Annona crassiflora é uma espécie nativa do cerrado brasileiro, conhecida pelo uso popular como alimento e na etnofarmacologia para o tratamento de parasitas do couro cabeludo e de transtornos menstruais. Quimicamente, Annonaceae é conhecida pela produção de acetogeninas e alcaloides benzilisoquinolínicos, dentro dos quais o gênero Annona apresenta a maior diversidade de compostos aporfínicos. O objetivo central deste trabalho foi avaliar potenciais atividades biológicas para Annona crassiflora, relacionadas a sua composição alcaloídica. A análise do extrato foliar de A. crassiflora através de técnicas cromatográficas, espectrométricas e por ressonância magnética nuclear levou a detecção de oito compostos nitrogenados, sendo sete deles identificados: anonaina, annoretina, estefalagina e xilopina, já previamente descritos na espécie, litseglutina B e tetrahidropalmatrubina, identificados pela primeira vez no gênero, e um alcaloide aporfínico inédito proposto como crassiflorina, em homenagem a espécie. A partir das amostras obtidas, foram desenvolvidos diversos ensaios de atividades biológicas, sendo testado o potencial fitotóxico, a atividade antimicrobiana frente as bactérias (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Bacillus subtilis), a inibição de atividade enzimática (acetilcolinesterase e transcriptase-reversa do HIV1) e a atividade antiparasitária (amastigotas e tripomastigotas de Trypanosoma cruzi). Somente dois dos alcaloides identificados, estefalagina e xilopina, foram isolados em quantidades suficientes para alguns bioensaios. De maneira geral, a estefalagina apresentou maior efeito inibitório no alongamento dos coleóptilos de trigo, além de melhores resultados nos ensaios de inibição de atividade enzimática (acetilcolinesterase e HIV1-RT). A xilopina foi mais eficiente nos ensaios fitotóxicos com braquiária (Urochloa decumbens) e com o parasita causador da doença de Chagas (Trypanossoma cruzi). Resultados interessantes com a fração enriquecida em alcaloides também foram obtidos para os ensaios fitotóxicos com espécies-alvo (Lactuca sativa e Lycopersicon esculentum) e antimicrobianos. Estes resultados reforçam o grande potencial biológico dos alcaloides produzidos por Annona crassiflora, sendo, a maioria das atividades descritas neste trabalho, inéditas para estas subtâncias / Annona crassiflora is a native species of Brazilian cerrado, used as food for local people and for treatment of scalp parasites and menstrual disorders in folk medicine. Chemically, Annonaceae is known for the production of acetogenins and benzylisoquinoline alkaloids, within which the Annona genus presents the greatest diversity of aporphine compounds. The aim of this work was to evaluate potential biological activities for Annona crassiflora, related to its alkaloid composition. The analysis of the foliar extract of A. crassiflora by chromatographic, spectrometric and nuclear magnetic resonance techniques led to the detection of eight nitrogen compounds. Seven of which were identified: anonaine, annoretine, stephalagine and xylopine, previously described in the species, litseglutine B and tetrahydropalmatrubine, as first report for the genus, and an unpublished aporphic alkaloid proposed as crassiflorine, in honor of the species. From the obtained samples, several biological assays were developed, being tested the phytotoxic potential, the antimicrobial activity against three bacteria (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis), the inhibition of enzymatic activity (acetylcholinesterase and transcriptase-reverse of HIV1) and the antiparasitic activity (amastigotes and trypomastigotes of Trypanosoma cruzi). Only two of the identified alkaloids, stephalagine and xylopine, were isolated in sufficient amounts for some bioassays. In general, stephalagine had significant inhibitory effect on wheat coleoptile elongation, as well as strong results in inhibition of enzymatic activity (acetylcholinesterase and HIV1-RT). Xylopine was more efficient in phytotoxic trials with Urochloa decumbens, and with the parasite that causes Chagas disease (Trypanosoma cruzi). Interesting results with an alkaloid enriched fraction were also obtained for the phytotoxic assays with target species (Lactuca sativa and Lycopersicon esculentum) and antimicrobials. These results reinforce the great biological potential of the alkaloids produced by Annona crassiflora. As the best of our knowledge, most of the activities described in this work are unpublished for these compounds

Annona crassiflora é uma espécie nativa do cerrado brasileiro, conhecida pelo uso popular como alimento e na etnofarmacologia para o tratamento de parasitas do couro cabeludo e de transtornos menstruais. Quimicamente, Annonaceae é conhecida pela produção de acetogeninas e alcaloides benzilisoquinolínicos, dentro dos quais o gênero Annona apresenta a maior diversidade de compostos aporfínicos. O objetivo central deste trabalho foi avaliar potenciais atividades biológicas para Annona crassiflora, relacionadas a sua composição alcaloídica. A análise do extrato foliar de A. crassiflora através de técnicas cromatográficas, espectrométricas e por ressonância magnética nuclear levou a detecção de oito compostos nitrogenados, sendo sete deles identificados: anonaina, annoretina, estefalagina e xilopina, já previamente descritos na espécie, litseglutina B e tetrahidropalmatrubina, identificados pela primeira vez no gênero, e um alcaloide aporfínico inédito proposto como crassiflorina, em homenagem a espécie. A partir das amostras obtidas, foram desenvolvidos diversos ensaios de atividades biológicas, sendo testado o potencial fitotóxico, a atividade antimicrobiana frente as bactérias (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Bacillus subtilis), a inibição de atividade enzimática (acetilcolinesterase e transcriptase-reversa do HIV1) e a atividade antiparasitária (amastigotas e tripomastigotas de Trypanosoma cruzi). Somente dois dos alcaloides identificados, estefalagina e xilopina, foram isolados em quantidades suficientes para alguns bioensaios. De maneira geral, a estefalagina apresentou maior efeito inibitório no alongamento dos coleóptilos de trigo, além de melhores resultados nos ensaios de inibição de atividade enzimática (acetilcolinesterase e HIV1-RT). A xilopina foi mais eficiente nos ensaios fitotóxicos com braquiária (Urochloa decumbens) e com o parasita causador da doença de Chagas (Trypanossoma cruzi). Resultados interessantes com a fração enriquecida em alcaloides também foram obtidos para os ensaios fitotóxicos com espécies-alvo (Lactuca sativa e Lycopersicon esculentum) e antimicrobianos. Estes resultados reforçam o grande potencial biológico dos alcaloides produzidos por Annona crassiflora, sendo, a maioria das atividades descritas neste trabalho, inéditas para estas subtâncias / Annona crassiflora is a native species of Brazilian cerrado, used as food for local people and for treatment of scalp parasites and menstrual disorders in folk medicine. Chemically, Annonaceae is known for the production of acetogenins and benzylisoquinoline alkaloids, within which the Annona genus presents the greatest diversity of aporphine compounds. The aim of this work was to evaluate potential biological activities for Annona crassiflora, related to its alkaloid composition. The analysis of the foliar extract of A. crassiflora by chromatographic, spectrometric and nuclear magnetic resonance techniques led to the detection of eight nitrogen compounds. Seven of which were identified: anonaine, annoretine, stephalagine and xylopine, previously described in the species, litseglutine B and tetrahydropalmatrubine, as first report for the genus, and an unpublished aporphic alkaloid proposed as crassiflorine, in honor of the species. From the obtained samples, several biological assays were developed, being tested the phytotoxic potential, the antimicrobial activity against three bacteria (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis), the inhibition of enzymatic activity (acetylcholinesterase and transcriptase-reverse of HIV1) and the antiparasitic activity (amastigotes and trypomastigotes of Trypanosoma cruzi). Only two of the identified alkaloids, stephalagine and xylopine, were isolated in sufficient amounts for some bioassays. In general, stephalagine had significant inhibitory effect on wheat coleoptile elongation, as well as strong results in inhibition of enzymatic activity (acetylcholinesterase and HIV1-RT). Xylopine was more efficient in phytotoxic trials with Urochloa decumbens, and with the parasite that causes Chagas disease (Trypanosoma cruzi). Interesting results with an alkaloid enriched fraction were also obtained for the phytotoxic assays with target species (Lactuca sativa and Lycopersicon esculentum) and antimicrobials. These results reinforce the great biological potential of the alkaloids produced by Annona crassiflora. As the best of our knowledge, most of the activities described in this work are unpublished for these compounds

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disseratacao Francinez Linhares Ferreira.pdf: 858941 bytes, checksum: 47da4fea68bdacd89f05293ec32428c4 (MD5) Previous issue date: 2001-08-23 / RESUMO CAPÍTULO I The araticum (Annona crassiflora Mart.) is a typical brazilian plant found in cerrados of Brazil. This plant contains acetogenins that presents cytotoxic, antitumorigenic, antiparasitic and antimicrobial properties. Its leaves, barks, fruits and seeds are used by the population as therapeutic medicine to treat several diseases as diarrhoea, rheumatism and syphilis. In the present study we have evaluated the mutagenic activity of the crude ethanolic extract of leaves of araticum though quantification of micronuclei induced in mice bone marrow. Doses of 10 mg/kg (5% of LD50), 20 mg/kg (10% of LD50), 50 mg/kg (25% of LD50), 100 mg/kg (50% of LD50) and 160 mg/kg (80% of LD50) were applied i.p. in mice Mus musculus, in groups of 5 (five) animals for each dose. The cytological preparations were made according to Heddle`s methodology. For all the applied doses, frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) was evaluated after 24, 48 and 72 h of treatment. The cytotoxicity was evaluated by ratio the between numbers of polychromatic and normochromatic erythrocytes (PCE/NCE). Ours results indicated an absence of significantly increased of micronuclei for all the doses tested (p>0,01). Thus, we concluded that the phytoterapic araticum did not present mutagenic activity under our experimental conditions. However, the toxic activity was observed upon analysis of LD50 and PCE/NCE ratio. RESUMO CAPÍTULO II Annona crassiflora Mart. (araticum) is a typical brazilian plant found in cerrados of Brazil. This plant contains acetogenins that presents cytotoxic, antitumorigenic, antiparasitc and antimicrobial properties. Its leaves, barks, fruits and seeds are used by the population as therapeutic medicine to treat several diseases as diarrhoea, rheumatism and syphilis. In the present study we have evaluated the antimutagenic activity of the crude ethanolic extract of leaves of araticum through quantification of micronuclei induced in mice bone marrow. Doses of the extract (10mg/kg, 20mg/kg, 50mg/kg, 100mg/kg and 160 mg/kg) and MMC (4mg/kg) were co-applied i.p in mice Mus musculus in groups of 5 (five) animals for each dose. The cytological preparations were made in according to Heddle s methodology. For all the applied doses, frequency of micronucleated polychomatic erythrocytes (MNPCE) was evaluated after 36 h of treatment. The obtained results indicated that the crude ethanol extract from leaves ay doses of 20 mg/kg, 50 mg/kg and 100 mg/kg inhibited significantly reduced frequencies of micronuclei (P<0.01). Thus, we concluded that the phytoterapic araticum exerted an antimutagenic effect. / RESUMO CAPÍTULO I O araticum (Annona crassiflora Mart.) é uma planta tipicamente brasileira encontrada nos cerrados do Brasil. Esta planta contém acetogeninas que apresentam propriedades citotóxica, antitumoral, antiparasitária e antimicrobiana. Suas folhas, cascas, frutos e sementes são utilizadas pela população para tratar várias doenças como diarréia, reumatismo e sífilis. No presente estudo, foi avaliada a atividade mutagênica do extrato bruto etanólico de folhas de araticum pelo teste do micronúcleo na medula óssea de camundongos. Doses de 10 mg/kg (5% da DL50), 20 mg/kg (10% da DL50), 50 mg/kg (25% da DL50), 100 mg/kg (50% da DL50) e 160 mg/kg (80% da DL50) foram aplicadas, intraperitonealmente, em camundongos Mus musculus, em grupos de 5 animais para cada dose. As preparações citológicas foram realizadas em conformidade com a metodologia de Heddle. Para todas as doses aplicadas, a freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMN) foi avaliada nos tempos de 24, 48 e 72 h. A citotoxicidade foi avaliada pela relação entre a freqüência de eritrócitos policromáticos e normocromáticos (EPC/ENC). Os resultados obtidos mostraram que o extrato bruto etanólico de folhas, para todas as doses testadas, não aumentou significativamente (p>0,01) a freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados. Dessa maneira, pôde-se concluir que o fitorápico araticum não exibiu atividade mutagênica. Entretanto, a atividade tóxica foi verificada pela DL50 e pela relação EPC/ENC. RESUMO CAPÍTULO II Annona crassiflora Mart. (araticum) é uma planta tipicamente brasileira encontrada nos cerrados do Brasil. Esta planta contém acetogeninas que apresentam propriedades citotóxica, antitumoral, antiparasitária e antimicrobiana. Suas folhas, frutos e sementes são utilizadas pela população como remédio para tratar diversas doenças como diarréia, reumatismo e sífilis. No presente estudo, foi avaliada a atividade antimutagênica do extrato bruto etanólico de folhas de araticum, na medula óssea de camundongos pelo teste do micronúcleo. Doses do extrato de folhas (10 mg/kg, 20 mg/kg, 50 mg/kg, 100 mg/kg e 160 mg/kg) e MMC (4,0 mg/kg) foram co-administradas, via intraperitoneal, em camundongos Mus musculus, em grupos de 5 (cinco) animais para cada dose. As preparações citológicas foram realizadas conforme metodologia de Heddle. Para todas as doses aplicadas, a freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMN) foi analisada 36 horas após tratamento. Os resultados obtidos mostraram que o extrato de folhas nas doses de 20 mg/kg, 50 mg/kg e 100 mg/kg inibiram significantemente (P<0,01) a freqüência de micronúcleos (MN) induzidos pela MMC. Dessa forma, concluiu-se que o fitoterápico araticum exerceu efeito antimutagênico.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-11-06T18:48:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_IsolamentoBiomonitoradoAtivos.pdf: 1682506 bytes, checksum: d089c22ff8b90442cdf6cdbb24270b26 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T12:55:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_IsolamentoBiomonitoradoAtivos.pdf: 1682506 bytes, checksum: d089c22ff8b90442cdf6cdbb24270b26 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:57:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_IsolamentoBiomonitoradoAtivos.pdf: 1682506 bytes, checksum: d089c22ff8b90442cdf6cdbb24270b26 (MD5) Previous issue date: 2012 / Neste trabalho foi realizado o estudo biomonitorado da toxicidade de frações e metabólitos secundários isolados das folhas de Annona crassiflora Mart., planta conhecida popularmente como araticum ou marolo. Além disso, foi investigada a atividade antimalárica dos compostos isolados e veiculados em nanoemulsões. O fracionamento do extrato etanólico, obtido de suas folhas, foi biomonitorado através do teste de letalidade sobre as larvas de Artemia salina, para a seleção de frações potenciais para obtenção de substâncias bioativas. O fracionamento do extrato etanólico bruto foi realizado através de extração ácida e métodos cromatográficos “flash” e CLAE-PDA. As frações obtidas foram submetidas à prospecção fitoquímica, com reagentes e reveladores para identificação das classes de metabólitos secundários, que levaram à detecção de alcaloides nas frações clorofórmicas (ACF-CI e ACF-CII). Foi isolado o alcaloide majoritário norestefalagina (NOR). Sua identificação foi realizada através de métodos espectrométricos como UV, IV, RMN de 1H e de 13C, DEPT 135, mapas de contornos COSY, HSQC, HMBC e NOESY. Foi também desenvolvido e validado um método CLAE-PDA para quantificação da NOR em nanoemulsões, através da avaliação da linearidade, precisão, exatidão, seletividade e limites de quantificação e detecção para a metodologia escolhida. Nanoemulsões contendo NOR (NE-NOR) foram produzidas e apresentaram tamanho e índice de polidispersão inferiores a 300nm nas concentrações entre 0,1 e 1,0 mg/mL. O potencial zeta das NE foi determinado, mas não foram observadas diferenças significativas entre as formulações testadas, estando todas em torno de -50 mV. A eficiência de encapsulação determinada foi de 22,0; 45,6 e 44,9% nas concentrações de 1,0; 2,0 e 5,0 mg/mL, respectivamente. As NE-NOR nas concentrações de 0,1 e 0,5 mg/mL apresentaram estabilidade de nove meses considerando os parâmetros físico-químicos avaliados. Na determinação da atividade hemolítica da NOR, foi constatado que esta foi inferior a 10% nas concentrações de 0,5 e 2,0 μg/mL. No ensaio de atividade antimalárica, a NOR em solução nas doses de 4,0; 8,0 e 20,0 mg/kg por via intraperitoneal reduziu significativamente (68 a 83%) a parasitemia dos camundongos infectados pelo Plasmodium berghei NK65 no quarto dia de infecção, quando comparada ao grupo controle não tratado. A redução da parasitemia foi de 80 a 84% para a NOR encapsulada nas nanoemulsões nas mesmas concentrações. A formulação de NE-NOR (4 mg/kg) apresentou maior redução da parasitemia ao longo do estudo, revelando seu efeito inibitório tardio sobre a carga parasitária dos animais. ____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: This work reports the bioguided study of the toxicity of fractions and secondary metabolites isolated from the leaves of Annona crassiflora Mart. popularly known as “araticum” or “marolo”, as well as the investigation of the antimalarial activity of isolated substances loaded in nanoemulsions. Fractionation of leave’s ethanolic extract was bioguided by the test of lethality using brine shrimp metanauplii. Itallows the selection of potential fractions containing bioactive substances. The crude ethanol extract fractionation was performed by acid-base extraction using flash chromatography and detected by HPLC-PDA. Phytochemical screening of the fractions with reagents enables detection of alkaloids from chloroform fractions (ACF and ACF-CI-CII) and isolation of the major aporphine alkaloid norstephalagine (NOR). Its identification was performed by spectrometric methods such as UV, IR, 1H NMR and 13C NMR, DEPT 135, contour maps COSY, HSQC, HMBC and NOESY. It was developed and validated an HPLC-PDA methodology for quantification of NOR in nanoemulsions, assessed by linearity, precision, accuracy, selectivity and limits of quantification and detection determination of the method. Nanoemulsions containing NOR were developed and presented suitable size distribution and surface charge (-50mV) between 0,1 e 1,0 mg/mL. Encapsulation efficiency was 22,0; 45,6 e 44,9% for the concentrations of 1.0; 2.0 e 5.0 mg/mL respectively. NE-NOR at 0,1 e 0,5 mg/mL had shown good stability following 9 months in all physicochemical parameters evaluated. The hemolytic activity of NOR was lower than 10% at concentrations of 0.5 e 2.0 μg/mL. The antimalarial activity of alkaloid in mice infected with Plasmodium berghei NK65 was also performed. In 4th and 7th days pos-infection, the parasitemia of mice decreased in the range of 70 and 80% for the tested groups, similarly with chloroquine group (90%). The NOR nanoemulsified treated group showed prolonged effect of alkaloid on parasitemia reduction, indicating the maintenance of activity when this substance was associated to nanostructures.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Tecnologia, Departamento de Engenharia Florestal, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-09-24T21:52:57Z No. of bitstreams: 1 2018_AlexandreCesarPalermo.pdf: 7779427 bytes, checksum: 91804ca8b5c55be16b216ae3fdeba60a (MD5) / Approved for entry into archive by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-09-25T19:41:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_AlexandreCesarPalermo.pdf: 7779427 bytes, checksum: 91804ca8b5c55be16b216ae3fdeba60a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-25T19:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_AlexandreCesarPalermo.pdf: 7779427 bytes, checksum: 91804ca8b5c55be16b216ae3fdeba60a (MD5) Previous issue date: 2018-09-19 / O mosaico vegetacional do Cerrado possui composição florística única para cada área observada. Além disso, com a presente redução da cobertura vegetal do Cerrado, diversas espécies arbóreas têm suas áreas de ocorrência diminuídas e como consequência perdem parte de sua diversidade genética. Nesse aspecto, a espécie Annona crassiflora que possui importância econômica e social sofre com a redução de sua área de ocorrência, polinização e dispersão deficientes e consequente perda de diversidade genética. O objetivo deste trabalho foi avaliar diferenças nos padrões espaciais de Annona crassiflora em quatro populações do Brasil Central, investigar a diversidade genética populacional de Annona crassiflora por meio de dados morfométricos de frutos e sementes e simular uma seleção genética por meio de parâmetros de variância por usando o programa Selegen-REML/BLUP. Os padrões de distribuição foram relacionados com o grau de antropização das áreas mostrando efeitos negativos da degradação nas populações estudadas. O aumento da endogamia gerado pela degradação culmina na redução da diversidade genética da população. De forma geral as maiores dimensões foram encontradas nas populações de Planaltina e Buritis. Diante disso as análises indicam alta diversidade genética e frutos/sementes com dimensões maiores nos locais com melhor estado de conservação. Tanto a análise de variância quanto a análise de deviance empregadas mostraram grande diversidade genética interpopulacional que se refletiu no dendrograma obtido onde as matrizes formaram oito grupos distintos. A simulação de seleção das populações mostrou que as populações FAL, Planaltina e Buritis são as mais proeminentes e que não há um predomínio de uma população na simulação. Assim, a estratégia de seleção a ser utilizada deve levar em consideração esse cenário. / The Cerrado vegetative mosaic has a unique floristic composition for each area observed. In addition, with the present reduction of the vegetation cover of the Cerrado, several tree species have their areas of occurrence diminished and as a consequence they lose part of their genetic diversity. In this aspect, the species Annona crassiflora that has economic and social importance suffers with the reduction of its area of occurrence, pollination and dispersion deficient and consequent loss of genetic diversity. The objective of this work was to evaluate differences in the spatial patterns of Annona crassiflora in four populations of Central Brazil, to investigate the population genetic diversity of Annona crassiflora by means of morphometric data of fruits and seeds and to simulate a genetic selection by means of variance parameters by using the Selegen-REML / BLUP program. The distribution patterns were related to the degree of anthropization of the areas showing negative effects of the degradation in the populations studied. The increase in inbreeding generated by the degradation culminates in the reduction of the genetic diversity of the population. In general, the largest dimensions were found in the populations of Planaltina and Buritis. Therefore, the analyzes indicate high genetic diversity and fruits / seeds with larger dimensions in the best preserved state. Both the analysis of variance and the deviance analysis employed showed great interpopulational genetic diversity that was reflected in the dendrogram obtained where the matrices formed eight distinct groups. The simulation of population selection showed that the FAL, Planaltina and Buritis populations are the most prominent and that there is no predominance of a population in the simulation. Thus, the selection strategy to be used must take into account this scenario.

A Annona crassiflora Mart. é uma espécie frutífera nativa do cerrado que possui alto potencial de uso e ampla distribuição. O presente trabalho tem os seguintes objetivos: identificar e quantificar aminoácidos livres, carboidratos solúveis e ácidos graxos da polpa e das sementes, visando ampliar os conhecimentos sobre potencial econômico de A. crassiflora; avaliar qual o nível de variações quantitativas e qualitativas de alcalóides de A. crassiflora de amostras provenientes de diferentes regiões do cerrado; avaliar qual a magnitude da diversidade genética entre diferentes populações de A. crassiflora, utilizando marcadores isoenzimáticos. Com relação às propriedades nutricionais, as análises de aminoácidos livres, carboidratos e lipídeos foram feitas por CLAE/F, por CLAE/CTI - DPA e por CG/EM, respectivamente. O teor total de aminoácidos livres na polpa variou de 1101,99 g/g a 1975,7 g/g de massa seca, enquanto nas sementes variou de 636,3 &#956;g/g a 17.445,83 &#956;g/g de massa seca. A glutamina foi majoritária em todas as amostras. O teor total dos carboidratos solúveis da polpa variou de 11,5 g/100g a 17,03 g/100g e das sementes variou de 13,69 g/100g a 40,47 g/100g de matéria seca. Foram detectadas a frutose, a glicose e a sacarose em todas as amostras de polpa e de sementes. A quantidade de lipídeos totais da polpa variou de 7g/100g a 16,2 g/100g de massa seca e das sementes variou de 34,36 g/100g a 35,98 g/100g de massa seca. O ácido oléico e/ou petroselínico (18:1) foram majoritários em todas as amostras de polpa e de sementes de diferentes origens geográficas. Certamente os dados obtidos permitiram ampliar os conhecimentos sobre potencial de aproveitamento dessa espécie. Para avaliar a magnitude da variação dos alcalóides das folhas de A. crassiflora, a quantificação e identificação dos alcalóides foram feitas, respectivamente, por CG/FID e CG/EM. Foi verificado que o teor total de alcalóides variou de 221,1 ± 17,14 &#956;g/g a 2986,89 ± 367,1 &#956;g/g de massa seca. Foram identificados os alcalóides anonaína, anoretina, romucosina e xilopina que mostraram diferenças entre as regiões. Essa variação na concentração e no perfil alcaloídico das populações de A. crassiflora sugere ampla plasticidade fenotípica desses metabólitos em resposta a fatores bióticos e/ou abióticos, além de alta variabilidade genética relacionada à expressão dos genes envolvidos na biossíntese desses metabólitos. A avaliação da estrutura genética foi feita através da análise isoenzimática. Os dados isoenzimáticos mostraram baixa variabilidade genética. Duas hipóteses são apontadas para explicar o baixo nível de polimorfismos verificado em A. crassiflora, uma delas relacionada à técnica e outra relacionada ao próprio processo de degradação do ambiente. Diante do exposto, os dados obtidos no presente trabalho sugerem formas de agregar mais valor econômico e ecológico à A. crassiflora e podem proporcionar uma base para o uso mais eficiente e racional dos recursos dessa espécie, contribuindo para exploração sustentável do cerrado, o que permite também o desenvolvimento de comunidades locais. / Annona crassiflora Mart. is a native fruit tree species from the cerrado, possessing high use potential and a wide distribution. The proposed aims were to identify and quantify free amino acids, free sugars and fatty acids in the pulp and seeds of this plant, with a view to widening knowledge on economical potentiality, as well as to evaluate the level of alkaloid quantitative and qualitative variation in samples coming from different regions of the cerrado, and finally define the size of genetic diversity among these different populations by using isoenzymatic markers. As to nutritional properties, analyses of free amino acids, free sugars and fatty acids were undertaken with, respectively, CLAE/F, CLAE/CTI DPA and CG/MS. The total rate of free amino acids in the pulp varied from 1101,99 ug/g to 1975,7 ug/g of dry mass, whereas in the seeds this variation was from 636,3 &#956;g/g to 17.445,83 &#956;g/g. Glutamin was preponderant in all the samples. Total free sugar rate in pulp varied from 11,5 g/100g to 17,03 g/100g and in seeds from 13,69 g/100g to 40,47 g/100g of dry matter. Fructose, glucose and sacarose was detected in all samples. The amount of total lipids in pulp varied from 7 g/100g to 16,2 g/100g of dry weight and in seeds from 34,36 g/100g to 35,98 g/100g. Oleic and/or petroselinic acids (18:1) were the most abundant in all pulp and seed samples from the different geographic regions. The obtained results certainly permit widening knowledge on the potentiality for use of this plant species. In order to evaluate the size of alkaloid variation in A. crassiflora leaves, alkaloid quantification and identification was done with, respectively, CG/FID and and CG/EIMS. It was noted that the total alkaloid rate varied from 221,1 ± 17,14 ug/g to 2986,89 ± 367,1 &#956;g/g of dry mass. The alkaloids anonain, anoretin, romucosin and xilopin were identified, these showing differences among regions. This variation in alkaloid concentration and profile in A. crassiflora populations suggests the wide phenotypic plasticity of these metabolites in response to biotic and/or abiotic factors, besides high genetic variability related to gene expression of those involved in their biosythesis. Genetic structure evaluation was done through isoenzymatic analysis. Isoenzymatic data revealed low genetic variability. Two hypotheses may be raised to explain this low polymorphism level. The first points to inefficient isoenzymatic techniques in reckoning species genetic diversity, whereas the second takes into consideration that excessive homozygosis (indicated by the low level of isoenzymatic variability) could be an indication of the process of species genetic erosion, possibly related to habitat (cerrado) degradation. In view of this, data obtained in the present study suggest forms of aggregating additional economical and ecological value to A. crassiflora, and could furnish a base for the more efficient and rational use of resources from this species, thus contributing to sustainable exploitation of the cerrado, and also allowing for local community development.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:21:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Felipe Oliveira Gouveia.pdf: 1496399 bytes, checksum: 82b6a1f0233784168bcbca4f78d3660e (MD5) Previous issue date: 2011-06-21 / The spatial genetic structure is the non-random distribution of genotypes within a population as the outcome of gene flow, genetic drift and selection. Annona crassiflora (Annonaceae) is a hermaphroditic tree. Pollination is entomophilous, being carried by beetles of the genus Cyclocephala (Scarabeidae). Seed dispersal is zoochorous mainly done by Tapirus terrestris. This study aimed to compare the genetic diversity and spatial genetic structure in two populations of Annona crassiflora, one in a conserved area and other in a disturbed area. We analyzed 97 plants from a population at the Ecological Station of Águas Emendadas (ESECAE) in the Federal District (conserved area) and 87 plants in Padre Bernardo (PBE), Goiás (disturbed area), based on eight microsatellite loci developed for the species. PCR products were electrophoresed in ABI3100 automatic DNA sequencer to obtain the genotypes. For a total of eight loci, the number of alleles ranged from 6 to 23 with an average of 15,75 alleles per locus.The allelic richness per population was larger in ESECAE population than PBE population. Expected and observed heterozygosity values were 0,614±0,145 and 0,499±0,181, significant f values were found for PBE, showing nonrandom mating. In ESECAE population expected and observed heterozygosity values were 0,746±0,134 and 0,723±0,173 and f value were not significant, suggesting random mating, the allele frequencies are following the expected ratios for the Hardy-Weinberg equilibrium (p<0,003). Analysis of spatial genetic structure in ESECAE population, showed little absence of autocorrelation (b=-0,00478; p<0,05 R2 = 0,001, p = 0,0257). In PBE population, autocorrelation analysis showed that kinship is slightly related to the logarithm of distance, showing a gene flow pattern like isolation by distance (b=-0,01958; p<0,05 R² = 0.001, p <0,0001). The significant value of θ (0,239) showed that populations are highly differentiated. Also, under the bottleneck test, a population does not showed up in mutation-drift equilibrium, reveling events of recent bottleneck effects. The study suggests that the species may be highly affected by fragmentation and disturbance of their natural habitats augmenting inbreeding, and leading to high genetic differentiation among populations and significant spatial structure, that may be the outcome of restriction to gene flow. / A estrutura genética espacial é a distribuição não aleatória de genótipos dentro de uma população como o resultado de fluxo gênico, deriva genética e seleção. Annona crassiflora (Annonaceae) é uma árvore hermafrodita e alógama. A sua polinização é do tipo entomófila, sendo realizada por besouros do gênero Cyclocephala (Scarabeidae). A dispersão de sementes é do tipo zoocórica, realizada principalmente por Tapirus terrestris. O objetivo desse estudo foi estudar e comparar a diversidade e a estrutura genética espacial em duas populações de Annona crassiflora, uma em área de conservação e outra em área antropizada. Foram analisadas 97 plantas provenientes de uma população da Estação Ecológica Águas Emendadas (ESECAE) no Distrito Federal e 87 plantas em Padre Bernardo (PBE) em Goiás, com base em oito locos microssatélites desenvolvidos para a espécie. Os produtos de PCR foram submetidos à análise de fragmentos no seqüenciador ABI3100, para obtenção dos genótipos. Para os oito locos analisados, o número total de alelos foi igual a 126, variando entre 6 e 23 com uma média de 15,75 alelos por loco. A riqueza alélica, por população foi maior na população de ESECAE do que na população de PBE. Foram encontrados valores de f significativos para PBE, o que sugere que existe endogamia, ou seja, há cruzamento de indivíduos aparentados dentro dessa população. Na população de ESECAE foi observado valor de f não significativo indicando ausência de endogamia nesta população, ou seja, as freqüências alélicas estão seguindo as proporções esperadas para o equilíbrio de Hardy-Weinberg. A análise de estrutura genética espacial na população de ESECAE revelou uma tendência de pequena magnitude à estruturação genética espacial (b=-0,00478; R2=0,001; p=0,0257).Na população de PBE, a análise de estrutura genética espacial revelou que o coeficiente de parentesco está relacionado com o logaritmo da distância, apresentando um modelo de fluxo gênico de isolamento por distância (b=-0,01958; R² = 0,001; p < 0,0001).O valor global de F foi significativo e igual a 0,309 e o valor de θ apresentou-se alto e significativo (0,239).Foi encontrada uma pequena diferença entre as estimativas de θ e Rst (p=0,064). Sob o teste de bottleneck as populações não se mostraram em equilíbrio Mutação-Deriva. O estudo revela que a fragmentação pode estar influenciando negativamente a dinâmica evolutiva da espécie. A forte endogamia na área fragmentada, alta diferenciação genética entre as populações e estruturação espacial dos indivíduos permite inferir que a conservação da espécie é de extrema importância, pois além do intenso extrativismo, a espécie possui baixas taxas de frutificação e problemas de germinação. Eventos que favorecem ainda mais probabilidade de extinção.

A Annona crassiflora Mart. é uma espécie frutífera nativa do cerrado que possui alto potencial de uso e ampla distribuição. O presente trabalho tem os seguintes objetivos: identificar e quantificar aminoácidos livres, carboidratos solúveis e ácidos graxos da polpa e das sementes, visando ampliar os conhecimentos sobre potencial econômico de A. crassiflora; avaliar qual o nível de variações quantitativas e qualitativas de alcalóides de A. crassiflora de amostras provenientes de diferentes regiões do cerrado; avaliar qual a magnitude da diversidade genética entre diferentes populações de A. crassiflora, utilizando marcadores isoenzimáticos. Com relação às propriedades nutricionais, as análises de aminoácidos livres, carboidratos e lipídeos foram feitas por CLAE/F, por CLAE/CTI - DPA e por CG/EM, respectivamente. O teor total de aminoácidos livres na polpa variou de 1101,99 g/g a 1975,7 g/g de massa seca, enquanto nas sementes variou de 636,3 &#956;g/g a 17.445,83 &#956;g/g de massa seca. A glutamina foi majoritária em todas as amostras. O teor total dos carboidratos solúveis da polpa variou de 11,5 g/100g a 17,03 g/100g e das sementes variou de 13,69 g/100g a 40,47 g/100g de matéria seca. Foram detectadas a frutose, a glicose e a sacarose em todas as amostras de polpa e de sementes. A quantidade de lipídeos totais da polpa variou de 7g/100g a 16,2 g/100g de massa seca e das sementes variou de 34,36 g/100g a 35,98 g/100g de massa seca. O ácido oléico e/ou petroselínico (18:1) foram majoritários em todas as amostras de polpa e de sementes de diferentes origens geográficas. Certamente os dados obtidos permitiram ampliar os conhecimentos sobre potencial de aproveitamento dessa espécie. Para avaliar a magnitude da variação dos alcalóides das folhas de A. crassiflora, a quantificação e identificação dos alcalóides foram feitas, respectivamente, por CG/FID e CG/EM. Foi verificado que o teor total de alcalóides variou de 221,1 ± 17,14 &#956;g/g a 2986,89 ± 367,1 &#956;g/g de massa seca. Foram identificados os alcalóides anonaína, anoretina, romucosina e xilopina que mostraram diferenças entre as regiões. Essa variação na concentração e no perfil alcaloídico das populações de A. crassiflora sugere ampla plasticidade fenotípica desses metabólitos em resposta a fatores bióticos e/ou abióticos, além de alta variabilidade genética relacionada à expressão dos genes envolvidos na biossíntese desses metabólitos. A avaliação da estrutura genética foi feita através da análise isoenzimática. Os dados isoenzimáticos mostraram baixa variabilidade genética. Duas hipóteses são apontadas para explicar o baixo nível de polimorfismos verificado em A. crassiflora, uma delas relacionada à técnica e outra relacionada ao próprio processo de degradação do ambiente. Diante do exposto, os dados obtidos no presente trabalho sugerem formas de agregar mais valor econômico e ecológico à A. crassiflora e podem proporcionar uma base para o uso mais eficiente e racional dos recursos dessa espécie, contribuindo para exploração sustentável do cerrado, o que permite também o desenvolvimento de comunidades locais. / Annona crassiflora Mart. is a native fruit tree species from the cerrado, possessing high use potential and a wide distribution. The proposed aims were to identify and quantify free amino acids, free sugars and fatty acids in the pulp and seeds of this plant, with a view to widening knowledge on economical potentiality, as well as to evaluate the level of alkaloid quantitative and qualitative variation in samples coming from different regions of the cerrado, and finally define the size of genetic diversity among these different populations by using isoenzymatic markers. As to nutritional properties, analyses of free amino acids, free sugars and fatty acids were undertaken with, respectively, CLAE/F, CLAE/CTI DPA and CG/MS. The total rate of free amino acids in the pulp varied from 1101,99 ug/g to 1975,7 ug/g of dry mass, whereas in the seeds this variation was from 636,3 &#956;g/g to 17.445,83 &#956;g/g. Glutamin was preponderant in all the samples. Total free sugar rate in pulp varied from 11,5 g/100g to 17,03 g/100g and in seeds from 13,69 g/100g to 40,47 g/100g of dry matter. Fructose, glucose and sacarose was detected in all samples. The amount of total lipids in pulp varied from 7 g/100g to 16,2 g/100g of dry weight and in seeds from 34,36 g/100g to 35,98 g/100g. Oleic and/or petroselinic acids (18:1) were the most abundant in all pulp and seed samples from the different geographic regions. The obtained results certainly permit widening knowledge on the potentiality for use of this plant species. In order to evaluate the size of alkaloid variation in A. crassiflora leaves, alkaloid quantification and identification was done with, respectively, CG/FID and and CG/EIMS. It was noted that the total alkaloid rate varied from 221,1 ± 17,14 ug/g to 2986,89 ± 367,1 &#956;g/g of dry mass. The alkaloids anonain, anoretin, romucosin and xilopin were identified, these showing differences among regions. This variation in alkaloid concentration and profile in A. crassiflora populations suggests the wide phenotypic plasticity of these metabolites in response to biotic and/or abiotic factors, besides high genetic variability related to gene expression of those involved in their biosythesis. Genetic structure evaluation was done through isoenzymatic analysis. Isoenzymatic data revealed low genetic variability. Two hypotheses may be raised to explain this low polymorphism level. The first points to inefficient isoenzymatic techniques in reckoning species genetic diversity, whereas the second takes into consideration that excessive homozygosis (indicated by the low level of isoenzymatic variability) could be an indication of the process of species genetic erosion, possibly related to habitat (cerrado) degradation. In view of this, data obtained in the present study suggest forms of aggregating additional economical and ecological value to A. crassiflora, and could furnish a base for the more efficient and rational use of resources from this species, thus contributing to sustainable exploitation of the cerrado, and also allowing for local community development.

The aim of the study was to evaluate the antimicrobial activity of the etanolic extract of the Annona crassiflora Mart., against the microrganisms of the endodontic microflora, aerobic, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, fungi, Candida albicans and anaerobes, Prevotela melanogenicus, Clostridium sp., and Bacteroides fragilis. The methodology used involved the preparation of the etanolic extract, the liquid-liquid parttion and cromatographic purification using G 60 silica gel, silica gel with 10% of KOH and activated silica gel and LH-20 Sephadex. Procedure of purification was followed by antimicrobial activity bioassay. The identification of chemical compounds from the active fractions of the A. crassiflora were made using the espectroscopic method of magnetic resonance of 1H and 13C. The antimicrobial assay activity, for the aerobic microrganisms, E. faecalis, P. aeruginosa and fungi, C. albicans the diffusion method in disc was used. For the anaerobic microrganisms P. melanogenicus, Costridium sp., and B. fragillis the the diffusion method in broth tioglicolato was used. Also the minimun inibitory concentration (MIC) of the active fractions from the wood, bark and stem extracts of the A. crassiflora were determined and compare with the minimum inibitory concentratioon (MIC) of the standards drugs (Fluconazol, Ofloxacin, Metronidazole) and Calcium Hidroxyde used in this study. The antimicrobial evaluation tests demonstrated that the fractions of bark and wood ethanolic extracts the A. crassiflora Mart., did not present antimicrobial activity against the E. faecalis, however, presented positive activity but presented antimicrobial activity against the P. aeruginosa and the C. albicans. This study also demonstrated that the bark and stem fractions of the ethanolic extracts of the Annona crassiflora Mart., presented antimicrobial activity against the P melanogenicus, Clostridium sp., and B. fragilis, however bigger expectrum antimicrobial activity was for the Clostridium sp. Of the active fractions of the extract of the A.crassiflora Mart., A6, A10, A11 and A13 were gotten the acetogenin Goniodonin that presented in the samples A11 and A13 a CIM=1000μg/mL for C. albicans and Clostridium sp, CIM=2000μg/mL for P. aeruginosa and B. fragilis and CIM>2000μg/mL for P. melanogeniccus while in the samples A6 and A10 μg/mL for C presented a CIM=2000. albicans, P. aeruginosa and B. fragilis, CIM>2000μg/mL para P. melanogenica and CIM=62μg/mL. The samples A3, A7 and A12 had presented one expectro of similar RMN of the acetogenins without the presence of the lactônico ring and had demonstrated the same antimicrobiana activity for the P.aeruginosa, C. albicans, B. fragilis (MIC=2000μg/mL) and P. melanogeniccus (MIC>2000 μg/mL) while for the Clostidium sp the samples A3 and A7 had presented a MIC=62 μg/mL while a sample A12 had presented a MIC=500 μg/mL). / O objetivo deste estudo foi para avaliar a atividade antimicrobiana do extrato etanólico da Annona crassiflora Mart., frente a microrganismos da microflora endodôntica. Foram utilizados os microrganismos aeróbios, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, fungo Candida albicans e anaeróbios, Prevotella melanogenica, Clostridium sp., e Bacteróides fragilis. A metodologia utilizada envolveu a preparação do extrato etanólico, a partição líquido-líquido e separação por meio de cromatografia em colunas usando como suporte o gel de sílica G 60, gel de sílica G-60 com 10% de KOH e Sephadex LH-20. O procedimento de purificação foi acompanhado pelo bioensaio da atividade antimicrobiana. A identificação dos compostos químicos das frações ativas do extrato da madeira e da casca da raiz da A.crassiflora foi feita pelo uso das técnicas espesctroscópicas de ressonância magnética nuclear de 1H e 13C, IV e UV e espectrometria de massa. No ensaio de atividade antimicrobiana, para os microrganismos aeróbios, P. aeruginosa e E. faecalis e fungo C.albicans, foi adotado o método de difusão em meio sólido pela técnica do disco. Para os microrganismos anaeróbios P. melanogenica, Clostridium sp e B. fragilis foi utilizado o método da difusão em caldo tioglicolato. Também foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) das frações ativas do extrato da madeira e da casca da raiz da Annona crassiflora comparando-se com a concentração inibitória mínima (CIM) das drogas padrões (Fluconazol, Ofloxacina, Metronidazol) e com o Hidróxido de Cálcio utilizadas neste estudo. Os testes de avaliação antimicrobiana demonstraram que as frações do extrato etanólico da casca da raiz e madeira da raiz da A. crassiflora Mart. não apresentaram nenhuma ação antimicrobiana frente ao E. faecalis, entretanto, apresentaram resultado positivo quanto à ação antimicrobiana frente a P. aeruginosa e a C. albicans. Este estudo também demonstrou que as frações do extrato etanólico da casca da raiz e madeira da raiz da A. crassiflora Mart. apresentaram ação antimicrobiana frente à P. melanogenica, Clostridium sp, e B. fragilis, demonstrando ter no entanto maior espectro antimicrobiano para o Clostridium sp. Das frações ativas do extrato da A. crassiflora Mart., A6, A10, A11 e A13 foi obtida a acetogenina Goniodonina que apresentou nas amostras A11 e A13 um CIM=1000μg/mL para C. albicans e Clostridium sp, CIM=2000μg/mL para P. aeruginosa e B. fragilis e CIM>2000μg/mL para P. melanogenica enquanto nas amostras A6 e A10 apresentou um CIM=2000 μg/mL para C. albicans, P. aeruginosa e B. fragilis, CIM>2000μg/mL para P. melanogenica e CIM=62μg/mL. As amostras A3, A7 e A12 apresentaram um espectro de RMN semelhante das acetogeninas sem a presença do anel lactônico e demonstraram a mesma atividade antimicrobiana para a P.aeruginosa, C. albicans, B. fragilis (CIM=2000μg/mL) e para a P. melanogenica (CIM>2000 μg/mL). Para o Clostidium sp as amostras A3 e A7 apresentaram CIM=62 μg/mL enquanto a amostra A12 apresentou um CIM =500μg/mL.

Considerando o grave quadro das doenças negligenciadas, no Brasil e no mundo, e as limitações do tratamento empregado, na atualidade, torna-se urgente a pesquisa de novos fármacos, que sejam mais ativos e seguros. Para tanto, a busca de moléculas-protótipo, a partir de espécies vegetais, tem sido importante estratégia. Neste contexto, foi realizado o estudo de Annona crassiflora Mart. (Annonaceae), cujos alcalóides totais (AT) demonstraram promissora atividade antiprotozoária in vitro, em estudo anterior. Em paralelo, outras espécies de Annona mostraram atividade antimicobacteriana in vitro, igualmente, tendo motivado o presente estudo. Cinco das vinte frações alcaloídicas obtidas, por cromatografia em coluna, a partir dos AT das folhas, apresentaram atividade anti-Leishmania in vitro, tendo causado 100% de morte das formas promastigotas de Leishmania (L.) infantum chagasi. Além disto, três delas foram ativas frente ao Mycobacterium tuberculosis. O isolamento de dois alcalóides noraporfínicos foi realizado, por fracionamento biomonitorado em coluna cromatográfica, seguido de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) semipreparativa. As estruturas dos compostos isolados foram elucidadas empregando-se as análises espectroscópicas de ressonância magnética nuclear, mono e bidimensionais, e por CLAE acoplada à espectrometria de massas (CLAEIES-EM2). Um dos alcalóides foi identificado pela primeira vez, nesta espécie, sendo que o outro apresentou estrutura inédita. Ambos demonstraram significativa atividade anti-Leishmania in vitro (CE50&#8804; 10 &#181; g/ mL) frente às formas promastigotas de L. (L.) infantum chagasi [MHOM/BR/1972/LD]. O primeiro teve maior índice de seletividade (IS: 7,4), em relação à citotoxicidade em células do tecido conjuntivo NCTC Clone 929 de camundongos. Frente ao Mycobacterium tuberculosis (ATCC 27294) e ao M. smegmatis (ATCC 35798), os alcalóides isolados foram inativos (CIM &#8805; 128 &#181;g/ mL). O óleo volátil das folhas foi analisado por cromatografia gasosa acoplada à espectroscopia de massas (CG-EM), tendo sido identificados 41 constituintes, prevalecendo os sesquiterpenos (81,7%) em relação aos monoterpenos (0,8%). Entre os compostos majoritários encontrados no óleo, citam-se os sesquiterpenos &#945;-amorfeno (43,6%), E-cariofileno (17,7%) e o germacreno (5,3%). Nos testes de atividade anti-Leishmania in vitro frente às formas promastigotas de quatro espécies do parasita, o óleo foi mais ativo em L. (L.) infantum chagasi (CE50: 25,97 &#181;g/ mL). Nas formas tripomastigotas do Trypanosoma cruzi mostrou atividade 8,5 vezes superior àquela do fármaco-padrão benznidazol (CE50: 5,31 &#181;g/ mL). Os resultados obtidos ratificaram a importância da prospecção da flora, em particular de A. crassiflora, como fonte potencial de compostos bioativos, que venham a constituir novos fármacos, como alternativa à restrita terapêutica existente para o tratamento das doenças negligenciadas. / Neglected diseases are a serious health problem in Brazil and worldwide. The available drugs are limited in effectiveness with a high toxicity. There is an urgent need of more safe and bioactive compounds. The search of new molecules from plant species is a well known and important strategy to achieve this goal. In a previous work, Annona crassiflora Mart. (Annonaceae) showed a promising antiprotozoal activity. Beside this, other Annona species presented an interesting antimicobacterial action. In this bio-guided study, after the column fractionation of the leaves total alkaloids, in vitro tests were performed and five from twenty fractions were highly active (100% deaths) against promastigotes of Leishmania (L.) infantum chagasi, and only three were active against Mycobacterium tuberculosis. After purification of the bioactive fractions, two noraporphine alkaloids were isolated by HPLC and identified by the usual mono and bidimensional spectroscopic techniques. One of them was isolated from the first time from this species. The other one is a novel chemical entity. Both compounds presented anti- Leishmania activity (CE50 &#8804; 10 &#181;g/ mL) against L. (L.) infantum chagasi [MHOM/BR/1972/LD]. The first one showed a higher selectivity index (SI: 7.4) considering its mice connective tissue cells toxicity [NCTC Clone 929]. However, both were inactive against Mycobacterium tuberculosis (ATCC 27294) and M. smegmatis (ATCC 35798) (CIM &#8805; 128 &#181;g/ mL). In the leaves volatile oil 41 compounds were identified. The sesquiterpenes were in majority (81.7%), followed by monoterpenes (0.8%). The sesquiterpenes &#945;-amorphene (43.6%), E-caryophyllene (17.7%) and germacrene (5.3%) were the main constituents. The oil was little effective against the four tested Leishmania species and slightly more active against L. (L.) infantum chagasi (CE50: 25.97 &#181;g/ mL). However, it was highly active against the trypomastigotes of Trypanosoma cruzi (CE50: 5.31 &#181;g/ mL) showing to be 8.5 times more active than benznidazol. These results stimulate a deeper investigation of those alkaloids as antiprotozoal agents, confirming the importance of the plant species metabolites as a source of new bioactive molecules and their potential as future drugs.