Made available in DSpace on 2015-03-26T13:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1636884 bytes, checksum: c966934c707a7e6bf40bfe5aee85e5a1 (MD5) Previous issue date: 2009-09-25 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais / The objective of this work was to promote the degreening, without losing internal fruit quality, of Poncã tangerine from two regions of Minas Gerais. Two experiments were carried out. In the first, the fruits were harvested from a commercial orchard in the northern region, and the second experiment used fruits from Zona da Mata. Fruits were harvested when showing minimum attributes of 35% juice, 9 ° Brix and soluble solids/tritable acidity ratio of 9.5. Then the fruits were packed in airtight boxes, which were exposed for 24, 48 and 96 h to different concentrations of ethylene gas: 0, 5, 10, 20 and 40 μL.L-1, at 20 + 1 °C and 90 + 5% relative humidity, respectively. Every 24 h, the boxes were opened for renewal of internal atmosphere, by reapplying the gas until treatment end. A post-treatment phase of 96 h duration took place at the end of each exposure time, when the fruits were kept in ethylene-free atmosphere, in cold chamber, at the same temperature and relative humidity used during the exposure to ethylene. During this phase, the fruits were evaluated every 24 h, and the difference in skin color, Hue angle of the peel, total chlorophyll and carotenoid content, soluble solids content, tritable acidity and SS/TA ratio of juice, solute leakage, CO2 production and loss of fruit fresh mass. In the first experiment, the fruits showed stronger degreening with increasing time of exposure to ethylene, most markedly for 96 h. After this exposure time, the Hue angle increased from 96.1o, in the first assessment days, to 82.3o, at the end of 96 h, which was lower than values observed in naturally degreened fruits. Fruits exposed for 24 h showed evolution of the yellow peel color similar to the untreated ones. It was observed that fruits left to ripe on the plant showed non-homogeneous peel degreening. The fruits exposed to ethylene for 96 h showed no visual signs of loss of commercial quality, although there was increased solute leakage from the peel during the treatment. Soluble solids content, tritable acidity and SS/TA ratio remained unchanged throughout the assessment period. The synthesis of total carotenoids in the peel was low, from 6.0 μg/cm2, in control fruits at the end of evaluations, to a maximum of 8.2 μg/cm2, in fruits exposed to ethylene for 96 h. This synthesis was insufficient to reach the orange color, therefore, the degreening of fruit peel was due, almost exclusively, to chlorophyll degradation. In the second experiment, the fruits showed yellowing of the peel stronger than fruits of the first experiment. The exposure time of 96 h proved to be the most efficient in promoting the fruit degreening in comparison with other times. Color evolution was quite similar between the control and fruits treated for 24 and 48 h. Fruits of all treatments had very low synthesis of total carotenoids in the peel, changing from 7.3 μg/cm2 in control fruits to 9.2 μg/cm2, maximum value observed in fruits exposed to ethylene for 96 h. Even in fruits showing the strongest yellowing, there was little participation of new synthesized carotenoids in the composition of the final color. Fruits fully developed in the plant reached the maximum degreening, becoming orange, the typical color of the species. Thus, for fruits produced in the Zona da Mata region, the post-harvest degreening with ethylene is only justified to anticipate the harvest, since the region has favorable climate to natural degreening. However, for fruits produced in northern Minas Gerais, where the high temperatures prevailing throughout the year impair the natural degreening, the postharvest use of ethylene may serve to obtain a more uniform peel color. / The objective of this work was to promote the degreening, without losing internal fruit quality, of Poncã tangerine from two regions of Minas Gerais. Two experiments were carried out. In the first, the fruits were harvested from a commercial orchard in the northern region, and the second experiment used fruits from Zona da Mata. Fruits were harvested when showing minimum attributes of 35% juice, 9° Brix and soluble solids/tritable acidity ratio of 9.5. Then the fruits were packed in airtight boxes, which were exposed for 24, 48 and 96 h to different concentrations of ethylene gas: 0, 5, 10, 20 and 40 μL.L-1, at 20 + 1 °C and 90 + 5% relative humidity, respectively. Every 24 h, the boxes were opened for renewal of internal atmosphere, by reapplying the gas until treatment end. A post-treatment phase of 96 h duration took place at the end of each exposure time, when the fruits were kept in ethylene-free atmosphere, in cold chamber, at the same temperature and relative humidity used during the exposure to ethylene. During this phase, the fruits were evaluated every 24 h, and the difference in skin color, Hue angle of the peel, total chlorophyll and carotenoid content, soluble solids content, tritable acidity and SS/TA ratio of juice, solute leakage, CO2 production and loss of fruit fresh mass. In the first experiment, the fruits showed stronger degreening with increasing time of exposure to ethylene, most markedly for 96 h. After this exposure time, the Hue angle increased from 96.1o, in the first assessment days, to 82.3o, at the end of 96 h, which was lower than values observed in naturally degreened fruits. Fruits exposed for 24 h showed evolution of the yellow peel color similar to the untreated ones. It was observed that fruits left to ripe on the plant showed non-homogeneous peel degreening. The fruits exposed to ethylene for 96 h showed no visual signs of loss of commercial quality, although there was increased solute leakage from the peel during the treatment. Soluble solids content, tritable acidity and SS/TA ratio remained unchanged throughout the assessment period. The synthesis of total carotenoids in the peel was low, from 6.0 μg/cm2, in control fruits at the end of evaluations, to a maximum of 8.2 μg/cm2, in fruits exposed to ethylene for 96 h. This synthesis was insufficient to reach the orange color, therefore, the degreening of fruit peel was due, almost exclusively, to chlorophyll degradation. In the second experiment, the fruits showed yellowing of the peel stronger than fruits of the first experiment. The exposure time of 96 h proved to be the most efficient in promoting the fruit degreening in comparison with other times. Color evolution was quite similar between the control and fruits treated for 24 and 48 h. Fruits of all treatments had very low synthesis of total carotenoids in the peel, changing from 7.3 μg/cm2 in control fruits to 9.2 μg/cm2, maximum value observed in fruits exposed to ethylene for 96 h. Even in fruits showing the strongest yellowing, there was little participation of new synthesized carotenoids in the composition of the final color. Fruits fully developed in the plant reached the maximum degreening, becoming orange, the typical color of the species. Thus, for fruits produced in the Zona da Mata region, the post-harvest degreening with ethylene is only justified to anticipate the harvest, since the region has favorable climate to natural degreening. However, for fruits produced in northern Minas Gerais, where the high temperatures prevailing throughout the year impair the natural degreening, the postharvest use of ethylene may serve to obtain a more uniform peel color.

A lecitina de soja é um complexo de fosfolipídeos em óleo de soja, sendo denominada de lecitina de soja comercial. Sua coloração é âmbar, apresenta alta viscosidade, cheiro e gosto característicos. É bastante utilizada como emulsificante, possui características próprias devido a modificações física, químicas ou de processos de obtenção. O presente trabalho teve por objetivo avaliar fisico-quimicamente lecitinas de soja clarificadas, pela adição de peróxido de hidrogênio a 35% (v/v), a temperatura e agitação controladas. Avaliar os aspectos qualitativos e de coloração, para posterior aplicação em leite integral UHT e verificação das características de pó (molhabilidade e insolubilidade). A etapa de clarificação foi planejada experimentalmente, através de um Planejamento Composto Central, cuja lecitina de soja comercial, sem tratamento com peróxido foi analisada quanto à reologia, apresentando comportamento pseudoplástico a 25°C e newtoniano à 50°C. Sua composição de ácidos graxos foi de elevado teor de insaturados conforme análise cromatográfica. A clarificação produziu lecitinas mais claras do que a lecitina comercial e foi selecionada a lecitina clarificada com maior valor de luminosidade (L*) para análise reológica, a qual mostrou mesmos comportamentos reológicos da lecitina comercial, porém com ligeiros aumentos na viscosidade aparente. Resultado das avaliações sobre a coloração foram realizadas, mostrando os efeitos da temperatura, tempo de agitação sob rotação constante e concentrações de H2O2 (%, m/v), obtendo-se colorações mais vermelhas e amarelas, intensas e de tonalidade tendendo ao amarelado. O ponto experimental em que se obteve maior luminosidade, cor branca, foi a 50°C, 520 segundos de agitação e adição de 2,3% de peróxido de hidrogênio, 35% (m/v). Um modelo de cor foi elaborado para predizer quais parâmetros de cor influenciam sobre a cor aparente, para isso foram analisados compostos carotenoides e clorofilas, chegando-se à conclusão que outras substâncias, como substâncias marrons e tocoferóis, se determinadas melhorariam o ajuste. Os resultados das avaliações da qualidade oxidativa das lecitinas clarificadas, mostraram os efeitos das variáveis do planejamento sobre as respostas de índice de saponificação, coeficiente de oxidação, índice de acidez e atividade de água, os resultados mostraram que em condições extremas, foram mantidos bons estados de oxidação lipídica. A aplicação da lecitina mais clarificada no leite mostrou que a cor do leite em pó ficou mais clara. A melhor solubilidade e menor tempo de molhabilidade foram obtidos para concentração adicionada de lecitina igual a 1,0% (m/m) sobre a massa aplicada e as micrografias dos pós mostraram que o aumento no teor de lecitina de soja deixa os grânulos menores e o pó mais granuloso. / Soy lecithin is a complex phospholipid in soybean oil, being called commercial soybean lecithin. Its color is amber, high viscosity, smell and taste characteristic. It is widely used as an emulsifier, has its own characteristics due to physical changes, chemical or production processes. This study aimed to assess physico-chemically clarified soy lecithins, by adding hydrogen peroxide to 35% (v / v), the controlled temperature and agitation. It was considered qualitative aspects and also in color, for later use in UHT whole milk and verification of powder characteristics (wettability and solubility). The clarification step is designed experimentally, using a central composite design, the commercial soybean lecithin without peroxide treatment rheology was analyzed, showing pseudoplastic behavior at 25°C and the Newtonian at 50°C, the composition of fatty acids was higher unsaturated content as chromatographic analysis. Clarification produced lighter than lecithin and commercial lecithin was clarified lecithin selected with higher brightness value (L*) to rheological analysis, which showed the same rheological behavior of commercial lecithin, but with slight increases in apparent viscosity. Reviews staining were performed, showing the effects of temperature under constant stirring rotation time and H2O2 concentration (% w/v) to give more red dyes and yellow, intense tint and tended to yellow. The experimental point was obtained in higher brightness, white color at 50°C was 520 seconds of stirring and addition of 2.3% hydrogen peroxide, 35% (w/v). A color model is designed to predict which color parameters influence on the apparent color, for that were analyzed carotenoids and chlorophyll compounds, coming to the conclusion that other substances, such as brown substances and tocopherols, if certain improve the fit. The evaluation of oxidative quality of clarified lecithins have shown the effects of the design variables on the saponification number of responses, oxidation rate, and acid value of water activity, the results showed that in axial conditions are maintained good oxidation states lipid. The application of more clarified lecithin in milk showed that the color of milk powder became clearer. The best solubility and shorter wettability were obtained for added lecithin concentration equal to 1.0% of the applied mass and the powders micrographs showed that the increase in soy lecithin content leaves the smaller beads and the most granular powder. / Tese (Doutorado)

Orientador: Christiane Neme Campos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Computação / Made available in DSpace on 2018-08-24T00:02:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Galvao_KaioKaram_M.pdf: 1971760 bytes, checksum: e2f60ab09595b03fa6da5051cd78e3f3 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Em 1971, Fulkerson propôs a seguinte conjetura: todo grafo cúbico sem arestas de corte admite seis emparelhamentos perfeitos tais que cada aresta do grafo pertence a exatamente dois destes emparelhamentos. A Conjetura de Fulkerson tem desafiado pesquisadores desde sua publicação. Esta conjetura é facilmente verificada para grafos cúbicos 3-aresta-coloráveis. Portanto, a dificuldade do problema reside em estabelecer a conjetura para grafos cúbicos sem arestas de corte que não possuem 3-coloração de arestas. Estes grafos são chamados snarks. Nesta dissertação, a Conjetura de Fulkerson e os snarks são introduzidos com ¿ênfase em sua história e resultados mais relevantes. Alguns resultados relacionados à Conjetura de Fulkerson são apresentados, enfatizando suas conexões com outras conjeturas. Um breve histórico do Problema das Quatro Cores e suas relações com snarks também são apresentados. Na segunda parte deste trabalho, a Conjetura de Fulkerson é verificada para algumas famílias infinitas de snarks construídas com o método de Loupekine, utilizando subgrafos do Grafo de Petersen. Primeiramente, mostramos que a família dos LP0-snarks satisfaz a Conjetura de Fulkerson. Em seguida, generalizamos este resultado para a família mais abrangente dos LP1-snarks. Além disto, estendemos estes resultados para Snarks de Loupekine construídos com subgrafos de snarks diferentes do Grafo de Petersen / Abstract: In 1971, Fulkerson proposed a conjecture that states that every bridgeless cubic graph has six perfect matchings such that each edge of the graph belongs to precisely two of these matchings. Fulkerson's Conjecture has been challenging researchers since its publication. It is easily verified for 3-edge-colourable cubic graphs. Therefore, the difficult task is to settle the conjecture for non-3-edge-colourable bridgeless cubic graphs, called snarks. In this dissertation, Fulkerson's Conjecture and snarks are presented with emphasis in their history and remarkable results. We selected some results related to Fulkerson's Conjecture, emphasizing their reach and connections with other conjectures. It is also presented a brief history of the Four-Colour Problem and its connections with snarks. In the second part of this work, we verify Fulkerson's Conjecture for some infinite families of snarks constructed with Loupekine's method using subgraphs of the Petersen Graph. More specifically, we first show that the family of LP0-snarks satisfies Fulkerson's Conjecture. Then, we generalise this result by proving that Fulkerson's Conjecture holds for the broader family of LP1-snarks. We also extend these results to even more general Loupekine Snarks constructed with subgraphs of snarks other than the Petersen Graph / Mestrado / Ciência da Computação / Mestre em Ciência da Computação

Neste trabalho, estudamos o problema a recoloração convexa de grafos, denotado por RC. Dizemos que uma coloração dos vértices de um grafo G é convexa se, para cada cor tribuída d, os vértices de G com a cor d induzem um subgrafo conexo. No problema RC, é dado um grafo G e uma coloração de seus vértices, e o objetivo é recolorir o menor número possível de vértices de G tal que a coloração resultante seja convexa. A motivação para o estudo deste problema surgiu em contexto de árvores filogenéticas. Sabe-se que este problema é NP-difícil mesmo quando G é um caminho. Mostramos que o problema RC parametrizado pelo número de mudanças de cor é W[2]-difícil mesmo se a coloração inicial usa apenas duas cores. Além disso, provamos alguns resultados sobre a inaproximabilidade deste problema. Apresentamos uma formulação inteira para a versão com pesos do problema RC em grafos arbitrários, e então a especializamos para o caso de árvores. Estudamos a estrutura facial do politopo definido como a envoltória convexa dos pontos inteiros que satisfazem as restrições da formulação proposta, apresentamos várias classes de desigualdades que definem facetas e descrevemos os correspondentes algoritmos de separação. Implementamos um algoritmo branch-and-cut para o problema RC em árvores e mostramos os resultados computacionais obtidos com uma grande quantidade de instâncias que representam árvores filogenéticas reais. Os experimentos mostram que essa abordagem pode ser usada para resolver instâncias da ordem de 1500 vértices em 40 minutos, um desempenho muito superior ao alcançado por outros algoritmos propostos na literatura. / In this work we study the convex recoloring problem of graphs, denoted by CR. We say that a vertex coloring of a graph G is convex if, for each assigned color d, the vertices of G with color d induce a connected subgraph. In the CR problem, given a graph G and a coloring of its vertices, we want to find a recoloring that is convex and minimizes the number of recolored vertices. The motivation for investigating this problem has its roots in the study of phylogenetic trees. It is known that this problem is NP-hard even when G is a path. We show that the problem CR parameterized by the number of color changes is W[2]-hard even if the initial coloring uses only two colors. Moreover, we prove some inapproximation results for this problem. We also show an integer programming formulation for the weighted version of this problem on arbitrary graphs, and then specialize it for trees. We study the facial structure of the polytope defined as the convex hull of the integer points satisfying the restrictions of the proposed ILP formulation, present several classes of facet-defining inequalities and the corresponding separation algorithms. We also present a branch-and-cut algorithm that we have implemented for the special case of trees, and show the computational results obtained with a large number of instances. We considered instances which are real phylogenetic trees. The experiments show that this approach can be used to solve instances up to 1500 vertices in 40 minutes, comparing favorably to other approaches that have been proposed in the literature.

Os ovos são alimentos de alto valor nutricional, já que possuem todas as vitaminas, aminoácidos e minerais essenciais. Os consumidores dão preferência, ovos com gema bem pigmentadas. A cultura popular trata o urucum como um poderoso agente anticolesterolemico, além de ser amplamente utilizado na forma de pigmento para a indústria. O presente trabalho avaliou os efeitos da adição de urucum (Bixa orellana L.) na ração de galinhas, verificando possível interferência na qualidade dos ovos, alteração de colesterol e cor e nas gemas e teores de vitamina A e ferro, inclusive com relação ao tempo. Para a obtenção das amostras foram utilizados 125 animais divididos em quatro tratamentos com adição de urucum na ração (0,5% - T2; 1,0% - T3; 1,5% - T4 e 2,0% - T5) e 1 controle (0% - T1). Os animais foram separados aleatoriamente em cinco blocos de cinco animais, totalizando 25 animais por parcela. Os ovos após serem colhidos passaram por análise de qualidade e padronização: pesados, classificados pelo ovoscópio, análise gravimétrica, unidade Haugh, altura de albúmen e gema, espessura da casca, diâmetro e índice de gema. O colesterol foi medido por método colorimétrico e a alteração da cor da gema, foi medida em colorímetro. Foi utilizado Teste de Tukey em nível de 5% para comparação de médias, utilizando o software SAS. Com relação à análise de qualidade dos ovos, não apresentou diferença significativa entre os tratamentos. A unidade Haugh e o índice de gema apresentaram diferença que, não se deve à adição do urucum por não ser uma resposta linear. Com relação ao colesterol, os tratamentos T2 e T3 (0,5% e 1,0% respectivamente) não apresentaram diferença significativa entre si, porém todos os tratamentos se diferenciaram em relação ao controle, apresentando diminuição no nível de colesterol, com o aumento da porcentagem de urucum na ração. Ao longo do tempo, o colesterol, mesmo administrando-se urucum para os animais, apresentou aumento significativo. Em relação a cor, determinada através do colorímetro Minolta, foram encontrados os seguintes resultados: para L, T1 e T2 apresentaram os valores superiores e, T4 e T5 os mais baixos; para a*: T4 e T5 apresentaram os maiores valores, diferindo dos demais; para b*: T1 e T2 apresentaram os maiores valores diferindo dos demais. Foi calculado também o Croma (cor) e Hue-Angle (saturação da cor). Para carotenóides (&#946; e &#945; caroteno), T5 apresentou valores superiores aos demais, diferindo estatisticamente (p<0,05). Com relação ao ferro total, T5 apresentou valores superiores aos demais, além do ferro dialisável, que provavelmente pela presença do aumento de carotenóides, também apresentou-se superior. Assim, pode-se concluir que a utilização de urucum na ração de poedeiras é útil, pois não interfere na qualidade dos ovos, influi na redução do colesterol, promove a cor das amostras, aumento de carotenóides e conteúdo de ferro. / The poultry meat and eggs are foods of high nutritional value, because they have all vitamins, amino acids and essential minerals to constitute a life. The popular culture treats the anatto like a power agent anticholesterolemic, there to be amply utilized like color source amount in the kitchen whatever in poultry farmer industry like a pigment, cosiderated that national and foreigner consumers have preference eggs with yolk yellow-orange and chickens with skin pigmented well. This research evaluated the effects of addition of anatto (Bixa orellana L.) add in ration of laying hens, relating the possible interference of the anatto in egg quality, cholesterol color and level in the yolk and tenor of vitamin A and iron, including the relationship with the time. The samples were obtained from 125 animal divided in 4 treatments with adittion of anatto (0.5% - T2; 1.0% - T3; 1.5% - T4 and 2.0% - T5 of anatto added in the ration) and 1 control (0% - T1 of anatto). The animals were separated aleatoric in 5 blocks, each block with 5 animals, with total 25 animals by parcel. The eggs harvesters were submeted by analysis of quality and standardization: they were weighty, classified by the eggscopic, gravimetric analysis, Haugh unit, albumen and yolk height, thickness of the shell, diameter and index yolk; the cholesterol was measured by a color methodology and the alteration of the yolk color, was measured in colorimeter. The statistic analysis was maked employing the Turkey test, level 5%, to compair means, utilized the SAS program. About the eggs quality analysis, they don’t showed significative difference between the treatments. The Haugh unit and the yolk index showed difference but it was not relationed to anatto add in ration. About the cholesterol, it decreased with the addition of anatto, but it increase with the time, even administrating anatto for the animals, there’s a significative increase at the cholesterol level. The color determined by the colorimeter, is dividing in 3 parts the prism: L, a* e b*: to L, T1 e T2 (control and 0.5% respectively) presented lower levels and, T4 and T5 (1.5% e 2.0% respectively) the highest. To a*: only T4 and T5 (1.5% and 2.0% respectively) don’t have difference of all. To b*: T1 and T2 (control and 0.5% respectively) presented the minimum value difering of all. There was calculated either, Croma (color) and Hue-Angle (color saturation). About the carotenes (&#946; and &#945; carotene), T5 showed higher values of the other, disagree of the statistics. About the total iron, T5 showed higher to the others, besides of the dialysable iron, that probably because of the presence of the increase of carotenes, showed higher either. So, can conclude that the utilization of anatto in ration of laying hens is very interesting, because it doesn’t interfere in the eggs quality, flow into the cholesterol reduction and color of the samples and increase carotenes and iron.

Um Projeto Temático de Pesquisa foi desenvolvido no Laboratório de Poluição Ambiental do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo com o objetivo de avaliar os efeitos da exposição aguda/crônica ao ar ambiente de um grande centro urbano sobre a saúde. Dentro deste projeto, uma linha de pesquisa foi dedicada ao estudo dos efeitos dessa exposição sobre a saúde reprodutiva feminina. Evidências de estudos epidemiológicos e experimentais implicam os fatores ambientais na infertilidade humana e resultado obstétrico adverso. Contudo, poucos estudos foram conduzidos até o presente para avaliar um possível efeito da exposição à poluição ambiental particulada sobre a saúde reprodutiva feminina. Portanto, o objetivo dos projetos da minha linha de pesquisa é fornecer dados que possam demonstrar os possíveis efeitos da exposição crônica à poluição ambiental particulada sobre a função ovariana e o desenvolvimento embrionário inicial. O objetivo do primeiro projeto desta tese foi avaliar diferentes metodologias utilizadas para a coloração diferencial das linhagens celulares do blastocisto, um método mais adequado para a avaliação de sua qualidade e normalidade. As células de blastocistos intactos de camundongo obtidos através de fertilização in vitro (FIV) foram permeabilizadas e coradas utilizando-se diferentes concentrações de um detergente (TX-100; 0,5% ou 1%) e de iodeto de propídeo (IP; 50 g/mL ou 100 g/mL) e depois disso, incubadas durante a noite em uma solução contendo diferentes fixadores (etanol, metanol, paraformaldeído PFA1% ou 4%) e bisbenzimida. Para a avaliação da qualidade de coloração e contagem diferencial dos núcleos, os blastocistos foram montados em lâminas de vidro e analisados em um microscópio de epifluorescência. O escore de qualidade de coloração foi significativamente diferente (p<0,05) entre todas as soluções fixadoras, sendo maior para o etanol, seguido pelo metanol, PFA1% e PFA4%. Mudanças da concentração do IP e o uso de diferentes soluções de fixação revelaram efeitos significativos na contagem de células da massa celular interna (MCI) e na razão MCI/trofectoderma (TE). Concentrações diferentes do detergente utilizado para a permeabilização celular apresentaram efeitos significativos sobre a contagem de células TE e razão MCI/TE. Concluímos que o protocolo que utiliza TX-100 1% para a permeabilização celular, 50 g/mL de IP para coloração das células TE e etanol como solução de fixação representa o método mais eficiente para a coloração diferencial e contagem das células das linhagens celulares do embrião no estágio de blastocisto. No segundo projeto que compõe esta, o objetivo foi avaliar os efeitos da exposição pré e/ou pós-natal ao ar ambiente sobre a fertilização, desenvolvimento embrionário e segregação das linhagens celulares em blastocistos pré-implantacionais, utilizando o modelo de FIV de camundongo. Fêmeas de camundongo com idade de seis semanas tiveram a ovulação estimulada e foram expostas no período pré- e/ou pós-natal ao ar filtrado (AF-AF), ar filtrado ar ambiente (AF-AA) ou ar ambiente ar ambiente (AA-AA) em câmaras de exposição 24 horas por dia, sete dias na semana, durante nove semanas. Os pontos de avaliação reprodutivos analisados incluíram a duração da gestação, tamanho e peso da prole, índice de nascidos vivos, razão sexual, resposta ovariana à estimulação, taxa de fertilização, desenvolvimento embrionário, taxas de formação e de eclosão dos blastocistos, contagem celular total e proporção da alocação celular à MCI e TE. A duração da gestação, tamanho e peso da prole, índice de nascidos vivos e razão sexual foram similares nos diferentes grupos de exposição. A resposta ovariana não foi afetada pelo protocolo de exposição. Um efeito multivariável para a exposição pré e/ou pós-natal ao material particulado fino ambiente sobre a FIV, o desenvolvimento embrionário e a coloração diferencial dos blastocistos foi observado. A contagem celular na MCI e a razão MCI/TE dos blastocistos produzidos no protocolo AF-AF foram significativamente maiores do que aquelas em blastocistos produzidos nos protocolos FA-AA e AA-AA. Nenhuma diferença na contagem celular total foi observada. Baseando-se nessas observações, nosso estudo sugere que a exposição ao material particulado fino presente no ar ambiente de um grande centro urbano pode afetar negativamente a saúde reprodutiva feminina através da alteração da especificação das linhagens celulares do embrião no estágio de blastocisto. Finalmente, o propósito do terceiro projeto que compõe esta tese foi de avaliar os efeitos da exposição pré e/ou pósnatal ao ar ambiente no final da vida reprodutiva sobre a fertilização, desenvolvimento embrionário e segregação das linhagens celulares em blastocistos pré-implantacionais, utilizando o modelo de FIV de camundongo. Fêmeas de camundongo com idade de cinco meses tiveram a ovulação estimulada e foram expostas no período pré e/ou pós-natal ao ar filtrado (AF-AF), ar filtrado ar ambiente (AF-AA) ou ar ambiente ar ambiente (AA-AA) em câmaras de exposição 24 horas por dia, sete dias na semana, durante seis meses. Os pontos de avaliação reprodutivos foram os mesmos que aqueles utilizados no segundo projeto. A duração da gestação, tamanho e peso da prole, índice de nascidos vivos e razão sexual foram similares nos diferentes grupos de exposição. A resposta ovariana não foi afetada pelo protocolo de exposição. Um efeito multivariável para a exposição pré e/ou pós-natal ao material particulado fino ambiente sobre coloração diferencial dos blastocistos, mas não sobre a FIV e o desenvolvimento embrionário, foi observado. A contagem celular na MCI e a razão MCI/TE dos blastocistos produzidos no protocolo AF-AF foram significativamente maiores do que aquelas em blastocistos produzidos nos protocolos FA-AA e AA-AA. A contagem celular do TE dos blastocistos produzidos no protocolo FA-FA foi significativamente menor do que aquela em blastocistos produzidos nos protocolos FA-AA e AA-AA. A contagem celular total foi similar entre os grupos. Nosso estudo sugere que a exposição à poluição ambiental particulada de um grande centro urbano não altera a função ovariana, mas pode afetar negativamente a saúde reprodutiva feminina no período final do menacme, através da alteração da especificação das linhagens celulares do embrião no estágio de blastocisto / A thematic research project to evaluate the health effects of acute/chronic exposure to ambient air in a large urban center was developed at the Air Pollution Laboratory in the Department of Pathology at the University of São Paulo School of Medicine. Within this project a specific research line was committed to the study of the effects of this exposure on female reproductive health. Evidence from epidemiological and experimental studies implied environmental factors as possible contributors to human infertility and poor obstetric outcome. However, very few studies evaluating a possible effect of exposure to particulate air pollution on female reproductive health have been conducted so far. Thus, the aim of the projects in my research line was to provide data that could show the possible effects of chronic exposure to particulate air pollution on ovarian function and early embryo development. The objective of the first project was to assess different methodologies used in cell lineage differential staining of the blastocyst, a method for more accurate evaluation of its quality and normality. Cells of zona-intact mouse blastocysts obtained from in vitro fertilization (IVF) were permeabilized and stained using different concentrations of a detergent (TX-100; 0.5% or 1%) and propidium iodide (PI; 50 g/mL or 100 g/mL) followed by overnight incubation in a solution containing different fixatives (ethanol, methanol, paraformaldehyde - PFA 1% or 4%) and bisbenzimide. To evaluate the staining quality and count the nuclei differentially, blastocysts were mounted and viewed using epifluorescence microscopy. Staining quality scores were significantly different (P < 0.05) among all fixative solutions with the highest for ethanol followed by methanol, PFA1%, and PFA4%. Changes in PI concentration and use of different fixative solutions revealed significant effects on inner cell mass (ICM) cell count and ICM/trophectoderm (TE) ratio. Different concentrations of the detergent used for cell permeabilization showed significant effects on TE cell counts and ICM/TE ratio. I concluded that the protocol using 1% TX-100 for cell permeabilization, 50 g/mL of PI for TE cell staining, and ethanol as a fixative solution is the most efficient method for cell lineage differential staining and counting at the blastocyst stage. In the second project the objective was to evaluate the effects of preand/ or postnatal exposure to ambient air on fertilization, embryo development, and cell lineage segregation in preimplantation blastocysts using the IVF mouse model. Six-week old superovulated mice were preand/ or postnatally exposed to filtered air (FA-FA), filtered-ambient air (FAAA), or ambient air (AA-AA) in exposure chambers 24/7 for nine weeks. Reproductive endpoints evaluated included gestation length, litter size, litter birth weight, live birth index, sex ratio, ovarian response to superovulation, fertilization rate, embryo development, blastocyst and hatching rates, total cell count, and proportion of cell allocation to ICM and TE. Gestation length, litter size, litter birth weight, live birth index, and sex ratio were similar among exposure groups. Ovarian response was not affected by the exposure protocol. A multivariate effect for pre- and/or postnatal exposure to ambient fine particulate matter on IVF, embryo development, and blastocyst differential staining was found. Cell counts in ICM and ICM/TE ratios in blastocysts produced in the FA-FA protocol were significantly higher than in blastocysts produced in FA-AA and AA-AA protocols. No difference in the total cell count was observed. Based on these observations the study suggests that exposure to ambient fine particulate matter in a large urban center may negatively affect female reproductive health by disrupting the lineage specification at the blastocyst stage. Finally, the purpose of the third project was to evaluate the effects of pre- and/or postnatal exposure to particulate air pollution on fertilization, embryo development, and cell lineage segregation in preimplantation blastocysts during the late-life reproductive period using the IVF mouse model. Five-month-old superovulated mice were pre- and/or postnatally exposed to filtered air (FA-FA), filtered-ambient air (FA-AA), or ambient air (AA-AA) in exposure chambers 24/7 during six months. Reproductive endpoints were the same as the ones selected for the second project. Gestation length, litter size, litter birth weight, live birth index, and sex ratio were similar among exposure groups. Ovarian response was not affected by the exposure protocol. A multivariate effect for pre- and/or postnatal exposure to ambient air on blastocyst differential staining but not on IVF and embryo development was found. Cell counts in ICM and ICM/TE ratios in blastocysts produced in the FA-FA protocol were significantly higher than in blastocysts produced in FA-AA and AA-AA protocols. Cell counts in TE cells in blastocysts produced in the FA-FA protocol were significantly lower than in blastocysts produced in FA-AA and AA-AA protocols. The total cell count was similar among groups. This study suggests that exposure to particulate air pollution in a large urban center has no effect on ovarian function but may negatively affect female reproductive health in the late-life period by disrupting the lineage specification at the blastocyst stage.

Trabalho prospectivo estudando a matriz extracelular da parede vesical em pacientes com extrofia vesical comparados ao grupo controle, pela microscopia óptica comum e luz polarizada com morfometria, quantificando-se as fibras colágenas e reticulínicas. Estudou-se 17 pacientes de ambos os sexos, biopsiando-se toda a parede vesical e empregando colorações HE, PS e Reticulina. Diferenças estatisticamente significantes foram notadas na análise quantitativa de fibras colágenas e reticulínicas o número de fibras colágenas foi significativamente maior e o número de fibras reticulínicas foi menor no grupo de pacientes com extrofia vesical quando comparado ao grupo controle. / A prospective study was done to evaluate the detrusor muscle\'s extracellular matrix in classical bladder exstrophy in comparison to a control group, by use of light microscopy and polarization method with morphometry, to quantify collagen and reticular fibers. Seventeen patients from both sexes were analysed and samples were obtained from the bladder and stained with Haematoxylin-eosin, Picrosirius red and the silver impregnation method. There were significant differences when comparing the quantity of collagen and reticular fibers. The collagen fibers were more abundant in the exstrophy bladders compared to controls, while the reticular fibers were present in smaller amounts.

Dunaliella tertiolecta, uma alga verde fitoplanctônica de ampla distribuição no ambiente marinho, foi escolhida como organismo teste para estudar a possibilidade de ser utilizada no ensaio cometa, um teste de detecção de danos no DNA em células individualizadas muito utilizado na ecotoxicologia. Essas algas foram facilmente lisadas pela solução de lise alcalina iônica, seus cometas foram corados eficientemente pelo brometo de etídio e pela prata, e a análise por índice de danos apresentou boa correlação com momento de cauda, comprimento de cauda e porcentagem de DNA na cauda. As algas foram expostas a concentrações crescentes de 4-nitroquinolina-N-óxido (4NQO) e benzo[a]pireno (BAP) por 1, 2 e 4 h no escuro. Após somente 1 h de exposição, observou-se um aumento significativo de danos no DNA das algas expostas a 0,25 µM de 4NQO, demonstrando a sensibilidade das mesmas em relação a células de animais. Os dados obtidos da exposição ao BAP não foram consistentes e necessitam de verificação. A metabolização de BAP em compostos tóxicos pelas algas e o efeito das condições de luminosidade antes e durante as exposições são discutidos. Os resultados indicam que D. tertiolecta pode ser utilizada em laboratório para avaliação de genotoxicidade na água através do ensaio cometa. / D. tertiolecta, a phytoplanktonic green algae with ubiquitous distribution in the marine environment, was chosen as a test organism to study the possibility of being used in the comet assay, a frequently used test in ecotoxicology to detect DNA damage in single cells. These algae were easily lised by the alkaline ionic lysis solution, their comets were efficiently stained by ethidium bromide and silver and the damage index was well correlated to tail moment, tail length and percentage of DNA in the tail. The algae were exposed to increasing concentrations of 4-nitroquinoline-N-oxide (4NQO) and benzo[a]pyrene (BAP) for 1, 2 and 4 h in the dark. After 1 h exposure, a significant increase in the DNA damage of algae exposed to 0,25 µM of 4NQO was observed, demonstrating their sensitivity in relation to cells from animals. The data of BAP exposure were not consistent and need further verification. The metabolization of BAP to toxic compounds by algae and the light conditions before and during exposure are discussed. The results indicate that D. tertiolecta can be used in laboratory to evaluate water genotoxicity with comet assay.

Dunaliella tertiolecta, uma alga verde fitoplanctônica de ampla distribuição no ambiente marinho, foi escolhida como organismo teste para estudar a possibilidade de ser utilizada no ensaio cometa, um teste de detecção de danos no DNA em células individualizadas muito utilizado na ecotoxicologia. Essas algas foram facilmente lisadas pela solução de lise alcalina iônica, seus cometas foram corados eficientemente pelo brometo de etídio e pela prata, e a análise por índice de danos apresentou boa correlação com momento de cauda, comprimento de cauda e porcentagem de DNA na cauda. As algas foram expostas a concentrações crescentes de 4-nitroquinolina-N-óxido (4NQO) e benzo[a]pireno (BAP) por 1, 2 e 4 h no escuro. Após somente 1 h de exposição, observou-se um aumento significativo de danos no DNA das algas expostas a 0,25 µM de 4NQO, demonstrando a sensibilidade das mesmas em relação a células de animais. Os dados obtidos da exposição ao BAP não foram consistentes e necessitam de verificação. A metabolização de BAP em compostos tóxicos pelas algas e o efeito das condições de luminosidade antes e durante as exposições são discutidos. Os resultados indicam que D. tertiolecta pode ser utilizada em laboratório para avaliação de genotoxicidade na água através do ensaio cometa. / D. tertiolecta, a phytoplanktonic green algae with ubiquitous distribution in the marine environment, was chosen as a test organism to study the possibility of being used in the comet assay, a frequently used test in ecotoxicology to detect DNA damage in single cells. These algae were easily lised by the alkaline ionic lysis solution, their comets were efficiently stained by ethidium bromide and silver and the damage index was well correlated to tail moment, tail length and percentage of DNA in the tail. The algae were exposed to increasing concentrations of 4-nitroquinoline-N-oxide (4NQO) and benzo[a]pyrene (BAP) for 1, 2 and 4 h in the dark. After 1 h exposure, a significant increase in the DNA damage of algae exposed to 0,25 µM of 4NQO was observed, demonstrating their sensitivity in relation to cells from animals. The data of BAP exposure were not consistent and need further verification. The metabolization of BAP to toxic compounds by algae and the light conditions before and during exposure are discussed. The results indicate that D. tertiolecta can be used in laboratory to evaluate water genotoxicity with comet assay.

Um Projeto Temático de Pesquisa foi desenvolvido no Laboratório de Poluição Ambiental do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo com o objetivo de avaliar os efeitos da exposição aguda/crônica ao ar ambiente de um grande centro urbano sobre a saúde. Dentro deste projeto, uma linha de pesquisa foi dedicada ao estudo dos efeitos dessa exposição sobre a saúde reprodutiva feminina. Evidências de estudos epidemiológicos e experimentais implicam os fatores ambientais na infertilidade humana e resultado obstétrico adverso. Contudo, poucos estudos foram conduzidos até o presente para avaliar um possível efeito da exposição à poluição ambiental particulada sobre a saúde reprodutiva feminina. Portanto, o objetivo dos projetos da minha linha de pesquisa é fornecer dados que possam demonstrar os possíveis efeitos da exposição crônica à poluição ambiental particulada sobre a função ovariana e o desenvolvimento embrionário inicial. O objetivo do primeiro projeto desta tese foi avaliar diferentes metodologias utilizadas para a coloração diferencial das linhagens celulares do blastocisto, um método mais adequado para a avaliação de sua qualidade e normalidade. As células de blastocistos intactos de camundongo obtidos através de fertilização in vitro (FIV) foram permeabilizadas e coradas utilizando-se diferentes concentrações de um detergente (TX-100; 0,5% ou 1%) e de iodeto de propídeo (IP; 50 g/mL ou 100 g/mL) e depois disso, incubadas durante a noite em uma solução contendo diferentes fixadores (etanol, metanol, paraformaldeído PFA1% ou 4%) e bisbenzimida. Para a avaliação da qualidade de coloração e contagem diferencial dos núcleos, os blastocistos foram montados em lâminas de vidro e analisados em um microscópio de epifluorescência. O escore de qualidade de coloração foi significativamente diferente (p<0,05) entre todas as soluções fixadoras, sendo maior para o etanol, seguido pelo metanol, PFA1% e PFA4%. Mudanças da concentração do IP e o uso de diferentes soluções de fixação revelaram efeitos significativos na contagem de células da massa celular interna (MCI) e na razão MCI/trofectoderma (TE). Concentrações diferentes do detergente utilizado para a permeabilização celular apresentaram efeitos significativos sobre a contagem de células TE e razão MCI/TE. Concluímos que o protocolo que utiliza TX-100 1% para a permeabilização celular, 50 g/mL de IP para coloração das células TE e etanol como solução de fixação representa o método mais eficiente para a coloração diferencial e contagem das células das linhagens celulares do embrião no estágio de blastocisto. No segundo projeto que compõe esta, o objetivo foi avaliar os efeitos da exposição pré e/ou pós-natal ao ar ambiente sobre a fertilização, desenvolvimento embrionário e segregação das linhagens celulares em blastocistos pré-implantacionais, utilizando o modelo de FIV de camundongo. Fêmeas de camundongo com idade de seis semanas tiveram a ovulação estimulada e foram expostas no período pré- e/ou pós-natal ao ar filtrado (AF-AF), ar filtrado ar ambiente (AF-AA) ou ar ambiente ar ambiente (AA-AA) em câmaras de exposição 24 horas por dia, sete dias na semana, durante nove semanas. Os pontos de avaliação reprodutivos analisados incluíram a duração da gestação, tamanho e peso da prole, índice de nascidos vivos, razão sexual, resposta ovariana à estimulação, taxa de fertilização, desenvolvimento embrionário, taxas de formação e de eclosão dos blastocistos, contagem celular total e proporção da alocação celular à MCI e TE. A duração da gestação, tamanho e peso da prole, índice de nascidos vivos e razão sexual foram similares nos diferentes grupos de exposição. A resposta ovariana não foi afetada pelo protocolo de exposição. Um efeito multivariável para a exposição pré e/ou pós-natal ao material particulado fino ambiente sobre a FIV, o desenvolvimento embrionário e a coloração diferencial dos blastocistos foi observado. A contagem celular na MCI e a razão MCI/TE dos blastocistos produzidos no protocolo AF-AF foram significativamente maiores do que aquelas em blastocistos produzidos nos protocolos FA-AA e AA-AA. Nenhuma diferença na contagem celular total foi observada. Baseando-se nessas observações, nosso estudo sugere que a exposição ao material particulado fino presente no ar ambiente de um grande centro urbano pode afetar negativamente a saúde reprodutiva feminina através da alteração da especificação das linhagens celulares do embrião no estágio de blastocisto. Finalmente, o propósito do terceiro projeto que compõe esta tese foi de avaliar os efeitos da exposição pré e/ou pósnatal ao ar ambiente no final da vida reprodutiva sobre a fertilização, desenvolvimento embrionário e segregação das linhagens celulares em blastocistos pré-implantacionais, utilizando o modelo de FIV de camundongo. Fêmeas de camundongo com idade de cinco meses tiveram a ovulação estimulada e foram expostas no período pré e/ou pós-natal ao ar filtrado (AF-AF), ar filtrado ar ambiente (AF-AA) ou ar ambiente ar ambiente (AA-AA) em câmaras de exposição 24 horas por dia, sete dias na semana, durante seis meses. Os pontos de avaliação reprodutivos foram os mesmos que aqueles utilizados no segundo projeto. A duração da gestação, tamanho e peso da prole, índice de nascidos vivos e razão sexual foram similares nos diferentes grupos de exposição. A resposta ovariana não foi afetada pelo protocolo de exposição. Um efeito multivariável para a exposição pré e/ou pós-natal ao material particulado fino ambiente sobre coloração diferencial dos blastocistos, mas não sobre a FIV e o desenvolvimento embrionário, foi observado. A contagem celular na MCI e a razão MCI/TE dos blastocistos produzidos no protocolo AF-AF foram significativamente maiores do que aquelas em blastocistos produzidos nos protocolos FA-AA e AA-AA. A contagem celular do TE dos blastocistos produzidos no protocolo FA-FA foi significativamente menor do que aquela em blastocistos produzidos nos protocolos FA-AA e AA-AA. A contagem celular total foi similar entre os grupos. Nosso estudo sugere que a exposição à poluição ambiental particulada de um grande centro urbano não altera a função ovariana, mas pode afetar negativamente a saúde reprodutiva feminina no período final do menacme, através da alteração da especificação das linhagens celulares do embrião no estágio de blastocisto / A thematic research project to evaluate the health effects of acute/chronic exposure to ambient air in a large urban center was developed at the Air Pollution Laboratory in the Department of Pathology at the University of São Paulo School of Medicine. Within this project a specific research line was committed to the study of the effects of this exposure on female reproductive health. Evidence from epidemiological and experimental studies implied environmental factors as possible contributors to human infertility and poor obstetric outcome. However, very few studies evaluating a possible effect of exposure to particulate air pollution on female reproductive health have been conducted so far. Thus, the aim of the projects in my research line was to provide data that could show the possible effects of chronic exposure to particulate air pollution on ovarian function and early embryo development. The objective of the first project was to assess different methodologies used in cell lineage differential staining of the blastocyst, a method for more accurate evaluation of its quality and normality. Cells of zona-intact mouse blastocysts obtained from in vitro fertilization (IVF) were permeabilized and stained using different concentrations of a detergent (TX-100; 0.5% or 1%) and propidium iodide (PI; 50 g/mL or 100 g/mL) followed by overnight incubation in a solution containing different fixatives (ethanol, methanol, paraformaldehyde - PFA 1% or 4%) and bisbenzimide. To evaluate the staining quality and count the nuclei differentially, blastocysts were mounted and viewed using epifluorescence microscopy. Staining quality scores were significantly different (P < 0.05) among all fixative solutions with the highest for ethanol followed by methanol, PFA1%, and PFA4%. Changes in PI concentration and use of different fixative solutions revealed significant effects on inner cell mass (ICM) cell count and ICM/trophectoderm (TE) ratio. Different concentrations of the detergent used for cell permeabilization showed significant effects on TE cell counts and ICM/TE ratio. I concluded that the protocol using 1% TX-100 for cell permeabilization, 50 g/mL of PI for TE cell staining, and ethanol as a fixative solution is the most efficient method for cell lineage differential staining and counting at the blastocyst stage. In the second project the objective was to evaluate the effects of preand/ or postnatal exposure to ambient air on fertilization, embryo development, and cell lineage segregation in preimplantation blastocysts using the IVF mouse model. Six-week old superovulated mice were preand/ or postnatally exposed to filtered air (FA-FA), filtered-ambient air (FAAA), or ambient air (AA-AA) in exposure chambers 24/7 for nine weeks. Reproductive endpoints evaluated included gestation length, litter size, litter birth weight, live birth index, sex ratio, ovarian response to superovulation, fertilization rate, embryo development, blastocyst and hatching rates, total cell count, and proportion of cell allocation to ICM and TE. Gestation length, litter size, litter birth weight, live birth index, and sex ratio were similar among exposure groups. Ovarian response was not affected by the exposure protocol. A multivariate effect for pre- and/or postnatal exposure to ambient fine particulate matter on IVF, embryo development, and blastocyst differential staining was found. Cell counts in ICM and ICM/TE ratios in blastocysts produced in the FA-FA protocol were significantly higher than in blastocysts produced in FA-AA and AA-AA protocols. No difference in the total cell count was observed. Based on these observations the study suggests that exposure to ambient fine particulate matter in a large urban center may negatively affect female reproductive health by disrupting the lineage specification at the blastocyst stage. Finally, the purpose of the third project was to evaluate the effects of pre- and/or postnatal exposure to particulate air pollution on fertilization, embryo development, and cell lineage segregation in preimplantation blastocysts during the late-life reproductive period using the IVF mouse model. Five-month-old superovulated mice were pre- and/or postnatally exposed to filtered air (FA-FA), filtered-ambient air (FA-AA), or ambient air (AA-AA) in exposure chambers 24/7 during six months. Reproductive endpoints were the same as the ones selected for the second project. Gestation length, litter size, litter birth weight, live birth index, and sex ratio were similar among exposure groups. Ovarian response was not affected by the exposure protocol. A multivariate effect for pre- and/or postnatal exposure to ambient air on blastocyst differential staining but not on IVF and embryo development was found. Cell counts in ICM and ICM/TE ratios in blastocysts produced in the FA-FA protocol were significantly higher than in blastocysts produced in FA-AA and AA-AA protocols. Cell counts in TE cells in blastocysts produced in the FA-FA protocol were significantly lower than in blastocysts produced in FA-AA and AA-AA protocols. The total cell count was similar among groups. This study suggests that exposure to particulate air pollution in a large urban center has no effect on ovarian function but may negatively affect female reproductive health in the late-life period by disrupting the lineage specification at the blastocyst stage.