Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 210893 bytes, checksum: c6cc2b6809ce21fbf9389200ea196914 (MD5) Previous issue date: 2003-04-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was to evaluate the efficacy of different associations of natural antioxidants in freezing the bovine semen. Eighteen ejaculates from three bulls were used to test the following associations: T1 TRIS egg yolk extender (control group); T2 control + equex; T3 control + Vitamin E + equex; T4 control + Vitamin C; T5 control + Vitamin E + equex and Vitamin C. The ejaculate was equally distributed in five treatments with a final concentration of 1000 x 106 sperm cells/ml and they were envased in 0.5 mL straws. The straws were cooled for five hours and then frozen in liquid N2. The thawing of the samples was made by immersion of the straws in a 370 C water-bath for 30 seconds. Motility, vigor, pathology, longevity and integrity of sperm cells were evaluated by hiposmotic and termoresistance test pre and pos-freezing. There was no difference (P > 0.05) in motility among treatments neither pre nor pos-freezing. In the pos-thawed semen T5 showed the best vigor (3.51; P < 0.05). There was significant (P < 0.05) difference between medium values obtained in T 2, T3, T4, T5 (29.67; 36.55; 31.83; 35.78; respectively) and the value obtained in T1 (control; 25.17). Treatments 2, 3, 4, 5 showed higher values for functional and structural integrity of sperm plasma membrane than showed treatment 1, as observed in the fluorescent test. It may be concluded that the use of antioxidants in bovine semen extender for cryopreservation protects sperm plasma membrane, although it did not increase the sperm motility. / Este estudo teve o objetivo de avaliar a eficácia de diferentes associações de antioxidantes naturais no congelamento de sêmen bovino. Dezoito ejaculados de três touros foram utilizados para testar as seguintes associações dos componentes: T1- meio Tris-gema (controle), T2-controle + equex, T3- controle + vitamina E + equex, T4- controle + vitamina C, T5- controle + vitamina E + equex e vitamina C. O ejaculado foi distribuído igualmente em cinco tratamentos, com concentração final de 100 x 106 espermatozóides por mL, envasados em palhetas de 0,5 mL. Estas palhetas permaneceram resfriadas por cinco horas quando foram congeladas em nitrogênio líquido. O descongelamento foi realizado submergindo as palhetas em banho-maria a 37°C por no mínimo trinta segundos. Os parâmetros de turbilhonamento, motilidade espermática progressiva retilínea, vigor, patologia espermática, longevidade e integridade das células espermáticas pelos testes de termo-resistência e hiposmótico foram avaliados antes e após o congelamento. A motilidade espermática progressiva retilínea não diferiu entre os valores médios observados nos tratamentos nem antes, nem após o congelamento (p>0,05). Já o vigor observado no tratamento 5 foi maior após descongelamento, comparado aos demais grupos experimentais, (3,51; p<0,05). Na avaliação da integridade funcional e estrutural da membrana plasmática dos espermatozóides, os valores médios obtidos nos tratamentos 2, 3, 4 e 5 (29,67, 36,55, 31,83, 35,78%, respectivamente) diferiram favoravelmente aos obtidos no tratamento 1 (controle; 25,17%), com a utilização do teste de fluorescência. Pode-se concluir que a utilização dos antioxidantes no diluente de sêmen bovino para o processo de criopreservação protege a membrana plasmática dos espermatozóides, embora não tenha aumentado a motilidade espermática progressiva retilínea. E que o equex foi eficaz como emulsificador do tocoferol e também protegeu a membrana plasmática quando utilizado sozinho.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 996495 bytes, checksum: d0704166d94adb1ce9c77dd01311d0e5 (MD5) Previous issue date: 2009-02-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objective of this study was evaluate the effectiveness of the Mangalarga Marchador stallions semen diluted with glycine-yolk egg based extender or milk-based extender and cooled at 5 °C for 24 hours, assessed by in vitro tests and of fertility in vivo. In Experiment 1, were used 5 ejaculated of 3 stallions. Following semen collection, the experimental group was divided into two treatments: 1 - cooling and dilution of semen with the milk-based extender, 2 - cooling and dilution of semen with extender glycine-egg yolk based extender. Semen was packaged in samples containing 12 mL of diluted semen with 30 x 106 viable sperm / mL concentration and then stored in Equitainer® for 24 hours. The sperm quality was evaluated after its dilution and after its cooling. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility, spermatic vigor, sperm morphology, integrity of the plasma membrane integrity by supravital test and epifluorescent using the dyes carboxyfluorescein diacetate (CFDA) and propidium iodide (PI); plasma membrane functionality by hypoosmotic test and progressive motility and spermatic vigor during the spermatic thermo-resistance test (TTR) for 90 minutes. The vigor of semen diluted with Kenney was higher (p <0.05) than T2 in the assessment of fresh diluted semen. No statistical difference was observed in other seminal characteristics from the fresh diluted semen. In the cooled semen, the Kenney extender had a better motility and spermatic vigor after the 24 hours storage, but Foote extender had higher average values for reactive spermatozoa percentage to the hypoosmotic test and the viabity to the epifluorescent test (p<0,05). In Experiment 2, the objective was to evaluate the fertility of cooled semen with both extenders previously described. Seventeen semen samples of stallion 1 and twenty three samples of stallion 2 were collected. Following semen collection, the semen was diluted with two extenders used in Experiment 1, and adjusted to an insemination dose of 500 million viable sperm in a final volume of 15 mL per dose. Semen was packaged in Equitainer® and cooled down to 5° C and storage for at least 24 hours. The following seminal characteristics were evaluated: progressive motility and vigor of the diluted and cooled semen; the sperm morphology of fresh semen and cooled with both extenders. Thirty one estrous cycles of 26 mares were used in the first period and 43 cycles of 28 mares in the second period. After detection 30 mm follicle size, the mares were randomly assigned into two groups: group A (mares inseminated with semen cooled with Kenney extender) and group B (mares inseminated with semen cooled with dilutive Foote). The stallions semen were used randomly among mares. The inseminations were done after a period of at least 24 hours of storage at 5° C. Semen was deposited in the body uterus, after the detection of a 30-40 mm follicle detection throughout ovulation. The inseminations were performed only on fixed days (Tuesday, Thursday and Saturday). The pregnancy diagnosis was performed by transrectal ultrasonography. As results, Kenney extender had higher progressive motility and spermatic vigor maintance after cooling compared to T2 extender. The pregnancy rate was higher from treatment A than treatment B (p<0,05), 55,26% (21/38) and 30,56% (11/36), respectively. With this data, it is possible to conclude that: the integrity and functionality of sperm cell plasma membrane evaluation tests are considered ancillary assessments in predicting the reproductive potential of stallions, but are not yet conclusive. The glycine-egg yolk based extender was not effective in preserving the seminal characteristics, and its fertility rate was not acceptable. The milk based extender proposed by Kenney et al. (1975) is still an excellent option for use in programs of AI with cooled semen from Mangalarga Marchador breed. / Objetivou-se neste estudo avaliar a eficácia de dois diluidores um à base de licina-gema de ovo e outro à base de leite em pó resfriado a 5 °C por 24 horas na preservação do sêmen de garanhões da raça Mangalarga Marchador, determinada por meio de testes in vitro e avaliação da fertilidade in vivo. No experimento 1, foram utilizados cinco ejaculados de três garanhões da raça Mangalarga Marchador, que foram divididos em dois tratamentos: Kenney - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor à base de leite (Kenney et al., 1975); Foote - diluição e resfriamento do sêmen com diluidor de glicina-gema de ovo (Foote, 2002). Amostras de 12 mL de sêmen foram diluídas numa concentração de 30 x 106 espermatozoides viáveis/mL e, depois, armazenadas em Equitainer® por 24 horas. A qualidade seminal foi avaliada após diluição e resfriamento do sêmen. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva; vigor espermático; morfologia espermática; integridade da membrana plasmática pelo teste supravital e da epifluorescência utilizando os corantes diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídeo; funcionalidade da membrana plasmática pelo teste hiposmótico; e motilidade progressiva e vigor espermáticos durante o teste de termorresistência por 90 minutos. O vigor espermático do sêmen diluído com Kenney foi superior (P<0,05) ao do Foote na avaliação do sêmen fresco diluído. Não houve diferença estatística entre as demais características seminais avaliadas no sêmen fresco diluído. No sêmen resfriado, o Kenney propiciou a manutenção da motilidade e do vigor espermático após as 24 horas de armazenamento, porém o Foote apresentou maiores valores médios (P<0,05) para porcentagem de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico e viáveis pelo teste de epifluorescência. Os valores médios da motilidade progressiva e do vigor espermático durante os testes de termorresistência do sêmen resfriado foram inferiores ao preconizado pelo CBRA (1998) aos 30 minutos com o diluidor de Foote e aos 60 minutos com o dilluidor Kenney. No experimento 2, avaliou-se a fertilidade do sêmen resfriado com ambos os diluidores. Foram realizadas 17 coletas do sêmen do garanhão 1 e 23 coletas do garanhão 2. Após as coletas, o sêmen foi diluído com os diluidores utilizados no experimento 1 e ajustado para uma dose inseminante de 500 milhões de espermatozoides viáveis num volume final de 15 mL por dose. O sêmen foi acondicionado no Equitainer®, resfriado até 5 oC e armazenado por no mínimo 24 horas. Foram avaliadas as seguintes características seminais: motilidade progressiva e vigor espermático do sêmen diluído e resfriado; e morfologia espermática do sêmen fresco e resfriado com ambos os diluidores. Foram utilizados 31 ciclos estrais de 26 éguas no primeiro período experimental e 43 ciclos de 28 éguas no segundo período experimental. Após a detecção de folículo de 30 mm, as éguas foram distribuídas ao acaso em dois grupos: grupo A (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Kenney) e grupo B (éguas inseminadas com sêmen resfriado com diluidor Foote). O sêmen dos garanhões foi utilizado aleatoriamente entre as éguas. As inseminações foram realizadas depois de no mínimo 24 horas de armazenamento do sêmen. O sêmen foi depositado no corpo do útero, a partir da detecção de um folículo de 30-40 mm até a observação da ovulação. As inseminações foram feitas somente em dias predeterminados (terça-feira, quinta-feira e sábado) e o diagnóstico de gestação foi realizado por meio de ultrassonografia transretal. O diluidor de Kenney se mostrou superior ao Foote na manutenção da motilidade progressiva e do vigor espermático após o período de resfriamento. A taxa de gestação do grupo A, 55,26% (21/38), foi maior (P<0,05) que a do grupo B, 30,56% (11/36). Os testes de avaliação da integridade e funcionalidade da membrana plasmática da célula espermática auxiliam na predição do potencial fecundante do garanhão, porém ainda não são conclusivos. O diluidor seminal à base de glicina-gema de ovo (Foote, 2002) não é eficaz em preservar as características seminais e não possibilita obter índice de fertilidade aceitável. O diluidor proposto por Kenney et al. (1975) ainda é uma ótima opção para inseminação artificial com sêmen resfriado de garanhões da raça Mangalarga Marchador.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 869208 bytes, checksum: 49cc1ade4a40ef37c41af4eebf8c42a1 (MD5) Previous issue date: 2010-07-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objectives of this study were to examine whether vitamin E has an effect on the structural integrity of goat sperm plasma membrane, as well to investigate the potential use of this vitamin in extenders medium for cryopreservation of goat semen. Two adult Parda Alpina breed males were used, totalizing 8 semen samples for each one. After collection, the physical characteristics of the semen, the sperm morphology and the functional integrity of sperm membrane by hypoosmotic swelling test were evaluated. Then the semen was diluted as follows: BIOXCELL® (Control), BIOXCELL® + Equex, BIOXCELL® + Vitamin E (25&#956;M), BIOXCELL® + Vitamin E (50&#956;M) and BIOXCELL® + Vitamin E (100&#956;M). After the final dilutions, the progressive motility, sperm vigor and hypoosmotic swelling test were performed for each treatment. The semen was packaged in 0.25 ml straws, the straws were cooled to 5 oC for 1 hour in plastic container containing ethyl alcohol. The pre-freezing was done in liquid nitrogen vapor for 15 minutes. After this period, the straws were immersed in liquid nitrogen. The samples were thawed in a water bath at 37 oC for 30 seconds, packaged in plastic tubes and homogenized for immediate analysis of sperm motility and vigor, hypoosmotic swelling test and thermoresistance test. In fresh semen, the physical and morphological characteristics remained within normal parameters. No correlation of motility with other variables were detected. The average volume correlated negatively with sperm vigor, minor defects and total defects (r = -0.55, r = -0.52 and r = -0.53, respectively) and positive correlation with the hypoosmotic swelling test (r = 0, 44). A negative correlation (r = -0.48) was found between sperm concentration and major defects. The minor defects and total defects values were markedly positive correlated (r = 0.98). The treatments did not differ (P > 0.05) for progressive motility, spermatic vigor and hypoosmotic swelling test of semen. The motility and vigor after thawing and during the TTR did not differ (P > 0.05) among treatments. No significant difference (P > 0.05) among treatments after the completion of the hypoosmotic swelling test was detected. Correlation was observed between motility and vigor in all treatments in the diluted semen (pre-cooled) and at all times of the TTR. No correlation between the vigor and the hypoosmotic swelling test in any of the treatments on 0H and 2H of TTR times was found, however a correlation at 1H time Equex treatment (r = 0.51) and the Control, Equex and Vit. E 50&#956;M treatment at time 3H (r = 0.44, 0.69, 0.57, respectively) were found. The thawed semen samples from Equex treatment and Vit. E 100&#956;M treatment showed correlation between motility and hypoosmotic swelling test. It is concluded that: The vitamin E did not affect any of parameters under study. / O objetivo deste estudo foi verificar se a vitamina E afeta a integridade estrutural da membrana plasmática dos espermatozóides caprinos, bem como verificar o potencial uso desta vitamina em meios diluentes de criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados 2 machos adultos da raça Parda alpina. Para as coletas de sêmen foi utilizada vagina artificial onde se obteve 8 ejaculados por animal. Após a coleta, fez-se a avaliação física do sêmen, morfológica dos espermatozóides e da integridade funcional da membrana espermática pelo teste hiposmótico. Em seguida, o sêmen foi diluído com os seguintes tratamentos: BIOXCELL® (Controle), BIOXCELL® + Equex, BIOXCELL® + Vitamina E 25&#956;M, BIOXCELL® + Vitamina E 50&#956;M e BIOXCELL® + Vitamina E 100&#956;M. Após as diluições finais, foram avaliados a motilidade progressiva e vigor espermático e realizado teste hiposmótico de cada tratamento. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25mL, as palhetas foram resfriadas a 5 oC, durante 1 hora em refil plástico contendo álcool etílico. O pré-congelamento foi realizado em vapor de nitrogênio líquido durante 15 minutos. Após esse período, as palhetas foram imersas no nitrogênio para o congelamento final do sêmen. As partidas foram descongeladas em banho-maria a 37 oC por 30 segundos, acondicionadas em tubos plásticos e homogeneizadas para a análise imediata de motilidade e vigor espermático, teste hiposmótico e teste de termorresistência. No sêmen fresco, as características físicas e morfológicas mantiveram-se dentro de parâmetros normais. Não houve correlação da motilidade progressiva com outras variáveis. O volume apresentou correlação negativa com o vigor espermático, defeitos menores e defeitos totais (r = -0,55, r = -0,52 e r = - 0,53, respectivamente) e correlação positiva com o teste hiposmótico (r = 0,44). Houve correlação média negativa (r = -0,48) entre a concentração de espermatozóides e os defeitos maiores. Os valores de defeitos menores e defeitos totais apresentaram correlação forte e positiva (r = 0,98). A motilidade progressiva, o vigor espermático e o teste hiposmótico do sêmen diluído não diferiram entre os tratamentos (P > 0,05). As médias gerais de motilidade e vigor logo após o descongelamento e ao longo do TTR não diferiram (P > 0,05) entre os tratamentos. A integridade funcional da membrana espermática, avaliada pelo teste hiposmótico, não diferiu (P > 0,05) entre os tratamentos. Foi observada correlação positiva entre motilidade e vigor dos espermatozóides em todos os tratamentos no sêmen diluído (pré-resfriado) e em todos os tempos do TTR. Não houve correlação entre o vigor e o teste hiposmótico dos espermatozóides em nenhum dos tratamentos no sêmen diluído e nos tempos 0H e 2H do TTR, havendo correlação média positiva no tratamento Equex no tempo 1H (r = 0,51) e nos tratamentos Controle, Equex e Vit. E 50&#956;M no tempo 3H (r = 0,44, 0,69, 0,57, respectivamente). Houve correlação entre a motilidade e o teste hiposmótico do sêmen diluído no Tramento Vit. E 50&#956;M (r = 0,68). As amostras de sêmen dos tratamentos Equex e Vit. E 100&#956;M descongeladas mostraram correlações entre motilidade e teste hiposmótico. Conclui-se que: Nenhum dos parâmetros avaliados neste estudo foi afetado pela Vitamina E.

Submitted by Suzane Peres Campanholi null (supc@hotmail.com) on 2016-06-02T21:33:16Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Suzane - Versão final pro repositório UNESP.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T16:46:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 campanholi_sp_me_jabo.pdf: 1223510 bytes, checksum: 26ebdc009120ee189335639e58233246 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O plasma seminal já foi descrito como benéfico e ao mesmo tempo prejudicial aos espermatozoides e isto está relacionado com o tempo de contato entre eles. A criopreservação do sêmen em touros pode ser prejudicada por exposição contínua dos espermatozoides ao plasma seminal (PS) e a aplicação de métodos para sua remoção pode aumentar a qualidade dos espermatozoides recuperados pós-descongelação, melhorando os resultados de biotécnicas que utilizam sêmen criopreservado. Pelo fato da centrifugação causar muitos danos aos espermatozoides, a filtragem com Sperm Filter® apresenta-se como um novo método de remoção do PS que almeja melhores resultados, porém não foi encontrado relato da sua aplicação em bovinos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos métodos de centrifugação e filtragem com Sperm Filter® sobre a criopreservação do sêmen bovino. Para isso, o sêmen de 38 touros Nelore foi colhido por eletroejaculação. Após a colheita, o sêmen foi fracionado em três alíquotas iguais para divisão em três grupos: controle (N), em que o sêmen foi diluído com PS; centrifugação (C), em que o PS foi removido por centrifugação a 600 X g por 10 minutos; e filtragem (F), em que o PS foi removido por filtragem com Sperm Filter®. As amostras foram criopreservadas, e pós-descongelação foram avaliados a cinética espermática, a integridade das membranas plasmática e acrossomal, o potencial mitocondrial, o estresse oxidativo e a capacidade fecundante através da produção in vitro de embriões (PIVE). Com relação à cinética, maiores valores da velocidade do trajeto (P = 0,0005) e velocidade progressiva (P = <0,0001) foram observados nos grupos C e F e os parâmetros frequência de batimento, retilinearidade e linearidade foram superiores no grupo F (P = 0,0008; P = 0,0133 e P = 0,0005, respectivamente). A integridade de membrana foi prejudicada pela centrifugação e filtragem do sêmen (P < 0,0001), porém o estresse oxidativo foi reduzido com esses métodos de remoção do PS (P < 0,0001). Na PIVE, as maiores taxas de desenvolvimento embrionário (blastocistos e blastocistos eclodidos) foram observadas no grupo N e F (P = 0,008 e P = 0,0042, respectivamente). Portanto, a remoção do plasma seminal pelo método da centrifugação reduz a qualidade do sêmen criopreservado bovino, interferindo negativamente na fertilidade dos espermatozoides e o método da filtragem com Sperm Filter® apresentou melhor resultado evidenciado por altas taxas de desenvolvimento embrionário. / Seminal plasma has been described as beneficial and harmful to the spermatozoa and this is related to the contact time between them. Cryopreservation of semen from bulls can be undermined by continuous exposure of sperm to the seminal plasma (SP) and the application of methods for removal can increase the quality of post-thaw sperm recovered, improving fertilization. Centrifugation cause a lot of damage to sperm and filtering with Sperm Filter® is a new SP removal method that aims to better results, but has not yet been applied in bull. The aim of this study was to evaluate the effect of the methods of centrifugation and filtering with Sperm Filter® on cryopreservation of bovine semen. For this, semen of 38 Nelore bulls was collected by electroejaculation. Semen was fractioned into three equal aliquots for division into three groups: control (N), wherein the semen was diluted with SP; centrifugation (C), in which the SP was removed by centrifugation at 600 X g for 10 minutes; and filtration (F), in which the SP was removed by filtration with Sperm Filter®. Samples were cryopreserved and was evaluated after thawing sperm kinetics, the integrity of plasma and acrosomal membranes, mitochondrial potential, oxidative stress and the fertilizing capacity by in vitro embryo production (IVP). The kinetics, higher values of the path velocity (P = 0.0005) and progressive speed (P = <0.0001) were observed in the groups C and F and the beat frequency parameters, straightness and linearity were higher in group F (P = 0.0008, P = 0.0133 and P = 0.0005, respectively). Membrane integrity was impaired by centrifugation and filtration of semen (P <0.0001), though oxidative stress was reduced with these SP removal methods (P <0.0001). In IVP, the highest rate of embryonic development (blastocyst and hatched blastocyst) were observed in the C and F group (P = 0.008 and P = 0.0042, respectively). Therefore, removal of seminal plasma by the method of centrifugation reduces the quality of semen cryopreserved cattle, a negative effect on fertility of sperm, and the method of filtering with Sperm Filter® showed better results evidenced by high rates of embryonic development.

Submitted by CARMEN CECÍLIA SICHERLE null (carmensicherle@terra.com.br) on 2016-09-27T16:44:19Z No. of bitstreams: 1 Carmen C Sicherle Tese Semen congelado e inseminação artificial em cães.pdf: 1290427 bytes, checksum: 577b12487088c3d576b6d6746216a3bf (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-09-28T16:11:22Z (GMT) / Submitted by CARMEN CECÍLIA SICHERLE null (carmensicherle@terra.com.br) on 2016-09-28T16:23:19Z No. of bitstreams: 1 Carmen C Sicherle Tese final completa.pdf: 1312682 bytes, checksum: dd7bc1c4c462c9d0da09cfa142d48ea4 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A data (mês) que consta na capa e folha de rosto do trabalho deve ser a mesma que consta na folha de aprovação. Corrija estas informações e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-09-28T16:27:18Z (GMT) / Submitted by CARMEN CECÍLIA SICHERLE null (carmensicherle@terra.com.br) on 2016-09-28T16:38:54Z No. of bitstreams: 1 Carmen C Sicherle Tese completa.pdf: 1312570 bytes, checksum: 9e105448cb368db57c02753ea8a7cf32 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-09-28T17:14:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sicherle_cc_dr_bot.pdf: 1312570 bytes, checksum: 9e105448cb368db57c02753ea8a7cf32 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-28T17:14:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sicherle_cc_dr_bot.pdf: 1312570 bytes, checksum: 9e105448cb368db57c02753ea8a7cf32 (MD5) Previous issue date: 2016-08-03 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi o de avaliar os efeitos da criopreservação sobre a qualidade e fertilidade do sêmen de cão. Para isso foram realizados dois experimentos. No primeiro experimento foram colhidos 4 ejaculados de 5 cães (n=20), os quais foram avaliados no sêmen fresco, resfriado e descongelado. A motilidade total (MT), progressiva (MP) e porcentagem de rápidos (RAP) por sistema computadorizado e por citometria de fluxo, a fluidez da membrana plasmática [Yo-Pro 1 (YP) e merocianina 540 (M540)], a translocação da fosfatilidil serina (FS) (anexina V e FITC-PSA), integridade da membrana plasmática e acrossomal (iodeto de propídeo (IP) combinado ao FITC-PSA), potencial da membrana mitocondrial (JC1), lipoperoxidação dos lipídeos de membrana (LPO, C11-BODIPY) e apoptose (CellEvent®). O sêmen do cão que apresentou melhores resultados numéricos em todas as análises foi escolhido para ser utilizado separadamente para as inseminações (cão 1) e o sêmen dos demais 4 cães foram utilizados em pool. Foram inseminadas 20 cadelas (2 IAs/cadela), por via transcervical (TCIA) sendo 10 delas com o cão 1 e 10 com o pool. Foram utilizadas 2 concentrações espermáticas (160 e 450 x 106 espermatozoides/TCIA). Houve diferença para os índices de motilidade (p < 0,01) entre o sêmen fresco e resfriado quando comparados ao descongelado para todos os índices avaliados, (MT = 87,00 ± 1,24; 88,15 ± 1,38; 72,55 ± 6,26); (MP = 69,95 ± 1,28 ; 71,75 ± 1,91; 56,30 ± 6,00) e (RAP = 83,15 ± 1,94; 81,55 ± 1,53; 64,30 ± 7,68). Em relação a fluidez da membrana espermática houve diferença na porcentagem da população de células íntegras (CI) e de células com aumento de fluidez de membrana (CIMF) (p < 0,01) entre o sêmen fresco e resfriado quando comparados ao descongelado, (CI = 78,29 ± 6,22; 75,76 ± 6,60; 23,02 ± 9,12); (CIMF = 18,33 ± 5,54; 22,55 ± 6,49; 71,78 ± 9,85). Sobre a identificação da translocação da FS houve diferença (p < 0,01) na porcentagem de células íntegras nos 3 momentos avaliados (CI = 79,90 ± 7,95; 63,50 ± 4,66; 27,19 ± 9,22). A porcentagem de células apresentado a membrana plasmática e acrossomal íntegras foi diferente (p < 0,01) também entre o sêmen fresco e resfriado quando comparados ao descongelado (MPAI = 85,71 ± 6,22; 70,37 ± 6,43; 30,87 ± 9,90). Quanto ao potencial da membrana mitocondrial houve diferença (p < 0,01) na porcentagem de células com alto potencial mitocondrial nos 3 momentos avaliados (APM = 85,15 ± 2,76; 60,52 ± 3,31; 38,06 ± 6,40). A LPO da membrana plasmática foi diferente (p < 0,05) no sêmen congelado quando comprado ao resfriado mas não teve diferença entre o sêmen fresco e resfriado e do fresco ao congelado. Não foi observada qualquer diferença, nos momentos estudados, na atividade da caspase. O cão 1 foi significamente melhor para os índices de integridade de membrana plasmática e acrossomal e potencial mitocondrial. Pelo calculo da resposta média do animal e limites mínimos e máximos, apesar de não haver diferença, observamos que o animal 1 apresentou melhores valores pós descongelação para todas os testes realizados. O aumento na concentração espermática foi positivo e observamos 50% de prenhez no grupo inseminado com o pool de sêmen utilizando a concentração de 450 x 106. Nenhuma gestação foi observada nas TCIA com o sêmen do cão 1. Em conclusão a criopreservação leva a alterações estruturais e funcionais da célula espermática, o que explica a sua sobrevivência curta após a descongelação. As mudanças semelhantes a crio-capacitação podem estar relacionadas a outros fatores, como as proteínas do plasma seminal que ainda não são totalmente conhecidas nesta espécie. O processo de apoptose pode ser iniciado com a abertura dos poros mitocondriais durante o processo de congelação/descongelação, o que libera fatores pro-apoptóticos no citoplasma celular. O potencial mitocondrial não está relacionado com a motilidade dos espermatozoides, mas sim com a sobrevivência do espermatozoide. Melhores resultados de gestação puderam ser obtidos quando mais de 100 x 106 de espermatozoides móveis e morfologicamente íntegros for utilizados por TCIA. Não houve relação entre a qualidade seminal, avaliada pelas técnicas aqui descritas, e a fertilidade. / The aims of the study were to assess individual characteristics and sperm concentration of cryopreserved semen characteristics using different structural and functional analysis and dog fertility. Twenty ejaculates were collected from 5 dogs and sperm were cryopreserved by one-step protocol. To better understand dog semen quality after thawing five healthy mature dogs were used to the one-step sperm cryopreservation protocol. Sperm analysis was performed at three time points: after collection, refrigeration, and after thawing, by computer sperm motility analysis (total [TM] and progressive motility [PM], and rapid sperm), membrane damage (membrane fluidity and viability - Yo-Pro 1 and merocianina 540, phosphatidyl serine translocation – annexin – V – propidium iodide - PI, acrosomal and membrane integrity FITC-PSA – PI), mitochondrial potential (JC-1), membrane lipid peroxidation, LPO (BODIPY 581/591 C11) and apoptosis (kit CellEventTM Caspase-3/7- FITC Green Flow Cytometry), evaluated by flow cytometry. Twenty bitches were inseminated by transcervical intrauterine (TCAI), twice using 2 sperm concentration (160 and 450 x 106 spermatozoa/TCAI). A decrease on frozen/thawed semen comparing to fresh and cooled semen occurred for the parameters of total and progressive motility (TM 87.00 ± 1.24, 88.15 ± 1.38, 72.55 ± 6.26; PM 69.95 ± 1.28, 71.75 ± 1.91, 56.30 ± 6.00, fresh cooled and frozen/thawed respectively P < 0.01), percentage of rapids (83.15 ± 1.94, 81.55 ± 1.53, 64.30 ± 7.68 P < 0.01), membrane fluidity and cell viability (78.29 ± 6.22, 75.76 ± 6.60, 23.02 ± 9.12 P < 0.01) and acrosomal and membrane integrity (85.71 ± 6.22, 70.37 ± 6.43, 30.87 ± 9.90 P < 0.01). Sperm cells were affect for cooling and freezing process when analyzed for the translocation of phosphatidyl serine (79.90 ± 7.95, 63.50 ± 4.66, 27.19 ± 9.22 P < 0.01) and high mitochondrial potential (85.15 ± 2.76, 60.52 ± 3.31, 38.06 ± 6.40 P < 0.01). For LPO significant difference was observed in semen after thawing only comparing to cooled semen (16.57 ± 5.44, 16.22 ± 2.43, 23.00 ± 4.13 P < 0.05). No difference on caspase activity was observed. Dog 1 was significantly better for the parameters of plasma membrane and acrosome integrity and mitochondrial potential. By calculating the average of the animal response and minimum and maximum limits, although there is no difference, we observed that the semen from Dog 1 displayed better post thaw values for all analyzes. The pregnancy rate was 0% for dog 1 and 50% for pool at concentration 450 x 106 spermatozoa. In conclusion, cryopreservation leads to structural and functional changes in sperm cell, which explains their short survival after thawing. The cryo-capacitation like changes can be related to others factors, as the seminal plasma proteins that are not know yet on this species. Apoptosis process can be initiated with the opening of mitochondrial pores during the freezing/thaw process, which releases pro-apoptotic factor on the cytoplasm. The mitochondrial potential is not related to sperm motility but sperm survival. Although the dog 1 displayed better sperm quality, no pregnancy was observed, which makes us to rethink the prediction of fertility of semen samples by commonly used parameters. The concentration dose used for AI procedures must consider motility and sperm viability to satisfactory pregnancy rates. / FAPESP: 2013/02050-5

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA12MA088.pdf: 670172 bytes, checksum: 978ec4d11d867f3e2959dae1534f76a9 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The viability evaluation of animal cells subjected to different cryopreservation strategies is important for studies in cell culture, application in animal cloning and the establishment and maintenance of gene banks. The aim of this study is optimize a method for cryopreservation of bovine somatic cells in different containers using different cryoprotectants. For this purpose, three experiments were conducted using bovine skin fibroblast cells obtained by ear biopsy explantation by ear biopsy of a female Flemish breed. In the first experiment the cells were cryopreserved in cryotubes at fixed concentration of 1x106 cells/mL and in three freezing culture medium (1) culture medium +10% DMSO, (2) culture medium + 10% propylene glycol, (3) culture medium + 10% ethylene glycol. In the second experiment the freezing was performed with the same solutions used in experiment 1, however, the cells were cryopreserved in 0.25 mL and 0.5 mL straws. In the third experiment cells in different concentrations, (0.33x106 cells/mL, 1x106 cells/mL, 3x106 cells/mL and 5x106 cells/mL) were cryopreserved in 0.5 mL straws with culture medium + 10% propylene glycol. In all experiments, the cells were thawed in waterbath at 37 oC for evaluation of cell survival by trypan blue method and by the cell growth curve after 72 h in culture, moreover, in the first experiment was carried out the population doubling time test (PDT). The data were analyzed by analysis of variance with pairwise comparisons between groups by the Tukey test, with significance level of 5%. In first experiment there was no significant difference between groups using different cryoprotectants and the time of cell division, estimated by PDT, ranged from 15.9 to 16.5 hours.In the second experiment no significant difference in the survival rate between groups was observed, regardless of the cryoprotectant used, and considering the 0.25 and 0.5 mL straws. In the growth curve, the survival performance of cells cryopreserved in 0.25 ml straws was statistically inferior to that frozen in 0.5 mL straws and cryovials. In this experiment all groups had significantly lower survival results campared to the control group. In the third experiment, the cell concentrations that presented a better survival rate after thawing were 0.33x106cells/ mL and 1x106 cells /mL. Based on the results obtained it follows that straws can be used for freezing cells and the straws of 0.5 mL showed results consistent with those obtained by cryotubes. Likewise the use of PG can be a viable alternative for the freezing somatic cells / A avaliação da viabilidade de células animais submetidas à criopreservação é importante para estudos em cultivo celular, aplicação em clonagem animal e para o estabelecimento e manutenção de bancos genéticos. O objetivo do trabalho é otimizar uma metodologia de criopreservação de células somáticas bovinas utilizando diferentes recipientes e crioprotetores. Para tanto, três experimentos foram conduzidos utilizando células fibroblásticas de origem cutânea foram obtidas por meio de biópsia auricular de uma fêmea da raça Flamenga. No primeiro experimento, as células foram criopreservadas em criotubos na concentração fixa de 1x106 células/mL em três soluções de congelamento (1) meio de cultivo +10% de DMSO; (2) meio de cultivo + 10% de Propileno glicol; (3) meio de cultivo + 10% de Etileno glicol. No segundo experimento, o congelamento foi realizado com as mesmas soluções crioprotetoras utilizadas no experimento um, porém as células foram criopreservadas em palhetas de 0,25 mL e 0,5 mL. No terceiro experimento, foram testadas diferentes concentrações celulares, (0,33x106 cel/mL, 1x106 cel/mL, 3x106 cel/mL e 5x106 cel/mL) que foram criopreservadas em palheta de 0,5 mL utilizando-se meio de cultivo + 10% propileno glicol. Em todos os experimentos, as células foram descongeladas em banho maria a 37 oC para avaliação da sobrevivência celular pelo método de azul de Tripan e avaliação da curva de crescimento celular após 72 h de cultivo, além disso, no primeiro experimento foi realizado o teste de population doubling time (PDT) e no segundo e terceiro experimento o grupo controle foi realizado com células criopreservadas em criotubo utilizando a solução de congelamento composta meio de cultivo +10% de DMSO. Os dados foram analisados através da análise de variância com comparações pareadas entre grupos pelo teste de Tukey, com nível de significância de 5%. No primeiro experimento, não houve diferença significativa entre os grupos utilizando diferentes crioprotetores e o tempo de divisão celular estimado pelo PDT variou de 15,9 a 16,5 horas. No segundo experimento, a taxa de sobrevivência pós descongelamento, considerando as palhetas de 0,25 e 0,5 mL, não apresentou diferença significativa entre os grupos, independente do crioprotetor utilizado. Já na curva de crescimento, a sobrevivência das células criopreservadas em palhetas de 0,25 mL apresentou um desempenho estatisticamente inferior às congeladas em palhetas de 0,5 mL e criotubos. Neste experimento todos os grupos apresentaram resultados de sobrevivência significativamente inferiores ao grupo controle. No terceiro experimento as concentrações celulares que apresentaram melhores resultados de sobrevivência após o descongelamento foram de 0,33x106 cel/mL e 1x106 cel/mL. Com base nos resultados obtidos conclui-se que é possível utilizar palhetas para o congelamento de células e que as palhetas de 0,5 mL apresentaram resultados compatíveis aos obtidos com criotubos. Da mesma forma o uso de PG pode ser uma alternativa viável para o congelamento de células somáticas

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA15MA184.pdf: 964703 bytes, checksum: 9b63fdeda6cbc9b89c700c8427b99a28 (MD5) Previous issue date: 2015-08-28 / The cryopreservation of somatic cells has been highlighted not only in the preservation of germplasm, but also in the maintenance of genotypes used for the induction of pluripotency, development of strains and cloning by nuclear transfer. The study of the effects of controlled stress in somatic cells or gametes have shown that, in addition to providing increased survival under experimental conditions, it may influence other parameters like the growth pattern in culture. Bovine fibroblasts obtained by standard procedure from a cartilage explant were evenly distributed in four experimental groups as described below: fibroblasts in culture were subjected for 4 minutes to negative pressure 200, 500 and 800 mbar, immediately (PN0h) or 3 hours before (PN3h) freezing, performed in a standard solution (10% DMSO in D-MEM). After trypsinization, the cells were loaded in 0.25 mL straws in a concentration of 1 x 106 cells / mL, and total volume of 200 &#956;L. The straws were sealed and stabilized in a refrigerator (5-7 °C) for 30 minutes, and then exposed to nitrogen vapor (4 cm above the surface) for 5 minutes when were dipped therein. Thawing was performed in a water bath at 36 °C for 20 seconds. Fibroblasts not subjected to pressure were used as frozen (CC) and fresh (FC) controls. There was evaluated the post-thaw viability and subsequently the cell replication index, based on the population doubling time (PDT) performed each 24 h intervals, during 8 days. At each evaluation, the cells of one well of each group were trypsinized and the number of viable cells determined by hemocytometric chamber after staining with Trypan Blue. PDT was determined using the algorithm available online (http://www.doubling-time.com): TD = t x lg2/(lgNt lgN0). Data were submitted to ANOVA and T student test, with 5% significance level. The average cell survival of control group (89.8%) and PN500 0h (88.1%) were higher than all other groups. The PDT average time of all frozen cells was 33.2 h. The PDT time was similar in fresh (27.5 ± 0.35 h), frozen control (30.1 ± 2.3 h) and PN500 0h (32.4 ± 1.6 h) groups. The lowest PDT time was observed in the PN800 0h (21,9h) group. The freezing in plastic straws with 10% DMSO was adequate to cryopreserve bovine fibroblasts allowing high survival rates. It was not observed negative effects of submission to the negative pressure just before freezing, and the level of 200 and 500 mbar resulted in growth rates similar to the obtained with fresh fibroblasts. Although the negative pressure has not increased cryotolerance in bovine fibroblasts, it determined changes in the behavior of these cells during the post-thaw culture. New evaluations should be performed to assess cells subjected to negative pressure in the development of animal clones / A criopreservação de células somáticas vem se destacando não apenas como aliada na preservação de germoplasma, mas também na manutenção de genótipos utilizados para a indução de pluripotencia, formação de linhagens e clonagem por transferência nuclear. O estudo dos efeitos do estresse controlado em gametas ou células somáticas tem demonstrado que, além de proporcionar maior sobrevivência em condições experimentais, outros parâmetros podem ser influenciados, como por exemplo, o padrão de crescimento em cultivo. Para isto, fibroblastos bovinos de primeira passagem, obtidos por procedimento padrão de explantação de cartilagem, foram distribuídos uniformemente em quatro grupos experimentais conforme descrito a seguir: Fibroblastos em cultivo foram submetidos por 4 minutos à pressão negativa de 200, 500 e 800 mbar, imediatamente (PN0h) ou 3horas antes (PN3h) do congelamento, realizado em solução padrão (10% DMSO em D-MEM). Após a tripsinização, as células eram envasadas em uma concentração de 1 x 106 células/mL, em palhetas de 0,25 mL, num volume total de 200 &#956;L. As palhetas eram seladas e estabilizadas em geladeira (5-7 &#730;C) por 30 minutos, expostas ao vapor de nitrogênio (4 cm acima da superfície) por 5 minutos, e então mergulhadas no mesmo. O descongelamento era realizado em banho-maria a 36 °C por 20 segundos. Fibroblastos não submetidos à pressão foram utilizados como controles congelado (CC) e fresco (FC). Foram avaliados a viabilidade pós-congelamento, e posteriormente o índice de replicação, baseado no tempo de duplicação da população (PDT) celular, com intervalos de 24h e duração de 8 dias. A cada avaliação, um poço de cada grupo era tripsinizado sendo o número de células viáveis determinado em câmara hemocitométrica, após a coloração com Azul de Trypan. O PDT foi 10 12 determinado utilizando-se o algoritmo disponível online (http://www.doubling-time.com): TD = t x lg2/(lgNt lgN0). Os dados foram submetidos à ANOVA e teste T Student, com 5% de significância. A sobrevivência celular média dos grupos controle (89,8%) e PN500 0h (88,1%) foram superiores aos outros grupos. O tempo médio de PDT de todas as células congeladas foi 33,2h; o tempo de PDT foi semelhante nos grupos fresco (27,5 ± 0,35 h), controle congelado (30,1 ± 2,3 h) e PN500 0h (32,4 ± 1,6 h), o menor tempo foi observado no grupo PN800 0h (21,9 h). As palhetas plásticas se mostraram adequadas para o congelamento de fibroblastos bovinos, não sendo observados efeitos negativos da submissão à pressão negativa imediatamente antes do congelamento, sendo os valores de 200 e 500 mbar os que possibilitaram as melhores taxas de crescimento. Muito embora o emprego de pressão negativa não tenha aumentado a criotolerância de fibroblastos bovinos, determinou mudanças no comportamento destas células durante o cultivo pós-descongelamento. Novas avaliações devem ser realizadas para avaliar a qualidade das células submetidas à pressão negativa, no desenvolvimento de clones animais

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-22Bitstream added on 2014-06-13T20:59:31Z : No. of bitstreams: 1 000755551.pdf: 414659 bytes, checksum: da80b05f755988e6a99a65d40c8a90bb (MD5) / A inseminação artificial com sêmen refrigerado é uma biotecnia imprescindível para os programas reprodutivos de equinos. Entretanto, durante a refrigeração o espermatozoide pode sofrer danos irreversíveis que irão prejudicar os índices de fertilidade. A incorporação de colesterol ligado a ciclodextrina (CLC) é uma estratégia de aumentar a resistência espermática em baixas temperaturas. No entanto, estudos anteriores tem sugerido que o colesterol presente em altos níveis na membrana plasmática pode interferir no processo de capacitação e consequentemente de fertilização. Para isso, foi realizado um trabalho dividido em cinco experimentos. No experimento 1 o objetivo foi determinar a concentração mais adequada de CLC para a utilização na refrigeração de espermatozoides equinos. No experimento 2 o objetivo foi comparar as temperaturas de 15º C e 5º C para refrigeração de espermatozoides equinos tratados com CLC. No experimento 3 o objetivo foi verificar a influência da adição de CLC sobre a qualidade do sêmen refrigerado de garanhões bad cooler e good cooler. No experimento 4 o objetivo foi avaliar a influência da adição de CLC sobre a ocorrência de reação acrossomal. O objetivo do experimento 5 foi avaliar a fertilidade de espermatozoides refrigerados de garanhões bad cooler (BC) e good cooler (GC) tratados com CLC. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 24 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, cada ejaculado foi dividido em quatro grupos: controle (C) e tratado com 1 mg (CLC-1), 1,5 mg (CLC-1,5) e 2 mg (CLC-2) de CLC/120 x 106 de espermatozoides e refrigerado por 48 horas a 5º C. Para o experimento 2 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Cada ejaculado foi diluído conforme o experimento 1, dividido em quatro grupos: C e CLC-1,5 refrigerados a 15º C e a 5 º C por 24 horas. Para o experimento 3 foram utilizados... / Artificial insemination with cooled semen is an invaluable biotechnique for equine reproductive programs. However, the cooling process may cause irreversible damage to spermatozoa, thus reducing fertility rates. The incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to the plasmatic membrane is an strategy to increase sperm resistance to low temperatures. However, previous studies have suggested that high levels of cholesterol may interfere with capacitation process and, consequently, with fertilization. To this end, a study was performed in five experiments. In experiment 1, the aim was to determine the best CLC concentration for the purpose of cooling equine spermatozoa. In experiment 2, the aim was to compare the temperatures of 15 ºC and 5 ºC for cooling equine semen treated with CLC. In experiment 3, the aim was to assess the influence of CLC addition for cooled semen quality of bad cooler (BC) and good cooler (GC) stallions. In experiment 4, the aim was to evaluate the influence of CLC addition for the occurrence of acrosome reaction. The aim of experiment 5 was to evaluate the fertility of cooled CCL-treated semen from BC and GC stallions. In experiment 1, two ejaculates from 24 stallions were used. After dilution with Botu-Sêmen® to a concentration of 50 x 106 cells/mL, each ejaculate was divided into four groups: control (C) and treated with 1 mg (CLC-1), 1.5 mg (CLC-1.5) and 2 mg (CLC-2) and 2 mg (CLC-2) of CLC/120 x 106 cells, and cooled for 48 hours at 5 ºC. For experiment 2, two ejaculates from 12 stallions were used. Each ejaculated, after dilution according to experiment 1, was divided into 4 groups: C and CLC-1.5 cooled at 15 ºC and 5 ºC for 24 hours. For experiment 3, two ejaculates from nine GC and nine BC stallions were used. The ejaculates were diluted according to the previous experiments and divided into two groups: C and CLC-1.5 cooled at 5 ºC for 48 hours. In experiments 1, 2 and 3, sperm ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-19Bitstream added on 2014-06-13T19:59:04Z : No. of bitstreams: 1 rocha_as_me_botfmvz.pdf: 334752 bytes, checksum: 8483e7af4f994ca7fc71b7f2189b4764 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição da asolctina de soja ou da fosfatidilcolina de soja em diluente à base de gema de ovo sobre os parâmetros espermáticos e índices de fertilidade de sêmen congelado de garanhões. No Experimento I, dezenove ejaculados de três garanhões foram submetidos ao processo de criopreservação utilizando três diluentes de congelação: Botu-Crio® (BC), Botu-Crio® adicionado de asolctina de soja (BC+Ac) e Botu-Crio® adicionado de fosfatidilcolina de soja (BC+Fc), para posterior avaliação dos parâmetros de cinética espermática e integridade de membrana plasmática. No Experimento II, comparou-se a taxa de fertilidade referente aos três meios de congelação por meio de inseminação artificial das éguas com “pool” de espermatozoides dos três garanhões. Não houve diferença significativa no que se refere aos parâmetros espermáticos (P<0,05) de motilidade total (69,16±9,28; 64,63±11,05; 68,47±7,92), motilidade progressiva (25,00±5,43; 23,26±5,63; 26,16±5,50), integridade de membrana plasmática (39,37±8,82; 39,95±9,52; 41,63±9,24) e índice de concepção (46,7%, 13,3%, 37,5%) entre os meios BC, BC+Ac e BC+Fc, respectivamente. Entretanto, existiu uma tendência a maior (P>0,05) taxa de fertilidade do diluente Botu-Crio® quando comparado ao meio adicionado de asolctina de soja. Diante dos resultados encontrados, conclui-se que tanto a adição da asolctina de soja quanto da fosfatidilcolina de soja ao diluente Botu-Crio® apresenta a mesma eficácia que o diluente Botu-Crio® convencional na criopreservação de sêmen equino / The aim of this study was to evaluate the effect of addition of soybean asolectin and phosphatidylcholine in an egg yolk-based extender on sperm parameters and fertility rates of frozen stallion semen. In Experiment I, nineteen ejaculates from three stallions were submitted to cryopreservation process using three freezing extenders: Botu-Crio™ (BC), Botu-Crio™ with soybean asolectin (BC+Ac) and Botu-Crio™ with soybean phosphatidylcholine (BC+Fc), for further evaluation of kinetic parameters and sperm plasma membrane integrity. In Experiment II, the fertility rates from the three freezing extenders were compared through artificial insemination in mares using a sperm “pool” of three stallions. No significant differences were found on sperm parameters (P<0.05) of total motility (69.16±9.28; 64.63±11.05; 68.47±7.92); progressive motility (25.00±5.43; 23.26±5.63; 26.16±5.50); plasma membrane integrity (39.37±8.82; 39.95±9.52; 41.63±9.24) and fertility rates (46.7%, 13.3%, 37.5%), for the BC, BC+Ac and BC+Fc groups, respectively. However, the tendency toward higher (P>0.05) fertility rates in Botu-Crio™ (BC) freezing extender than the freezing extender containing soybean asolectin (BC + Ac). Based in these results, it is concluded that the both addition of soybean asolectin and phosphatidylcholine to Botu-Crio™ freezing extender has the same effectiveness as the conventional Botu-Crio™ used in the cryopreservation of equine semen

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:59:06Z : No. of bitstreams: 1 lima__mr_me_jabo.pdf: 1535432 bytes, checksum: 7fba3e3ae5e6792c02b0d8168157e36d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Dentre as biotecnologias aplicadas à reprodução animal, atualmente um dos maiores desafios é a criopreservação de embriões PIV. Esses embriões apresentam alta criosensibilidade, devido principalmente a excessiva deposição lipídica no citoplasma, e que por sua vez está relacionada com a utilização de SFB nos meios. Neste trabalho foram avaliados os efeitos da suplementação protéica com BSA, SFB e FE e suas associações na PIV de embriões bovinos durante as etapas de MIV e CIV, visando melhorar sua criotolerância. Na MIV foram utilizadas sete diferentes combinações (SFB, BSA, FE, BSA+SFB, BSA+FE, SFB+FE e BSA+SFB+FE), e no CIV quatro tratamentos (BSA, BSA+SFB, BSA+FE e BSA+SFB+FE). Os embriões em estádios de Bl e Bx foram vitrificados e após seu reaquecimento foram avaliadas as taxas de eclosão embrionária em 24 e 48 horas. Dos oócitos colocados em maturação, obteve-se um total de 85,4% de clivagem e 35,52% de produção embrionária. Ao analisar os efeitos da fonte protéica na MIV notou-se que o grupo tratado com BSA apresentou as piores taxas de clivagem (80,96%) (p<0,05) em relação aos demais grupos, o melhor resultado de produção embrionária foi obtido com BSA+SFB (46,69%) e os melhores índices de eclosão embrionária pós reaquecimento foram nos tratamentos BSA+FE (44,35%), SFB+FE (44,90%) e BSA+SFB+FE (42,48%). Quando se avaliou os efeitos de fonte protéica na CIV, não houve diferença significativa entre os tratamentos quanto a clivagem, o BSA apresentou o pior desempenho na produção de embriões (31,88%) (p<0,05) em relação aos demais grupos que não diferiram entre si, e os melhores índices de eclosão embrionária 24 e 48h pós reaquecimento foram obtidos com o tratamento BSA+FE (37,64% e 51,34%, respectivamente) / Among the biotechnology applied to animal reproduction, nowadays one of the biggest challenges is the cryopreservation of embryos produced in vitro. These embryos have a high cryosensitivity, mainly due to excessive fat deposition in the cytoplasm, which in turn is related with the FCS used in the mediums for embryo production in vitro. The aim of this study was to evaluate the effects of protein supplementation with BSA, FBS and FE, and their associations in IVP bovine embryos during the stages of IVM and IVC, to improve their cryotolerance. For IVM were used seven different combinations (FCS, BSA, FE, BSA + FCS, BSA + FE, FE and FBS + BSA + FCS + FS), and four treatments during IVC (BSA, BSA + FCS, BSA + FE, BSA+ FE+ FCS). Embryos in stage of Bl and Bx were vitrified and after their reheating the rates of hatched blastocysts at 24 and 48 hours were evaluated. Of the oocytes placed into maturation, we obtained 85.4% of cleavage and 35.52% of embryo produced. When were evaluated the effects of protein source in IVM was noted that the BSA-treated group showed the worst rates of cleavage (80.96%) (p <0.05) compared to other groups, the best result of embryo production was obtained with FCS + BSA (46.69%) and the highest rates of hatched blastocysts after rewarming were obtained with FE + BSA (44.90%), FE + FCS (44.35%) and FS + FCS + BSA ( 42.48%). When we assessed the effects of protein source in the IVC, there was no significant difference between treatments for the cleavage, the BSA group had the worst performance in the production of embryos (31.88%) (p <0.05) compared to other groups that not differ, and the highest hatched blastocysts in 24 and 48 hours after rewarming were obtained by treating BSA + FE (37.64% and 51.34%, respectively)