Orientador: Albetiza Lobo de Araujo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:08:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_AnaOliviade_M.pdf: 3133175 bytes, checksum: 172111dae3c3965d6a48fe7907c481cf (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: A capacidade que os venenos de serpentes possuem de aumentarem a permeabilidade vascular e induzirem edema, através da liberação de substâncias farmacologicamente ativas, é bem conhecida. Investigamos a resposta inflamatória (edema e permeabilidade vascular) induzida pelo veneno de Bothrops lanceolatus (VBL) em camundongos Swiss machos. O edema de pata foi induzido pela injeção subplantar do VBL (125 a 1000 ng/pata) e quantificado pelo aumento do peso da pata. A permeabifidade vascular foi determinada pela quantidade de azul de Evans extravasado. O edema e o aumento de permeabilidade foram máximos dentro de duas horas e estatisticamente insignificantes a partir de 24 horas. A administração de iloprost (20 ng/pata) após a do VBL potencializou o edema e o aumento de permeabilidade vascular aproximadamente em 400%. O tratamento dos camundongos com indometacina (5 mg/kg), dexametasona (1 mg/kg), NDGA (100 mg/kg) ou BW A4C (50 mg/kg) inibiu o edema induzido pelo VBL (43%, 59%, 28% e 43%, respectivamente) e o a(Jmento da permeabilidade vascular (0%, 66%, 48% e 44%, respectivamente). Ao contrário, os antagonistas de histamina, serotonina, e PAF [mepiramina (6 mg/kg), ciproheptadina (5 mg/kg), e WEB 2086 (50 mg/kg), respectivamente não foram efetivos. Estes resultados indicam que os dois fenômenos anteriormente citados são mediados principalmente por produtos da ação de ciclooxigenase e lipoxigenase. A nível histológico, as patas que sofreram injeção de 250 e 500 ng do VBL apresentaram um aumento na região dérmica com espaços intercelulares que são indícios de edema. Houve a presença de infiltrado celular, principalmente neutrófilos, entre as fibras musculares, as quais, morfologicamente não foram afetadas, pelo menos durante as três primeiras horas de observação. Com a dose de 500 ng ocorreu intensa hemorragia registrando grande número de hemácias extravasculares / Abstract: The ability of snake venoms to increase vascular permeability and to induce oedema through the release of pharmacologically active substances is well known. This thesis investigates the inflammatory response (oedema and , vascular permeability) induced by the venom of Bothrops lanceolatus (BL V) in male Swiss white mice (20-30g). Paw oedema was induced by the subplantar injection of BLV (125-1000 ng/paw) and was quantified as the increase in paw weighí. Changes in vascular permeability were assessed by measuring the amount of Evans blue dye extravasation. Oedema and the increase in vascular permeability were maximal within two hours and had resolved afier 24h. The administration of iloprost (20 ng/paw) immediately afier BLV potentiated the oedema and increased the vascular permeability by approximately 400%. Pre¬treating the mice with indomethacin (5 mg/kg), dexamethasone (1 mg/kg), NDGA (100 mg/kg), or BW A4C (50 mg/kg) inhibited the BLV-induced oedema (by 43%, 59%, 28% and 43%, respectively) and the increase in vascular permeability (by 0%, 66%, 48%, and 44%, respectively). In contrast, histamine, serotonin, and PAF-acether antagonists [mepyramine (6 mglkg) , cyproheptadine (5 mg/kg), and WEB 2086 (50 mg/kg), respectively)] were not effective. In histological sections,the venom (250 and 500 ng) was observed to cause thickening of the innerdermal layers which was accompanied by the presence of large intercellular spaces indicative of oedema. In addition, there was a marked infiltration of inflammatory cells, particularly neutrophils, into the underlying muscle layer. The latter, however, remained morphologically unaffected during the three hours of observation. Venom doses of 500 ng or more produced intense hemorrhage in the paw. These results indicate that BL V-induces oedema and increases vascular permeability in the mouse paw as confirmed by histological examination of the injected paws. The principal mediators of this inflammation response are cyclooxygenase and lipoxygenase products / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientadores : Julia Prado Franceschi, Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:56:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cogo_JoseCarlos_M.pdf: 5956920 bytes, checksum: a9419c9c9c555fbca0bd2d0f8cedeeae (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: A peçonha da Bothrops insularis (jararaca-ilhôa) foi estudada em aves in vitro (toxicidade e estudo morfológico) e in vitro (estudo miográfico, eletrofisiológico e morfológico acompanhado de dosagem de CK), comparando seus efeitos com aqueles da peçonha Bothrops jararaca. Os resultados obtidos levam às seguintes conclusões: 1) A toxicidade da peçonha Bothrops insularis é superior à da peçonha de Bothrops jararaca cerca de 5 vezes, mostrando-se as aves muito mais sensíveis à peçonha de Bothrops insularis do que os mamíferos. 2) A peçonha da Bothrops insularis age na junção neuromuscular possuindo ações tanto pré (ação facilitadora da transmissão neuromuscular) como pós juncionais (Contratura e bloqueio da transmissão neuromuscular). 3) A peçonha de Bothrops insularis mostrou-se mais potente també, nas preparações musculares in vitro de aves quando comparada com as preparações musculares in vitro de mamíferos, sendo esta atividade dose-dependente. O mesmo pode-se dizer quando comparada com a peçonha de Bothrops jararaca nas preparações in vitro. 4) Existe também uma ação direta da peçonha na fibra muscular detectada através da degeneração muscular observada tanto nos músculos de pintainhos que foram injetados com a peçonha como nos músculos de pintainhos incubados com a mesma. 5) Devido à degeneração muscular, verifica-se nos músculos tratados in vitro, um aumento nos níveis de liberação de CK o qual é dose-dependente. A liberação de CK in vitro é também verificada com a peçonha de Bothrops jararaca sendo entretanto essa liberação de menor intensidade do que aquela causada pela Bothrops insularis...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstracts: The effects of Bothrops insularis (jararaca-ilhôa) venom were examined , in vitro in birds (toxicity and morphological studies) and in vitro (myographical electrophysiological ans morphological studies together with the measurement of CK levels). Tese effects were compared to those of Bothrops jararaca. The results obtained allow the followings conclusions to be drawn. 1) The toxicity of Bothrops insularis venom is about fice times greater than that of Bothrops jararaca. Birds are much more sensitive to Bothrops insularis venom than are mammals. 2) Bothrops insularis venom acts on the neuromuscular junction both presynaptically, to cacilitate neuromuscular transmission, and postnaptically, to induce contracture and blockage of neuromuscular transmission. 3) Bothrops insularis venom is more potent in in vitro muscle preparations of birds than of mammals. Theis venom is also more potent in ptese preparations than that of Bothrops jararaca.4) The venom of Bothrops insularis has a direct action on muscle fibers as demonstrated by the muscle degeneration observed in vitro in chicks injectd with the venom and in vitro in muscle incubated with venom. 5) The muscle degeneration observed in vitro resuloted in a dose-dependent release of CK. Bothrops jararaca. Venom also caused the release of CK in vitro, although this effect was less marked than that observed with Bothrops insularis venom¿. Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores : Julia Prado Franceschi, François Radvanyi / Tese (doutorado) - Universidade Estadualde Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-13T22:57:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_AlbetizaLobode_D.pdf: 9308594 bytes, checksum: 5d373ae25e509c651bc76131bf282c5e (MD5) Previous issue date: 1990 / Resumo: No presente trabalho procuramos inicialmente obter informações gerais sobre o veneno total de Bothrops lanceolatust comparando suas atividades enzimaticas com aquelas das Bothrops brasileiras, encontrando valores medios entre B. jararaca e B. jararacussu para atividade litica sobre caseina e TAME, como tambem em relação a atividade hemorragica. Apesar de não exibir efeito coagulante sobre o plasma, o veneno total coagula o fibrinogênio, apresenta atividade hemolitica indireta e prolonga o tempo de tromboplastina parcial ativada. Como esses dois ultimos efeitos foram mais evidentes com a fração F32 podemos caracteriza-la como uma fosfolipase A2 acida e anticoagulante. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: In the presente work we initially obtained some information on the crude venom of Bothrops lanceolatus comparing its enzymatic activities with those of Brazilian Bothrops species. Caseinolytic, TAMEesterase and "hemorrhagic activities were intermediate to those of B. jararaca and B. jararacussu. Despite having no coagulant effect on plasma, crude venom clotted fibrinogen, possessed indirect hemolytic activity and prolonged the partial thromboplastin time. Since these last two activities were most marked with fraction F32, this fraction may be characterized anticoagulant acidic phospholipase A2'. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Lucilene Delazari dos Santos / Banca: Nanci Nascimento / Resumo: A giroxina isolada do veneno de Crotalus durissus terrificus apresenta atividades coagulante e neurotóxica, caracterizada pelo "rolamento em barril". É uma serinoprotease do tipo trombina-símile que tem a capacidade de converter o fibrinogênio em fibrina. Visando a atenuação destas atividades, a irradiação com 60Co aparece como uma importante ferramenta. O presente estudo teve por objetivo isolar e purificar a giroxina e avaliar o efeito da irradiação com 60Co sobre suas atividades coagulante e tóxica. O isolamento da giroxina envolveu duas etapas cromatográficas: gel filtração em coluna Sephadex G-75 e afinidade em coluna Benzamidina-Sepharose 6B. O alto grau de pureza foi confirmado por RP-HPLC C2/C18 e pela análise eletroforética, que revelou uma massa molecular de aproximadamente 30 kDa. A giroxina nativa catalisou a hidrólise dos substratos cromogênicos S-2238 e S-2288, demonstrando tratar-se de uma serinoprotease pertencente à subclasse das enzimas trombina-símile, estável em diferentes pHs (5,5 a 8,5), sensível aos metais Mn2+ e Cu2+ e aos inibidores de serinoprotease PMSF e benzamidina. Apresentou melhor atividade coagulante sobre o plasma humano entre os pHs 6,0 e 7,4. A irradiação da giroxina nas doses de 0,5; 1,0 e 2,0 kGy anulou completamente suas atividades coagulante e tóxica. Os ensaios de toxicidade in vivo mostraram apenas alterações comportamentais sem demonstrar o rolamento em barril. Este fato sugere que as toxinas purificadas são mais sensíveis à irradiação, pois não há proteção mútua entre as proteínas presentes no veneno total. A giroxina nativa também não causou o bloqueio da contração neuromuscular in vitro sugerindo que a sua ação não tem efeito sobre o sistema nervoso periférico nas concentrações utilizadas / Abstract: Gyroxin isolated from Crotalus durissus terrificus venom presents coagulant and neurotoxic activities. It belongs to the thrombin-like enzyme group capable of converting fibrinogen into fibrin. To reduce these toxic activities, the irradiation with Cobalt-60 appears to be an important tool. The present study was carried out in order to isolate and purify the gyroxin and evaluate the effects of irradiation with Cobalt-60 on coagulant and toxic activities. The gyroxin isolation consisted of two chromatographic steps: gel filtration (Sephadex G-75) and affinity (Benzamidine-Sepharose 6B). The high purity level of gyroxin was confirmed by RP-HPLC C2/C18 and electrophoretic analysis that showed a molecular weight of 30 kDa. The native gyroxin hydrolyzed the chromogenic substrates S-2238 and S-2288, indicating that this enzyme is a serine proteinase that belongs to the group of thrombin-like enzymes, stable when submitted to pHs from 5.5 to 8.5 and inhibited by Mn2+, Cu2+, PMSF and benzamidine. It was capable of coagulating human plasma at pH 6.0 and 7.4. The gyroxin irradiated at 0.5, 1.0 and 2.0 kGy doses neutralized the coagulant and toxic activities. The in vivo toxic study showed only behavioral alterations with no barrel rotation. This fact suggests that purified toxins are more sensitive to the irradiation because they e mutual protection with the other proteins present in the total venom. The native gyroxin was not able to block in vitro neuromuscular contraction, suggesting that the action of gyroxin, in the concentration used in this study, has no effect on the peripheral nervous system / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-05Bitstream added on 2014-06-13T18:43:16Z : No. of bitstreams: 1 santos_ji_dr_botib.pdf: 2854322 bytes, checksum: 40144832d1328710b9a79f30a62356ba (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O envenenamento por picadas de serpentes é um importante problema de saúde pública em muitos países tropicais e subtropicais. Aspectos científicos, médicos e sociais relacionados ao envenenamento por serpentes do gênero Bothrops são especialmente importantes no Brasil já que estes animais são responsáveis por aproximadamente 90% dos acidentes ofídicos relatados em nosso país. Um dos principais problemas relacionados ao acidente botrópico é o proeminente dano tecidual local cuja patogênese é complexa e envolve a ação combinada de uma variedade de componentes do veneno. As fosfolipases A2 (PLA2s) são os componentes mais abundantes no veneno e tem papel fundamental quando se trata do estabelecimento de lesão muscular. O presente trabalho descreve estudos estruturais com miotoxinas que adotam enovelamento de PLA2s (PLA2s homólogas) com o objetivo de melhor entender a relação estrutura – função destas toxinas. Para tanto, estudos estruturais por cristalografia de difração de raios X com Lys49-PLA2s de venenos botrópicos complexadas com os inibidores manganês e ácido rosmarínico (AR) foram realizados. A estrutura cristalográfica de uma miotoxina Asp49-PLA2 homóloga complexada com cálcio também foi elucidada. Adicionalmente, o arranjo quaternário de miotoxinas Asp49-PLA2s homólogas do gênero Bothrops foi revisado e características estruturais relevantes para a expressão da miotoxicidade destas proteínas foram apontadas. A estrutura cristalográfica do complexo formado entre uma Lys49-PLA2 e o inibidor AR evidencia que este inibidor interage com a proteína na entrada de uma dos canais hidrofóbicos do dímero protéico, estabelecendo ligações de hidrogênio com átomos dos resíduos Phe3, Lys7, Leu10, Gln11 e Gly15 do monômero com a qual interage. Já no... / Envenoming resulting from snakebites is an important public health problem in many tropical and subtropical countries. Scientific, medical and social aspects related to envenoming by snakes from Bothrops genus are especially important in Brazil because these animals are responsible for approximately 90 % of all ophidian accidents reported in our country. One of the main problems regarding bothropic accidents is a prominent local tissue damage whose pathogenesis is complex and involves the combined action of a variety of venom components. Phospholipases A2 (PLA2s) are the most abundant muscle-damaging components of these venoms playing a central role in the muscle damage establishment. The present work reports structural studies with myotoxins that adopt a PLA2 fold (PLA2- like myotoxins) aiming a better understanding of their structure-function relationship. For this purpose, X-ray crystallographic studies of Lys49-PLA2s from bothropic snake venoms complexed to the inhibitors manganese and rosmarinic acid (RA) were performed. The crystallographic structure of the complex formed between an Asp49-PLA2-like myotoxin and calcium was also solved. Additionally, the quaternary assembly of Asp49-PLA2-like myotoxins from Bothrops genus was reviewed and relevant structural features for their myotoxicity expression were pointed out. The crystallographic structure of the complex formed between a Lys49-PLA2 and the inhibitor RA demonstrates that the inhibitor interacts with the protein in the entrance of one of its hydrophobic channel, establishing hydrogen bonds with atoms of the residues Phe3, Lys7, Leu10, Gln11 and Gly15 of the monomer with which it interacts. For the complex formed between a Lys49-PLA2 and the inhibitor Mn2+ the manganese ion is coordinated by atoms of the... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-29Bitstream added on 2014-06-13T18:20:27Z : No. of bitstreams: 1 barros_lc_me_botfm.pdf: 1332337 bytes, checksum: 59f455ce412e913486df8681ce6b0e01 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A giroxina isolada do veneno de Crotalus durissus terrificus apresenta atividades coagulante e neurotóxica, caracterizada pelo “rolamento em barril”. É uma serinoprotease do tipo trombina-símile que tem a capacidade de converter o fibrinogênio em fibrina. Visando a atenuação destas atividades, a irradiação com 60Co aparece como uma importante ferramenta. O presente estudo teve por objetivo isolar e purificar a giroxina e avaliar o efeito da irradiação com 60Co sobre suas atividades coagulante e tóxica. O isolamento da giroxina envolveu duas etapas cromatográficas: gel filtração em coluna Sephadex G-75 e afinidade em coluna Benzamidina-Sepharose 6B. O alto grau de pureza foi confirmado por RP-HPLC C2/C18 e pela análise eletroforética, que revelou uma massa molecular de aproximadamente 30 kDa. A giroxina nativa catalisou a hidrólise dos substratos cromogênicos S-2238 e S-2288, demonstrando tratar-se de uma serinoprotease pertencente à subclasse das enzimas trombina-símile, estável em diferentes pHs (5,5 a 8,5), sensível aos metais Mn2+ e Cu2+ e aos inibidores de serinoprotease PMSF e benzamidina. Apresentou melhor atividade coagulante sobre o plasma humano entre os pHs 6,0 e 7,4. A irradiação da giroxina nas doses de 0,5; 1,0 e 2,0 kGy anulou completamente suas atividades coagulante e tóxica. Os ensaios de toxicidade in vivo mostraram apenas alterações comportamentais sem demonstrar o rolamento em barril. Este fato sugere que as toxinas purificadas são mais sensíveis à irradiação, pois não há proteção mútua entre as proteínas presentes no veneno total. A giroxina nativa também não causou o bloqueio da contração neuromuscular in vitro sugerindo que a sua ação não tem efeito sobre o sistema nervoso periférico nas concentrações utilizadas / Gyroxin isolated from Crotalus durissus terrificus venom presents coagulant and neurotoxic activities. It belongs to the thrombin-like enzyme group capable of converting fibrinogen into fibrin. To reduce these toxic activities, the irradiation with Cobalt-60 appears to be an important tool. The present study was carried out in order to isolate and purify the gyroxin and evaluate the effects of irradiation with Cobalt-60 on coagulant and toxic activities. The gyroxin isolation consisted of two chromatographic steps: gel filtration (Sephadex G-75) and affinity (Benzamidine-Sepharose 6B). The high purity level of gyroxin was confirmed by RP-HPLC C2/C18 and electrophoretic analysis that showed a molecular weight of 30 kDa. The native gyroxin hydrolyzed the chromogenic substrates S-2238 and S-2288, indicating that this enzyme is a serine proteinase that belongs to the group of thrombin-like enzymes, stable when submitted to pHs from 5.5 to 8.5 and inhibited by Mn2+, Cu2+, PMSF and benzamidine. It was capable of coagulating human plasma at pH 6.0 and 7.4. The gyroxin irradiated at 0.5, 1.0 and 2.0 kGy doses neutralized the coagulant and toxic activities. The in vivo toxic study showed only behavioral alterations with no barrel rotation. This fact suggests that purified toxins are more sensitive to the irradiation because they e mutual protection with the other proteins present in the total venom. The native gyroxin was not able to block in vitro neuromuscular contraction, suggesting that the action of gyroxin, in the concentration used in this study, has no effect on the peripheral nervous system

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-12T15:53:19Z No. of bitstreams: 2 Tese - Habdel Nasser.pdf: 15126039 bytes, checksum: 87f29159443eecef88032880bd6b9dce (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-12T15:53:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Habdel Nasser.pdf: 15126039 bytes, checksum: 87f29159443eecef88032880bd6b9dce (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-12T15:53:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Habdel Nasser.pdf: 15126039 bytes, checksum: 87f29159443eecef88032880bd6b9dce (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2007-08-10 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Most of the snakebite incidents in the Amazon region involve the Bothrops atrox, whose venom presents the most potent edematogenic and necrotic activities in the genus. This work describes the studies of isolation of the chemical constituents and antiedematogenic activity of the species Peltodon radicans (Lamiaceae), which is used in the treatment of snakebites and scorpion stings in the region. The extracts presented aliphatic hydrocarbons, 3-OH,-amirin (1), 3-OH,-amirin (2), -sitosterol (3), stigmasterol (4), ursolic acid (5), 2,3,19-trihydroxy-urs-12-en-28-oic acid (tormentic acid, 6), methyl 3-hydroxy,28-methyl-ursolate (7), sitosterol-3-O--D-glucopyranoside (8), and stigmasterol-3-O--D-glucopyranoside (9). The flower extracts presented the largest antiedematogenic activity. This is the first report on the study of the flowers, stem, and roots of this plant. / A maioria dos acidentes com serpentes na região Amazônica envolve a espécie Bothrops atrox, cujo veneno apresenta as atividades edematogênica e necrótica mais potentes no gênero. Este trabalho descreve o estudo do isolamento dos constituintes químicos e da atividade antiedematogênica de Peltodon radicans (Lamiaceae), espécie vegetal que é usada no tratamento de picadas de serpentes e escorpiões na região. O extrato apresentou hidrocarbonetos alifáticos, 3-OH,-amirina (1), 3-OH,-amirina (2), -sitosterol (3), estigmasterol (4), ácido ursólico (5), ácido 2,3,19-tri-hidroxi-urs-12-en-28-óico (ácido tormêntico 6), 3-hidroxi,28-metil-ursolato de metila (7), 3-O--D-glicopiranosíl-sitosterol (8) e 3-O--D-glicopiranosíl-estigmasterol (9). Os extratos das flores apresentaram maiores atividades edematogênicas. Este é o primeiro registro do estudo das flores, caules e raízes dessa planta.

Orientador: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Richard Garratt / Banca: Jonas Perales / Banca: Humberto D'Muniz / Banca: Marcia Gallaci / Resumo: O envenenamento por picadas de serpentes é um importante problema de saúde pública em muitos países tropicais e subtropicais. Aspectos científicos, médicos e sociais relacionados ao envenenamento por serpentes do gênero Bothrops são especialmente importantes no Brasil já que estes animais são responsáveis por aproximadamente 90% dos acidentes ofídicos relatados em nosso país. Um dos principais problemas relacionados ao acidente botrópico é o proeminente dano tecidual local cuja patogênese é complexa e envolve a ação combinada de uma variedade de componentes do veneno. As fosfolipases A2 (PLA2s) são os componentes mais abundantes no veneno e tem papel fundamental quando se trata do estabelecimento de lesão muscular. O presente trabalho descreve estudos estruturais com miotoxinas que adotam enovelamento de PLA2s (PLA2s homólogas) com o objetivo de melhor entender a relação estrutura - função destas toxinas. Para tanto, estudos estruturais por cristalografia de difração de raios X com Lys49-PLA2s de venenos botrópicos complexadas com os inibidores manganês e ácido rosmarínico (AR) foram realizados. A estrutura cristalográfica de uma miotoxina Asp49-PLA2 homóloga complexada com cálcio também foi elucidada. Adicionalmente, o arranjo quaternário de miotoxinas Asp49-PLA2s homólogas do gênero Bothrops foi revisado e características estruturais relevantes para a expressão da miotoxicidade destas proteínas foram apontadas. A estrutura cristalográfica do complexo formado entre uma Lys49-PLA2 e o inibidor AR evidencia que este inibidor interage com a proteína na entrada de uma dos canais hidrofóbicos do dímero protéico, estabelecendo ligações de hidrogênio com átomos dos resíduos Phe3, Lys7, Leu10, Gln11 e Gly15 do monômero com a qual interage. Já no... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Envenoming resulting from snakebites is an important public health problem in many tropical and subtropical countries. Scientific, medical and social aspects related to envenoming by snakes from Bothrops genus are especially important in Brazil because these animals are responsible for approximately 90 % of all ophidian accidents reported in our country. One of the main problems regarding bothropic accidents is a prominent local tissue damage whose pathogenesis is complex and involves the combined action of a variety of venom components. Phospholipases A2 (PLA2s) are the most abundant muscle-damaging components of these venoms playing a central role in the muscle damage establishment. The present work reports structural studies with myotoxins that adopt a PLA2 fold (PLA2- like myotoxins) aiming a better understanding of their structure-function relationship. For this purpose, X-ray crystallographic studies of Lys49-PLA2s from bothropic snake venoms complexed to the inhibitors manganese and rosmarinic acid (RA) were performed. The crystallographic structure of the complex formed between an Asp49-PLA2-like myotoxin and calcium was also solved. Additionally, the quaternary assembly of Asp49-PLA2-like myotoxins from Bothrops genus was reviewed and relevant structural features for their myotoxicity expression were pointed out. The crystallographic structure of the complex formed between a Lys49-PLA2 and the inhibitor RA demonstrates that the inhibitor interacts with the protein in the entrance of one of its hydrophobic channel, establishing hydrogen bonds with atoms of the residues Phe3, Lys7, Leu10, Gln11 and Gly15 of the monomer with which it interacts. For the complex formed between a Lys49-PLA2 and the inhibitor Mn2+ the manganese ion is coordinated by atoms of the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Márcia Gallacci / Banca: Selma Maria Michelin Matheus / Banca: Yoko Yoshima-Franco / Resumo: Os acidentes botrópicos representam cerca de 87% dos envenenamentos ofídicos registrados no Brasil e se destacam pelas graves seqüelas que limitam a vida do acidentado. O principal efeito tóxico local destes é a mionecrose, que pode levar à perda tecidual permanente e à amputação. A mionecrose pode ser decorrente da isquemia do tecido muscular, causada por fatores hemorrágicos presentes nestes venenos (metaloproteases), ou da presença de miotoxinas (PLA2s) que afetam diretamente o tecido muscular. O método mais eficaz para o tratamento dos envenenamentos ofídicos é a soroterapia passiva. No entanto, esta é limitada devido à relativa ineficácia do soro em neutralizar a mionecrose dos venenos botrópicos, além de muitas comunidades não terem acesso à soroterapia. Estes fatores conduzem a busca de métodos alternativos, como o uso de extratos vegetais. Evidências mostram que o extrato aquoso da Casearia sylvestris, conhecida popularmente como "guaçatonga, é capaz de neutralizar efeitos tóxicos de venenos brutos e de suas miotoxinas isoladas. A Casearia sylvestris apresenta diversos outros efeitos terapêuticos como: anti-séptico, antiinflamatório, anestésico local, anti-tumoral, anti-úlcera e cicatrizante. Devido à escassez de estudos experimentais para avaliar a eficácia de extratos vegetais na redução dos danos locais ocasionados pelo envenenamento botrópico, torna-se importante avaliar a potencial atividade antiofídica da Casearia sylvestris. O presente estudo teve por objetivo investigar o uso do extrato aquoso da Casearia sylvestris, como terapêutica tópica dos efeitos locais do envenenamento botrópico experimental em camundongos. Foi avaliada a capacidade do extrato bruto da planta em neutralizar a mionecrose induzida pelo veneno da Bothrops jararacussu e/ou acelerar o processo de regeneração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bothrops accidents represent about 87% of snakebites recorded in Brazil and account for serious the consequences that affect the life of the victim with social and economic repercussions. Its main toxic effect is myonecrosis, which can lead to permanent tissue loss and amputation. Myonecrosis may result from muscle tissue ischemia, hemorrhage caused by factors present in these venoms (metalloproteases), or the presence of myotoxins (PLA2s) that directly affect muscle tissue. The most effective treatment is passive serotherapy. However, this is limited due the relative ineffectiveness of the serum to neutralize the myonecrosis of Bothrops venoms and the lack of access to serotherapy by many communities. These factors lead to alternative methods such as the use of plant extracts. Evidence shows that the aqueous extract of Casearia sylvestris, known popularly as "guaçatonga", is able to neutralize the toxic effects of venom and their crude myotoxins isolated. Casearia sylvestris presents several other therapeutic effects such as, antiseptic, antiinflammatory, local anesthetic, anti-tumor, anti-ulcer and wound healing. Due to the scarcity of experimental studies to evaluate the efficacy of plant extracts in reducing the harm caused by Bothrops envenomation, it is important to evaluate the potential activity of antiophidic Casearia sylvestris as a complement to conventional serum therapy. The present study aimed to investigate the use of aqueous extract of Casearia sylvestris, topical therapy as complementary to local effects of Bothrops envenomation in experimental mice. We evaluated the ability of the crude extract of the plant to neutralize myonecrosis induced by the venom of Bothrops jararacussu and / or accelerate the process of muscle regeneration. The onset of myonecrosis and the regenerative process... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-13Bitstream added on 2014-08-13T18:01:14Z : No. of bitstreams: 1 000734578_20141213.pdf: 582180 bytes, checksum: 39bc1ce8faae49b36e5f6872f7230f69 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:48Z: 000734578_20141213.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:35Z : No. of bitstreams: 1 000734578.pdf: 6353831 bytes, checksum: 2085747c5839b745c38dd84ed2d34826 (MD5) / Ainda nos dias de hoje, o envenenamento ofídico é um problema de saúde pública, afetando sobretudo, regiões de clima tropical, subtropical e áreas rurais de países da África, Ásia, Oceania e América Latina. No Brasil, os gêneros de serpentes Bothrops e Crotalus são responsáveis por quase 90% dos acidentes ofídicos, sendo que os acidentes provocados por este último apresentam relativa alta taxa de mortalidade. O veneno das serpentes do gênero Bothrops possuem uma classe de fosfolipases A2, as Lys49-PLA2s, que não possuem atividade catalítica, mas são capazes de induzir a mionecrose por uma mecanismo não catalítico que não é totalmente conhecido. Com relação às fosfolipases A2 veneno das serpentes do gênero Crotalus, o complexo crotoxina, formado pela crotoxina A (não catalítica) e a crotoxina B (catalítica) pode constituir até cerca de 60% do veneno desses animais, como no caso da subespécie Crotalus durissus terrificus, e é uma potente neurotoxina que provoca um grande bloqueio da transmissão neuromuscular. Neste trabalho, utilizando diversas técnicas teóricas e experimentais, sobretudo cristalografia de raios X, são apresentados diversos resultados que visam aprofundar o conhecimento acerca do funcionamento destas proteínas. Com relação à crotoxina, é apresentado a estrutura cristalográfica da crotoxina B de Crotalus durissus colillineatus, a expressão heteróloga da isoforma CBa2 da crotoxina B de Crotalus durissus terrificus para a posterior produção de formas mutantes sítio-dirigidas e resultados da análise do espalhamento de raios X a baixo ângulo da crotoxina e de suas subunidades isoladas, gerando informações relevantes e inéditas acerca da oligomerização destas proteínas. No caso das Lys49-PLA2s isoladas do veneno botrópico, são apresentadas duas novas estruturas cristalográficas dessa classe de proteínas isolada da serpente amazônica B. brazili. A análise ... / Snakebite is a very serious public health problem still today, affecting tropical and subtropical countries, especially the rural areas of Africa, Asia, Oceania and Latin America. In Brazil, Bothrops and Crotalus snake genus are responsible of almost 90% of snakebites. The venoms of Bothrops snakes have a class of phospholipases A2, known as Lys49-PLA2s, which do not have catalytic activity. However, they are able to induce myonecrosis by a non-catalytic mechanism that is not fully understood. In the venom of Crotalus snakes, a phospholipase A2, known as crotoxin constitutes about 60% of the venom from these animals. This protein is a potent neurotoxin that causes a large block of neuromuscular transmission formed by complexation of crotoxin A (non-catalytic) and crotoxin B (catalytic). In this work, it was used several theoretical and experimental techniques, in particular X-ray protein crystallography, to generate information to extend the knowledge of the action of these proteins. Regarding to crotoxin, the crystal structure of crotoxin B isolated from Crotalus durissus colillinetaus was solved and the heterologous expression of isoform CBa2 of crotoxin B from Crotalus durissus terrificus was performed, in order to, subsequently, produce site-directed mutants. Furthermore, it is presented small angle X-ray scattering experiments with the crotoxin and its isolated subunits that provided intriguing and novel information about the oligomerization of these proteins. Regarding to Lys49-PLA2s from Bothrops snakes, it is presented two new crystal structures of this class isolated from Amazonian snake B. brazili. The analysis of these structures and the structural comparison to other Lys49-PLA2s crystallographic structures generated new information about the position of hydrophobic residues in C-terminal portion of these proteins. This information led us to a new proposition of the mechanism of action of these proteins. It is also presented ...