O presente estudo foi realizado no Laboratório de Reprodução Animal da Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA, localizada no município de Tamarana - Paraná. O experimento se refere aos resultados obtidos na produção in vitro de embriões através da aspiração folicular transvaginal em bovinos das raças Nelore (não CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22). Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) totalizando 172 animais, no período de O 1 janeiro de 2010 a 31 de dezembro de 2012. Todos os animais foram submetidos à OPU (Ovum Pick Up) totalizando 397 procedimentos entre as doadoras, sendo 104 OPUs em Nelore (não CEIP), 52 OPUs em Nelore (CEIP). 133 OPUs em Brangus e 108 OPUs em Girolando. Com estes procedimentos foram aspirados 7335 oócitos, destes 3597 foram considerados viáveis (49%), produzindo 969 embriões (26.93%), destes foram transferidos 922 embriões em receptoras previamente selecionadas, resultando em 266 prenhes (taxa de prenhes 28.85%). Após a obtenção dos oócitos estes eram enviados para o laboratório acima citado para maturação, fecundação e cultivo in vitro, em um período de oito dias. Os embriões produzidos eram transferidos para receptoras de embrião previamente selecionadas e submetidas ao protocolo de TETF (transferência de embrião em tempo fixo), sendo o diagnóstico de gestação realizado aos 30 dias com auxílio de ultrassonografia transretal. Na raça Brangus recuperou-se um total de 2139 oócitos sendo 967 viáveis (45,2%), destes foram obtidos 272 embriões os quais foram transferidos 241 embriões resultando em 81 prenhezes (33.3%). Na raça Girolando, foram recuperados 1806 oócitos, destes 972 foram considerados viáveis (53.8%) e resultaram na produção de 251 embriões (25.8%), os quais foram transferidos 245, obtendo-se 61 prenhezes (24.9%). Com relação às doadoras da raça Nelore (CEIP). recuperou-se 1850 oócitos, destes 842 foram considerados viáveis (45.5%), resultando em 214 embriões (25.4%), obtendo-se 61 prenhezes (28.5%). Na raça Nelore (não CEIP) recuperou-se 1540 oócitos sendo 816 considerados viáveis (53.0%), os quais resultaram na produção de 232 embriões (28.4%), sendo transferidos 222 dos quais se obteve 63 prenhezes (28.4%). De acordo com a análise estatística observou-se que a raça Nelore (CEIP) teve resultados superiores de (P< 0.0001) em relação à média total de oócitos por OPU, total de oócitos viáveis por sessão de OPU (P< 0.0001), produção de embriões (P< 0.0001) e prenhes por OPU (P<O,0115). O presente trabalho forneceu dados inéditos de PIVE para discussão nas raças sintéticas Brangus e Girolando ( Bos taurus x Bos indicus), em larga escala, porém, o experimento também destaca a necessidade de mais estudos relacionados à produção in vitro de embriões nessas raças. Quanto ao comparativo entre as raças, observou que a quantidade total de oócitos não variou de acordo com as raças Brangus, Girolando e Nelore (não CEIP), no entanto podemos notar uma grande variação individual de animais da mesma raça, Nelore (CEIP) e Nelore (não CEIP), onde se obteve nas fêmeas da raça Nelore (CEIP, selecionadas) uma maior produção total de oócitos, oócitos viáveis e embriões por sessão de aspiração. / This study was developed at the Laboratory of Animal Reproduction from the \"Empresa Agropecuária Laffranchi Com. Ind. LTDA\", town of Tamarana, Paraná State, Brazil. Results from in vitro production of cattle embryos through follicular aspiration in the breeds Nelore (no CEIP, Bos indicus, n = 34), Nelore (CEIP, Bos indicus, n = 22), Brangus (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 64) e Girolando (5/8 Bos taurus x 3/8 Bos indicus, n = 52) from January 1st of 2010 to December 31th of 2012 were used totalizing 397 oocyte donors OPU. From those, 104 OPU were realized in Nelore (no CEIP), 52 OPUs in Nelore (CEIP), 133 OPUs in Brangus, and 108 OPUs in Girolando. The total of recovered oocytes was 7335. Then, the oocytes were sent to the Laboratory for in vitro maturation, fertilization and culture during a period of eight days. The number ofviable oocytes was 3597 (49%) and 969 embryos were in vitro produced (26.9%). A total of 922 were transferred to recipients previously selected and submitted to estrous synchronization using the farm routine FTET (fixed-time embryo transfer) protocol. The pregnancy rate was 28.9% (266 pregnancies). Pregnancy diagnosis was done at the embryo age of 30 days using B-mode transrectal ultrasonography. From Brangus cows, a total of 2139 oocytes were recovered and 967 were c1assified as viable (45.2%), 272 embryos were produced and 241 were transferred resulting in 81 pregnancies (33.3%). From Girolando cows, 1806 oocytes were recovered and 972 c1assified as viable (53.8%). A total of 251 embryos (25.8%) were produced, 245 transferred and the pregnancy rate was 24.9% (61 pregnancies).From the Nelore CEIP cows, a total of 1850 oocytes were recovered and 842 were c1assified as viable (45.5%), 214 embryos were produced and 214 were transferred resulting in 61 pregnancies (28.5%).From Nelore cows, 1540 oocytes were recovered and 816 c1assified as viable (53.0%). A total of 232 embryos (28.4%) were produced, 222 transferred and the pregnancy rate was 28.4% (63 pregnancies).The Nelore CEIP presented superior results for the number of oocytes recovered per OPU (P<0.0001), for the total of viable oocytes per OPU (P<0.0001), embryos produced (P<0.0001), and total of pregnancies per OPU procedures (P<0.0115). This work presents for the first time data from IVPE from Brangus and Girolando breeds (Bos taurosx Bos indicus). When the four studied breeds were compared, the results showed a considerable variation between animais in the same breed. Also, it was observed, in the same breed Nelore, a superiority ofthe Nelore CEIP for oocyte recovery rate, viable oocytes e total of embryos produced by OPU procedure.

A expressão da conexina 32 e 43 nas células gigantes trofoblásticas foi analisada em condições de cultura celular com e sem influência de hormônios sexuais. Placentônios bovinos foram coletados de vacas prenhes em abatedouro nos diferentes períodos gestacionais e divididos em três grupos, primeiro terço (I), segundo terço (II), terceiro terço (III) e transportados ao laboratório em condições assépticas à temperatura de 4ºC em solução de PBS com antibiótico. No laboratório as células foram isoladas e cultivadas em meio D-MEM com 10% SFB por cinco dias. As detecções das conexinas 32 e 43 foram realizadas através de munofluorescencia, pelo método de amplificação da tiramida-fluoresceina, utilizando anticorpo primário policlonal a imunoglobulina de coelho, anti-conexina 32 e 43 de camundongo. Os resultados mostraram que as células gigantes trofoblásticas expressam conexinas 32 e 43 nos três períodos gestacionais com exceção da Cx32 no primeiro terço gestacional sem adição de hormônios, a qual passou a expressar fluorescência após a adição de hormônios. A distribuição da Cx43 evoluiu com a progressão da gestação, permanecendo limitada ao interior das células gigantes trofoblásticas, sem formar junções comunicantes. O terceiro terço gestacional mostra a Cx43 na CGTT localizada no interior do núcleo. A adição de hormônios ao meio de cultura vem confirmar que a progesterona e o estrógeno podem ter um papel no controle da Cx32. Para Cx43 onde se adicionou progesterona os níveis de expressão foram baixos no início aumentando no decorrer da gestação, o mesmo foi encontrado para o conjugado de progesterona/ estrógeno. Para o estrógeno no grupo I os níveis de expressão foram menores se comparados aos três grupos diminuindo no grupo II e voltando a aumentar no grupo III. / The trophoblast cells expression of connexins 32 and 43 was studied in cell culture conditions with or without influence of sexual hormones. Bovine placentomes were collected from pregnant cows in slaughterhouses in different gestational periods and so divided into three groups, first term (I), second term (II), and third term (III), and transported to the laboratory in aseptic conditions at a temperature of 40C in PBS solution with antibiotics. At the laboratory the cells were isolated and cultivated in D-MEM environment with 10% SFB for five days. The detections of connexins 32 and 43 were achieved through immunofluorescence, by the tyramide-fluorescein amplification method, using a rabbit polyclonal primary antibody anti-connexin 32 and 43 of mice. The results showed that the trophoblast cells expressed connexins 32 and 43 in the three gestational periods with an exception of the Cx32 at the first gestational period. However, after the addition of sexual hormones, they began to express the connexins in the cytoplasm in the first stage. The distribution of the Cx43 evolved with the progression of the gestation, remaining limited to the trophoblast`s cells interior, without formation of gap junctions. The third gestational term shows the Cx43 located inside the nuclei of the CGTT. Addition of hormones in the culture environment confirmed that estrogen and progesterone may have an important action controlling Cx32. For Cx43, the expression was low after prosterone was added to the culture medium, but increased as the gestation evolved, the same was found for a combined compost of estrogen\\ progesterone. For estrogen, in group I the expression levels were inferior when compared to the three groups decreasing in group II and increasing again in group III. We may conclude that the sexual hormes, specially estrogen, affect the expression of connexins in trophoblastic cells.

The study evaluated strategies for induction of ovulation for fixed-time AI (FTAI) in lactating dairy cows submitted to Ovsynch-type protocols initiated after a novel presynchronization strategy. A total of 909 lactating dairy cows from 6 dairy herds were at 36.7 ± 0.28 d in milk, with body condition score of 3.16 ± 0.02 when they underwent presynchronization. On D-15, all cows received an intravaginal progesterone (P4) implant of 1.0 g P4 (new or used) or a used device of 2.0 g P4 and 7 d later (D-8) the P4 implant was removed and cows received 1.0 mg i.m. estradiol cypionate (EC) and 0.530 mg i.m. sodium cloprostenol (PGF). On D0, a synchronization of ovulation protocol for FTAI was initiated and cows were randomly assigned to 1 of 3 experimental groups, that differed only on the strategy to induce ovulation at the end of the protocol. The protocols initiated on D0 with 16.8 &mu;g i.m. of buserelin acetate (GnRH) concomitant with insertion of a 2.0 g (new or used) P4 device. On D6, every cow received 0.530 mg PGF followed by a second PGF on D7, concomitant with P4 device withdrawal. In Group EC, cows received 1.0 mg EC on D7 (time of P4 device withdrawal) as inducer of ovulation. In Group EC/G, cows received EC on D7 and 8.4 &mu;g GnRH administered 16 h before FTAI (56 h after the first PGF). Finally, in Group G, cows only received 8.4 &mu;g GnRH at 56 h after the first PGF. The FTAI was performed on D9 (48 h after P4 device withdrawal) in all experimental treatments and pregnancy diagnosis was performed 31 and 60 d after FTAI. The pregnancy per AI (P/AI) was not different between cows with or without CL on D-15 (44.7 vs. 38.7%) and on D0 (44.3 vs. 37.3), however, cows with CL on D6 had higher P/AI than cows without CL at PGF (45.9 vs. 17.7%). Estrus expression was greater in cows receiving EC compared to cows receiving only GnRH (80.0 vs. 46.1%). Moreover, cows expressing estrus had greater P/AI than cows not showing estrus on d31 (50.8 vs. 34.8) and on d60 (48.5 vs. 27.6%), however, estrus did not affect pregnancy loss. There were no differences between experimental treatments on P/AI on d30 with an overall P/AI of 40.4% (367/909). Pregnancy loss and P/AI on d60 did not differ between treatments. In conclusion, the reproductive program has potential to promote high fertility and the 3 strategies to induce the final synchronized ovulation produced similar fertility. Further research is needed to optimize the presynchronization strategy and to more definitively determine the effect of different methods of ovulation induction on P/AI and in particular on the pregnancy loss after the d30 pregnancy diagnosis. / O estudo avaliou estratégias para induzir a ovulação final em protocolos de IA em tempo fixo (IATF) em vacas leiteiras submetidas a protocolos do tipo Ovsynch iniciados após uma pré-sincronização. Um total de 909 vacas em lactação de seis diferentes fazendas estava com 36,7 ± 0,28 d em lactação e escore de condição corporal de 3,16 ± 0.02 quando iniciaram o protocolo de pré-sincronização. No D-15 todas as vacas receberam um implante de progesterona (P4) de 1,0 g (novo ou usado) ou de 2,0 g (usado), e 7 d após (D-8), o implante de P4 foi retirado e as vacas receberam 1,0 mg i.m. de cipionato de estradiol (CE) e 0,530 mg de cloprostenol sódico (PGF). No D0, iniciou-se o protocolo de sincronização da ovulação para a IATF a as vacas foram aleatoriamente distribuídas em 1 de 3 grupos experimentais, que diferiam somente na estratégia de indução da ovulação ao final do protocolo. Os protocolos se iniciaram no D0 com 16,8 &mu;g de acetato de buserelina (GnRH) concomitante com a inserção de um dispositivo de P4 de 2,0 g (novo ou usado). No D6, todas as vacas receberam 0,530 mg de PGF seguida de uma segunda PGF no D7, concomitante com a retirada do implante de P4. No Grupo CE, as vacas receberam 1,0 mg de CE no D7 (momento da retirada do dispositivo de P4) como indutor de ovulação. No Grupo CE/G, as vacas receberam 1,0 mg de CE no D7 e 8,4 &mu;g de GnRH 16 h antes da IATF (56 h após a primeira PGF). Por último, no Grupo G, as vacas receberam somente 8,4 &mu;g de GnRH no mesmo momento do grupo CE/G. A IATF foi realizada no D9 (48 h após a retirada do implante de P4) em todos os grupos e o diagnóstico de gestação ocorreu 31 e 60 d após a IATF. A prenhez por IA (P/IA) não diferiu entre vacas com ou sem CL no D-15 (44.7 vs. 38.7%) e no D0 (44.3 vs. 37.3), no entanto, vacas com CL no D6 apresentaram maior P/IA do que vacas sem CL na PGF (45.9 vs. 17.7%). Expressão de cio foi maior em vacas que receberam CE do que vacas que receberam somente GnRH (80.0 vs. 46.1%). Além disso, vacas que expressaram cio tiveram maio P/IA no d31 (50.8 vs. 34.8) e no d60 (48.5 vs. 27.6%), no entanto, expressão de cio não afetou perda gestacional. Não houve diferença entre os tratamentos experimentais na P/IA no d31, e a P/IA média foi 40.4% (367/909). Perda gestacional e P/IA aos 60 d não diferiram entres os grupos. Concluímos que o programa reprodutivo tem potencial para promover alta fertilidade e que as 3 estratégias para induzir a ovulação final do programa reprodutivo promoveram fertilidade similares. No entanto, é necessário que seja melhor estudado a interação entre expressão de cio e tratamentos nos parâmetros de fertilidade, assim como, estudar mais a fundo os efeitos dos tratamentos (indutores de ovulação) na fertilidade após o d30 e na perda gestacional.

O objetivo deste trabalho foi determinar e avaliar os fatores sanitários e reprodutivos capazes de afetar a produtividade de vacas leiteiras. Pesquisou-se por meio de dois estudos correlacionais os efeitos de ocorrências sanitárias no periparto e seus respectivos fatores de risco sobre a produção de leite no pico e aos 305 dias em lactação, e os fatores de riscos para falhas na concepção ao primeiro serviço pós-parto (CPS). Para concretizar o objetivo deste trabalho, foram coletados mensalmente durante os anos de 2001 e 2002 dados de um rebanho comercial de vacas leiteiras de raça holandesa, localizado no Estado de São Paulo. Para a realização do primeiro estudo foram usadas 15.613 observações e para a análise estatística dos dados foram utilizadas a regressão logística e a análise de regressão múltipla. Os resultados obtidos nestas análises demonstraram que as doenças do periparto e seus fatores de risco afetaram a produção de leite com diferentes efeitos em função do número de lactações, exigindo desta maneira maior cuidado com adoção de medidas profiláticas para serem evitadas doenças e para maximizar a produção de leite dos animais. Foram usadas no segundo estudo 13.594 observações e os dados foram analisados estatisticamente por meio de regressão logística, calculando-se a razão das chances no isolamento dos fatores de risco e na associação entre os riscos para sucesso ou falha na CPS. Os resultados obtidos indicaram que os principais fatores de risco foram o número da lactação, a época do ano ao primeiro serviço, a ocorrência de doenças no periparto, a relação entre as porcentagens de gordura e proteína do leite (RGP) e as alterações no escore de condição corporal (ECC). Os animais de primeira lactação apresentaram maior chance de sucesso ao primeiro serviço do que os animais multíparos. As vacas cobertas no período do inverno apresentaram, aproximadamente, cinco vezes mais chances de CPS do que as vacas cobertas no verão. Os animais que apresentaram doenças no periparto tiveram menor sucesso de concepção que os animais sadios. Os animais que apresentaram melhor condição ruminal, determinada pela RGP, principalmente durante o período de verão, tiveram melhor concepção do que os animais com RGP reduzida no verão. O ECC adequado nas diferentes fases produtivas das vacas (secagem, parto e cobertura) demonstrou ser uma importante ferramenta para identificar as vacas com risco de insucesso na concepção ao primeiro serviço. / These studies evaluate health and reproductive factors affecting dairy cows’ productivity. Through correlation studies were evaluated health occurrences and risk factors during peripartum for milk production at peak, after 305 days of lactation and conception failures on first service pos-partum (CFS). Using a commercial herd of “dairy holsteins cows” located in São Paulo state – Brazil, data were collect in 2001 and 2002. On the first study were used 15,613 observations, the statistical analyses data were processed on logistic regression and multiple regression analyses. The analyses showed that peripartum diseases and risk factors directly affected milk production, with different effects based on lactations times, requesting extra care on prophylactics to avoid diseases and improve milk production. On the second study were used 13,594 observations, the statistical analyses data were processed on logistic regression calculating chances ratio on risk factors isolation and risk factors association to success or failure on first service pos-partum. Results indicated as mainly risks factors: lactation times, year period that first service occurred, peripartum diseases, body score condition (BSC), milk protein and fat ratio (PFR). First lactation animals presented more chance of success to the first service than multiparous. Cows inseminated during winter time showed 5 times more chances of CFS than ones inseminated on summer time. Animals with peripartum diseases had less conception success than healthy ones. Cows with better rumminal condition (FPR) had a much better conception than ones with lower FPR. The correct BSC on different productive steps (dry-off, calving and breeding) showed to be an important tool to identify animals with higher risks of failure on first service conception.

Neospora caninum é um protozoário parasita de grande importância em todo o mundo, sendo considerado a principal causa de abortamento bovino em algumas localidades. Enquanto a implicação deste parasita em distúrbios reprodutivos na espécie bovina seja conhecida, as informações disponíveis com a espécie bubalina são escassas. Este estudo avaliou e comparou as consequências da infecção experimental por N. caninum em búfalas e vacas, no estágio inicial da gestação, o de maior importância no que se refere à ocorrência de morte fetal. Protocolos de inseminação artificial em tempo fixo foram utilizados para maior controle da fecundação. Foram utilizados para inoculação dois isolados distintos, Nc-Bahia e Nc-1, possibilitando a comparação entre o isolado nacional e o isolado padrão. Todos os animais foram inoculados com 5 x 108 taquizoítos, pela via endovenosa, no 70º dia de gestação. Três búfalas e cinco vacas foram infectadas com o isolado Nc-Bahia, sendo detectado abortamento 42 dias pós-infecção (DPI) em somente uma das vacas inoculadas. Três búfalas e duas vacas foram inoculadas com o isolado Nc-1 e morte fetal foi detectada 35 DPI em todas as búfalas e vacas. Uma búfala e uma vaca permaneceram como controles negativos, sem infecção. A transmissão vertical foi verificada por semi-nested PCR nos animais infectados com Nc-Bahia e Nc-1. Diferentes graus de inflamação não-supurativa foram detectados em tecidos maternos, fetais e placentários. Todas as fêmeas inoculadas apresentaram resposta humoral frente à infecção. Embora a infecção estivesse mais disseminada pelo organismo das búfalas (p<0,05), a resposta humoral foi menor (p<0,05) e as lesões histológicas foram menos frequentes (p<0,05), indicando haver maior adaptação entre N. caninum e as búfalas, em comparação com os resultados obtidos nas vacas. O isolado Nc-Bahia foi menos patogênico que o Nc-1, por causar menos abortamentos (p<0,05) e menor frequência de lesões histológicas (p<0,05). A patogenicidade do agente na espécie bubalina foi confirmada, consideradas as lesões encontradas na análise histopatológica e a detecção da presença do agente por semi-nested PCR nos diversos tecidos estudados, além da positividade por imunoistoquímica em placenta e cérebro fetal bubalino. Esta é a primeira detecção de abortamento causado por N. caninum na espécie bubalina, em fêmeas infectadas experimentalmente com o protozoário, confirmando que problemas reprodutivos podem ser causados pelo N. caninum em búfalas. / Neospora caninum is a protozoan parasite with big importance all over the world, being considered the main cause of bovine abortion in some locations. While the implication of this parasite in bovine reproductive disorders is known, the available information within the buffalo species is scarce. This study evaluated and compared the consequences of experimental infection with N. caninum in buffaloes and cows on the initial stage of pregnancy, the most important regarding to the occurrence of fetal death. Protocols for fixed-time artificial insemination were used for greater control of fertilization. Two different isolates, Nc-Bahia and Nc-1, were utilized for inoculation, allowing the comparison between the national isolate and the standard isolate. All animals were inoculated with 5 x 108 tachyzoites, by endovenous route, at the 70th day of pregnancy. Three buffaloes and five cows were infected with the isolate Nc-Bahia and abortion was detected 42 days post-infection (DPI) in only one inoculated cow. Three buffaloes and two cows were inoculated with the isolate Nc-1 and fetal death was detected 35 DPI in all buffaloes and cows. A buffalo and a cow remained as negative controls, without infection. Vertical transmission was verified by semi-nested PCR in animals infected with Nc-Bahia and Nc-1. Different degrees of nonsuppurative inflamation were detected in maternal, foetal and placental tissues. All inoculated females showed humoral response against the infection. Although the infection was more disseminated withn the body of buffaloes (p <0.05), the humoral response was lower (p <0.05) and histological lesions were less frequent (p <0.05), indicating bigger adaptation between N. caninum and the buffaloes, in comparison with the results obtained in cows. Nc-Bahia isolate was less pathogenic than the Nc- 1, as it caused less abortions (p <0.05) and lower frequency of histological lesions (p<0.05). The pathogenicity of the agent in the bubaline species was confirmed, considering the lesions found on histopathology analysis and the detection of the agent´s presence by semi-nested PCR in the different studied tissues, in addition to the positivity by immunohistochemistry test in bubaline placenta and foetal brain. This is the first detection of abortion caused by N. caninum in buffalo species, in females experimentally infected with the protozoan, confirming that reproductive disorders can be caused by N. caninum in buffaloes.

Este estudo teve como objetivo a compreensão dos efeitos desencadeados pelas temperaturas elevadas na expressão gênica de proteínas de choque térmico, nomeadamente da HSPA1A e HSP90AA1, em linfócitos de fêmeas bovinas de diferentes raças e origens. Parte do projeto foi desenvolvida em Portugal, onde foram utilizadas 20 novilhas da raça Limousine e 22 da raça Mertolenga. A parte desenvolvida no Brasil decorreu com 11 novilhas da raça Holstein Frísia e 20 da raça Brahman. Os animais da raça Holstein participaram do Experimento I no qual foram coletados 4 tubos de sangue para posterior choque térmico in vitro, onde cada tudo de sangue foi submetido a diferentes temperaturas: 40 °C e 42 °C (ambos através de banhos-maria), 23 °C (mantido a temperatura ambiente) e 10 °C (na geladeira), durante duas horas. Todos os animais de todas as raças participaram no Experimento II, onde foram sujeitos ao teste de tolerância ao calor, tendo sido aferidas a temperatura retal e a frequência respiratória, e coletado sangue (após os tratamentos sombra e sol). A todas as amostras de ambos os experimentos foi realizada a lise das hemácias de modo a obter o buffy-coat. O RNA foi isolado através do método do TRIzol e a RT-PCR realizada com SuperScript III após digestão com DNAse I. A PCR em tempo real decorreu no aparelho 7500 Fast Real Time, utilizando TaqMan Gene Expression Assays para os genes alvo HSPA1A e HSP90AA1, e ACTB e PPIA como genes endógenos. Foram calculados os &Delta;Ct (Ctalvo - Ctendógeno) assim como a expressão gênica através do método 2-&Delta;&Delta;Ct. A análise estatística foi realizada através de modelos lineares mistos, recorrendo ao programa R Software Project (versão 3.0.1). No Experimento I foi atestada a qualidade da relação para ambos os endógenos nas relações que estabelecem com o mRNA-HSPA1A e o mRNA-HSP90AA1, através de uma análise de regressão pairwise. Tal como era esperado os valores de expressão gênica a uma temperatura de 23 °C foram os menores, seguidos 10 °C (estresse por frio), 40 °C e 42 °C para o gene HSPA1A. No caso da HSP90AA1, foi a 40 °C que se verificou uma maior expressão gênica. No Experimento II verificou-se uma variação intra-raça algo acentuada para valores de frequência respiratória, permitindo supor que o esforço termorregulatório dos animais de uma mesma raça possa ter sido diferente. Em relação à temperatura retal a raça Brahman apresentou valores significativamente diferentes das restantes raças para a situação sol. As diferenças observadas foram provavelmente consequência dos diferentes níveis de estresse aos quais os animais estiveram sujeitos. As diferenças observadas nos &Delta;Ct não foram muito expressivas e apenas se observaram diferenças significativas na expressão gênica relativa na raça Mertolenga entre as situações sombra e sol. Podemos concluir que o aumento planificado da temperatura de linfócitos bovinos leva a diferentes expressões gênicas relativas de HSPA1A e HSP90AA1. A expressão de mRNA-HSPA1A é tanto maior quanto maior o estresse térmico, quer por frio quer por calor. As expressões gênicas relativas de HSPA1A e HSP90AA1 exibidas por animais com diferentes capacidades termolíticas são também elas diferentes, existindo uma variabilidade individual na expressão gênica relativa de proteínas de choque térmico. / The present study aimed to understand the effects triggered by high temperatures in heat shock proteins gene expression, HSPA1A and HSP90AA1, in cow lymphocytes from different breeds and origins. Part of the project was developed in Portugal, where 20 Limousin and 22 Mertolenga breed heifers were used and the second part was developed in Brazil with 11 Holstein Friesian and 20 Brahman heifers. The Holstein animals participated in Experiment I in which four blood samples were collected for subsequent in vitro heat shock, where each one of the blood samples was submitted to different temperatures: 40 ° C and 42 ° C (through water baths), 23 ° C (kept at room temperature) and 10 ° C (in refrigerator) for two hours. All animals from all breeds participated in Experiment II, where they were subjected to the heat tolerance test, where rectal temperature and respiratory rate were measured, and blood samples were collected (after shadow and after sun treatments). In all samples of both experiments was carried out the erythrocytes lysis so as to obtain the buffycoat. The RNA was isolated by the TRIzol method and RT-PCR performed with SuperScript III after digestion with DNase I. The real-time PCR apparatus took place in 7500 Real Fast Time, using TaqMan Gene Expression Assays for HSPA1A and HSP90AA1 target genes, ACTB and PPIA as endogenous genes. The &Delta;Ct (Cttarget - Ctendogenous) were calculated as well as gene expression through the 2-&Delta;&Delta;Ct method. Statistical analysis was performed using linear mixed models, using the program R Project Software (version 3.0.1). In Experiment I it was attested the quality of the relationship for both endogenous with the mRNA-HSPA1A and mRNAHSP90AA1 through a pairwise regression analysis. As expected values, gene expression at a temperature of 23 °C were lower, followed by 10 °C (cold stress), 40 °C and 42 °C for the HSPA1A gene. In the case of HSP90AA1 the higher gene expression was found at 40 °C. In Experiment II, there was a slightly pronounced intra-race variation for respiratory rate values, allowing the assumption that the thermoregulatory effort of animals of the same breed may have been different. Regarding the rectal temperature, in Brahman breeds it was significantly different from the other breeds in the sun treatment. The differences observed were probably a result of different levels of stress to which the animals were subjected. The differences observed in &Delta;Ct were not very expressive and significant differences were only observed in relative gene expression of Mertolenga breed between shade and sun treatments. We conclude that planned increasing temperature in bovine lymphocytes leads to different relative gene expression of HSPA1A and HSP90AA1. The mRNA-HSPA1A expression is greater in higher thermal stress, either by cold or by heat. The HSPA1A and HSP90AA1 relative gene expressions exhibited by animals with different thermolytic capabilities, are also different, existing an individual variability in relative gene expression of heat shock proteins.

Muçarela de búfala é um queijo fresco, de massa filada, que apresenta características como coloração branca, sabor adocicado e alto valor nutricional e que tem grande aceitação pelos consumidores, dispostos a pagar preços diferenciados pela peculiaridade do produto. No entanto, o queijo está sujeito à violação de autenticidade, tanto pela sazonalidade da produção do leite da búfala quanto pelo alto preço do leite e do queijo, quando comparado aos similares oriundos da vaca, bem como à contaminação microbiana. Assim, este trabalho teve por objetivos avaliar a ocorrência de fraude na muçarela de búfala por adição de leite de vaca, e a influência da sazonalidade da produção do leite de búfala na frequência desta adulteração, bem como avaliar a presença de alguns patógenos no queijo comercializado no município de São Paulo. Amostras de muçarela de bolinha cujo rótulo identificava o uso exclusivo de leite de búfala foram submetidas à pesquisa de DNA bubalino e bovino, usando primers para detecção do gene citocromo b (cytb), e à análise microbiológica. A fraude foi detectada em 73% das amostras (77/106), não havendo influencia da sazonalidade; em duas amostras (2/106) apenas o DNA bovino foi detectado. Do ponto de vista microbiológico, todas as amostras apresentaram ausência de Listeria monocytogenes e de Salmonella spp. em 25 gramas, mas 7% (10/138) foram consideradas impróprias para o consumo humano por apresentar Coliformes termotolerantes e/ou Staphylococcus coagulase positiva acima dos limites estabelecidos pela legislação vigente. Conclui- se que a fraude por adição de leite de vaca é muito frequente e não é motivada apenas pela redução sazonal da oferta do leite bubalino. Além disso os problemas microbiológicos detectados estão associados às inadequadas condições de higiene da matéria prima e/ou do processo de fabricação e/ou abuso de temperatura de armazenamento do queijo. / Buffalo mozzarella is a fresh cheese, filada mass, with characteristics such as white color, sweet taste and high nutritional value and has great acceptance by consumers willing to pay different prices for the uniqueness of the product. However, the cheese is subject to violation of authenticity, both the seasonality of production of milk the buffalo as by the high price of milk and cheese when compared to similar coming from the cow as well as to microbial contamination. This work aimed to evaluate the occurrence of fraud in buffalo mozzarella by adding cow\'s milk, and the influence of the seasonality of production of buffalo milk in the frequency of this tampering and evaluate the presence of some pathogens in cheese marketed in São Paulo. Mozzarella samples of marble whose label identified the exclusive use of buffalo milk were subjected to DNA research buffalo and cattle, using primer for detection of cytochrome b gene (cytb), and microbiological analysis. The fraud was detected in 73% of samples (77/106), with no influence of seasonality; in two samples (2/106) only the bovine DNA was detected. From a microbiological point of view, all samples showed no Listeria monocytogenes and Salmonella spp. 25 grams but 7% (10/138) were considered unfit for human consumption by presenting thermotolerant coliforms and / or coagulase positive Staphylococcus above the limits established by law. It is concluded that fraud by adding cow\'s milk is very common and is not motivated only by the seasonal reduction in supply of buffalo milk; microbiological problems encountered are related to inadequate hygiene conditions of raw materials and / or fabrication process and / or storage temperature abuse cheese.

Orientador: José Jurandir Fagliari / Banca: Francisco Guilherme Leite / Banca: Eduardo Harry Birgel Júnior / Resumo: O presente estudo foi constituído por três experimentos: Experimento 1: Foram analisadas as variáveis hematológicas de fêmeas bovinas da raça holandesas mensalmente durante toda a gestação e o periparto. As fêmeas foram distribuídas em 5 grupos: novilhas gestantes (G1), vacas de segunda gestação (G2), vacas de segunda gestação, repetidoras de estro(G3), vacas de terceira gestação (G4) e vacas de terceira gestação, repetidoras de estro(G5). As atividades das enzimas AST e ALP, foram maiores em G1. Houve diferença significativa entre vacas repetidoras e não repetidoras de estro somente nas concentrações séricas de colesterol no início da gestação. No segundo mês de gestação as concentrações de cálcio total e ionizado foram alteradas significativamente em relação ao primeiro mês, em todos os grupos. No terço final da gestação, dia do parto e no pós-parto houve alteração nas concentrações de cálcio, fósforo, ferro, cloretos, creatinina, bilirrubina direta e total, colesterol, triglicerídeos, proteína total, albumina e imunoglobulinas, no número de hemácias e leucócitos, volume globular, nos teores plasmáticos de glicose e hemoglobina e na atividade da enzima AST em todos grupos de animais. As atividades de LDH, ALP e GGT e as concentrações de sódio, potássio e uréia não foram significativamente alteradas durante o experimento. Experimento 2: Os constituintes sanguíneos das vacas do experimento 1 (G1) foram comparados aqueles de vacas acometidas por abortamento G (2) entre 25 (25 DPc) e 45 dias após inseminação artificial ou transferência de embrião (45 DPc). O teor de cálcio ionizado foi significativamente maior no grupo 1 45 dias após a inseminação artificial ou transferência de embrião. Possivelmente esses abortos tem origem metabólica/nutricional... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study was constituted by 3 experiments: Experiment 1: Were analysed the blood constituents of Holstein bovine females monthly during the whole gestation and the peripartum. The females were sorted in five groups: pregnancy heifers (G1), second pregnancy cows (G2) repeat-breeders second pregnancy cows (G3), third pregnancy cows (G4) and repeat-breeders third pregnancy cows. The seric activity of AST and ALP enzymes was higher in G1. Only the cholesterol level. The diference was significative between repeat-breeders and non repeat-breeders cows only in the cholesterol seric concentration in the early gestation. In the second month of pregnancy the seric concentration of total calcium and ionized calcium was significant modified compared with the first month of gestation in all groups. In the late gestation, at the partum and in post-partum period the seric concentration of calcium, phosphorus, iron, chlorides, creatinine, direct and total bilirrubins, cholesterol, triglycerides, total protein, albumin, and imunoglobulins, number of eritrocytes and leukocytes, plasmatic concentration of glucose and hemoglobin and AST activity in all of the animal groups. The sodium, potassium and urea concentrations were not significantly modified during the experiment. Experiment 2: The blood constituents of the cows of experiment 1 (G1) was compared with cows that aborted between 25 and 45 days post-breed. Possibly this abortion has metabolic/nutricional cause, because was not found alterations in the acute-phase protein concentrations neither in the leukogram. Experiment 3: The passive immunity transfer to the heifers which were daughters of the females from the experiment 1 was evaluated by measuring seric GGT , total protein and IGg . The heifers got colostrum from their own mothers and there was no significant difference between the groups. The TIP found in all the groups was considered good. / Mestre

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O estradiol (E2) exerce papel fundamental no desencadeamento da luteólise nos ruminantes. A redução das concentrações de E2 que se segue a ablação dos folículos retarda a luteólise enquanto que aplicações de E2 no final da fase luteínica estimulam a secreção de prostaglandina-F2&alpha; (PGF2&alpha;), induzindo a luteólise. O E2 pode preparar bioquimicamente o endométrio de forma que a progesterona (P4) possa estimular a secreção de PGF2&alpha;. Para esse trabalho foi utilizado um antagonista de P4 (RU486) no intuito de se estudar efeitos da P4 em associação com o E2 na produção de PGF2&alpha;. Foram conduzidos 2 experimentos com vacas holandesas em final da fase luteínica. No primeiro experimento, 2 grupos (n=4) receberam respectivamente RU486 (3mg/kg)+E2 (3mg) e placebo+E2. O uso do RU486 não inibiu a produção de PGFM (metabólito da PGF2&alpha;) e sim aumentou-a. O E2 estimulou a produção de PGFM. Verificou-se também que o etanol (ETOH) utilizado como solvente para o RU486 provocou forte pico de liberação de PGFM. No experimento 2 fez-se necessário checar a efetividade da ação do ETOH nos resultados obtidos. Animais foram divididos em 3 grupos (n=3) que receberam 0,00; 0,03 e 0,06mL de ETOH/kg de peso vivo. Uma hora após a aplicação do ETOH todos receberam E2 (3mg). O ETOH e o E2 voltaram a estimular a produção de PGFM. A baixa especificidade do RU486, a possível ativação de receptores de P4 pelo próprio RU486 e/ou ação do LH associado ao E2 podem ter estimulado a liberação de PGFM. Porém pouco pôde-se concluir sobre o pico de PGFM ocasionado pelo ETOH. / Estradiol (E2) is essential for triggering luteolysis in ruminants. The low E2 concentrations after follicular ablation prolongs luteolysis instead of E2 injections in late luteal phase stimulate prostaglandin F2&alpha; (PGF2&alpha;) and luteolysis. The E2 could act in endometrium avoiding progesterone (P4 ) to stimulate PGF 2&alpha; secretion. A P4 antagonist (RU486) was used for it. Holstein cows in late luteal phase where used for those 2 experiments. First experiment, 2 groups (n=4) received respectively RU486 (3mg/kg)+E2 (3mg) and placebo+E2 Ru486 increased PGFM (PGF2&alpha; metabolite). E2 stimulated PGFM production. Ethanol (ETOH) used as a RU486 vehicle strongly stimulated PGFM. In experiment 2 the effectivity of ETOH was studied. Animals were share into 3 groups (n=3) receiving 0,00; 0,03 e 0,06mL of ETOH/kg. All animals received E2 (3mg) 1hour after ETOH injection. Once more, both ETOH and E2 stimulated PGFM releasing. The low RU486 specificity, the possible P4 receptor activation by the RU486 itself and/or the LH/E2 association could be able to stimulate PGFM release. The PGFM stimulus by the ETOH injection is not well understood.