Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-20T18:33:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 20005358 bytes, checksum: 1121af69167ca6262a2059e1892c3134 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T18:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 20005358 bytes, checksum: 1121af69167ca6262a2059e1892c3134 (MD5) Previous issue date: 2003-12-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Em Magnaporthe grisea, agente causal da brusone, mutagênese insercional mediada por transformação tem constituído estratégia para a identificação de genes essenciais para a patogenicidade em arroz. A técnica REMI, integração mediada por enzima de restrição, merece destaque em virtude da eficiência de transformação e da predominância de integrações simples. Visando a implantação de programa de mutagênese insercional em M. grisea, os objetivos deste trabalho incluíram: (1) adequar as condições para a obtenção e regeneração de protoplastos do ascomiceto, (2) estabelecer sistema de transformação REMI em M. grisea, avaliando o potencial dos protoplastos e do vetor pAN7-1 e (3) selecionar e caracterizar mutantes com patogenicidade alterada em plantas de arroz. Produção eficiente de protoplastos foi alcançada com o uso simultâneo de 10 mg de Lysing Enzymes e 10 mg de Cellulase Onozuka R10 em 3 mL de MgSO 4 a 1,2 M / NaH 2 PO 4 a 0,01 M (pH = 5,8). Protoplastos de M. grisea I-22 liberados com 3 horas de hidrólise enzimática apresentaram maior capacidade de regeneração da parede celular. Quando expostos ao vetor pAN7-1, os protoplastos foram prontamente transformados para a resistência à higromicina. Quando pAN7-1- HindIII foi usado para transformar I-22 na presença de HindIII, a freqüência de transformantes foi 1,1 a 8,1 vezes superior ao tratamento sem a adição da endonuclease de restrição. No geral, a melhor concentração de HindIII foi 5 unidades/reação de transformação. A partir de testes de patogenicidade envolvendo 125 transformantes, principalmente gerados por REMI, foi possível selecionar cinco mutantes com alterações consistentes na patogênese. Dois desses mutantes, T108 e T93, causaram poucas lesões em folhas de arroz, enquanto o mutante T251 não foi patogênico. A alteração na patogenicidade de T108 foi acompanhada pela menor capacidade de desenvolvimento in vitro. Quando inoculado em plantas de arroz, o mutante T41 apresentou agressividade reduzida, caracterizada por lesões arredondadas de tamanho limitado. Por sua vez, o período de incubação para o mutante T72 foi mais longo do que o do isolado selvagem. Além disso, atrasos consideráveis na germinação de conídios e na formação de apressórios foram detectados em T72. Os mutantes T93 e T251 apresentaram fenótipos semelhantes quando em cultura, caracterizados pela pigmentação marrom. Análises Southern blots de quatro mutantes indicaram que em 50 % dos casos, T108 e T251, apenas uma cópia de pAN7-1 se integrou em um único sítio no genoma. No mutante T251 ocorreu evento REMI propriamente dito. Os mutantes T41 e T93 apresentaram padrões de integração mais complexos. / Transformation mediated-insertional mutagenesis of phytopathogenic fungi is an important tool to identify genes involved in pathogenicity. An improved version of this method is the restriction enzyme mediated integration, or REMI. We chose REMI to begin an insertional mutagenesis project in M. grisea. In this work, were reported the: (1) protoplasts production and regeneration of M. grisea, (2) transformation of protoplasts with pAN7-1 mediated by restriction enzyme and (3) identification and characterization of five transformants with pathogenicity defects in rice, at the phenotypic and molecular levels. The highest protoplasts production was obtained with Lysing Enzymes plus Cellulase Onozuka R-10 and the osmotic buffer MgSO 4 at 1.2 M / NaH 2 PO 4 at 0.01 M (pH = 5.8). The highest regeneration frequency was obtained with protoplasts produced after 3 hours of incubation. The I-22 protoplasts were readily transformed for hygromycin resistance. When pAN7-1-HindIII was used to transform fungal protoplasts in the presence of the HindIII, the transformation efficiency was increased 1.1 to 8.1-fold. The optimal HindIII concentration for enhanced transformation corresponded to 5 unit/transformation mix. Out of 125 transformants screened for the ability to infect rice plants, five showed changes in pathogenicity. The T108 and T93 mutants caused few lesions in rice leaves, while the T251 mutant was non-pathogenic. The alteration in pathogenicity of T108 was accompanied by reduced development in culture. The T41 mutant caused small and limited round lesions. The incubation period of the T72 mutant was longer than of wild type. Furthermore, late germination and appresorium formation was detected in the T72 mutant. The T93 and T251 mutants had similar phenotypes, characterized by a brown-pigmented colony. Four mutants (T41, T93, T108 and T251) were examined by Southern blots. The T108 and T251 mutants contained one copy of the vector integrated at a single site in the genome. REMI event occurred in the T251 mutant. More complex integration events were observed in the T41 and T93 mutants. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T12:31:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 486412 bytes, checksum: ea7846af4d8a5809764bfecb46fb6ed2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T12:31:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 486412 bytes, checksum: ea7846af4d8a5809764bfecb46fb6ed2 (MD5) Previous issue date: 2003-12-17 / A sigatoka negra, causada pelo fungo Mycosphaerella fijiensis, ocasiona perdas que oscilam entre 50 a 100% na produção de bananeira e bananeira-da-terra. Visando obter informação sobre epidemias da sigatoka negra em ambas as musáceas, realizaram-se dois experimentos. No primeiro, avaliaram-se os componentes epidemiológicos: períodos de incubação e latente médio; severidade aos 24 e 40 dias; freqüência de infecção; intervalo, em dias, para atingir a severidade máxima; dias transcorridos do aparecimento de sintomas até atingir a severidade máxima; e as áreas abaixo da curva da severidade e da porção necrosada. Verificou-se que M. fijiensis não foi específico para bananeira ou bananeira-da-terra e que as populações variam quanto à agressividade. A inoculação artificial em mudas pode ser usada para avaliar componentes de resistência de diferentes genótipos à doença. No segundo experimento, estudou-se o progresso da doença em plantações comerciais de bananeira 'Williams' e bananeira-da-terra 'Barraganete', durante as épocas seca e chuvosa. Independentemente da época avaliada, os valores de área abaixo da curva da severidade estimados para bananeira foram maiores que para bananeira-da-terra. Na época chuvosa, o progresso da doença foi maior que na época seca. Em bananeira-da-terra, detectou-se correlação significativa da severidade e o número de horas semanais com temperatura entre 24 e 28°C e umidade relativa maior de 90%, quando se consideraram os valores das variáveis climatológicas registrados quatro e três semanas antes da severidade, nas épocas seca e chuvosa, respectivamente. Não se detectou correlação significativa de severidade e intensidade de precipitação pluviométrica, nas duas épocas avaliadas. Este é o primeiro relato de estudos de sigatoka negra em bananeira-da-terra no Equador, nas épocas seca e chuvosa. É, também, o primeiro estudo de componentes epidemiológicos de isolados equatorianos de M. fijiensis. Os resultados obtidos serão importantes para subsidiar o manejo da sigatoka negra, bem como programas de melhoramento que visem obter resistência a M. fijiensis. / Black sigatoka, caused by the fungus Mycosphaerella fijiensis, is the most important leaf disease of banana and plantain crops, causing 50 to 100% production losses. To generate information regarding black sigatoka epidemics on both Musacea, two experiments were conducted. In the first, isolates of M. Fijiensis obtained from diseased leaves of banana and plantain from several regions of Ecuador, were inoculated in banana and plantain plantlets. The following epidemic components were evaluated: mean incubation and latent periods, initial severity, infection frequency, number of lesions/leaf area, days to reach maximum severity, area under disease progress curve for severity, and area under disease progress curve of leaf necrosis. Regarding all components, it was found that M. fijiensis was not specific for either banana or plantain, and that there is variability in fungal aggressiveness. It was concluded that artificial inoculation of M. fijiensis in plantlets can be used in evaluating disease resistance components of different genotypes. In the second experiment, disease progress was studied in commercial crops of banana 'Williams' and plantain 'Barraganete', during dry and rainy seasons. In both seasons, area under disease progress curve (AUDPC) on banana was higher than AUDPC for iplantain. Values of AUDPC in plantain were higher in the rainy season than in the dry season. Correlation analysis was done between weather variables and disease severity in plantains. Disease severity was not correlated with temperature, relative humidity, or precipitation. Significant correlation was detected between severity and both number of hours with temperature ranging from 24 to 28° C and relative humidity higher than 90%, when these variables were registered four or three weeks before severity assessment, in either dry or rainy seasons, respectively. This is the first report of epidemiological studies of Black Sigatoka in plantains in the dry and rainy seasons, in Ecuador. It is also the first study of aggressiveness components of M. fijiensis, which may become important to assist future breeding programs to obtain resistance against the pathogen. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-24T14:18:22Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 179014 bytes, checksum: 6dc994175521b9e665bebeec3986f34a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-24T14:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 179014 bytes, checksum: 6dc994175521b9e665bebeec3986f34a (MD5) Previous issue date: 2003-06-27 / Estudos sobre a patologia de sementes de feijão e a dinâmica temporal de epidemias do crestamento bacteriano comum do feijoeiro foram realizados com o objetivo de melhor conhecer a doença nas condições brasileiras. Em um primeiro estudo avaliou-se a incidência de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap) em 19 lotes de sementes provenientes, em sua maioria, do Distrito Federal. As sementes foram avaliadas pelos métodos de semeio direto e de inoculação do extrato de sementes em plantas suscetíveis, em duas condições ambientes, casa-de-vegetação e câmara de crescimento (30°C). Em 16 dos 19 lotes avaliados observou-se contaminação com Xap. Os métodos de plantio direto e extrato de sementes foram eficientes e de uso prático em laboratórios de rotina. Em um segundo estudo avaliou-se a transmissão de Xap, das sementes para as plântulas de feijão, em quatro cultivares e uma linhagem de feijão. Estudou-se ainda o efeito da idade de vagens na contaminação das sementes. Ambos os ensaios foram realizados duas vezes. Xap foi transmitida da semente para as plântulas, em todas as cultivares avaliadas. Além disso, com a maturação das vagens, houve redução significativa na produção de sementes sintomáticas. Finalmente, estudou-se a dinâmica temporal de epidemias do crestamento bacteriano comum do feijoeiro, em Viçosa, MG e no Distrito Federal. Foram avaliados os componentes epidemiológicos taxa de progresso, valor máximo de severidade e a área abaixo da curva de progresso da doença. Tentou-se, ainda, correlacionar dados de temperatura, precipitação e umidade aos de severidade da doença no campo. Detectou-se uma relação entre a severidade da doença no campo e a fenologia da cultura de feijão, além da correlação da temperatura, precipitação e a severidade. Porém, a umidade relativa não foi correlacionada aos dados de severidade obtidos. / Seed pathology of beans and temporal dynamics of common halo blight studies were done to better know about the disease in the Brazilian conditions. The first work concerned to the contamination of bean seeds by Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli was evaluated in 19 samples from Cerrados Brazilian Savana region, Brazil. Growing- on test and extraction followed by inoculation of suspension in bean susceptible plants were the two techniques used to assess the seeds. Growing-on tests were conducted in two environmental conditions: greenhouse and growing chamber at 30°C. X. axonopodis pv. phaseoli was found in sixteen samples. Seeds were placed in sterilized distilled water for bacterial extraction and the suspension obtained was inoculated in bean susceptible plants. Occurrence of symptoms was observed and the pathogen was detected in 16 samples. In the second work seed transmission of X. axonopodis pv. phaseoli was evaluated in some bean cultivars often used in comercial crops in Brazil. Two assays had been carried out and the results showed high rate of seed transmission of X. axonopodis pv. phaseoli in the cultivars. Rates of transmission ranged from 5,66 to 86,36% according to each cultivar. The effect of phenology of pods in seeds contamination was studied. Results showed that as younger as pods are, higher is the incidence of symptomatic seeds. Finally temporal dynamics of bean halo common blight epidemics were analyzed in two Brazilian locations, Federal District (Cerrados Savanna Region) and Viçosa, MG. Three epidemiological components were compared: disease progress rate (r), maximum intensity of disease (Ymax) and area under the viiidisease progress curve (AUDPC). Among the Gompertz, logistic, and monomolecular models, the monomolecular model fitted better disease severity data over time in Viçosa experiments. Disease severity was related to plant phenology, mean temperature, and rain intensity. However no correlation was found between disease severity and relative humidity. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T12:50:24Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2223653 bytes, checksum: 8768097f77a47ecf8e794f97d9e1d85a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T12:50:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2223653 bytes, checksum: 8768097f77a47ecf8e794f97d9e1d85a (MD5) Previous issue date: 2004-02-26 / A monilíase, causada por Moniliophthora roreri, uma das doenças mais importantes do cacaueiro no Peru, pode causar perdas totais na produção. Considerando a importância da doença e a escassez de informações a seu respeito, nesse trabalho avaliaram-se: i- o avanço, a distribuição geográfica e as perdas decorrentes da doença; ii- o progresso e a influência de condições ambientais sobre a doença; iii- a resistência de cultivares de cacau ao patógeno; e iv- os efeitos de remoção de frutos doentes, de fungicidas e da associação remoção de frutos-resistência, no progresso da doença. Detectou-se a doença pela primeira vez no Peru em 1988, na região de Bagua (Marañon); em 1989 e 1990, em 48 e 85%, respectivamente, das localidades avaliadas na região Jaen-Bagua; em 1992, na região de Tingo Maria (Huallaga); em 1992, em Juanjui; em 1993, em Tocache; em 1994, no Valle do Pachitea; em 1995, na região de San Francisco (Apurimac-Ene); em 1997, na de Satipo (Perene-Ene); e, em 1998, na de La Convención (Urubamba). Atualmente, a doença ocorre nas cinco principais regiões produtoras de cacau, ocasionando perdas de 19 a 100% de frutos. Em vista do comércio e do tráfego nas regiões fronteiriças, há risco iminente de introdução da monilíase no Brasil e na Bolívia. Na região de Tingo Maria, de 1996 a 1999, a doença ocorreu em todos os meses do ano. Identificaram-se picos de infecção, principalmente de janeiro a julho, resutado de condições de alta precipitação pluviométrica em outubro a abril, existência de inóculo e de frutos em estádio suscetível em dezembro a maio. No banco de germoplasma da Universidad Nacional Agraria de la Selva (Tingo María) e no viveiro da Cooperativa Agraria (Tocache), em 1997/98 e 1998/99, avaliou-se a resistência de cultivares ao patógeno, por meio de inoculações artificiais e de observações em condições de inóculo natural no campo. Em ambas as condições e os locais, no cultivar 'ICS 95' detectou-se maior resistência à doença. A remoção semanal de frutos doentes reduziu significativamente a doença em relação à remoção a cada duas semanas. Em outros ensaios, a remoção semanal e a diferenciada (semanal, de dezembro a maio, e a cada duas semanas, de junho a novembro) reduziram mais eficientemente a incidência da monilíase e aumentaram a produção que a remoção a cada duas semanas, durante todo o ano. A remoção diferenciada é recomendável aos produtores para implementação. A incidência da monilíase foi significativamente menor com aplicação de hidróxido de cobre, óxido cuproso ou clorotalonil, que no tratamento testemunha. Nas cultivares testadas, houve diferenças quanto à suscetibilidade à doença. Obtiveram-se menor incidência de monilíase e maior produção em 'ICS 95', que deve ser recomendada para plantios comerciais. / Moniliasis, which is caused by Moniliophthora roreri, is a very important cocoa disease in Peru and can cause complete production losses. Because of disease importance and the lack of information regarding it, there were evaluated: i- disease spread, its geographical distribution, and losses it is being causing; ii- disease progress and the effect of climate variables on it; iii- the resistance of cocoa cultivars to the pathogen; and iv- the effects of diseased fruits removal, fungicides, and the combination fruit removal-resistance on moniliasis progress. The disease was first found in Peru in 1988 in Bagua region (Marañon); 1989 and 1990 in 48 and 85%, respectively, of localities sampled in Jaen-Bagua region; 1992 in Tingo Maria region (Huallaga); 1992 in Juanjui; 1993 in Tocache; 1994 in Pachitea Valley; 1995 in San Francisco region (Apurimac-Ene); 1997 in Satipo region (Perene-Ene); and 1998, in La Convención (Urubamba). Currently, moniliasis is found at the five major Peruvian cocoa producing regions, causing fruit losses between 19 to 100%. Considering intense trade and people movement in Peruvian border, there is a risk of introducing moniliasis on Brazil and Bolivia. In Tingo Maria region, from 1996 to 1999, the disease occurred throughout all the months. Infection peaks were detected, mostly from January to July, which coincided with high rainfall levels (October to April) and availability of inoculum and stage susceptible fruits (December to May). At the germplasm collection of the Universidad Nacional Agraria de la Selva (Tingo María) and at the nursery of the Cooperativa Agraria (Tocache), in 1997/98 and 1998/99, cultivar resistance to M. roreri was evaluated, by artificially inoculating fruits and by observing fruit reactions to natural inoculation under field conditions. At both places and inoculation conditions, 'ICS 95' was the most resistant cultivar to the pathogen. Weekly removals of diseased fruits were more efficient than biweekly removals in reducing disease incidence. Similarly either weekly removals or variable removals (weekly from December to May and biweekly from June to November) were more efficient in reducing disease incidence and increasing yield than biweekly removals. Variable removals should be recommended to growers. Moniliasis incidence was significantly lower with copper hydroxide, cuprous oxide or chlorotalonil than in control treatment. Differences regarding disease resistance were found in the tested cultivars. Less disease incidence and more yield were gotten in ICS 95 , which should be recommended to growers. stage susceptible fruits (December to May). At the germplasm collection of the Universidad Nacional Agraria de la Selva (Tingo María) and at the nursery of the Cooperativa Agraria (Tocache), in 1997/98 and 1998/99, cultivar resistance to M. roreri was evaluated, by artificially inoculating fruits and by observing fruit reactions to natural inoculation under field conditions. At both places and inoculation conditions, 'ICS 95' was the most resistant cultivar to the pathogen. Weekly removals of diseased fruits were more efficient than biweekly removals in reducing disease incidence. Similarly either weekly removals or variable removals (weekly from December to May and biweekly from June to November) were more efficient in reducing disease incidence and increasing yield than biweekly removals. Variable removals should be recommended to growers. Moniliasis incidence was significantly lower with copper hydroxide, cuprous oxide or chlorotalonil than in control treatment. Differences regarding disease resistance were found in the tested cultivars. Less disease incidence and more yield were gotten in 'ICS 95', which should be recommended to growers. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-03T10:52:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3353185 bytes, checksum: 7d45eba15c5e999db5cb43513a107843 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-03T10:52:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3353185 bytes, checksum: 7d45eba15c5e999db5cb43513a107843 (MD5) Previous issue date: 2005-05-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os experimentos foram instalados em lavouras comerciais de Coffea arabica nos municípios de São Gotardo e Ervália, no Estado de Minas Gerais. As avaliações das plantas da lavoura quanto à atrofia dos ramos do cafeeiro (ARC) constaram da determinação de incidência e da severidade da doença, do crescimento dos ramos e da produção de grãos. No estudo da distribuição espacial, foram feitas análises de ordinary runs nas linhas e nas entrelinhas, da dinâmica e estrutura de focos, análise utilizando a lei de Taylor modificada e determinação de áreas isópatas. No estudo da distribuição temporal da doença, avaliou-se a incidência real e cumulativa de ARC e calculou-se a taxa de progresso da doença. Com base nas análises de ordinary runs e dinâmica e estrutura de focos, observou-se agregação das plantas doentes, mostrando que a disseminação da doença ocorreu preferencialmente nas linhas de plantio. Por meio da análise da lei de Taylor modificada, observou-se forte agregação de plantas doentes. Pela a análise de dinâmica e estrutura de focos, verificou-se que as plantas doentes apresentaram-se, inicialmente, como focos isolados e, posteriormente, com o aumento da incidência, ocorreu a coalescência delas. Os ramos sem sintomas apresentaram maior crescimento do que os com sintomas. Obteve-se relação negativa entre os valores de produção e tamanho dos grãos com a severidade da ARC. A máxima incidência de ARC ocorreu no mês de dezembro, quando a taxa de progresso da doença foi de 0,18 planta/mês, enquanto no período de inverno a incidência foi muito baixa, com taxa próxima a zero. / Field experiments were conducted at commercial coffee (Coffea arabica) areas at ‘São Gotardo” and ‘Ervália” counties at ‘Minas Gerais’ state. The assessments were done by determining the incidence, severity of Coffee Leaf Scorch (CLS), shoot growth and grain yield. On the spatial distribution study, analysis of ordinary runs, on the lines and among them, dynamic and structure of foci as well as the analysis using modified Taylor’s law were done. On temporal distribution of CLS study, the real and cumulative incidence of CLS was done and the data was used to calculate the rate of the disease progress. Based on the analysis of ordinary runs and dynamic and structure of foci, aggregation of diseased plants was observed showing that its dissemination occurred mainly on planting lines. By using the modified Taylor’s law, diseased plants were aggregated within the area containing the coffee plants. Based on the analysis of the dynamic and structure of foci, it was seem that diseased plants showed, at the beginning, isolated foci and later on, with an increase on disease incidence, they became more aggregated. Shoot with disease symptoms had greater growth compared to shoot without symptoms. There was a negative relationship between the yield and values grain size with the CLS severity. The maximum values for CLS incidence occurred on december when the rate of disease progress was 0.18 plant/month. However, on the winter time, disease incidence was lower with rate of progress close to zero. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-04T14:05:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 884943 bytes, checksum: 6d04675a5504c3d18ce512015afd015c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T14:05:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 884943 bytes, checksum: 6d04675a5504c3d18ce512015afd015c (MD5) Previous issue date: 2005-04-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O Brasil é o principal produtor de feijão no mundo, com mais de três milhões de toneladas produzidas anualmente. Entretanto, esta produtividade poderia ser maior. Diversos fatores têm impedido que a produção do país aumente, entre eles, a ocorrência de doenças durante o ciclo da cultura tem papel central. Mais de duzentos patógenos já foram relatados ocorrendo em feijoeiro, embora apenas uma dúzia tenha sido relatada como importante. No Brasil, o crestamento bacteriano, a mancha angular, a ferrugem e a antracnose são as principais doenças da parte aérea da cultura, podendo reduzir a produção em até 70%. Atualmente, as medidas de controle adotadas têm sido relativamente eficientes devido à alta variabilidade dos patógenos no campo e pequeno número de genes de resistência disponíveis e o plantio das mesmas cultivares por ciclos sucessivos. Assim o controle biológico tem papel fundamental, quando inserido numa estratégia de manejo integrado de doenças. Dentre os organismos estudados para atuarem no biocontrole de doenças, as bactérias têm sido relatadas como capazes de inibir outros microrganismos por meio de mecanismos de antibiose, parasitismo, competição e indução de resistência. O presente trabalho teve como objetivos selecionar bactérias do filoplano de feijoeiro como agentes de biocontrole de doenças da parte aérea da cultura, baseado em estratégias de seleção conjuntas in vitro e in vivo, determinar que mecanismos de controle poderiam estar envolvidos, se os isolados obtidos estariam atuando como promotores de crescimento ou indutores de resistência e testar a efetividade dos isolados em campo, em diferentes cultivares e em idades diferentes da cultura, contra os patógenos desafiantes, Colletotrichum lindemuthianum, Erysiphe polygoni, Phaeoisariopsis griseola, Pseudomonas viridiflava, Uromyces appendiculatus e Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. Dos 500 isolados obtidos, três foram mais promissores, quanto ao controle das doenças em casa de vegetação, reduzindo a severidade das doenças quando comparados ao tratamento com água, sendo dois identificados por sequenciamento do RNA16S como Bacillus cereus (UFV-75 e UFV-172) e o terceiro, por análise de ácidos graxos, como Pseudomonas putida (UFV-108). Nos ensaios de antibiose in vitro, verificou-se que a bactéria Bacillus cereus (UFV-75) foi capaz de inibir, seja a germinação de conídios ou o crescimento micelial de fungos ou o crescimento de bactérias, todos os patógenos testados. Demonstrou-se em ensaio in vitro que B. cereus (UFV-75) foi produtor de sideróforos, compostos voláteis, bacteriocinas e da enzima quitinase. As bactérias B. cereus (UFV-172) e P. putida (UFV-108) também produziram sideróforos, embora o isolado UFV-172 não tenha inibido o crescimento de nenhum dos patógenos in vitro. Nos ensaios de campo, UFV-75, UFV-108 e UFV-172, reduziram a severidade da mancha angular (P. griseola) e da ferrugem (U. appendiculatus). Nos ensaios de promoção de crescimento, o isolado UFV-74 (Pseudomonas putida) foi selecionado, por promover o aumento do tamanho das folhas e das plantas em casa de vegetação e também aumentar a produtividade no campo, quando pulverizado sobre as folhas ou via microbiolização de sementes. Nos testes com produtos comerciais, B. cereus (os dois isolados) e P. putida foram sensíveis apenas aos fungicidas Cupravit Azul Br e Manzat 800. Nos ensaios de amplitude de controle, onde se avaliou a eficiência de B. cereus (UFV-172 e UFV-75) e P. putida, em controlar: a) o crestamento bacteriano em plantas da cultivar Pérola com idades diferentes; b) a antracnose, o oídio, a mancha bacteriana e a mancha angular na cultivar Pérola e; c) em nove cultivares diferentes contra o crestamento bacteriano, todos os três isolados foram eficientes em controlar o crestamento bacteriano comum em plantas com idades até 60 dias após a emergência. Todos os isolados foram capazes de reduzir a severidade da antracnose, do oídio, da mancha bacteriana e da mancha angular, exceto nos ensaios de UFV-75 X oídio e todos os isolados foram eficientes em controlar o crestamento bacteriano, em todas as cultivares testadas, exceto nos ensaios de UFV-75 X ‘Vermelhinho’. Nos ensaios de sistemicidade, onde buscava-se determinar se B. cereus (UFV-172) poderia estar atuando como indutor de resistência sistêmica, o isolado inibiu os patógenos desafiantes X. a. pv. phaseoli e M. incognita, quando aplicado em região separada espacialmente da região que foram aplicados os patógenos, dando indícios de que o isolado pode estar agindo nas plantas de feijoeiro como indutor de resistência. Esse resultado é corroborado pelo ensaio de restrição de multiplicação de X. a. pv. phaseoli, quando o isolado foi aplicado quatro dias antes do patógeno e esse, quando infiltrado em folhas de feijoeiro, teve um desenvolvimento inferior ao de plantas não expostas ao isolado, sugerindo que mecanismos de sinalização que induzem a síntese de compostos que restringem o desenvolvimento dos patógenos são desencadeados nas plantas quando estas são expostas ao isolado e que esse sinal é sistêmico sendo translocado das folhas até as raízes. / Brazil is the most important bean producer in the world, producing around 3 million tons of grains per year. Nevertheless, the Brazilian productivity could be higher but several factors have been impeding increases in productivity such as the occurrence of multiple diseases during the plant life cycle. In this sense, more than two hundred pathogens are known to induce diseases in bean but only a few actually are important. Under Brazilian conditions, the bacterial blight, the angular leaf spot, the rust and the anthracnose are the most important bean phylloplane diseases and may account for losses up to 70% if environmental conditions favor disease occurrence. Nowadays, the majority of disease control procedures lack efficiency due to inefficiency of available recommended chemicals in the field, the high level of variability in pathogen populations as well as the few resistance genes detected and manipulated. Therefore, biological control assumes paramount importance when included in global procedures of disease integrated management. Among focused microorganisms as potential biocontrol agents, bacteria have been exhaustively investigated and it is well known that they can act either by direct antibiosis or by inducing systemic resistance. This work had as main objective the selection of prokaryotic phylloplane residents that might act as agents of biological control for bean aerial part diseases, from a universe of 500 isolates obtained from healthy bean phylloplane. In this sense, the strategy of combining “in vitro” as “in vivo” procedures for the massal screen, the investigation on the nature of control mechanisms involved, specific tests to determine whether the observed biocontrol could be attributed to direct antibiosis or to induced resistance, specific assays to verify whether selected antagonists might act as growth promoters, field tests to investigate whether selected isolates would act as biocontrol agents when delivered to distinct bean cultivars, to plants in different phenology stages and against multiple pathogens (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, Pseudomonas viridiflava, Uromyces appendiculatus, Colletotrichum lindemuthianum, Phaeoisariopsis griseola and Erysiphe polygoni) were studied. Out of the set of 500 isolates, three of them - UFV-75, UFV-172 (Bacillus cereus) and UFV-108 (Pseudomonas putida) – presented the best performance as biocontrol agents being able to reduce diseases severity up to 75% in greenhouse tests. In “in vitro” tests, isolate UFV-75 was able to inhibit growth of all pathogens as well as produce siderophores, volatile antimicrobial compounds, bacteriocins and chitinases. Isolates UFV-172 and UFV-108 also produced siderophores but the latter shown no “in vitro” activity against pathogens. In field trials, all three isolates showed efficiency for reducing severity of rust (U. appendiculatus) and angular leaf spot (P. griseola). In growth-promoting assays, an isolate distinct from the ones selected as biocontrol agents, namely UFV-74 (Pseudomonas putida), behaved as a good promoter, as detected by plant growth parameters evaluation like number of leaves, plant height and seed production, if delivered either by seed microbiolization or by spraying of propagules in the aerial part. Investigating the possibility of mixing the selected biocontrol agents and commercial products recommended in Brazil (registered pesticides, like fungicides, insecticides and herbicides) for the bean culture, it was found that all of them were sensitive only to the fungicides Cupravit Azul Br and Manzat 800. Using X. a. pv. phaseoli as challenging pathogen, it was found that all of them were able to low down disease severity but in the interaction isolate UFV-75 and “Vermelhinho” cultivar. All three selected isolates were able to promote the experimental biocontrol of bacterial blight under controlled conditions regardless plant age, up to 70 days after sowing. Using “Perola” as model cultivar, it was verified that protection brought about by the three isolates had character of multiplicity in the sense that this protection was effective against a broad range of pathogens like C. lindemuthianum, P. griseola P.viridiflava and Erysiphe polygoni. In protection sistemicity assays, the isolate UFV-172 provided protection against X. a. pv. phaseoli and Meloidogyne incognita even if delivered to locals remote from the site of inoculation. This constitutive sistemicity of protection indicates that isolate UFV-172 may promote biocontrol by inducing systemic resistance and the efficiency by which the antagonist restricted multiplication of a model pathogen (X. a. pv. phaseoli) in bean leaf tissue provided an additional evidence for that. / Tese importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-05-10T16:53:01Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6078357 bytes, checksum: 26dd06f3cc777f1681a5e8f5d8395eab (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-10T16:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6078357 bytes, checksum: 26dd06f3cc777f1681a5e8f5d8395eab (MD5) Previous issue date: 2002-03-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Avaliaram-se a resistência de berinjela ‘Embú’ controle e transgênica, contendo a região codante do gene orizacistatina, às espécies Meloidogyne incognita, M. javanica e M. arenaria. Foi verificado que a berinjela transgênica foi altamente suscetível a M. incognita, M. arenaria e M. javanica, assim como a berinjela controle as espécies M. incognita e M. javanica com grande número de galhas e número de ovos. Portanto, a transgênese não afetou a resposta de berinjela ‘Embú’ aos nematóides avaliados. A resistência às espécies de pulgões (Myzus persicae e Macrosiphum euphorbiae) e lagartas (Mechanitis polymnia e Mechanitis lysimnia) também foi avaliada. Trabalhou-se com uma geração de M. persicae e de M. euphorbiae para elaboração de tabelas de vida. Foram detectados efeitos significativos das linhagens da planta quanto às características (Ro - taxa líquida de reprodução, rm - razão infinitesimal de aumento populacional e λ - razão finita de aumento populacional) estudadas, exceto para tempo de geração (T). O efeito da espécie de pulgão foi significativo para todas as características, enquanto que o efeito da interação entre linhagem da planta e espécie de pulgão não foi significativo para nenhuma das características. Conclui-se que o ciclo biológico de M. persicae e M. euphorbiae foi alterado, sendo que Ro, rm e λ foram menores nas plantas transgênicas. Para o teste de resistência à lagartas, foram avaliados a área foliar consumida, o número de indivíduos e sua mortalidade, nas fases de desenvolvimento (da lagarta até a fase adulta). Não foram observadas significâncias para as características (duração do período pupal, e mortalidade larval e pupal) avaliadas, à exceção da duração larval. Em relação à área foliar consumida pelas lagartas, observou-se que não houve diferença entre as linhagens da planta e na interação entre linhagem e espécie da lagarta, porém houve diferença em todos os parâmetros avaliados (área foliar total e diária consumida em centímetros quadrado e em porcentagem) quando analisada as espécies de lagarta. Assim, as plantas transgênicas utilizadas não apresentam atividade sobre a mortalidade e duração das fases larval e pupal de Mechanitis polymnia e M. lysimnia. Atividade genotóxica de extratos de berinjela transgênicos utilizados como alimento na dieta de larvas de Drosophila melanogaster, na forma de extratos de frutos in natura e aquecidos em banho-maria a 45oC foi avaliada pelo SMART (somatic mutation and recombination test). Em berinjela ‘Embú’, foram incorporados os genes das construções pRGG hpt, pOZC6 e pCLDO04541, chamados de HPT-1, OZC-2 e SW5-3, respectivamente. Foram realizados dois experimentos independentes nos quais foram testados os mesmos frutos de cada linhagem in natura. No experimento II foram acrescentados os mesmos frutos aquecidos e mais dois frutos: OZC-4 e SW5-5. Além desses, diluiu-se o triturado do fruto OZC-2 a uma concentração de 25%. Em cada experimento também foram incluídos um controle positivo (Ciclofosfamida) e um negativo (água). Em ambos experimentos, resultados positivos foram observados para o controle positivo e em algum dos tratamentos com berinjela transgênica in natura e aquecidos. Por comparação das progênies obtidas no SMART, observou que ocorreu recombinação em alta frequência. Frações de todos os frutos liofilizados das plantas transgênicas e controle, utilizados no SMART, foram mantidos a –80oC e foram, posteriormente, utilizados para detecção de Agrobacterium tumefaciens. Após a rehidratação dos tecidos, com água destilada e estéril, esses foram plaqueados, sob condições assépticas, e avaliado o crescimento de bactérias e sua natureza pelo teste ketolactose. Dos seis frutos utilizados (Berinjela controle, HPT-1; OZC-2, SW5-3, OZC-4, SW5-5) foram isoladas 10 colônias de bactérias, apenas dos fruto SW5-3 e SW5-5. Dessas, 5 colônias foram identificadas pelo teste Ketolactose como Agrobacterium tumefaciens. À luz dos resultados, conclui-se que apesar das evidências de que extrato de berinjela induziu a recombinação somática em D. melanogaster, a ausência de dados na literatura acerca da aplicação deste teste na caracterização de efeitos genótoxicos, advindos dos produtos dos transgenes, sugere que outros estudos devem ser conduzidos, para determinar o(s) agente(s) indutor(es) de recombinação, inclusive aqueles advindos de bactérias residentes nos tecidos de frutos transformados e de possíveis situações de estresses de natureza biótica ou abiótica. / Control and transgenic eggplants for the orizacystatin gene were evaluated as for resistance to nematode species Meloidogyne incognita, M. javanica, and M. arenaria. Transgenic eggplants were highly susceptible to M. incognita, M. arenaria, and M. javanica, as well as the control eggplants were to M. incognita and M. javanica, with high number of galls and eggs produced in the roots. Therefore, the transgenesis did not affect the response of ‘Embú’ eggplant to the nematodes evaluated. The resistance to species of aphids (Myzus persicae and Macrosiphum euphorbiae) and butterfly larvae (Mechanitis polymnia and Mechanitis lysimnia) was also evaluated. For elaboration of life tables, a generation of Myzus persicae and Macrosiphum euphorbiae was used. Significant effects of plant lines were detected for the parameters studied (Ro - net reproductive rate, rm - intrinsic rate of population increase e λ - finite rate of population increase), except for generation time (T). The effect of aphid species was significant for all parameters evaluated, whereas the effect of interaction between plant line and aphid species was not significant for the parameters analyzed. It can be concluded that the biological cycle of M. persicae and M. euphorbiae was alterated, since Ro, rm and λ were smaller in the transgenic plants. For the resistance test to butterfly larvae, consumed leaf area, individual number and mortality were evaluated during the different stages of its development (from larval to adult stage). Significant differences for the parameters evaluated (time period of pupal stage and larval and pupal mortality) were not observed, with exception of time period of larval stage. In relation to consumed leaf area by the larvae, it was observed no difference between the plant lines and no interaction between the plant lines and larvae species; however, differences in all parameters evaluated (total and daily leaf area consumed) were observed depending on larvae species. Thus, the transgenic plants analized did not have any influence on the mortality and time period of larval and pupal stages of Mechanitis polymnia and M. lysimnia. The genotoxic activity of fruit extracts (in natura and preheated at 45 o C) from transgenic eggplants, used as food in the diet of Drosophila melanogaster larvae, was evaluated by the somatic mutation and recombination test (SMART). The T-DNAs from the constructs pRGG hpt [containing the genes hygromycin phosphotransferase (hpt) and β -glucuronidase (uidA), pOZC6 [containing the genes orizacystatin (ozc), uidA, and neomycin phosphotransferase II (nptII), and pCLDO04541 [containing the genes npt and Sw5], were incorporated into eggplant cv. Embú, called of HPT-1, OZC-2 and SW5-3, respectively. Two independent experiments were performed, in which the same fruits from each line were tested in natura. In the experiment II, it was added the same preheated fruits and additional two fruits: OZC-4 and SW5-5. Besides, the triturated from the fruit OZC-2 was diluted to a concentration of 25%. It was also included, in each experiment, a positive (Cyclophosphamide) and a negative (water) control. In both experiments, positive results were observed for the positive control and also in some treatments with transgenic eggplant in natura and preheated. Comparing the progenies obtained in the SMART, it was verifyed the occurrence of recombination at high frequency. Fractions of all lyophilized fruits from transgenic and control plants, used in the SMART, were kept at –80oC, and then utilized for the detection of Agrobacterium tumefaciens. After re-hydration of the tissues, with sterile destilled water, they were plaqued, under asseptic conditions, and the bacterial growth and nature were evaluated by the ketolactose test. Among six fruits analized (control, HPT-1, OZC-2, SW5-3, OZC-4, and SW5-5), bacterial colonies (total of 10) were isolated only from SW5-3 and SW5-5 fruits. Five colonies were identifyed by the ketolactose test as Agrobacterium tumefaciens. Despite evidences that extracts from transgenic eggplant induced somatic recombination in D. melanogaster, it can be concluded that the absence of data in the literature, concerning the application of SMART in the characterization of genotoxic effects of transgenic products, suggests that other studies need to be accomplished, aiming to determine the inductive agent(s) of recombination, including those from bacteria resident in transformed fruit tissues and from possible situations of stress of biotic and abiotic nature. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-05T19:13:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1057121 bytes, checksum: bf75cf6f735caaf7d72e5ad8a513b28f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T19:13:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1057121 bytes, checksum: bf75cf6f735caaf7d72e5ad8a513b28f (MD5) Previous issue date: 2005-08-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A maioria dos genes de resistência (genes R) clonados codifica para proteínas R que contêm um domínio C-terminal rico em repetições do aminoácido leucina (domínio LRR), um domínio central conservado contendo sítios de ligação a nucleotídeos trifosfatados (domínio NBS) e um domínio N-terminal variável (TIR ou não-TIR). O domínio LRR provavelmente está envolvido no reconhecimento de proteínas do patógeno produzidas durante o processo de infecção. O domínio NBS está relacionado com a hidrólise de nucleotídeos trifosfatados e participa de uma sinalização celular necessária à resposta de resistência da planta. A região N-terminal variável pode conter um domínio com similaridade com a proteína ao Toll de Drosophila e Interleucina de mamíferos (TIR) ou ainda um domínio não-TIR, como coiled-coil (CC), ambos aparentemente envolvidos com sinalização celular. Ao contrário do observado em culturas agronômicas, existem poucos trabalhos de caracterização de genes de resistência em árvores, especialmente em Eucalyptus. Estudos de caracterização do transcriptoma desta planta, como parte do projeto Genolyptus (http://genolyptus.ucb.br), resultaram na identificação de várias etiquetas de sequências de genes expressos (ESTs) com similaridade a genes R e genes envolvidos em resposta de defesa. Desta forma, este trabalho teve por objetivos: 1) sequenciar completamente oito cDNAs de eucalyptus pré- selecionados por possuírem similaridade com genes envolvidos em resistência a doenças em diferentes espécies vegetais, como linho e Populus e ao gene Rar1 envolvido em resposta de defesa; 2) identificar clones BACs de E. grandis vcorrespondentes a cada um desses cDNAs, visando a futura determinação desses genes; e 3) sequenciar parcialmente pelo menos um clone BAC visando determinar a estrutura completa de pelo menos um gene similar a gene R. A caracterização dos cDNAs revelou que a maioria dos clones possuem sequências incompletas de genes R. Foram identificados onze clones BACs (insertos variando de 20 a 280 kb) correspondentes a esses genes e um deles foi selecionado (BAC 143 F-12, inserto de 90 kb) para construção de uma biblioteca shotgun, visando a caracterização parcial de seu inserto. As sequências parciais de 917 subclones desta biblioteca foram agrupadas em 14 contíguos sendo que nove apresentaram similaridade com genes conhecidos. Dois contíguos mostraram similaridade com genes que codificam proteínas da classe TIR-NBS-LRR e os demais a genes que codificam para fosfatidilinositol 3-quinases putativas, poligalacturonase e a poliproteínas putativas (retrotransposons do grupo Ty1-copia). Análises mais detalhadas dos contíguos com sequências similares a genes R revelaram que um deles contém a ORF completa de um gene da classe TIR-NBS-LRR e o outro contém um gene truncado com domínios TIR-NBS e parte de um domínio LRR. Esses resultados sugerem que este BAC seja derivado de uma região genômica de E. grandis que contém um agrupamento de genes TIR-NBS-LRR. Futuros estudos de mapeamento genético poderão determinar se a sequência desse BAC co- localiza com genes de resistência em E. grandis. / Several resistance genes (R genes) have been isolated from various plant species in the last decade. These R genes can be categorized into several distinct classes based on their predicted protein structures. The largest class falls into the NBS-LRR class, which encodes a nucleotide site domain and a leucine-rich repeat (LRR) domain. NBS-LRR R genes can be further subdivided into toll and interleukin-1 (TIR) and non-TIR classes based on the presence of a TIR domain at the N-terminus of the protein. In contrast to agronomic cultures, there are few resistance genes characterized in woody plants, especially in Eucalyptus. Transcript characterization studies of this tree, as part of Genolyptus Project (http://genolyptus.ucb.br), have identified several expressed sequence tags (ESTs) similar to R genes and disease resistance response genes. Therefore, this work aimed to: (1) completely sequence eight pre- selected eucalyptus cDNAs with similarity to R genes from flax and Populus and to resistance response Rar1 gene from barley; (2) identify E. grandis BAC clones corresponding to these cDNAs, seeking future R gene genomic organization studies; and (3) partially sequence at least one BAC clone to determine the complete structure of al least one resistance gene analog. The sequencing results showed that the majority of the cDNAs analyzed are truncated, representing incomplete sequences of R genes analogs. Eleven BAC clones were identified (inserts varying from 20 to 280 kb) that correspond to these cDNAs and one (BAC 143F12, 90 kb insert) was characterized by shotgun sequencing. Partial sequences obtained from 917 BAC subclones were viigrouped in 14 contigs. Nine contigs showed similarity to known genes. Two contigs were similar to TIR-NBS-LRR genes and the others to putative phosphatidylinositol 3-kinase, polygalacturonase and putative polyproteins (Ty1-copia group retrotransposons). Detailed analysis of the contigs similar to R genes demonstrated that one has a complete ORF of a TIR-NBS-LRR gene and the other has one TIR-NBS pseudogene with truncated LRR domain. These results suggest that the insert of this BAC is derived from a Eucalyptus grandis genomic region that contains a cluster of TIR-NBS-LRR genes. Future genetic mapping studies will elucidate if these BAC inserts co-localize with known R genes in Eucalyptus.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-06T14:03:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1133771 bytes, checksum: 640defa7d0749c719bdf5d760421654a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-06T14:03:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1133771 bytes, checksum: 640defa7d0749c719bdf5d760421654a (MD5) Previous issue date: 2007-07-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Para isso foram usadas três estrategias. Inicialmente, palavras-chave correspondentes a termos relacionados aos mecanismos de resistência de plantas a patógenos foram identificadas na literatura e utilizadas como “iscas” para a mineração dos dados. Com o auxílio de ferramentas disponíveis na plataforma de bioinformática do PBGC, foram identificadas ESTs (Expressed Sequence Tags) relacionadas a cada uma destas palavras. Outra estrategia utilizada foi a busca por similaridades entre algumas sequências públicas envolvidas com a resistência do cafeeiro a doenças com as sequências do PBGC, por meio do programa BLAST. Utilizou-se, também, o Electronic Northern, uma ferramenta desenvolvida pelo Laboratório de Genômica e Expressão (LGE). A mineração, usando as três estrategias, identificou 14.060 sequências do PBGC. Essas sequências apresentaram similaridade com proteínas conhecidamente relacionadas com o processo de defesa da planta contra doenças como, por exemplo, quitinase, proteína quinase, citocromo P450, proteína de resistência a doenças, proteína relacionada com patogênese, proteínas com domínio LRR e NBS, proteínas induzidas por hipersensibilidade, entre outras. Os processos biológicos com os quais essas sequências estão envolvidas incluíram metabolismo, transporte, regulação da transcrição, enovelamento de proteínas, biossíntese entre outros. A análise global baseada em ontologia de função molecular das sequências obtidas mostrou que os genes estão envolvidos com metabolismo, resposta a estímulos externos, diferenciação celular, ligação a ácidos nucleicos, ligação a nucleotídeos, resposta de defesa, apoptose entre outras. Visando verificar o envolvimento destas sequências com a resistência do cafeeiro a ferrugem foram desenhados 40 primers para amplificar algumas das sequências mineradas. Os primers foram desenhados com o programa computacional Primer3 e a estabilidade desses foi verificada por meio do programa PrimerSe/ect. Diferentes concentrações dos componentes da reação de PCR foram analisadas. Utilizando as condições de reação e amplificação otimizadas, os 40 primers foram testados em 12 genótipos resistentes e 12 susceptíveis a Hemi/eia vastatrix, fungo causador da ferrugem. Vinte e nove destes 40 primers resultaram em bandas únicas e bem definidas, sendo um polimórfico. Este trabalho permitiu obter, até o momento, um marcador molecular polimórfico entre os indivíduos resistentes e susceptíveis. Esse marcador, denominado CARF 005, amplifica uma região do DNA que corresponde a uma ORF parcial de Coffea arabica que codifica uma proteína de resistência a doenças. / For that, three strategies were used. Initially, keywords related to the plants resistance mechanism to pathogens were searched in scientific literature and used as drivers for data mining. Using the available tools at the PBGC bioinformatics platform, ESTs (Expressed Sequence Tags) related to each one of these words were identified. The search for similarities between some published sequences and sequences from the PBGC, by using the BLAST program was another strategy. The Electronic Northern, a tool developed by the Laboratório de Genômica e Expressão (LGE), was also used. Those strategies allowed the identification of 14,060 sequences of the PBGC. These sequences were similar to proteins known to be related to de plant disease defense process, for instance chitinase, kinase protein, cytochrome P450, disease resistance protein, pathogenesis related protein, LRR and NBS proteins, hypersensibility induced protein among others. The biological processes with witch these sequences are involved included metabolism, transport, transcription regulation, protein folding, biosynthesis and others. The ontology-based global analysis for molecular function showed that the genes are involved with metabolism, external stimulus response, cellular differentiation, nucleic acid binding, nucleotide binding, defense response, apoptosis and others. Aiming to verify the involvement of these sequences with the coffee tree resistance to leaf rust, 40 primers were designed to amplify the mined sequences. The primers were synthesized using the computational program Primer3 and their stability was tested by the program PrimerSelect. Different PCR conditions were tested. Using optimized reaction and amplification conditions, those 40 primers were tested in 12 resistant and 12 susceptible genotypes to Hemileia vastatrix, fungus that causes coffee leaf rust. Twenty nine of those resulted in unique and sharp bands, and only one of these was polymorphic. The 40 primers permitted to find one molecular marker polymorphic between the resistant and susceptible genotypes. This marker amplifies a region of the DNA which corresponds to a Coffea Arabica ORF for disease resistance protein.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-06-19T16:48:07Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3248356 bytes, checksum: a4f8aeccd8cbef161fab74116f3703b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-19T16:48:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3248356 bytes, checksum: a4f8aeccd8cbef161fab74116f3703b1 (MD5) Previous issue date: 2005-08-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A arte de fazer jardins sedimentou-se no Brasil a partir do século 18, principalmente com a criação dos primeiros jardins públicos nas cidades brasileiras. Atualmente, o ofício de paisagismo, que inclui o design de jardins, é exercido por profissionais às vezes pouco capacitados, visto que não há regulamentação da profissão. Aliado a isso, falta mão-de-obra qualificada para implantação e manutenção das áreas ajardinadas – os jardineiros. A literatura existente sobre jardinagem possui linguagem difícil e contém recomendações por vezes inviáveis. Ciente da importância dos jardins para a sociedade, este trabalho visou verificar se há um padrão no emprego das técnicas de jardinagem utilizadas, identificar a literatura referente a estas, como também descrever o perfil e a qualificação profissional de jardineiros. Foram realizadas 54 entrevistas em três condomínios da cidade de Viçosa – MG e no Setor de Parques e Jardins da UFV . Dos entrevistados, 100% eram homens. Verificou-se pouca escolaridade dos jardineiros e que apenas 23% dos entrevistados fizeram algum curso de jardinagem. Somente 30% consultam fontes de informação sobre jardinagem. Dos entrevistados, 100% fazem adubação no plantio e 72% utilizam mistura de fontes orgânicas e minerais. 93% fazem adubação de manutenção, sendo que 44% misturam fonte orgânica e mineral. Em ambas as adubações, o adubo orgânico mais usado é o esterco bovino e o mineral é o NPK 4-14-8. Há entrevistados que usam quantidade insignificante de adubos e outros que aplicam excesso. A adubação de manutenção é realizada por 56% em intervalos de até três meses. 33% dos entrevistados irrigam três vezes/ semana, 24% todos os dias e outros 24% o fazem 2 vezes/ semana. 46% irrigam até encharcar e 41% até o solo ficar úmido. 85% controlam plantas invasoras com arranquio manual, fazendo isto semanalmente (35%), a cada 15 dias (33%) ou somente quando em excesso (19%). 60% fazem controle químico de pragas. Dos que controlam doenças pelo método químico, 64% não sabem o nome do produto utilizado. Assim, conclui-se que: as técnicas de jardinagem precisam ser mais conhecidas e empregadas com maior rigor técnico-científico e que os jardineiros entrevistados precisam ser mais bem capacitados para exercer sua função, o que pode evitar situações de risco de saúde e ambiental. / The art of planting gardens was strengthened in Brazil in the 18th century, mainly with the creation of the first public gardens in Brazilian cities. Nowadays, the profession of landscape architecture, which includes the design of gardens, is practiced by professionals sometimes insufficiently qualified, because there is no regulation for the practice. Allied to that, qualified labour lacks for plantation and maintenance of gardens – gardeners. The existing literature on gardening presents difficult language and contains recommendations sometimes not feasible. Aware of the importance of gardens for the society, this research sought to verify if there is a pattern in gardening techniques used, to identify the related literature, and to describe the profile of gardeners and their professional qualifications. 54 interviews were carried out in three condominiums of Viçosa – MG , Brazil, and in the Parks and Gardens Section of the Federal University of Viçosa. 100% of the interviewees were men. Little education was verified among the gardeners and only 23% of the interviewees took gardening courses. Only 30% refer to sources of information on gardening. Of the interviewees, 100% fertilise when planting and 72% use a mixture of organic and mineral sources. 93% do maintenance fertilisations and 44% mix organic and mineral sources for that purpose. In both cases, the most used organic fertilizer is cow manure and the mineral formulation is NPK 4-14-8. Some interviewees declared to use amounts of fertilizers that are insignificant and others apply excess. Maintenance fertilisation is done by 56% in intervals of up to three months. 33% of the interviewees irrigate three times a week, 24% everyday and other 24% do it twice a week. 46% irrigate until soaking and 41% until the soil looks humid. 85% control weeds by plucking them manually, doing this weekly (35%), every 15 days (33%) or only when in excess (19%). 60% perform chemical pest control. 64% of those who control diseases chemically do not know the name of the product used. Hence, the conclusions are: gardening techniques need to be better known and performed with greater technical and scientific adequacy, and that the gardeners interviewed need to be better qualified to practice, which can avoid situations of health and environmental hazard risk.