Orientadores: Enilson Antonio Sallum, Francisco Humberto Nociti Jr / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T04:17:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Machion_Luciana_D.pdf: 384065 bytes, checksum: 6e6dbb89d4fe3af21bf49de9590d2e24 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a efetividade a longo prazo da associação de liberação local de doxiciclina (ATRIDOX*) à raspagem e alisamento radicular quanto à resposta clinica e microbiológica no tratamento periodontal de fumantes. Foram selecionados 43 pacientes fumantes, portadores da doença periodontal crônica, apresentando mínimo de 4 bolsas periodontais (³5mm) com sangramento à sondagem em dentes anteriores. Os pacientes foram divididos aleatoriamente em 2 grupos: RAR = Raspagem e alisamento radicular; e RAR-D = raspagem e alisamento radicular seguida de aplicação de doxiciclina. Esses tratamentos foram realizados nos períodos inicial e aos 12 meses. Avaliações do índice de placa (IPL), sangramento à sondagem (SS), recessão gengival (RG), nível de inserção clínica relativo (NICr) e profundidade de sondagem (PS) foram realizadas nos períodos inicial, 45 dias, 3, 6 e 12 meses, 45 dias após o retratamento e novamente aos 15, 18 e 24 meses. Além disso, coleta de placa subgengival foi realizada nos mesmos períodos, até os 15 meses e análise de PCR e ¿Checkerboard DNA-DNA hybridization¿ foram realizadas. O teste t de Student demonstrou valores iniciais similares para ambos os grupos em todos os parâmetros (p>0,05). Não houve diferença significante entre os grupos nos parâmetros IPL, SS e RG em nenhum dos períodos (p>0,05). As maiores diferenças entre os grupos se deu nas bolsas inicialmente profundas (³7mm). Para essas bolsas, o grupo RAR-D mostrou maiores ganhos em PS aos 6 e aos 18 meses (diferenças entre os grupos de 1,18 e 1,73mm, respectivamente, p<0,05). O ganho em NICr também foi maior para RAR-D aos 6, 18 e 24 meses (diferença de 1,16, 1,99 e 1,78mm, respectivamente, p<0,05). Além disso, a proporção de sítios que apresentaram redução em PS ³ 2mm foi maior para RAR-D aos 6 meses (81,2 x 50,8%, p<0,001) e aos 24 meses (65,5 x 46,5% para RAR-D e RAR respectivamente, p=0,01). Quanto ao ganho em NIC, esta proporção foi de 34,4% para RAR-D e 18,1% para RAR (p=0,008). A análise microbiológica detectou reduções significantes nas proporções de Tannerela forsythensis e Porphyromonas gingivalis em ambos os grupos, porém esta ocorreu a partir dos 3 meses para o grupo RAR-D e a partir dos 6 meses para RAR e a diferença entre os grupos somente se deu aos 3 meses pós-tratamentos inicial e de manutenção para proporções de sítios com Pg (58 x 25% e 47 x 8%, respectivamente). Em vista dos resultados obtidos, pode-se concluir que a utilização da liberação local de doxiciclina associada à raspagem e alisamento radicular pode trazer benefícios adicionais para o tratamento periodontal de pacientes fumantes / Abstract: The aim of this study was to evaluate the long term clinical and microbiological responses to the association of locally delivered doxycycline with scaling and root planing in the periodontal treatment of smokers. Forty-three chronic periodontitis patients, presenting a minimum of 4 pockets (³ 5mm) that bled on probing on anterior teeth were selected. Patients were randomly assigned to receive one of the following treatments: scaling and root planing (SRP) and scaling and root planing followed by local application of doxycycline (SRP-D). Assigned treatments were performed at baseline and 12 months. Plaque, bleeding on probing, gingival recession, relative attachment level (RAL) and probing depth (PD) were recorded at baseline, 45 days, 3, 6 and 12 months, 45 days following retreatment and at 15, 18 and 24 months. Subgingival plaque samples were also obtained at the same time intervals up to 15 months, for the analysis by PCR and Checkerboard. Student t test showed similar baseline values for both groups in all parameters (p>0,05). At all time points, plaque, bleeding reduction and gingival recession were similar between groups (p>0,05). Most significant differences between groups were found at initially deep pockets (³ 7mm), where SRP-D showed greater values in PD reduction than SRP at 6 and 18 months (mean difference of 1.18 and 1.73mm, respectively, p<0,05) and in RAL gain at 6, 18 and 24 months (mean difference of 1.16, 1.99 and 1.78mm, respectively, p<0,05). Also, proportion of sites showing ³ 2mm PD reduction was greater for SRP-D at 6 months (81,2 x 50,8%, p<0,001) and at 24 months (65,5 x 46,5%, respectively, p=0,01). As for RAL gain, this proportion was 34.4 and 18.1% for SRP-D and SRP, respectively (p=0,008). The bacterial analysis detected significant reductions in the proportions of T.forsythensis and P.gingivalis in both groups, however, this occurred earlier at 3 months for the SRP-D group and later at 6 months for the SRP group (p<0.05) and the difference between groups was statistically significant at 3 months for the proportion of sites with Pg after first and second application of the drug (58 x 25% and 47 x 8%, respectively). According to the results obtained in the present investigation, it can be concluded that the use of locally delivered doxycycline associated with scaling and root planing provides additional benefits for the periodontal treatment of smokers / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study evaluated as overall purpose the influence of doxycycline used as a matrix metalloproteinase (MMPs) inhibitor on the microtensile bond strength (μTBS) of a total etching adhesive system to dentin, considering two formulations (different pHs) and two substrates (source and demineralized) of primary and permanent teeth. The study is divided into two articles, the aim of the first article was to evaluate the application s effect of acidic or neutral doxycycline on the μTBS to dentin. Twenty extracted noncarious third molars were divided into 4 groups (doxycycline acidic pH, doxycycline neutral pH, chlorhexidine and control - no treatment). A flat dentin surface was exposed, wet grinding and submitted to: acid etch, application of the substance corresponding treatment group, application of adhesive system and resin composite. The specimens were stored (24 h in distilled water) and sectioned to obtain sticks (cross-sectional area of approximately 0.9 mm2). The sticks were submitted to tensile test. The mean μTBS were submitted to a one-way ANOVA and Tukey s test (α = 0.05). No significant difference of immediate μTBS (MPa) was observed between the neutral and acidic doxycycline, furthermore the solutions of different pH values were statistically similar to control and chlorhexidine groups. For the second study 30 permanent molars and 30 second primary molars were divided into 12 experimental groups (n = 5) according to the surface treatment after etching: doxycycline, chlorhexidine and control, and the condition substrate: sound and demineralized (pH cycling). The specimens preparation, restorative procedures and tensile test were performed in the same way as in the previous study. The μTBS were subjected to a two-way ANOVA and Tukey's test (α = 0.05), considering separately primary and permanent teeth. For both teeth types the application of doxycycline did not affect the immediate μTBS, while the demineralized substrate values were statistically lower than the sound group. The doxycycline solution, even at acidic pH, does not seem to affect the immediate bond strength to dentin, while demineralized substrate needs attention by presenting μTBS immediately reduced compared to sound. / Este trabalho teve como objetivo geral, avaliar a influência de uma substância inibidora de metaloproteinases (MMPs), a doxiciclina, na resistência de união (RU) à dentina de um sistema adesivo com condicionamento prévio, considerando duas formulações (diferentes pHs) e dois substratos (hígido e desmineralizado) de dentes decíduos e permanentes. O trabalho está dividido em dois artigos, sendo o primeiro realizado com o intuito de avaliar o efeito da aplicação da doxiciclina ácida ou neutra na RU à dentina. Para isso, foram selecionados 20 terceiros molares hígidos, os quais foram divididos em 4 grupos experimentais (doxiciclina pH ácido, doxiciclina pH neutro, clorexidina e controle nenhum tratamento). Os dentes foram seccionados próximo ao terço médio da coroa para obtenção de uma superfície dentinária plana, a qual foi submetida a: condicionamento ácido, tratamento de acordo com o grupo, ou seja, aplicação da substância correspondente na superfície condicionada, aplicação do sistema adesivo e restauração com resina composta. Após armazenamento (24h em água destilada a 37°C) os espécimes foram seccionados para obtenção de palitos (área de secção transversal de aproximadamente 0,9mm2), os quais foram submetidos a ensaio de tração. Os valores médios de RU foram submetidos à análise de variância com um fator e ao teste de Tukey (α=0,05). Os valores de RU (em MPa) obtidos para os grupos tratados com as soluções de doxiciclina em diferentes pHs apresentaram valores de RU estatisticamente semelhantes entre si e aos grupos controle e clorexidina. Para o segundo estudo, foram selecionados 30 terceiros molares permanentes e 30 segundos molares decíduos hígidos, os quais foram divididos em 12 grupos experimentais (n=5) de acordo com o tratamento da superfície após condicionamento ácido: doxiciclina, clorexidina e controle, e a condição do substrato: hígido e desmineralizado (ciclagem de pH). O preparo dos espécimes, procedimentos restauradores e ensaio de tração foram realizados da mesma forma que no estudo anterior. Os valores de RU obtidos foram submetidos à análise de variância de dois fatores e ao teste de Tukey (α=0,05), considerando separadamente dentes decíduos e permanentes. Para os dois tipos de dentes, a aplicação de solução de doxiciclina não afetou a resistência de união imediata, enquanto o substrato desmineralizado apresentou valores estatisticamente inferiores ao grupo hígido. A solução de doxiciclina, mesmo em pH ácido, parece não afetar a resistência de união imediata à dentina, sendo que o substrato desmineralizado merece atenção por apresentar valores de RU imediata reduzidos comparado ao hígido.

Orientador: Humberto Santo Neto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T14:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_JulianoAlves_D.pdf: 20174519 bytes, checksum: cb29b0264ecac77cff508a6dbc1ec270 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Na distrofia muscular de Duchenne (DMD) e no camundongo mdx, a ausência da distrofina no músculo esquelético e cardíaco, desestabiliza o sarcolema e leva a um aumento do influxo de cálcio e consequente mionecrose. A reação inflamatória induzida para remover a fibra muscular necrótica, ativa a produção de citocinas pró-inflamatórias, que por sua vez aumenta o estresse oxidativo e ultimamente levando a formação de fibrose intersticial. A terapia padrão ouro usada no tratamento da DMD é o corticosteroide, tal como a prednisona e o deflazacorte (DFZ). No entanto, eles apresentam valor terapêutico limitado, e sua combinação com drogas já aprovada para o tratamento de outras doenças humanas, como a doxiciclina (DOX) poderia ser uma alternativa no tratamento clínico em pacientes DMD. No presente estudo, investigamos os benefícios da terapia do DFZ associado a DOX em relação ao tratamento padrão ouro DFZ, na atenuação da evolução da distrofinopatia em músculo esquelético e cardíaco de camundongos mdx. As terapias com cada droga isoladamente (DOX 6 mg/mL), (DFZ 1,2 mg/Kg) e com a combinação DOX (6 mg/mL) / DFZ (1,2 mg/Kg) foram administradas na água de beber para mãe e seus recém nascidos, com início no dia do nascimento no grupo tratado de curta duração por 36 dias. No tratamento de longa duração (9 meses), as mesmas terapias e as mesmas doses foram administradas na água de beber, com início aos 8 meses até os 17 meses de idade. Os parâmetros histopatológicos, funcionais e bioquímicos foram avaliados no músculo esquelético (bíceps braquial e diafragma) e coração. A DOX/DFZ apresentou-se vantajosa em relação a monoterapia com DFZ tanto na proteção inicial contra a mionecrose, quanto em retardar a progressão da distrofinopatia nos músculos esqueléticos. Mostrou-se também vantajosa em relação ao DFZ na proteção cardíaca. A combinação da DOX com o DFZ, já utilizada no tratamento de algumas doenças emerge como um tratamento potencialmente útil para DMD / Abstract: In Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) and in mdx mice, absence of dystrophin in skeletal and cardiac muscle disrupts the sarcolemma and leads to increased calcium influx and consequent myonecrosis. The inflammatory reaction elicited to remove muscle fiber debris results in production of pro-inflammatory cytokines which, in turn, increases oxidative stress, and ultimately causes interstitial fibrosis. The gold standard therapy used in the treatment of DMD consists in the use of corticosteroids such as prednisone and deflazacort (DFZ). However, these drugs have limited therapeutic value and their combination with drugs already approved for the treatment of other human diseases such as doxycycline (DOX) could be beneficial in the clinical management of DMD patients. In this study, we investigated the benefits of the association between DFZ and DOX over therapy with DFZ (gold standard), in mitigating the evolution of dystrophinopathy in skeletal and heart muscle in mdx mice. The treatments with the single drug (DOX 6 mg/mL), (DFZ 1,2 mg/Kg) or DOX (6 mg/mL) / DFZ (1,2 mg/Kg) combination were administered in drinking water to mothers and newborns, starting on the day of birth in the short-term treatment group for a period of 36 days. In the long-term treatment group, which was composed of mice 17 months of age, the same treatments were administered in drinking water to mdx mice for 9 months, starting on their 8 month of birth. Histopathological, functional and biochemical parameters were evaluated in skeletal (biceps brachii and diaphragm) and cardiac muscle. DOX/DFZ combination was found to be advantageous over monotherapy with DFZ either by promoting an initial protection against myonecrosis or by slowing the progression of dystrophinopathy of skeletal muscles. It was also advantageous for cardiac protection. The combination of DOX with DFZ, which has already been used in the treatment of some diseases, has emerged as a potential useful therapy for DMD / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / The biodegradation of the hybrid layer of dental restorations is due in part to the degradation of the demineralized collagen by matrix metalloproteinases (MMPs). During the bonding procedure, phosphoric acid/acidic primers activate MMPs that degrade denuded type I collagen. As a result, the hybrid layer loses its integrity overtime, leading to the failure of the resin composite restoration. This study aimed to evaluate doxycycline (DOX) for its effects on preventing the degradation of the hybrid layer through the modification of the dental adhesive with aluminosilicate clay nanotubes (HNT) loaded with doxycycline. Doxycycline was encapsulated into HNT at three distinct concentrations (10%, 20% and 30% DOX, w/v). The increases in the concentration of doxycycline significantly increased the amount of doxycycline that was encapsulated into HNT and the drug loading into the HNT. Conversely, the encapsulation efficiency was significantly decreased with the increases in concentration of doxycycline. The modified adhesives were fabricated by incorporation of DOX-encapsulated HNT into a commercially available dental adhesive (Adper Scotchbond Multi-Purpose, SBMP). The degree of conversion (DC), Knoop microhardness, doxycycline release profiles, the biological activity (antibacterial and anti-MMP activity), and cytocompatibility of the modified adhesives were investigated. There were no statistically significant differences (p &gt; 0.05) in DC and Knoop microhardness compared to the control (SBMP). None of the adhesive eluates was cytotoxic to the human dental pulp stem cells. Although higher concentrations of doxycycline led to a higher release of doxycycline from the modified adhesives, the differences were not significant (p = 0.259) among the groups (10%, 20% and 30% DOX). A significant growth inhibition of S. mutans and L. casei by direct contact illustrated successful encapsulation of doxycycline into the modified adhesives. Doxycycline released from the modified adhesives did not inhibit the growth of both cariogenic bacteria but inhibited MMP-1 activity. The results suggested that subantimicrobial levels of doxycycline were gradually released. The immediate microtensile bond strengths were not significantly different from those of the control (SBMP), suggesting no negative effect of doxycycline on dentin bonding (only 10% DOX were investigated). The long-term resin-dentin bond durability should be evaluated.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第21665号 / 医博第4471号 / 新制||医||1035(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 浅野 雅秀, 教授 齊藤 博英, 教授 遊佐 宏介 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Neural crest cells (NCC) are a multipotent population of cells that form at the dorsal region of neural tube, migrate and contribute to a vast array of embryonic structures, including the majority of the head, the septum of the cardiac outflow tract (OFT), smooth muscle subpopulations, sympathetic nervous system and many other organs. Anomalous NCC morphogenesis is responsible for a wide variety of congenital defects. Importantly, several individual members of the TGFβ superfamily have been shown to play essential roles in various aspects of normal NCC development. However, it remains unclear what role Smad7, a negative regulator of TGFβ superfamily signaling, plays during development and moreover what the spatiotemporal effects are of combined suppression of TGFβ superfamily signaling during NCC formation and colonization of the developing embryo. Using a cre/loxP three-component triple transgenic system, expression of Smad7 was induced via doxycycline in the majority of pre- and post-migratory NCC lineages (via Wnt1-Cre mice). Further, expression of Smad7 was induced via doxycycline in a subset of post-migratory NCC lineages (via Periostin-Cre mice, after the NCC had reached their target organs and undergone differentiation). Induction of Smad7 within NCC significantly suppressed TGFβ superfamily signaling, as revealed via diminished phosphorylation levels of both Smad1/5/8 and Smad2/3 in vivo. This resulted in subsequent loss of NCC-derived craniofacial, pharyngeal and cardiac OFT cushion tissues. ROSA26r NCC lineage mapping demonstrated that cardiac NCC emigration and initial migration were unaffected, but subsequent colonization of the OFT was significantly reduced. At the cellular level, increased cell death was observed, but cell proliferation and NCC-derived smooth muscle differentiation were unaltered. Molecular analysis demonstrated that Smad7 induction resulted in selective increased phospho-p38 levels, which in turn resulted in the observed initiation of apoptosis in trigenic mutant embryos. Taken together, these data demonstrate that tightly regulated TGFβ superfamily signaling is essential for normal craniofacial and cardiac NCC colonization and cell survival in vivo.

A endometriose é uma doença de origem multifatorial, caracterizada por presença de tecido endometrial fora da cavidade uterina, responsável por sintomas álgicos com grande impacto na qualidade de vida da paciente, além de ser um dos principais fatores de infertilidade. Muitos estudos já foram realizados no intuito de explicar a etiopatogenia da endometriose, assim como muito tem sido estudado para encontrar novas estratégias de tratamento. Várias linhas de medicamentos têm sido estudadas com este intuito, agindo em diferentes pontos da etiopatogênese da doença, uma delas na inibição de metaloproteinases da matriz extracelular, que tem papel no remodelamento do mesotélio do peritônio e angiogênese. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de uma droga (doxiciclina) de baixo custo, com ação conhecida na inibição das metaloproteinases, em endometriose peritoneal induzida em ratas. Para isso, foram usadas 30 ratas adultas Wistar com lesão induzida de endometriose, divididas em três grupos, um grupo controle (C, n=10) sem tratamento, um grupo onde foi administrado doxiciclina em baixa dose (BD, n=10) e um grupo onde foi realizado doxiciclina em alta dose (AD, n=10). Foi realizada avaliação da área das lesões de cada rata e estudo imunohistoquímico para positividade de anticorpo primário de metaloproteinase de matriz 9 (MMP9) e de inibidor de metaloproteinase de matriz 2 (TIMP2). A doxiciclina atuou reduzindo a área das lesões nos grupos BD e AD (p=0,0052) em relação ao grupo C e reduzindo a expressão do TIMP2 no grupo AD (p=0,0009) em relação aos grupos BD e C. Não houve resultado significativo na expressão da MMP9. / Endometriosis is a multifactorial origin disease, characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity, responsible for painful symptoms with important impact on the life quality of the patient, besides being one of the main factors of infertility. Many studies have already been carried out to explain the etiopathogenesis of endometriosis, and much has been studied to find new treatment strategies. Several lines of drugs have been studied for this purpose, acting at different points in the etiopathogenesis of the disease, one of them in the inhibition of extracellular matrix metalloproteinases, which plays a role in the remodeling of the peritoneum mesothelium and angiogenesis. The purpose of this study was to evaluate the influence of a low-cost drug (doxycycline), with known action on the inhibition of metalloproteinases, in induced peritoneal endometriosis in rats. Thirty adult Wistar rats with endometriosis-induced lesions were divided into three groups: one untreated control group (C, n = 10), one group receiving low dose doxycycline (BD, n = 10) and a group where high dose doxycycline (AD, n = 10) was performed. An evaluation of the lesion area of each rat and immunohistochemical study for primary antibody to matrix metalloproteinase 9 (MMP9) and matrix metalloproteinase inhibitor 2 (TIMP2) was performed. Doxycycline worked by reducing the area of lesions in the BD and AD groups (p = 0.0052) in relation to the C group and reducing the expression of TIMP2 in the AD group (p = 0.0009) in relation to the BD and C groups. There was no significant effect on MMP9 expression in the present study.

Objetivos: Este Estudo randomizado duplo cego placebo controlado comparou, clínica, sitemica e imunologicamente um protocolo de Terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFA) de aplicações múltiplas com um protocolo já consagrada com o uso da Doxiciclina sistêmica no tratamento da doença periodontal em pacientes diabéticos tipo 2 descontrolados. Materiais e Métodos: Vinte seis pacientes com HbA1c> 7% foram selecionados e randomicamente alocados em dois grupos que receberam raspagem e alisamento radicular. Um dos grupos recebeu a aplicação adjunta de aplicações múltiplas de TFA (n=12) e o outro utilizando a doxiciclina sistêmica na dose de 100mg (n=14). Os parâmetros monitorados foram índice de placa, Sangramento à sondagem, Profundidade de sondagem, Supuração, Recessão gingival e nível clinico de inserção relativo, o parâmetro sistêmico avaliado foi a HbA1c, medida antes e 3 meses pós tratamento. Os níveis de IL1-&beta;, TNF-&alpha; e TGF-&beta; foram medidos antes, 1 e 3 meses pós tratamento através da coleta de fluido crevicular gengival. Resultados: Não houveram diferenças significantes em nenhum dos parâmetros clínicos avaliados e nos níveis de HbA1c. O uso do antibiótico sistêmico demonstrou ser superior na redução de IL1-&beta; até o período de 1 mês pós tratamento, porém, em 3 meses a TFA se mostrou superior. Não houve diferença na redução dos níveis de TNF-&alpha; e TGF-&beta; entre os grupos. Conclusões: Ambos tratamentos foram eficientes nas melhoras dos parâmetros clínicos e sistêmicos. A TFA parece possuir maior estabilidade na redução dos níveis de citocinas inflamatórias. / Aim: This randomized, double-blind, placebo-controlled, clinical study compared a multiple application Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) treatment protocol with systemic doxycycline as adjuvant to scaling and root planning, to treat chronic periodontitis on type 2 diabetic patients on clinical, systemic and immune-inflammatory outcomes. Materials and Methods: Twenty six patients with Hba1c >7% were randomically allocated in two groups, SRP+Doxy (n=14) using systemic doxycycline 100 mg and SRP+aPDT (n=12) with multiple applications (0, 3, 7 and 14 days). Monitored parameters of plaque score (PS), bleeding on probe (BOP), probing depth (PD), suppuration (S), gingival recession, and relative clinical attachment level (RCAL), glycated haemoglobin (HbA1c) were measured at baseline and 3 months after therapy, the cytokine profile was assessed at 0, 1 and 3 month to measure IL1-&beta;, TNF-&alpha; and TGF-&beta; on Gingival Crevicular Fluid. Results: There were no statistically significant differences on intergroup on clinical parameters and HbA1c levels. Systemic doxycycline shoed difference in reduction of IL1-&beta; at 1 month, but aPDT better results at 3 months IL1-&beta; levels. There were no differences between TNF-&alpha; and TGF-&beta; trough experimental times Conclusions: Both treatments were effective to improve clinical and systemic outcomes and aPDT seems to have a great stability on of IL1-&beta; reductions. (Clinicaltrials.gov Identifier: NCT01175720).

Objetivos: Este Estudo randomizado duplo cego placebo controlado comparou, clínica, sitemica e imunologicamente um protocolo de Terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFA) de aplicações múltiplas com um protocolo já consagrada com o uso da Doxiciclina sistêmica no tratamento da doença periodontal em pacientes diabéticos tipo 2 descontrolados. Materiais e Métodos: Vinte seis pacientes com HbA1c> 7% foram selecionados e randomicamente alocados em dois grupos que receberam raspagem e alisamento radicular. Um dos grupos recebeu a aplicação adjunta de aplicações múltiplas de TFA (n=12) e o outro utilizando a doxiciclina sistêmica na dose de 100mg (n=14). Os parâmetros monitorados foram índice de placa, Sangramento à sondagem, Profundidade de sondagem, Supuração, Recessão gingival e nível clinico de inserção relativo, o parâmetro sistêmico avaliado foi a HbA1c, medida antes e 3 meses pós tratamento. Os níveis de IL1-&beta;, TNF-&alpha; e TGF-&beta; foram medidos antes, 1 e 3 meses pós tratamento através da coleta de fluido crevicular gengival. Resultados: Não houveram diferenças significantes em nenhum dos parâmetros clínicos avaliados e nos níveis de HbA1c. O uso do antibiótico sistêmico demonstrou ser superior na redução de IL1-&beta; até o período de 1 mês pós tratamento, porém, em 3 meses a TFA se mostrou superior. Não houve diferença na redução dos níveis de TNF-&alpha; e TGF-&beta; entre os grupos. Conclusões: Ambos tratamentos foram eficientes nas melhoras dos parâmetros clínicos e sistêmicos. A TFA parece possuir maior estabilidade na redução dos níveis de citocinas inflamatórias. / Aim: This randomized, double-blind, placebo-controlled, clinical study compared a multiple application Antimicrobial Photodynamic Therapy (aPDT) treatment protocol with systemic doxycycline as adjuvant to scaling and root planning, to treat chronic periodontitis on type 2 diabetic patients on clinical, systemic and immune-inflammatory outcomes. Materials and Methods: Twenty six patients with Hba1c >7% were randomically allocated in two groups, SRP+Doxy (n=14) using systemic doxycycline 100 mg and SRP+aPDT (n=12) with multiple applications (0, 3, 7 and 14 days). Monitored parameters of plaque score (PS), bleeding on probe (BOP), probing depth (PD), suppuration (S), gingival recession, and relative clinical attachment level (RCAL), glycated haemoglobin (HbA1c) were measured at baseline and 3 months after therapy, the cytokine profile was assessed at 0, 1 and 3 month to measure IL1-&beta;, TNF-&alpha; and TGF-&beta; on Gingival Crevicular Fluid. Results: There were no statistically significant differences on intergroup on clinical parameters and HbA1c levels. Systemic doxycycline shoed difference in reduction of IL1-&beta; at 1 month, but aPDT better results at 3 months IL1-&beta; levels. There were no differences between TNF-&alpha; and TGF-&beta; trough experimental times Conclusions: Both treatments were effective to improve clinical and systemic outcomes and aPDT seems to have a great stability on of IL1-&beta; reductions. (Clinicaltrials.gov Identifier: NCT01175720).

A malária, causada por protozoários intracelulares do gênero Plasmodium, é uma das doenças tropicais mais devastadoras existentes. Mais de 3 bilhões de pessoas vivem em regiões endêmicas para a malária. Cinco espécies de Plasmodium (falciparum, vivax, ovale, malariae e knowlesi) causam doenças em humanos e a infecção com P. falciparum, o mais letal desses parasitas, resulta em mais de 1 milhão de mortes anualmente. O desenvolvimento de resistência aos fármacos antimaláricos tradicionais, leva ao uso de combinações de fármacos como a quinina (QN) e a doxiciclina (DOX). Nesse contexto, os objetivos deste trabalho foram desenvolver e caracterizar formulação de nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) contendo a associação de QN/DOX, avaliar sua eficácia em um modelo in vivo de malária berghei, determinar a sua farmacocinética e o coeficiente de partição nos eritrócitos dos fármacos livres e nanoencapsulados. A formulação de NLS contendo QN/DOX (2,0/0,2 mg/mL) foi preparada pela técnica de homogeneização a alta pressão, utilizando polissorbato 80 e Lipoid® como emulsionantes e palmitato de cetila como matriz lipídica. No estudo preliminar de estabilidade, a formulação de NLS contendo QN/DOX apresentou tamanho de partícula adequado (152,8 ± 5,26 nm), índice de polidispersão (0,173 ± 0,006), potencial zeta (-38,6 ± 1,82 mV), alto conteúdo dos fármacos (95,9% ± 0,70/ 94,1% ± 2,41) e adequada eficiência de encapsulação (94,2% ± 1,14/83,0% ± 2,52), após 21 dias de armazenamento em temperatura ambiente. Para a análise do teor um método rápido e específico de cromatografia líquida-acoplada a espectrometria de massa (LC-MS/MS) foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de QN e DOX nas formulações. O método por LC-MS/MS utilizou coluna Waters Sun Fire C18 (50 mm x 3,0 mm de diâmetro) e a fase móvel foi composta de acetonitrila:ácido fórmico 0,1% (75:25, v/v), no fluxo de 0,45 mL/min (split 1:3). O volume de injeção foi de 10 μL. Ratos Wistar infectados por P. berghei foram utilizados para avaliar a eficácia da formulação de NLS contendo QN/DOX utilizando diferentes regimes de dose. As doses efetivas da formulação, i.v. (75/7,5 mg/kg/dia) e oral (105/10,5 mg/kg/dia), representam uma redução de quase 30% em comparação com os fármacos livres utilizados em associação. A farmacocinética foi avaliada após a administração dos fármacos livres ou nanoencapsulados pela vias i.v. (10/1 mg/ kg) e oral (25/2,5 mg/kg) em ratos Wistar infectados. Para a quantificação das amostras de plasma dos ratos, método por LC-MS/MS foi desenvolvido e validado. A QN, a DOX e a cimetidina (padrão interno, PI) foram extraídos do plasma através de precipitação de proteínas e a fase móvel consistiu de metanol/ácido fórmico 0,1% (70:30, v/v), no fluxo de 0,5 mL / min (split 1:3). A detecção foi realizada através da ionização por electrospray positivo, no modo de monitoramento de reações múltiplas, onde foram monitoradas as transições 325,0>307,0, 445,0>428,1 e 252,8>159,0, para QN, DOX e PI, respectivamente. A análise foi realizada em 2,0 min e o método foi linear na faixa de concentração plasmática entre 5-5000 ng/mL. Nenhuma alteração significativa dos parâmetros farmacocinéticos foi observada para ambos os fármacos e vias de administração, após a nanoencapsulação. O coeficiente de partição da QN nos eritrócitos infectados por P. berghei aumentou (5,53 ± 0,28) quando a formulação de NLS contendo QN/DOX foi usada em comparação com os fármacos livres em associação (3,81± 0,23). Nenhuma alteração significativa na penetração intraeritrocitária da DOX foi observada com a nanoencapsulação. Os resultados demonstram que a nanoencapsulação da QN/DOX em NLS diminui a dose efetiva para o tratamento da malária, sendo uma alternativa interessante a ser investigada para o tratamento da malária falciparum resistente. / Malaria is one of the most devastating tropical diseases caused by intracellular protozoan parasites of the genus Plasmodium. More than 3 billion people live in malarial endemic regions. Five species of Plasmodium (falciparum, vivax, ovale, malariae and knowlesi) cause disease in humans and infection with P. falciparum, the most deadly of these parasites, results in more than 1 million deaths annually. The development of resistance to traditional antimalarial drugs leads to the use of drug combinations such as quinine (QN)/doxycycline (DOX). In this context, the aims of this work were to develop and characterize solid lipid nanoparticles (SLN) loaded with QN/ DOX, to evaluate their efficacy in an in vivo model of berghei malaria, and to determine their pharmacokinetics and erythrocyte partition coefficient compared to the non-encapsulated (free) drug association. The SLN were prepared by high pressure homogenization technique using polysorbate 80 and Lipoid® as emulsifiers and cetyl palmitate as lipid matrix. In the preliminary stability study, QN/DOX-loaded SLN (2.0/0.2 mg/mL) presented adequate particle size (152.8 ± 5.26 nm), polydispersion index (0.173 ± 0.006), zeta potential (-38.6 ± 1.82 mV), high drug content (95.9% ± 0.70/94.1% ± 2.41) and appropriate encapsulation efficiency (94.2% ± 1.14/83.0% ± 2.52) after 21 days of storage at room temperature. For the assay analysis, a fast and specific liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed and validated for the simultaneous determination of QN and DOX. The LC-MS/MS method was carried out on a Sun Fire Waters C18 column (50 mm x 3.0 mm I.D.) and the mobile phase consisted of acetonitrile:0.1% formic acid (75:25, v/v), run at a flow rate of 0.45 mL/min (split 1:3). The injection volume was 10 μL. Plasmodium berghei infected Wistar rats were used to evaluate the efficacy of QN/DOX-loaded SLN using different dosing regimens. The effective QN/DOX-loaded SLN i.v. (75/7.5 mg/kg/day) and oral (105/10.5 mg/kg/day) doses represent an almost 30% reduction compared to the free drugs in association. Plasma pharmacokinetics was evaluated after administration of free or nanoencapsulated QN/DOX by i.v. (10/1 mg/kg) and oral (25/2.5 mg/kg) routes to infected Wistar rats. For the quantification of the rat plasma samples, a fast, sensitive and specific LC-MS-MS method was developed and validated for the determination of QN and DOX. QN, DOX and cimetidine (internal standard, IS) were extracted from the plasma by protein precipitation and the mobile phase consisted of methanol/formic acid 0.1% (70:30, v/v), run at a flow rate of 0.5 mL/min (split 1:3). Detection was carried out by positive Electrospray Ionization in multiple reaction monitoring mode, monitoring the transitions 325.0>307.0, 445.0>428.1 and 252.8>159.0, for QN, DOX and IS, respectively. The analysis was carried out in 2.0 min and the method was linear in the plasma concentration range of 5-5000 ng/mL. No significant alteration of pharmacokinetic parameters was observed for both drugs and routes of dosing after nanoencapsulation. QN partition coefficient into P. berghei infected erythrocyte was increased (5.53 ± 0.28) when the QN/DOX-loaded SLN was used in comparison with the free drugs in association (3.81 ± 0.23). No significant alteration on DOX erythrocyte partition coefficient was observed. In summary, the results showed that QN/DOX nanoencapsulation into SLN allows the reduction of the effective antimalarial dose being an interesting alternative to be investigated for the treatment of falciparum resistant malaria.