O uso de modelos murinos de enfisema pulmonar é importante para testar diferentes estratégias terapêuticas. Dependendo do grau de dano pulmonar, algumas terapias resultam em diferentes efeitos. O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de enfisema induzido por diferentes doses de elastase a fim de produzir diferentes graus de severidade. Foram testadas três diferentes doses de elastase (0,1U, 0,15U e 0,2U), administradas uma vez por semana durante quatro semanas, por via intratraqueal. Foram medidas mecânica pulmonar (pletismografia), diâmetro alveolar médio e fração de área ocupada por fibras colágenas e elásticas em camundongos fêmeas C57BL/6. Este estudo foi realizado no Centro de Pesquisa Experimental do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Observamos aumento na resistência pulmonar com maior dose de elastase (0,2U) [2,02(1,67; 2,34) cmH2O.s/ml; p=0,008]. . No mesmo grupo, volume corrente e ventilação minuto reduziram. O pico de fluxo expiratório aumentou significativamente nos grupos tratados com 0,15U e 0,2U. Nenhuma alteração significativa foi observada na complacência pulmonar dinâmica. O diâmetro alveolar médio foi maior nos grupos com 0,15U e 0,2U de elastase demonstrando a destruição dos espaços alveolares [E15: 30,31(26,65;43,13)μm and E20: 49,49(31,67;57,71)μm; p<0,0001). . A fração de área ocupada por fibras colágenas e fibras elásticas foi menor nos animais que receberam 0,2U de elastase. Concluímos que quatro instilações intratraqueais de 0,2U de elastase, uma vez por semana induzem alterações na função pulmonar e na histologia, sugerindo um modelo experimental de enfisema pulmonar severo, enquanto que doses menores resultam somente em modificações histológicas. / The use of murine models of emphysema is important to test different therapeutic strategies. Depending on the degree of lung damage some therapies result in different effects. The aim of this study was to develop a murine model of emphysema induced by different doses of elastase in order to produce different degrees severity. We tested three doses of elastase (0.1 U, 0.15 U and 0.2 U) administered once a week for four weeks intratracheally. Lung mechanics (plethysmography), mean linear intercept and the fraction area occupied by collagen and elastic fibers were measured in female C57BL/6 mice. This study was conducted at the Experimental Research Center, Hospital de Clínicas de Porto Alegre. We observed an increase in lung resistance with higher dose of elastase (0.2 U) [2.02(1.67; 2.34) cmH2O.s/ml; p=0.008]. In the same group, tidal volume and minute ventilation reduced. Peak expiratory flow increased significantly in groups treated with 0.15 U and 0.2 U. No significant changes in dynamic lung compliance were observed. Mean linear intercept was higher with 0.15 U and 0.2 U elastase, demonstrating the destruction of the alveolar spaces [E15: 30.31(26.65;43.13)μm and E20: 49.49(31.67;57.71)μm; p<0.0001). The fraction area occupied by collagen and elastic fibers was lower in the animals that received 0.2 U elastase. We concluded that four intratracheal instillations with 0.2 U elastase, once a week induced changes in lung function and in histology, suggesting an experimental model of severe pulmonary emphysema whereas lower doses resulted in only histological modifications.

O uso de modelos murinos de enfisema pulmonar é importante para testar diferentes estratégias terapêuticas. Dependendo do grau de dano pulmonar, algumas terapias resultam em diferentes efeitos. O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de enfisema induzido por diferentes doses de elastase a fim de produzir diferentes graus de severidade. Foram testadas três diferentes doses de elastase (0,1U, 0,15U e 0,2U), administradas uma vez por semana durante quatro semanas, por via intratraqueal. Foram medidas mecânica pulmonar (pletismografia), diâmetro alveolar médio e fração de área ocupada por fibras colágenas e elásticas em camundongos fêmeas C57BL/6. Este estudo foi realizado no Centro de Pesquisa Experimental do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Observamos aumento na resistência pulmonar com maior dose de elastase (0,2U) [2,02(1,67; 2,34) cmH2O.s/ml; p=0,008]. . No mesmo grupo, volume corrente e ventilação minuto reduziram. O pico de fluxo expiratório aumentou significativamente nos grupos tratados com 0,15U e 0,2U. Nenhuma alteração significativa foi observada na complacência pulmonar dinâmica. O diâmetro alveolar médio foi maior nos grupos com 0,15U e 0,2U de elastase demonstrando a destruição dos espaços alveolares [E15: 30,31(26,65;43,13)μm and E20: 49,49(31,67;57,71)μm; p<0,0001). . A fração de área ocupada por fibras colágenas e fibras elásticas foi menor nos animais que receberam 0,2U de elastase. Concluímos que quatro instilações intratraqueais de 0,2U de elastase, uma vez por semana induzem alterações na função pulmonar e na histologia, sugerindo um modelo experimental de enfisema pulmonar severo, enquanto que doses menores resultam somente em modificações histológicas. / The use of murine models of emphysema is important to test different therapeutic strategies. Depending on the degree of lung damage some therapies result in different effects. The aim of this study was to develop a murine model of emphysema induced by different doses of elastase in order to produce different degrees severity. We tested three doses of elastase (0.1 U, 0.15 U and 0.2 U) administered once a week for four weeks intratracheally. Lung mechanics (plethysmography), mean linear intercept and the fraction area occupied by collagen and elastic fibers were measured in female C57BL/6 mice. This study was conducted at the Experimental Research Center, Hospital de Clínicas de Porto Alegre. We observed an increase in lung resistance with higher dose of elastase (0.2 U) [2.02(1.67; 2.34) cmH2O.s/ml; p=0.008]. In the same group, tidal volume and minute ventilation reduced. Peak expiratory flow increased significantly in groups treated with 0.15 U and 0.2 U. No significant changes in dynamic lung compliance were observed. Mean linear intercept was higher with 0.15 U and 0.2 U elastase, demonstrating the destruction of the alveolar spaces [E15: 30.31(26.65;43.13)μm and E20: 49.49(31.67;57.71)μm; p<0.0001). The fraction area occupied by collagen and elastic fibers was lower in the animals that received 0.2 U elastase. We concluded that four intratracheal instillations with 0.2 U elastase, once a week induced changes in lung function and in histology, suggesting an experimental model of severe pulmonary emphysema whereas lower doses resulted in only histological modifications.

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Dans le but d'obtenir des composés originaux ayant une activité inhibitrice envers la NE, des triazoles et des 2-aminofuranes diversement substitués ont été synthétisés. Une réaction de "click chemistry" catalysée par le cuivre entre un azide et un alcyne a été appliquée pour la synthèse des triazoles. La synthèse des composés de type 2-aminofuranes est basée sur l'attaque nucléophile d'un isonitrile sur un γ-oxo butynoate d'alkyle en présence d'un aldéhyde aromatique.Les tests biologiques ont été réalisés tout au long de la thèse. Les composés présentant les meilleures IC50 envers la NE ont été sélectionnées pour une évaluation en terme de sélectivité vs les autres sérines protéases du PN (la cathepsine G et la protéinase 3). Enfin, les meilleurs inhibiteurs ont subi une évaluation de leur activité anti-oxydante selon deux méthodes: méthode au DPPH (1,1-diphényl-2-picryl-hydrazyl) et méthode au thiocyanate ferrique. / To prepare new compounds with an inhibitory activity towards NE, diversely substituted triazoles and 2-aminofuranes were synthesized. Triazoles were obtained using the copper catalyzed "click chemistry" between an azide and an alkyne. The synthesis of 2-aminofuranes is based on the nucleophilic attack of an isonitrile on an alkyl γ-oxo-butynoate in the presence of an aromatic aldehyde.Biological assays were carried out throughout the thesis. Compounds owning the best IC50 towards NE were selected for evaluation in terms of selectivity vs the two other serine-proteases of the PN (cathepsin G and proteinase 3). Finally, evaluation of antioxidant activity of the best compounds was achieved using by two approachs: DPPH (1,1-diphenyl -2-picrylhydrazyl) method and ferric thiocyanate method.

A cada dia os relatos sobre acidentes por escorpiões vêm aumentando no Brasil, com frequentes casos fatais. Dentre os escorpiões que compõem a fauna brasileira temos o Tityus serrulatus, considerado o mais perigoso por conta de sua facilidade adaptativa em centros urbanos e das manifestações clínicas severas em vítimas acidentadas, como febre, agitação psicomotora, hipertensão arterial seguida de hipotensão e edema pulmonar agudo. Dentre os componentes da peçonha se destacam os peptídeos estruturados por ligações dissulfeto, que são abundantemente relatados na literatura e atuam em canais de Na+ e K+. Ao contrário, os peptídeos lineares são pouco caracterizados. A partir desta premissa, nosso grupo identificou peptídeos lineares do veneno através de um screening empregando a enzima elastase. Esta enzima foi escolhida por estar envolvida em processos inflamatórios exacerbados, como em casos de edema pulmonar agudo, que é um dos principais sintomas do escorpionismo. Encontramos mais de 700 sequências peptídicas onde, através de um criterioso processo com o uso de bancos de dados de sequências depositadas e a literatura, selecionamos nove moléculas inéditas (TsP1 a TsP9) e duas já estudadas (hipotensinas I e II) para a síntese. Dentre estas moléculas, identificamos possíveis criptídeos advindos da Ts19 e moléculas com processamento diferenciado envolvendo a combinação de sequências peptídicas diferentes (peptídeos quiméricos), primeiramente relatadas e investigadas na peçonha do T. serrulatus neste trabalho. Além da elastase, utilizamos as enzimas de importância médica tripsina, ECA e NEP e os peptídeos sintéticos em nossos estudos, visando aumentar o conhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos no escorpionismo e, também, com base no potencial biotecnológico de moléculas capazes de exercerem modulações das atividades destas peptidases. Destacaram-se peptídeos que podem ter ação em processos inflamatórios, uma vez que foram capazes de aumentar a atividade da elastase e tripsina, com destaque para o TsP5, que também apresentou citotoxidade intermediária. Alguns peptídeos aumentaram a atividade da ECA, sendo o peptídeo TsP2 capaz de potencializar a ação da bradicinina in vivo. A hipotensina I foi caracterizada como um inibidor não competitivo da NEP (Ki = 4,35 &micro;M), podendo indicar a possível inibição desta metalopeptidase nos casos de hipotensão, onde a hipotensina I pode agir de forma sinérgica com o [des-Arg1]-Proctolin (Ki = 0,94 &micro;M para a NEP), outro peptídeo linear do veneno caracterizado por nosso grupo. Os peptídeos não foram reconhecidos pelos soros antiescorpiônico e antiaracnídico produzidos pelo Instituto Butantan podendo indicar limitações na imunoterapia utilizada no tratamento das vítimas. Por fim, além dos novos peptídeos identificados, finalizamos a caracterização do FTR, um tripeptídeo que apresentou em nossos trabalhos anteriores propriedades antinociceptivas. No presente trabalho, demonstramos que este peptídeo é capaz de agir na via opioide, atuando em receptores delta de forma direta. Assim, com a identificação e caracterização destas moléculas conseguimos novos dados referentes a possíveis origens e processamento, ações tóxicas no envenenamento e potencial biotecnológico de alguns peptídeos lineares do T. serrulatus. / Reports of scorpions accidents with humans are increasing in Brazil, with some of the cases resulting in death. Among the scorpions from the Brazilian fauna, Tityus serrulatus is considered the most dangerous species, due to its easy adaptation in urban centers, and because it brings severe clinical manifestations in the victims, such as fever, psychomotor agitation, arterial hypertension followed by hypotension and acute pulmonary edema. Among the venom components that stand out are the peptides structured by disulfide bonds, which are richly reported in the literature and act on Na&#43; and K&#43; channels. In contrast, linear peptides are poorly characterized. From this evidence, our group identified linear peptides of the venom using the serine protease elastase screening. This enzyme was chosen because it is involved in inflammatory processes, such as cases of acute pulmonary edema, one of the main symptoms of scorpionism caused by T. serrulatus. More than 700 peptide sequences where found and, through a careful process using protein databases and the literature, from these all, we selected nine novel (TsP1 to TsP9) and two already characterized (hypotensins I and II) sequences for synthesis. Among these molecules, we identified possible cryptides derived from Ts19 and others molecules, with different processing involving combination of different peptide sequences (chimeric peptides), which are here firstly reported and investigated in the venom of T. serrulatus. In addition to elastase, we tested other enzymes of medical importance - trypsin, ACE and NEP - with the synthetic peptides, aiming to increase the knowledge of molecular mechanisms involved in scorpionism and also based on the biotechnological potential of peptidase-modulator molecules. Peptides that may have an action in inflammatory processes were highlighted, since they were able to increase the activity of elastase and trypsin, especially the TsP5, which also showed intermediate cytotoxicity. Some peptides increased the ACE activity, with the peptide TsP2 capable of potentializing the action of bradykinin in vivo. Hypotensin I was characterized as a noncompetitive inhibitor of NEP (Ki &#61; 4.35 &micro;M) and may indicate the possible inhibition of this metallopeptidase in cases of hypotension, where hypotensin I may act synergistically with [des-Arg1] - Proctolin (K&micro; &#61; 0.94 &micro;M for NEP), a linear peptide present in the venom already characterized by our group. The peptides were not recognized by the antiscorpion and antiarachinid sera produced by the Butantan Institute and may indicate limitations in the immunotherapy. Finally, in addition to the new identified peptides, we concluded the in vivo characterization of FTR, a tripeptide that presented antinociceptive properties in our previous studies. In the present work, we demonstrate that this peptide is able to act in the opioid pathway, acting directly on delta receptors. Thus, with the identification and characterization of these molecules we obtained new data regarding possible origins and processing, toxic actions in the envenomation and biotechnological potential of some linear peptides of T. serrulatus venom.

INTRODUÇÃO: O modelo eslastase-induzido de aneurismas tem se destacado, nos últimos anos, porque simula as características geométricas dos aneurismas intracranianos humanos. A elastase destrói as fibras elásticas e dilata as artérias. A papaína é uma enzima que ainda não foi usada com esta finalidade. Os objetivos deste estudo foram determinar se a papaína produz aneurismas saculares em coelhos, e comparar suas características macroscópicas e histológicas com as dos aneurismas elastase-induzidos. MÉTODO: Dezoito coelhos brancos Nova Zelândia (1,9-3,2 kg) foram divididos em 3 grupos: I- elastase (n=7), II- papaína (n=8) e III- cirurgia controle (n=3). Os animais foram submetidos à exposição cirúrgica do pescoço, sendo que a artéria carótida comum direita foi usada como teste e a artéria carótida comum esquerda como controle. No 21° dia após a cirurgia, os animais foram sacrificados para retirada das artérias, tomada de suas medidas e análise histológica. Considerou-se formação de aneurisma quando a artéria teste dilatou em relação ao seu controle. RESULTADOS: Não houve aneurismas no grupo cirúrgico controle. Houve formação de aneurismas nos grupos elastase (71,4%) e papaína (100%). A diferença do diâmetro das artérias testes e seus respectivos controles não foi significativa (p= 0,15) entre os grupos elastase (média= 1,2 ± 0,4mm) e papaína (média= 2,1 ± 0,4mm), embora houvesse tendência deste último à maior dilatação . A histologia demonstrou que a papaína produziu maior tendência à lesão endotelial, à trombose (p = 0,01) e à inflamação parietal do que a elastase. A análise da fibrose intimal foi prejudicada em 50% dos casos do grupo papaína devido à trombose acentuada. Não houve diferença significativa entre os grupos quanto ao espessamento parietal (p=0,81) e ao grau de destruição das fibras elásticas (p= 0,009). CONCLUSÕES: A papaína produz aneurismas com tamanhos semelhantes aos da elastase, contudo a papaína provoca maior lesão endotelial, maior trombose e maior inflamação do que a elastase / INTRODUCTION: The elastase-induced model of experimental saccular aneurysms has been relevant in the last years because it mimics the size and geometric features of human intracranial aneurysms. Elastase destroys the arterys elastic fibers and produces arterial enlargement. Papain enzyme is also elastolytic but it had not been tested on saccular aneurysms creation yet. The purpose of this study was determine if papain produces saccular aneurysms in rabbits and to compare its gross and microscopic features are with the elastaseinduced aneurysms. METHODS: Eighteen New Zealand white rabbits (1.9 kg 3,2 kg) were separated in 3 groups: 1) sham (n=3) 0,9% saline solution; papain (n=8) 17-40 U; elastase (n=7) 6-8 U. The animals underwent surgical exposure of the neck; the right common carotid artery (RCCA) was used as the test and the left common carotid artery (LCCA) as the control. On the 21st day after surgery, animals were sacrificed for removal of the arteries, measurements and histological analysis. We determine formation of aneurysm to occur when the test artery dilated compared to the control. RESULTS: The sham group didnt develop aneurysms. There was aneurysm formation in the elastase (71,4%) and papain (100%) groups. The difference of the diameter of the tests and their respective controls is not significant (p=0,15) between elastase (average = 1,2 ± 0,4 mm) and papain (average = 2,1 ± 0,4mm) groups although there was tendency of this last one to produce larger aneurysms. the and to thrombosis (p = 0,01) and to parietal inflammation than the elastase. The analysis of the intimal fibrosis was not possible in 50% of papain cases due to pronounced thrombosis. There was no significant difference between the groups regarding the parietal thickening (p = 0,81) and the degree of destruction of the elastic fibers (0,009). CONCLUSION: Papain creates saccular aneurysms with similar dimensions to elastase-induced aneurysms. The microscopic results indicated papain destroys more endothelial cells, produces more thrombosis and more inflammatory process than elastase

Uma atividade funcional para uma via alternativa de geração de angiotensina II, como a elastase-2 foi sugerida em estudos realizados anteriormente em nosso laboratório no leito arterial mesentérico isolado de rato. No presente estudo, caracterizamos com o uso de substratos e inibidores seletivos a presença de via alternativa de geração de Ang II, independente da ECA, em carótida de ratos. Determinamos ainda a expressão do RNAm da elastase-2 nesta preparação arterial. Em anéis isolados de carótida de ratos analisamos o efeito vasoconstritor dos peptídeos Ang II, Ang I, TDP, [Pro11-D-Ala12]-Ang I (um substrato resistente a ECA) na ausência e presença de inibidores de proteases. Ang II e seus precursores produziram efeito vasoconstritor dependente da concentração em carótidas de ratos, de forma sensível ao losartan (1 M). Na presença de captopril (10 M) a resposta vasoconstritora produzida pela Ang I foi inibida, mas a resposta contrátil induzida pelo TDP e [Pro11-D-Ala12]-Ang I não foi alterada. Na presença de quimostatina (100 M) o efeito produzido pelo TDP e [Pro11-D-Ala12]-Ang I foi abolido enquanto que a curva cumulativa de Ang I foi significativamente deslocada para a direita. Inibidor Ac-AAPL-CK (seletivo para elastase-2) aboliu completamente a resposta contrátil induzida pelo PDA e não alterou o efeito vasoconstritor da Ang II. Na presença de captopril e quimostatina a resposta vasoconstritora dos peptídeos Ang I, TDP e [Pro11-D-Ala12]-Ang I foram inibidas, enquanto a resposta contrátil da Ang II não foi alterada em artéria carótida. A presença de RNAm da elastase-2 na carótida, juntamente com os dados funcionais apresentados aqui sugerem a participação desta enzima na via alternativa de geração de Ang II em carótidas de ratos. Embora a formação de Ang II a partir Ang I seja descrita como essencialmente dependente da ECA, nossos resultados sugerem a existência de vias alternativas de geração de Ang II sensível a quimostatina e Ac-AAPL-CK em artéria carótida de ratos. Muito provavelmente a elastase-2 seja a enzima responsável pela geração de Ang II nessa preparação. / We have recently described a chymostatin-sensitive elastase-2 as the major angiotensin (Ang) II-forming enzyme in the perfusate of rat mesenteric arterial bed (MAB). In the present study we investigated the role of this enzyme in generating Ang II in the isolated rat carotid artery rings by analyzing the vasoconstrictor effect of Ang II, Ang I, tetradecapetide renin-substrate (TDP), [Pro11-D-Ala12]-Ang I (an ACE-resistant substrate) in the absence and presence of proteases inhibitors. Ang II and its precursors produced a dose-dependent vasoconstrictor effect in vascular preparation that was blocked by losartan (1 M). In carotid rings, captopril (10M) abolished the responses induced by Ang I but did not affect those induced by TDP and [Pro11-D-Ala12]-Ang I. In the presence of chymostatin (100 M) alone, the effects induced by [Pro11-D-Ala12]-Ang I and TDP were abolished while the concentration-response curve to Ang I was shifted to the right. Ac-AAPL-CK (selective elastase-2 inhibitor) inhibited the responses induced by [Pro11-D-Ala12]-Ang I but did not affect Ang II-induced effects. In the presence of captopril and chymostatin, the vasoconstrictor effects of Ang I, TDP, and PDA were completely blocked while those induced by Ang II were not affected in rat artery carotid. Although Ang II formation from Ang I is essentially dependent on ACE in carotid artery, our results suggest the existence of an alternative chymostatin-sensitive pathway in rat arteries, most probably involving elastase-2.

O sistema renina angiotensina (SRA) é descrito como uma complexa cascata hormonal que participa de inúmeros processos fisiológicos. Além da enzima conversora de angiotensina (ECA), outras vias independentes da ECA têm sido descritas como geradoras alternativas de angiotensina II (ANG II), por exemplo, a elastase-2 (ELA-2). A deleção do gene que expressa a ELA-2 é capaz de influenciar o balanço simpatovagal. Sabe-se que existe estreita relação entre a atividade do SRA e a expectativa de vida. Tendo em vista a participação da ELA-2 no perfil autonômico e hemodinâmico de camundongos, e as alterações do sistema cardiovascular na senescência, seria interessante a avaliação do perfil cardiovascular de camundongos idosos nocautes para ELA-2 (ELA-2 KO). O aumento da atividade parassimpática, característica dos camundongos ELA-2 KO, poderia ser um fator protetivo em relação às alterações deletérias características do envelhecimento. O objetivo do presente estudo foi investigar o papel da ELA-2, com relação ao fenótipo cardiovascular e autonômico, no envelhecimento, e avaliar a participação da ECA, também no envelhecimento, nos camundongos ELA-2 KO. Foram estudados camundongos ELA-2 KO machos, jovens (3-4 meses) tratados com salina, e idosos (10-12 meses), tratados com salina ou enalapril. O tratamento teve duração de 10 dias, e foi realizado por meio de gavagem. No quinto dia de tratamento, os camundongos foram submetidos à cirurgia para canulação da artéria femoral e veia jugular. A seguir, cinco dias após a cirurgia procedeu-se o registro hemodinâmico dos animais acordados. A variabilidade da pressão arterial sistólica (PAS) e intervalo de pulso (IP) foi avaliada no domínio do tempo, e da frequência, enquanto a sensibilidade do barorreflexo espontâneo foi avaliada por meio do método de sequência. Não foram observadas diferenças no fenótipo hemodinâmico e autonômico de camundongos ELA-2 KO jovens e idosos; exceto a redução da eficácia barorreflexa no grupo idoso. O tratamento com enalapril reduziu a pressão arterial média (PAM), e promoveu taquicardia, em camundongos ELA-2 KO idosos, quando comparados com os tratados com salina. Entre os grupos idosos não foram observadas diferenças entre os parâmetros referentes à variabilidade da FC. O tratamento com enalapril não promoveu alterações nos índices de sensibilidade barorreflexa. Portanto, sugere-se que a ELA-2 possa contribuir para os efeitos deletérios relacionados à atividade do SRA no envelhecimento. Embora a inibição da ECA tenha alterado os parâmetros hemodinâmicos avaliados entre os camundongos idosos, a mesma não alterou, significativamente, a variabilidade da FC e da PAS / The renin angiotensin system (RAS) is described as a complex hormonal cascade that participates in numerous physiological processes. In addition to the angiotensin converting enzyme (ACE), other ACE-independent pathways have been described as alternative generators of angiotensin II (ANG II), such as elastase-2 (ELA-2). The deletion of the ELA-2 is able to influence the sympathovagal balance. Furthermore, a close relationship between RAS activity and life span has been established. Considering the participation of ELA-2, in the autonomic and hemodynamic profile of mice, and changes in the cardiovascular system in senescence, it would be pertinent to evaluate the cardiovascular profile of elderly knockout mice for ELA-2 (ELA-2 KO). The increase in parasympathetic activity, characteristic of ELA-2 KO, could be a protective factor in relation to deleterious changes characteristic of aging. The aim of the present study was to investigate the role of ELA-2 in the cardiovascular and autonomic phenotype in aging, and to evaluate the participation of ACE in the aging of ELA-2 KO mice. Male ELA-2 KO mice, young (3-4 months, treated with saline) and elderly (10-12 months, treated with saline or enalapril) were studied. The treatment lasted 10 days and was performed by gavage. On the fifth day of treatment, the mice underwent surgery for cannulation of the femoral artery and jugular. Subsequently, five days after surgery hemodynamic recording of the awake animals was performed. The variability of systolic blood pressure (SBP) and pulse interval (PI) was evaluated in the time and frequency domain and the sensitivity of the spontaneous baroreflex, evaluated by the sequencing method. No differences were observed in the hemodynamic and autonomic phenotype of young and elderly ELA-2 KO mice, except for the reduction of baroreflex effectiveness in the elderly group. Treatment with enalapril reduced mean arterial pressure (MAP) and promoted tachycardia in elderly ELA-2 KO mice when compared to saline treated. Among the elderly groups, no differences were observed between the parameters referring to HR variability. Treatment with enalapril did not promote changes in baroreflex sensitivity indexes. Therefore, it is suggested that ELA-2 may contribute to the deleterious effects related to RAS activity in aging, since elderly ELA-2 KO mice have hemodynamic and autonomic phenotypes similar to that of young mice. Although the inhibition of ACE altered the hemodynamic parameters evaluated among the elderly mice, it did not alter the HR and SBP variability

Estudou-se Microsporum gypseum de diferentes fontes regiões geográficas do Brasil.Os fungos foram isolados do solo, de animais e obtidos em coleções de cultura. Em 692 amostras de solo e a taxa de recuperação foi de 19,2%. A atividade queratinolítica e elastinolítica foi avaliada quantitativamente em 138 amostras de M. gypseum. A biotipagem molecular foi realizado através da técnica de PCR-RFLP com a enzima MvaI. O seqüenciamento da região ITS1 do rDNA foi realizado em amostras representativas. M. gypseum de amostras clínicas e do solo mostraram diferenças quantitativas significantes na expressão das enzimas. A PCR-RFLP para a região ITS1 não mostrou diferença. Pelo seqüenciamento foram obtidas duas espécies sexuadas (A. gypseum e A. incurvatum). As atividades enzimáticas sugerem um importante papel na patogenicidade e uma provável adaptação desta espécie de fungo ao parasitismo animal. A análise dos resultados pode auxiliar a identificação e o conhecimento de mecanismos de virulência destes fungos. / Microsporum gypseum from different geographical sources and regions of Brazil were studied. The fungi were isolated from the soil, animals and obtained in collections of culture. In 692 samples of soil, the recovery rate was 19.2%. The keratinolytic and elastinolytic activities were quantitatively performed on 138 samples of M. gypseum. The molecular biotyping was carried out by the technique of PCR-RFLP with the enzyme MvaI. The sequencing of the region ITS1 rDNA was carried out on representative samples. Samples of M. gypseum from clinical isolates and from soil showed significant quantitative differences in the expression of enzymes. The PCR-RFLP for the ITS1 region showed no difference. For the sequencing was obtained two sexual species (A. gypseum and A. incurvatum). The enzyme activities suggest an important role in pathogenicity and a likely adjustment of this kind of parasitic fungus to feed. The results may help the identification and knowledge of mechanisms of virulence of these fungi.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2007. / Härtill 5 uppsatser.