O presente estudo utilizou o modelo fatia-dental/matriz-polimérica para avaliar a influência do tratamento dentinário e das BMPs dentinárias na diferenciação das células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED). Secções transversais (1mm) foram preparadas a partir de terceiros molares humanos extraídos. Matrizes poliméricas a base de ácido poli-L-lático (PLLA) foram criadas no interior da cavidade pulpar das secções dentinárias, tratadas com solução de EDTA a 10%; NaOCl a 5.25%; ou permanecendo sem tratamento. Matrizes poliméricas confeccionadas sem as fatias dentais foram utilizadas como controle. As células (5x104) foram semeadas nas matrizes e, após 7, 14, 21 e 28 dias de cultura in vitro, a expressão de marcadores de diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP1 e MEPE) e a proliferação celular (WST-1) foram avaliadas. Células (5x105) semeadas nas matrizes foram transplantadas em camundongos imunodeficientes e cultivadas in vivo por um período de 14 e 28 dias. Para avaliar a atividade das BMPs dentinárias, 5x104 células foram semeadas em matrizes poliméricas com fatia dental e cultivadas na presença de anticorpos anti-BMP- 2, -4, ou -7 (2 μg/ml) durante 14 dias. Adicionalmente, 5x105 células foram tratadas com rhBMP-2, -4, ou -7 (100ng/mL) por 24hs. As células cultivadas in vitro e in vivo alteraram sua expressão genética durante o curso do tempo. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células cultivadas in vitro após 14 dias (tratamento com EDTA e dentina sem tratamento) e in vivo após 28 dias (EDTA), não sendo detectados nos grupos NaOCl e nas células cultivadas nas matrizes sem fatia dental. A proliferação foi reduzida com a diferenciação celular (p<0.05). A utilização de BMP-2/4Ab no meio de cultura exerceu um efeito inibitório na expressão dos marcadores de diferenciação celular, não ocorrendo quando do cultivo das SHED na presença de BMP-7Ab. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células tratadas com rhBMP-2, e DSPP e DMP-1 por células tratadas com rhBMP-4 e -7. Células sem tratamento não expressaram os marcadores. O modelo fatia-dental/matriz-polimérica demonstrou ser adequado para o estudo da diferenciação de células-tronco pulpares, sugerindo que a dentina possa fornecer um microambiente favorável para a diferenciação de celular. As proteínas ósseas morfogenéticas dentinárias BMP-2 e BMP-4 parecem exercer um papel relevante nesse processo. / The effect of dentin pre-treatments and dentin-derived BMPs on SHED differentiation was tested using the Tooth-Slice Scaffold model (TSS). Dentin slices (1mm thickness) were prepared from extracted human third molars. Biodegradable PLLA scaffolds were prepared inside the pulp chamber of the tooth-slices, treated alternatively with a 5.25% NaOCl or 10% EDTA solution, or remaining untreated (WO-T). PLLA sponge scaffolds with no tooth-slice (PSS) were used as control. SHED (5x104) were seeded in TSS and PSS and after 7, 14, 21 and 28 days in culture, RT-PCR (DSPP, DMP1 and MEPE) and WST-1 proliferation assay were performed. Additionally, cells (5x105) were seeded in TSS and PSS and transplanted into SCID mice (14 and 28 days). To verify the dentinderived BMPs bioactivity, SHED (5x104) were cultured in TSS in the presence of antihuman BMP-2, -4, and -7 antibodies for 14 days. Besides, cells in culture were treated with rhBMP-2; -4; or -7 for 24 hours. After in vitro and in vivo time course, SHED altered their genetic expression. The cells cultured in vitro in the TSS (EDTA or WO-T) expressed the differentiation markers after 14 days and maintained expression thereafter. Cell proliferation rate was reduced following the differentiation (p<0.05). Cells transplanted in vivo expressed DSPP, DMP-1 and MEPE after 28 days (EDTA). No transcripts were found in tooth-slices treated with NaOCl or in PSS groups. BMP-2/4Ab prevented the differentiation process and no inhibitory effect was detected for BMP-7Ab. After 24 hours, expression of DSPP, DMP-1 and MEPE was found for rhBMP-2, and DSPP and DMP-1 for rhBMP-4 and rhBMP-7 treated SHED, but not for untreated cells. The tooth slice scaffold model suggests that dentin can provide the environment for SHED differentiation and dentin-derived morphogenic signals BMP-2 and BMP-4 play an important role in this process.

Orientador: Angela Cristina Cilense Zuanon / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira / Banca: Maria Cristina Borsatto / Banca: Gelson Luis Adabo / Banca: Josimeri Hebling / Resumo: A infiltração marginal em restaurações de resina composta classe V foi avaliada nas margens cervical e oclusal de dentes decíduos e permanentes após diferentes tratamentos dentinários. Os preparos cavitários foram confeccionados nas faces vestibular e lingual de 25 molares decíduos e 25 terceiros molares permanentes hígidos utilizando fresas e instrumentos rotatórios e, posteriormente foram divididos em 5 grupos, cada um contendo 10 cavidades: grupo 1 (abrasão a ar e sistema Scotchbond Multi-Uso), grupo 2 (ácido fosfórico e Scotchbond Multi-Uso), grupo 3 (sistema auto-condicionante Clearfil SE Bond), grupo 4 (abrasão a ar, ácido fosfórico e Scotchbond Multi-Uso) e grupo 5 (abrasão a ar e Clearfil SE Bond), todos restaurados com resina Z100. Após polimento, os dentes foram submetidos à termociclagem (500 ciclos) e imersos em solução de nitrato de prata a 50%. Depois de seccionados, foram analisados em lupa estereoscópica (40x) utilizando escores de 0 a 4. Para avaliação dos diferentes tratamentos e tipos de margem, empregou-se o teste de Kruskal-Wallis, seguido de comparações múltiplas dos postos médios pelo teste de Dunn e a comparação entre dentes decíduos e permanentes foi realizada pelo teste de Mann-Whitney, com nível de significância de 5%. A aplicação do sistema de abrasão a ar e Scotchbond Multi-Uso, sem condicionamento ácido produziu os maiores valores de infiltração marginal em dentes decíduos e permanentes. Os resultados demonstraram que a utilização do sistema de abrasão associado a condicionadores ácidos resultou em menor infiltração marginal em dentes decíduos, embora não tenha havido diferença estatisticamente significante. O sistema auto-condicionante promoveu o menor valor de infiltração na margem cervical e o condicionamento com ácido fosfórico acompanhado pelo sistema... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Marginal leakage in gingival and occlusal margins of Class V composite restorations in deciduous and permanent teeth was investigated. Cavities were prepared with burs in high speed in facial and lingual surfaces of 25 deciduous molars and 25 third permanent molars. The specimens were divided into 5 groups of 10 preparations each: group 1 (air abrasion and Scotchbond Multi Purpose), group 2 (phosphoric acid and Scotchbond Multi Purpose), group 3 (Clearfil SE Bond self-etching system), group 4 (air abrasion, phosphoric acid and Scotchbond Multi Purpose) and group 5 (air abrasion and Clearfil SE Bond), all groups were restored with Z100 composite resin. After polish, the teeth were subjected to 500 thermal cycling and immerged in 50% silver nitrate solution. After sectioning, the specimens were analyzed with a stereomicroscope (40x) for assessment of microleakage according to the degree of dye penetration (scores of 0-4). The Kruskal-Wallis test followed by Dunn Multiple Comparison test were performed in order to evaluate the differences among the experimental groups. The Mann-Whitney test was performed to evaluate the differences among deciduous and permanent teeth at a 5% level of significance. Air abrasion and Scotchbond Multi-Purpose without etching, showed the greatest leakage in deciduous and permanent teeth. Air abrasion and acid condicionings produced little leakage in deciduous teeth. The self-etching system demonstrated the least leakage in gingival margins and Scotchbond Multi-Purpose showed the best results in occlusal margins of deciduous teeth. No significant difference was observed among gingival and occlusal margins in deciduous teeth. Air abrasion groups demonstrated the greatest leakage in permanent teeth. Scotchbond Multi- Purpose with phosphoric acid produced the least leakage in permanent teeth, with greater leakage in gingival... (Complete abstract, click electronic address below) / Doutor

Orientador: Silvio Issáo Myaki / Banca: Orlando Ayrton de Toledo / Banca: Luis Rynaldo de Figueiredo Walter / Banca: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Marcelo Fava de Moraes / Resumo: O objetivo deste estudo in vitro foi analisar, ao microscópio de luz polarizada, os aspectos histológicos do esmalte decíduo, empregando-se diferentes modelos de indução de formação de lesão artificial de cárie. Avaliou-se também a influência de dois materiais restauradores na formação da lesão de cárie secundária quando submetidos aos mesmos modelos. Foram selecionados vinte dentes apresentando lesão natural de mancha branca de cárie (grupo controle) e quarenta dentes clinicamente hígidos, divididos em dois grupos conforme o modelo de indução de formação de lesão de cárie. Após este período, os espécimes foram incluídos em resina e seccionados longitudinalmente obtendo-se secções de 100æm de espessura, que foram embebidas em água destilada ou quinolina para análise ao microscópio de luz polarizada. Os resultados obtidos na primeira parte do estudo revelaram a formação das quatro zonas histológicas da lesão de mancha branca nos dois modelos empregados, porém morfologicamente distintas. Na segunda parte, os valores de profundidade da lesão externa, obtidos por meio de análise histomorfométrica, foram submetidos ao teste estatístico de análise de variância (ANOVA) constatando-se que o grupo do cimento de ionômero de vidro exibiu profundidade da lesão externa significantemente menor do que o grupo restaurado com resina composta, independentemente do modelo de indução. As amostras do G4 apresentaram maior ocorrência de zonas de inibição do que as do G5. Concluiu-se que os modelos de indução foram eficientes na formação da lesão artificial de cárie, e que independentemente do modelo o CIV foi mais eficiente na inibição da formação de lesões de cárie. / Abstract: The aim of this in vitro study was to compare by polarized light microscopy the histopathological appearance of caries-like lesions of enamel created artificially in primary teeth based on different models. Methods: 60 deciduous human molars were used. In G1 (n=20): control group, the specimens with natural white spot lesions, examined in incident light, were stored in deionized water for 14 days. After this, longitudinal ground sections were taken from all groups and examined while immersed in water or quinoline using polarized light microscopy techniques. Buccal class V restorations were prepared in 40 deciduous human molars with margins in enamel that were randomly divided into two groups (n=10) using a hybrid resin composite (Z-250) and a conventional glass ionomer cement (Fuji IX GP Fast). After the restorative procedures, all teeth surfaces were coated with nail polish, except for the restoration area and 1mm rim of tooth structure. In order to induce artificial carious lesions, the specimens were immersed into the models. After this, the specimens were prepared for polarized light microscopy in an imbibition's media of water. The results showed the development of caries lesions in all groups Areas of positive birefringence were seen in the subsurface enamel with negatively birefringence surface zone. The data was analyzed by ANOVA test (5%) and the specimens restored with glass ionomer cement exhibited the depth of caries significantly lower than the group restored with composite resin. It was concluded that the restorative material could influence the demineralization of primary enamel. / Doutor

Objetivo: avaliar o desempenho clínico e radiográfico da resina bulk fill em cavidades classe II em molares decíduos em comparação ao cimento de lonômero de vidro modificado por resina Metodologia: Estudo clínico em que participaram 16 crianças entre 4 a 7 anos de idade, apresentando, lesões de cárie nas superfícies oclusal e/ proximal sem sinal ou sintomatologia de pulpite irreversível. Foram restaurados 39 dentes sendo 21 com cimento de ionômero de vidro modificado por resina (CIVMR) e 18 com resina bulk fill (RBF).Os materiais foram alocados a cada dente por sorteio e as restaurações executadas pelo mesmo operador. A avaliação clínica foi realizada, imediatamente, e após um e seis meses de acordo com os critérios United States Public Health Service - USPHS (retenção, coloração, adaptação marginal, coloração marginal, cárie secundária, textura superficial e forma anatômica). Radiográfica foram obtidas imediatamente e após seis meses. Para a análise estatística o teste U de Mann Whitney foi aplicado. Resultados: Ambos materiais apresentaram baixo índice pelos critérios de falhas clínicas ou radiográficas, porém diferença significante foi encontrada para a forma anatômica (0,0146), sendo a RBF o material de melhor desempenho neste critério. Conclusão: Os dois materiais apresentaram desempenho satisfatório, para restaurações classe II em molares decíduos no período de seis meses, porém, para o critério forma anatômica a RBF apresentou desempenho superior. / Objective: The aim of the study was to assess the clinical and radiographic performance of bulk fill resin when used as Class II restorations in primary molars compared to resin-modified glass ionomer cement Methodology: A total of 16 children, aged 4-7 years old, having caries on the occlusal and/proximal surfaces without signs and/or symptoms of irreversible pulpits were selected. It was placed 39 restorations in primary molars, 21 were of (RMGIC). randomly allocated for a each tooth am the restoration performed by one trained operator and 18 of bulk fill resin (BFR). The materials and the teeth were selected by lottery and done by the same operator. The restorations were evaluated clinically at baseline and after 1 and 6 months following the criteria of United States Public Health Service - USPHS (retention, color, marginal adaptation, marginal discoloration, tooth secondary, surface texture and anatomical form) X-ray images were taken at baseline and after 6 months. For the statistical analysis was perfomed using the Mann-Whitney U test (X = 0,05). Results: Both materials showed few failures of clinical and radiographic evaluations, however significant difference was found for the anatomical form (0.0146), being the BFR the material of better performance for this criterion. Conclusion: Both materials presented satisfactory performance, at 6 months for Class II restoring in primary molars, however for anatomical form the BFR showed better performance. / Dissertação (Mestrado)

A remoção parcial de tecido cariado (RPTC) em lesões profundas de cárie em dentes decíduos tem demonstrado excelentes resultados clínicos, radiográficos e microbiológicos. No entanto, o desempenho das restaurações com resina composta em dentes que tiveram esse tratamento ainda merece esclarecimentos. O objetivo desse trabalho foi investigar a taxa de manutenção de restaurações sobre tecido cariado através de uma revisão sistemática de literatura e de um ensaio clínico controlado randomizado. Métodos: Cinquenta e uma crianças de 3 a 8 anos de idade (28 meninos e 23 meninas) portadoras de ao menos um molar com lesão profunda de cárie foram incluídas no estudo. Os dentes foram aleatoriamente divididos de acordo com os seguintes tratamentos: Grupo controle: Remoção total de tecido cariado (RTTC) e teste: Remoção parcial de tecido cariado (RPTC). Nos casos em que ocorreu exposição pulpar foi realizada pulpotomia. Três Odontopediatras realizaram os procedimentos que foram acompanhados em 3, 6,12, 18 e 24 meses. Todos os procedimentos foram realizados sob anestesia local e isolamento absoluto. No início e no final do procedimento as crianças reportaram sua ansiedade através de duas escalas: Venham Picture Test (VPT) e Facial Image Scale (FIS). O comportamento da criança durante o atendimento foi avaliado através da escala de Sarnat. Em todos os momentos experimentais foram avaliados os aspectos clínicos e radiográficos dos tratamentos e as restaurações foram analisadas por um examinador cego e calibrado através do USPHS modificado.Para determinar as taxas de sucesso clínico e radiográfico e das restaurações de resina composta foram geradas curvas de sobrevida com o estimador Kaplan-Meyer. A distribuição dos indivíduos cooperativos e não cooperativos de acordo com diferentes variáveis independentes, assim como as comparações das escalas FIS e VENHAM entre os três tratamentos, foram avaliadas utilizando-se o teste de Qui-quadrado. Resultados: Quarenta e oito crianças e 120 dentes foram incluídos na análise. Dentre as variáveis analisadas, apenas o tempo de atendimento afetou significativamente o comportamento das crianças (p=0,018). No grupo RTTC ocorreram 15 casos de exposição pulpar (27,5%), enquanto que no grupo RPTC apenas 1 caso (2%). As taxas de sucesso clínicoradiográfico após RPTC e RTTC foram 92% e 98%, respectivamente (p=0,14). Foi observada uma tendência a menor taxa de sucesso clínicoradiográfico em cavidades oclusoproximais (92%) em comparação com cavidades oclusais (100%), porém não estatisticamente significante (p=0,08). Não houve diferença significativa entre os operadores. A taxa de sobrevida das restaurações foi de 66%, 85% e 92%, para os grupos RPTC, RTTC e pulpotomia, respectivamente, após 24 meses, (p=0,09). Quando a taxa de sobrevida das restaurações foi avaliada de acordo com o tratamento e o tipo de cavidade, foi observada taxa de sobrevida significativamente menor (p=0,007) para restaurações do tipo oclusoproximais após RPTC (52%).Por outro lado, os maiores percentuais 10 de sobrevida das restaurações foram observados em cavidades oclusais após RPTC (95%). A revisão de literatura demonstrou que o sucesso das restaurações aumenta quanto menor o número de superfícies envolvidas, assim, cavidades classe I apresentaram em torno de 90% de sucesso e diminui para 50% quando mais de uma superfície foi restaurada. Conclusões: As restaurações de resina composta sobre tecido cariado necessitam de proservação em curtos períodos de tempo para manutenção e reparo. / Partial caries removal in deep carious lesions of primary teeth has been demonstrated excellent clinical, radiographs and microbiological results. However, the clinical performance of composite resin restorations placed over the demineralized dentin need more information. The objective of this work was to investigate the restoration performance over carious tissue trough a literature systematic review and a randomized controlled clinical trial. Methods: Fifty-one children aged from 3 to 8 years old (28 boys and 23 girls) with, at least, one molar with deep carious lesion were included in this clinical trial. The teeth were randomly divided according to the following treatments: Control group - total caries removal (TCR); and Test - partial caries removal (PCR). In case of pulp exposure during dentinal excavation, pulpotomy was performed. Three Pediatric Dentist made the procedures that were followed-up by 3, 6, 12, 18 and 24 months. All procedures were performed under local anesthesia and rubber dam isolation. At the beginning and right after the procedure the children reported their anxiety through two scales: Venham Picture Test (VPT) and Facial Image Scale (FIS). The children behavior during the attendance was valued through Sarnat scale. During the time course follow-up clinical and radiographic aspects of the treatments were evaluated and the restorations analyzed by a calibrated and blinded examiner through modified USPHS. To determine the clinical and radiographic outcomes of composite restorations the groups were statistically analyzed using Kaplan-Meier survival followed by Log Rank. The distribution of cooperatives and non-cooperatives subjects in accordance with different independent variables as well as FIS and VENHAM comparisons between the tree treatments were availed using Qui-square test. Results: The final sample was comprised by forty-eight children and 120 teeth. Among all the analyzed variables, only the time spent for the procedure significantly affected the children behavior (p=0.018) The total caries removal procedure produced 15 pulp exposures (27.5%), while the same event occurred only in one case for the PCR group (2%). The clinical- radiographic success rate after PCR and TCR were 92% and 98%, respectively (p=0.14). It was observed a tendency to lower clinical-radiographic success rate in oclusoproximal cavities (92%) in comparison with oclusal (100%) but without statistic significance (p=0.08). The restorations survival rate was 66%, 85% and 92% to PCR, TCR and pulpotomy groups, respectively after 24 months follow-up (p=0.09). When the restorations survival rate was evaluated in accordance with type of treatment and the type of cavity was observed a significant lower survival rate (p=0.007) to oclusoproximal restoration after PCR (52%). On the other hand, the highest restorations survival was observed in oclusal cavities with partial caries removal (95%). The literature review shows that success rate increases with the decrease of involved surface at the restoration, thus class I restorations presented around 90% of success and it decreases below to 50% if more than one surface are restored. Conclusions: The composite resin restorations placed over caries tissue need shorter follow-up time to evaluate the necessity of being repaired or replaced.

Na dentição decídua, as restaurações adesivas apresentam uma longevidade média de 2 a 3 anos, contudo, muitas vezes, essas restaurações são substituídas antes deste período médio. Dentre os motivos mais prevalentes para substituição de restaurações, a lesão de cárie secundária é o mais freqüentemente citado. Esta dissertação teve como objetivo avaliar clinicamente, através de um estudo transversal, o comportamento de lesões cariosas adjacentes a restaurações de resina composta em molares decíduos, relacionando-o com a atividade de cárie da criança e com a integridade marginal da restauração. O estudo envolveu 64 pacientes infantis, de ambos os sexos, com idades variando entre 7 a 11 anos, que possuíam restauração oclusal (n = 33) ou ocluso-proximal (n = 31) de resina composta em molares decíduos. Nos pacientes com mais de uma restauração, a randomização dos dentes foi realizada para seleção de apenas uma restauração por criança, totalizando 64 restaurações avaliadas (média de idade em meses das restaurações = 29, 31 ± 16,85, mediana 31,5 meses). Como critério de inclusão, todos os indivíduos deveriam ter sido submetidos a tratamento odontológico para atividade cariosa. Os profissionais responsáveis por tal tratamento eram orientados para seguir um protocolo de atendimento clínico a crianças cárie-ativas. Um examinador treinado e calibrado (valor de Cohen’s kappa dicotômico = 1) avaliou a atividade de doença cárie (ativo ou inativo) do paciente e a presença radiográfica de imagens radiolúcidas relacionadas às margens oclusais das restaurações. Outros dois examinadores, também treinados e calibrados, avaliaram a restauração quanto ao comportamento da lesão cariosa adjacente à restauração (ausência de lesão, lesão ativa sem cavidade, lesão ativa com cavidade, lesão inativa sem cavidade, lesão inativa com cavidade; valor de Cohen’s kappa de múltiplos critérios = 0,844) e quanto à integridade marginal (presença ou ausência; valor de Cohen’s kappa dicotômico = 1). Todos os três examinadores realizaram as avaliações de forma independente e seguindo o princípio de cegamento. As variáveis explicativas foram relacionadas ao desfecho através dos testes estatísticos Qui-quadrado e Exato de Fisher (α=5%). Mais da metade das crianças apresentava-se como cárie–ativa durante a avaliação, sendo a prevalência de lesão cariosa adjacente à restauração (LCAdj) de 40,63% (maioria lesões inativas). Não houve associação entre a presença de LCAdj e a atividade cariosa da criança (p = 0,237). Houve associação estatisticamente significativa entre ausência de LCAdj e a presença de integridade marginal (p = 0,013). Com relação ao dente restaurado, foi constatada associação estatisticamente significativa entre a presença de LCAdj e o segundo molar decíduo (p = 0,033). Verificou-se também que a presença de LCAdj ocorreu preferencialmente nas restaurações mais antigas (p = 0,044). A partir dos resultados, pôde-se concluir que mesmo em pacientes inseridos em um programa de manutenção periódica profissional há uma grande ocorrência de lesões cariosas adjacentes a restaurações adesivas, predominando lesões inativas. A presença de integridade marginal da restauração mostrou estar relacionada à ausência desse tipo de lesão, contudo ausência de integridade marginal não foi completamente relacionada à LCAdj. Embora, não tenha sido possível observar correlação entre a atividade cariosa das crianças e a presença da LCAdj, futuros ensaios clínicos são necessários para observar o comportamento desse tipo de lesão. / In the deciduous teeth the adhesive restorations last from 2 to 3 years although sometimes replacement takes place before the mean time. Among the most prevalent reasons for replacement of restorations, the secondary caries lesion is mentioned more often. The aim of this study was to evaluate clinically, through a transversal study, the behavior of adjacent caries lesion to composite resin restorations in deciduous molars, considering the relationship of the new lesion to the caries activity of the child and the marginal integrity of the restoration. Sixty four male and female pediatric patients mean age from 7 to 11years and with oclusal (n = 33) or occlusoproximal (n = 31) composite resin restoration in the deciduous molars were used. In the patients where more than one restoration fit the profile, a randomized selection was performed to assure that only one tooth was used per person, in the total 64 appraised restorations (mean of the age in month of the restorations = 29, 31 ± 16,85; median 31,5 months). As inclusion criteria, all patients must have been submitted to dental treatment for disease activity. The professional who performed such treatment was oriented to follow a clinical protocol for children with an active disease. A calibrated and trained examiner (Cohen’s kappa =1) evaluated the activity of the patient’s disease (active or non active), the presence of radiolucent images on dental occlusal surface of the restoration. Another 2 examiners, also trained and calibrated, evaluated the filling as for the behavior of the adjacent caries lesion to the restoration (absence of the lesion, non-cavitated active lesion, cavitated active lesion, non-cavitated inactive lesion, cavitated inactive lesion; Cohen’s kappa = 0,844) and marginal integrity (presence or absence; Cohen’s kappa =1). All the examiners performed the evaluation independently and following blindness principles. The variables were relation to outcome through by Chi-square and Fisher’ Exact analysis (α=5%). More than half of the patients were caries active during the evaluation period. The prevalence of adjacent caries lesion to the restoration (AdjCL) was 40.63% (most inactive lesions). There was no association among the presence of AdjCL and the caries activity of the child (p=0,237). The association of the absence of AdjCL and the presence of marginal integrity was statistically significant (p=0,013). Considering the restorated tooth, there was an association statistically significant among the presence of AdjCL and the second deciduous molar (p=0,033). Also, the presence of AdjCL occurred specially around older restorations (p=0,044). Analyzing the results, it was concluded that even patients submitted to standardized individual professional controlled treatment there is great occurrence of adjacent caries lesion to adhesive restorations, most inactive lesion. The presence of marginal integrity showed to be related to the absence of this lesion, but the absence of marginal integrity was not entirely related to AdjCL. Even though the correlation between caries activity and presence of AdjCL haven’t been observed, future clinical studies are necessary to observe the behavior of this type of lesion.

O presente estudo utilizou o modelo fatia-dental/matriz-polimérica para avaliar a influência do tratamento dentinário e das BMPs dentinárias na diferenciação das células-tronco da polpa de dentes decíduos (SHED). Secções transversais (1mm) foram preparadas a partir de terceiros molares humanos extraídos. Matrizes poliméricas a base de ácido poli-L-lático (PLLA) foram criadas no interior da cavidade pulpar das secções dentinárias, tratadas com solução de EDTA a 10%; NaOCl a 5.25%; ou permanecendo sem tratamento. Matrizes poliméricas confeccionadas sem as fatias dentais foram utilizadas como controle. As células (5x104) foram semeadas nas matrizes e, após 7, 14, 21 e 28 dias de cultura in vitro, a expressão de marcadores de diferenciação odontoblástica (DSPP, DMP1 e MEPE) e a proliferação celular (WST-1) foram avaliadas. Células (5x105) semeadas nas matrizes foram transplantadas em camundongos imunodeficientes e cultivadas in vivo por um período de 14 e 28 dias. Para avaliar a atividade das BMPs dentinárias, 5x104 células foram semeadas em matrizes poliméricas com fatia dental e cultivadas na presença de anticorpos anti-BMP- 2, -4, ou -7 (2 μg/ml) durante 14 dias. Adicionalmente, 5x105 células foram tratadas com rhBMP-2, -4, ou -7 (100ng/mL) por 24hs. As células cultivadas in vitro e in vivo alteraram sua expressão genética durante o curso do tempo. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células cultivadas in vitro após 14 dias (tratamento com EDTA e dentina sem tratamento) e in vivo após 28 dias (EDTA), não sendo detectados nos grupos NaOCl e nas células cultivadas nas matrizes sem fatia dental. A proliferação foi reduzida com a diferenciação celular (p<0.05). A utilização de BMP-2/4Ab no meio de cultura exerceu um efeito inibitório na expressão dos marcadores de diferenciação celular, não ocorrendo quando do cultivo das SHED na presença de BMP-7Ab. DSPP, DMP-1 e MEPE foram expressos por células tratadas com rhBMP-2, e DSPP e DMP-1 por células tratadas com rhBMP-4 e -7. Células sem tratamento não expressaram os marcadores. O modelo fatia-dental/matriz-polimérica demonstrou ser adequado para o estudo da diferenciação de células-tronco pulpares, sugerindo que a dentina possa fornecer um microambiente favorável para a diferenciação de celular. As proteínas ósseas morfogenéticas dentinárias BMP-2 e BMP-4 parecem exercer um papel relevante nesse processo. / The effect of dentin pre-treatments and dentin-derived BMPs on SHED differentiation was tested using the Tooth-Slice Scaffold model (TSS). Dentin slices (1mm thickness) were prepared from extracted human third molars. Biodegradable PLLA scaffolds were prepared inside the pulp chamber of the tooth-slices, treated alternatively with a 5.25% NaOCl or 10% EDTA solution, or remaining untreated (WO-T). PLLA sponge scaffolds with no tooth-slice (PSS) were used as control. SHED (5x104) were seeded in TSS and PSS and after 7, 14, 21 and 28 days in culture, RT-PCR (DSPP, DMP1 and MEPE) and WST-1 proliferation assay were performed. Additionally, cells (5x105) were seeded in TSS and PSS and transplanted into SCID mice (14 and 28 days). To verify the dentinderived BMPs bioactivity, SHED (5x104) were cultured in TSS in the presence of antihuman BMP-2, -4, and -7 antibodies for 14 days. Besides, cells in culture were treated with rhBMP-2; -4; or -7 for 24 hours. After in vitro and in vivo time course, SHED altered their genetic expression. The cells cultured in vitro in the TSS (EDTA or WO-T) expressed the differentiation markers after 14 days and maintained expression thereafter. Cell proliferation rate was reduced following the differentiation (p<0.05). Cells transplanted in vivo expressed DSPP, DMP-1 and MEPE after 28 days (EDTA). No transcripts were found in tooth-slices treated with NaOCl or in PSS groups. BMP-2/4Ab prevented the differentiation process and no inhibitory effect was detected for BMP-7Ab. After 24 hours, expression of DSPP, DMP-1 and MEPE was found for rhBMP-2, and DSPP and DMP-1 for rhBMP-4 and rhBMP-7 treated SHED, but not for untreated cells. The tooth slice scaffold model suggests that dentin can provide the environment for SHED differentiation and dentin-derived morphogenic signals BMP-2 and BMP-4 play an important role in this process.

Estudos de diagnóstico de vitalidade pulpar em dentes decíduos traumatizados, através da Fluxometria Laser Doppler (FLD), têm utilizado dentes tratados endodonticamente, porém o diagnóstico clínico é realizado em dentes necrosados. O objetivo deste estudo foi avaliar a FLD como teste de vitalidade pulpar em incisivos superiores decíduos traumatizados necrosados, desvitalizados (DES), antes e após tratamento endodôntico. Foram analisados em 57 crianças, de 40 a 85 meses de idade, valores de fluxo de dois dentes: IC DES - I VIT - 1 incisivo central necrosado (leitura antes e após a endodontia) e 1 incisivo central ou lateral vitalizado (leitura repetida em 2 sessões); I VIT - I VIT - 2 incisivos centrais ou laterais vitalizados (leitura em sessão única). Foi utilizado o Fluxômetro Laser Doppler (Moor Instruments, moorLab, Axminster, Inglaterra), diodo laser emitindo no comprimento de onda de 780nm, banda Doppler em 15kHz, sonda MP13 posicionada na vestibular a 4mm da margem gengival e estabilizada com posicionador de silicone. Foram avaliados dois parâmetros: F(UA), valor de fluxo de um único dente em unidades arbitrárias; F(%), variação percentual entre pares de dentes de um mesmo paciente. Estes parâmetros foram aplicados nos grupos antes e após a endodontia: F(UA) antes, F(UA) após, F(%) antes e F(%) após. No parâmetro F(UA), para os 29 IC DES antes, a variação de fluxo foi de 2,3 a 11,1UA, a média foi de 5,4UA e o desvio-padrão de 2,5UA. Para os 29 I VIT antes, a variação foi de 4,2 a 16,1UA (9,6 ± 3,5UA). Na segunda sessão, para os 29 IC DES após, foi de 1,3 a 7,4UA (3,4 ± 1,6UA), e para os 29 I VIT após foi de 3,6 a 19,7UA (9,3 ± 3,6UA). Para os 62 I VIT analisados em única sessão, a variação foi de 5,0 a 16,5UA (9,3 ± 2,4UA). No parâmetro F(%), para os 29 pares de IC DES antes - I VIT antes a variação foi de 28,0 a 98,1% (57,4 ± 17,2%). Para os 29 pares de IC DES após - I VIT após, de 18,0 a 84,5% (37,9 ± 15,2%). Para os 31 pares de I VIT - I VIT, foi de 57,5 a 146,5% (99,9 ± 23,3%). A performance dos parâmetros foi estimada pela área sob a curva ROC (AUC). Para F(UA) antes, a AUC foi de 0,862, para F(%) antes, a AUC foi de 0,941, para F(UA) após, a AUC foi de 0,975. Seus desempenhos, considerando intervalo de confiança de 95%, foram considerados entre moderadamente acurados e altamente acurados. Para F(%) após, a AUC foi de 0,987, sendo seu desempenho altamente acurado. Após comparação das AUCs, somente foi observada diferença significante, p=0,002, entre F(UA) antes e F(UA) após. Os pontos de corte propostos foram baseados nos dados obtidos antes da endodontia: para F(UA), valores menores ou iguais a 6,5UA classificam os dentes como desvitalizados e para F(%), valores menores ou iguais a 66,9%. Conclui-se que F(UA) e F(%) são parâmetros capazes de diferenciar dentes decíduos necrosados de dentes vitalizados, assim como de diferenciar dentes tratados endodonticamente de dentes vitalizados. / Studies on diagnosis of dental pulp necrosis in traumatized primary teeth using laser Doppler flowmetry (LDF) evaluate teeth with endodontic treatment; however, clinical diagnosis is performed in teeth with pulp necrosis. The aim of this study was to evaluate the LDF as pulp vitality test in traumatized primary upper incisors, with pulp necrosis (DES), before and after endodontic treatment. The pulpal flux values of 57 children, aged from 40 to 85 months, were evaluated: IC DES - I VIT - 1 central incisor with pulp necrosis (readings before and after endodontic treatment) and 1 vital central or lateral incisor (readings in 2 sessions); Control group: I VIT - I VIT - 2 vital incisors (readings in 1 session). The Laser Doppler Flowmeter (Moor Instruments, moorLab, Axminster, UK) was used. It is a diode laser emitting at 780 nm and bandwidth at 15 kHz. A MP13 probe was placed on the buccal surface of the tooth, 4mm from the gingival margin using silicone splints. Two parameters were evaluated: F(AU), the flux value of each tooth in arbitrary units, and F(%), the percentage variation of the flux value between pairs of teeth in the same patient. The two parameters were used before and after endodontic treatment: F(AU) before, F(AU)after, F(%) before and F(%) after. In the 29 IC DES before, F(AU) ranged from 2.3 to 11.1AU; the mean was 5.4AU and the standard deviation was 2.5AU; in the 29 I VIT before, ranged from 4.2 to 16.1AU (9.6 ± 3.5AU); in the 29 IC DES after, the values ranged from 1.3 to 7.4AU (3.4 ± 1.6AU), and in the 29 I VIT after, from 3.6 to 19.7AU (9.3 ± 3.6AU). In the 62 I VIT analyzed in one session, the values ranged from 5.0 to 16.5AU (9.3 ± 2.4AU). In respect to F(%), in the 29 pairs of IC DES before - I VIT before, the values ranged from 28.0 to 98.1% (57.4 ± 17.2%); in the 29 pairs of IC DES after - I VIT after, from 18.0 to 84.5% (37.9 ± 15.2%); in the 31 pairs of I VIT - I VIT, from 57.5 to 146.5% (99.9 ± 23.3%). The performance of both tests was estimated by the area under the ROC curve (AUC). Regarding F(AU) before, the AUC was 0.862; in F(%) before, the AUC was 0.941; in F(AU) after, the AUC was 0.975. The performances were classified between moderate and highly accurate (95% Confidence Interval). Regarding F(%) after, the AUC was 0.987 and its performance was highly accurate. Comparing the AUCs, there was statistical significance (p=0.002), between F(AU) before and F(AU) after. The cut-off values were based on data before endodontic treatment. The F(AU) values that were equal to or smaller than 6.5AU, and the F(%) values that were equal to or smaller than 66.9% classified the tooth as non-vital The two parameters studied, F(AU) and F(%), are able to distinguish non-vital primary teeth from vital teeth, and to distinguish vital teeth from teeth with endodontic treatment.

A regeneração óssea é um processo fisiológico que promove a neoformação de tecido ósseo saudável e funcional com características idênticas antes da lesão. Entretanto, frente a defeitos críticos, o osso é incapaz de se regenerar espontaneamente. Diante destas deficiências, a bioengenharia de tecidos ósseos (BTO) é uma opção promissora para a regeneração deste tipo de defeito. A maioria das abordagens de BTO utiliza as células-tronco mesenquimais da medula óssea (BMSC), porém, a coleta de BMSC dos pacientes é um processo bastante invasivo e doloroso. Por estas desvantagens, a busca por abordagens acessíveis e menos invasivas de novas fontes de células-tronco (CT) se tornou necessária. Neste contexto, as células-tronco de polpa de dentes decíduos (SHED) foram identificadas e sua aplicação na BTO, desde então, vem sendo amplamente estudada devido ao seu potencial osteogênico e por se tratar de uma fonte não invasiva. A obtenção de células-tronco do músculo orbicular do lábio (OOMDSC) também não causa dor adicional aos indivíduos, pois os fragmentos deste tecido são rotineiramente descartados durante as cirurgias de reconstrução do lábio. No presente trabalho investigamos o potencial de diferenciação osteoblástico in vitro e in vivo das OOMDSC e comparamos com as SHED, além disto, associamos estas células a biomateriais de HA/&beta;-TCP e investigamos a sua contribuição na neoformação óssea in vivo. O imunofenótipo de cada amostra de SHED e OOMDSC foi verificado para certificar a identidade de CT mesenquimais. Em seguida, as células em cultura foram submetidas à diferenciação osteoblástica in vitro. Em 9 e 14 dias de diferenciação as OOMDSC apresentaram menor atividade de fosfatase alcalina (p<0,0001) e menor marcação de matriz extracelular mineralizada, comparado às SHED (p<0,001), enquanto que em 21 dias estas diferenças não foram mais observadas. Quando associadas a biomateriais e implantadas em defeitos críticos calvariais bilaterais em ratos Wistar, tanto OOMDSC e SHED foram capazes de induzir neoformação óssea após 50 dias de cirurgia, conforme evidenciado pela análise morfológica e por micro-CT. Todavia, as células ósseas encontradas nos sítios da neoformação óssea não eram de origem humana. A avaliação da neoformação óssea in vivo induzida por SHED assim como a sua distribuição no enxerto foi verificada também em 07, 15 e 30 dias pós-cirúrgicos. Nestes períodos não há evidência de neoformação óssea, entretanto, as SHED estão localizadas no tecido conjuntivo que se forma e preenche o enxerto. Além disto, os dados sugerem que estas células estão relacionadas à modificações na microarquitetura do biomaterial e ainda à modulação dos números dos osteoclastos, também verificada nestas amostras. Portanto, podemos concluir que as OOMDSC são tão capazes de se diferenciar em osteoblastos quanto às SHED in vitro, porém esta diferenciação é mais lenta. Os experimentos in vivo indicam que as SHED possuem maior capacidade de indução à neoformação óssea quando comparadas às OOMDSC e que, em nosso modelo, as CT humanas não se diferenciam em osteoblastos in vivo. De qualquer forma a adição das CT ao biomaterial favorece a neoformação óssea, variações de microarquitetura e modulação dos osteoclastos. O fato de as ilhas ósseas não serem de origem humana indica que as células-tronco possam estar secretando fatores de indução à osteogênese, estimulando a neoformação óssea a partir das células do hospedeiro. / Bone regeneration is a physiological process, which promotes the growth of tissue at the site of injury, with the same characteristics of the original bone. However, when faced with critical defects the bone is unable to regenerate spontaneously. Bone tissue engineering (BTE) is a promising option for regenerating this type of defect. The majority of the approaches in BTE use Bone Marrow derived Mesenchymal Stem Cells (BMSC); however, the aspiration of bone marrow is a very invasive and painful procedure. Due to these disadvantages, the search for new, affordable and less invasive sources of stem cells (SC) has become necessary. In this context, stem cells from exfoliated deciduous teeth (SHED) have been identified and their application in BTE, since then, has been widely studied because they can be obtained non-invasively and due to their osteogenic potential. Stem cells from the orbicularis oris muscle (OOMDSC) are also obtained non-invasively and do not cause additional pain to individuals, because the fragments of this tissue are routinely discarded during lip reconstruction surgeries. In the present work we investigated, in vitro and in vivo, the osteoblastic differentiation potential of OOMDSC and compared with SHED; furthermore, we associated these cells with HA/&beta;-TCP scaffolds and investigate its contribution in the bone formation in vivo. The immunophenotype of each OOMDSC and SHED sample was verified to attest their mesenchymal stem cell identity. Then, cell cultures were submitted to osteoblastic differentiation in vitro. In 9 and 14 days of differentiation, OOMDSC exhibited lower alkaline phosphatase activity (p <0.0001) and lower mineralized extracellular matrix staining compared to SHED (p <0.001), whereas at 21 days, these differences were no longer observed. When associated with scaffolds and implanted into bilateral critical-sized calvarial defects in Wistar rats, both OOMDSC and SHED were able to induce bone formation after 50 days of surgery, as evidenced by morphological analysis and micro-CT. However, bone cells found at sites of bone formation were not of human origin. The evaluation of new bone formation in vivo induced by SHED as well as its distribution in the graft was performed at 07, 15 and 30 days after surgery. During these periods there was no evidence of new bone formation, however, SHED were located in the connective tissue that formed and filled the graft. Furthermore, our results suggest that these cells are related to changes in the microarchitecture of the scaffold and also to the modulation of the number of osteoclasts observed in these samples. In summary, our results suggest that OOMDSC are as capable to differentiate into osteoblasts as SHED in vitro, but this differentiation is slower. In vivo experiments indicate that SHED has a greater ability to induce bone formation when compared with OOMDSC, and that in our model, the human stem cells do not differentiate into osteoblasts in vivo. Nonetheless, the addition of SC to the scaffolds promotes bone formation, as well as variations in microarchitecture and modulation of osteoclasts. The fact that the bone islands are not of human origin indicates that the stem cells may be secreting osteogenesis-inducing factors, stimulating the host\'s cells to regenerate the defects.

O objetivo deste estudo in vitro foi avaliar e comparar a microestrutura e a composição mineral do esmalte e da dentina de dentes decíduos e permanentes. Terceiros molares hígidos e segundos molares decíduos foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em grupos, de acordo com o método de análise dos substratos utilizado: Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Espectroscopia de Energia Dispersiva de Raio X (EDX), Difração de Raio X (DRX) e Microscopia Óptica (MO). Foi realizada comparação qualitativa e quantitativa da estrutura dental. As medidas de densidade numérica e diâmetro dos prismas de esmalte/túbulos dentinários e, de espessura do esmalte, dentina e dentina peritubular foram realizadas por meio de fotomicrografias obtidas pela MEV. Os resultados obtidos por meio da SEM foram analisados estatisticamente pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis. A quantidade relativa de íons cálcio (Ca) e fósforo (P) foram determinadas por meio de EDX e as fases químicas presentes em ambos os substratos, por análise de DRX. O valor das medidas de espessura observado para o esmalte e dentina dos dentes decíduos foi de 1.14 mm e 3.02 mm, respectivamente. Para os dentes permanentes, obtiveram-se valores de 2.58 mm para o esmalte e 5.95 mm para a dentina. Com relação ao diâmetro da cabeça dos prismas de esmalte, os resultados foram estatisticamente semelhantes para os dentes decíduos e permanentes, demonstrando uma ligeira diminuição do diâmetro da superfície externa para a região próxima a junção amelodentinária (JAD). A densidade numérica dos prismas foi maior nos dentes decíduos, principalmente próximo à JAD, sendo estatisticamente diferente dos valores observados nos dentes permanentes, independente da região analisada. Na análise do diâmetro e densidade numérica dos túbulos dentinários verificou-se semelhança estatística entre os dentes decíduos e permanentes, havendo aumento gradativo do número de túbulos a partir da JAD em direção a região próxima a polpa. A espessura da dentina peritubular, na região próxima a JAD e central foi, respectivamente, 0.91 e 0.59 mm nos dentes decíduos 1.16 e 0.98 mm nos dentes permanentes. A porcentagem de Ca e P foi maior nos dentes permanentes. Observou-se ainda, que a quantidade de colágeno nos dentes decíduos foi aparentemente menor quando analisados por meio da MO. De acordo com os resultados obtidos neste estudo, pode-se concluir que, de maneira geral, os dentes decíduos apresentam menor porcentagem de Ca e P, menor espessura de esmalte e dentina, maior densidade numérica de prismas e dentina peritubular mais delgada quando comparada aos dentes permanentes. / This study evaluated in vitro the microstructure and mineral composition of dental enamel and dentin comparing the permanent teeth with the deciduous teeth. Sound third molars and second primary molars were selected and randomly assigned to the following groups, according to the analysis methods of the substrates performed: Scanning Electron Microscopy (SEM), X-Ray diffraction (XRD), Energy dispersive X-ray spectrometer (EDS) and Optical Microscopy (OP). A qualitative and quantitative comparison of the dental structure was done. The measurements of the number and diameter of prisms/tubules, thickness of enamel, dentin and peritubular dentin were done in SEM photomicrographs. The microscopic findings were analyzed statistically by a non-parametric test (Kruskal- Wallis). The relative amounts of calcium (Ca) and phosphorus (P) were determined by EDS investigation. Phase present in both types of teeth were observed by the XRD analysis. The mean thickness measurements observed in the deciduous teeth enamel and dentin was, respectively, 1.14 mm and 3.02 mm and in the permanent teeth, 2.58 mm and 5.95 mm. The mean rod head diameter in deciduous teeth was statistically similar to that of permanent teeth enamel, and a slightly decrease from the outer enamel surface to the region next to the enameldentine junction was assessed. The numerical density of enamel rods was higher in the deciduous teeth, mainly near EDJ, that showed statistically significant difference. The mean tubules number and diameter in deciduous teeth were statistically similar to that of permanent teeth, and this numerical density increased from the EDJ to the region near the pulp. The mean thickness measurements of peritubular dentin observed in the regions near EDJ and central were, respectively, 0.91 and 0.59 mm for the primary teeth / 1.16 and 0.98 mm for the permanent teeth. The percentage of Ca and P was higher in the permanent teeth. The collagen level was apparently lower in deciduous teeth when analyzed by OP. The primary teeth structure showed a lower level of Ca and P and a thinner enamel and dentin thickness. The deciduous enamel presented higher numerical density of rods. The peritubular dentin was thicker in the permanent teeth.