulches produced by different crops contributes significantly to reduce weeds. The best results were obtained in a natural infestation and the mixture of three cover crops. The fertilization in the whole area regardless the cover crops, presents a minor density of weeds in the lines of the citric plants. Furthermore, it can be concluded that the use of cover crops contributes widely to reduce weeds, supporting integrated management of weeds and providing with other inherent benefits.
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Variação sazonal da fotossíntese e relações hídricas de laranjeira 'Valência' / Seasonal variation of photosynthesis and water relations of ‘Valencia’ sweet orange plant

Rafael Vasconcelos Ribeiro 21 July 2006 (has links)
Esse estudo tem como hipótese que a variação sazonal da fotossíntese de laranjeira ‘Valência’ está relacionada a fatores ambientais e endógenos. A menor atividade fotossintética durante os meses frios e secos está possivelmente associada à baixa temperatura e ao acúmulo de reservas, podendo ocorrer mesmo em condições de boa disponibilidade hídrica. A alta atividade fotossintética durante os meses quentes e chuvosos é possivelmente induzida pela maior disponibilidade de recursos naturais (água, energia solar e temperatura) e maior demanda por carboidratos, haja vista que nessa ocasião ocorre fluxo vegetativo intenso. O objetivo foi testar a hipótese acima, avaliando a variação anual de algumas características fisiológicas relacionadas à fotossíntese (trocas gasosas, fluorescência da clorofila, potencial de água no ramo e conteúdo foliar de carboidratos) de laranjeiras ‘Valência’ em condições de campo, em Cordeirópolis (SP). A influência da baixa disponibilidade hídrica sazonal foi verificada comparando-se plantas em condições naturais com plantas sob irrigação. A produção e algumas características biométricas foram avaliadas. A maior atividade fotossintética de laranjeiras ‘Valência’ ocorre durante a primavera, sendo induzida pelo aumento da temperatura e disponibilidade hídrica, enquanto que a menor fotossíntese ocorre durante o inverno, quando há baixa temperatura e deficiência hídrica. Durante o inverno, a menor fotossíntese não é associada ao conteúdo total de reservas foliares. Os valores máximos de assimilação de CO2 são observados na primavera, quando as condições ambientais são intermediárias entre o verão e o inverno e há fluxos vegetativo e reprodutivo nas laranjeiras. A alta demanda de carboidratos por esses drenos causa decréscimos no conteúdo de reservas foliares entre outubro e novembro, possivelmente estimulando a fotossíntese na primavera. Embora a fotossíntese das plantas no verão seja maior que no inverno, a atividade fotossintética não alcança valores próximos aos da primavera por limitações de origem bioquímica e estomática. A menor atividade bioquímica é induzida pela maior temperatura do ar em relação à primavera, em especial durante o período vespertino, enquanto que a limitação de origem estomática é causada pela alta demanda evaporativa do ar no verão. Durante o período quente e chuvoso, a atividade fotoquímica se ajusta às condições ambientais e não limita a fixação de carbono. A menor atividade fotossintética durante o inverno é ocasionada pela menor condutância estomática, devida à baixa temperatura do ar e solo. A ocorrência de deficiência hídrica no inverno causa redução do potencial de água nos ramos, diminuindo ainda mais a condutância estomática. No inverno, há limitação bioquímica da fotossíntese devida à baixa temperatura do ar, indicada pela redução da eficiência instantânea de carboxilação. Em relação ao metabolismo fotoquímico, não há indícios de limitação da fotossíntese. / This study has as hypothesis that the seasonal variation of photosynthesis in ‘Valencia’ sweet orange plant is related to environmental and endogenous factors. The lower photosynthetic activity during cold and dry months is possibly associated to low temperature and accumulation of leaf reserves, occurring even in well-watered plants.The higher photosynthetic activity during warm and rainy months is probably induced by higher availability of natural resources (water, sunlight and temperature) and by carbohydrate demand, since there is intense vegetative flush during this period. The objective was to test the above hyphotesis, evaluating the annual variation of some physiological characteristics related to photosynthesis (gas exchange, chlorophyll fluorescence, stem water potential and leaf carbohydrate content) of ‘Valencia’ sweet orange plants under field conditions, in Cordeirópolis (SP). The influence of low seasonal water availability was verified by comparing plants under natural with irrigated plants. Fruit production and some biometric characteristics were evaluated. The highest photosynthetic activity in ‘Valencia’ sweet orange plants occurred in spring, being induced by increase of temperature and water availability, while the lowest photosynthesis occurred in winter, when there is low temperature and water deficiency. During the winter, the lowest photosynthesis is not associated to the total reserve content in leaves. The maximum CO2 assimilation values are observed in spring, when environmental conditions are intermediate between summer and winter and there are vegetative and reproductive flushes in sweet orange plants. The high demand for carbohydrates in those sinks causes reduction in leaf reserve contents between october and november, probably estimulating the photosynthesis in spring. Although the photosynthesis in summer is higher than in winter, the photosynthetic activity does not reach values close to ones observed in spring due to biochemical and stomatal limitations. The low biochemical activity is induced by higher air temperature when compared to spring, mainly during afternoon, while the stomatal limitation is caused by the high air evaporative demand in summer. During the warm and wet period, the photochemical activity adjusts itself to environmental conditions and does not limit the carbon fixation. The low photosynthetic activity during winter is caused by low stomatal conductance as a consequence of low air and soil temperature. The occurrence of water deficiency in winter causes reduction of stem water potential, which is an additional factor leading to reduced stomatal conductance. In winter, there is biochemical limitation of photosynthesis due to low air temperature, as indicated by reduced instantaneous carboxylation efficiency. Regarding the photochemical metabolism, there are not signs of limitation to photosynthesis.
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Doenças pós-colheita em citros e caracterização da população fúngica em packinghouses e na Ceagesp-SP / Postharvest diseases in citrus and characterization of the fungal population in packinghouses and at Ceagesp-SP

Ivan Herman Fischer 15 June 2007 (has links)
Este trabalho objetivou caracterizar os danos pós-colheita em frutos de laranja &#39;Valência&#39; e de tangor &#39;Murcott&#39;, destinados à exportação, e em frutos de laranjas &#39;Pêra&#39;, &#39;Lima&#39; e &#39;Natal&#39; e de tangor &#39;Murcott&#39;, destinados ao mercado interno, após diferentes etapas do beneficiamento em packinghouse, em 2004 e 2005 e na Ceagesp-SP em 2006; identificar os pontos críticos e a magnitude de impacto em linhas de beneficiamento de citros dos packinghouses; e caracterizar a micoflora ambiental nos packinghouses e nos pontos de revenda de atacadistas da Ceagesp, assim como a micoflora da superfície de equipamentos e instalações e a presença de isolados de Penicillium spp. resistentes a fungicidas nos packinghouses. Frutos cítricos foram coletados na chegada ao packinghouse, após a pré-lavagem, após o desverdecimento, na banca, no palete e na Ceagesp, e armazenados durante 14 a 21 dias a 25&#176;C e 85-90% de UR. A incidência de injúrias foi avaliada visualmente a cada três dias. Para a avaliação da magnitude de impactos nos pontos de transferência da linha de beneficiamento empregou-se uma esfera instrumentada com registrador de aceleração (G). A micoflora ambiental foi amostrada mediante o método gravimétrico, com placas de Petri, contendo meio batata-dextrose-ágar, abertas por dois minutos. A micoflora de superfície de equipamentos e instalações foi amostrada mediante placas Rodac. Observou-se baixa incidência (<3,5%) de podridões nos frutos destinados à exportação. As principais podridões encontradas em laranja &#39;Valência&#39; e tangor &#39;Murcott&#39; foram a podridão peduncular de Lasiodiplodia e a antracnose, respectivamente. Nos frutos para o mercado interno a incidência de podridões atingiu valores médios entre 12,8% e 36,2%, ao final do armazenamento, sendo o bolor verde a principal doença pós-colheita nos diferentes frutos cítricos. As injúrias mecânicas de oleocelose foram crescentes com o beneficiamento até a banca de embalagem e a aplicação de cera reduziu a incidência de frutos murchos. Na avaliação dos impactos na linha de beneficiamento do packinghouse de exportação, 95% dos impactos variaram entre 30-95 G. Já no packinghouse de mercado interno, 94% dos impactos variaram entre 24-131 G. A população fúngica no ambiente e na superfície do packinghouse de exportação foi de 12,3 e 52,3 ufc/placa, respectivamente, enquanto a população fúngica no packinghouse de mercado interno foi de 46,3 e 68,2 ufc/placa, respectivamente. Posição intermediária aos packinghouses foi observada na Ceagesp, com uma população fúngica ambiental de 25,3 ufc/placa. Cladosporium e Penicillium foram os gêneros fúngicos mais abundantes. A contaminação de &#34;zonas limpas&#34; nos packinghouses (lavagem dos frutos, banca, caixa e contêiner) não foi substancialmente menor que nas &#34;zonas sujas&#34; (recepção dos frutos e primeira seleção). A porcentagem de isolados de P. digitatum resistentes a tiabendazol foi de 25,9 no ambiente e de 30,1 na superfície do packinghouse de exportação, enquanto que para imazalil foi de 1,5 no ambiente e de 16,0 na superfície. No packinghouse de mercado interno, a porcentagem de isolados de P. digitatum resistentes a tiabendazol foi de 51,9 no ambiente e de 39,2 na superfície, enquanto que para imazalil foi de 0,1 e 0,9, respectivamente. / The purposes of this work were a) to characterize postharvest injuries in &#39;Valência&#39; oranges and &#39;Murcott&#39; tangors aimed at the external market, and in &#39;Pêra&#39;, &#39;Lima&#39;, &#39;Natal&#39; oranges and &#39;Murcott&#39; tangors aimed at the internal market after different processing stages in a packinghouse in 2004 and 2005, and at Ceagesp-SP in 2006; b) to identify critical points and impact extent on processing lines in packinghouses; c) to characterize the environmental mycoflora in packinghouses and in retail points at Ceagesp; d) to characterize the superficial mycoflora of equipment and facilities, and e) to characterize the presence of isolated Penicillium spp. resistant to fungicides in packinghouses. Fruits were collected at the packinghouse, at their arrival, after pre-washing and degreening, from the packing table, from the pallet and at Ceagesp. They were stored for 14 to 21 days at 25&#176;C and 85-90% RH. The incidence of injuries was visually evaluated every three days. An instrumented sphere with acceleration register (G) was used to evaluate the extent of impacts at the transference points of the citrus processing line. The environmental mycoflora was sampled according to the gravimetric method, using Petri dishes containing potato-dextrose-agar medium opened for two minutes. The superficial mycoflora on equipment and facilities was sampled with Rodac plates. There was low rot incidence (under 3.5%) in fruits aimed at the external market. The main disease affecting &#39;Valência&#39; oranges and &#39;Murcott&#39; tangors were Lasiodiplodia stem-end rot and anthracnose, respectively. Rots averaged between 12.8% and 36.2% at the end of the storage period in fruits aimed at the internal market, and green mold was the main postharvest disease. Oleocellosis increased along the processing stages until the arrival of fruits at the packing table. Wax application reduced the incidence of wilted fruits. Ninety-five percent of the impacts in the packinghouse processing line in fruits aimed at the external market ranged between 30 and 95 G, while 94% of the impacts in fruits aimed at the internal market ranged between 24 and 131 G. The environmental and the packinghouse superficial fungal population in fruits aimed at the external market were 12.3 and 52.3 cfu/plate, respectively, while these populations in fruits aimed at the internal market were 46.3 and 68.2 cfu/plate, respectively. Intermediate values in relation to packinghouses were observed at Ceagesp, where the environmental fungal population was 25.3 cfu/plate. Cladosporium and Penicillium were the most prevailing genera of fungi. The contamination of &#34;clean zones&#34; in the packinghouses (washing of fruits, packing table, boxes and containers) was not substantially lower than contamination in &#34;dirty zones&#34; (reception of fruits and first selection). The percentage of P. digitatum isolates resistant to thiabendazole was 25.9 in the environment and 30.1 on the packinghouse surface for fruits aimed at the external market, while the corresponding data concerning isolates resistant to imazalil were 1.5 and 16.0, respectively. In the packinghouse of fruits aimed at the internal market, the percentage of isolates of P. digitatum resistant to thiabendazole was 51.9 in the environment and 39.2 on the packinghouse surface, while the corresponding data concerning isolates resistant to imazalil were 0.1 and 0.9, respectively.
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Identificação e caracterização de viróides e estudo de alguns aspectos da interação de viróides com proteínas do hospedeiro / Identification and characterization of viroids and study of some viroid-host protein interactions

Marcelo Eiras 24 November 2006 (has links)
O presente trabalho foi subdividido em quatro capítulos com os seguintes objetivos: (i) elaborar uma minuciosa revisão de literatura abordando os principais aspectos da interação viróide-hospedeiro e as relações evolutivas dos viróides e virusóides; (ii) identificar e caracterizar viróides associados a videiras, no Brasil; (iii) purificar, clonar e caracterizar, um RNA circular de seqüência totalmente desconhecida; (iv) estudar alguns aspectos relacionados à interação viróidehospedeiro. Inicialmente, foram identificadas e caracterizadas duas espécies de viróides (o Citrus exocortis viroid CEVd e o Hop stunt viroid, HSVd) isolados de videiras no Brasil. Para tal, promoveu-se extração de RNAs totais de folhas de Vitis vinifera &#145;Cabernet Sauvignon&#146; e V. labrusca &#145;Niagara Rosada&#146;, seguida de RT-PCR com oligonucleotídeos específicos. Os fragmentos de DNA amplificados foram clonados e seqüenciados. Os resultados revelaram que as videiras estavam duplamente infectadas com o CEVd e HSVd. As análises filogenéticas mostraram que os clones de HSVd de videira agruparam-se com outros variantes de videira, formando um grupo separado de um segundo formado por variantes de citros. Já os clones de CEVd de videira agruparam-se com isolados de citros e videira. No capítulo 3, empregou-se um método para a clonagem e caracterização de um pequeno RNA circular (com aproximadamente 300 nucleotídeos) de seqüência totalmente desconhecida. Este RNA, quando submetido à eletroforese dupla em géis de poliacrilamida desnaturantes, apresentou um retardamento na migração, similar aos viróides. Após a clonagem de fragmentos do RNA, amplificados via RTPCR com oligonucleotídeos aleatórios (apresentando seis nucleotídeos degenerados no terminal 3&#145),os clones obtidos foram seqüenciados. A partir desses dados, dois oligonucleotídeos adjacentes de polaridades opostas foram desenhados e empregados para amplificar via RT-PCR a seqüência completa do RNA circular. A análise das seqüências revelou a presença da CCR (central conserved region) do Apple scar skin viroid (ASSVd), espécie tipo do gênero Apscaviroid, e compartilha similaridade com outros membros deste gênero, o que sugere fortemente que o RNA circular é um viróide recombinante. Finalmente, no capítulo 4, foram realizados experimentos que comprovaram a existência do motivo loop E (presente na CCR de algumas espécies dos Pospiviroidae) in vivo no PSTVd. Demonstrou-se também, utilizando ensaios de união in vitro (análise de retardo em gel, EMSA e entrecruzamento com luz ultravioleta), que as proteínas L5 e TFIIIA de Arabidopsis thaliana se unem especificamente ao PSTVd com a mesma afinidade que elas se unem ao seu substrato natural, o rRNA 5S, enquanto que a afinidade por um viróide cloroplástico (Avocado sunblotch viroid, ASBVd) foi significativamente menor. Estas duas proteínas devem participar na síntese e movimento intracelular do PSTVd in vivo. / The present work has been divided into four chapters to: (i) review the main points in viroid-host interactions and present different aspects in the evolutionary relationship of the viroids and virusoids; (ii) identify and characterize viroids infecting grapevine in Brazil; (iii) purify, clone and sequence what appears to be a novel citrus viroid; (iv) study some aspects related to the viroid-host protein interactions. Firstly, two viroid species (Citrus exocortis viroid, CEVd and Hop stunt viroid, HSVd) were identified and characterized from grapevine in Brazil. Total RNAs, extracted from leaves of Vitis vinifera &#145;Cabernet Sauvignon&#146; and V. labrusca &#145;Niagara Rosada&#146;, were RT-PCR amplified with specific primers for the five viroids described infecting grapevines. The resulting products were separated by agarose gel electrophoresis and the DNA fragments of the expected full-size were eluted, cloned and sequenced. The grapevines analyzed were doublyinfected by CEVd and HSVd. A phylogenetic analysis showed that the Brazilian grapevine HSVd variants clustered with other grapevine HSVd variants forming a specific group separated from citrus variants, whereas the Brazilian CEVd variants clustered with other citrus and grapevine variants. On the other hand, a method for cloning small circular RNAs of unknown sequence has been applied to an RNA of this kind from citrus (with ca. 300 nucleotides). This RNA, when analyzed by PAGE in denaturing conditions, showed the slow mobility typical of viroid RNAs. After denaturation, the purified RNA was RT-PCR amplified using a primer with six randomized positions at its 3? terminus, with the resulting products being then cloned and sequenced. From these data, two adjacent primers of opposite polarities were designed and used to RT-PCR amplify the complete sequence. Analysis of the sequences revealed the presence of the CCR (central conserved region) of the Apple scar skin viroid (ASSVd), the type member of the genus Apscaviroid, and scattered similarities with other members of this genus, suggesting that the circular RNA is a viroid recombinant. Finally, UV irradiation of infected tissue has revealed the existence in vivo of an RNA motif (loop E) in Potato spindle tuber viroid (PSTVd), the type member of the family Pospiviroidae (nuclear viroids), and RNA-protein binding followed by eletrophoretic mobility shift (EMSA) and UV cross-linking label transfer assays have shown that transcription factor IIIA (TFIIIA) and L5 ribosomal protein from Arabidopsis thaliana bind this RNA in vitro with the same affinity as they bind 5S rRNA, whereas the affinity for a chloroplastic viroid (Avocado sunblotch viroid, ASBVd) is significantly lower. These two proteins may participate in synthesis and delivery of PSTVd in vivo.
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Identificação e caracterização de viróides e estudo de alguns aspectos da interação de viróides com proteínas do hospedeiro / Identification and characterization of viroids and study of some viroid-host protein interactions

Eiras, Marcelo 24 November 2006 (has links)
O presente trabalho foi subdividido em quatro capítulos com os seguintes objetivos: (i) elaborar uma minuciosa revisão de literatura abordando os principais aspectos da interação viróide-hospedeiro e as relações evolutivas dos viróides e virusóides; (ii) identificar e caracterizar viróides associados a videiras, no Brasil; (iii) purificar, clonar e caracterizar, um RNA circular de seqüência totalmente desconhecida; (iv) estudar alguns aspectos relacionados à interação viróidehospedeiro. Inicialmente, foram identificadas e caracterizadas duas espécies de viróides (o Citrus exocortis viroid CEVd e o Hop stunt viroid, HSVd) isolados de videiras no Brasil. Para tal, promoveu-se extração de RNAs totais de folhas de Vitis vinifera &#145;Cabernet Sauvignon&#146; e V. labrusca &#145;Niagara Rosada&#146;, seguida de RT-PCR com oligonucleotídeos específicos. Os fragmentos de DNA amplificados foram clonados e seqüenciados. Os resultados revelaram que as videiras estavam duplamente infectadas com o CEVd e HSVd. As análises filogenéticas mostraram que os clones de HSVd de videira agruparam-se com outros variantes de videira, formando um grupo separado de um segundo formado por variantes de citros. Já os clones de CEVd de videira agruparam-se com isolados de citros e videira. No capítulo 3, empregou-se um método para a clonagem e caracterização de um pequeno RNA circular (com aproximadamente 300 nucleotídeos) de seqüência totalmente desconhecida. Este RNA, quando submetido à eletroforese dupla em géis de poliacrilamida desnaturantes, apresentou um retardamento na migração, similar aos viróides. Após a clonagem de fragmentos do RNA, amplificados via RTPCR com oligonucleotídeos aleatórios (apresentando seis nucleotídeos degenerados no terminal 3&#145),os clones obtidos foram seqüenciados. A partir desses dados, dois oligonucleotídeos adjacentes de polaridades opostas foram desenhados e empregados para amplificar via RT-PCR a seqüência completa do RNA circular. A análise das seqüências revelou a presença da CCR (central conserved region) do Apple scar skin viroid (ASSVd), espécie tipo do gênero Apscaviroid, e compartilha similaridade com outros membros deste gênero, o que sugere fortemente que o RNA circular é um viróide recombinante. Finalmente, no capítulo 4, foram realizados experimentos que comprovaram a existência do motivo loop E (presente na CCR de algumas espécies dos Pospiviroidae) in vivo no PSTVd. Demonstrou-se também, utilizando ensaios de união in vitro (análise de retardo em gel, EMSA e entrecruzamento com luz ultravioleta), que as proteínas L5 e TFIIIA de Arabidopsis thaliana se unem especificamente ao PSTVd com a mesma afinidade que elas se unem ao seu substrato natural, o rRNA 5S, enquanto que a afinidade por um viróide cloroplástico (Avocado sunblotch viroid, ASBVd) foi significativamente menor. Estas duas proteínas devem participar na síntese e movimento intracelular do PSTVd in vivo. / The present work has been divided into four chapters to: (i) review the main points in viroid-host interactions and present different aspects in the evolutionary relationship of the viroids and virusoids; (ii) identify and characterize viroids infecting grapevine in Brazil; (iii) purify, clone and sequence what appears to be a novel citrus viroid; (iv) study some aspects related to the viroid-host protein interactions. Firstly, two viroid species (Citrus exocortis viroid, CEVd and Hop stunt viroid, HSVd) were identified and characterized from grapevine in Brazil. Total RNAs, extracted from leaves of Vitis vinifera &#145;Cabernet Sauvignon&#146; and V. labrusca &#145;Niagara Rosada&#146;, were RT-PCR amplified with specific primers for the five viroids described infecting grapevines. The resulting products were separated by agarose gel electrophoresis and the DNA fragments of the expected full-size were eluted, cloned and sequenced. The grapevines analyzed were doublyinfected by CEVd and HSVd. A phylogenetic analysis showed that the Brazilian grapevine HSVd variants clustered with other grapevine HSVd variants forming a specific group separated from citrus variants, whereas the Brazilian CEVd variants clustered with other citrus and grapevine variants. On the other hand, a method for cloning small circular RNAs of unknown sequence has been applied to an RNA of this kind from citrus (with ca. 300 nucleotides). This RNA, when analyzed by PAGE in denaturing conditions, showed the slow mobility typical of viroid RNAs. After denaturation, the purified RNA was RT-PCR amplified using a primer with six randomized positions at its 3? terminus, with the resulting products being then cloned and sequenced. From these data, two adjacent primers of opposite polarities were designed and used to RT-PCR amplify the complete sequence. Analysis of the sequences revealed the presence of the CCR (central conserved region) of the Apple scar skin viroid (ASSVd), the type member of the genus Apscaviroid, and scattered similarities with other members of this genus, suggesting that the circular RNA is a viroid recombinant. Finally, UV irradiation of infected tissue has revealed the existence in vivo of an RNA motif (loop E) in Potato spindle tuber viroid (PSTVd), the type member of the family Pospiviroidae (nuclear viroids), and RNA-protein binding followed by eletrophoretic mobility shift (EMSA) and UV cross-linking label transfer assays have shown that transcription factor IIIA (TFIIIA) and L5 ribosomal protein from Arabidopsis thaliana bind this RNA in vitro with the same affinity as they bind 5S rRNA, whereas the affinity for a chloroplastic viroid (Avocado sunblotch viroid, ASBVd) is significantly lower. These two proteins may participate in synthesis and delivery of PSTVd in vivo.

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