Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-06T11:26:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 697207 bytes, checksum: fb986e6d6a9b11c6081a4c4b0a20d472 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T11:26:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 697207 bytes, checksum: fb986e6d6a9b11c6081a4c4b0a20d472 (MD5) Previous issue date: 2004-09-14 / Este trabalho consistiu de dois ensaios biológicos com o objetivo de estudar as influências do bifosfonato alendronato de sódio, da estatina atorvastatina cálcica e do flavonóide ipriflavona, isoladamente e em associação, na osteoporose induzida pelo glicocorticóide dexametasona, em ratas da raça Wistar, adultas, pesando 250 ± 20g. O processo da indução da osteoporose consistiu na administração de dexametasona, na dose de 7 mg/kg de peso corporal, por via IM, uma vez por semana, durante cinco semanas, nos seis animais de todos os grupos, à exceção dos animais que constituiu o grupo controle (G1), que receberam, via IM, solução de NaCl à 0,9%. Os animais do grupo 2 (G2), chamado osteoporótico, receberam apenas dexametasona; Após a indução, iniciou-se os tratamentos. No primeiro ensaio, o grupo 3 (G3) que recebeu dexametasona mais alendronato de sódio na dose de 0,2 mg/kg; grupo 4 (G4) que recebeu dexametasona mais atorvastatina cálcica na dose de 1,2 mg/kg e grupo 5 (G5) que recebeu dexametasona mais ipriflavona na dose de 100 mg/kg. No segundo ensaio, procedeu as combinações das respectivas substâncias, sendo: (G3) que recebeu dexametasona mais alendronato de sódio a 0,1 mg/kg + atorvastatina cálcica a 0,6 mg/kg; (G4) que recebeu dexametasona mais alendronato de sódio a 0,1 mg/kg + ipriflavona a 50 mg/kg e (G5) que recebeu dexametasona mais atorvastatina cálcica a 0,6 mg/kg + iprilfavona a 50 mg/kg. Todas as substâncias foram administradas por via oral, diariamente. Nos períodos de 7, 14, 21 e 28 dias, após o início dos tratamentos, foram coletados amostras de sangue para dosagens de cálcio e fósforo no equipamento multiparamétrico de bioquímica Alizé com “kits” da marca BioMerieux, e fosfatase alcalina óssea no equipamento de quimioluminescência Access Immunoassay System da Beckman Coulter com “kits” Ostase. Após o sacrifício, foi coletado fêmur direito de cada animal que, uma vez processado rotineiramente e obtido as lâminas, cujos cortes foram corados com hematoxilina e eosina, foi estudado histologicamente em microscopia de luz. Procedeu-se o cálculo percentual da densidade trabecular óssea, à partir da imagem amostral de osso trabecular, contida na região subcondral, de cada corte histológico, em microscópio óptico equipado com câmara digital (TCL-984 P), analisada em monitor de microcomputador de 14 polegadas, utilizando-se da técnica de histomorfometria de contagem de pontos. Os ensaios biológicos foram realizados segundo delineamento inteiramente casualizado, com cinco tratamentos em seis repetições. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste F (p<0,05). Os grupos controles (G1 e G2) foram comparados entre si, por meio do teste F. Os grupos tratados (G3, G4 e G5) foram comparados entre si, através do teste de Tukey à 5% de probabilidade. As comparações também foram realizadas entre os grupos tratados e os controles G1 e G2, sendo que, para o mesmo, foi aplicado o teste de Dunnet à 5% de probabilidade. Os resultados não mostraram diferenças significativas entre o grupo controle (G1) e o grupo osteoporótico (G2), bem como, entre eles e os grupos tratados (G3, G4 e G5) e, também, entre os grupos tratados entre si, em todos os períodos, quanto aos valores sérico de cálcio, fósforo e fosfatase alcalina óssea, tanto no primeiro, como no segundo ensaio biológico. Assim, estes marcadores bioquímicos não apresentaram indícios para condução de diagnóstico e acompanhamento da patologia óssea osteoporótica. Todavia, os valores percentuais de densidade trabecular óssea foram significativos em todos os períodos, quando se compara o G1, (±60%), com G2, (±40%), mostrando que a indução osteoporótica com o glicocorticóide dexametasona foi um sucesso. Quanto aos grupos tratados, comparados com o G2, constata-se que os tratamentos com alendronato de sódio (G3) e atorvastatina cálcica (G4), isoladamente, alcançaram valores percentuais de densidade trabecular óssea significativos, já no período de 14 dias, repetindo-se nos períodos de 21 e 28 dias e o tratamento com ipriflavona obteve valores significativos nos períodos de 21 e 28 dias. O grupo tratado com alendronato de sódio obteve valores semelhantes ao do grupo controle (G1), nos períodos de 21 e 28 dias. Demonstra-se, assim, a capacidade destas substâncias de restaurar o tecido trabecular ósseo nos animais osteoporóticos induzidos com glicocorticóide. As associações, por sua vez, apresentaram resultados superiores. Todos os grupos tratados (G3, G4 e G5) apresentaram resultados significativos em relação ao grupo (G2) nos períodos de 14, 21 e 28 dias. Ademais, o grupo G4 (alendronato + ipriflavona) mostrou valores significativos, acima dos apresentados pelo grupo controle (G1), que é constituído de animais normais, nos períodos de 14, 21 e 28 dias e o grupo G3 (alendronato + atorvastastina), nos períodos de 21 e 28 dias. Tornou-se evidente, que as associações resultaram em maior eficácia, particularmente, aquelas com alendronato, com capacidade de restaurar o tecido trabecular ósseo. Considerando que as doses individuais das substâncias associadas foram reduzidas à metade daquelas, quando administradas isoladamente, e os resultados foram superiores, caracteriza-se, assim, efeito sinérgico de supradição ou potenciação farmacológica. Muito embora os marcadores bioquímicos utilizados neste trabalho não demonstraram diferenças que evidenciasse alteração metabólica óssea, a histomorfometria e a histopatologia permitiu análise estática e dinâmica, bem como a avaliação das alterações tissulares na unidade metabólica óssea, especialmente, no osso trabecular. Deste modo, as substâncias usadas isoladamente ou as suas associações, podem ser promissoras no tratamento prolongado com glicocorticóide ou no tratamento da osteoporose estabelecida. Ressalva-se, no entanto, que estudos posteriores das dosagens, interações, biodisponibilidades, além dos efeitos toxicológicos dessas substâncias farmacológicas, fazem-se necessários. / This work consisted of two biological assays with objective of studying the influences of the bisphosphonate alendronate of sodium, statin atorvastatin calcic and flavonoid ipriflavone, separately and in association, in osteoporotic female Wistar rats, adults, weighing 250 ± 20g, induced with glucocorticoid dexamethasone. Induction of osteoporosis consisted of the dexamethasone administration, in the dose of 7 mg/kg, IM, once for week, for five weeks, in six animals of all groups, except those constituted the control group (G1), which received solution of NaCl to 0.9%, IM. The animals of the group 2 (G2), named osteoporotic, just received dexamethasone; After the induction, began the treatments. In the first rehearsal, the group 3 (G3) that received dexamethasone more alendronate of sodium in the dose of 0.2 mg/kg; group 4 (G4) that received dexamethasone more atorvastatin calcic in the dose of 1.2 mg/kg and group 5 (G5) that received dexamethasone more ipriflavone in the dose of 100 mg/kg. In the second rehearsal, proceeded the combinations of substances: (G3) that received dexamethasone more alendronate of sodium for 0.1 mg/kg + atorvastatin calcic for 0.6 mg/kg; (G4) that received dexamethasone more alendronate of sodium for 0.1 mg/kg + ipriflavone for 50 mg/kg and (G5) that received dexamethasone more atorvastatin calcic for 0.6 mg/kg + iprilfavone for 50 mg/kg. The substances were administered orally, daily. To the periods of 7, 14, 21 and 28 days of treatments, were collected sample blood for dosages of calcium and phosphorus in the biochemical multiparametric Alizé equipment with "kits" BioMerieux, and bone alkaline phosphatase in the quimioluminescence Access Immunoassay System equipment of Beckman Coulter with "kits" Ostase. After the sacrifice, was collected right femur of each animal that, once processed and obtained microscopic slides, whose cuts were colored with hematoxylin and eosin, was histological studied in light microscopy. The percentile calculation of bone trabecular density from sample image of bone trabecular was proceeded, contained in the area subcondral of each histological cut, in optical microscope equipped with digital camera (TCL-984 P), analyzed in monitor of microcomputer of 14 inches, for histomorphometric technique of point scores. The biological assays were accomplished entirely according to casual delineation with five treatments in six repetitions. The results obtained were submitted to the variance analysis and the test F (p <0,05). The control groups (G1 and G2) were compared to each other by means of the test F. The treated groups (G3, G4 and G5) were compared to each other through the test of Tukey to 5% of probability. The comparisons were also accomplished between the treated groups and the control G1 and G2, and was applied of Dunnet test to 5% of probability. The results didn't show difference significants among group control (G1) and the osteoporotic group (G2), as well as between them and the treated groups (G3, G4 and G5) and also among the treated groups to each other, in all the periods, with relationship to the levels of calcium, phosphorus and bone alkaline phosphatase serum, so much in the first as in the second biological assays. Thus, these biochemical markers didn't present indications for diagnosis conduction and accompaniment of the bone osteoporotic pathology. Though, the percentile values of bone trabecular density were significant in all the periods, when it is compared G1, (±60%), with G2, (±40%), showing that osteoporotic induction with glucocorticoid dexamethasone was a success. With relationship to the treated groups, compared with the G2, it is verified that the treatments with alendronate of sodium (G3) and atorvastatin calcic (G4), separately, reached percentile values significant of bone trabecular density, already in the period of 14 days, repeating in the periods of 21 and 28 days and the treatment with ipriflavone obtained values significant in the periods of 21 and 28 days. The treated group with alendronate of sodium obtained values similar to controls group (G1), in periods of 21 e 28 days. It is demonstrated, like this, the capacity of these substances to restore bone trabecular tissue in the osteoporotic animals induced with glucocorticoid. The associations, for its time, presented results better. All treated groups (G3, G4 and G5) presented significant results in relation to the group (G2) in the periods of 14, 21 and 28 days. Furthermore, group G4 (alendronate + ipriflavone) showed significant values, above presented them for the group controls (G1), that is constituted of normal animals, in the periods of 14, 21 and 28 days and group G3 (alendronate + atorvastastin), in the periods of 21 and 28 days. Became evident, that associations resulted in larger effectiveness, particularly, those with alendronate, with capacity of restore bone trabecular tissue. Considering that individual doses of the associated substances were in half reduced of those, when administered separately, and the results were superiors, it is characterized, like this, supraddition synergistc effect or pharmacological potentiation. The biochemical markers used in this work didn't demonstrate differences that evidenced bone metabolic alteration. However, histomorphometric and histopatology allowed static and dynamic analysis, as well as the evaluation of tissue alterations in the bone metabolic unit, particularly, in the bone trabecular. This way, the substances used separately or its associations, can be promising in the treatment prolonged with glucocorticoid or in the treatment of the established osteoporosis. It is excepted, however, that further studies of dosages, interactions, bioavailability, besides the toxicological effects those pharmacogical substances, are necessaries. / Tese importada do Alexandria

O objetivo desse estudo foi avaliar a citotoxicidade do alendronato de sódio (ALN), em diferentes concentrações, sobre osteoblastos em cultura celular. Foi utilizado para o experimento meio sem droga (controle) e meio contendo a droga em diferentes concentrações a saber: 0,5; 1; 5; 10; 20 e 40 mg/ml. Para o estudo foi utilizado uma linhagem de osteoblastos de rato (Osteo-1). A viabilidade celular foi inferida a partir da análise da atividade mitocondrial das células através do método da redução do MTT nos tempos experimentais de 0, 24, 48 e 72 horas. Após análise estatística (teste de Mann-Whitney, p<0,05), os resultados mostraram que, com exceção da concentração de 40mg/ml, todos os grupos apresentaram células viáveis, embora todas as concentrações de ALN tenham reduzido a atividade mitocondrial em mais de 50% em relação ao grupo controle, sugerindo que o ALN nessas concentrações estudadas foi citotóxico para os osteoblastos. / The aim of this study was to analyze the cytotoxicity of a bisphosphonate (sodium alendronate) on rat osteoblasts. The experimental groups were GI (control) no sodium alendronate, and GII, GIII, GIV, GV, GVI, and GVII with sodium alendronate at the concentrations of 0.5, 1, 5, 10, 20, and 40mg/ml, respectively. The cell viability was evaluated by MTT assay in experimental times 0, 24, 48, and 72 h. Data were statistically analyzed. Cultures treated with sodium alendronate showed cell viability percentages significantly lower (p < 0.05) than those of the control groups. In GVII, no viable cell was observed in all experimental times. It could be concluded that sodium alendronate, on direct contact with rat osteoblasts, is cytotoxic in all concentrations studied.

Os casos de reimplante tardio são considerados de prognóstico duvidoso pois a ocorrência de anquilose e reabsorções são fatos comuns para esta condição. Neste sentido, é proposta a utilização de drogas para imersão do dente antes do reimplante visando um favorecimento no prognóstico. Recentemente, o alendronato de sódio tem sido experimentalmente indicado com esta finalidade; porém, a capacidade de adsorção deste medicamento pelo dente é desconhecida. Neste estudo foi avaliada a adsorção de alendronato de sódio pelo dente utilizando-se a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência. Para isto, realizou-se a imersão do dente em frascos contendo soluções deste medicamento nas concentrações de 3,2 Zg/ml (10-5M) e 32,0 Zg/ml (10-4M). Após períodos experimentais de 10, 15 e 30 minutos foram retiradas amostras das soluções para análise da concentração que foi comparada com a do controle que continha apenas a solução, sem presença do dente. Os resultados obtidos mostram que o dente adsorve alendronato de sódio quando imerso em solução e que para a concentração de 3,2 Zg/ml são necessários 15 minutos para que a saturação ocorra, já para a concentração de 32,0 Zg/ml uma elevada média de adsorção foi observada após 10 minutos de imersão. / Delayed tooth replantation is considered a poor prognosis because of ankylosis and root resorption occurrence. The use of drugs for topical treatment before replantation is recommended expecting better prognosis. Recently, the sodium alendronate has been experimentally indicated for this purpose; but tooth adsorption capability of this drug is unknown. The aim of this study was to evaluate the tooth adsorption of sodium alendronate utilizing the High Performance Liquid Chromatography. Six maxillary central incisors were immersed in solutions of alendronate in concentrations of 10-5 and 10-4M; after experimental times of 10, 15 e 30 minutes samples of solutions were obtained for concentration analysis. The concentrations obtained were compared with control concentrations (solutions without tooth immersion). The results showed the occurrence of adsorption when teeth were immersed in sodium alendronate solutions. At the concentration of 10-5M it is necessary to keep the tooth immersed for at least 15 minutes, while at the concentration of 10-4M after 10 minutes a high adsorption value is observed.

A osteonecrose dos ossos maxilares relacionada ao uso prolongado de bisfosfonatos (OMRB), associada a procedimentos cirúrgicos, constitui uma entidade com menos de dez anos de ocorrência na clínica estomatológica. Os bisfosfonatos (BFs) são medicamentos antireabsortivos altamente efetivos no tratamento de diversas doenças ósseas, além de metástases. Embora a maioria dos casos de OMRB tenha sido relatada após o uso de potentes BFs da terceira geração, o alendronato de sódio (ALN), um bisfosfonato de segunda geração, é amplamente utilizado no tratamento e prevenção de doenças ósseas. O presente estudo experimental in vivo visou analisar a possível presença de OMRB no processo alveolar de ratos tratados com ALN após exodontia do segundo molar inferior. Para tanto, utilizou-se 30 ratos Wistar, machos, com 7 semanas de vida, divididos em dois grupos, ALN (tratado com alendronato) e CTL (controle, tratado com solução salina). O ALN foi administrado diariamente por injeção subcutânea na dose de 2,5 mg/kg peso por 14 dias. Nesse momento, foi realizada a exodontia, havendo sido eutanasiados cinco animais de cada grupo, 7, 14 e 21 dias após a exodontia. Após a eutanásia, a região da mandíbula foi fixada em 2,5% formaldeído e 2% glutaraldeído, em tampão cacodilato 0,1M - pH 7,4 e descalcificada em EDTA a 4,13% por 30 dias. Os espécimes foram analisados em cortes corados em HE, e foi realizada histomorfometria para análise da reabsorção da crista alveolar mesial e distal, além do tecido ósseo neoformado no interior do alvéolo, que também foi analisado através de imuno-histoquímica para as proteínas não colágenas OPN e BSP e para evidenciação de vasos sanguíneos neoformados com o anticorpo anti-CD105. Os osteoclastos foram evidenciados através de histoquímica para fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Além disso, as células e eventos da reparação foram examinados por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que os animais tratados com ALN exibiram OMRB de grau zero em todos os períodos estudados, além da presença de osteoclastos latentes TRAP-positivos e histomorfometria, onde a não reabsorção das cristas alveolares ocasionaram a permanência do osso alveolar, em contato com bactérias. Observou-se ainda, um claro atraso na formação óssea, quando comparado ao controle, além da diminuição dos vasos sanguíneos nos estágios iniciais. A localização e o padrão de marcação para as proteínas OPN e BSP foram considerados normais, observados evidente marcação em áreas ósseas imaturas e em linhas cimentantes. Assim, concluiu-se que o ALN administrado neste protocolo provocou OMRB leve, provavelmente causada pela diminuição da angiogênese, presença de osso alveolar não remodelado expostos a colônias bacterianas, além da diminuição da atividade osteoblástica. / The bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaw (BRONJ) associated with surgery procedures, is an entity with less than 10 years of occurrence in dental practice. The bisphosphonates (BFs) are anti-resorbing drugs highly effective in the treatment of several bone diseases, including metastasis. Although the majority of cases of BRONJ had been reported with the potent third generation of BFs, sodium alendronate (ALN), a second generation bisphosphonate, is widely used for treatment or prevent bone diseases as osteoporosis. The present experimental study aimed to analyze the possible presence of BRONJ in the alveolar process of rats treated with ALN following extraction of the mandibular second molar. For this, we used thirty 7-week-old male Wistar rats, divided into two groups, ALN (treated with alendronate) and CTL (control, treated with saline solution). The administration of ALN received daily subcutaneous injection at a dose of 2.5 mg/kg for 14 days. At that moment, the extraction was performed. After 7, 14 e 21 days of surgery, five animals of each group were euthanized and the mandibular region fixed in 2.5% formaldehyde + 2% glutaraldehyde in cacodylate buffer 0.1M - pH 7.4 and decalcified in 4.13% EDTA for 30 days. The specimens were morphologically analyzed in HE stained sections, and, histomorphometry was used to analyze the resorption of mesial and distal alveolar crests, as well as the bone formed into the alveolus. Immunohistochemistry for the noncollagenous proteins OPN and BSP and for CD105 to revel neoformed blood vessels was also performed. The osteoclasts were revealed through tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry. Moreover, the cells and events of alveolar healing were examined by transmission electron microscopy. The results showed light degree of BRONJ in the ALN treated animals at all the studied periods, and the presence of latent osteoclasts near the non-resorbing crest alveolar. Bacteria were observed in contact with the non-resorbed alveolar bone. An evident delay in bone formation when compared to control group was also observed, as well as the decrease of blood vessels in early stages. The distribution of immature bone and in cement lines of OPN and BSP was considered normal. Thus, we concluded that the present protocol of ALN yielded light BRONJ areas, probably by reduced angiogenesis, lock of remodeling of alveolar, presence of bacterial colonies and evident decreased osteoblastic ativitity.

Os bisfosfonatos representam uma classe de drogas que agem sobre o metabolismo ósseo e são amplamente utilizadas na prevenção e tratamento de estados osteopênicos e osteoporóticos. Tem sido demonstrado que alterações na estrutura dos tecidos dentais podem ocorrer como efeitos adversos à administração sistêmica do alendronato de sódio. No esmalte de dentes de ratos submetidos ou não ao uso sistêmico de alendronato de sódio, os objetivos do presente estudo foram: 1) avaliar a resistência do esmalte a desafios ácidos (indução artificial de lesões de cárie e indução artificial de lesões de erosão) por meio da mensuração da microdureza subsuperficial e da profundidade das lesões; 2) avaliar a permeabilidade do esmalte por meio de técnica histoquímica. Foi utilizada a porção coronária de 20 incisivos superiores de 10 animais submetidos à medicação com alendronato de sódio (grupo experimental) e 16 incisivos superiores de 8 animais que receberam apenas água destilada (grupo controle). Para os experimentos de indução artificial de lesão de cárie e de lesão de erosão, as porções coronárias de 18 incisivos superiores foram seccionadas ao meio, no sentido transversal, obtendo-se duas secções de aproximadamente 8 mm de comprimento de cada dente, num total de 36 secções que foram aleatoriamente divididas de acordo com o grupo experimental (n=10/grupo/experimento) e controle (n=8/grupo/experimento). Para a avaliação da permeabilidade, foram utilizados 18 incisivos superiores restantes, sendo 10 para o grupo experimental e 8 para o grupo controle. As variáveis de resposta quantitativa para o estudo foram a porcentagem da variação de perda de dureza subsuperficial (%VPD) na indução artificial de lesões de cárie e lesões de erosão, avaliadas em microdurômetro; e a profundidade das lesões de desmineralização de cárie/erosão e a permeabilidade do esmalte avaliadas em microscopia de luz. Os resultados foram submetidos à análise estatística por meio do teste ANOVA. O nível de significância adotado foi de 5%. De acordo com os resultados obtidos verificou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos experimental e controle (p>0,05), tanto na porcentagem de VPD quanto na profundidade das lesões de cárie/erosão. Com relação à permeabilidade não foi observada diferença significante entre os grupos (p>0,05), mostrando penetração do agente traçador semelhante em ambos. Pôde-se concluir que, após o uso sistêmico do alendronato de sódio, o esmalte de dentes de ratos não apresentou maior resistência aos desafios ácidos (indução artificial de lesões de cárie e erosão) e não sofreu alteração em sua permeabilidade. / Bisphosphonates represent a class of drugs that act on bone metabolism and are widely used in the prevention and treatment of osteopenic and osteoporotic states. It has been demonstrated that structural alterations on dental tissues might occur as adverse effects of systemic sodium alendronate administration. In the dental enamel of rats subjected or not to systemic use of sodium alendronate, the objectives of the present study were: 1) to evaluate enamel resistance to acid challenges (artificial induction of carious lesions and artificial induction of erosion lesions) by analysis of subsurface microhardness and lesion depth; 2) to evaluate enamel permeability by a histochemical coloring method. The crowns of 20 upper incisors of 10 animals, which received chemically pure sodium alendronate (experimental group), and 16 upper incisors of 8 animals, which received distilled water (control group) were used in the study. For the experiments of artificial induction of carious and erosion lesions, the coronal portions of 18 upper incisors were bisected transversally to produce two 8-mm-long sections per tooth, totalizing 36 sections, which were randomly assigned according to the experimental group (n=10/group/experiment) and the control group (n=8/group/experiment). For the permeability test, the remaining 18 upper incisors were used, being 10 of the experimental group and 8 of the control group. The quantitative response variables were the percent subsurface Knoop microhardness change (%SHC) assessed with a microhardness meter at different depths from enamel surface for the artificially induced carious/erosion lesions; and the carious/erosion lesions depth and enamel permeability, measured by light microscopy. The results were subjected to statistical analysis by ANOVA test with significance level set at 5%. There was no statistically significant difference between the experimental and control groups (p>0.05) for either %SHC or depth of the artificially induced carious/erosion lesions. Data from the permeability test revealed no statistically significant difference (p>0.05) between the groups, showing similar penetration of the tracer agent in both of them. Therefore, it may be concluded that after the systemic use of sodium alendronate, the enamel of rat teeth did not present higher resistance to acid challenges (artificially induced carious/erosion lesions) and did not suffer alteration of its permeability.

As reabsorções radiculares externas são conseqüências decorrentes de lesões traumáticas severas como a avulsão e a intrusão. O estudo de medicamentos que possam auxiliar no controle e prevenção desses processos é de grande interesse. O objetivo desse estudo foi avaliar a citotoxicidade do alendronato de sódio e da calcitonina, aplicados em forma de pasta em cultura de fibroblastos humanos de gengiva. Foi utilizado para o experimento meio condicionado pelas substâncias a serem testadas, divididas em quatro grupos: alendronato de sódio (ALN) a 10-6M; ALN a 10-7M; ALN a 10-8M; e calcitonina (CAL). Como grupos controle usou-se meio de cultura não condicionado e meio de cultura condicionado apenas pelo veículo das pastas (talco farmacêutico e solução salina). A sobrevivência celular foi analisada pelo método de contagem de células viáveis nos tempos experimentais de 1 e 24 horas. Os resultados foram analisados estatisticamente e mostraram que o veículo empregado e as pastas de ALN nas concentrações de 10-7 e 10-8 M não apresentaram diferença significante do grupo controle. Conclui-se que os produtos oriundos das pastas formuladas com ALN a 10-6 M e com CAL a 0,002% apresentaram citotoxicidade para fibroblastos de gengiva humana na forma e período empregados. / External root resorption is a common consequence of dental trauma injuries, mainly in dental avulsion and extrusion. Doubtful prognoses awake the interesting in studying medications, which could help in controlling and preventing these resorption processes. The aim of this study was to evaluate the citotoxicity of sodium alendronate (ALN) and calcitonin, used in a paste formulation in human gingival fibroblasts. Products leached from the pastes were divided into four experimental groups and had conditioned cellular medium: ALN 10-6 M, ALN 10-7 M, ALN 10-8 M and calcitonin 0,002%. Such groups were taking under: fresh media and conditioned media with vehicle (talcum powder and saline). On experimental times, 1 and 24 hours, citotoxicity analyses were performed using the Trypan blue dye exclusion assay. The results were statistically analyzed and showed that the vehicle used and ALN concentrations 10-7 M and 10-8 M did not lead to differences from the control group with fresh media. In contrast, the calcitonin and the ALN pastes in a higher concentration, 10-6 M, demonstrated cell growth reduction. In conclusion, this research showed that products leached from pastes with calcitonin and ALN 10-6 were cytotocic for human gingival fibroblasts in vitro. Meanwhile, substances leached from ALN 10-7 M and 10-8 M were biocompatible.

Os bisfosfonatos representam uma classe de drogas que agem sobre o metabolismo ósseo e são amplamente utilizadas na prevenção e tratamento de estados osteopênicos e osteoporóticos. Tem sido demonstrado que alterações na estrutura dos tecidos dentais podem ocorrer como efeitos adversos à administração sistêmica do alendronato de sódio. No esmalte de dentes de ratos submetidos ou não ao uso sistêmico de alendronato de sódio, os objetivos do presente estudo foram: 1) avaliar a resistência do esmalte a desafios ácidos (indução artificial de lesões de cárie e indução artificial de lesões de erosão) por meio da mensuração da microdureza subsuperficial e da profundidade das lesões; 2) avaliar a permeabilidade do esmalte por meio de técnica histoquímica. Foi utilizada a porção coronária de 20 incisivos superiores de 10 animais submetidos à medicação com alendronato de sódio (grupo experimental) e 16 incisivos superiores de 8 animais que receberam apenas água destilada (grupo controle). Para os experimentos de indução artificial de lesão de cárie e de lesão de erosão, as porções coronárias de 18 incisivos superiores foram seccionadas ao meio, no sentido transversal, obtendo-se duas secções de aproximadamente 8 mm de comprimento de cada dente, num total de 36 secções que foram aleatoriamente divididas de acordo com o grupo experimental (n=10/grupo/experimento) e controle (n=8/grupo/experimento). Para a avaliação da permeabilidade, foram utilizados 18 incisivos superiores restantes, sendo 10 para o grupo experimental e 8 para o grupo controle. As variáveis de resposta quantitativa para o estudo foram a porcentagem da variação de perda de dureza subsuperficial (%VPD) na indução artificial de lesões de cárie e lesões de erosão, avaliadas em microdurômetro; e a profundidade das lesões de desmineralização de cárie/erosão e a permeabilidade do esmalte avaliadas em microscopia de luz. Os resultados foram submetidos à análise estatística por meio do teste ANOVA. O nível de significância adotado foi de 5%. De acordo com os resultados obtidos verificou-se que não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos experimental e controle (p>0,05), tanto na porcentagem de VPD quanto na profundidade das lesões de cárie/erosão. Com relação à permeabilidade não foi observada diferença significante entre os grupos (p>0,05), mostrando penetração do agente traçador semelhante em ambos. Pôde-se concluir que, após o uso sistêmico do alendronato de sódio, o esmalte de dentes de ratos não apresentou maior resistência aos desafios ácidos (indução artificial de lesões de cárie e erosão) e não sofreu alteração em sua permeabilidade. / Bisphosphonates represent a class of drugs that act on bone metabolism and are widely used in the prevention and treatment of osteopenic and osteoporotic states. It has been demonstrated that structural alterations on dental tissues might occur as adverse effects of systemic sodium alendronate administration. In the dental enamel of rats subjected or not to systemic use of sodium alendronate, the objectives of the present study were: 1) to evaluate enamel resistance to acid challenges (artificial induction of carious lesions and artificial induction of erosion lesions) by analysis of subsurface microhardness and lesion depth; 2) to evaluate enamel permeability by a histochemical coloring method. The crowns of 20 upper incisors of 10 animals, which received chemically pure sodium alendronate (experimental group), and 16 upper incisors of 8 animals, which received distilled water (control group) were used in the study. For the experiments of artificial induction of carious and erosion lesions, the coronal portions of 18 upper incisors were bisected transversally to produce two 8-mm-long sections per tooth, totalizing 36 sections, which were randomly assigned according to the experimental group (n=10/group/experiment) and the control group (n=8/group/experiment). For the permeability test, the remaining 18 upper incisors were used, being 10 of the experimental group and 8 of the control group. The quantitative response variables were the percent subsurface Knoop microhardness change (%SHC) assessed with a microhardness meter at different depths from enamel surface for the artificially induced carious/erosion lesions; and the carious/erosion lesions depth and enamel permeability, measured by light microscopy. The results were subjected to statistical analysis by ANOVA test with significance level set at 5%. There was no statistically significant difference between the experimental and control groups (p>0.05) for either %SHC or depth of the artificially induced carious/erosion lesions. Data from the permeability test revealed no statistically significant difference (p>0.05) between the groups, showing similar penetration of the tracer agent in both of them. Therefore, it may be concluded that after the systemic use of sodium alendronate, the enamel of rat teeth did not present higher resistance to acid challenges (artificially induced carious/erosion lesions) and did not suffer alteration of its permeability.

A osteonecrose dos ossos maxilares relacionada ao uso prolongado de bisfosfonatos (OMRB), associada a procedimentos cirúrgicos, constitui uma entidade com menos de dez anos de ocorrência na clínica estomatológica. Os bisfosfonatos (BFs) são medicamentos antireabsortivos altamente efetivos no tratamento de diversas doenças ósseas, além de metástases. Embora a maioria dos casos de OMRB tenha sido relatada após o uso de potentes BFs da terceira geração, o alendronato de sódio (ALN), um bisfosfonato de segunda geração, é amplamente utilizado no tratamento e prevenção de doenças ósseas. O presente estudo experimental in vivo visou analisar a possível presença de OMRB no processo alveolar de ratos tratados com ALN após exodontia do segundo molar inferior. Para tanto, utilizou-se 30 ratos Wistar, machos, com 7 semanas de vida, divididos em dois grupos, ALN (tratado com alendronato) e CTL (controle, tratado com solução salina). O ALN foi administrado diariamente por injeção subcutânea na dose de 2,5 mg/kg peso por 14 dias. Nesse momento, foi realizada a exodontia, havendo sido eutanasiados cinco animais de cada grupo, 7, 14 e 21 dias após a exodontia. Após a eutanásia, a região da mandíbula foi fixada em 2,5% formaldeído e 2% glutaraldeído, em tampão cacodilato 0,1M - pH 7,4 e descalcificada em EDTA a 4,13% por 30 dias. Os espécimes foram analisados em cortes corados em HE, e foi realizada histomorfometria para análise da reabsorção da crista alveolar mesial e distal, além do tecido ósseo neoformado no interior do alvéolo, que também foi analisado através de imuno-histoquímica para as proteínas não colágenas OPN e BSP e para evidenciação de vasos sanguíneos neoformados com o anticorpo anti-CD105. Os osteoclastos foram evidenciados através de histoquímica para fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP). Além disso, as células e eventos da reparação foram examinados por microscopia eletrônica de transmissão. Os resultados mostraram que os animais tratados com ALN exibiram OMRB de grau zero em todos os períodos estudados, além da presença de osteoclastos latentes TRAP-positivos e histomorfometria, onde a não reabsorção das cristas alveolares ocasionaram a permanência do osso alveolar, em contato com bactérias. Observou-se ainda, um claro atraso na formação óssea, quando comparado ao controle, além da diminuição dos vasos sanguíneos nos estágios iniciais. A localização e o padrão de marcação para as proteínas OPN e BSP foram considerados normais, observados evidente marcação em áreas ósseas imaturas e em linhas cimentantes. Assim, concluiu-se que o ALN administrado neste protocolo provocou OMRB leve, provavelmente causada pela diminuição da angiogênese, presença de osso alveolar não remodelado expostos a colônias bacterianas, além da diminuição da atividade osteoblástica. / The bisphosphonate-related osteonecrosis of the jaw (BRONJ) associated with surgery procedures, is an entity with less than 10 years of occurrence in dental practice. The bisphosphonates (BFs) are anti-resorbing drugs highly effective in the treatment of several bone diseases, including metastasis. Although the majority of cases of BRONJ had been reported with the potent third generation of BFs, sodium alendronate (ALN), a second generation bisphosphonate, is widely used for treatment or prevent bone diseases as osteoporosis. The present experimental study aimed to analyze the possible presence of BRONJ in the alveolar process of rats treated with ALN following extraction of the mandibular second molar. For this, we used thirty 7-week-old male Wistar rats, divided into two groups, ALN (treated with alendronate) and CTL (control, treated with saline solution). The administration of ALN received daily subcutaneous injection at a dose of 2.5 mg/kg for 14 days. At that moment, the extraction was performed. After 7, 14 e 21 days of surgery, five animals of each group were euthanized and the mandibular region fixed in 2.5% formaldehyde + 2% glutaraldehyde in cacodylate buffer 0.1M - pH 7.4 and decalcified in 4.13% EDTA for 30 days. The specimens were morphologically analyzed in HE stained sections, and, histomorphometry was used to analyze the resorption of mesial and distal alveolar crests, as well as the bone formed into the alveolus. Immunohistochemistry for the noncollagenous proteins OPN and BSP and for CD105 to revel neoformed blood vessels was also performed. The osteoclasts were revealed through tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histochemistry. Moreover, the cells and events of alveolar healing were examined by transmission electron microscopy. The results showed light degree of BRONJ in the ALN treated animals at all the studied periods, and the presence of latent osteoclasts near the non-resorbing crest alveolar. Bacteria were observed in contact with the non-resorbed alveolar bone. An evident delay in bone formation when compared to control group was also observed, as well as the decrease of blood vessels in early stages. The distribution of immature bone and in cement lines of OPN and BSP was considered normal. Thus, we concluded that the present protocol of ALN yielded light BRONJ areas, probably by reduced angiogenesis, lock of remodeling of alveolar, presence of bacterial colonies and evident decreased osteoblastic ativitity.

O objetivo desse estudo foi avaliar a citotoxicidade do alendronato de sódio (ALN), em diferentes concentrações, sobre osteoblastos em cultura celular. Foi utilizado para o experimento meio sem droga (controle) e meio contendo a droga em diferentes concentrações a saber: 0,5; 1; 5; 10; 20 e 40 mg/ml. Para o estudo foi utilizado uma linhagem de osteoblastos de rato (Osteo-1). A viabilidade celular foi inferida a partir da análise da atividade mitocondrial das células através do método da redução do MTT nos tempos experimentais de 0, 24, 48 e 72 horas. Após análise estatística (teste de Mann-Whitney, p<0,05), os resultados mostraram que, com exceção da concentração de 40mg/ml, todos os grupos apresentaram células viáveis, embora todas as concentrações de ALN tenham reduzido a atividade mitocondrial em mais de 50% em relação ao grupo controle, sugerindo que o ALN nessas concentrações estudadas foi citotóxico para os osteoblastos. / The aim of this study was to analyze the cytotoxicity of a bisphosphonate (sodium alendronate) on rat osteoblasts. The experimental groups were GI (control) no sodium alendronate, and GII, GIII, GIV, GV, GVI, and GVII with sodium alendronate at the concentrations of 0.5, 1, 5, 10, 20, and 40mg/ml, respectively. The cell viability was evaluated by MTT assay in experimental times 0, 24, 48, and 72 h. Data were statistically analyzed. Cultures treated with sodium alendronate showed cell viability percentages significantly lower (p < 0.05) than those of the control groups. In GVII, no viable cell was observed in all experimental times. It could be concluded that sodium alendronate, on direct contact with rat osteoblasts, is cytotoxic in all concentrations studied.

As reabsorções radiculares externas são conseqüências decorrentes de lesões traumáticas severas como a avulsão e a intrusão. O estudo de medicamentos que possam auxiliar no controle e prevenção desses processos é de grande interesse. O objetivo desse estudo foi avaliar a citotoxicidade do alendronato de sódio e da calcitonina, aplicados em forma de pasta em cultura de fibroblastos humanos de gengiva. Foi utilizado para o experimento meio condicionado pelas substâncias a serem testadas, divididas em quatro grupos: alendronato de sódio (ALN) a 10-6M; ALN a 10-7M; ALN a 10-8M; e calcitonina (CAL). Como grupos controle usou-se meio de cultura não condicionado e meio de cultura condicionado apenas pelo veículo das pastas (talco farmacêutico e solução salina). A sobrevivência celular foi analisada pelo método de contagem de células viáveis nos tempos experimentais de 1 e 24 horas. Os resultados foram analisados estatisticamente e mostraram que o veículo empregado e as pastas de ALN nas concentrações de 10-7 e 10-8 M não apresentaram diferença significante do grupo controle. Conclui-se que os produtos oriundos das pastas formuladas com ALN a 10-6 M e com CAL a 0,002% apresentaram citotoxicidade para fibroblastos de gengiva humana na forma e período empregados. / External root resorption is a common consequence of dental trauma injuries, mainly in dental avulsion and extrusion. Doubtful prognoses awake the interesting in studying medications, which could help in controlling and preventing these resorption processes. The aim of this study was to evaluate the citotoxicity of sodium alendronate (ALN) and calcitonin, used in a paste formulation in human gingival fibroblasts. Products leached from the pastes were divided into four experimental groups and had conditioned cellular medium: ALN 10-6 M, ALN 10-7 M, ALN 10-8 M and calcitonin 0,002%. Such groups were taking under: fresh media and conditioned media with vehicle (talcum powder and saline). On experimental times, 1 and 24 hours, citotoxicity analyses were performed using the Trypan blue dye exclusion assay. The results were statistically analyzed and showed that the vehicle used and ALN concentrations 10-7 M and 10-8 M did not lead to differences from the control group with fresh media. In contrast, the calcitonin and the ALN pastes in a higher concentration, 10-6 M, demonstrated cell growth reduction. In conclusion, this research showed that products leached from pastes with calcitonin and ALN 10-6 were cytotocic for human gingival fibroblasts in vitro. Meanwhile, substances leached from ALN 10-7 M and 10-8 M were biocompatible.