Orientador: José Antônio Dell'Aqua Júnior / Resumo: O espermatozoide exige um fornecimento constante de energia para a manutenção de suas funções celulares e quando desafiado por processos de criopreservação do sêmen, sofrem danos irreversíveis. Para o desenvolvimento de técnicas que visam o aumento da longevidade espermática, é necessário considerar que mesmo em metabolismo basal, o espermatozoide necessita de substratos para garantir sua motilidade e poder fecundante após a ejaculação. Para atender suas demandas energéticas, estudos recomendam o uso de nutrientes exógenos, como o piruvato de sódio e a coenzima Q10 (CoQ10), substratos fundamentais na bioenergética celular. Visto a importância da refrigeração de sêmen em garanhões e o potencial destas substâncias em melhorar os parâmetros seminais atuando como substrato energético e antioxidante, respectivamente, o presente trabalho tem por objetivo abordar aspectos relacionados ao metabolismo espermático, bem como o papel do piruvato e CoQ10 visando minimizar os efeitos deletérios da refrigeração sobre a qualidade do sêmen equino. Foram adicionadas diferentes concentrações de piruvato de sódio e da CoQ10 ao sêmen de garanhões considerados “good coolers” (GC) e “bad coolers” (BC). Primeiramente, foram estabelecidas as concentrações mais eficazes de piruvato e CoQ10 no diluente de refrigeração BotuSêmen® (Botupharma Botucatu/SP Brasil) para preservar os parâmetros espermáticos na refrigeração a 5° C por até 48 horas. Foi utilizado 1 ejaculado de 25 garanhões das raças Quarto de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The spermatozoa require a constant supply of energy for the maintenance of their cellular functions and when challenged by processes of cryopreservation of the semen, they suffer irreversible damages. For the development of techniques that aim to increase sperm longevity, it is necessary to consider that even in basal metabolism, the spermatozoa require substrate to ensure their motility and fertilizing power after ejaculation. To attend their energy demands, studies recommend the use of exogenous nutrients, such as sodium pyruvate and coenzyme Q10 (CoQ10), key substrates in cellular bioenergetics. Considering the importance of semen cooling in stallions and the potential of these substances to improve seminal parameters acting as an energetic and antioxidant substrate, this review aims to address aspects related to cooling, as well as the role of sodium pyruvate and CoQ10 in minimizing the effects of cooling on the quality of equine semen. Different concentrations of sodium pyruvate and CoQ10 have been added to semen from good coolers (GC) and bad coolers (BC). First, the most effective concentrations of sodium pyruvate and CoQ10 in the BotuSêmen® extender (Botupharma Botucatu / SP Brazil) were established to preserve the sperm parameters at 5°C for up to 48 hours. Each ejaculate was split into 7 treatments, with sodium pyruvate and CoQ10 being added at concentrations of 1 mmol/l (P1), 2 mmol/l (P2), 3 mmol/l sodium pyruvate (P3), 25 µmol/l (Q25), 50 µmol/l (Q50) and 75 µmol... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A preservação e o armazenamento de células e tecidos têm sido utilizados largamente em pesquisa científica e aplicações clínicas. No entanto, há uma aparente contradição entre o conceito de preservaão e as conclusões baseadas em resultados experimentais que materiais biológicos criopreservados podem ser danificados pelo próprio processo de preservação. A compreensão do processo de solidificação de soluções salinas é fundamental para a proposição de novos protocolos de criopreservação. No presente estudo, o congelamento de uma solução de cloreto de sódio a 1% em massa é simulado. As equações de conservação de massa, momentum, energia, e espécies químicas foram discretizadas e resolvidas numericamente utilizando-se o método dos volumes de controle para um domínio bidimensional que contém a parede da bolsa plástica e a solução salina. A perda de água da célula foi calculada a partir da história de temperatura e concentração durante o processo de solidificação e verificou-se que, dependendo da posição inicial da célula na bolsa, a célula tem probabilidades diferentes de sobreviver durante o processo.

A preservação e o armazenamento de células e tecidos têm sido utilizados largamente em pesquisa científica e aplicações clínicas. No entanto, há uma aparente contradição entre o conceito de preservaão e as conclusões baseadas em resultados experimentais que materiais biológicos criopreservados podem ser danificados pelo próprio processo de preservação. A compreensão do processo de solidificação de soluções salinas é fundamental para a proposição de novos protocolos de criopreservação. No presente estudo, o congelamento de uma solução de cloreto de sódio a 1% em massa é simulado. As equações de conservação de massa, momentum, energia, e espécies químicas foram discretizadas e resolvidas numericamente utilizando-se o método dos volumes de controle para um domínio bidimensional que contém a parede da bolsa plástica e a solução salina. A perda de água da célula foi calculada a partir da história de temperatura e concentração durante o processo de solidificação e verificou-se que, dependendo da posição inicial da célula na bolsa, a célula tem probabilidades diferentes de sobreviver durante o processo.

Resumo não disponível.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-07T17:20:00Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1688152 bytes, checksum: dea3857aba803e685276552e0efbb3a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T17:20:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1688152 bytes, checksum: dea3857aba803e685276552e0efbb3a4 (MD5) Previous issue date: 2000-07-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudou-se criopreservação do sêmen canino, utilizando dois diluidores e dois protocolos de resfriamento do sêmen, para avaliar o efeito desses sobre a qualidade espermática in vitro, após a congelação/descongelação. Os meios diluidores utilizados foram o Tris-citrato e o Tes-Tris e os procedimentos de resfriamento foram realizados em um congelador de células digital e em caixa de isopor. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal - DVT-UFV, utilizando-se três machos, submetidos a uma coleta de sêmen por semana, durante cinco semanas, totalizando quinze amostras, em cada delineamento experimental. Os testes in vitro aplicados às amostras de sêmen foram os de: avaliação da motilidade espermática progressiva, vigor espermático, avaliação da integridade da membrana plasmática e do acrossoma, por meio dos testes hipo-osmótico (HOS-T) e câmara úmida, respectivamente e avaliação da longevidade espermática, por meio do teste de termo-resistência rápido (TTR). A análise comparativa entre os meios diluidores evidenciou que o meio diluidor Tris-citrato foi superior (P<0,05) ao meio Tes-Tris, por ter obtido nos resultados de todos os testes in vitro, valores em torno de 15% mais altos. Concluiu-se, portanto, que o Tris-citrato foi mais eficiente em conservar a qualidade espermática, por ter mantido viável uma maior porcentagem de espermatozóides, após a criopreservação. Houve correlação positiva entre vários testes, indicando coerência entre os resultados. A análise comparativa dos protocolos de resfriamento demonstrou que não houve diferença (P>0,05) entre a caixa de isopor e o biocool, logo após o resfriamento. Após a descongelação, os resultados demonstraram que houve igualdade entre os protocolos quanto ao vigor espermático, ao HOS-T e a condição de acrossoma, havendo diferença (P<0,05) apenas na motilidade espermática após a descongelação e durante o teste de termo-resistência, que foram superiores quando o sêmen foi resfriado na caixa de isopor. A curva de resfriamento na caixa de isopor foi de, aproximadamente, -0,45°C/min. e no biocool de -0,55°C/ min., porém, na caixa de isopor a queda de temperatura não foi constante durante os 60 minutos do resfriamento, sendo que nos primeiros dez minutos a temperatura diminuiu 13°C. Parece que o perfil dessa curva favoreceu a manutenção das reservas energéticas dos espermatozóides, por terem tido seu metabolismo mais rapidamente diminuído. Os resultados dos testes para ambos os diluidores e ambos protocolos de resfriamento são compatíveis com os considerados normais para o sêmen criopreservado na espécie canina. / A study on different extenders and cooling systems on the canine semen was taken, in order to evaluate the effects on in vitro characteristics of cryopreserved spermatozoa. The extenders studied were Tris-citrate and Tes-Tris and the cooling systems were accomplished in a programmable cells freezer and in a polystyrene container. The experiment took place at the Animal s Reproduction Laboratory-DVT-UFV, where three stud dogs were collected weekly for five weeks for each experiment protocol. The in vitro evaluations applied to the semen samples were sperm motility and forward progression, plasm membrane and acrosome integrity, through hypo-osmotic swelling test and phase contrast microscopy, respectively and semen longevity, through the thermo resistance test. A comparative analysis between the extenders has showed that Tris-citrate was superior (P<0,05) to Tes-Tris because the results of all the in vitro evaluations after cryopreservation were 15% higher for the first compared to the second extender. It was concluded, therefore, that Tris-citrate was more xivefficient in preserving spermatozoa quality because it has maintained the viability of a larger percentage of them, after cryopreservation. The results of the tests are in agreement with the standard values for the freezing semen in dogs and there was also positive correlation among several semen evaluations, showing relationship among the results. The comparative analysis of the cooling systems has showed that there was no difference (P>0,05) between the programmable freezer and the polystyrene container, immediately after cooling and equilibration time. However, after freezing and thawing the results of forward progression, HOS-T and acrosome integrity was equal for both cooling systems but the motility and thermo resistance test was better (P<0,05) at polystyrene container. The cooling rate at this system was approximately -0,45°C/min. and at the programmable freezer was -0,55°C/ min.. The temperature fall was not constant at the polystyrene container and dropped faster on the beginning of the cooling time, it seems that this cooling rate at the polystyrene container favored the maintenance of spermatozoa energy sources. The tests results for both procedures were close to the standard values for the freezing semen in dogs.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-08-04T10:14:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520639 bytes, checksum: dc14b395e24975ee7ac9955dbe0f97bd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-04T10:14:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 520639 bytes, checksum: dc14b395e24975ee7ac9955dbe0f97bd (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se neste estudo verificar se a melatonina influencia a integridade estrutural da membrana plasmática, o acrosssoma, a produção de peróxido de hidrogênio e atividade mitocondrial dos espermatozoides caprinos criopreservados, bem como, verificar o potencial uso deste antioxidante em meio diluente comercial para criopreservação de sêmen. Foram utilizados dois machos adultos da raça Alpina e dois da raça Saanen. Foi utilizada vagina artificial obtendo-se sete ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se a avaliação das características por meio de testes complementares. Em seguida, o sêmen foi diluído com os seguintes tratamentos: Botubov ® (T 1 ), Botubov ® + 1μM (T 2 ), Botubov ® + 1 mM Melatonina (T 3 ), Botubov ® + 2 mM Melatonina (T 4 ), Botubov ® + 3 mM Melatonina (T 5 ) e Botubov ® + 4 mM Melatonina (T 6 ). Em seguida foram avaliados a motilidade progressiva e vigor espermático. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL, que foram resfriadas a 5oC, durante três horas. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio durante 15 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento final do sêmen. As partidas foram descongeladas em banho-maria a 37°C por 30 segundos, acondicionadas em microtubos e homogeneizadas para as análises de motilidade e vigor espermáticos, teste de termorresistência e citometria de fluxo. No sêmen fresco, as características de motilidade e vigor mantiveram-se dentro de parâmetros normais. As médias de motilidade e vigor para o sêmen descongelado diferiram entre os tratamentos, para aqueles utilizaram melatonina a partir de 1 e 2mM, principalmente após o descongelamento nos tempos zero e 30 minutos, sendo observado diferenças ao longo de todo TTR (P < 0,05). A análise por citometria de fluxo, para quase todas as características, apresentou diferenças entre o tratamento controle e os demais tratamentos (P < 0,05) quando a concentração de melatonina excedeu valores entre 1 e 2 mM no diluente. Conclui-se que a melatonina, em elevadas concentrações, apresenta resultados insatisfatórios no congelamento de sêmen caprino e que sua adição nas concentrações de 1 μM no diluente não afetou qualquer parâmetro avaliado neste estudo. / The aim of this study was to verify whether melatonin affects the structural integrity of the plasma membrane, acrosssoma, the production of hydrogen peroxide and mitochondrial activity of sperm cryopreserved goats, as well as to investigate the potential use of this antioxidant in commercial diluent for semen cryopreservation. Two adult males of the Alpine race and two Saanen were used. For semen collection was used artificial vagina resulting in seven ejaculations per animal. After collection, made up the evaluation of the characteristics through additional tests. Then, semen was diluted with the following treatments: Botubov® (T1), Botubov® + 1μM (T2), Botubov® + 1 mM Melatonin (T3), Botubov® + 2 mM melatonin (T4), Botubov® + 3 Melatonin mM (T5) and Botubov® + 4 mM Melatonin (T6). They were then evaluated motility and sperm vigor in each treatment. The semen was packaged in 0.25 ml palettes, which were cooled to 5 ° C for three hours. The pre-freezing was performed in liquid nitrogen vapor for 15 minutes. After this period, the palettes were immersed in nitrogen for the final freezing of semen. The palettes were defrosted in a water bath at 37 ° C for 30 seconds, put into microtubes and homogenized for analysis of spermatic motility and vigor, heat resistance test and flow cytometry. In fresh semen, the motility and vigor remained within normal parameters. The average motility and vigor to the defrosted semen differ between treatments to those used melatonin from 1 and 2 mM, especially after defrosting at zero and 30 minutes, and observed differences throughout TTR (P <0, 05). The integrity of the plasma membrane and acrossomal, production of peroxides and sperm mitochondrial activity were assessed by flow cytometry and for almost all the features presented differences between control treatment and other treatments (P <0.05) when the concentration of melatonin exceeded values from 1 and 2 mM in diluent. It is concluded that the addition of melatonin, in high concentrations, shows unsatisfactory results in freezing goat semen and that the addition of melatonin in 1 uM concentrations in the diluent did not affect any of the parameters evaluated in this study.

Resumo não disponível.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_4888_.pdf: 792984 bytes, checksum: 55b49c255f7a7e0cb47a61520b8b1901 (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / O aumento da demanda em reprodução assistida de cães, bem como a crescente preocupação com a preservação de espécies ameaçadas de extinção têm impulsionado as pesquisas com reprodução canina, e o uso do cão como modelo experimental, em muitos casos, é um modelo mais relevante que os tradicionalmente utilizados para humanos. Além disso, a criopreservação de embriões caninos ainda é um desafio para a comunidade científica. Objetivou-se com este estudo avaliar as taxas de reexpansão da blastocele, taxas de eclosão, a viabilidade embrionária pós-descongelação e o desenvolvimento in vitro de blastocistos caninos criopreservados em glicerol 10% (GLI) e em etilenoglicol 1,5M (EG), por congelação lenta. Foram recuperadas 72 estruturas embrionárias e um total de 125 corpos lúteos foram identificados nos ovários, perfazendo uma taxa de recuperação embrionária de 57,6%. As concentrações plasmáticas de progesterona foram de 4,57±3,77 ng/mL no dia 0 (primeira cópula ou inseminação artificial) e 28,56±3,21 ng/mL no dia 12 (dia da colheita dos embriões). Cinquenta e um blastocistos foram separados aleatoriamente em dois grupos, GLI (n=26) e EG (n=25). Cada grupo foi subdividido em três (M0 = avaliação imediatamente após a descongelação, GLI = 9 e EG = 9; M3 = avaliação três dias após a descongelação e cultivo in vitro, GLI = 8 e EG = 8; e M6 = avaliação seis dias após a descongelação e cultivo in vitro, GLI = 9 e EG = 8). A criopreservação dos embriões foi realizada em máquina de congelação programável, em curva de resfriamento decrescente de 0,6°C até a temperatura de -35°C. Imediatamente após a descongelação, os embriões do M0 foram corados com a associação das sondas fluorescentes iodeto de propídeo (125 &#956;g/ml) e Hoechst 33342 (1mg/ml) para avaliação da viabilidade celular; os embriões do M3 e M6 foram descongelados, cultivados in vitro em estufa com umidade saturada e atmosfera de 5% de CO2 em ar a uma temperatura de 38,5ºC, em meio SOFaa acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB), por três e seis dias, respectivamente, e corados de forma similar. A taxa de reexpansão da blastocele após 24h de cultivo in vitro não diferiu (P = 0,6196) entre os grupos GLI (76,5%) e EG (68,8%), respectivamente. Não foi observada eclosão embrionária em ambos os grupos. As taxas de viabilidade embrionária pós-descongelação dos grupos GLI e EG foram de 60,6±9,7 e 64,4±9,9, respectivamente, e não diferiram (P = 0, 8275). Além disso, não foi verificada diferença (P = 0, 3105) na viabilidade embrionária entre os momentos M0 (61,1±11,6%), M3 (50,0±12,4%) e M6 (76,4±12,0%). Conclui-se que a taxa de reexpansão da blastocele pode ser um indicativo de viabilidade embrionária pós-descongelação; que não há eclosão de blastocistos caninos criopreservados em glicerol 10% ou etilenoglicol 1,5M por congelação lenta e cultivados in vitro em meio SOFaa por até 6 dias; que blastocistos caninos criopreservados em glicerol 10% ou etilenoglicol 1,5M, por congelação lenta, apresentam viabilidade similar pós-descongelação e mantêm-se viáveis por até seis dias em cultivo in vitro.

Resumo não disponível.

A preservação e o armazenamento de células e tecidos têm sido utilizados largamente em pesquisa científica e aplicações clínicas. No entanto, há uma aparente contradição entre o conceito de preservaão e as conclusões baseadas em resultados experimentais que materiais biológicos criopreservados podem ser danificados pelo próprio processo de preservação. A compreensão do processo de solidificação de soluções salinas é fundamental para a proposição de novos protocolos de criopreservação. No presente estudo, o congelamento de uma solução de cloreto de sódio a 1% em massa é simulado. As equações de conservação de massa, momentum, energia, e espécies químicas foram discretizadas e resolvidas numericamente utilizando-se o método dos volumes de controle para um domínio bidimensional que contém a parede da bolsa plástica e a solução salina. A perda de água da célula foi calculada a partir da história de temperatura e concentração durante o processo de solidificação e verificou-se que, dependendo da posição inicial da célula na bolsa, a célula tem probabilidades diferentes de sobreviver durante o processo.