Cytokines are soluble signalling mediators within the immune system, and have been shown to be of importance in the development of type 1 diabetes (T1D). This thesis studied the production of cytokines in experimental models of T1D and during transplantation of insulin-producing islets of Langerhans. We have demonstrated that the transcriptional TNFα-inhibitor MDL 201,449A, previously shown to reduce immune-mediated diabetes induced in mice by multiple low doses of streptozotocin, was not TNFα-specific, but also inhibited IFNγ and IL-10 in spleen cells. Furthermore, when the inhibitor was removed from in vitro cultures, a rebound phenomenon of increased cytokine secretion occurred. The thesis also investigated whether plastic adhesion, a method generally employed to deplete macrophages, influenced cytokine production in spleen cells. We observed that plastic adhesion increased TNFα, IFNγ and IL-10 release, and decreased IL-4 secretion. Plastic adhesion depleted only ~30% of the macrophages, but as much as ~60% of the regulatory T cells. Thirdly, we found that “control” treatments for islet transplantations, i.e. syngeneic and sham transplantations, exerted a clear effect on cytokine production from spleen cells, possibly due to a decrease in regulatory T cells that may be caused by the surgery and/or anaesthesia. Moreover, spleen cells from mice exposed to surgery exhibited a decreased proliferative capacity to concanavalin A stimulation. We also perceived a marked difference in cytokine response depending on the mouse strain used in the experiments. Finally, we aimed to elucidate if, besides autoimmune activities, also high glucose- and free fatty acid concentrations as seen in diabetes could cause changes in cytokine production. We observed that spleen cells cultured in varying glucose concentrations had different cytokine production profiles. The free fatty acid palmitate might also influence cytokine release, but this effect was obscured by the cytokine-suppressive action of the ethanol used to dissolve the palmitate.

ABSTRACT The morphological premalignant changes in prostate epithelium such as high grade prostatic intraepithelial neoplasia (HGPIN) precede invasive prostate cancer (PC) by several decades. The overall aim of this project was to identify patterns of gene expression in HGPIN and early PC which increase our understanding of the early biology of PC and identify genes and pathways that correlate with an aggressive phenotype. A comprehensive tissue cohort of premalignant prostate lesions was collected in a tissue microarray (TMA) platform that was utilised for high-throughput validation of target genes. Using this unique resource, the expression of the tumour suppressor gene PTEN was assessed using immunohistochemistry in an initial candidate gene approach based on mouse models implicating PTEN in carcinogenesis. No significant difference in expression of PTEN was detected in premalignant and benign epithelium. A transcript profiling approach was undertaken by integrating laser capture microdissection, linear RNA amplification and oligonucleotide microarrays to perform a screen of matched patient samples of normal, HGPIN and PC cells. The expression patterns of two genes encoding secreted proteins, neuropeptide Y (NPY) and macrophage inhibitory cytokine (MIC-1) were validated using immunohistochemistry on TMAs representing the progression model of early PC. Increased expression of these proteins in PC was confirmed to occur early in the disease process and altered expression of NPY and MIC-1 was associated with worse clinical outcome. Further analysis of global gene expression patterns using a structured network knowledge base identified a notable aberration in the expression of extracellular matrix and extracellular matrix associated proteins in HGPIN and provided novel evidence for the role of this class of molecules in the development of PC. In summary, contrary to current dogma based on work in animal models, altered PTEN expression is unlikely to represent an important event in the development of malignancy in the human prostate. In contrast, the expression patterns and prognostic value of NPY and MIC-1 in HGPIN support their further evaluation as biomarkers for the development and progression of PC. The aberrant expression of genes and networks of genes detected in HGPIN will assist in further identification of biological pathways which may be targeted in therapeutic strategies against the development and progression of PC.

ABSTRACT The morphological premalignant changes in prostate epithelium such as high grade prostatic intraepithelial neoplasia (HGPIN) precede invasive prostate cancer (PC) by several decades. The overall aim of this project was to identify patterns of gene expression in HGPIN and early PC which increase our understanding of the early biology of PC and identify genes and pathways that correlate with an aggressive phenotype. A comprehensive tissue cohort of premalignant prostate lesions was collected in a tissue microarray (TMA) platform that was utilised for high-throughput validation of target genes. Using this unique resource, the expression of the tumour suppressor gene PTEN was assessed using immunohistochemistry in an initial candidate gene approach based on mouse models implicating PTEN in carcinogenesis. No significant difference in expression of PTEN was detected in premalignant and benign epithelium. A transcript profiling approach was undertaken by integrating laser capture microdissection, linear RNA amplification and oligonucleotide microarrays to perform a screen of matched patient samples of normal, HGPIN and PC cells. The expression patterns of two genes encoding secreted proteins, neuropeptide Y (NPY) and macrophage inhibitory cytokine (MIC-1) were validated using immunohistochemistry on TMAs representing the progression model of early PC. Increased expression of these proteins in PC was confirmed to occur early in the disease process and altered expression of NPY and MIC-1 was associated with worse clinical outcome. Further analysis of global gene expression patterns using a structured network knowledge base identified a notable aberration in the expression of extracellular matrix and extracellular matrix associated proteins in HGPIN and provided novel evidence for the role of this class of molecules in the development of PC. In summary, contrary to current dogma based on work in animal models, altered PTEN expression is unlikely to represent an important event in the development of malignancy in the human prostate. In contrast, the expression patterns and prognostic value of NPY and MIC-1 in HGPIN support their further evaluation as biomarkers for the development and progression of PC. The aberrant expression of genes and networks of genes detected in HGPIN will assist in further identification of biological pathways which may be targeted in therapeutic strategies against the development and progression of PC.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2008. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 86-111).

Nos últimos anos, o corpo de evidência científica a respeito da relação entre as doenças periodontais e desordens metabólicas - como a obesidade e a síndrome metabólica - vem aumentando consideravelmente. Entretanto, estudos avaliando os mecanismos biológicos que permeiam esta associação ainda são escassos. A presente tese teve como objetivo principal avaliar, em ratos Wistar, o efeito da obesidade e da síndrome metabólica (MetS) sobre a patogênese da perda óssea alveolar. Nesse sentido, foram produzidos 4 artigos científicos, sendo 2 revisões de literatura e 2 estudos experimentais. A primeira revisão de literatura buscou avaliar a literatura disponível acerca da relação MetS e doença periodontal. Pode-se observar que poucos estudos foram localizados e, dentre aqueles avaliados, a maioria tratouse de estudos de natureza epidemiológica transversal. Não foram localizados estudos de natureza longitudinal e apenas um estudo de intervenção piloto foi avaliado. A análise desta evidência permitiu concluir que o tópico é de interesse, porém ainda não foi explorado na perspectiva dos fatores de risco. Para o segundo e terceiro artigos, foi utilizado um modelo animal que reproduz as características de obesidade (artigo 2) e MetS (artigo 3). Para o segundo artigo, foram utilizados 28 ratos Wistar machos divididos em 2 grupos experimentais. O grupo controle recebeu ração padrão e água e o grupo teste além da ração padrão/água foi exposto a uma dieta de cafeteria (CAF) para indução de obesidade. Foi definido um ponto de corte para ocorrência de doença periodontal, sendo essa considerada positiva quando da presença de perda óssea alveolar ≥0.51mm em fotografias padronizadas. Diferenças significativas para o peso e índice de Lee foram observadas no grupo exposto a dieta CAF indicando presença de obesidade neste grupo. Observou-se que os animais obesos apresentaram significativamente mais sítios positivos para doença periodontal. Portanto, pode se concluir que a obesidade aumenta a perda óssea alveolar espontânea em ratos Wistar. Para o terceiro artigo, 60 ratos Wistar foram divididos em 4 grupos: Controle (ração padrão e água), Doença Periodontal (DP) (ração padrão e ligadura no semana 12), MetS (dieta CAF por 17 semanas) e MetS+DP (ligadura na semana 12 e dieta CAF por 17 semanas). Dois animais foram perdidos ao longo do período experimental por razões não relacionadas ao protocolo do estudo. Diferenças significativas foram observadas para o peso, índice de Lee colesterol total e triglicerídeos, indicando presença de MetS. Foram realizadas análises do percentual de perda óssea alveolar através de micro-tomografias e os níveis séricos de IL1- e TNF- foram avaliados por ELISA. Observou-se que os animais portadores de MetS exibiram maiores percentuais de perda óssea alveolar induzida e espontânea. Não foram observadas diferenças significativas para os níveis séricos das citocinas avaliadas. Nesse sentido, pode ser concluído que a presença de MetS modula a resposta do hospedeiro, provavelmente pela quebra da homeostase do periodonto. O artigo 4 tratou-se de uma revisão de literatura com caráter informativo alertando aos profissionais da odontologia a responsabilidade da transcender as abordagens odontológicas tradicionais colocando a profissão como parte importante e integrantes da equipe de saúde. A partir dos resultados obtidos nos artigos constituintes da presente tese e frente às reflexões realizadas, pode-se concluir que a doença periodontal é influenciada por desordens metabólicas. Recomenda-se, portanto, a inclusão de questionamentos e análises dessas condições e suas potenciais inter-relações pelos profissionais da saúde / between periodontal diseases and metabolic disorders – like obesity and metabolic syndrome – has considerably increased. However, studies evaluating the biological mechanisms related to this association are still scarce. The present thesis had as main objective to evaluate, in Wistar rats, the effect of obesity and metabolic syndrome (MetS) on the pathogenesis of alveolar bone loss. In this respect, 4 scientific articles were written, being 2 literature reviews and 2 experimental studies. The first literature review evaluated the available literature relating MetS and periodontal disease. It can be observed that few studies were retrieved and, among thos evaluated, the majority were of cross-sectional epidemiological nature. Longitudinal studies were not found and only one pilot intervention study was evaluated. The analysis of this evidence lead to the conclusion that the topic is of interest, however still has not been explored in the perspective of risk factors. For the second and third articles, an animal model was used, that mimics obesity (article 2 and MetS (article 3). For the second article, 28 male Wistar rats were divided in 2 experimental groups. The control group received chow and water and the test group, besides the standard chow/water was exposed to cafeteria diet (CAF) in order to induce obesity. A cut-off point was defined for the occurrence of periodontal disease, being this considered positive when alveolar bone loss ≥0.51mm was present in standardized pictures. Significant differences for body weight and Lee Index were observed in the group exposed to CAF diet, indicating obesity. Obese animals presented significantly more sites positive for periodontal disease. Thus, it may be concluded that obesity increases spontaneous alveolar bone loss in Wistar rats. For the third article, 60 male Wistar rats were divided in 4 groups: Control (standard chow and water), Periodontal disease (PD) (standard rat chow and ligature on week 12, MetS (CAF diet for 17 weeks and MetS+PD (ligature on week 12 and CAF diet for 17 weeks). Two animals were lost during the experimental period for reasons not related to the study protocol. Significant differences were observed in body weight, Lee Index, total cholesterol and triglycerides, indicating the presence of MetS. Analyses of percent alveolar bone loss were performed by microcomputer tomography and the serum levels of IL1- and TNF- were performed by ELISA. Animals with MetS exhibited higher percentage of spontaneous and induced alveolar bone loss. No significant differences were observed for the serum levels of the evaluated cytokines. Thus, it may be concluded that the presence of MetS modulates the host response, probably breaking the periodontium homeostasis. Article 4 is a literature review with informative characteristics alerting the dental professionals about the responsibility of going beyond the traditional dental practices, making the profession an important component of the health team. Taking into consideration the obtained results in the articles in this thesis, and the thoughts coming from them, it may be concluded that periodontal disease is influenced by metabolic disorders. It is recommended that questions and analyzes are made about these conditions and their potential interrelationships by the health personnel.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-15Bitstream added on 2014-06-13T19:23:20Z : No. of bitstreams: 1 mineo_twp_dr_jabo.pdf: 3433348 bytes, checksum: fac62f81f1b33434ac64c0e811ae8d5a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neospora caninum é um protozoário do Filo Apicomplexa, que foi primeiramente descrito como causa de encefalomielite em filhotes caninos sorologicamente negativos para Toxoplasma gondii. Estudos anteriores neste importante hospedeiro da cadeia epidemiológica de N. caninum demonstram que as respostas de anticorpos IgG são tardiamente detectadas e que a infecção clínica é de difícil indução. Desta forma, este trabalho objetivou o estudo da imunidade de cães frente à infecção oral por N. caninum. Os resultados obtidos a partir de análises de diversos animais experimentalmente infectados indicam que os cães apresentam uma prolongada fase aguda da infecção, com eliminação de oocistos associado à queda nos níveis de linfócitos T CD4+ e CD8+ e diminuição de MHC de classe II por células apresentadoras de antígeno. Adicionalmente, os animais apresentam soroconversão instável durante o mesmo período, sendo que somente IgG1 e IgG3 foram detectados em adultos e filhotes, respectivamente, entre o 2o e 3o mês de infecção. De forma concomitante, observa-se uma predominância da expressão de citocinas imunomoduladoras como TGF 1, IL-4 e IL-10. Após dois meses de infecção, o perfil da resposta se inverte, sendo observado picos de produção dos marcadores CD4 e CD8 de linfócitos T e citocinas próinflamatórias como IFN , IL-6 e IL-12, além do aumento nos títulos de anticorpos, principalmente IgG1 e IgG4 nos cães jovens. Com base nestes resultados, conclui-se que os cães apresentam uma relação de equilíbrio com N. caninum, a qual induz nesta espécie uma modulação da resposta imunológica durante a fase de merogonia. / Neospora caninum is an Apicomplexan parasite firstly described as the cause of encephalomyelitis in puppies serologically negative to Toxoplasma gondii. Previous reports on the parasite s definitive host indicate a late IgG antibody response and that clinical disease is difficult to be induced. The aim of this study was to investigate canine immunity during N. caninum oral infection. The results obtained from the analysis of infected animal s samples indicate that dogs present a protracted acute phase, with oocyst shedding correlated to a drop in CD4+ and CD8+ T cell levels, and low MHC class II expression by antigen presenting cells. Additionally, the dogs presented an unstable seroconversion pattern in the same period, with only IgG1 and IgG3 being detected in adult dogs and puppies, respectively, between the second and third months of infection. Concomitantly, dominant Th2 cytokine expression was observed, with peak expression levels of TGF 1, IL-4 and IL-10. After 2 months of infection, the immunity profile shifts towards a Th1 response, with high levels of CD4 and CD8 lymphocytary marker production and pro-inflammatory cytokine expression (IFN , IL-6 and IL-12), besides of the raise in antibody levels, especially IgG1 and IgG4 in puppies. Based in the results presented herein, we may conclude that dogs present a balanced host-parasite relationship, modulating the host immune response during N. caninum merogony.

Resumo: A expressão de citocinas inflamatórias é um processo estritamente regulado por mecanismos variados, incluindo o controle da sinalização intracelular e da atividade transcricional por inibidores endógenos, os quais são pouco estudados e compreendidos. Três grupos de proteínas: SHP, PIAS e SOCS inibem de maneira distinta e específica a transdução de sinais pela via JAK/STAT, bem como a atividade dos fatores de transcrição, eventos que modulam a expressão de diversas citocinas. As doenças periodontais estão associadas à inflamação persistente, com elevados níveis de citocinas proinflamatórias, no entanto praticamente não existem informações sobre a participação destes mecanismos de regulação nas diferentes condições clínicas periodontais. Os objetivos deste projeto incluíram avaliar a cinética de expressão das proteínas SOCS1 e SOCS3 e suas proteínas-alvo, STAT1 e STAT3, respectivamente, durante a evolução da doença periodontal. Foram utilizados 36 ratos Wistar divididos em 2 grupos: DP - doença periodontal induzida por 2 métodos: ligaduras ao redor dos 1os molares inferiores e injeções de 60 μg de LPS de E. coli no tecido gengival palatino dos molares superiores, 3x/semana; Grupo controle negativo - recebeu apenas injeções de PBS (veículo). Os ratos foram sacrificados 7, 15 e 30 dias após a indução da doença periodontal para avaliação histológica e análise macroscópica da perda óssea alveolar. A expressão de SOCS1 e SOCS3 e a ativação de STAT1 e STAT3 foram avaliadas nas biópsias gengivais por PCR em tempo real e Western blot. Ambos os modelos apresentaram significante e progressiva perda óssea dos 7 aos 30 dias. A inflamação foi evidente já no período de 7 dias em ambos os modelos, porém enquanto manteve-se similar nos demais períodos no modelo de indução por LPS, apresentou uma diminuição na severidade da inflamação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory cytokine gene expression is a process strictly regulated by various mechanisms, including the negative regulation of signaling of cytokine receptors and of the activity of transcription factors such as STATs. These mechanisms involve endogenous proteins and are largely unknown, especially in periodontal diseases. Three groups of proteins, SHP, PIAS and SOCS modulate in a fairly specific manner JAK/STAT signaling and/or STAT activity. Periodontal diseases are infectious-inflammatory conditions of the supporting tissues of the teeth associated with increased levels of proinflammatory cytokines, but there are no information regarding the role of these endogenous mediators of JAK/STAT during its course. The aims of this study included the evaluation of the expression kinetics of inducible negative regulators and their target proteins during the course of experimentally induced periodontal disease. 36 Wistar rats were divided into two groups: PD - experimental periodontal disease induced by two methods: ligature placement around the first mandibular molars and E. coli lipopolysaccharide (LPS) injections into the palatal gingival tissues of the maxillary molars, 3x/week, and Negative Control group. Rats were sacrificed 07, 15 and 30 days after disease induction for histological evaluation of periodontal inflammation and macroscopic analysis of alveolar bone loss. SOCS expression and the activation status of STAT1 and STAT3 were evaluated in gingival biopsies by real time PCR and Western Blot. Both disease models presented significant progressive bone loss from 7 to 30 days. Inflammation was evident and similar for all the periods in LPS injected sites; however, a decrease on severity at the end of the experimental period was observed in the ligature model. There was a significant (p<0.05) increase on SOCS1 and SOCS3 gene expression in PD compared to control... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Joni Augusto Cirelli / Coorientador: Carlos Rossa Junior / Banca: Carlos Ferreira dos Santos / Banca: Paulo Sergio Cerri / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-30Bitstream added on 2014-06-13T19:26:31Z : No. of bitstreams: 1 souza_jac_me_arafo.pdf: 631355 bytes, checksum: 9371a4a7027469c6d4a66de2870a71ed (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A expressão de citocinas inflamatórias é um processo estritamente regulado por mecanismos variados, incluindo o controle da sinalização intracelular e da atividade transcricional por inibidores endógenos, os quais são pouco estudados e compreendidos. Três grupos de proteínas: SHP, PIAS e SOCS inibem de maneira distinta e específica a transdução de sinais pela via JAK/STAT, bem como a atividade dos fatores de transcrição, eventos que modulam a expressão de diversas citocinas. As doenças periodontais estão associadas à inflamação persistente, com elevados níveis de citocinas proinflamatórias, no entanto praticamente não existem informações sobre a participação destes mecanismos de regulação nas diferentes condições clínicas periodontais. Os objetivos deste projeto incluíram avaliar a cinética de expressão das proteínas SOCS1 e SOCS3 e suas proteínas-alvo, STAT1 e STAT3, respectivamente, durante a evolução da doença periodontal. Foram utilizados 36 ratos Wistar divididos em 2 grupos: DP - doença periodontal induzida por 2 métodos: ligaduras ao redor dos 1os molares inferiores e injeções de 60 μg de LPS de E. coli no tecido gengival palatino dos molares superiores, 3x/semana; Grupo controle negativo - recebeu apenas injeções de PBS (veículo). Os ratos foram sacrificados 7, 15 e 30 dias após a indução da doença periodontal para avaliação histológica e análise macroscópica da perda óssea alveolar. A expressão de SOCS1 e SOCS3 e a ativação de STAT1 e STAT3 foram avaliadas nas biópsias gengivais por PCR em tempo real e Western blot. Ambos os modelos apresentaram significante e progressiva perda óssea dos 7 aos 30 dias. A inflamação foi evidente já no período de 7 dias em ambos os modelos, porém enquanto manteve-se similar nos demais períodos no modelo de indução por LPS, apresentou uma diminuição na severidade da inflamação... / Inflammatory cytokine gene expression is a process strictly regulated by various mechanisms, including the negative regulation of signaling of cytokine receptors and of the activity of transcription factors such as STATs. These mechanisms involve endogenous proteins and are largely unknown, especially in periodontal diseases. Three groups of proteins, SHP, PIAS and SOCS modulate in a fairly specific manner JAK/STAT signaling and/or STAT activity. Periodontal diseases are infectious-inflammatory conditions of the supporting tissues of the teeth associated with increased levels of proinflammatory cytokines, but there are no information regarding the role of these endogenous mediators of JAK/STAT during its course. The aims of this study included the evaluation of the expression kinetics of inducible negative regulators and their target proteins during the course of experimentally induced periodontal disease. 36 Wistar rats were divided into two groups: PD - experimental periodontal disease induced by two methods: ligature placement around the first mandibular molars and E. coli lipopolysaccharide (LPS) injections into the palatal gingival tissues of the maxillary molars, 3x/week, and Negative Control group. Rats were sacrificed 07, 15 and 30 days after disease induction for histological evaluation of periodontal inflammation and macroscopic analysis of alveolar bone loss. SOCS expression and the activation status of STAT1 and STAT3 were evaluated in gingival biopsies by real time PCR and Western Blot. Both disease models presented significant progressive bone loss from 7 to 30 days. Inflammation was evident and similar for all the periods in LPS injected sites; however, a decrease on severity at the end of the experimental period was observed in the ligature model. There was a significant (p<0.05) increase on SOCS1 and SOCS3 gene expression in PD compared to control... (Complete abstract click electronic access below)

Nos últimos anos, o corpo de evidência científica a respeito da relação entre as doenças periodontais e desordens metabólicas - como a obesidade e a síndrome metabólica - vem aumentando consideravelmente. Entretanto, estudos avaliando os mecanismos biológicos que permeiam esta associação ainda são escassos. A presente tese teve como objetivo principal avaliar, em ratos Wistar, o efeito da obesidade e da síndrome metabólica (MetS) sobre a patogênese da perda óssea alveolar. Nesse sentido, foram produzidos 4 artigos científicos, sendo 2 revisões de literatura e 2 estudos experimentais. A primeira revisão de literatura buscou avaliar a literatura disponível acerca da relação MetS e doença periodontal. Pode-se observar que poucos estudos foram localizados e, dentre aqueles avaliados, a maioria tratouse de estudos de natureza epidemiológica transversal. Não foram localizados estudos de natureza longitudinal e apenas um estudo de intervenção piloto foi avaliado. A análise desta evidência permitiu concluir que o tópico é de interesse, porém ainda não foi explorado na perspectiva dos fatores de risco. Para o segundo e terceiro artigos, foi utilizado um modelo animal que reproduz as características de obesidade (artigo 2) e MetS (artigo 3). Para o segundo artigo, foram utilizados 28 ratos Wistar machos divididos em 2 grupos experimentais. O grupo controle recebeu ração padrão e água e o grupo teste além da ração padrão/água foi exposto a uma dieta de cafeteria (CAF) para indução de obesidade. Foi definido um ponto de corte para ocorrência de doença periodontal, sendo essa considerada positiva quando da presença de perda óssea alveolar ≥0.51mm em fotografias padronizadas. Diferenças significativas para o peso e índice de Lee foram observadas no grupo exposto a dieta CAF indicando presença de obesidade neste grupo. Observou-se que os animais obesos apresentaram significativamente mais sítios positivos para doença periodontal. Portanto, pode se concluir que a obesidade aumenta a perda óssea alveolar espontânea em ratos Wistar. Para o terceiro artigo, 60 ratos Wistar foram divididos em 4 grupos: Controle (ração padrão e água), Doença Periodontal (DP) (ração padrão e ligadura no semana 12), MetS (dieta CAF por 17 semanas) e MetS+DP (ligadura na semana 12 e dieta CAF por 17 semanas). Dois animais foram perdidos ao longo do período experimental por razões não relacionadas ao protocolo do estudo. Diferenças significativas foram observadas para o peso, índice de Lee colesterol total e triglicerídeos, indicando presença de MetS. Foram realizadas análises do percentual de perda óssea alveolar através de micro-tomografias e os níveis séricos de IL1- e TNF- foram avaliados por ELISA. Observou-se que os animais portadores de MetS exibiram maiores percentuais de perda óssea alveolar induzida e espontânea. Não foram observadas diferenças significativas para os níveis séricos das citocinas avaliadas. Nesse sentido, pode ser concluído que a presença de MetS modula a resposta do hospedeiro, provavelmente pela quebra da homeostase do periodonto. O artigo 4 tratou-se de uma revisão de literatura com caráter informativo alertando aos profissionais da odontologia a responsabilidade da transcender as abordagens odontológicas tradicionais colocando a profissão como parte importante e integrantes da equipe de saúde. A partir dos resultados obtidos nos artigos constituintes da presente tese e frente às reflexões realizadas, pode-se concluir que a doença periodontal é influenciada por desordens metabólicas. Recomenda-se, portanto, a inclusão de questionamentos e análises dessas condições e suas potenciais inter-relações pelos profissionais da saúde / between periodontal diseases and metabolic disorders – like obesity and metabolic syndrome – has considerably increased. However, studies evaluating the biological mechanisms related to this association are still scarce. The present thesis had as main objective to evaluate, in Wistar rats, the effect of obesity and metabolic syndrome (MetS) on the pathogenesis of alveolar bone loss. In this respect, 4 scientific articles were written, being 2 literature reviews and 2 experimental studies. The first literature review evaluated the available literature relating MetS and periodontal disease. It can be observed that few studies were retrieved and, among thos evaluated, the majority were of cross-sectional epidemiological nature. Longitudinal studies were not found and only one pilot intervention study was evaluated. The analysis of this evidence lead to the conclusion that the topic is of interest, however still has not been explored in the perspective of risk factors. For the second and third articles, an animal model was used, that mimics obesity (article 2 and MetS (article 3). For the second article, 28 male Wistar rats were divided in 2 experimental groups. The control group received chow and water and the test group, besides the standard chow/water was exposed to cafeteria diet (CAF) in order to induce obesity. A cut-off point was defined for the occurrence of periodontal disease, being this considered positive when alveolar bone loss ≥0.51mm was present in standardized pictures. Significant differences for body weight and Lee Index were observed in the group exposed to CAF diet, indicating obesity. Obese animals presented significantly more sites positive for periodontal disease. Thus, it may be concluded that obesity increases spontaneous alveolar bone loss in Wistar rats. For the third article, 60 male Wistar rats were divided in 4 groups: Control (standard chow and water), Periodontal disease (PD) (standard rat chow and ligature on week 12, MetS (CAF diet for 17 weeks and MetS+PD (ligature on week 12 and CAF diet for 17 weeks). Two animals were lost during the experimental period for reasons not related to the study protocol. Significant differences were observed in body weight, Lee Index, total cholesterol and triglycerides, indicating the presence of MetS. Analyses of percent alveolar bone loss were performed by microcomputer tomography and the serum levels of IL1- and TNF- were performed by ELISA. Animals with MetS exhibited higher percentage of spontaneous and induced alveolar bone loss. No significant differences were observed for the serum levels of the evaluated cytokines. Thus, it may be concluded that the presence of MetS modulates the host response, probably breaking the periodontium homeostasis. Article 4 is a literature review with informative characteristics alerting the dental professionals about the responsibility of going beyond the traditional dental practices, making the profession an important component of the health team. Taking into consideration the obtained results in the articles in this thesis, and the thoughts coming from them, it may be concluded that periodontal disease is influenced by metabolic disorders. It is recommended that questions and analyzes are made about these conditions and their potential interrelationships by the health personnel.

Carrapatos são artrópodes hematófagos de distribuição cosmopolita que parasitam vertebrados e transmitem uma grande variedade de agentes infecciosos para o homem e animais domésticos. Cobaias, diferentemente de cães e camundongos, são capazes de desenvolver resistência a carrapatos Rhipicephalus sanguineus após sucessivas infestações. Ao comparar o tipo de resposta imune desenvolvida por cobaias e cães frente a carrapatos observou-se que cobaias re-infestadas desenvolvem uma pequena reação de hipersensibilidade imediata e uma forte reação de hipersensibilidade tardia à inoculação cutânea com antígenos de carrapatos. Já em cães e camundongos, é notada somente uma forte reação de hipersensibilidade imediata. Também foi verificado que células dos linfonodos de cobaias infestadas três vezes com carrapatos (resistentes) proliferam intensamente na presença de saliva de carrapatos, diferentemente do que ocorre com células de cães e camundongos re-infestados (suscetíveis) que não proliferam. Esses achados sugerem o envolvimento de um padrão Th1 de resposta imune na aquisição de resistência, no entanto essa hipótese ainda não foi confirmada. Assim sendo, no atual trabalho procurou-se verificar a expressão de mRNA de citocinas na pele e linfonodos de cobaias infestadas e re-infestadas com carrapatos. Para tal foram delineados primers e padronizadas reações de PCR para detectar a expressão de mensagem das citocinas IL-12p40, IFN-gama e TNF-alfa, pertencentes a um padrão Th1, e IL-4, IL-5, IL-10 e TGF-beta, pertencentes a um padrão Th2 de resposta imune. Os resultados obtidos demonstraram que cobaias sucessivamente infestadas apresentaram um aumento significativo na intensidade de mensagem para IL-12p40 nos linfonodos, tanto comparado com animais uma vez infestados (aumento de 2,6 vezes), quanto comparado com os controles (aumento de 13 vezes). Embora a análise estatística não tenha apontado uma diferença significativa houve elevação consistente na intensidade de mRNA para IFN-gama nos linfonodos de cobaias re-infestadas comparadas às infestadas apenas uma vez (aumento de 2,4 vezes). Também foi observado um aumento significativo na intensidade da mensagem para IL-5 nos linfonodos de cobaias infestadas uma vez quando comparadas aos controles (aumento de 5 vezes). Não foi detectada expressão de mensagem para IL-4 e IL-10 nas amostras analisadas. Já a expressão de mensagem para TGF-beta foi observada em todos os animais (experimentais ou controles), sugerindo que essa citocina possa ter uma expressão constitutiva em cobaias. Tomados em conjunto, os resultados sugerem o envolvimento predominante de um perfil de citocinas de padrão Th1 na aquisição de resistência em cobaias a carrapatos. Nossos resultados poderão auxiliar o desenvolvimento de novas abordagens para o controle de carrapatos, como, por exemplo, sugerir adjuvantes mais adequados a serem utilizados em vacinas anti-carrapatos. O conhecimento gerado não se restringe à indução de proteção contra carrapatos como também a possibilidade de aumentar a resistência de hospedeiros a patógenos transmitidos por carrapatos que poderiam ser controlados por uma resposta tipo Th1. / Ticks are hematophagous arthropods of cosmopolitan distribution and are significant vectors of several diseases for humans and animals. Guinea pigs, unlike dogs and mice, develop resistance to Rhipicephalus sanguineus ticks after successive infestations. When the immune reaction between tick-infested guinea pigs and dogs/mice are compared, guinea pigs develop both immediate and strong delayed type hypersensitivity reactions while dogs and mice develop only a strong immediate reaction. Additionally was shown that lymph node cells from tick-infested guinea pigs (resistant hosts) proliferate intensely when cultured with tick saliva, differently to what is observed with cells from tick-infested dogs and mice (susceptible hosts). These findings propose the contribution of a Th1 cytokine pattern on the acquired immune response to ticks; however this hypothesis still has to be tested. This being so, in this study we investigated the expression profile of genes coding for selected cytokines on R. sanguineus infested guinea-pigs. Messenger RNA for IL-12-p40, IFN-gamma and TNF-alfa (Th1 cytokine pattern) and IL-4, IL-5, IL-10 and TGF-beta (Th1 cytokine pattern) was measured in skin and lymph nodes biopsies from tick-infested guinea pigs. Our results demonstrated that repeatedly tick-infested guinea pigs presented a significant increase on the intensity of message for IL-12p40 in the lymph nodes compared to both, one time tick-infested guinea pigs (raise of 2.6 times) or controls (raise of 13 times). Although the statistical analysis did not point out differences, there was a consistent increase on the mRNA intensity for IFN-gamma on the lymph nodes from re-infested guinea pigs compared to one time tick-infested animals (raise of 2.4 times). In addition, a significant enhance on the intensity of message for IL-5 on the lymph nodes from one time tick-infested guinea pigs compared to the controls (raise of 5 times). No message for IL-4 and IL-10 was detected on the analyzed tissues. In contrast, TGF-beta was detected on tissues collected from all animals (experimental or controls), suggesting a spontaneous production of this cytokine in guinea pigs. Taken together, these data suggest that a T helper 1-type pattern of cytokine production might be associated with the resistance expressed by guinea-pigs to ticks. Moreover, our results can provide new approaches to control ticks, i.e. suggest adjuvants to be added to anti-tick vaccines that preferably induce a Th1-type of response.