O estudo de agentes que interferem no funcionamento das proteínas relacionadas com o ciclo celular é importante para a compreensão dos processos de transformação e de morte celular. Alterações de ploidia, embora presentes na maioria dos tumores humanos, não têm ainda seu papel conhecido no processo de oncogênese. A alteração do número cromossômico é conseqüência primária de erros que envolvem o fuso mitótico e o cinetócoro. Dessa maneira, drogas que agem sobre os microtúbulos são consideradas aneugênicas potenciais. O presente trabalho enfocou o estudo do mecanismo pelo qual drogas que atuam sobre microtúbulos levam ao aparecimento de células multinucleadas e o significado biológico destas. Os resultados mostraram que a vincristina induziu bloqueio em mitose das células BBnt e MDCK, com conseqüente entrada em interfase no estado multinucleado. As células multinucleadas não apresentaram sinais de morte celular por apoptose, entretanto, quando em prófase apresentaram vários centrossomos, que poderiam originar divisões celulares com fusos multipolares. Estes resultados indicam que essas linhagens celulares possuem pontos de checagem mitótico funcionais e células multinucleadas são viáveis e capazes de prosseguir no ciclo celular. A presença de mitoses com fusos multipolares é indício de que as células multinucleadas passam por divisões anormais, que progrediriam para apoptose resultando na eliminação desta população. / The study of agents that interfere in the functionality of proteins related to cell cycle is important for the understanding of the transformation and cell death processes. Although ploidy alterations are presented in the majority of human tumors, their role in oncogenic process is not understood yet. The alteration on chromosomal number is the primary consequence of errors involving the mitotic spindle and kinetocore. Thus, drugs acting on the microtubules are considered as potentially aneugenic agents. The present work aimed to study the mechanism of multinucleated cells induction by action of antimicrotubule drug and biological meaning of these cells. The results showed that vincristine induced mitotic arrest of both BBnt and MDCK cells, with consequent entrance into interphasic-multinucleated status. Multinucleated cells did not present features of cell death by apoptosis; they were still viable and able to go further in cell-cycle progression. The presence of many structures suggested microtubule enucleation, centrosomes-like were detected on treated cells and could be responsible for the multi-spindle assembling that leads the multinucleated cells to abnormal divisions. Later on, when the multinucleated cells accumulated more abnormalities they were eliminated from the cell population by apoptosis.

A subespécie Caligo illioneus illioneus, conhecida popularmente por Olho-de-coruja é uma Lepdóptera importante da Mata Atlântica no Brasil, possuindo ampla distribuição Neotropical, sendo predadora voraz de diversas culturas agrícolas de importância econômica quando em seus estádios de lagarta. Desde o descobrimento da primeira estabilização por Grace (1962), mais de 500 linhagens celulares de insetos já foram estabelecidas, sendo ferramentas valiosas para o progresso nos estudos fisiológicos, propagação in vitro de patógenos, pesquisas sobre controle de pragas e na produção de proteínas recombinantes. Porém, poucos trabalhos apresentaram resultados positivos com linhagens de células tronco embrionárias, especialmente em Lepidópteras. Este projeto teve como objetivo obter, isolar e caracterizar células tronco indiferenciadas de ovos embrionados de Caligo illioneus illioneusobtidas a partir de culturas primárias sob protocolo de cultivo celular específico para Lepidópteras, armazenamento em nitrogênio líquido, avaliação da manutenção e expansão in vitro. Através de análises anatômicas e taxonômicas, confirmou-se que a subespécie tratava-se de Caligo illioneus illioneus. As análises ultraestruturais do cório do ovo, através de microscopia eletrônica de varredura, demonstraram variação de 32-35 carenas verticais, havendo diferenças taxonômicas no cório do ovo das espécies do gênero Caligo. Após a obtenção das células do embrião, estas foram isoladas e cultivadas em meio de cultura celular DMEM-High suplementado, em temperatura de 22°C sem a adição de CO2. Foram realizadas as análises de aspectos citológicos, morfologia celular, ciclo celular, análises de imunofenotipagem por citometria de fluxo e potencial elétrico e funcional da membrana mitocondrial. As células apresentaram formato globóide, sem adesão ao substrato, com o núcleo bem delimitado e com baixo volume celular. Os dados obtidos pelas análises do ciclo celular das 4 amostras em diferentes passagens demonstraram que o protocolo estabelecido para a cultura celular foi favorável, com significativo rendimento no número de células, na expansão e criopreservação, confirmado pelo aumento na proporção de células nas fases G2/M e de Síntese, e que as células estavam realizando os processos naturais de interfase e de divisão celular responsável pela embriogênese e crescimento. A análise de imunofenotipagem por citometria de fluxo apresentou marcações positivas com alta expressão para os marcadores de células pluripotentes (Sox2 e Oct 3/4), marcadores de morte celular por apoptose (Caspase 3 e HSP70), marcadores específicos de insetos (Anti Rab-5, Axons BP 102, GM 130 e Dro. FMR1) e marcadores de células de origem mesenquimal (Stro-1, Vimentina), apresentando baixa expressão somente em CD 90. O experimento de potencial elétrico e funcional da membrana mitocondrial apresentou células metabolicamente ativas, não evidenciando diferenças significativas entre as culturas primárias e entre terceira e quinta passagens das 4 amostras. Concluiu-se que foi possível estabelecer um protocolo de cultura celular para Lepidópteras livre de patógenos e que os ovos embrionados de Caligo illioneus illioneus com 3 e 4 dias para a eclosão apresentaram maior duração em cultura celular, possuindo células indiferenciadas, representando, deste modo, uma ferramenta promissora com grande potencial para pesquisas em biotecnologia e biologia molecular, principalmente devido ao fato da espécie ser de importância ecológica, médica e em controle de pragas nas ciências agrárias / Caligo illioneus illioneus subspecies, known popularly by Owl Butterfly, is an important Lepdoptera of the Brazilian Atlantic Forest, with wide distribution Neotropical, being a voracious predator of various agricultural crops of economic importance when in their caterpillar stages. Since discovery of the first stabilization by Grace (1962), over 500 insect cell lines have been established and are valuable tools for progress in physiological studies, in vitro propagation of pathogens, research on pest control and the production of recombinant proteins. However, few studies showed positive results to embryonic stem cell lines, especially in Lepidoptera. This study aimed to obtain, isolate and characterize undifferentiated stem cells of embryonated eggs from Caligo illioneus illioneus, obtained from primary cultures under specific cell culture protocol to Lepidoptera, storage in liquid nitrogen, evaluation of maintenance and expansion in vitro. By means of anatomical and taxonomic analysis, it was confirmed that the subspecies was Caligo illioneus illioneus. Ultrastructural analysis of the egg chorion, by scanning electron microscopy showed variation of 32-35 vertical carina, having taxonomic differences in egg chorion at the Caligo species. After obtaining the embryonic cells, these were isolated and cultured in cell culture medium DMEM-High supplemented, at 22 ° C without addition of CO2. They were carried out analysis of cytological aspects, cell morphology, cell cycle, immunophenotyping by flow cytometry and electrical and functional potential of mitochondrial membrane. The cells showed globoid shape without adhesion to the substrate, with well-defined nucleus and low cell volume. Data obtained by cell cycle analysis of the four samples at different passages showed that established protocol for cell culture was favorable, with significant yield relative to the number of cells, the expansion and cryopreservation, confirmed by the increase in the proportion of cells in G2/M and Synthesis phases, and the cells were performing the natural processes of interphase and cell division, responsible for embryogenesis and growth. Immunophenotyping analysis by flow cytometry showed positive markings with high expression for pluripotent cells markers (Sox2 e Oct 3/4), markers of cell death by apoptosis (Caspase 3 e HSP70), specific markers for insects (Anti Rab-5, Axons BP 102, GM 130 e Dro. FMR1) and mesenchymal cell markers (Stro-1, Vimentina), presenting low expression only in CD 90. The electrical and functional potential analysis of mitochondrial membrane has resulted in metabolically active cells, not evidencing significant differences among primary cultures and between the third and fifth passages of 4 samples. It was concluded that it was possible to establish a cell culture protocol to Lepidoptera free from pathogens and that embryonated eggs from Caligo illioneus illioneus with 3 to 4 days for hatching showed longer duration in cell culture, having undifferentiated cells, representing in this way, a promising tool with great potential for research in biotechnology and molecular biology, mainly due to this species have ecological and medical importance and in control pests at the agricultural sciences

A deficiência de vitamina A é um problema global de saúde pública que afeta especialmente crianças com menos de 5 anos, mulheres durante o parto e 1 ano pós-parto e é a principal causa de cegueira evitável em crianças. Biofortificação é uma estratégia que visa reduzir as deficiências de micronutrientes em populações vulneráveis ao redor do mundo através do aumento da concentração de nutrientes nos alimentos básicos. Investigou-se os efeitos de genótipos e estilos de cocção sobre o conteúdo, retenção e biodisponibilidade de ?-caroteno (?C) em mandiocas biofortificadas e batatas-doces de polpa laranja (BDPL). Cinco genótipos de mandioca biofortificada, três acessos parentais, e uma mandioca branca foram fornecidos por dois programas de melhoramento. Adicionalmente, foram avaliados dois genótipos de BDPL e duas marcas de alimentos infantis. Tanto as raízes de mandioca quanto de batatas-doces foram analisadas cruas, cozidas em água a 100°C, e fritas em óleo de soja a 180°C após cozimento. Os carotenoides foram extraídos e analisados por HPLC-DAD. A biodisponibilidade foi determinada utilizando a digestão oral, gástrica e duodenal in vitro e absorção por culturas celulares Caco-2. Somente o ?C foi detectado em todos os genótipos de mandioca, embora os teores tenham variado significativamente dependendo do genótipo. As mandiocas melhoradas continham pelo menos 10 vezes mais ?C do que a branca. O cozimento e a fritura foram associados com a perda e isomerização de ?C na mandioca bem como na BDPL. Houve interação significativa entre genótipo e processamento nos perfis e teores de ?C. Eficiência de micelarização do trans-?C nas mandiocas cozidas foi menor do que nas fritas. As mandiocas biofortificadas prontas para consumo podem fornecer até 28% da IDR de retinol. A absorção pelas células Caco-2 do trans-?C foi analisada em quatro genótipos. Dois deles não foram afetados pela cocção em relação à absorção celular, no entanto, os outros dois genótipos apresentaram aumento com a fritura. Com relação às batatas-doces, o trans-?C foi o principal carotenoide encontrado, embora também tenham sido identificados três isómeros do ?C e ?-caroteno em quantidades menores. O teor do trans-?C em um dos genótipos de BDPL foi duas vezes maior do que nos alimentos infantis. Nos alimentos infantis foi encontrada presença relativa de 13-cis-?C maior do que nas BDPLs. A eficiência de micelarização de trans-?C das batatas-doces foi considerada baixa, e não teve diferença com os processamentos. A absorção por Caco-2 não foi diferente para os genótipos de BDPL e alimentos infantis investigados. A quantidade intracelular acumulada de trans-?C foi proporcional à concentração do material inicial. Em resumo, as culturas biofortificadas estudadas podem aumentar a concentração de ?C na dieta. A mandioca frita apresenta mais ?C biodisponível do que ela cozida. Tanto o genótipo da mandioca quanto o tipo de processamento influenciam a absorção de trans-?C. Por outro lado, não foram encontradas evidências de que a redução de partículas, utilizada no alimento infantil, ofereça maior biodisponibilidade de beta-caroteno das BDPLs / Vitamin A deficiency is a world public health problem that affects especially infants, children less than 5 years of age, women during birthing and 1 year post-partum and is the primary cause of avoidable blindness in children. Biofortification is a strategy aimed at decreasing global micronutrient deficiencies in vulnerable populations by increasing the nutrient density in staple food crops. It was investigated the effects of genotype and cooking styles on the content, retention and bioavailability of ?-carotene (?C) in biofortified cassava and orange fleshed sweet-potatoes (OFSP). Five genotypes of biofortified cassava, three parental accessions, and one white cassava were provided by two different breeding programs. Additionally, two genotypes of OFSP and two brands of high processed baby foods were evaluated. Both cassava and OFSP roots were analyzed raw, after boiling in water at 100°C only or after subsequent frying in soybean oil at 180°C. Carotenoids were extracted and analyzed by HPLC-DAD. Bioavailability was assessed using an in vitro oral, gastric and small intestinal digestion coupled with the Caco-2 human intestinal cell model. Only ?C was detected in all tested genotypes of cassava root, although its content varied markedly depending on genotype. Biofortified genotypes contained at least 10-fold higher ?C than the white variety. Boiling and frying were associated with loss and isomerization of ?C in cassava as well as OFSP. There was an interaction of genotype and cooking style on profile of ?C contents. Efficiency of micellarization of trans-?C in boiled cassava was lower than in fried. Biofortified cassava ready to eat can provide up to 28% of the IDR of retinol. Uptake of trans-?C in micelles generated during digestion by Caco-2 cells was analyzed for the four of the five biofortified genotypes. Cell uptake of ?C from two genotypes were not affected by processing, however the other two genotypes had increased with frying. Regarding sweet-potatoes, trans-?C was the major carotenoid found, although it was identified three ?C isomers and ?-carotene in minimal quantities. The concentration of trans-?C in one genotype of OFSP was two times higher than baby foods and the other genotype. Baby foods had relative presence of the 13-cis-?C higher than in the OFSP. Efficiency of micellarization of trans-?C from cooked OFSP or Baby foods was considered low, and had no statistic differences between boiling and frying. The Caco-2 cells uptake were not different for the genotypes and baby foods investigated. The absolute amount of accumulated trans-?C intracellular was proportional to the concentration of the starting material. In summary, biofortified crops can increase ?C contents in diet. Fried cassava presents more bioavailable ?C than boiled. Cassava genotype and cooking style may influence uptake of trans-?C by absorptive intestinal cells. In contrast, there is no evidence that high processed OFSP has more bioavailability of ?C than homemade boiled or fried OFSP

A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade de tratamento de câncer que consiste na interação de três componentes: fotossensibilizador (FS), luz para ativar o FS e o oxigênio presente nos tecidos. Os estudos da fototoxicidade e do potencial de agente terapêuticos utilizados no tratamento do câncer, dentre eles os FSs, são realizados utilizando culturas celulares bidimensionais (2D) ou modelos animais. No entanto, os modelos 2D apresentam limitações, como impossibilitar sinais tão importantes que ocorrem in vivo, dentre eles o contato célula-célula e célula-matriz. Além disso, busca-se reduzir cada vez mais o número de animais em pesquisas científicas. Diante dessas limitações, nos últimos 30 anos tem sido desenvolvidos métodos alternativos in vitro que possam mimetizar melhor as complexas estruturas e funcionalidade dos sistemas in vivo. O objetivo desse estudo foi desenvolver um modelo de cultura de células tridimensional (3D) e um modelo de plataforma de cultura microfluídica para avaliar a viabilidade de células de carcinoma humano (HEp-2) após aplicação da terapia fotodinâmica com hipericina. O modelo 3D foi produzido utilizando-se colágeno tipo I aniônico e a plataforma de cultura microfluídica foi produzida utilizando-se lâmina de plástico, que serviu como base para o adesivo biocompatível utilizado para delimitar o canal celular e o poliéster, servindo como uma espécie de tampa para os dois materiais. A caracterização do biomaterial utilizado no modelo 3D foi realizada pela determinação da porosidade e diâmetro dos poros por meio da Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e por ensaios de citotoxicidade pelo método de difusão em ágar e pelo método do MTT (ISO 10993-5). Os ensaios de citotoxicidade comprovaram que o biomaterial utilizado é biocompatível e não causa nenhuma citotoxicidade as células. A viabilidade celular da linhagem HEp-2 foi acompanhada no modelo 2D e 3D durante 168 h (sete dias) utilizando o método do MTT e na plataforma microfluídica por 24 h através de microscopia de fluorescência com perfusão contínua de meio de cultura. Em ambos os modelos as células apresentaram-se capazes de se manter aderidas e em multiplicação. Nos ensaios fototóxicos realizados no modelo 3D por meio do método do MTT, observou-se que a viabilidade celular diminui à medida que se aumenta a concentração da hipericina, mantendo-se a dose de luz e o tempo de incubação constantes, sugerindo que as células HEp-2 em cultura 2D apresentaramse mais sensíveis à TFD do que as células em cultura 3D. Os ensaios fototóxicos na plataforma microfluídica mostraram através da análise das imagens de microscopia de fluorescência que o tipo de morte celular preponderante foi a apoptose. Portanto, os resultados apresentados sugerem que é possível a realização de estudos de terapia fotodinâmica no modelo de cultura tridimensional bem como na plataforma microfluídica de cultura de células. / Photodynamic Therapy (PDT) is a cancer treatment modality consisting of the interaction of three components: photosensitizer (PS), light to activate the PS and oxygen present in the tissues. The studies about the toxicity and potential of therapeutic agents used for cancer treatment, among them the PS, are performed using 2D cell cultures or animal models. However, the 2D models have several limitations, such as making it impossible that important signals which occur in vivo, such as cell-cell and cell-matrix contact occur. In addition, it is importatnt to reduce the number of animals in scientific research. Due of the limitations of the twodimensional cell culture models and the need to reduce the use of animals in research, in the last 30 years alternative in vitro methods have been developed which t can better mimic the complex structures and functionality of in vivo systems. Therefore, the objective of this study was to develop a three-dimensional (3D) cell culture model and a microfluidic culture platform model to evaluate the viability of human carcinoma cells (HEp-2) after photodynamic therapy with hypericin. The 3D support was produced using type I collagen and the microfluidic culture platform was produced using a plastic blade which served as the basis for the surgical adhesive, used to delimit the cell canal and the polyester, serving as a sort of cap for both materials. The characterization of the biomaterial used in the 3D model was performed by determination of the porosity and pore diameter by Scanning Electron Microscopy (SEM) and by cytotoxic assays using the agar diffusion method and the MTT method (ISO 10993-5). It was observed that the biomaterial used in the 3D model is biocompatible and does not cause any cytotoxicity to the cells. The cell viability of the HEp-2 cells was monitored in the 2D and 3D models for 168 h (seven days) using the MTT method and in the microfluidic platform for 24 h by fluorescence microscopy with continuous perfusion of culture medium. In both models the cells are able to remain adherent and in multiplication. In the phototoxic assays performed on the microfluidic platform, the analysis of fluorescence microscopy images showed that the preponderant cell death type was apoptosis. Results suggest that is possible to perform photodynamic therapy studies in the three-dimensional culture model as well as in the microfluidic cell culture platform.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho apresenta um modelo computacional aplicado na quantificação do efeito bystander radioinduzido no qual células não irradiadas sofrem danos provocados por algum tipo ainda não totalmente esclarecido de sinalização que células diretamente atravessadas por radiação emitem no meio no qual elas se encontram. No modelo proposto, uma dada célula pode se encontrar em três estados: saudável (S), danificada não emissora de sinais (D) e danificada emissora de sinais (F). As transições podem ocorrer entre os estados S e D, S e F e D, F para S. Os sinais se propagam pelo meio através da equação de difusão discreta com decaimento em duas dimensões. Análises temporais estocásticas e determinísticas foram concordantes qualitativamente. O modelo foi aplicado a um cenário experimental no qual a fração de células sobreviventes decresce com a dose usando a hipótese que uma dada célula irradiada libera uma concentração de sinais dependente da dose para um dado intervalo. Os resultados simulacionais apresentaram boa concordância quantitativa com os resultados experimentais. / This work presents a computational model to quantify the radiation-induced bystander effect in which non-irradiated cells suffer damage caused by some kind of still unknown signals emitted by neighboring cells that were directly traversed by radiation. In the model, a given cell can be found in three states: healthy (S), damaged and not signal emitter (D) damaged and signal emitter (F). Transitions can occur between the states S and D, S and F and D, F to S. Signals propagate through the medium according to the discrete diffusion equation with decay in two dimensions. Temporal stochastic and deterministic analyzes were qualitatively consistent. The model was applied to an experimental scenario where the cells surviving fraction decreases with the dose using the hypothesis that a given irradiated cell releases a dose dependent signal concentration for a given interval of dose. The simulations show good quantitative agreement with the experimental results.

Os processos de reabsorção radicular externa, geralmente, estão associados aos traumatismos dentários que atingem os tecidos de sustentação e suporte, principalmente a avulsão e a intrusão. A terapia endodôntica nesses casos, deve visar a estabilização ou paralisação deste processo através da utilização de medicação intracanal que possa inibir a atividade osteoclástica, como os bisfosfonatos desde que, esse fármaco seja biocompatível. Neste sentido, o objetivo desse estudo foi analisar a citotoxicidade do alendronato de sódio sobre fibroblastos do ligamento periodontal humano em cultura celular. As células foram cultivadas na densidade de 1 x 10 3 células/placa. Os grupos experimentais foram: G1 (controle) sem alendronato de sódio e G2, G3 e G4 com o alendronato nas concentrações de 10 -5 , 10 -6 e 10 -7 M respectivamente. Nos tempos experimentais de 1, 6, 12 e 24 horas (curto prazo) foi analisada a viabilidade celular e em 2, 4, 6 e 8 dias (longo prazo) a sobrevivência celular. Os resultados em triplicata foram analisados estatisticamente e mostraram que as culturas tratadas com a maior concentração da droga (G2), apresentaram porcentagens de viabilidade celular significantemente menores (p < 0.01), que as dos outros grupos (G1, G3 e G4) nos tempos de 12 e 24 horas. O crescimento celular nos grupos G2 e G3 foram similares. O G2 apresentou crescimento, significantemente menor que dos demais grupos (p < 0.05). Concluiu-se que o alendronato de sódio, em contato direto com fibroblastos de ligamento periodontal humano em cultura, é citotóxico em concentrações mais elevadas (10 -5 e 10 -6 M) / The external root resorption processes are usually associated with dental trauma, mainly avulsion and intrusion. In such cases, the endodontic therapy aims the process stabilization and paralysation, through utilization of medications that can inhibit the osteoclastic activity, like bisphosphonates, since this drug would be biocompatible. The aim of this study was to analyze the sodium alendronate citotoxicity on human periodontal ligament fibroblasts. Cells were plated in a density of 1 X 10 3 cells/dish. The experimental groups were: GI (control) no sodium alendronate, and GII, GIII and GIV with sodium alendronate at the concentrations of 10 -5 , 10 -6 and 10 -7 M, respectively. The experiment times were 1, 6, 12 and 24 hours (short term) for viability and 2, 4, 6 and 8 days (long term) for cell survival. Data in triplicate were statistically analyzed. Cultures treated with the highest alendronate concentration (GII)showed cell viability percentages significantly lower (p < 0.01) than those of the other groups (GI, GIII and GIV), at 12 and 24 hours. Cell growth on GII and GIII groups was similar. GII presented smaller growth than the other groups (p < 0.05). We concluded that sodium alendronate, on direct contact with human periodontal ligament fibroblasts, is citotoxic in concentrations higher than of 10 -6 M

A deficiência de vitamina A é um problema global de saúde pública que afeta especialmente crianças com menos de 5 anos, mulheres durante o parto e 1 ano pós-parto e é a principal causa de cegueira evitável em crianças. Biofortificação é uma estratégia que visa reduzir as deficiências de micronutrientes em populações vulneráveis ao redor do mundo através do aumento da concentração de nutrientes nos alimentos básicos. Investigou-se os efeitos de genótipos e estilos de cocção sobre o conteúdo, retenção e biodisponibilidade de ?-caroteno (?C) em mandiocas biofortificadas e batatas-doces de polpa laranja (BDPL). Cinco genótipos de mandioca biofortificada, três acessos parentais, e uma mandioca branca foram fornecidos por dois programas de melhoramento. Adicionalmente, foram avaliados dois genótipos de BDPL e duas marcas de alimentos infantis. Tanto as raízes de mandioca quanto de batatas-doces foram analisadas cruas, cozidas em água a 100°C, e fritas em óleo de soja a 180°C após cozimento. Os carotenoides foram extraídos e analisados por HPLC-DAD. A biodisponibilidade foi determinada utilizando a digestão oral, gástrica e duodenal in vitro e absorção por culturas celulares Caco-2. Somente o ?C foi detectado em todos os genótipos de mandioca, embora os teores tenham variado significativamente dependendo do genótipo. As mandiocas melhoradas continham pelo menos 10 vezes mais ?C do que a branca. O cozimento e a fritura foram associados com a perda e isomerização de ?C na mandioca bem como na BDPL. Houve interação significativa entre genótipo e processamento nos perfis e teores de ?C. Eficiência de micelarização do trans-?C nas mandiocas cozidas foi menor do que nas fritas. As mandiocas biofortificadas prontas para consumo podem fornecer até 28% da IDR de retinol. A absorção pelas células Caco-2 do trans-?C foi analisada em quatro genótipos. Dois deles não foram afetados pela cocção em relação à absorção celular, no entanto, os outros dois genótipos apresentaram aumento com a fritura. Com relação às batatas-doces, o trans-?C foi o principal carotenoide encontrado, embora também tenham sido identificados três isómeros do ?C e ?-caroteno em quantidades menores. O teor do trans-?C em um dos genótipos de BDPL foi duas vezes maior do que nos alimentos infantis. Nos alimentos infantis foi encontrada presença relativa de 13-cis-?C maior do que nas BDPLs. A eficiência de micelarização de trans-?C das batatas-doces foi considerada baixa, e não teve diferença com os processamentos. A absorção por Caco-2 não foi diferente para os genótipos de BDPL e alimentos infantis investigados. A quantidade intracelular acumulada de trans-?C foi proporcional à concentração do material inicial. Em resumo, as culturas biofortificadas estudadas podem aumentar a concentração de ?C na dieta. A mandioca frita apresenta mais ?C biodisponível do que ela cozida. Tanto o genótipo da mandioca quanto o tipo de processamento influenciam a absorção de trans-?C. Por outro lado, não foram encontradas evidências de que a redução de partículas, utilizada no alimento infantil, ofereça maior biodisponibilidade de beta-caroteno das BDPLs / Vitamin A deficiency is a world public health problem that affects especially infants, children less than 5 years of age, women during birthing and 1 year post-partum and is the primary cause of avoidable blindness in children. Biofortification is a strategy aimed at decreasing global micronutrient deficiencies in vulnerable populations by increasing the nutrient density in staple food crops. It was investigated the effects of genotype and cooking styles on the content, retention and bioavailability of ?-carotene (?C) in biofortified cassava and orange fleshed sweet-potatoes (OFSP). Five genotypes of biofortified cassava, three parental accessions, and one white cassava were provided by two different breeding programs. Additionally, two genotypes of OFSP and two brands of high processed baby foods were evaluated. Both cassava and OFSP roots were analyzed raw, after boiling in water at 100°C only or after subsequent frying in soybean oil at 180°C. Carotenoids were extracted and analyzed by HPLC-DAD. Bioavailability was assessed using an in vitro oral, gastric and small intestinal digestion coupled with the Caco-2 human intestinal cell model. Only ?C was detected in all tested genotypes of cassava root, although its content varied markedly depending on genotype. Biofortified genotypes contained at least 10-fold higher ?C than the white variety. Boiling and frying were associated with loss and isomerization of ?C in cassava as well as OFSP. There was an interaction of genotype and cooking style on profile of ?C contents. Efficiency of micellarization of trans-?C in boiled cassava was lower than in fried. Biofortified cassava ready to eat can provide up to 28% of the IDR of retinol. Uptake of trans-?C in micelles generated during digestion by Caco-2 cells was analyzed for the four of the five biofortified genotypes. Cell uptake of ?C from two genotypes were not affected by processing, however the other two genotypes had increased with frying. Regarding sweet-potatoes, trans-?C was the major carotenoid found, although it was identified three ?C isomers and ?-carotene in minimal quantities. The concentration of trans-?C in one genotype of OFSP was two times higher than baby foods and the other genotype. Baby foods had relative presence of the 13-cis-?C higher than in the OFSP. Efficiency of micellarization of trans-?C from cooked OFSP or Baby foods was considered low, and had no statistic differences between boiling and frying. The Caco-2 cells uptake were not different for the genotypes and baby foods investigated. The absolute amount of accumulated trans-?C intracellular was proportional to the concentration of the starting material. In summary, biofortified crops can increase ?C contents in diet. Fried cassava presents more bioavailable ?C than boiled. Cassava genotype and cooking style may influence uptake of trans-?C by absorptive intestinal cells. In contrast, there is no evidence that high processed OFSP has more bioavailability of ?C than homemade boiled or fried OFSP

Pentoxifilina (PTF), um derivado da metilxantina, tem ação terapêutica como agente antifibrótico. In vitro, a PTF causa inibição na produção de colágeno, glicosaminoglicanos e fibronectina, bem como promove acentuada redução na proliferação dos próprios fibroblastos de quelóides. A PTF na concentração de 1.000 g/mL foi seletiva no controle da inibição da síntese protéica pelos fibroblastos. O objetivo deste estudo foi verificar o comportamento in vitro de fibroblastos oriundos de cicatrizes hipertróficas (HSHF) e de pele não-cicatricial (NHF) na presença e ausência de PTF (1.000 g/mL), quanto à: proliferação celular, produção de colágeno e capacidade dos fibroblastos gerarem contração em modelo experimental de matriz de colágeno. Para tanto, foram utilizados fibroblastos cultivados a partir de amostras de cicatrizes hipertróficas e pele não-cicatricial doadas, com finalidade de pesquisa, pelo banco de Tecidos do Instituto Central do Hospital das Clínicas da FMUSP. Culturas celulares expostas a PTF apresentaram diminuição na proliferação celular em HSHF (46,35%) e em NHF (37,73%) (p<0,0001). Na presença de PTF, foi observada seletividade de inibição na síntese de colágenos, havendo inibição mais expressiva de colágeno tipo III em HSHF e de colágeno tipo I em NHF (p<0,0001). O modelo experimental de matriz de colágeno povoada por fibroblastos de cicatriz hipertrófica apresentou contração menor (12%) na presença de PTF (p<0,0001), em relação à sua ausência / Fibroblasts are thought to be partially responsible for the persisting contractile forces that result in burn contractures. Using a monolayer and fibroblast populated collagen lattice (FPCL) three-dimensional (3D) model we subjected hypertrophic scar and non-cicatricial fibroblasts to the antifibrogenic agent pentoxifylline (PTF) 1000g/mL attempting to reduce proliferation, collagen type I and III synthesis and contraction in this 3D model. Fibroblasts were isolated from post burn hypertrophic scars (HSHF) and non-scarred skin (NHF). Cells were grown in monolayer or incorporated into FPCL\'s and exposed to PTF. In monolayer, cell number proliferation was reduced (46.35% in HSHF group and 37.73% in NHF group) p<0,0001. The PTF also demonstrated to be selective on collagen type I and III synthesis inhibition suggesting higher inhibition of collagen type III on HSHF group and more evident inhibition of type I on NHF group. FPCL\'s containing PTF had surface areas reduced in about 12% p<0,0001. PTF showed inhibition effects on cell proliferation and reduced contraction in both HSHF and NHF

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA two-way, com correção de Bonferroni (p< 0,05). A citotoxicidade dos cimentos AH Plus e EndoSequence BC Sealer revelou-se tempo/concentração-dependente, enquanto a do MTA Fillapex mostrou-se concentração-dependente. Os cimentos endodônticos induziram a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 pelos fibroblastos, sem diferença significativa com os controles (p> 0,05). Somente o LPS de E. coli induziu a secreção de IL-8, com diferença estatística (p< 0,05). A TLBP não foi capaz de modular a produção das citocinas em questão, significativamente. / Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckeys test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed as dose-dependent manner. The endodontic sealers inducted the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by fibroblasts similar to control (p> 0.05). Only E. coli LPS was capable to stimulate IL-8 secretion with statistic difference (p< 0.05). TLBP was not able to modulate the secretion of these cytokines, significantly.

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA two-way, com correção de Bonferroni (p< 0,05). A citotoxicidade dos cimentos AH Plus e EndoSequence BC Sealer revelou-se tempo/concentração-dependente, enquanto a do MTA Fillapex mostrou-se concentração-dependente. Os cimentos endodônticos induziram a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 pelos fibroblastos, sem diferença significativa com os controles (p> 0,05). Somente o LPS de E. coli induziu a secreção de IL-8, com diferença estatística (p< 0,05). A TLBP não foi capaz de modular a produção das citocinas em questão, significativamente. / Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckeys test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed as dose-dependent manner. The endodontic sealers inducted the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by fibroblasts similar to control (p> 0.05). Only E. coli LPS was capable to stimulate IL-8 secretion with statistic difference (p< 0.05). TLBP was not able to modulate the secretion of these cytokines, significantly.