Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:17:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337733.pdf: 2596779 bytes, checksum: c5381f2da78b8237b60b5e66535caf71 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os decápodes representam um grupo de crustáceos que obteve sucesso evolutivo em ambientes diferentes, e apresentam características que os tornam de interesse para estudos de biologia do desenvolvimento. A espécie Macrobrachium olfersi destaca-se por ter sido estudada amplamente, desde sua distribuição geográfica até biologia reprodutiva e desenvolvimento embrionário. Foram padronizados diferentes estagiamentos para caracterizar a ontogenia dessa espécie, sendo observados alguns processos restritos ao grupo em que ela está inserida. A diferenciação da região posterior do corpo, correspondente a papila caudal, é realizada pelo mecanismo de teloblastia. Esse mecanismo forma os segmentos corporais e é controlado por genes conservados entre os artrópodes. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a morfologia dos embriões nos estágios que compreendem o pré-nauplius (E3), nauplius (E4) e pós-nauplius inicial (E5 a E7) e relacionar esses dados com a quantificação da expressão relativa dos genes caudal, engrailed e even-skipped. Foram realizadas marcações nucleares com Hoechst nos preparados totais de ovos e de embriões nas idades que correspondem aos estágios E3 a E7, e observou-se o crescente rearranjo celular organizado pelo processo de teloblastia na região pós-naupliar, sendo visualizados os ectoteloblastos, dispostos em fileiras ao longo da papila caudal. A expressão relativa do gene caudal decresce com o avanço do crescimento da papila caudal e sua expressão também foi identificada nos ovários das fêmeas, comprovando a contribuição materna desse gene nessa espécie. Para o gene even-skipped foram identificadas duas isoformas, na primeira há decréscimo de expressão relativa com o avanço da embriogênese, o que possivelmente está relacionado com a segmentação corporal, e na segunda isoforma há aumento de sua expressão, o que pode estar relacionado com a neurogênese, outra função conhecida desse gene. engrailed se apresentou expresso linearmente entre as diferentes idades, sendo que pode atuar tanto no processo de segmentação quanto no processo de neurogênese. O presente estudo relacionou temporalmente os aspectos morfológicos com o controle a nível molecular, propiciando resultados para melhor compreender a evolução dos artrópodes.<br> / Abstract : Decapods constitute a group of crustaceans with evolutionary success in different environments, and have features that make them interesting for developmental biology studies. M. olfersi stands out for having been studied widely, since its geographical distribution to reproductive biology and embryonic development. Different stagings were standardized to characterize the ontogeny of this species, being analyzed some processes restricted to the group in which it is inserted. The differentiation of the posterior region of the body, corresponding to caudal papilla, is performed by the teloblastic mechanism. This mechanism forms the body segments and is controlled by genes whose are conserved among the arthropods. The objective of this work was to characterize the morphology of embryos in stages that comprise the pre-nauplius (E3), nauplius (E4) and post-nauplius (E5 to E7) and correlate that data with the genes relative expression quantification caudal, engrailed and even-skipped. Nuclear stainings were held with Hoechst in whole-mounted eggs and embryos in the stages E3 to E7, and noted the growth on cellular rearrangement organized by teloblastic mechanism process in the post-naupliar region, being identified the ectoteloblasts, arranged in rows along the caudal papilla. The relative gene expression of caudal decreases with the advance on the caudal papilla growth and their expression was also identified in oocytes of females, proving the maternal contribution of this gene in this species. For the gene even-skipped, two isoforms have been identified, in the first one there is a decrease on its relative expression with the advancement of embryogenesis, which possibly is related to body segmentation, and in the second isoform there is an increase on its expression, which may be related to neurogenesis, another known function of this gene. engrailed is expressed linearly between the different ages, and possibly acts on both the segmentation process as in the process of neurogenesis. The present study related temporally on the morphological aspects with the control at the molecular level, providing results to better understand the arthropods evolution.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337733.pdf: 2596779 bytes, checksum: c5381f2da78b8237b60b5e66535caf71 (MD5) Previous issue date: 2015 / Os decápodes representam um grupo de crustáceos que obteve sucesso evolutivo em ambientes diferentes, e apresentam características que os tornam de interesse para estudos de biologia do desenvolvimento. A espécie Macrobrachium olfersi destaca-se por ter sido estudada amplamente, desde sua distribuição geográfica até biologia reprodutiva e desenvolvimento embrionário. Foram padronizados diferentes estagiamentos para caracterizar a ontogenia dessa espécie, sendo observados alguns processos restritos ao grupo em que ela está inserida. A diferenciação da região posterior do corpo, correspondente a papila caudal, é realizada pelo mecanismo de teloblastia. Esse mecanismo forma os segmentos corporais e é controlado por genes conservados entre os artrópodes. O objetivo desse trabalho foi caracterizar a morfologia dos embriões nos estágios que compreendem o pré-nauplius (E3), nauplius (E4) e pós-nauplius inicial (E5 a E7) e relacionar esses dados com a quantificação da expressão relativa dos genes caudal, engrailed e even-skipped. Foram realizadas marcações nucleares com Hoechst nos preparados totais de ovos e de embriões nas idades que correspondem aos estágios E3 a E7, e observou-se o crescente rearranjo celular organizado pelo processo de teloblastia na região pós-naupliar, sendo visualizados os ectoteloblastos, dispostos em fileiras ao longo da papila caudal. A expressão relativa do gene caudal decresce com o avanço do crescimento da papila caudal e sua expressão também foi identificada nos ovários das fêmeas, comprovando a contribuição materna desse gene nessa espécie. Para o gene even-skipped foram identificadas duas isoformas, na primeira há decréscimo de expressão relativa com o avanço da embriogênese, o que possivelmente está relacionado com a segmentação corporal, e na segunda isoforma há aumento de sua expressão, o que pode estar relacionado com a neurogênese, outra função conhecida desse gene. engrailed se apresentou expresso linearmente entre as diferentes idades, sendo que pode atuar tanto no processo de segmentação quanto no processo de neurogênese. O presente estudo relacionou temporalmente os aspectos morfológicos com o controle a nível molecular, propiciando resultados para melhor compreender a evolução dos artrópodes.<br> / Abstract : Decapods constitute a group of crustaceans with evolutionary success in different environments, and have features that make them interesting for developmental biology studies. M. olfersi stands out for having been studied widely, since its geographical distribution to reproductive biology and embryonic development. Different stagings were standardized to characterize the ontogeny of this species, being analyzed some processes restricted to the group in which it is inserted. The differentiation of the posterior region of the body, corresponding to caudal papilla, is performed by the teloblastic mechanism. This mechanism forms the body segments and is controlled by genes whose are conserved among the arthropods. The objective of this work was to characterize the morphology of embryos in stages that comprise the pre-nauplius (E3), nauplius (E4) and post-nauplius (E5 to E7) and correlate that data with the genes relative expression quantification caudal, engrailed and even-skipped. Nuclear stainings were held with Hoechst in whole-mounted eggs and embryos in the stages E3 to E7, and noted the growth on cellular rearrangement organized by teloblastic mechanism process in the post-naupliar region, being identified the ectoteloblasts, arranged in rows along the caudal papilla. The relative gene expression of caudal decreases with the advance on the caudal papilla growth and their expression was also identified in oocytes of females, proving the maternal contribution of this gene in this species. For the gene even-skipped, two isoforms have been identified, in the first one there is a decrease on its relative expression with the advancement of embryogenesis, which possibly is related to body segmentation, and in the second isoform there is an increase on its expression, which may be related to neurogenesis, another known function of this gene. engrailed is expressed linearly between the different ages, and possibly acts on both the segmentation process as in the process of neurogenesis. The present study related temporally on the morphological aspects with the control at the molecular level, providing results to better understand the arthropods evolution.

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Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T11:58:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 281559.pdf: 724745 bytes, checksum: 0263af8e3fa1aa4b1340292bd1b2db90 (MD5) / A proteção antiviral específica contra o vírus da síndrome da mancha branca (WSSV) induzida via RNA de interferência (RNAi) e sua influência na expressão de alguns genes imunológicos foram avaliados em Litopenaeus vannamei. Os animais foram injetados com dsRNA de sequência específica (vp28 do envelope viral), e posteriormente desafiados com o WSSV. Camarões tratados com dsRNA vp28 tiveram a infecção viral limitada, uma alta taxa de sobrevivência (73%) e ausência do vírus em 80% dos sobreviventes, confirmando a ativação do mecanismo antiviral específico via RNAi. Animais desafiados e não tratados com dsRNA vp28 tiveram uma queda significativa no hemograma (85%) e depleção gênica da argonauta, caspase-3, fator antilipopolissacarídeo (ALF), pró-fenoloxidase (proPO) e transglutaminase (TGase). Uma superexpressão gênica da proteína que reconhece LPS e ?-1,3-glicanas (LGBP) e do inibidor de proteases ?2-macroglobulina (?2M) foi verificada nesses animais, indicando o envolvimento destas proteínas na fase aguda da infecção por WSSV. O tratamento com dsRNA vp28 limitou a infecção e restabeleceu as condições imunológicas gerais dos animais através do aumento do hemograma e da modulação positiva dos genes argonauta, ALF, proPO e TGase, sugerindo a participação destas proteínas na defesa do organismo contra o WSSV. Os resultados deste estudo apontam para uma potencial utilização do dsRNA vp28 como agente terapêutico anti-WSSV e confirmam que a técnica de RNAi é uma abordagem preventiva promissora e efetiva para o controle das viroses de crustáceos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-10-11T04:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 342140.pdf: 2423788 bytes, checksum: 7d2c90d8e6c9b96f6368ce0392c1b601 (MD5) Previous issue date: 2016 / Organismos aquáticos estão em constante contato, em seu ambiente natural, com uma grande quantidade de microrganismos. Em camarões, o sistema gastrointestinal funciona como uma importante barreira para a entrada de agentes infecciosos e na seleção da microbiota intestinal. No entanto, muito do que conhecemos sobre o sistema imune de camarões está restrito às reações de defesa que ocorrem hemolinfa e pouco ainda se conhece a respeito da sua imunidade intestinal. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar o perfil transcricional de genes associados ao sistema imune de crustáceos nas diferentes regiões do trato gastrointestinal do camarão Litopenaeus vannamei. Primeiramente, foi realizada uma análise semi-quatitativa da expressão de genes de diferentes categorias funcionais em quatro regiões do trato gastrointestinal (estômago, intestino médio, intestino posterior e hepatopâncreas) de animais estimulados ou não com a bactéria Vibrio harveyi ATCC 14126 (inativada por calor). Dos 54 genes avaliados, 37 deles mostraram-se expressos no estômago, 16 no hepatopâncreas, 35 no intestino médio e 35 no intestino posterior. As categorias funcionais mais representadas foram os peptídeos antimicrobianos ou AMPs (estômago e intestinos), vias de sinalização celular (estômago e intestinos), proteínas de reconhecimento de padrões moleculares (hepatopâncreas) e sistema de RNA de interferência ou RNAi (intestino médio). Os níveis de expressão de 19 genes candidatos foram posteriormente quantificados por PCR quantitativa em tempo rela (RT-qPCR) no intestino médio de animais experimentalmente infectados com V. harveyi ATCC 14126 ou com o vírus da Síndrome da Macha Branca (WSSV). De maneira interessante, enquanto os genes Litvan ALF-A (AMPs), Litvan ALF-C (AMPs) e LvDcr 2 (RNAi) foram induzidos em resposta à infecção bacteriana, a expressão do gene Litvan ALF-A (AMPs) foi reprimida frente à infecção pelo WSSV. A ocorrência da expressão de genes associados ao sistema imune no trato gastrointestinal evidencia a importância desses órgãos nos mecanismos de defesa de camarões, podendo estar envolvidos na manutenção da microbiota intestinal e/ou no controle de agentes infecciosos.<br> / Abstract : Aquatic organisms are in constant contact, in their natural environment, with a large number of microorganisms. In shrimp, the gastrointestinal system acts as an important barrier to the entry of infectious agents and in the selection of the intestinal microbiota. However, much of our knowledge about shrimp immune system is restricted to the defense reactions occurring in the hemolymph and little is known about the intestinal immunity of these animals. Thus, the objective of this work was to characterize the transcriptional profile of crustacean immune-related genes in different regions of the gastrointestinal tract of the shrimp Litopenaeus vannamei. Firstly, a semi-quantitative RT-PCR analysis was performed to evaluate the expression of genes from different functional categories in four regions of the gastrointestinal tract (foregut, midgut, hindgut and hepatopancreas) from animals stimulated or not with heat-killed Vibrio harveyi ATCC 14126. From the 54 analyzed genes, 37 showed to be expressed in foregut, 16 in the hepatopancreas, 35 in midgut and 35 in hindgut. The most representative functional categories were the antimicrobial peptides or AMPs (foregut, midgut and hindgut), the cell signaling (foregut, midgut and hindgut), the pattern recognition proteins (hepatopancreas) and the RNA interference system or RNAi (midgut). Then, the expression levels of 19 candidate genes was quantified by real-time quantitative PCR (RT-qPCR) in the midgut of animals experimentally infected with the bacterium V. harveyi ATCC 14126 or the White Spot Syndrome Virus (WSSV). Interestingly, while the genes Litvan ALF-A (AMPs), Litvan ALF-C (AMP) and LvDcr 2 (RNAi) showed to be induced in response to the bacterial infection, the expression of Litvan ALF-A (AMPs) was down-regulated upon the WSSV infection. The occurrence of the expression of immune-related genes in the gastrointestinal tract highlights the importance of these organs in the shrimp immune defense, whose may be involved in the maintenance of the intestinal microbiota and/or in the control of infectious agents.

La langostilla Munida gregaria es crustáceo decápodo muy abundante en el Golfo San Jorge y uno de los principales componentes de las capturas incidentales en las distintas pesquerías que allí se desarrollan. Por esto, la especie constituye un potencial recurso pesquero en el Golfo San Jorge y en otras localidades del Mar Argentino. En la presente tesis doctoral se analizan diferentes aspectos de la biología de la langostilla Munida gregaria en el Golfo San Jorge, a efectos de incrementar el conocimiento de la especie y brindar herramientas para el manejo de la misma ante un eventual aprovechamiento. En el Capítulo I se estudia la distribución, abundancia relativa y tamaño de los estadios larvales. Cinco estadios zoeas y un decapodito (megalopa) fueron diferenciados en las muestras de plancton. Larvas de M. gregaria se observan de desde agosto a febrero, con un prolongado período de aporte de zoeas I al plancton. En este período las larvas de langostilla son el principal componente del meroplancton de decápodos en aguas costeras, junto al cangrejo Halicarcinus planatus y al camarón fantasma Notiax brachyophthalma. En general, las curvas de abundancia para los distintos estadios son bimodales con un primer pico de mayor magnitud. No se observa un patrón de deriva de los estadios, siendo los tardíos (zoea IV, zoea V y decapodito) muy abundantes en aguas costeras con profundidades menores a 20 m. Los decapoditos muestran numerosas características morfológicas que permiten la diferenciación de los dos morfotipos descriptos. Los resultados sugieren que la duración del estadio zoea V determinaría la expresión de los morfotipos y que el asentamiento ocurre en aguas costeras. El ciclo de muda y crecimiento de langostilla en el Golfo San Jorge son analizados en el Capítulo II. La frecuencia de muda está relacionada con la talla de los ejemplares. Luego del asentamiento, los animales tienen un período de rápido crecimiento, con sucesivas mudas hasta junio/julio, cuando una fracción de esta cohorte comienza a destinar energía a la reproducción, disminuyendo su frecuencia de muda. Las langostillas con tallas mayores a 11 mm de longitud del caparazón (LC) tienen una frecuencia de muda bianual, ya que los animales comienzan a mudar luego del período reproductivo y vuelven a hacerlo nuevamente hacia finales del verano. Sin embargo, cuando los animales alcanzan aproximadamente los 20 mm de LC mudarían solo una vez al año, durante la primavera. En ambos sexos, el crecimiento relativo en cada evento de muda decrece con la talla, mientras que el incremento bruto es máximo en juveniles próximos a alcanzar la madurez sexual. Combinando la distribución de estadios modales, la frecuencia de muda y los incrementos por muda, se estima una longevidad de 6-8 y de 7-9 años para machos y hembras, respectivamente. En el Capítulo III se analiza la inversión reproductiva de la especie a través de indicadores de uso común en decápodos tales como la fecundidad, el tamaño de los huevos y el aporte teórico de huevos. Las hembras sexualmente maduras pueden realizar dos desoves en la misma temporada reproductiva: el tamaño de los huevos y la fecundidad en ambas puestas es similar. La principal diferencia es que en la segunda de estas puestas (septiembre) intervienen hembras de edad 0+, las cuales presentan una baja fecundidad y tienen una escasa contribución teórica de huevos en la población. No se observaron diferencias significativas en la fecundidad entre 2009 y 2010. La fecundidad media ajustada es mayor en el periodo 2009-2010 que la registrada para el periodo 1999-2000. La prevalencia del bopírido Pseudione galacanthae (Hansen, 1897), su efecto sobre el potencial reproductivo de la langostilla y las tallas de infestación del parásito se analizan en el Capítulo IV. La prevalencia del parásito es baja e independiente de la profundidad, la estación del año y el sexo del hospedador. En el intervalo de tallas 7,0-9,99 mm de LC, la prevalencia del bopírido es significativamente mayor que en el resto de las clases de tallas. La presencia de larvas y estadios inmaduros del parásito en este intervalo sugiere que la infestación de las langostillas se produce en este rango de tallas. El potencial reproductivo de la especie no se ve afectado por la presencia del bopírido, ya que la infestación no determina cambios en los caracteres sexuales ni en la fecundidad de las hembras parasitadas. El diámetro de los huevos es menor en los ejemplares parasitados. En el Capítulo V se analiza la distribución y abundancia relativa de las capturas incidentales de la especie en zona de esfuerzo pesquero restringido. Para ello se emplea información provista por el Programa de Observadores a Bordo de la Provincia de Chubut, la cual es incorporada a un sistema de información geográfica. La langostilla es capturada de manera incidental por la flota costera a lo largo de todo el año. La frecuencia de ocurrencia de la especie a lo largo de todo el periodo es 88,6 %. Una alta abundancia relativa de la especie se registra en los lances de pesca de langostino y en profundidades menores a 50 m. En el Capítulo VI se integran los principales aportes de esta tesis doctoral con la información proveniente de trabajos previos realizados en el área de estudio y se desarrollan consideraciones en relación con el potencial aprovechamiento comercial de la especie en el Golfo San Jorge.