As síndromes mielodisplásicas (SMD) constituem um grupo heterogêneo de doenças hematológicas de origem clonal, caracterizado por hematopoese ineficaz, citopenia e risco de evolução para leucemia mieloide aguda (LMA). As anormalidades citogenéticas adquiridas são marcadores prognósticos bem estabelecidos em SMD. No entanto, a técnica de citogenética metafásica apresenta limitações, incluindo baixa resolução e necessidade de divisão celular, sendo que defeitos cromossômicos podem não ser detectados. Tecnologias baseadas em microarranjo (array) de DNA, como o Single Nucleotide Polymorphism Array (SNP-A), são importantes para avaliação do genoma normal e neoplásico. O SNP-A foi desenvolvido para o estudo de todo o genoma, apresenta uma resolução superior a citogenética metafásica convencional, pode ser realizado em células na interfase, e detecta alterações cromossômicas não visualizadas pela citogenética metafásica. Além disso, o SNPA fornece dados de genotipagem para detecção de perda neutra de heterozigose, também denominada de dissomia uniparental somática. Regiões cromossômicas com deleção, perda neutra de heterozigose ou ganho são comuns em pacientes com neoplasias hematológicas e sugeriu genes candidatos a supressores de tumor e oncogenes. O objetivo do presente estudo foi a caracterização da coorte de pacientes com suspeita clínica de SMD e o uso integrado do método de citogenética convencional e SNP-A no serviço de hematologia da nossa instituição na investigação de alterações citogenéticas em pacientes com SMD e doenças relacionadas. Durante o período do estudo, foram recebidas um total de 114 amostras de pacientes com suspeita clínica de SMD. A análise clínica, morfológica e citogenética permitiu confirmar o diagnóstico de SMD ou doenças relacionadas em 43 pacientes (SMD [n=34], SMD/NMP [n=5], LMA com alterações mielodisplásicas [n=4]). Vinte e um pacientes foram classificados como citopenia idiopática de significado indeterminado (CISI) e 50 indivíduos apresentaram outros diagnósticos. SNP-A foi realizado em 17 pacientes com SMD e doenças relacionadas. Dentre os pacientes selecionados para o SNP-A, anormalidades cromossômicas foram observadas em 6/17 (35%) casos pelo cariótipo convencional e em 8/17 (47%) casos pela técnica de SNP-A. SNP-A não detectou quatro alterações cromossômicas previamente identificadas pela citogenética convencional: duas translocações balanceadas e duas alterações numéricas. SNP-A confirmou os demais achados identificados pela citogenética convencional e detectou um total de 32 novas lesões (1 ganho, 19 perdas e 12 UPDs) em 6 pacientes com SMD ou doenças relacionadas. SNP-A pode complementar a citogenética convencional na detecção de anormalidades cromossômicas em neoplasias mieloides. / Myelodysplastic syndromes (MDS) are a heterogeneous group of clonal hematopoietic diseases, characterized by inefficient hematopoiesis, peripheral blood cytopenias and a risk to progress to acute myeloid leukemia (AML). Acquired chromosomal abnormalities have prognostic value in MDS. However, metaphase cytogenetics has some limitations including low resolution and the requirement of cell division, and chromosomal abnormalities may not be detected. New technologies based on array, the Single Nucleotide Polymorphism Array (SNP-A), are able to evaluate the whole genome. The SNP-A has superior resolution compared to metaphase cytogenetics, may be used in interphase cells, and may detect chromosomal abnormalities not detected by metaphase cytogenetics. In addition, the SNP-A read-out includes genotyping calls and hybridization signal strength, corresponding to gene copy number, allowing detecting copy neutral loss of heterozigosity (CN-LOH), also known as uniparental dissomy (UPD). Deletions, copy neutral loss of heterozigosity or gain are frequent in patients with haematopoietic neoplasms and has already suggested the location of tumor suppressor genes and oncogenes. The aim of this study was to characterize the cohort of patients with clinical suspicion of MDS and to establish the integrative use of the conventional cytogenetic and the SNP-A in the investigation of chromosomal abnormalities in patients with MDS and related diseases followed at our institution. The clinical, morphological and cytogenetic evaluation allowed us to confirm the diagnosis of MDS or related disease in 43 patients (MDS [n=34], MDS/MPN [n=5], AML with myelodysplastic changes [n=4]). Twenty-one patients were diagnosed with idiopathic cytopenia with undetermined significance (ICUS) and 50 patients had other diagnosis. SNP-A were performed in 17 patients with MDS and related disease. Chromosomal abnormalities were observed in 6/17 (35%) cases by metaphase cytogenetics, and in 8/17 (47%) of the cases by SNP-A. SNP-A did not detected two balanced translocations and two numerical alterations previously observed by metaphase cytogenetics. SNP-A confirmed all the other findings observed by metaphase cytogenetics and SNP-A detected a total of 32 new lesions (1 gain, 19 losses and 12 UPDs) in 6 MDS and related diseases. SNP-A may complement metaphase cytogenetics to improve the detection of chromosomal abnormalities in myeloid neoplasms.

A medida da translucência nucal (TN) entre 11 e 14 semanas de gestação é um exame ultra-sonográfico que mede a camada líquida na região cervical posterior do feto, sendo observado um aumento de espessura nas anomalias cromossômicas, especialmente na trissomia 21. Com sua crescente utilização, outras anormalidades fetais têm sido descritas em associação a um aumento da TN. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho da medida da TN na detecção de diferentes anomalias fetais e outros efeitos adversos para a gestação. Realizou-se de um estudo observacional, no período de 1996 a 2004, com gestantes avaliadas no Ambulatório de Aconselhamento Genético para Diagnóstico Pré-natal do Hospital de Clínicas de Porto Alegre por risco aumentado de anomalia congênita, e que haviam realizado a medida da TN. Foram consideradas adequadas as TN realizadas de acordo com a padronização da Fundação de Medicina Fetal de Londres, e aumentadas aquelas TN com valor cima do percentil 95 para idade gestacional. Das 443 gestantes avaliadas, 38 seguimentos foram perdidos, 4 gestações estavam em curso na análise final dos dados, finalizando 401 gestações com desfecho conhecido. Em 275 gestações com TN adequada, a medida aumentada foi significativamente associada a anormalidades congênitas em geral (p 0,000000), cromossomopatias (p 0,000059) e perdas gestacionais (p 0,000000), sendo aumentada em oito dos 14 casos de cromossomopatia e em 6/7 dos casos com Síndrome de Down. Por outro lado, no grupo das TN inadequadas (126 casos), a associação entre TN aumentada não foi significativa para defeitos congênitos em geral (p 0,641396), nem para cromossomopatias (p 0,329194) ou perdas gestacionais (p 0,096092). Especificamente com relação aos erros inatos do metabolismo (EIM) no feto, foram localizados relatos e séries de casos com TN aumentada em dez diferentes EIM. Nas dezenove gestantes com história familiar de EIM e com medida da TN, houve um caso de uma menina afetada por MPS I com TN aumentada, e um de Raquitismo Resistente à Vitamina D com TN normal. Nos outros 17 casos, a medida da TN foi normal e não havia evidência de um EIM. Entre as novas associações de TN aumentada com síndromes genéticas, relatamos um paciente com Síndrome de Artrogripose, Anomalia renal e Colestase (ARC), cuja análise molecular na Universidade de Birmingham identificou uma mutação sem sentido (1518C>T) em homozigose no gene VPS33B. Concluiu-se que o desempenho da TN na detecção de anomalias congênitas depende da qualidade do exame, sendo que uma medida adequada aumentada está significativamente associada a defeitos congênitos, cromossomopatias e a outros desfechos gestacionais adversos, e que a sensibilidade da TN é especialmente elevada na detecção da síndrome de Down.

Com o desenvolvimento da citogenética convencional, a partir da metade do século passado, houve um enorme crescimento no entendimento da etiologia das síndromes malformativas, sendo as anomalias cromossômicas reconhecidas como a causa genética mais freqüente dos defeitos congênitos. Assim sendo, a investigação de aberrações cromossômicas através do cariótipo se tornou uma rotina na investigação das malformações e de outras condições. Desde os anos 70, quando o diagnóstico pré-natal para a detecção de anomalias cromossômicas no feto foi estabelecido, este tem se tornado uma prática usual em muitos países, e uma importante ferramenta para o aconselhamento genético. A introdução da ultra-sonografia pré-natal na obstetrícia permitiu a identificação precoce de fetos com malformações, os quais têm grande probabilidade de serem portadores de alguma anormalidade cromossômica. O conhecimento da etiologia de sua doença é fundamental para diminuir a ansiedade da família e para tomada de decisões sobre a gestação em curso e sobre gestações futuras. Foi realizado um estudo retrospectivo de 18 anos (1989-2007) que teve como objetivos gerais: estimar a freqüência das anormalidades cromossômicas mais comuns através do cariótipo convencional e suas indicações para as gestantes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (artigo 1). Embora o cariótipo seja considerado o exame padrão ouro para este tipo de investigação, o mesmo possui algumas limitações. Entre elas se destaca a dependência de uma cultura de células, o que significa uma espera de 10 a 14 dias para se obter um resultado, tempo este precioso para a família e para a gestante. Além disto, corre-se o risco de perda da cultura por contaminação ou falta de crescimento celular, e com isso nenhum resultado é atingido, permanecendo a família sem um esclarecimento sobre a situação. Na tentativa de solucionar estes problemas, nesta tese, também foi proposta uma continuação do estudo (de 2006 a 2008) em fetos com múltiplas malformações, para testar a aplicação de técnicas moleculares, como QF-PCR e MLPA em diferentes materiais fetais (artigo 2). Ainda, quando a coleta de materiais tradicionais como líquido amniótico, ou biópsia de vilosidades coriônicas, eram impossíveis de se coletar por alguma dificuldade, incluindo os problemas morfológicos do feto, materiais alternativos, como urina, foram obtidos para se testar sua utilidade para se atingir o diagnóstico citogenético. Os achados citogenéticos relatados no artigo 1 foram compatíveis com os da literatura, sendo a trissomia do 21 a anormalidade cromossômica mais freqüentemente detectada no pré-natal. Entretanto, como o risco de recorrência desta síndrome foi zero neste estudo, um filho anterior com síndrome de Down foi considerado uma indicação fraca, sendo priorizadas para a realização do exame outras famílias carentes de maior risco. Por outro lado, com a técnica de MLPA (artigo 2) não foram obtidos resultados satisfatórios, provavelmente porque as amostras não permitiam obter DNA na qualidade necessária para esse procedimento. Com a técnica de QF-PCR pode-se obter 30 resultados (alguns parciais) nas 50 amostras coletadas. O estudo citogenético convencional de 13 amostras em que materiais diversos dos usuais foram empregados teve 100% de sucesso. Com a aplicação desse arsenal de técnicas, a chance de se obter uma informação citogenética ficou bem maior, diminuindo a ansiedade do casal e auxiliando nas suas decisões reprodutivas. / With the development of conventional cytogenetic techniques, since the second half of the last century, there was an enormous growth in knowledge of the etiology of malformed syndromes, being the chromosomal abnormalities considered the most common genetic causes of congenital defects. Therefore, the investigation of chromosomal aberrations by karyotype became a routine in the investigation of the malformations and many other conditions. Since the 70's, when prenatal diagnosis to detect chromosomal abnormalities in the fetus was set up, this became usual practice in many countries, and an important tool for genetic counseling. The introduction of the ultrasound in the obstetrician practice allowed the early identification of the malformed fetus, which has a great probability of being a carrier of some chromosomal aberration. The knowledge of the etiology of the disease is essential to reduce the anxiety of the family and to plan future pregnancies. From 1989 to 2007, 905 pregnant women from Hospital de Clinicas de Porto Alegre had an investigation for their fetus conditions by conventional karyotypes. With this information, a study was made which the main objectives were: to estimate the frequency of the most common chromosomal abnormalities and to estimate the most frequent indications that lead those women to make this invasive procedure (manuscript 1). Although the karyotype is considered the gold standard test for this type of research, it has some limitations, among them: the necessity of a cell culture, which means an expected time between 10 to 14 days to obtain the desired result, and time is a very precious aspect in pregnancy. Moreover, there is a risk of loss of culture because of contamination or lack of cell growth, leaving the family without a result. In an attempt to solve these problems, we proposed another study (from 2006 to 2008) to check the application of molecular techniques such as MLPA and QF-PCR in different malformed fetal materials (manuscript 2). Still, when the collection of traditional materials such as amniotic fluid, blood cord or chorionic villus biopsy were impossible to collect because of morphological problems on the malformed fetus, other alternative materials such as urine or intraperitoneal fluid were collected in an attempt to test these materials as a manner to reach the cytogenetic diagnosis. Our cytogenetics findings were similar to the literature, being trisomy 21 the most frequent chromosomal abnormalities. On the other hand, we did not find any recurrent case of this syndrome, so the indication for doing the exam, as having a previous child with Down syndrome, stayed as a weak indication that comes after others priorities, like pregnancies with greater risks. When we tried to introduce the MLPA technique, we did not achieve satisfactory results, probably because the samples were not suitable for good quality of DNA extraction. We then applied QF-PCR, and obtained 30 results (some partials) from 50 samples collected. The karyotype results of 13 samples from additional materials, not commonly used elsewhere, achieved 100% of success. With all these alternatives techniques, the chance to achieve a diagnosis was much higher, reducing the anxiety of the couple and helping the family to make decisions for futures pregnancies.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-02-14T15:49:11Z No. of bitstreams: 1 Tese MARCOS DA COSTA SILVA.pdf: 2300719 bytes, checksum: 16090000ed4ce64993380a1d56d78866 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T14:00:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese MARCOS DA COSTA SILVA.pdf: 2300719 bytes, checksum: 16090000ed4ce64993380a1d56d78866 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T14:00:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese MARCOS DA COSTA SILVA.pdf: 2300719 bytes, checksum: 16090000ed4ce64993380a1d56d78866 (MD5) / CAPES / A Leucemia Linfóide Crônica (LLC) tem origem nos linfócitos B, derivada de uma única célula transformada devido a alterações genômicas, aumentando a resistência à apoptose. Essas células acumulam-se no sangue, medula óssea e órgãos linfoides secundários muitas vezes passando de 10.000 células/mm3 de sangue resultando em anormalidades imunológicas. Mais de 99% dessas células circulantes estão na fase G0 do ciclo celular. É uma doença de maior prevalência no idoso, com médias de idade entre 64-70 anos. Células LLC geralmente co-expressam antígenos de células T e B em sua superfície e esses marcadores são úteis para o diagnostico da LLC através da imunofenotipagem. É frequente, na prática clinico-laboratorial, resultados inconclusivos para LLC, chamadas de LLC atípicas isso ocorre, principalmente devido a resultados limítrofes na imunofenotipagem. Outra técnica utilizada no diagnóstico e prognóstico da LLC é a análise de alterações cromossômicas através da Hibridação In Situ por Fluorescência (FISH). É uma alternativa para elucidação dos casos inconclusivos. Pacientes com aberrações têm sobrevida menor que aqueles com cariótipo normal. Devido a isso objetivou-se estudar a ocorrência da LLC no Estado da Bahia e as características dos indivíduos com laudo de LLC atípica, quanto ao perfil imunofenotípico , a presença de aberrações cromossômicas incluindo os genes da família NTRK, produção de citocinas e vitamina D. Entendimento que poderá auxiliar no desenvolvimento de políticas publicas para a terceira idade no Estado. Foi observado nas amostras analisadas no estudo a ocorrência de 22% de LLC, sendo que, 8% corresponde a LLC atípica. O gênero feminino foi o menos acometido, possivelmente associado aos hormônios sexuais. O trabalho mostrou a importância do uso do FISH, pois solucionou 87% dos casos atípicos sendo que a aberração mais freqüente foi a translocação 11:14 associada ao linfoma do manto. A IL-17 A mostrou-se um possível marcador de evolução clínica da doença. TNF e IFN- mostraram-se marcadores de pior prognóstico. Além disso, a diminuição dos níveis de vitamina D como um sinal de pior prognóstico. Foi observado no trabalho a presença de alterações cromossômicas nos genes da família NTRK, NTRK1 e NTRK3 correspondendo a 24%. O conjunto desses resultados amplia os conhecimentos sobre a LLC além de possibilitar para os pacientes, quando possível, mudanças na conduta terapêutica. / Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) originates from B lymphocytes, derived from a single cell transformed due to genomic changes, increasing resistance to apoptosis. These cells accumulate in the blood, bone marrow and secondary lymphoid organs often passing from 10,000 cells / mm3 of blood resulting in immunological abnormalities. More than 99% of these circulating cells are in the G0 phase of the cell cycle. It is a disease of higher prevalence in the elderly, with a mean age of 64-70 years. LLC cells generally co-express T-cell and B-cell antigens on their surface and such markers are useful for the diagnosis of CLL by immunophenotyping. In clinical-laboratory practice, inconclusive results for CLL, often called atypical CLLs, are common, mainly due to borderline immunophenotyping results. Another technique used in the diagnosis and prognosis of CLL is the analysis of chromosomal changes through Fluorescence In Situ Hybridization (FISH). It is an alternative for the elucidation of inconclusive cases. Patients with aberrations have a lower survival rate than those with normal karyotype. Due to this, we aimed to study the occurrence of CLL in the State of Bahia and the characteristics of individuals with atypical CLL, regarding the immunophenotypic profile, the presence of chromosomal aberrations including the NTRK family genes, cytokine and vitamin D production. Understanding that may assist in the development of public policies for the elderly in the State. The occurrence of 22% of CLL was observed in the samples analyzed in the study, and 8% corresponded to atypical CLL. The female gender was the least affected, possibly associated with sex hormones. The work showed the importance of using FISH, since it solved 87% of atypical cases and the most frequent aberration was the 11:14 translocation associated with mantle lymphoma. IL-17A was shown to be a possible marker of clinical evolution of the disease. TNF and IFN-γ were shown to be worse prognostic markers. In addition, the decrease in vitamin D levels as a sign of worse prognosis. The presence of chromosomal alterations in the NTRK, NTRK1 and NTRK3 family genes, corresponding to 24%, was observed in the study. Together, these findings broaden the understanding of CLL and make it possible for patients, when possible, to change their therapeutic behavior.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 1123.pdf: 756167 bytes, checksum: 8f26768ca765a03dc831882c78fe60fa (MD5) Previous issue date: 2007 / Durante as últimas décadas, biomarcadores citogenéticos em linfócitos de sangue periférico têm sido usados para avaliar a exposição ocupacional a agentes carcinogênicos ou mutagênicos. A preocupação sobre os efeitos dos agentes genotóxicos nas populações humanas expostas ocupacionalmente, acidentalmente oupor estilo de vida tem crescido. Alterações cromossomiais induzidas em linfócitos humanos são biomarcadores bem eselecidos de exposição ocupacional e ambiental a agentes genotóxicos. Participaram do estudo trabalhadores de um Estaleiro e de umLaboratório de Análises Tóxicológicas onde foram analisadas alterações citogenéticas em linfócitos de sangue periféricos, bem como indicadores biológicos de exposição aos metais chumbo e manganês. Os indicadores de exposição ao chumbo apresentaram as seguintes alterações: diferença significativa entre os grupos estudados nos níveis dos indicadores ALA-U, Pb-S, correlação significativa entre por cento de recuperação da ALAD e Pb-S no grupo Estaleiro e 22,2 por cento dos trabalhadores deste grupo que apresentaram por cento de recuperação da ALAD acima do Índice Biológico Máximo indicando que o grupo Estaleiro apresenta exposição ocupacional aochumbo. A exposição ao manganês deve ser mais bem estudada, pois embora osresultados da exposição não sejam conclusivos, os trabalhadores do grupo Estaleiro apresentam uma diferença perto da significância (p=0,075) dos níveis de Mn em sangue em relação ao outro grupo e apresentam uma alta freqüência de pneumonia ocupacional, uma das doenças causadas pela exposição ao manganês. A altafreqüência de aneuploidias no grupo Estaleiro indica risco de desenvolvimento de processos de carcinogenicidade neste grupo. Com relação ao grupo Laboratório, osresultados do presente estudo não evidenciam uma forte associação das alterações citogenéticas versus exposição. / È fundamental que um maior número de trabalhadores sejam avaliados, mas é importante ressaltar a necessidade de um programa de prevenção da exposição profissional e um controle efetivo dos aspectos ambientais. A aneuploidia se correlacionou fortemente com as outras alterações citogenéticas demonstrando ser importante ferramenta na avaliação da genotoxicidade. Existe uma evidência da relação da exposição ao metal chumbo com o aparecimento da alteração citogenética SPC no grupo Estaleiro, pois foi encontrada uma correlação bastante significativa entre o indicador de exposição ao chumbo por cento derec de ALAD e esta alteração citogenética. Os resultados dos testes X2 revelam que os trabalhadores avaliados neste estudo apresentam alterações citogenéticas diferentesdo controle do estudo de Major, Jakab e Tompa, 1999, indicando que estão expostos ocupacionalmente a substâncias clastogênicas, em especial o grupo Estaleiro. Os indicadores genotóxicos podem não analisar de forma específica a exposição asubstâncias químicas, mas eselecem fortes associações com a exposição a estas, devendo ser incluídos como uma ferramenta independente na avaliação de risco toxicológico.

PAIVA, Jean Carlos Gomes. Biomonitoring genetic of farmers exposed to pesticides in the municipalities of Tiangua and Ubajara (Ceará, Brazil). 2011. 111 f. : Tese (doutorado) - Universidade Federal do Ceará, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Renorbio - Rede Nordeste de Biotecnologia. 2011. / Submitted by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-23T17:19:06Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_jcgpaiva.pdf: 2591728 bytes, checksum: 4776344bdee5aac282c66c0a37608507 (MD5) / Approved for entry into archive by demia Maia (demiamlm@gmail.com) on 2016-05-23T17:19:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_jcgpaiva.pdf: 2591728 bytes, checksum: 4776344bdee5aac282c66c0a37608507 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T17:19:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_jcgpaiva.pdf: 2591728 bytes, checksum: 4776344bdee5aac282c66c0a37608507 (MD5) Previous issue date: 2011

Com o desenvolvimento da citogenética convencional, a partir da metade do século passado, houve um enorme crescimento no entendimento da etiologia das síndromes malformativas, sendo as anomalias cromossômicas reconhecidas como a causa genética mais freqüente dos defeitos congênitos. Assim sendo, a investigação de aberrações cromossômicas através do cariótipo se tornou uma rotina na investigação das malformações e de outras condições. Desde os anos 70, quando o diagnóstico pré-natal para a detecção de anomalias cromossômicas no feto foi estabelecido, este tem se tornado uma prática usual em muitos países, e uma importante ferramenta para o aconselhamento genético. A introdução da ultra-sonografia pré-natal na obstetrícia permitiu a identificação precoce de fetos com malformações, os quais têm grande probabilidade de serem portadores de alguma anormalidade cromossômica. O conhecimento da etiologia de sua doença é fundamental para diminuir a ansiedade da família e para tomada de decisões sobre a gestação em curso e sobre gestações futuras. Foi realizado um estudo retrospectivo de 18 anos (1989-2007) que teve como objetivos gerais: estimar a freqüência das anormalidades cromossômicas mais comuns através do cariótipo convencional e suas indicações para as gestantes do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (artigo 1). Embora o cariótipo seja considerado o exame padrão ouro para este tipo de investigação, o mesmo possui algumas limitações. Entre elas se destaca a dependência de uma cultura de células, o que significa uma espera de 10 a 14 dias para se obter um resultado, tempo este precioso para a família e para a gestante. Além disto, corre-se o risco de perda da cultura por contaminação ou falta de crescimento celular, e com isso nenhum resultado é atingido, permanecendo a família sem um esclarecimento sobre a situação. Na tentativa de solucionar estes problemas, nesta tese, também foi proposta uma continuação do estudo (de 2006 a 2008) em fetos com múltiplas malformações, para testar a aplicação de técnicas moleculares, como QF-PCR e MLPA em diferentes materiais fetais (artigo 2). Ainda, quando a coleta de materiais tradicionais como líquido amniótico, ou biópsia de vilosidades coriônicas, eram impossíveis de se coletar por alguma dificuldade, incluindo os problemas morfológicos do feto, materiais alternativos, como urina, foram obtidos para se testar sua utilidade para se atingir o diagnóstico citogenético. Os achados citogenéticos relatados no artigo 1 foram compatíveis com os da literatura, sendo a trissomia do 21 a anormalidade cromossômica mais freqüentemente detectada no pré-natal. Entretanto, como o risco de recorrência desta síndrome foi zero neste estudo, um filho anterior com síndrome de Down foi considerado uma indicação fraca, sendo priorizadas para a realização do exame outras famílias carentes de maior risco. Por outro lado, com a técnica de MLPA (artigo 2) não foram obtidos resultados satisfatórios, provavelmente porque as amostras não permitiam obter DNA na qualidade necessária para esse procedimento. Com a técnica de QF-PCR pode-se obter 30 resultados (alguns parciais) nas 50 amostras coletadas. O estudo citogenético convencional de 13 amostras em que materiais diversos dos usuais foram empregados teve 100% de sucesso. Com a aplicação desse arsenal de técnicas, a chance de se obter uma informação citogenética ficou bem maior, diminuindo a ansiedade do casal e auxiliando nas suas decisões reprodutivas. / With the development of conventional cytogenetic techniques, since the second half of the last century, there was an enormous growth in knowledge of the etiology of malformed syndromes, being the chromosomal abnormalities considered the most common genetic causes of congenital defects. Therefore, the investigation of chromosomal aberrations by karyotype became a routine in the investigation of the malformations and many other conditions. Since the 70's, when prenatal diagnosis to detect chromosomal abnormalities in the fetus was set up, this became usual practice in many countries, and an important tool for genetic counseling. The introduction of the ultrasound in the obstetrician practice allowed the early identification of the malformed fetus, which has a great probability of being a carrier of some chromosomal aberration. The knowledge of the etiology of the disease is essential to reduce the anxiety of the family and to plan future pregnancies. From 1989 to 2007, 905 pregnant women from Hospital de Clinicas de Porto Alegre had an investigation for their fetus conditions by conventional karyotypes. With this information, a study was made which the main objectives were: to estimate the frequency of the most common chromosomal abnormalities and to estimate the most frequent indications that lead those women to make this invasive procedure (manuscript 1). Although the karyotype is considered the gold standard test for this type of research, it has some limitations, among them: the necessity of a cell culture, which means an expected time between 10 to 14 days to obtain the desired result, and time is a very precious aspect in pregnancy. Moreover, there is a risk of loss of culture because of contamination or lack of cell growth, leaving the family without a result. In an attempt to solve these problems, we proposed another study (from 2006 to 2008) to check the application of molecular techniques such as MLPA and QF-PCR in different malformed fetal materials (manuscript 2). Still, when the collection of traditional materials such as amniotic fluid, blood cord or chorionic villus biopsy were impossible to collect because of morphological problems on the malformed fetus, other alternative materials such as urine or intraperitoneal fluid were collected in an attempt to test these materials as a manner to reach the cytogenetic diagnosis. Our cytogenetics findings were similar to the literature, being trisomy 21 the most frequent chromosomal abnormalities. On the other hand, we did not find any recurrent case of this syndrome, so the indication for doing the exam, as having a previous child with Down syndrome, stayed as a weak indication that comes after others priorities, like pregnancies with greater risks. When we tried to introduce the MLPA technique, we did not achieve satisfactory results, probably because the samples were not suitable for good quality of DNA extraction. We then applied QF-PCR, and obtained 30 results (some partials) from 50 samples collected. The karyotype results of 13 samples from additional materials, not commonly used elsewhere, achieved 100% of success. With all these alternatives techniques, the chance to achieve a diagnosis was much higher, reducing the anxiety of the couple and helping the family to make decisions for futures pregnancies.

A medida da translucência nucal (TN) entre 11 e 14 semanas de gestação é um exame ultra-sonográfico que mede a camada líquida na região cervical posterior do feto, sendo observado um aumento de espessura nas anomalias cromossômicas, especialmente na trissomia 21. Com sua crescente utilização, outras anormalidades fetais têm sido descritas em associação a um aumento da TN. O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho da medida da TN na detecção de diferentes anomalias fetais e outros efeitos adversos para a gestação. Realizou-se de um estudo observacional, no período de 1996 a 2004, com gestantes avaliadas no Ambulatório de Aconselhamento Genético para Diagnóstico Pré-natal do Hospital de Clínicas de Porto Alegre por risco aumentado de anomalia congênita, e que haviam realizado a medida da TN. Foram consideradas adequadas as TN realizadas de acordo com a padronização da Fundação de Medicina Fetal de Londres, e aumentadas aquelas TN com valor cima do percentil 95 para idade gestacional. Das 443 gestantes avaliadas, 38 seguimentos foram perdidos, 4 gestações estavam em curso na análise final dos dados, finalizando 401 gestações com desfecho conhecido. Em 275 gestações com TN adequada, a medida aumentada foi significativamente associada a anormalidades congênitas em geral (p 0,000000), cromossomopatias (p 0,000059) e perdas gestacionais (p 0,000000), sendo aumentada em oito dos 14 casos de cromossomopatia e em 6/7 dos casos com Síndrome de Down. Por outro lado, no grupo das TN inadequadas (126 casos), a associação entre TN aumentada não foi significativa para defeitos congênitos em geral (p 0,641396), nem para cromossomopatias (p 0,329194) ou perdas gestacionais (p 0,096092). Especificamente com relação aos erros inatos do metabolismo (EIM) no feto, foram localizados relatos e séries de casos com TN aumentada em dez diferentes EIM. Nas dezenove gestantes com história familiar de EIM e com medida da TN, houve um caso de uma menina afetada por MPS I com TN aumentada, e um de Raquitismo Resistente à Vitamina D com TN normal. Nos outros 17 casos, a medida da TN foi normal e não havia evidência de um EIM. Entre as novas associações de TN aumentada com síndromes genéticas, relatamos um paciente com Síndrome de Artrogripose, Anomalia renal e Colestase (ARC), cuja análise molecular na Universidade de Birmingham identificou uma mutação sem sentido (1518C>T) em homozigose no gene VPS33B. Concluiu-se que o desempenho da TN na detecção de anomalias congênitas depende da qualidade do exame, sendo que uma medida adequada aumentada está significativamente associada a defeitos congênitos, cromossomopatias e a outros desfechos gestacionais adversos, e que a sensibilidade da TN é especialmente elevada na detecção da síndrome de Down.

Objetivos: avaliar a contribuição do fluxo anormal no ducto venoso de 11 a 13 6/7 semanas no rastreamento de anomalias cromossômicas, defeitos estruturais e prognóstico gestacional. Método: 1221 gestações únicas foram submetidas a Dopplervelocimetria do ducto venoso após o rastreamento pela translucência nucal (TN). Resultados: os defeitos cromossômicos foram diagnosticados em 22 fetos. O fluxo no ducto venoso estava anormal em 84 fetos, a TN estava acima do 95o percentil em 160 casos e ambos marcadores estiveram anormais em 41 fetos. A sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo para defeitos cariotípicos corresponderam respectivamente a 86,4%, 86,9%, 11,9% e 99,7% considerando a TN aumentada, 68,2%, 96,9%, 31,3%, 99,3% para anomalias do fluxo do ducto venoso e 68,2%, 97,6%, 36,6%, 99,3% analisando ambos os marcadores. Investigando malformações estruturais, esses valores foram de 43,8%, 92,9%, 8,3%, 99,1% para uma TN aumentada, 25%, 92,6%, 4,8%, 98,8% para anomalias do fluxo do ducto venoso e 25%, 97,9%, 15,4%, 98,9% para ambos os marcadores. Nos casos com TN aumentada, a proporção de nascidos vivos morfológica e cariotipicamente normais diminui de 93,8% nos fetos com fluxo no ducto venoso normal para 77,3%, quando anormal. Conclusão: a avaliação do ducto venoso de 11 a 13 6/7 semanas de gestação pode ser utilizada no rastreamento de anomalias cromossômicas fetais e pode ajudar a reduzir a taxa de falso-positivo quando combinado com a medida da TN. Em fetos com TN aumentada o fluxo anormal no ducto venoso aumenta a probabilidade de resultados gestacionais adversos / Objective: To evaluate the association between abnormal ductus venosus at 11 - 13 6/7 weeks\' gestation and chromosomal abnormalities, structural defects and fetal outcome. Methods: Ductus venosus waveform (DVFVW) and nuchal translucency (NT) thickness were prospectively evaluated in 1221 singleton pregnancies. Results: The DVFVW was abnormal in 84 cases, NT was above the 95th centile in 160 cases and both markers were observed in 41 fetuses. Chromosomal defects were diagnosed in 22 fetuses. The sensitivity, specificity and positive predictive values for an abnormal karyotype were respectively 86.4%, 86.9%, 11.9% for an increased NT; 68.2%, 96.9%, 31.3% for DVFVW abnormalities and 68.2%, 97.6%, 36.6% for both markers. Regarding structural defects, this values were 43.8%, 92.9%, 8.3% for an abnormal NT, 25%, 92.6%, 4.8% for DVFVW abnormalities and 25%, 97.9%, 15.4% for both. Considering those cases of unexplained fetal demise, the percentages were 44.4%, 85.9%, 5% for NT abnormalities, 22.2%, 92.6%, 4.8% for an abnormal DVFVW and 22.2%, 98%, 15.4% for both. In cases with increased NT measurement, the percentage of livebirths with normal karyotype and no major fetal structural defects decreased from 93.8% in normal DVFVW fetuses to 77.3%, when abnormal. Conclusion: Ductus venosus assessment at 11 - 13 6/7 weeks\' gestation is useful in screening for fetal chromosomal abnormalities and may help to reduce the false-positive rate when combining with NT thickness measurement. Abnormal DVFVW is also associated with an increase of adverse perinatal outcome in fetuses with enlarged NT. However, the value of DVFVW assessment in cases with normal NT measurement is unclear

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-04Bitstream added on 2014-06-13T20:49:39Z : No. of bitstreams: 1 christofoletti_ca_me_rcla.pdf: 3763933 bytes, checksum: d9284f200972936e72e67bb3de745be4 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A degradação dos recursos hídricos, como os ambientes lênticos, dentre eles, os lagos, é uma das maiores preocupações atualmente, visto que esta pode causar danos diretos ou indiretos à saúde e à sobrevivência dos organismos expostos. Um dos fatores que contribui para a alteração da qualidade das águas de ambientes lênticos é o despejo de efluentes, principalmente àqueles de origem doméstica, portadores de substâncias que chegam a ser tóxicas para o meio aquático. Por meio dos testes citogenéticos, utilizando os mais diversificados organismos-teste, é possível biomonitorar a extensão da poluição e avaliar os efeitos dessas substâncias presentes no ambiente natural. Com esse intuito, o presente trabalho tomou por modelo de estudo, um lago urbano artificial (Lago Azul, Rio Claro-SP) e objetivou avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico das águas desse ambiente, por meio dos testes de aberrações cromossômicas e micronúcleos, em células meristemáticas de Allium cepa (cebola), em dois tratamentos: o contínuo e o período de recuperação, em água ultra pura; e, pelo teste do micronúcleo associado às anormalidades nucleares e do ensaio do cometa, aplicados em eritrócitos de Oreochromis niloticus (tilápia). Coletas de águas sazonais foram realizadas na estação seca (agosto/2006 e agosto/2007) e na estação chuvosa (março/2007 e fevereiro/2008). Análises físico-químicas foram feitas para uma coleta de cada estação. A partir dos dados obtidos, pode-se inferir que as águas desse ambiente lêntico apresentam potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico, nas duas estações de coletas, para os dois organismos-teste empregados. As análises de metais revelaram concentrações acima do permitido pela legislação de Ag, Cd2+, Cu e Fe3+, em ambas as estações. Embora os... / The degradation of water resources, as the lentics environments, among them, the lakes, is a major concern now, because it can cause direct or indirect damages to health and to the survival of the exposed organisms. One factor that can contribute to change the water quality of lentics environments is the dumping of effluents, mainly those of domestic origin, carriers of substances that come to be toxic to the aquatic environment. Through the cytogenetic tests, using the most diverse systems-test, it is possible monitoring the extent of pollution and assess the effects of substances on the natural environment. To that end, this work has taken a model of study, an urban artificial lake (Lago Azul, Rio Claro-SP) and aimed to evaluate the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials of waters that environment, through tests of chromosome aberrations and micronuclei in meristematic cells of Allium cepa (onion) in two treatments: the continued and the period of recovery, in ultra pure water, and by the micronucleus and nuclear abnormalities test and of the comet assay, applied in erythrocytes of Oreochromis niloticus (tilapia). Seasonal collections of waters were held in the dry season (august/2006 and august/2007) and the rainy season (march/2007 and february/2008). Physical and chemical analyses were made for a collection of each season. From the data obtained, it can be infered that the waters of this lentic environment had cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials in two seasons of collections for the two systems-test employed. Analyses of metals detected high concentrations of Ag, Cd2+, Cu, Fe3+, whose values are higher than permitted by law, in both seasons. Although the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials have been detected in two seasons, the dry season is that presented the highest risk... (Complete abstract click electronic access below)