Orientadores : Paulo Cesar Rodrigues Palma, Viviane Herrmann / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T22:05:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cortado_PedroLuizMacedo_D.pdf: 7054640 bytes, checksum: 9f2ce3dbccc9eabbe7a95d4824105249 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Orientador: Hernandes F. Carvalho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T06:28:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Antonioli_Eliane_M.pdf: 5634229 bytes, checksum: e84596f8c7f4242d01484a32424ef9a4 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A próstata é uma glândula exócrina composta de um epitélio secretor e de um estroma composto de diversos tipos celulares e matriz extracelular. A célula muscular lisa é o principal componente do estroma prostático e desempenha um importante papel na remodelação da glândula nas lesões e/ou alterações hormonais afetando também as células epiteliais. As células musculares lisas prostáticas são reguladas por andrógenos e, provavelmente, produzem inúmeros fatores essenciais para o desenvolvimento e manutenção das células epiteliais. Porém, o modo de ação dos andrógenos sobre as células musculares lisas ainda não está totalmente esclarecido, embora acredite-se que sejam de cnlcial importância para estas células. O presente estudo procurou verificar a influência dos andrógenos sobre as células musculares lisas prostáticas in vivo e in vitro. Os resultados obtidos demonstraram que os andrógenos afetam a morfologia das células musculares lisas, mas não a expressão de proteínas específicas de músculo liso. Anteriormente foi demonstrado que há uma extensa reorganização do estroma prostático após a privação de andrógenos e que as células musculares lisas estariam envolvidas com o rearranjo das fibras de colágeno. Para verificar a participação das células musculares lisas na remodelação do estroma prostático, estas células foram isoladas, caracterizadas e empregadas num modelo in vitro de contração de gel de colágeno. Foi demonstrado que as células musculares lisas prostáticas são capazes de contrair géis de colágeno e essa função é modulada pela insulina e testosterona, refletindo a remodelação das fibras de colágeno observadas in vivo após a privação de andrógenos conseguida com a castração. Estes resultados permitem sugerir que a reorganização do estroma prostático após a castração é comandada pelos hormônios, sendo que as células musculares lisas participam na reorganização do microambiente frente à redução do epitélio, estabelecendo um novo balanço entre o epitélio e o estroma / Abstract: The prostate is an exocrine gland composed of a secretory epithelium and a stroma made up of diverse cell types and extracellular matrix. The smooth musc1e cell is the main component of prostatic stroma and plays an important role in the remodelling of the gland in the metaplasias and/or hormonals alterations. The prostatic smooth musc1e cells are regulated by androgens and, probably, produce essential factors for the development and maintenance of the epithelial cells. However, the mechanism of action of the androgens on smooth musc1e cells is not c1ear. The present work studied the influence of the androgens on the prostatic smooth musc1e cells in vivo and in vitro. The results obtained demonstrated that androgens affect the morphology of smooth musc1e cells, but not the expression of protein specifically ftom smooth musc1e. Previously the occurrence of an extensive reorganization of prostatic stroma with androgen deprivation was demonstrated and that smooth muscle cells would be involved with the rearrangement of collagen fibres. To verify the participation of smooth musc1e cells in the remodelling of prostatic stroma, smooth musc1e cells were isolated, characterized and used in an in vitro model of collagen gel contraction. The results demonstrated that the prostatic smooth musc1e cells are capable of contracting collagen gels and this function is modulated by insulin and testosterone. These results suggest that the reorganization of prostatic stroma after castration is regulated by hormones, and that smooth musc1e cells reorganize the microenvironment to adapt to the reduction of the epithelium, establishing a new balance between the epithelium and stroma / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Ivanira Jose Bechara / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:38:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bockelmann_PetraKarla_M.pdf: 3545716 bytes, checksum: 14a2bf292fa6eb03926de15ae4a33858 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: As nadadeiras dos peixes teleósteos apresentam uma capacidade de regeneração bastante rápida, o que as torna um modelo biológico importante e adequado para o estudo do efeito de drogas que possam alterar esse crescimento. Os raios que constituem as nadadeiras são constituídos, em grande parte, por colágeno e glicosaminoglicanos e, sabe- se, por relatos na literatura, que certas drogas anti-inflamatórias, esteróides e não esteróides, podem afetar a composição da matriz extracelular dos tecidos conjuntivos. Este trabalho tem como objetivo estudar o efeito do naproxeno, uma droga anti-inflamatória não esteróide utilizada no tratamento de doenças reumáticas, durante o processo regenerativo da nadadeira caudal do peixe teleósteo Cyprinus carpio. Para isso, 2 aquários com 6 litros de água cada um foram montados. A água foi declorada e limpa, a temperatura foi de 24°C e a aeração foi constante. Em um dos aquários foi dissolvido o naproxeno na dose 10,4mgIL. O outro aquário, contendo apenas água, serviu como controle. Quarenta e dois alevinos foram anestesiados com benzocaína (1: 10000) e tiveram suas nadadeiras caudais amputadas transversalmente. Após a amputação, os peixes foram divididos em 2 grupos de 21 peixes cada. Um grupo foi para o aquário contendo o naproxeno dissolvido e o outro grupo foi para o aquário controle. Os peixes permaneceram nestes aquários até que a regeneração ocorresse. Diariamente, até o final do experimento, metade da água de cada aquário foi . trocada por água limpa e, no aquário experimental, metade da dose de naproxeno, 5,2 mgIL, foi acrescentada. Os animais foram anestesiados, sacrificados e as nadadeiras em regeneração foram excisadas e fixadas em intervalos de 1, 2, 4, 6, 8, 10 e 12 dias após a amputação. Foram utilizados 3 espécimes, por grupo, para cada intervalo de tempo. As amostras foram processadas para permitir estudos através da microscopia de luz convencional e polarizada e através da microscopia eletrônica de transmissão. No geral, o naproxeno, na dose utilizada neste trabalho, não afetou a organização dos componentes da matriz extracelular e nem a mineralização da substância fundamental da lepidotriquia durante o processo regenerativo da nadadeira caudal. Como o efeito do naproxeno, bem como de outras drogas anti-inflamatórias não esteróides, depende da dose utilizada, da via de administração e do metabolismo do animal em que a droga esta sendo testada, talvez doses maiores da droga possam provocar um atraso ou até inibir por completo esse processo de regeneração, podendo, também, provocar uma desorganização da matriz lepidotriquial / Abstract: The fins of teleosts show a very fast capacity for regeneration, what make them one important and appropriate biologic model for study of the drugs that can affect their development. The rays of fins are formed, for the most part, of collagen and glycosaminoglycans and, as showed on literature reports, some antiinflammatory drugs, steroidal and nonsteroidal, may affect the extracellular matrix composition of connective issue. In the present investigation we studied the effect of naproxen, a non-steroidal antiinflammatory drug used for the treatment of rheumatic disease, during the regeneration process of the tail fin of the teleost fish Cyprinus carpio (carp). The beginning of the experiment was conducted using 2 aquaria containing 6 liters of water each were set up. The water was clear and decWorinated, the temperature was kept at 24°C and under constant aeration. The naproxen was dissolved in one of them to obtain the dose of 10.4 mg/L, while the other contained on1y water and was used as a control. Forty-two alevins were anesthetized with benzocaine (1 : 1 0000) and their tail fins were transversely amputated. After amputation, the fishes were divided into 2 groups of 21 animaIs each. One group was placed in the aquarium containing the drug and the other was placed in the control aquarium. The fishes were left in the aquaria until the occurrence of regeneration. Half of the water in each aquarium was exchanged daily with clean water until the end of the experiment and half of the dose of naproxen, 5.2 mg/L, was added to the experimental aquarium in order to restaured the initial concentration. The animaIs were anesthetized and sacrificed and the regenerating fins were excised and fixed at intervals of 1,2,4,6,8, 10 and 12 days after amputation. Three specimens per time point were used. The collected samples were processed for standard and polarized light microscopy and for transmission electron microscopy. In general, naproxen at the dose used in the present study did not affect the organization of the extracellular matrix components and the mineralization of the fundamental substance of the lepidotrichia during the process of tail fin regeneration. Since the effect of naproxen, as well as of other non-steroidal anti-inflammatory drugs, depends on the dose used, the route of administration and the metabolism of the animal in which the drug is being tested, higher doses of the drug may perhaps delay or even fully inhibit this process, possibly also provoke disorganization of the lepidotrichial matrix / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular

Orientador: Benedicto de Campos Vidal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paoli_Flaviade_M.pdf: 13532312 bytes, checksum: e1da24a994eb94382a8c6665b5814297 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Dois tendões de frangos com idades de 21 e 41 dias da região tibiotarsus foram utilizados: o tendão calcaneus communis e o tendão flexor digitorum superficialis, que são submetidos a forças compressivas e tensionais, respectivamente. O objetivo deste estudo foi detectar diferenças morfológicas e funcionais, de ordem molecular e de cristalinidade entre esses dois tendões. Tendões que trafegam sobre uma articulação possuem características fibrocartilaginosas em resposta a forças compressivas apresentando grandes quantidades de glicosaminoglicanos livres e organizados com os feixes de colágeno. Por outro lado, tendões que são submetidos a forças tensionais possuem menores quantidades de glicosaminoglicanos, fato esse indicado por uma metacromasia menos evidente na coloração com Azul de Toluidina e por apresentarem valores maiores em testes de intumescimento em ácido acético a 3%. Análises de curvas de birrefringência de forma revelam um maior estado de agregação ordenada e uma maior cristalinidade neste tendão, demonstrada por maiores valores de retardas ópticos. Células do tendão calcaneus communis exibem grandes variações morfológicas, assim como seus núcleos, que possuem formas que vão da fusiforme até a arredondada, semelhantemente a condrócitos. Foi também observado aumento da quantidade de DNA nesses núcleos, com o avanço da idade, comparativamente à quantidade determinada em eritrócitos de frangos, utilizados como controle para os parâmetros geométricos e absorciométricos analisados. Portanto, todos esses dados indicam que estes tendões, por necessitarem de processos adaptativos constantes, possuem uma maior organização e orientação de seus componentes, além de uma alta atividade metabólica de suas células / Abstract: Two tendons of chickens with 21 and 41 days old from tibiotarsus region were utilized: calcaneus communis tendon and fIexor digitorum superficialis tendon that are submitted to compressive and tensional forces, respectively. The aim of this study was to detect morphological and functional differences, related with molecular order _nd crystallinity between these two tendons. Tendons that pass above joints have fibrocartilagenous characteristics in response to compressive forces, presenting high amounts of free glycosaminoglycans and organized with the collagen bundles. Otherwise, tendons subjected to tensional forces have minor glycosaminoglycans amount, in agreement with the decreased metachromasy after toluidine blue staining and with the great values found in the intumescing tests with 3% acetic acid. Form birefringence curves analyses reveal a higher ordered aggregational state and crystallinity in this tendon according to the optical retard values. Cells of the calcaneus communis tendon exhibit great morphological variations, as its nuclei, wich have forms ranging from elongated to round, similar to chondrocytes. Its was also watched an increase on the DNA amount at these nuclei with the ages advance when compared to the amount found in chicken erythrocytes, here utilized as control for the geometric and absorciometric parameter. However, ali these data indicate that these tendons, for needing constant adaptative processes, have a high organization and orientation of their components, besides a high metabolic activity of the cells / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Benedicto de Campos Vidal, Maria Luiza Silveira Mello / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:12:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_MarcelaAldrovani_M.pdf: 772611 bytes, checksum: 98863f8fc3e779f3b2e9d793b94fa5bb (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Camundongos NOD são ótimos modelos para estudo, uma vez que são portadores de duas importantes características: diabetes e resistência à apoptose. É desconhecido se a elevada resistência à apoptose atinge células somente do sistema imune onde foi descrita, ou se é uma característica de células de outros sistemas/tecidos. O diabetes mellitus provoca alterações na matriz extracelular (MEC) por meio da glicosilação não-enzimática das proteínas intercelulares, tal como o colágeno. No processo não-enzimático de glicosilação da proteína colagênica, o grupo aldeído da glicose reage com o grupamento amina livre de resíduos de lisina e hidroxilisina do colágeno, formando uma base Schiff reversível que origina os produtos de Amadori. Estes produtos dão origem aos produtos de glicosilação avançada (AGEs) que desencadeiam a formação de ligações cruzadas entre as moléculas de colágeno. O colágeno interage com receptores de superfície celular de modo que alterações nesta glicoproteína poderiam alterar a transdução de sinais da MEC para as células. O presente estudo visa descrever e quantificar as propriedades anisotrópicas ópticas em feixes de colágeno; buscar alterações elicitadas pelo diabetes nos proteoglicanos (PGs) da MEC; verificar a ocorrência de resíduos de glicose disponíveis no colágeno glicosilado; descrever o intumescimento e a extração de feixes de colágeno em ácido acético a 3% e comparar alguns aspectos da morte celular e do fenótipo nuclear de fibroblastos de feixes de colágeno de camundongos sadios e NOD, buscando-se alterações elicitadas pelo diabetes. Para isso, tendões do calcâneo e da cauda de 14 camundongos NOD e BALB/C (não-diabéticos) foram submetidos aos seguintes experimentos: Medidas de retardo óptico (RO) das birrefringências; digestão enzimática com hialuronidase testicular; colorações com azul de toluidina (AT) pH 4.0 e concanavalina Br (ConBr); intumescimento e extração do colágeno; reação de Feulgen, análise de imagem nuclear e teste imunocitoquímico de TUNEL. Os resultados indicam que toda a glicose incorporada não-enzimaticamente ao colágeno foi convertida a produtos de Amadori. O aumento no número de ligações cruzadas intermoleculares tornou as fibras de colágeno mais alinhadas, estáveis e com condições de empacotamento molecular mais intensas em relação às fibras de colágeno controle. A estabilidade torna o colágeno glicosilado mais resistente à extração por ácido acético a 3% e sugere a ocorrência de diminuição na taxa de remodelação tecidual de animais e/ou pacientes diabéticos. Em termos de ordem molecular (cristalinidade) dos feixes de colágeno, parece que o diabetes induz mudanças variáve is em função da estrutura, fato este que sugere a existência de significados fisio-patogênicos distintos. Quanto aos PGs da MEC, não foram observadas alterações elicitadas pelo diabetes nestas macromoléculas. Os parâmetros geométricos e densitométricos que caracterizam o fenótipo nuclear dos fibroblastos também foram alterados pelo diabetes, sendo que encontrou-se um aumento desses parâmetros ao compará-los com os observados em núcleos de fibroblastos de camundongos não-diabéticos. Não foi constatada positividade ao teste de TUNEL nos núcleos dos fibroblastos estudados / Abstract: NOD mice possess two characteristics: diabetes and resistance to various apoptosis signals. Diabetes mellitus provokes alterations in the extracellular matrix (ECM) through of the non-enzymatic glycosylation of intercellular proteins, such as the collagen. In the process of non-enzymatic glycosylation of the collagen protein, the carbonyl group of a sugar reacts with the amino group of a protein and forms a Schiffs¿ base which reacts further into a Amadori products. The products of early glycosylation undergo rearrangements resulting in the formation of irreversible products, the so-called advanced glycosylation endproducts (AGEs). AGEs formation is probably one of the main mechanisms underlying the increased arterial stiffness in diabetic patients or diabetic complications in general. The collagen interacts with cell receptors, consequently alterations in the collagen can change the signal transduction from ECM for the cells. The principal objectives of present study are: to describe the anisotropic properties of collagen bundles obtained from NOD mice and to compare some aspects of the cell death and nuclear phenotype of fibroblasts obtained from NOD and BALB/C mice. For this, calcaneal and tail tendons were submitted to the following experiments: measurements of intrinsical and textural birefringence; enzymatic digestion; staining with toluidine blue (TB) pH 4.0; Concanavalin Br method; collagen extraction; Feulgen reaction, analysis of nuclear images and TUNEL test. The results indicate that all glucose was converted the Amadori products. The increase in the number of cross-linking becomes the collagen fibers both more 16 aligned and with more intense molecular packing conditions than those of the control. In terms of molecular order (crystallinity) of collagen bundles, the diabetes induces variable changes in function of the structure, fact this that suggests the existence of different physio-pathogenics meanings. The analysis of parameters that characterize the nuclear phenotype (area, perimeter, OD, IOD, SDtd and entropy) indicate physiological differences between the fibroblasts obtained from NOD and BALB/C mice. The reply to the TUNEL test was negative in the fibroblasts / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tomiosso_TatianaCarla_M.pdf: 4297076 bytes, checksum: 448864ccd931233cf60f718db755d078 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A cartilagem articular é um tecido conjuntivo hialino que apresenta células e abundante matriz extracelular, sendo essa composta de colágenos, glicoproteínas não colagênicas e proteoglicanos. Este trabalho teve como objetivo descrever a composição e organização da matriz extracelular de cartilagem articular de avestruz. Esta ave de grande porte e de interesse comercial, quando mantida em cativeiro, tem sido acometida por artrose nas articulações do tarsometatarso com sério comprometimento para a saúde do animal e consequências econômicas. Para tanto consideramos as cartilagens articulares das superfícies proximal e distal do tarsometatarso. A cartilagem proximal foi dividida em porção lateral e intermediária-medial, enquanto que da cartilagem da superfície distal foi analisada só a porção central. As análises estruturais das regiões da cartilagem, coradas com azul de toluidina, mostraram porções meta cromáticas e fibrilares. As fibrilas, intensamente birrefringentes ao exame pela microscopia de polarização, mostraram-se dispostas em várias direções, especialmente na região dista / Abstract: The articular cartilage is a hyaline connective tissue that contains cells and a great amount of extracellular matrix, which is composed of collagen, non-collagenous glycoproteins, and proteoglycans. This work aimed to describe the composition and organization of the extracellular matrix from articular cartilage of ostrich, which is a big bird with commercial importance and that commonly suffers of arthritis at the tarsometatarsical articulations when living in captivity conditions, teading to serious commitments to the animal's health, beyond the economical consequences. For this purpose. we have considered the articular cartilages of the proximal and distal surfaces of the tarsometatarsus. The proximal cartilage was divided into lateral, and intermediary-medial portions. From the distal surface only the central portion was analyzed. Structural analyses after toluidine blue staining showed presence of metachromatic and fibrilar components. The fibrils, intensely birefringent at polarization microscopy. were arranged in many directions, especially in distal cartilage. To extract the extracellular matrix components 4 M guanidinium chloride was utilized. The components were fractionated in DEAE-Sephacel and analyzed by SDS-PAGE. Quantitation of proteins and glycosaminoglycans was done utilizing colorimetric methods. The quantitative analysis revealed that the distal region, which is subjected to higher compressive forces, contaíns more proteins and glycosaminoglycans than the proximal region. The SDS-PAGE analysis of the fractions eluted from the DEAE-Sepachel showed the presence of proteíns with Mr from 17 to 121 kDa. In ali regions, polydisperse components wíth Mr around 67, 80-100, and 250-300 kDa, were found. These components probably correspond to the small proteoglycans fíbromodulin, decorín and biglycan. Glycosaminoglycans analysis in agarose-propylene diamine gel showed only the presence of chondroitin-suftate. The possible decorin found is a proteoglycan of chondroitin-sufate, and not dermatan-sulfate, as observed in other cartilages. Structurally the distal region exhibited ffbí11s arranged in several directions, probably because of a highest compressive strenght / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:56:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2780_1.pdf: 3374117 bytes, checksum: 1ce7fdad8e74d2e26d55331aec8bb950 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Objetivos: Avaliar os resultados obtidos de pacientes portadores de ceratocone na forma inicial ou moderado, em fase de evolução, submetidos ao tratamento com a técnica do crosslinking do colágeno utilizando parâmetros reprodutíveis de concentração de riboflavina em gotas e exposição corneana aos raios ultra-violeta . Métodos: Em um estudo prospectivo, foram submetidos ao tratamento com crosslinking do colágeno 24 olhos de 24 pacientes, 13 do sexo feminino e 11 do sexo masculino. A idade média das mulheres foi 24,08 anos e dos homens de 21,27 anos. Quanto ao grau de ceratocone, 16 pacientes apresentavam ceratocone grau I e os outros 8 pacientes com ceratocone grau II. Foram tratados no período de dezembro de 2008 a abril de 2009 e acompanhados por um período de 6 meses com avaliações mensais da ceratometria , paquimetria pelo exame do ORBSCAN e AVCC ( acuidade visual com correção ) e refração ( avaliação do grau ). Resultados: Ao final do tratamento observou uma melhora estatisticamente significante ( p < 0,05 ) nas médias da ceratometria máxima (Kmáx), ceratometria média (Kmédio), AVCC ( acuidade visual com correção), paquimetria ( espessura da córnea ) e equivalente esférico. A média da acuidade visual corrigida com óculos (AVCC) antes do tratamento foi de 0.38 logMAR (20/50) com desvio padrão de ± 0,172 e no final do tratamento foi de 0.22 logMAR ( 20/30 ) com DP(desvio padrão) de ± 0,153 . Observamos também que a média do Kmédio antes do tratamento era 47.30 D com DP 2,723 e 6 meses após o tratamento diminuiu para 46.00 D com DP 2,595 o que confirma o aplanamento corneano com diminuição média de 1,30 D(dioptrias). Conclusão: O tratamento do crosslinking mostrou resultados significativamente positivos nos pacientes tratados principalmente nos pacientes portadores de ceratocone grau I . Concluímos que houve diferença significante entre a acuidade visual antes e pós-tratamento com melhora da visão

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:59:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8476_1.pdf: 5038082 bytes, checksum: 0cb3583859984a2f9505d6348cd18d26 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Verificou-se a influência da remoção do colágeno sobre a adesão dentinária de sistemas restauradores adesivos através de avaliações da resistência adesiva à microtração (RA&#956;T) e da análise morfológica das interfaces adesivas em microscopia eletrômica de varredura (MEV). Molares humanos tiveram a dentina oclusal exposta, sendo distribuídos conforme os grupos: GSB (Single Bond/3M); GPB (Prime & Bond NT/Dentsply); GOC (One Coat Bond/Coltene/Vigodent); GPQ (PQ1/Ultradent); GSE (Clearfil SE Bond/Kuraray); GOU (One Up Bond F/Tokuyama). Cada grupo (n=12 - Ra&#956;T; n=3 - MEV) foi subdividido em 2 subgrupos quanto à forma de tratamento dentinário: 1 protocolo adesivo recomendado pelos fabricantes; 2 remoção do colágeno (H3PO4 15 s + NaOCl 5% por 2 min) + protocolo adesivo. Para os testes de RA&#956;T foram obtidos 9 corpos de prova por dente, com área de interface adesiva de 0,8 mm2 (± 0,2), os quais foram submetidos ao ensaio mecânico de RA&#956;T à velocidade de 0,5 mm/min. Para a MEV, após o preparo e tratamento das interfaces adesivas, realizou-se a metalização das superfícies e análise na linha de união. Os valores médios dos submetidos a ANOVA e teste de Tukey (&#945;=5%) foram em MPa(letras iguais = similaridade estatística): GSB1=60,70 (ab); GSB2=39,08 (de); GPB1=31,73 (e); GPB2=61,53 (a); GOC1=54,30 (abcd); GOC2=51,24 (abcd); GPQ1=39,11 (de); GPQ2=58,18 (abc); GSE1=44,11 (abcde); GSE2=51,00 (abcd); GOU1=42,2 (bcde); GOU2=40,18 (cde). A análise em MEV evidenciou ausência de camada híbrida em todos os grupos submetidos à desproteinização. A remoção das fibras colágenas interferiu positivamente sobre a adesão do sistema adesivo Prime & Bond NT/Dentsply e PQ1/Ultradent e negativamente para o Single Bond/3M ESPE

Orientador: Benedicto de Campos Vidal / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T06:41:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria_SilvyaStuchi_D.pdf: 6365323 bytes, checksum: 6d4c28f92f74ac737d03b7a3634c42cf (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: o presente trabalho é composto de dois estudos, o primeiro que trata a respeito da análise da morte celular por apoptose em células fibroblásticasem culturas confluentes e o segundo, sobre a influênciado substrato à base de colágeno tipo I hiperpolimerizado no crescimento e apoptose de células fibroblásticascultivadas por longo período. As células BHK21 em apoptose, submetidas à reação de Feulgen e a seguir à análise de imagem, demonstraram menor conteúdo de DNA, representado pela diminuição dos valores de IOD (densidade óptica integrada). Após a reação de ConcanavalinaA (Com A), os núcleos apoptóticos exibiram uma maior positividade de reação que os núcleos normais, o que demonstra a presença de glicoproteínas, possivelmente da matriz nuclear, rearranjadas e complexadas ao DNA do núcleo apoptótico. O arranjo ordenado da complexação de glicoproteínas ao DNA foi confirmado através de coloração com ATCEC (azul de toluidina-concentração crítica de eletrólitos), a qual diferencia DNA de RNA, seguida por observação em microscopia de polarização. Células fibroblásticasV79, submetidas à reação de Feulgen e estudadas por análise de imagem, mostraram em culturas confluentes três fenótipos diferentes classificados como normal, suspeito de apoptose e apoptótico. Tal classificação foi feita aliando análise morfológica e avaliação de parâmetros como conteúdo de DNA (IOD), condensação cromatínica em termos de densidade óptica e medidas de área nuclear. Nossos resultados revelaram que a condensação cromatínica aumentou quando comparados os três fenótipos entre si. Foi observado decréscimo nos valores Feulgen-DNA em células apoptóticas e em células suspeitas de apoptose, revelando-se perda de DNA. Em conclusão, destacou-se a importância do método utilizado para caracterizar fases iniciaisdo processo apoptótico e a possibilidade de diagnóstico inequívoco de apoptose, ao utilizar esta metodologia, desde que associada a outras, quer citoquímicas, imunocitoquímicasou bioquímicas. No último estudo, células fibroblásticas V79 foram cultivadas em substrato de colágeno tipo I hiperpolimerizado. Este substrato apresenta características especiais de auto-agregação e é uma estrutura ordenada que mimetiza a estrutura apresentada pelos tendões in vivo. O cultivo celular de longa duração sobre este substrato foi caracterizado por análise de proliferação, diferenciação e morte celular por apoptose, comparado ao crescimento das células sobre lamínulas. A reação de Feulgen, associada à análise de imagem demonstrou que as células apresentaram um aumento no conteúdo de DNA e da condensação cromatínica quando crescidas em substrato colagênico. A proliferação das células V79 sobre colágeno foi menor, refletindo uma fase de latência neste substrato e após o método de TUNEL, específico para detecção de apoptose, observou-se que a morte celular ocorria, porém em tempos de cultivo superiores aqueles observados para células que cresceram sobre lamínula. Demonstrou-se que o substrato colagênico altera o desenvolvimento proliferativo e metabólico dos fibroblastos, características que sugerem a diferenciação celular, e também atrasa, mas não previne o processo apoptótico / Abstract: matrix which were disorganized and complexed to the DNA of apoptotic nuclei. The ordered arrangement of glycoproteins on the DNA was confirmed by TB-CEC (Toluidine blue-critical electrolyte concentration) which diferentiatesDNA ftom RNA after polarization mycroscopy analyses. V79 fibroblast cells submitted to the Feulgen reaction and image analysis of confluent cultures showed three different nuclear phenotypes classified as normal, suspected of apoptosis and apoptotic. This classification were done using morphological analysis and consideration of parameters such as DNA content (IOD), chromatin condensation in terms of optical density (OD) and nuclear area. The results showed that chromatin condensation increased when the three phenotypes were compared. A decrease of Feulgen-DNA values was observed in apoptotic cells and in cells suspected of apoptosis, revealing loss of DNA. In conclusion, this pointed out the importance of this method to characterized early phases of an apoptotic process and the possibility of inequivocal apoptosis diagnosis using this methodology when associated with others, such as cytochemical, immunocytochemical or biochemicalmethods. In the other aprroach, V79 fibroblastic cells were cultured on hyperpolymerized collagen type I substrates. The substrate showed special characteristics of self-assemleyand is an ordered structure that mimics the in vivo tendon. The long-term cell culture on this substrate was characterized by proliferation, differentiation and cell death by apoptosis analysis when compared to cell growth on coverslips. The Feulgen reaction allied to image analysis demonstrated that there is an increase in DNA content and in chromatin condensation when the cells are grow on the collagen substrate. The proliferation of V79 cells on collagen was less than observed for cells grown on a coverslips, which reflects the latency of this substrate. After the apoptosis specific TUNEL method, cell death was found to occur after longer culture periods than for cells grown on coverslips. The collagen substrate alters fibroblast proliferation and morphological aspects, characteristics that suggest cellular differentiation and the delay of apoptosis but not prevent the prevention of the apoptotic processo / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador: Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-24T07:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_MonicadeCampos_M.pdf: 11738135 bytes, checksum: 923bf4a53465671a3a728451203b86eb (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A transfonnação da sínfise pubiana em um ligamento durante a prenhez, e sua involução no puerpério oferece um modelo ímpar para o estudo do metabolismo do tecido conjuntivo. A separação dos ossos pubianos inicia-se no 12° dia de prenhez, sendo que o espaço entre as superficies articulares aumenta cerca de 1 mm por dia até o parto. Após o parto, esse espaço fecha-se rapidamente, mas não retoma às características do animal virgem. Um dos aspectos mais notáveis deste evento é a remodelação da matriz extracelular, decorrente tanto das alterações qualitativas quanto quantitativas dos componentes da matriz extracelular.Para estudar a organização estrutural e possíveis modificações do colágeno, foi realizado um estudo histoquímico, ultra-estrutural e morfométrico das fibras de colágeno. Os resultados obtidos através dos métodos empregados mostraram que, em camundongos nuliparos, a sínfise é composta por duas populações de colágeno segregadas em compartimentos diferentes: uma população de fibras grossas que se continuam com o periósteo, constituídas por fibrilas finas e grossas; e uma 28 população que fonna uma trama fibrilar na região central da fibrocartilagem, composta basicamente por fibrilas fmas. No 15° dia de prenhez não se nota mais a compartimentalização das fibras, sendo observado um ligamento fonnado por fibras grossas de colágeno com padrão fibrilar bimodal. A partir do 17° dia de prenhez inicia-se o processo de relaxamento do ligamento pubiano que se continuam até 24 horas após o parto; nesta etapa as fibras de colágeno separam­se, com diferentes graus de agregação, sendo observados e padrões de distribuição fibrilar variáveis. Estes resultados sugerem que durante a prenhez, o ligamento pubiano passa por mudanças na sua morfologia, principalmente devido ao rearranjo das fibras de colágeno. Após o parto há a reaproximação dos ossos pubianos onde as fibras tornam-se novamente compactadas, o que demostrou que as mudanças na histoarquitetura da sínfise pubiana estão relacionadas à adequação desta articulação a diferentes situações fisiológicas. No animal virgem, e até o início da separação dos ossos pubianos, o arranjo do colágeno está diretamente relacionado à resistir as forças de compressão, na articulação. Durante o afastamento dos ossos as fibras que compõem o ligamento mostram um padrão estrutural aparentemente adaptado a resistir forças de tensão. O relaxamento do ligamento se faz necessário para tomar possível a passagem do feto, sem contudo modificar a função das fibras de colágeno em resistir as forças de tensão. Com a reaproximação dos ossos a reorganização das fibras de colágeno se faz necessária para restabelecer a sínfise pubiana / Abstract: The spreading apart or relaxation of the pubic joint depends on the growth of a ligament in pregnant rodents, and offers a unique system for the study of the hOl1l1onal regulation of connective tissue. The two pubic articular surfaces begin to separate on the 12th day of pregnancy, and the gap widens an average of 1 mm per day until parturition. After labor, the gap rapid1y closes by the 5th day post-partmn, but does not retum to the virgin condition. The development and involution of the pubic ligament involve an increased biosynthesis of extracellular matrix components such as collagen proteoglycans, and a new balance between synthesis and degradation. In order to evaluate and compare the collagen fibers and fibrils assembly and their possible modifications in the virgin, pregnant and post-partum mouse pubic symphysis, we perfol1l1ed a histochemicaL ultrastructural and morphometric study. The collagen network in virgin and twelve days pregnant murine symphysis showed two distinct distribution and organization: a central fibrocartilaginous region with a random meshwork of thin fibrils collagen that on 12th day of pregnancy they were oriented parallel in direction to the mechanical stretching of joint spreading; b) the peripheral region surrounded by sheaths, continuous with the periosteum, showed thick wavy fibers preferentially oriented. The ligament architecture on the 15th day of pregnancy doesn't show regional differences and was assembled by bimodal thick collagen fibrils. After 17th day of pregnancy the collagen meshwork becomes progressively loosen which result in the relaxation of the symphysis, preparing for the parturition. In the post-partmn, the gap quickly diminished and on 5th day post-partmn, the loose three dimensional collagen arrangement transfol1l1s in dense connective tissue. Therefore the histoarchitecture changes observed in the pubic symphysis during pregnancy can be attributed to the changes of collagen fibers assemblies and their rearrangement in this region preparing to the parturition. In virgin the collagen assembly is proper to resist the compression forces acting on the pubic joint, which becomes gradually relaxed due to the looseness of collagen meshwork of the ligamento This facilitates the opening for delivery but sustains the tissue integrity of the symphysis. Afier parturition the reconstitution and reorientation of the collagen fibers suggest the support for the traction fimction just to restore the pubic joint / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas