Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2017-08-28T15:09:22Z No. of bitstreams: 1 2011 SONCINI, FERNANDA.Mestrado.pdf: 1664772 bytes, checksum: 1c90744d7519584a45eed67e79bdec59 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T15:09:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 SONCINI, FERNANDA.Mestrado.pdf: 1664772 bytes, checksum: 1c90744d7519584a45eed67e79bdec59 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Eventos estressantes ou traumáticos são frequentemente seguidos por distúrbios de sono e, consequentemente, a persistência desses distúrbios de sono podem ser fatores preditivos para o desenvolvimento de futuros transtornos de ansiedade, como as fobias e o Transtorno de Estresse Pós-Traumático (TEPT), caracterizado pela persistência das memórias aversivas e a incapacidade de extinção destas. Uma vez demonstrado que a ativação do sistema canabinóide facilita a extinção de memórias aversivas, além de modular a indução de sono, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da privação de sono sobre os processos de retenção, evocação e extinção de memórias aversivas, no condicionamento de medo ao contexto, além de avaliar a densidade de receptores CB1 no encéfalo de ratos privados de sono e os efeitos de um antagonista canabinóide na evocação da memória emocional. Os animais foram organizados em dois ou três grupos: Privação de Sono (PS), Rebote de Sono (REB) e Controle (CTRL). Os resultados mostram que a privação de sono pode ter causado tanto (1) prejuízo na evocação da memória de medo como (2) na expressão da resposta comportamental, devido ao aumento de atividade locomotora, entretanto, não prejudicou a extinção de memória, na tarefa do condicionamento de medo ao contexto. Mostrou também que a admininstração do AM251 antes do treino não reverteu o prejuízo na retenção da memória causado pela privação de sono, na mesma tarefa, pois independente da dose de droga administrada (0,5; 2,5; 5,0 mg/kg), o grupo PS continuou apresentando maior prejuízo na retenção de memória, em relação ao grupo CTRL e mesmo em relação ao grupo REB, que teve 24 horas de oportunidade de sono após a privação de 96 horas. Além disso, o estudo auto-radiográfico mostrou uma diminuição na densidade dos receptores canabinoides CB1 no grupo PS e REB. Concluímos que a privação de sono possa ter aumentado a atividade motora do animal, e também prejudicado a retenção e a evocação da memória no condicionamento de medo ao contexto. Por outro lado, a privação de sono não prejudicou o processo de extinção da memória eversiva. Concluímos também que o antagonista canabinóide AM251 não foi capaz de reverter o prejuízo na retenção de memória dos animais privados de sono e que estes apresentam uma diminuição na densidade de receptores CB1 nos núcleos amigdaloides basolateral, central e medial, o que pode diminuir a reação de medo do animal. Nossos resultados sugerem que o processo de extinção do condicionamento de medo ao contexto ocorra por mecanismos distintos do aprendizado original dessa tarefa, uma vez que a privação de sono afeta o aprendizado de tarefas contextuais, mas não a sua extinção. / FAPESP: 08/56053-7

Receptores CB1 e TRPV1 desempenham papéis opostos na modulação da atividade neuronal e, possivelmente, na regulação da resposta ao estresse. A exposição ao estresse reduz a neurotransmissão mediada por receptores CB1, enquanto que a facilitação do sistema endocanabinóide produz efeito tipoantidepressivo. Por outro lado, estudos farmacológicos e de manipulação genética apontam que a diminuição da sinalização mediada por receptores TRPV1 produz efeito tipo-antidepressivo em modelos animais. Evidências científicas apontam que a modulação da neurotransmissão glutamatérgica, dependente de receptores NMDA, esteja envolvida em respostas mediadas por CB1 e TRPV1. Ambos os receptores são amplamente expressos em estruturas cerebrais envolvidas na resposta emocional, incluindo o córtex pré-frontal medial ventral (CPFmv), o que aponta para essa estrutura como importante alvo para os efeitos mediados por receptores CB1, TRPV1 e NMDA. Entretanto, pouco se sabe sobre a interação entre CB1 e TRPV1 corticais na resposta ao estresse. Dessa forma, avaliamos se receptores CB1 e TRPV1 localizados no CPFmv-pré-límbico (PL) podem contribuir, de maneiras opostas, para as mudanças comportamentais induzidas pelo estresse do teste do nado forçado (TNF), um teste preditivo de efeito tipo-antidepressivo. Em um primeiro grupo experimental observou-se que a AEA induz efeito tipo-antidepressivo com uma curva dose-resposta em U, quando administrada no CPFmv-PL. Além disso, o efeito tipo-antidepressivo da AEA foi prevenido pela pré-administração de AM251, um antagonista para receptores CB1. Por outro lado, a maior dose de AEA, que não induz efeito per se, produziu efeito tipo-antidepressivo quando combinada ao bloqueio de receptores TRPV1 por meio do pré-tratamento com SB366791. Corroborando estes dados, observou-se que a administração intra-CPFmv-PL de um bloqueador dual da enzima FAAH e de receptores TRPV1 (AA-5HT), induziu efeito tipo-antidepressivo no teste do nado forçado. Além disso, a administração do inibidor da FAAH (URB597) e do antagonista de receptores TRPV1 (SB366791), em grupos independentes de animais, reduziu o tempo de imobilidade no teste do nado forçado. Ademais, a coadministração de doses subefetivas de URB597 e SB366791 reduziu o tempo de imobilidade no mesmo teste comportamental, evidenciando somação de efeito do bloqueio combinado da FAAH com receptores TRPV1. Em conjunto, esses ii resultados indicam que tanto a facilitação da neurotransmissão mediada por CB1R quanto o bloqueio de TRPV1R no CPFmv-PL promove efeito tipo-antidepressivo, sugerindo que ambos os receptores corticais são importantes na modulação de respostas comportamentais ao estresse e, possivelmente, na neurobiologia da depressão, porém de maneiras opostas. Buscando elucidar os mecanismos pelos quais a AEA, através da ativação de CB1R e TRPV1R, promove seus efeitos comportamentais, o envolvimento da das neurotransmissões glutamatérgica e nitrérgica nos efeitos induzidos pela AEA foi investigado. Nossos resultados demonstraram que a administração de antagonista de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA (LY235959) e de inibidor da nNOS (NPA) induziram efeito tipoantidepressivo no teste do nado forçado quando administrados intra-CPFmv-PL. Além disso, a coadministração de doses subefetivas do antagonista NMDA (LY366791) e da AEA intra-CPFmv-PL, induziu efeito tipo-antidepressivo no TNF, mostrando um efeito aditivo da administração conjunta das drogas. Esse resultado sugere que o efeito tipo-antidepressivo da AEA seja facilitado pela inibição da neurotransmissão glutamatérgica mediada por NMDA. Em conjunto, os resultados do presente trabalho indicam um envolvimento de CB1 e TRPV1 do CPFmv-PL na modulação da resposta comportamental ao estresse do nado forçado, porém de maneira contrária. Além disso, o efeito tipo-antidepressivo da AEA parece envolver a diminuição da neurotransmissão glutamatérgica mediada por NMDAR. / CB1 and TRPV1 receptors play opposite roles in the modulation of neuronal activity and, possibly, in the regulation of the stress response. Exposure to stress attenuates CB1 receptor-mediated neurotransmission, while facilitation of the endocannabonoid system produces antidepressant-like effects. On the other hand, genetic and pharmacological blockade of TRPV1 receptor signalling produces antidepressant-like effect in animal models. Scientific evidence suggests NMDA receptor-mediated glutamatergic neurotransmission might be involved in responses mediated by CB1 and TRPV1. Both receptors are widely expressed in brain structures involved in the emotional response, including the ventral medial prefrontal cortex (CPFmv), which points to this structure as an important target to the effects triggered by CB1 and TRPV1. However, little is known about the interaction between cortical CB1 and TRPV1 in response to stress. Therefore, we evaluated whether CB1 and TRPV1 receptors of the vmPFC-PL may contribute, in opposite ways, to stress-induced behavioral changes in the forced swimming test (FST), a predictive test of antidepressant-like effect. In a first experimental group it was observed that AEA induces antidepressant-like effect with a U shape dose-response curve, when administered in the vmPFC-PL. In addition, the antidepressant-like effect of AEA was prevented by pre-administration with AM251, a CB1 receptor antagonist. On the other hand, the higher dose of AEA, which does not induce effect per se, produced an antidepressant-like effect when combined with TRPV1 receptor blockade with SB366791. Corroborating these data, intra-vmPFC-PL administration of a dual blocker of the FAAH enzyme and TRPV1 receptors (AA-5HT), induced antidepressant-like effect in the forced swimming test. In addition, administration of FAAH inhibitor (URB597) and TRPV1 receptor antagonist (SB366791) in independent groups of animals reduced the immobility time in the forced swimming test. Furthermore, co-administration of URB597 and SB366791, in sub-effective doses, reduced the immobility time in the same behavioral test, evidencing synergism of the combined blockade of FAAH with TRPV1 receptors. Taken together, these results indicate that both facilitation of CB1R-mediated neurotransmission and blockade of TRPV1R in vmPFC-PL promotes antidepressantlike effect, suggesting that both cortical receptors are important in modulating iv behavioral responses to stress and possibly in the neurobiology of depression, but in opposite ways. Aiming to elucidate the mechanisms by which AEA, through the activation of CB1R and TRPV1R, promotes its behavioral effects, the involvement of the possible modulation of glutamatergic and nitrergic neurotransmissions by AEA was investigated. Our results demonstrated that administration of NMDA receptor antagonist (LY235959) and nNOS inhibitor (NPA) induced antidepressant-like effect in the forced swimming test when administered intra-CPFmv-PL. In addition, coadministration of NMDA antagonist (LY366791) and AEA intra-CPFmvPL, in subeffective doses, induced antidepressant-like effect in the FST, showing a synergistic effect of these drugs. This result suggests that the antidepressant-like effect of AEA might involve attenuation of cortical NMDA-mediated glutamatergic neurotransmission. Taken together, results of the present study indicate an opposite involvement for CB1 and TRPV1 receptors in the behavioral responses elicited by forced swimming stress. Furthermore, the antidepressant-like effect of AEA probably involves the attenuation of NMDAR-mediated glutamatergic neurotransmission.

A sinalização por endocanabinóides é finalizada por meio de hidrólise enzimática; um processo que para o endocanabinóide 2-Arachidonoylglycerol (2-AG) é mediado pela lipase monoacilglicerol (MAGL). O JZL184, é um fármaco que apresenta alta seletividade na inibição da MAGL. Assim, o JZL184 aumenta os níveis de 2-AG que, por sua vez, atua sobre os receptores canabinóides CB1 e CB2 produzindo diversos efeitos como, por exemplo, o anti-inflamatório. A inflamação pulmonar aguda (ALI) e a sua forma mais grave, a síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), em humanos, são doenças pulmonares, caracterizadas por infiltrado pulmonar bilateral com acúmulo de neutrófilos. A sepse é a causa mais comum da ALI/SDRA; aproximadamente 40% de pacientes com sépsis, também apresentam ALI ou ARDS e a ALI/ARDS são síndromes graves associadas com mortalidade superior a 40%. Considerando que não há cura para a ARDS / ALI, foi utilizado um modelo murino de ALI para averiguar se a inibição da MAGL seria capaz de aliviar os sintomas inflamatórios ou, até mesmo, promover a cura do processo. Para isso, foram analisados fatores que promovem a migração de leucócitos para o pulmão e o dano tecidual. Ainda, para avaliar se os LPS e/ou o JZL184 promoveram mudanças no sistema nervoso central, foram avaliados a atividade locomotora no campo aberto (CA), a ansiedade no labirinto (LCE), a capacidade de adaptação em CA e os níveis de glicocorticóides séricos, assim como os níveis hipotalâmicos de citocinas. Assim, o JZL184, foi administrado por via intraperitoneal (i.p.) e 60 minutos depois o LPS foi instilado por via intranasal. As análises foram realizadas 6, 24 e/ou 48 horas após a indução da ALI. Observou-se que a inibição MAGL diminuiu a migração de leucócitos para os pulmões, bem como a permeabilidade vascular e o dano tecidual. O JZL184 também reduziu os níveis de citocinas e quimiocinas e o extravasamento vascular no lavado bronco alveolar (LBA), a atividade de MPO no tecido pulmonar e a expressão da molécula de adesão no sangue e no LBA. Os receptores CB1 e CB2 foram considerados como envolvidos nos efeitos anti-inflamatórios produzidos pelo JZL184 porque o AM281, um antagonista seletivo do receptor CB1, e o AM630, um antagonista seletivo do receptor CB2, reduziram ou bloquearam os efeitos anti-inflamatórios para JZL184. O LPS e o JZL184 não promoveram comportamento doentio e tampouco alteraram os parâmetros de ansiedade. Entretanto, o LPS e/ou o JZL184 aumentaram a expressão gênica de citocinas hipotalâmicas. Concluiu-se que a inibição MAGL produziu efeitos anti-inflamatórios no modelo murino de ALI induzida por LPS, uma descoberta que foi considerada uma consequência da ativação dos receptores canabinóide CB1 e CB2. A inibição da MAGL pode ser, no futuro, uma ferramenta terapêutica relevante para o tratamento de inflamações pulmonares / Endocannabinoid signaling is terminated by enzymatic hydrolysis, a process that, for 2-Arachidonoylglycerol (2-AG), is mediated by monoacylglycerol lipase (MAGL). The JZL184, is a drug that inhibits MAGL and presents high potency and selectivity. Thus, JZL184 increases the levels of 2-AG, an endocannabinoid that acts on the CB1 and CB2 cannabinoid receptors, and has shown anti-inflammatory effects. Acute lung injury (ALI) and its most severe form the acute respiratory distress syndrome (ARDS), in humans, are lung diseases, characterized by bilateral pulmonary infiltrate with neutrophils accumulation. The sepsis is the most common cause of ALI / ARDS; approximately 40% of patients with sepsis have also ALI or ARDS. ALI and ARDS are severe syndromes associated with mortality 40% exceeding rates. Considering that there is no cure for ARDS/ALI, we used a ALI murine model to evaluate if the MAGL inhibition was able to alleviating the inflammatory symptoms or even promote the cure. For this, factors that promote migration of leukocytes into the lungs and the tissue damage were analyzed. Still, to assess whether LPS and / or JZL184 promoted changes in the central nervous system, the locomotor activity and ability to adapt were evaluated in the open field end the anxiety in the plus maze. Were also evaluated the glucocorticoid levels in the serum, and the hypothalamic levels of cytokines. Thus, the JZL184 was used intraperitoneally, 60 minutes after LPS was intranasally instilled and 6, 24 and/or 48 hours, after induction of ALI, analyzes were performed. It was observed that the MAGL inhibition decreased the leukocyte migration into the lungs as well as the vascular permeability and the lung damage. JZL184 also reduced the cytokine and chemokine levels and the vascular extravasation in the BAL, the MPO activity in the lungs and adhesion molecule expression in the blood and BAL. The CB1 and CB2 receptors were considered involved in the anti-inflammatory effects of JZL184 because the AM281, a selective CB1 receptor antagonist, and the AM630, a selective CB2 receptor antagonist, reduced or blocked the anti-inflammatory effects previously described for JZL184. The LPS and the JZL184 did not promote unhealthy behavior and did not change the parameters of anxiety. However, LPS and/orJZL184 increased gene expression of hypothalamic cytokines. It was concluded that MAGL inhibition produced anti-inflammatory effects in a murine model of LPS-induced ALI, a finding that was considered a consequence of the activation of the CB1 and CB2 cannabinoid receptors. The MAGL inhibition in the future may be a therapeutic tool for the pulmonary inflammation treatment

Orientadora: Profª. Drª. Tatiana Lima Ferreira / Coorientador: Prof. Dr. Daniel Carneiro Carrettiero / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Neurociência e Cognição, São Bernardo do Campo, 2018. / A doença de Alzheimer (DA) é uma doença neurodegenerativa caracterizada por múltiplos déficits cognitivos, como prejuízo da memória operacional, espacial e emocional. As principais características histopatológicas da DA são o surgimento das placas amilóides e dos emaranhados neurofibrilares. Os emaranhados se originam do acúmulo da proteína tau fosforilada (p-tau), que ocorre devido a falhas nas suas vias de degradação, como a via BAG2/HSP70. Esse acúmulo de p-tau no progresso da DA é parte fundamental do surgimento e agravamento de processos neurodegenerativos como perda sináptica e neuronal, relacionada à piora do comprometimento cognitivo. Os compostos canabinóides tem importante papel no progresso da DA, regulando processos cognitivos, inflamatórios e de degradação de p-tau. Uma redução da quantidade de anandamida (ANA) um endocanabinóide, no encéfalo de humanos está correlacionada com o déficit cognitivo associado à DA. Além disso, uma das formas da ANA exercer seu papel neuroprotetor em processos neuropatológicos seria aumentando os níveis de HSP70, chaperona envolvida na degradação de p-tau. A maioria dos estudos que investigo Os animais que receberam STZ tiveram déficits nos testes de reconhecimento de novo objeto (RNO), latência de escape no labirinto em cruz elevada (LCE) e condicionamento de medo ao som e a injeção de ANA recuperou os prejuízos no RNO e no LCE. O condicionamento de medo ao contexto e a inibição pré-pulso não foram alterados pela STZ e/ou ANA. STZ também induziu alargamento ventricular, redução de receptores canabinóides do tipo 1 e das proteínas sinápticas sinaptofisina e sintaxina. ANA preveniu o aumento do ventrículo e a diminuição de sintaxina. Os níveis de SNAP-25 não foram modificados por ANA e/ou STZ. A respeito da via de degradação da ptau, STZ aumentou os níveis de p-tau Ser 396 e diminuiu p-tau Ser199/202, HSP70 e BAG2. A ANA não preveniu nenhum desses efeitos, apenas acentuou a redução de BAG2. A quantidade de tau total permaneceu inalterada pelos tratamentos. Os resultados sugerem que o sistema endocanabinóide pode estar envolvido nos efeitos induzidos pela STZ, pois, embora a ANA não tenha conseguido prevenir algumas alterações cognitivas observadas na DA esporádica, ela evitou parcialmente as deficiências cognitivas induzidas pela STZ e as alterações no volume ventricular e nos marcadores sinápticos. A relação desse sistema com a degradação de p-tau ainda permanece não esclarecida e são necessários mais estudos para melhor compreensão do substrato neurobiológico pelo qual a ANA poderia exercer sua atividade neuroprotetora. .Assim, este estudo fortalece o uso de STZ como modelo de DA esporádica e corrobora o potencial do sistema endocanabinóide como um importante alvo terapêutico para a DA. / Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disorder characterized by multiple cognitive deficits, such as impairment of working, spatial and emotional memory. The main histopathological features of AD are the appearance of amyloid plaques and neurofibrillary tangles. The tangles are originated from the accumulation of phosphorylated tau protein (p-tau), which occurs due to failures in its degradation mechanisms, such as the BAG2/HSP70 pathway. This accumulation of p-tau in AD progress is a fundamental part of the onset and aggravation of neurodegenerative processes, including synaptic and neuronal loss, related to the worsening of cognitive impairment. Cannabinoid compounds play an important role in the pathological progression of AD, regulating cognitive and inflammatory processes and p-tau degradation. A reduction in the amount of anandamide (ANA), an endocannabinoid, in the brain of humans is correlated to the cognitive deficit associated with AD. In addition, one of the ways ANA exert its neuroprotective role in neuropathological processes would be by increasing the levels of HSP70, chaperone involved in the degradation of p-tau. Most studies investigating the role of the endocannabinoid system in AD have used transgenic animals, which are more correlated to familial AD, and are not ideal models to mimic sporadic AD, which is the multifactorial form of the disease, corresponding to more than 95% of the cases. The sporadic DA model based on the intracerebroventricular (icv) injection of streptozotocin (STZ) mimics the cognitive, metabolic, synaptic and histopathological changes of the AD. However, little is known about the role the endocannabinoid system in the changes observed in this model. Thus, the objective of the present study was to evaluate the possible preventive effect of ANA on cognitive changes, synaptic loss and alterations in the HSP70/BAG2 pathway of p-tau degradation in a sporadic AD model. Thus, Wistar rats received ANA and/or STZ icv in the same surgery and after 30 days had their cognitive performance evaluated. Afterwards, they were euthanized and their brains were removed for histological analysis and the hippocampus were used for Western blotting analysis of the onditioning tests and ANA injection recovered the impairments of the performance in NOR and EPM. Contextual fear conditioning and pre-pulse inhibition were not altered by STZ and/or ANA. STZ also induced ventricular enlargement and reduced the levels of cannabinoid receptors of type 1 and of the synaptic proteins synaptophysin and syntaxin. ANA prevented ventricular enlargement and the decrease of syntaxin levels. SNAP-25 levels were not modified by ANA and/or STZ. Regarding the degradation pathway of p-tau, STZ increased p-tau Ser 396 and decreased p-tau Ser199 / 202, HSP70 and BAG2. ANA did not prevent any of these effects, only accentuated the reduction of BAG2. The total levels of tau remained unchanged by the treatments. The results suggest that the endocannabinoid system may be involved in the STZ-induced effects because, although ANA failed to prevent some cognitive changes in sporadic AD, it partially inhibited STZ-induced cognitive deficits and changes in ventricular volume and in the synaptic markers. The relationship of this system to the degradation of p-tau remains unclear and further studies are needed to better understand the neurobiological substrate by which ANA could exert its neuroprotective activity. Thus, this study strengthens the use of STZ as a sporadic DA model and corroborates the potential of the endocannabinoid system as an important therapeutic target for AD.

Receptores CB1 e TRPV1 desempenham papéis opostos na modulação da atividade neuronal e, possivelmente, na regulação da resposta ao estresse. A exposição ao estresse reduz a neurotransmissão mediada por receptores CB1, enquanto que a facilitação do sistema endocanabinóide produz efeito tipoantidepressivo. Por outro lado, estudos farmacológicos e de manipulação genética apontam que a diminuição da sinalização mediada por receptores TRPV1 produz efeito tipo-antidepressivo em modelos animais. Evidências científicas apontam que a modulação da neurotransmissão glutamatérgica, dependente de receptores NMDA, esteja envolvida em respostas mediadas por CB1 e TRPV1. Ambos os receptores são amplamente expressos em estruturas cerebrais envolvidas na resposta emocional, incluindo o córtex pré-frontal medial ventral (CPFmv), o que aponta para essa estrutura como importante alvo para os efeitos mediados por receptores CB1, TRPV1 e NMDA. Entretanto, pouco se sabe sobre a interação entre CB1 e TRPV1 corticais na resposta ao estresse. Dessa forma, avaliamos se receptores CB1 e TRPV1 localizados no CPFmv-pré-límbico (PL) podem contribuir, de maneiras opostas, para as mudanças comportamentais induzidas pelo estresse do teste do nado forçado (TNF), um teste preditivo de efeito tipo-antidepressivo. Em um primeiro grupo experimental observou-se que a AEA induz efeito tipo-antidepressivo com uma curva dose-resposta em U, quando administrada no CPFmv-PL. Além disso, o efeito tipo-antidepressivo da AEA foi prevenido pela pré-administração de AM251, um antagonista para receptores CB1. Por outro lado, a maior dose de AEA, que não induz efeito per se, produziu efeito tipo-antidepressivo quando combinada ao bloqueio de receptores TRPV1 por meio do pré-tratamento com SB366791. Corroborando estes dados, observou-se que a administração intra-CPFmv-PL de um bloqueador dual da enzima FAAH e de receptores TRPV1 (AA-5HT), induziu efeito tipo-antidepressivo no teste do nado forçado. Além disso, a administração do inibidor da FAAH (URB597) e do antagonista de receptores TRPV1 (SB366791), em grupos independentes de animais, reduziu o tempo de imobilidade no teste do nado forçado. Ademais, a coadministração de doses subefetivas de URB597 e SB366791 reduziu o tempo de imobilidade no mesmo teste comportamental, evidenciando somação de efeito do bloqueio combinado da FAAH com receptores TRPV1. Em conjunto, esses ii resultados indicam que tanto a facilitação da neurotransmissão mediada por CB1R quanto o bloqueio de TRPV1R no CPFmv-PL promove efeito tipo-antidepressivo, sugerindo que ambos os receptores corticais são importantes na modulação de respostas comportamentais ao estresse e, possivelmente, na neurobiologia da depressão, porém de maneiras opostas. Buscando elucidar os mecanismos pelos quais a AEA, através da ativação de CB1R e TRPV1R, promove seus efeitos comportamentais, o envolvimento da das neurotransmissões glutamatérgica e nitrérgica nos efeitos induzidos pela AEA foi investigado. Nossos resultados demonstraram que a administração de antagonista de receptores glutamatérgicos do tipo NMDA (LY235959) e de inibidor da nNOS (NPA) induziram efeito tipoantidepressivo no teste do nado forçado quando administrados intra-CPFmv-PL. Além disso, a coadministração de doses subefetivas do antagonista NMDA (LY366791) e da AEA intra-CPFmv-PL, induziu efeito tipo-antidepressivo no TNF, mostrando um efeito aditivo da administração conjunta das drogas. Esse resultado sugere que o efeito tipo-antidepressivo da AEA seja facilitado pela inibição da neurotransmissão glutamatérgica mediada por NMDA. Em conjunto, os resultados do presente trabalho indicam um envolvimento de CB1 e TRPV1 do CPFmv-PL na modulação da resposta comportamental ao estresse do nado forçado, porém de maneira contrária. Além disso, o efeito tipo-antidepressivo da AEA parece envolver a diminuição da neurotransmissão glutamatérgica mediada por NMDAR. / CB1 and TRPV1 receptors play opposite roles in the modulation of neuronal activity and, possibly, in the regulation of the stress response. Exposure to stress attenuates CB1 receptor-mediated neurotransmission, while facilitation of the endocannabonoid system produces antidepressant-like effects. On the other hand, genetic and pharmacological blockade of TRPV1 receptor signalling produces antidepressant-like effect in animal models. Scientific evidence suggests NMDA receptor-mediated glutamatergic neurotransmission might be involved in responses mediated by CB1 and TRPV1. Both receptors are widely expressed in brain structures involved in the emotional response, including the ventral medial prefrontal cortex (CPFmv), which points to this structure as an important target to the effects triggered by CB1 and TRPV1. However, little is known about the interaction between cortical CB1 and TRPV1 in response to stress. Therefore, we evaluated whether CB1 and TRPV1 receptors of the vmPFC-PL may contribute, in opposite ways, to stress-induced behavioral changes in the forced swimming test (FST), a predictive test of antidepressant-like effect. In a first experimental group it was observed that AEA induces antidepressant-like effect with a U shape dose-response curve, when administered in the vmPFC-PL. In addition, the antidepressant-like effect of AEA was prevented by pre-administration with AM251, a CB1 receptor antagonist. On the other hand, the higher dose of AEA, which does not induce effect per se, produced an antidepressant-like effect when combined with TRPV1 receptor blockade with SB366791. Corroborating these data, intra-vmPFC-PL administration of a dual blocker of the FAAH enzyme and TRPV1 receptors (AA-5HT), induced antidepressant-like effect in the forced swimming test. In addition, administration of FAAH inhibitor (URB597) and TRPV1 receptor antagonist (SB366791) in independent groups of animals reduced the immobility time in the forced swimming test. Furthermore, co-administration of URB597 and SB366791, in sub-effective doses, reduced the immobility time in the same behavioral test, evidencing synergism of the combined blockade of FAAH with TRPV1 receptors. Taken together, these results indicate that both facilitation of CB1R-mediated neurotransmission and blockade of TRPV1R in vmPFC-PL promotes antidepressantlike effect, suggesting that both cortical receptors are important in modulating iv behavioral responses to stress and possibly in the neurobiology of depression, but in opposite ways. Aiming to elucidate the mechanisms by which AEA, through the activation of CB1R and TRPV1R, promotes its behavioral effects, the involvement of the possible modulation of glutamatergic and nitrergic neurotransmissions by AEA was investigated. Our results demonstrated that administration of NMDA receptor antagonist (LY235959) and nNOS inhibitor (NPA) induced antidepressant-like effect in the forced swimming test when administered intra-CPFmv-PL. In addition, coadministration of NMDA antagonist (LY366791) and AEA intra-CPFmvPL, in subeffective doses, induced antidepressant-like effect in the FST, showing a synergistic effect of these drugs. This result suggests that the antidepressant-like effect of AEA might involve attenuation of cortical NMDA-mediated glutamatergic neurotransmission. Taken together, results of the present study indicate an opposite involvement for CB1 and TRPV1 receptors in the behavioral responses elicited by forced swimming stress. Furthermore, the antidepressant-like effect of AEA probably involves the attenuation of NMDAR-mediated glutamatergic neurotransmission.

A sinalização por endocanabinóides é finalizada por meio de hidrólise enzimática; um processo que para o endocanabinóide 2-Arachidonoylglycerol (2-AG) é mediado pela lipase monoacilglicerol (MAGL). O JZL184, é um fármaco que apresenta alta seletividade na inibição da MAGL. Assim, o JZL184 aumenta os níveis de 2-AG que, por sua vez, atua sobre os receptores canabinóides CB1 e CB2 produzindo diversos efeitos como, por exemplo, o anti-inflamatório. A inflamação pulmonar aguda (ALI) e a sua forma mais grave, a síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), em humanos, são doenças pulmonares, caracterizadas por infiltrado pulmonar bilateral com acúmulo de neutrófilos. A sepse é a causa mais comum da ALI/SDRA; aproximadamente 40% de pacientes com sépsis, também apresentam ALI ou ARDS e a ALI/ARDS são síndromes graves associadas com mortalidade superior a 40%. Considerando que não há cura para a ARDS / ALI, foi utilizado um modelo murino de ALI para averiguar se a inibição da MAGL seria capaz de aliviar os sintomas inflamatórios ou, até mesmo, promover a cura do processo. Para isso, foram analisados fatores que promovem a migração de leucócitos para o pulmão e o dano tecidual. Ainda, para avaliar se os LPS e/ou o JZL184 promoveram mudanças no sistema nervoso central, foram avaliados a atividade locomotora no campo aberto (CA), a ansiedade no labirinto (LCE), a capacidade de adaptação em CA e os níveis de glicocorticóides séricos, assim como os níveis hipotalâmicos de citocinas. Assim, o JZL184, foi administrado por via intraperitoneal (i.p.) e 60 minutos depois o LPS foi instilado por via intranasal. As análises foram realizadas 6, 24 e/ou 48 horas após a indução da ALI. Observou-se que a inibição MAGL diminuiu a migração de leucócitos para os pulmões, bem como a permeabilidade vascular e o dano tecidual. O JZL184 também reduziu os níveis de citocinas e quimiocinas e o extravasamento vascular no lavado bronco alveolar (LBA), a atividade de MPO no tecido pulmonar e a expressão da molécula de adesão no sangue e no LBA. Os receptores CB1 e CB2 foram considerados como envolvidos nos efeitos anti-inflamatórios produzidos pelo JZL184 porque o AM281, um antagonista seletivo do receptor CB1, e o AM630, um antagonista seletivo do receptor CB2, reduziram ou bloquearam os efeitos anti-inflamatórios para JZL184. O LPS e o JZL184 não promoveram comportamento doentio e tampouco alteraram os parâmetros de ansiedade. Entretanto, o LPS e/ou o JZL184 aumentaram a expressão gênica de citocinas hipotalâmicas. Concluiu-se que a inibição MAGL produziu efeitos anti-inflamatórios no modelo murino de ALI induzida por LPS, uma descoberta que foi considerada uma consequência da ativação dos receptores canabinóide CB1 e CB2. A inibição da MAGL pode ser, no futuro, uma ferramenta terapêutica relevante para o tratamento de inflamações pulmonares / Endocannabinoid signaling is terminated by enzymatic hydrolysis, a process that, for 2-Arachidonoylglycerol (2-AG), is mediated by monoacylglycerol lipase (MAGL). The JZL184, is a drug that inhibits MAGL and presents high potency and selectivity. Thus, JZL184 increases the levels of 2-AG, an endocannabinoid that acts on the CB1 and CB2 cannabinoid receptors, and has shown anti-inflammatory effects. Acute lung injury (ALI) and its most severe form the acute respiratory distress syndrome (ARDS), in humans, are lung diseases, characterized by bilateral pulmonary infiltrate with neutrophils accumulation. The sepsis is the most common cause of ALI / ARDS; approximately 40% of patients with sepsis have also ALI or ARDS. ALI and ARDS are severe syndromes associated with mortality 40% exceeding rates. Considering that there is no cure for ARDS/ALI, we used a ALI murine model to evaluate if the MAGL inhibition was able to alleviating the inflammatory symptoms or even promote the cure. For this, factors that promote migration of leukocytes into the lungs and the tissue damage were analyzed. Still, to assess whether LPS and / or JZL184 promoted changes in the central nervous system, the locomotor activity and ability to adapt were evaluated in the open field end the anxiety in the plus maze. Were also evaluated the glucocorticoid levels in the serum, and the hypothalamic levels of cytokines. Thus, the JZL184 was used intraperitoneally, 60 minutes after LPS was intranasally instilled and 6, 24 and/or 48 hours, after induction of ALI, analyzes were performed. It was observed that the MAGL inhibition decreased the leukocyte migration into the lungs as well as the vascular permeability and the lung damage. JZL184 also reduced the cytokine and chemokine levels and the vascular extravasation in the BAL, the MPO activity in the lungs and adhesion molecule expression in the blood and BAL. The CB1 and CB2 receptors were considered involved in the anti-inflammatory effects of JZL184 because the AM281, a selective CB1 receptor antagonist, and the AM630, a selective CB2 receptor antagonist, reduced or blocked the anti-inflammatory effects previously described for JZL184. The LPS and the JZL184 did not promote unhealthy behavior and did not change the parameters of anxiety. However, LPS and/orJZL184 increased gene expression of hypothalamic cytokines. It was concluded that MAGL inhibition produced anti-inflammatory effects in a murine model of LPS-induced ALI, a finding that was considered a consequence of the activation of the CB1 and CB2 cannabinoid receptors. The MAGL inhibition in the future may be a therapeutic tool for the pulmonary inflammation treatment

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:22:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3956.pdf: 1826733 bytes, checksum: e72222f7d290cf5a26f0db7d34928af6 (MD5) Previous issue date: 2011-10-20 / Financiadora de Estudos e Projetos / The purpose of this study was to investigate the effects of high-fat diet and swimming and resistance training in the adipose tissue, endocannabinoid system and lipid profile in obese rats. Wistar adult male rats were divided into 6 groups (n = 10 per group): sedentary chow diet (SP); sedentary high-fat diet (SH); swimming chow diet (NP); swimming high-fat diet (NH); resistance training chow diet (FP); resistance training high-fat diet (FH). After three weeks feeding on a chow diet or high-fat diet, the animals started the exercise protocols. The NP and NH groups swam 60 minutes/day, five days a week, with a constant overload of 5% body weight during 8 weeks in tanks of 50 cm of height and 30 cm of diameter, for 8 weeks. The groups FP and FH started the resistance training with weights tied to their tails, once every three days for 8 weeks. The animals of SP and HS groups remained sedentary and fed their respective diets. After this period all animals were sacrificed by decapitation and tissues dissected, weighed and immediately stored at -80 º C. High-fat diet increased body weight gain, relative weight of adipose tissues (epididymal, retroperitoneal, visceral and subcutaneous) and adipose tissue area (epididymal, retroperitoneal and visceral). It also increased the fat percentage of all adipose tissues and liver, and increased gene expression of CB1 receptor. The trained groups, both resistance training and swimming, presented lower values of adipocyte area, benefits in lipid profile, lower percentage of fat in the adipose tissue and liver, lower body weight gain, and lower values for gene expression the CB1 receptor. Thus our results indicate the potential benefits of the resistance training and swimming as non pharmacological alternatives to control the deleterious effects of high-fat diet on adipose tissue, lipid profile, lipid content of tissues and control of the endocannabinoid system imbalance caused by high-fat diet. / O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos da dieta hiperlipídica e do treinamento de natação e força sobre o tecido adiposo, perfil lipídico e sistema endocanabinóide de ratos obesos. Para isso, utilizamos sessenta ratos adultos machos divididos em seis grupos: Sedentário Padrão (SP); Sedentário Hiperlipídico (SH); Natação Padrão (NP); Natação Hiperlipídica (NH); Força Padrão (FP); Força Hiperlipídica (FH). Após três semanas recebendo dieta padrão ou hiperlipídica, os animais iniciaram os protocolos de exercício. Os grupos NP e NH nadaram 60 minutos por dia, 5 dias na semana com uma carga de 5% do peso corporal atada ao corpo, em tanques de 50 cm de altura e 30 cm de diâmetro, durante 8 semanas. Os grupos FP e FH realizaram exercício de subida em escada com pesos atados às suas caudas, uma vez a cada três dias, durante 8 semanas. Os animais dos grupos SP e SH continuaram sedentários e alimentados com suas respectivas dietas. Após esse período todos os animais foram sacrificados por decapitação, e os tecidos dissecados, pesados e imediatamente congelado a -80ºC. A dieta hiperlipídica aumentou o ganho de massa corporal, peso relativo dos tecidos adiposos (epididimal, retroperitoneal, visceral e subcutâneo) e área de adipócitos (epididimal, retroperitoneal e visceral). Também aumentou o percentual de gordura de todos os tecidos adiposos e fígado, além de aumentar a expressão gênica do receptor CB1. Os grupos treinados, tanto em força quanto em natação, apresentaram menores valores de área de adipócitos, melhora do perfil lipídico, menores valores no percentual de gordura dos tecidos adiposos e fígado, menores ganhos de massa corporal, além de menores valores de expressão gênica para o receptor CB1. Assim nossos resultados indicam os potenciais benefícios do treinamento força e natação, como alternativas não farmacológicas para controlar os efeitos deletérios da dieta hiperlipídica sobre o tecido adiposo, perfil lipídico, conteúdo lipídico dos tecidos e controle do desequilíbrio do sistema endocanabinóide provocado pela dieta hiperlipídica.