O pêssego é o nome popular do fruto produzido por Prunus persica (L.) Batsch, e é amplamente cultivado na região sul do Brasil. Seu cultivo é economicamente muito importante para o local, e o desenvolvimento de técnicas que garantam o controle de qualidade desta matéria-prima e seus produtos industriais são interessantes. No presente trabalho foi feita uma revisão de literatura acerca de análises realizadas por CLAE-UV com o pêssego, realizada uma otimização das técnicas de extração do ácido clorogênico e do sistema cromatográfico, validado este método e utilizado para quantificar 13 diferentes cultivares de pêssegos fornecidos pela EMBRAPA Clima Temperado, cultivados em Pelotas, RS. O resultado é um método rápido, econômico e prático que foi otimizado e validado, excelente para análises rotineiras de controle de qualidade deste material. As quantidades de ácido clorogênico foram comparadas entre si, e identificou-se que as cultivares Morro Redondo e Sunblaze apresentaram os maiores teores desta substância, sendo promissoras para serem empregadas pela indústria como alimento funcional. / Peach is the common name of the fruit produced by Prunus persica (L.) Batsch, widely cultivated in the southern of Brazil. Its cultivation is economically important to the local market, and the development of techniques that assure the quality control of the raw material as well as the industrial products made of this fruit are very useful. In this work, a literature review of the HPLC-UV analysis of peach was done, a technique of extraction and chromatographic system were optimized and validated, and 13 cultivar varieties supplied by EMBRAPA Clima Temperado, grown in Pelotas, RS were analyzed. The result is an optimized and validated method of HPLC-UV to quantify chlorogenic acid in peaches, excellent for routine analysis. The average amount of this phenolic compound in the selected cultivars was quantified and compared among them. It was identified that Morro Rendondo and Sunblaze varieties presents the highest amounts of this substance, and both are promising cultivars to be explored by the industry as functional food.

Com as aplicações indiscriminadas de agrotóxicos e a falta de critérios na seleção destes, todo o ecossistema se torna comprometido, afetando também a saúde humana. A agricultura praticada em nosso país ainda é altamente dependente de agroquímicos, dentre os quais os fungicidas com função de largo espectro na eficácia do controle de uma variedade de fungos. Uma grande proporção da produção mundial destes fungicidas é o do pentaclorofenol, que é destinado ao uso como preservante da madeira e seus derivados, assim como, em processos de curtimento de couro e peles. A madeira e o couro por serem materiais de origem orgânica, sofrem deterioração por organismos xilófagos. Considerando que a celulose é a matéria prima utilizada na fabricação de embalagens de papel e papelão do gênero alimentício e que a produção da gelatina comestível é a partir do tecido conjuntivo (colágeno) extraído de peles, raspas de couro e osseína de mamíferos como suínos e bovinos, alimento este largamente consumido pela população infantil e como complemento nutricional dos desportistas, estes podem estar representando uma via de contaminação. A fim de se avaliar a incidência de resíduo de pentaclorofenol em gelatina comestível e a possibilidade da migração através da embalagem em contato com o alimento, procedeu-se a extração do pentaclorofenol em gelatina e na embalagem de papel. Para ambos, a determinação analítica foi realizada por Cromatografia Gasosa com Detector de Captura de Elétrons (CG Varian Star Modelo 3600 cx) com as seguintes condições operacionais: Temperatura da coluna: 100 °C (2 min), 10 °C min-1, 250 °C(0 min); Temperatura do Detector: 300 °C;Temperatura do Injetor: 250°C ; Modo de injeção: splitless; Volume da injeção: 1 μL . Os limites de detecção e quantificação encontrados foram 0,09 mg kg-1 e 0,3 mg kg-1 para a gelatina e 0,002 mg kg-1 e 0,06 mg kg-1 para as embalagens, respectivamente. Os níveis de recuperação ficaram entre 59,5% para amostras de gelatina e 82% para as embalagens. Os ensaios de migração foram feitos com 5 mL de solução padrão de 0,01 mg L-1 nas temperaturas 25, 40 e 60 °C e com tempo de exposição de 3, 6, 24 e 48 h . Os resultados demonstraram que das 25 marcas de gelatina comestível (n=125), apenas uma única marca teve a ocorrência da presença de pentaclorofenol abaixo do limite de quantificação no produto e em nenhuma embalagem observou-se a presença do mesmo. Posto isto, pode-se especular que há um processo maior de seleção nos fornecedores de matérias-prima para este tipo de alimento e que no processo de boas práticas de fabricação, as empresas têm se adequado com vistas a qualificar seus produtos. / With the indiscriminate applications of the pesticide and the lack of criteria defined in the election of these, the entire ecosystem if becomes engaged, affecting the health human. The agriculture in our country is still highly dependent on chemicals among them broad spectrum fungicides used to control a variety of fungi. Pentachlorophenol (PCP) represents a great percentage of the produced fungicides on a global scale, and is utilized in the preservation of wood and its derivates and fungicide in processes of tanning of animal hides. Wood and leather being organic materials are attacked by xylophagous organisms. Considering that cellulose is raw material for manufacturing some food paperboard packaging and cardboard and and that the production of the edible gelatin is from the fabric conjunctive (collagen) extracted of skins, leather scraps and ossein of mammals as swines and bovines, food this wide consumed by children and as nutritional complement of the athletes, these may constitute routes of a contamination. In order to evaluate the incidence of pentachlorophenol residue in edible gelatin and the possibility of its migration of the same in contact with the food, it was proceeded extraction from pentachlorophenol in gelatin and the packing of paper. For both matrixes the analytical determination was made by gas chromatography with electron capture detector (GC Varian Star Model 3600 Cx) using the following operational conditions: column temperature : 100 ºC (2 min), 10 ºC min-1, 250 °C (0 min); detector temperature: 300 ºC; injector temperature:250 ºC; injection mode: splitless ; injection volume: 1 μL . The detection (LOD) and quantitation (LOQ) limits are 0,09 mg kg-1 and 0,3 mg kg-1 for gelatin and 0,002 mg kg-1 and 0,06 mg kg-1 for the packaging , respectively. Recoveries ranged 59,5% for gelatin and 82% for the packaging. Migration assays in original packaging and products were made with 5 mL standard solution of 0,01mg L-1 in temperatures 25, 40 and 60 °C with 3, 6, 24 and 48 h of contact. The results showed that primarily packaging in polypropylene are effectiveness as a barrier to migration for this contaminants and so 25 marks (n=125) of edible gelatin only one had presence of PCP bellow LOQ and in none paperboard packaging occurred the presence of PCP. It is cogitated hypothesis of that companies is if adjusting good practical of manufacture and the election of suppliers.

Flores das espécies Sambucus nigra, de origem européia, e Sambucus australis, nativa da América do Sul (Caprifoliaceae), denominadas sabugueiro e sabugueirodo- brasil, respectivamente, são utilizadas popularmente sob forma de infusão, como antiinflamatórias, laxativas e para condições febris resultantes de afecções do trato respiratório. Estudos prévios para S. nigra indicam compostos fenólicos como principais constituintes químicos, sendo estes relacionados às principais atividades biológicas avaliadas. Objetivando comparar esta espécie com Sambucus australis, foram realizadas análises botânicas macro e microscópicas das flores, identificando as principais diferenças entre as espécies, tais como o número de lóculos no ovário e presença de idioblastos cristalíferos em algumas estruturas, e observando os possíveis contaminantes (pedicelos). Também foram determinados os parâmetros farmacopéicos: cinzas totais e perda por dessecação. Após a análise química, foi escolhido o flavonóide rutina como marcador das espécies, para realizar análises quantitativas nas 31 amostras adquiridas e / ou coletadas, utilizando método de CLAE previamente validado. Soluções hidroetanólicas apresentaram maior capacidade de extração do produto alvo. Os limites mínimos de rutina observados para ambas as espécies foram de aproximadamente 0,65%. Também foram quantificados, por método espectrofotométrico, os flavonóides totais expressos em quercetina, sendo 0,93% e 1,46% os teores mínimos determinados para S.nigra e S. australis, respectivamente. O estudo da estabilidade acelerada (50°C ± 90% U.R.), avaliando a degradação dos constituintes químicos presentes permitiu sugerir a cinética de degradação de segunda ordem para da rutina nas duas espécies. Comparações de atividades biológicas das espécies foram realizadas pelos ensaios das atividades antiinflamatória (inibição do edema em pata de rato induzido por carragenina) e antioxidante (DPPH). Os resultados para o primeiro ensaio demonstraram ação equivalente em ambas as espécies para extratos hidroetanólicos a 80% (86% de inibição) e aquosos (81%), com atividade semelhante ao padrão indometacina (~83%); para a atividade antioxidante os extratos hidroetanólicos a 80% foram mais ativos (CE50 = 16 μg/ml) que os aquosos (CE50 = 27 μg/ml) em S. australis, e ambos extratos, superiores ao 28 extrato padronizado Gingko biloba (CE50 = 40 μg/ml) e aos extratos de S. nigra (CE50= 50 μg/ml – hidroetanólico e CE50= 32 μg/ml – aquoso). / Sambucus nigra (from Europe) and Sambucus australis (from South America) flowers (Caprifoliaceae), called sabugueiro and sabugueiro-do-brazil, respectively, are used in the folk medicine as anti-inflammatory, laxative and for respiratory diseases. Previous studies for S. nigra indicate phenolic compounds as the main chemical constituents, being related for these ones the biological activities reported. In order to compare this species with S. australis macro and microscopical analysis of the flowers were carried out to identify the major differences between the species, such as the number of ovary locules and idioblasts in some structures, verifying the possible contaminants (pedicels). The following Pharmacopoeia parameters were also determined: total ash and loss on drying. After the chemical analysis, it was chosen the rutin flavonol as the mark constituent for both species, to carry through quantitative analysis of the 31 acquired and/or collected samples, by previously validated HPLC method. Hydroethanolic solutions had shown greater capacity of extraction of the target product. The minimum limits of rutin observed for both species had been of approximately 0.65%. The total flavonoid content was also quantified by spectrophotometer method, being expressed as quercetin, finding 0.93% and 1.46% the minimum values for S. nigra and S. australis, respectively. The accelerated stability test (50 ºC ± 90% UR) that evaluate the degradation of the constituents, allowed to verify a kinetic degradation of second order for rutin in both species. Comparison of biological activities of these species was carried out using the antiedematogenic (rat paw edema) and antioxidant (DPPH) activities. The results for the first test showed an equivalent action for the hydroethanolic (86% of edema inibition) and aqueous (81%) extracts, exhibiting a similar activity to indometacin (~83%). For the antioxidant activity, the ethanolic extracts (CE50 = 16 μg/ml) were more active than the aqueous (CE50 = 27 μg/ml ) for S. australis, and, both extracts were superiors to the Ginko biloba (CE50 = 40 μg/ml) and to the S. nigra extracts (CE50 = 50 μg/ml – hydroethanolic and CE50 = 32 μg/ml - aqueous).

Peumus boldus Molina (Monimiaceae) é uma árvore comum e abundante no Chile, e suas folhas são amplamente empregadas pela medicina tradicional para o tratamento de uma variedade de afecções do sistema digestivo e hepatobiliar. Seus principais constituintes químicos são alcalóides do tipo aporfínicos, sendo a boldina seu maior e mais característico representante, cujas propriedades antioxidantes são extensivamente relatadas na literatura, servindo desta forma como marcador químico para a espécie. Com o objetivo de contribuir com parâmetros de controle de qualidade, um estudo botânico macro e microscópico das folhas e do pó da espécie foi realizado. Características morfológicas, identificadas pela análise macroscópica, como pilosidade, tipologia dos tricomas, proeminência ao redor da base dos tricomas e aparência do bordo, e características microscópicas como estômatos anomocíticos, folha hipoestomática e ocorrência de cristais de oxalato de cálcio denotam valor taxonômico. Parâmetros farmacopéicos como cinzas totais e perda por dessecação foram determinados, e um método de quantificação da boldina foi desenvolvido e validado utilizando a CLAE. O limite mínimo de boldina observado na análise de 10 amostras adquiridas foi de aproximadamente 0,016%. A fim de avaliarse o comportamento de seus constituintes químicos frente a variações de temperatura e umidade, realizou-se estudo de estabilidade acelerada (40ºC ± 2ºC / 75% ± 5% U.R.). A degradação máxima de boldina foi observada após 90 dias em câmara climática chegando a aproximadamente 52%. A reação de degradação sugerida foi de segunda ordem, e o tempo de vida útil e meia-vida calculados foram de aproximadamente 18 dias e 165 dias, respectivamente. Por fim, realizou-se a quantificação de alguns metais pesados nas folhas da espécie, que decresceram na ordem de Fe> Mn> Cu> Ni, sendo que Pb, Cr e Co tiveram níveis abaixo do limite de detecção de 5 μg/g. / Peumus boldus Molina (Monimiaceae) is an abundant and widespread tree native from Chile, and the leaves are widely used in folk medicine for the treatment of digestive and hepatobiliary disorders. Its leaves are rich in several aporphine-like alkaloids such as boldine, the most characteristic one and used as a marker constituent for species. This compound has potent antioxidant properties described in literature. In order to contribute with quality control parameters, macro and microscopical analisys of the leaves and powder were carried out. Morphological characteristics of the macroscopical analysis like pilosity, trichomes type, trichome basis proeminency and border appearance; and microscopical characteristcs like anomocitic stomata, hipostomatic leave and the presence of calcium oxalate crystals denote taxonomic value. The following Pharmacopoeia parameters were also determined: total ash and loss on drying, and a method for boldine quantification were developed and validated using HPLC. The minimum limit of boldine observed in the analysis of 10 samples obtained had been of approximately 0,016%. In order to evaluate the behavior of its chemical constituents under temperature and moisture variations, a study of accelerated stability (40ºC ± 2ºC / 75% ± 5% R.U.) was carried out. The maximum boldine degradation was observed after 90 days of treatment, reaching approximately 52%, and the kinetic degradation of second order was suggered, By this mean, the shelf life expectancy was determined to be 18 days and the half-life was 165 days. Finally, the quantification of heavy metals in the leaves of the specie was performed, and found in the descending order Fe> Mn> Cu> Ni; Pb, Cr and Co had their quantification levels lower than the detection limit of 5 μg/g.

Submitted by ANTONIO FERNANDEZ BOBEY null (antoniofernandezbobey86@yahoo.es) on 2016-04-12T19:44:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Versão Final_ Repositorio Unesp.pdf: 2495633 bytes, checksum: f7ff8d9ec49134a24d9a1082b09926dc (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-15T17:37:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandezbobey_a_me_araiq_par.pdf: 909965 bytes, checksum: 12ae7f0b3b5f6a97678bcbd7f2a70506 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T17:37:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandezbobey_a_me_araiq_par.pdf: 909965 bytes, checksum: 12ae7f0b3b5f6a97678bcbd7f2a70506 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os ciclotídeos são produtos naturais de estrutura polipeptídica, contendo de 28 a 37 resíduos de aminoácidos, sendo seis deles resíduos de cisteína, altamente conservados e formados por ligações dissulfeto as quais exibem ciclização tipo "cabeça-cauda". Esse arranjo estrutural característico confere aos ciclotídeos uma estabilidade excepcional e resistência à proteólise. Devido a estas peculiaridades moleculares os ciclotídeos são substâncias com importantes funções biológicas, entre elas, destacam-se as de defesa e adaptação dos organismos que as acumulam. São de grande interesse para agricultura, agindo como inseticidas e, no uso medicinal por apresentarem atividades anti-HIV, anti-helmíntica, antimicrobiana e efeitos uterotônicos. A presente dissertação trata do estudo de ciclotídeos isolados da planta Noisettia orchidiflora (Rudge) Gingins, pertencente à família Violaceae, um táxon de ocorrência frequente na Mata Atlântica. Já existem dados na literatura sobre o estudo de ciclotídeos das raízes e o presente estudo é importante na medida que registra a ocorrência desta classe de substâncias e a sua caracterização nas folhas e galhos desta espécie, levando a informações mais completas sobre a ocorrência de ciclotídeos em Violaceae. A extração de ciclotídeos do material vegetal (galhos e folhas secos e moídos) foi feita mediante maceração hidrometanólica até esgotamento do material vegetal, seguida de partição líquido-líquido com diclorometano. A fase polar foi concentrada e submetida à cromatografia em coluna, empregando octadecilsilano (C18) como fase estacionária, obtendo-se frações ricas em peptídeos. O processo de purificação foi realizado por HPLC preparativo e/ou analítico com eluição gradiente, empregando-se acetonitrila e água como fase móvel, o que permitiu a obtenção das substâncias. A sequência de aminoácidos (estrutura primária) dos ciclotídeos isolados foi estabelecida por Espectrometria de Massas MALDI-TOF/TOF com o auxílio das reações de redução, alquilação e digestão enzimática empregando as enzimas: endoproteinase de ácido glutâmico (endoGlu-C), tripsina e quimiotripsina. Também, foi realizada a análise de aminoácidos das substâncias, permitindo a quantificação de cada aminoácido presente. A presente pesquisa resultou no isolamento de seis compostos de galhos e três oriundos de folhas, totalizando sete diferentes possíveis ciclotídeos, visto que dois deles foram comuns para ambos os tecidos. Até o momento foi possível determinar a estrutura primária de quatro deles: Os ciclotídeos Nor B (substância F20-2), massa molecular 3180,416 Da, Nor C (substância F20-3), massa molecular 3282,472 Da, Nor D (substância F17-1), massa molecular 3249,474 Da e Nor E (substância F21-1), massa molecular 3170,472 Da. Todos eles reportados pela primeira vez no presente estudo. As demais substâncias isoladas se encontram em processo caracterização estrutural. / Cyclotides are polypeptide structures, comprise 28-37 amino acid residues, six of them, are cysteine residues, highly conserved and formed by disulfide bonds, which exhibit "head-tail" cyclization type. This structural feature gives to cyclotides remarkable stability and resistance to proteolysis. Due to these singularities, such compounds have disclosed important biological functions. Among them; the literature has highlighted important ecological properties as defense and adaptation of the organisms, which accumulate these natural products. Accordingly, they are of great interest to agriculture, acting as insecticide, and to medicine, since some compounds have displayed anti-HIV activity, anthelmintic, antimicrobial and uterotonic properties. This research deals with the study of cyclotides isolated Noisettia orchidiflora (Rudge) Gingins, belonging to the taxon Violaceae, which frequently occurs in the Atlantic Forest. There are several studies in the literature on the occurrence of this class of compounds and their characterization in the leaves and branches of Violaceae plant species, leading to more complete information on the occurrence of cyclotides, and their biological significance for these plants. The cyclotides extraction of plant material (dried and ground branches and leaves) was carried out by maceration with methanol/water, followed by a liquid-liquid partition with dichloromethane. The polar phase was concentrated and subjected to chromatographic column using octadecylsilane (C18) as stationary phase, achieving several fractions rich in peptides. The purification process was performed by analytical and/or preparative HPLC, in gradient of acetonitrile and water as mobile phase, which led to the isolation of the cyclotides. The amino acid sequence (primary structure) of the isolated compounds was established by MALDI-TOF/TOF by reduction and alkylation reactions as well as enzymatic digestion using the enzymes: endoproteinase glutamic acid (endoGlu-C), trypsin and chymotrypsin. Also, the quantification of each amino acid present in the cyclotide structures was performed, and this amino acid analysis was fundamental for the characterization of these substances. Therefore, this research resulted in the isolation of the six compounds accumulated in the branches, and 3 of them were also found in the leaves. A complete analysis of all peptides suggested that seven are cyclotides, while two of them were common for both twigs and leaves tissues. Until now it was possible to determine the primary structure of four cyclotides, which is being described in plants for the first time: The cyclotides Nor B (F20-2 substance), molecular weight 3180.416 Da, Nor C (F20-3 substance), molecular weight 3282.472 Da, Nor D (substance F17-1), molecular mass 3249.474 Da Nor E (F21-1 substance), molecular weight 3170.472 Da. All these cyclotides are being reported for the first time in this study, however, 3 of these are currently under further analytical studies aimed at the complete structural characterization. / CNPq: 133418/2014-6

O sucesso da terapia endodôntica depende da limpeza, anti-sepsia, escultura e obturação hermética dos canais radiculares, no entanto, o preparo biomecânico não gera redução microbiana suficiente na totalidade dos casos. Devido à inconfiabilidade inerente ao tratamento, parte dos casos ainda resulta em insucesso. As pastas de hidróxido de cálcio vêm sendo empregadas com a finalidade de ampliar a eficiência anti-séptica do tratamento dos canais radiculares além de estimular a recuperação dos tecidos afetados pela infecção endodôntica. O digluconato de clorexidina tem sido empregado na endodontia devido ao amplo espectro de ação principalmente contra \"Enterococcus faecalis\" e \"Candida albicans\" e vem sendo adicionado às pastas de hidróxido de cálcio uma vez que as virtudes de um complementam as deficiências do outro. No entanto, devido à estrutura molecular da clorexidina e aos níveis elevados de pH promovidos pelo hidróxido de cálcio, há indícios de risco sistêmico na sua utilização por causa da provável decomposição da clorexidina em radicais livres e para-cloroanilina que está classificada como possível agente carcinogênico em humanos pela IARC. O presente estudo teve como objetivo investigar quimicamente, por meio da Espectrometria de Massas (ESI-TOF-MS) e Cromatografia Líquida (HPLC), a solução de digluconato de clorexidina a 0,2% isolada ou misturada ao hidróxido de cálcio. As análises foram realizadas logo em seguida ao preparo das amostras e após os períodos de 7 e 14 dias de armazenamento à temperatura de 36,5 ºC. Constatou-se que a solução de digluconato de clorexidina isolada foi decomposta em diferentes subprodutos, inclusive em para-cloroanilina oferecendo riscos sistêmicos. Em contato com o hidróxido de cálcio, a decomposição da clorexidina é total com formação de diferentes compostos. Apesar de não ter sido demonstrada a presença de para-cloroanilina na pasta medicamentosa, o elevado número de espécies reativas possui alto potencial de dano sobre o material genético das células do paciente afetadas pela medicação intracanal. É imperativo estabelecer vínculos diagnóstico-terapêuticos precisos por meio do desenvolvimento de protocolos clínicos que restrinjam o uso dessas medicações intracanais a quadros clínicos com infecção endodôntica disseminada e periodontites apicais persistentes. É necessário desenvolver estratégias mais eficientes que utilizem processos biomecânicos de maior eficácia e medicações intracanais efetivas que não ofereçam riscos locais e sistêmicos para que se contemplem os objetivos do tratamento dos canais radiculares com previsibilidade e segurança. / The success of endodontic therapy depends upon root canal cleanliness, antisepsis, sculpture, and hermetic obturation. However, biomechanical preparation does not always provide an adequate microbial reduction. Due to the inherent unreliability of the treatment, some cases still are unsuccessful. Calcium hydroxide pastes have been used with the aim to improve antisepsis effectiveness in root canal treatments, in addition to stimulating the recovery of tissues affected by endodontic infection. Chlorhexidine digluconate has been used in endodontics due to its broad action spectrum, mainly against \"Enterococcus faecalis\" and \"Candida albicans\", and has been added to calcium hydroxide pastes so that the advantages of one would compensate for the other\'s deficiencies. However, the structure of the chlorhexidine molecule in addition to the high pH values promoted by calcium hydroxide pose a systemic risk in its use due to the likely decomposition of chlorhexidine into free radicals and para-chloroaniline, which International Agency for Research on Cancer (IARC) has classified as a possible carcinogenic agents in humans. The purpose of the present study was to perform a chemical analysis of chlorhexidine digluconate at 0.2%, isolated or mixed to calcium hydroxide, using Mass Spectrometry and High- Efficiency Liquid Chromatography. The analyses were performed shortly after the samples were prepared, and after 7 and 14 days of storage at 36.5 ºC. It was found that the isolated chlorhexidine digluconate solution formed different byproducts, including para-chloroaniline, posing systemic risks. In contact with calcium hydroxide, chlorhexidine decomposes completely and forms different compounds. Though the study did not demonstrate the presence of para-chloroaniline in the medication paste, the high number of reactive species poses a high risk over the genetic material of the host cells affected by intracanal medication. It is mandatory to establish a precise diagnostic-therapeutic relation by developing clinical protocols that would restrict the use of these intracanal medications to clinical conditions with disseminated endodontic infection and persistent apical periodontitis. There is a need for more efficient strategies that use more effective biomechanical processes and intracanal medications that do not offer any local or systemic risk so root canal treatment goals can be considered with predictability and safety.

A depressão, tida como a doença do final do século XX, acarreta diversos distúrbios físicos, mentais e emocionais. Amitriptilina,. imipramina, nortriptilina e desipramina são antidepressivos tricíclicos (ADT) largamente usados no tratamento de desordens depressivas. Os ADT são fármacos que apresentam alta variabilidade interindividual na farmacocinética e resposta clínica não facilmente ou não imediatamente mensurável. Assim faz-se necessário o desenvolvimento e validação de métodos analíticos capazes de determinar com a devida confiabilidade suas concentrações em amostras de plasma. Os métodos desenvolvidos possuem uma etapa de extração para posterior separação e quantificação. Os métodos de extração avaliados foram a extração líquido-líquido (LLE) e a microextração em fase sólida (SPME). As técnicas usadas para separação e quantificação foram cromatografia líquida (LC) e eletroforese capilar (CE). Dois métodos foram desenvolvidos e validados: LLE/LC e LLE/CE. Usando uma fibra com recobrimento PDMS 100 mm, um método SPME/LC (modo de dessorção off-line) foi desenvolvido e os parâmetros relativos a SPME foram otimizados fazendo uso de planejamento fatorial (23) e simplex. Usando as mesmas condições otimizadas para a fibra PDMS testou-se uma fibra PDMS/DVB 65 mm. Avaliou-se a CE para a determinação dos ADT em formulações farmacêuticas e o comportamento eletroforético destes compostos em diferentes meio (água, metanol e acetonitrila) foi avaliado. De acordo com os parâmetros avaliados (linearidade, precisão (intra e inter ensaios), recuperação, limites de quantificação (LOQ) e detecção) ambos os métodos (LLE/LC e LLE/CE) mostraram-se aplicáveis para a determinação dos ADT em níveis plasmáticos. O método SPME/LC (off-line) que fez uso da fibra com recobrimento PDMS/DVB apresentou LOQ suficientemente baixos para determinar os ADT em concentrações plasmáticas, apesar de consumir um tempo maior para execução, quando comparado aos métodos LLE/LE e LLE/CE. A validação e aplicação de um método fazendo uso de CE para a análise dos ADT em formulações farmacêuticas mostra a aplicabilidade desta técnica para análises de rotina. Determinou-se por CE o pKa* dos ADT em água, metanol e ACN. A ordem dos valores obtidos em meio aquoso e metanólico é inversa em relação a ordem obtida em ACN. Assim, pôde-se correlacionar a carga das espécies em cada condição de análise com a ordem de migração dos ADT em cada meio. / Depressive disorders imply in a variety of physical, mental and emotional disturbances. Amitriptyline, imipramine, nortriptyline e desipramine are tricyclic antidepressants (TAD) largely used in depression treatment. The TADs are drugs that show high inter individual variability in pharmacokinetics, low clinical response or even they are not straightforwardly measured. Therefore, it is necessary the development and validation of analytical methods for TAD determination in plasma samples. The developed methods have an extraction step for subsequently separation and quantification. The extraction methods appraised were liquid-liquid extraction (LLE) and solid phase microextraction (SPME). The analytical techniques used for separation and further quantification were liquid chromatography (LC) and capillary electrophoresis (CE). Two methods were developed and validated: LLE/LC and LLE/CE. Using a PDMS coating (100 mm), a SPME/LC method (with off-line dessorption) was developed and the experimental conditions relative to SPME were optimized using a factorial planning (23) and a simplex methodology. The same optimized conditions (for PDMS) were used for a PDMS/DVB (65 mm) coating. According to the appraised parameters such as linearity, precision (intra and inter assays), recovery and limits of quantification and detection, the methods LLE/LC and LLE/CE showed suitable for TAD determination in plasma samples regarding the therapeutic plasmatic concentration. The SPME/LC method (off-line desorption) with PDMS/DVB coating has also shown LOQ lower than the minimum therapeutic plasmatic concentration, implying that may be subject to validation. This method may be used for TAD analysis even though the total analysis time was greater those from LLE/LC and LLE/CE methods. CE was also applied for TAD determination in pharmaceutical formulations and the electrophoretic behavior such compounds in different separation media, especially non-aqueous solvents, was studied. The validation and application of a method using CE for TAD determination in pharmaceutical formulations has shown the applicability of this technique for routine analysis. The migration order in aqueous and methanolic media is opposite to obtained in acetonitrile, and the pKa* of the TAD were determined in different media (aqueous, methanol and acetonitrile) by CE. With the calculated values, it was possible to correlate the species total charge to the migration order in each medium.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-02Bitstream added on 2014-06-13T20:37:35Z : No. of bitstreams: 1 paz_ta_me_araiq.pdf: 1193700 bytes, checksum: 6489d53c5b06afd24ac5bdf2e56d9611 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve como objetivo estabelecer metodologia de cultivo e produção de células e/ou órgãos in vitro da espécie Salacia campestris com vista à obtenção de triterpenos quinonametídeos. Para isso, aplicando-se técnicas biotecnológicas, diversas tentativas de inserir a espécie in vitro foram realizadas utilizando explantes de folhas (limbo foliar e pecíolo), endosperma e sementes. Raízes obtidas in vitro foram cultivadas por 105 dias, sendo a presença e o teor de triterpenos quinonametídeos avaliados no decorrer deste período. Sistemas radiculares de plantas jovens (1 ano) cultivadas em casa de vegetação e sistemas radiculares de plantas adultas foram também analisadas quanto à presença e teor de triterpenos quinonametídeos. Foram utilizadas técnicas cromatográficas e de espetrometria de massas (EM) para a detecção e identificação de 22β-hidroximaitenina, maitenina e netzahualcoieno. Os ensaios citotóxicos in vitro foram realizados, como os dois últimos quinonametídeos, frente à linhagem de células normais 3T3 (fibroblasto) e de células tumorais HeLa (cólon de útero) e B16-F10 (melanoma murino). A partir de explantes de endosperma inoculados em meio de cultura WPM, suplementado com 20 g/L de sacarose, acrescido com 4,0 mg/L de AIB (ácido indolbutírico) e 100 mg/L de PVP (polivinilpirrolidona), foram obtidas raízes in vitro. A partir dos estudos fitoquímicos foram detectados e identificados, nas raízes in vitro e em sistemas radiculares de plantas cultivadas em casa de vegetação, os triterpenos quinonametídeos maitenina e 22β-hidroximaitenina, enquanto que nos sistemas radiculares coletados em campo foram identificados os triterpenos maitenina e netzahualcoieno. O isolamento dos três triterpenos citados também foi realizado. Para as raízes cultivadas... / This work aimed to establish a methodology of cultivation and production of in vitro cells and /or organs of Salacia campestris, trying to obtain the quinone-methide triterpenes. Based on this and applying biotechnological techniques, several attempts to insert this species in an in vitro system were performed using leaf explants (leaf and petiole), endosperm and seeds. The in vitro roots obtained were cultured for 105 days, and the presence and content of quinone-methide triterpenes were evaluated during this period. The roots of young plants (1 year) grown in a greenhouse as well roots of adult plants were also analyzed for the presence and content of the quinone-methides. The analysis of the quinone-methides were performed using chromatographic techniques and mass spectrometrometry (MS) led to the identification of 22β-hydroxymaytenin, maytenin and netzahualcoyene. The in vitro cytotoxic assays were performed using the quinone-methides maytenin and netzahualcoyene, comparing with the normal cell line 3T3 (fibroblast) as well the HeLa tumor cells (uterus carcinoma) and B16-F10 (murine melanoma). The in vitro roots were obtained from endosperm explants, inoculated in WPM medium supplemented with 20 g/L sucrose, 4.0 mg/L IBA (indole-butyric acid) and 100 mg/L PVP (polyvinylpyrrolidone). The phytochemical studies of the in vitro roots and roots of plants grown in a greenhouse resulted in the identification of the quinone-methide triterpenes maytenin and 22β-hydroxymaytenin, while from the natural roots were identified the quinone-methides maytenin and netzahualcoyene. All of the triterpenes were also isolated. The results obtained for in vitro roots indicated that the greatest accumulation of biomass occurred on the 60th day of culture and the highest levels of maytenin (972.11 mg/g) and ... (Complete abstract click electronic access below)

Valdecoxib is a non-steroidal anti-inflammatory drug that represents a second-generation of cyclooxygenase-2 enzyme inhibitor and possesses anti-inflammatory, analgesic and antipyretic activities. In this work a reversed-phase liquid chromatography procedure was developed and validated for the quantitative determination of valdecoxib in solid dosage forms and dissolution studies, and the evaluation of the sub-acute effects on the hematological parameters of animal model as well. Valdecoxib samples were also submitted to the physicochemical tests, meeting the specifications. The identification and quantitation analyses were performed by liquid chromatography on a Synergi fusion C18 column (150 mm x 4.6 mm i.d.; 4 µm particle size), held at 30º C. The mobile phase consisted of water, pH 7.0/acetonmitrile (52:48, v/v), with run at a flow rate of 1.0 mL/ min, with UV detection at 210 nm. The method was validated evaluating parameters such as the specificity, sensitivity, linearity (r2=0.9999), range, precision, accuracy, and robustness. The dissolution test was developed with 0.5% of sodium lauryl sulfate in water as dissolution medium using an apparatus paddle at a stirring rate of 75 rpm and quantitation by liquid chromatography. The effects of valdecoxib on the hematological parameters were evaluated by the prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (APTT), levels of fibrinogen, platelet count, anti-factor Xa and anti-factor IIa activity. The results of the APTT, PT and anti-factor Xa activity showed, preliminary, that valdecoxib could increase the risk of thromboembolic complications, thus the procedures and evaluations carried out can be helpful to understand the side effects and safe use of the drug improving the quality control of the pharmaceutical product. / O valdecoxibe é um medicamento antiinflamatório não esteroidal, que representa a segunda geração dos inibidores seletivos da enzima cicloxigenase-2 e apresenta atividades antiinflamatória, analgésica e antipirética. No presente trabalho desenvolveu-se e validou-se método por cromatografia líquida em fase reversa para determinação quantitativa de valdecoxibe em produtos farmacêuticos e estudos de dissolução, bem como se avaliaram efeitos sub-agudos sobre parâmetros hematológicos em modelo animal. Submeteram-se os produtos aos testes físico-químicos, mostrando que cumprem as especificações. Realizaram-se análises de identificação e quantificação, por cromatografia líquida em coluna Synergi fusion® C18 (150 mm x 4,6 mm, 4 m) mantida à temperatura de 30 ºC. A fase móvel constituída de água pH 7,0:acetonitrila na proporção de 52:48 (V/V) foi eluída à vazão de 1,0 mL/min, com detecção no ultravioleta a 210 nm. O método foi validado demonstrando especificidade, sensibilidade, linearidade, precisão, exatidão e robustez. Desenvolveu-se método de dissolução do fármaco, utilizando como meio 900 mL de solução aquosa de lauril sulfato de sódio 0,5% mantido a 37 ± 0,5 ºC, aparato 2, rotação de 75 rpm e quantificação por cromatografia líquida. Avaliaram-se também os efeitos sobre parâmetros hematológicos, usando os métodos laboratoriais baseados no tempo de protrombina (TP), tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), dosagem de fibrinogênio, contagem de plaquetas, atividade anti-fator Xa e anti-fator IIa. Os dados fornecidos pelo TTPA, TP e atividade anti-fator Xa mostraram preliminarmente, que o valdecoxibe poderia causar aumento da incidência de eventos trombóticos. Desse modo, estabeleceram-se procedimentos e avaliações que contribuem para aprimorar as áreas de tecnologia farmacêutica e controle da qualidade, bem como garantir a segurança e eficácia no uso terapêutico.

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No. of bitstreams: 1 ROSA_Wesley_2016.pdf: 8516860 bytes, checksum: ee5a7fd54adf8975660601cc883291f2 (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Não recebi financiamento / The need to obtain biomaterials in order to reduce environmental impacts has been the focus of research groups in recent years, and cellulose, a dominant component at most forms of plants is a promising resource because of its abundance. In order to improve the ability processing, the chemical modification of cellulose has been widely studied. Among the most important reactions of cellulose are: etherification, esterification, acetylation and oxidation; being cellulose acetate, viscose, nitrocellulose and cellulose ethers, the main cellulose derivatives. The chemical modification with isocyanates presents some unique properties, such as absence of by-products and chemical stability of the urethane group. In this work we were synthesized gels obtained by modified cellulose acetate (CA) with a degree of substitution (DS) 2,5 by crosslinking, with 4,4' - Diphenylmethane diisocyanate (MDI) in stoichiometry of 1:1, in homogeneous by varying the humidity and the homogenization time. For characterization were used the following techniques and tests: vibrational infrared absorption spectroscopy (Fourier Transform Spectrometer - FTIR), size exclusion Chromatography (SEC), molecular absorption spectrophotometry UV-VIS, density determining of the gels by pycnometry, determination of the coefficient swelling, determination of cross-links by Flory-Rehner theory, thermogravimetry (TG) and scanning electron microscopy (SEM). Crosslink density results showed that the gel synthesized in the absence of moisture suffered greater crosslinking with an average number of repeat units between the crosslinking points of about 1000 times lower. The potential applications of these gels were tested, by using than as stationary phase in size exclusion chromatography, having been assessed its efficiency in the fractionation and separation of natural and synthetic polymers. Results showed the effectiveness of the gel as stationary phase on separation of polymers, opening up a range of opportunities, taking into consideration the simplicity of the process and lower costs attributed to it. / A necessidade de se obter biomateriais na tentativa de reduzir impactos ambientais tem sido o foco de grupos de pesquisa nos últimos anos e, a celulose, um componente dominante na maioria das formas de plantas, é um recurso promissor devido à sua abundância. A fim de melhorar a capacidade de processamento, a modificação química da celulose tem sido amplamente estudada. Dentre as reações mais importantes da celulose estão: eterificação, esterificação, acetilação e oxidação; sendo o acetato de celulose, viscose, nitrocelulose e éteres de celulose, os principais derivados da celulose. A modificação química com isocianatos apresenta algumas propriedades únicas, como ausência de produtos secundários e estabilidade química do grupo uretano. Nesse trabalho foram sintetizados géis obtidos por meio da modificação de Acetato de Celulose (AC) com grau de substituição (GS) 2,5 através da reticulação com 4,4' - Difenilmetano Diisocianato (MDI), na estequiometria 1:1, em meio homogêneo, variando a umidade e o tempo de homogenização. Para caracterização foram utilizadas as seguintes técnicas e ensaios: espectroscopia vibracional de absorção no infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR), cromatografia de exclusão por tamanho (SEC), espectrofotometria de absorção molecular UV-VIS, determinação de densidade dos géis por picnometria, determinação do coeficiente de intumescimento, determinação de ligações cruzadas pela teoria de Flory-Rehner, termogravimetria (TG) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Resultados da densidade de ligações cruzadas mostraram que o gel sintetizado na ausência de umidade sofreu uma maior reticulação, com um número médio de unidades de repetição entre os pontos de reticulação cerca de 1000 vezes menor. As aplicações potenciais desses géis foram testadas como fase estacionária em cromatografia de exclusão por tamanho, tendo sido avaliada sua eficiência no fracionamento e separação de polímeros naturais e sintéticos. Resultados mostraram a eficácia do gel como fase estacionária na separação de polímeros, abrindo uma gama de oportunidades, levando-se em consideração a simplicidade do processo e os baixos custos a ele atribuídos.