Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La endotelina-1 (ET-1) es un péptido vasoactivo producido principalmente por el endotelio vascular. La ET-1 estimula la contracción y tiene acción mitogénica en la célula muscular lisa vascular al unirse a su receptor ETA muscular, mientras que la unión del péptido al receptor ETB endotelial promueve vasodilatación, participando ambos receptores en la regulación del tono vascular. La alteración del sistema ET-1 y de sus receptores puede tener un profundo impacto en la regulación de la presión arterial pulmonar durante la transición desde la vida fetal a la vida extrauterina, bajo condiciones de hipoxia crónica. Hipótesis: existiría una mayor expresión del precursor de ET-1, preproendotelina-1 (PPET-1) y del receptor ETA y una menor expresión del receptor ETB en pulmón de ovejas recién nacidas crónicamente hipóxicas, gestadas y nacidas en tierras altas, que desarrollan hipertensión arterial pulmonar, en comparación con ovejas recién nacidas gestadas y nacidas en tierras bajas. Estos cambios no se observarían en llamas recién nacidas, especie tolerante a la hipoxia crónica, en la que la gestación y nacimiento en tierras altas no genera hipertensión arterial pulmonar. Objetivo: comparar la expresión de PPET-1 y receptores ETA y ETB en pulmón de ovejas y llamas recién nacidas de tierras bajas y altas. Método: evaluar la expresión de PPET-1 y de receptores ETA y ETB a nivel de mRNA por RT-PCR semicuantitativo y a nivel proteico para ambos receptores por inmunoblot, en pulmón de ovejas recién nacidas de tierras bajas (n=5) y altas (n=6) y de llamas recién nacidas de tierras bajas (n=6) y altas (n=5). Resultados: a nivel de mRNA, la expresión de PPET-1 y de los receptores ETA y ETB aumentó en ovejas recién nacidas de tierras altas en comparación con el grupo de tierras bajas. Por otra parte, no hubo diferencias en la expresión de estos mRNA entre llamas recién nacidas de tierras bajas y altas. La expresión de estos receptores a nivel de proteína no pudo ser determinada debido a que los anticuerpos ensayados no permitieron la detección específica de los receptores en los pulmones de ambas especies. Conclusión: el aumento de expresión pulmonar del sistema de ET-1 podría estar implicado en el desarrollo de la hipertensión arterial pulmonar observado en ovejas recién nacidas crónicamente hipóxicas, mientras que la capacidad de mantener sin cambios este sistema en las llamas recién nacidas contribuiría a prevenir el desarrollo de hipertensión arterial pulmonar en esta especie / Proyectos FONDECYT 1010636 y 1050479 (Investigador responsable: Doctor Jorge Aníbal Llanos Mansilla y coinvestigador: Víctor Roberto Reyes Catalán) y 1020599 (Investigador responsable: Víctor Roberto Reyes Catalán y coinvestigador: Doctor Aníbal Llanos Mansilla) de Chile y The Wellcome Trust CRIG 072256 (Investigador responsable: Doctor Jorge Aníbal Llanos Mansilla y coinvestigador: Víctor Roberto Reyes Catalán) de Reino Unido

Resumo não disponível.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T17:59:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 248609.pdf: 584796 bytes, checksum: 8cfe067ea80cee93cf54684419c059c3 (MD5) / The nociceptive effects of Endothelin-1 (ET) are well-known. This peptide is synthesized by cleavage of Big ET-1 by Endothelin Converting Enzyme (ECE), however, Big ET-1 can be also cleaved by mast cell-derived chymase to ET-1(1-31), which can be converted to ET-1 by the enzyme neutral endopeptidase-24.11 (NEP). The present study aimed to assess, pharmacologically, the ability of ET-1(1-31) to induce nociception and mechanical hypernociception in the hind paw of mice and compare its effects with those evoked by ET-1 and Big ET-1. The intra-plantar (i.pl) injection of ET-1 (3 to 30 pmol), ET-1(1-31) (30 to 100 pmol) or Big ET-1 (30 to 100 pmol) induced dose-dependent nociception and hypernociception. Local pretreatment of the animals with thiorphan (NEP inhibitor, 300 nmol, i.pl.) or phosphoramidon (NEP and ECE inhibitors, 100 nmol, i.pl.), reduced nociception induced by ET-1(1-31) (10 pmol) or by ET-1(1-31) and Big ET-1 (30 pmol), respectively. On the other hand, pre treatment with chymostatin (chymase inhibitor, 100 nmol) did not alter the nociception induced by ET-1, ET-1 (1-31) or Big ET-1. Mast cell degranulation by i.pl. injection of compound 48/80 (0.05 to 1 ìg) or OVA (0.05 to 1 ìg) also evoked nociception and mechanical hypernociception. The association of Big ET-1 (30 pmol) with sub-effective doses of compound 48/80 (0.1 ìg) or OVA (0.05 ìg) resulted in potentiation of Big-ET-1-induced nociception by 93.5% e 154%, respectively. Pre-treatment with phosphoramidon (100 nmol) or chymostatin (100 nmol) reduced the nociception induced by Big ET-1 associated with compound 48/80 or OVA, while thiorphan was only able to reduce the nociception induced by the association of Big ET-1 plus compound 48/80 at 1000 nmol. Nociception induced by compound 48/80 (1.0 ìg) and OVA (0.3 ìg) was reduced by pretreatment with phosphoramidon or chymostatin or BQ-123 (selective ETBAB receptor antagonist, 10 nmol), while BQ-788 (selective ETBBB receptor antagonist, 10 nmol) and thiorphan (1000 nmol) reduced only nociception induced by OVA and compound 48/80, respectively. The results of the current study suggest that ET-1, formed via an alternative synthesis pathway, which involves formation of the intermediary peptide ET-1(1-31), contributes significantly to nociception induced by the activation of mast cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Natália Cristina Ramos dos Santos (nataliaguilera3@hotmail.com) on 2009-09-10T12:22:59Z No. of bitstreams: 1 2008_EdmilsonBastosdeMoura.pdf: 1746669 bytes, checksum: c25edd64b2c89dd0421a0aa41d8f1c8b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-10-05T16:32:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_EdmilsonBastosdeMoura.pdf: 1746669 bytes, checksum: c25edd64b2c89dd0421a0aa41d8f1c8b (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-05T16:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_EdmilsonBastosdeMoura.pdf: 1746669 bytes, checksum: c25edd64b2c89dd0421a0aa41d8f1c8b (MD5) Previous issue date: 2008 / Introdução: o estudo da substância vasoconstritora endotelina-1 e de seus receptores A e B, desde sua descoberta em 1988, tem crescido progressivamente nos últimos anos. Isso se deve ao seu reconhecimento como elemento crítico na fisiopatologia de diversas doenças, com destaque para aquelas de acometimento cardiovascular. Sua função na vasorreatividade já é conhecida, bem como sua ação parácrina e autócrina, o que conduz à procura de seus sítios de produção nos diversos tecidos. Essa busca objetiva desvendar a contribuição de cada órgão no processo patológico, e também determinar a participação de tais peptídeos nas modificações sofridas pelo próprio tecido nesse processo (como a deposição de colágeno, ou a neovascularização). Nesse contexto, a valvopatia reumática revela-se uma boa candidata à pesquisa, pelas suas características mudanças estruturais valvares e pela repercussão que impõe à todo o sistema cardiovascular e pulmonar. Objetivo: determinar, mediante técnicas moleculares, a expressão dos genes da endotelina e dos seus receptores em valvas mitrais reumáticas. Metodologia: 27 pacientes submetidos a troca valvar mitral tiveram seu tecido valvar analisado para determinação da presença de genes da ET-1 e seus receptores A e B; foi feita análise histológica e molecular das valvas (divididas em fragmentos M1, M2 e M3) e colhidos dados clínicos e epidemiológicos dos pacientes. Foram divididos em 3 grupos (valvopatia mitral, mitroaórtica, pacientes reoperados). Resultados: O estudo mostrou a manifestação do gene da endotelina-1 em 40,7% dos espécimes e de seu receptor A em todas as amostras, com manifestação minoritária do gene do receptor B (22,2%). Conclusões: todos os pacientes expressaram a presença do gene do receptor A; não houve diferença estatística quanto a gravidade da doença, expressa em classe funcional, e os subgrupos estudados (valvopatas mitrais, mitro-aórticos e pacientes reoperados), ou quanto a expressão dos genes da ET-1 e seus receptores, entre os subgrupos estudados (valvopatas mitrais, mitro-aórticos e pacientes reoperados). ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction: the study of the vasoconstrictor substance endothelin-1 and its receptors A and B, since its discovery in 1988, has grown gradually in the last years. This is due to their recognition as a critical element in the pathophysiology of many diseases, with emphasis on those from cardiovascular involvement. His role in vasorreactivity is already known, as well as its autocrine and paracrine actions, leading to demand for its production sites in various tissues. This search aims to unveil the contribuction of each organ in the pathological process, and also determine the involvement of these peptides in the modifications made by the tissue in the process (as the deposition of collagen, or neovascularization). In this context, rheumatic valve disease proves to be a good candidate to search, due their characteristics valve structural changes and the impact of the whole cardiovascular and pulmonary sistems. Objective: to determine, through molecular techniques, the expression of genes of endothelin and its receptors in rheumatic mitral valves. Methodology: 27 patients undergoing mitral valve replacement had their valve tissue analyzed for determining the presence of genes of ET-1 and its receptors A and B; was made histological and molecular analysis of the valves and collected clinical and epidemiological data of patients. They were divided into 3 groups (mitral valvophaty, mitroaortic, patients reoperated). Results: the study showed the gene expression of enothelin-1 in 40,7% of the samples, and its receptor A in all samples, with minority manifestation of the gene of receptor B (22,2%). Conclusions: all patients expressed the gene of receptor A; there was no statistical difference regarding the severity of illness, expressed in functional class, and the subgroups studied (mitral valvophaty, mitroaortic and reoperated patients), or in the expression of genes of ET-1 and their receptors, among the subgroups studied.

Introdução: A reestenose intra-stent ocorre basicamente por uma resposta proliferativa da parede vascular à lesão. Além de ser um marcador de disfunção endotelial, a endotelina-1 (ET-1) exerce atividade proliferativa sobre as células musculares lisas. Evidências experimentais sugerem que a ET-1 possa contribuir para fisiopatogenia da reestenose. Porém, a relação entre os níveis de ET-1 com o implante de stent coronariano e a reestenose intrastent em humanos não está definida. Objetivo: Avaliar o comportamento dos níveis plasmáticos da ET-1 em pacientes submetidos a implante de stent coronariano e determinar se há associação desses com a ocorrência de reestenose. Métodos: Foram incluídos 41 pacientes (44 stents), encaminhados para revascularização coronariana eletiva com implante de stent, por indicação da equipe assistente. Os níveis séricos de ET-1 foram dosados pelo método de ELISA antes do procedimento, logo após e seis meses após o procedimento, quando se realizou nova angiografia quantitativa para avaliar a presença de reestenose. Os níveis de ET-1 foram comparados nos grupos com e sem reestenose e correlacionados com a perda luminal tardia. Resultados: A incidência de reestenose angiográfica foi de 41%. Ocorreu um aumento significativo da ET-1 logo após o procedimento em ambos os grupos (P<0,001), retornando a valores semelhantes aos basais no sexto mês. Não houve diferença significativa entre os grupos com e sem reestenose quanto aos valores de ET-1 em nenhum dos momentos analisados. Não houve correlação entre os níveis de ET-1 e a perda luminal tardia. Conclusões: Ocorre um aumento significativo dos níveis de ET-1 após o implante de stent, possivelmente por ser a ET-1 um marcador da disfunção endotelial provocada pela lesão. Entretanto, não houve uma associação entre os níveis de ET-1 e a ocorrência de reestenose pós-stent em humanos. / Background: Experimental evidence suggests that endothelin-1 (ET-1) levels may play a role in the occurrence of restenosis following percutaneous revascularization procedures. However, the relationship between serum ET-1 with coronary stent implantation and restenosis in humans is not well defined yet. The objective of this study was to evaluate the serum levels of ET-1 in patients submitted to coronary stenting and to determine if there is an association between ET-1 levels and the occurrence of in-stent restenosis. Methods: 41 patients (44 stents) submitted to elective coronary stent implantation were included in the study. Serum ET-1 levels were measured right before and after the procedure and after 6 months. ET-1 levels were compared in patients with and without restenosis and correlated with late luminal loss. Results: The incidence of restenosis was 41%. A significant increase in ET-1 levels right after the procedure was observed in both groups (P < 0.001), with return to basal values after 6 months. No difference was observed between the groups, with and without restenosis, in ET-1 levels pre-procedure, post-procedure or at 6-months. No correlation was observed between late luminal loss and ET-1 levels. Conclusions: There is a significant increase in ET-1 levels right after coronary stenting, probably as a marker of endothelial dysfunction associated arterial lesion. However, there was no association between ET-1 levels and in-stent restenosis in humans.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:38:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 290484.pdf: 2223179 bytes, checksum: 6cba3254b3fc511eda0220e4973d0485 (MD5) / O presente trabalho reproduziu o modelo experimental descrito por Shimada e Lamotte, (2008), e o utilizou para diferenciar e quantificar as respostas de coceira ou nocicepção à ET-1 na face de camundongos. A histamina causou acessos de coceira com efeito máximo em 50 mg, sem causar movimentos de limpeza. A capsaicina causou nocicepção (movimentos de limpeza facial) na dose máxima de 40 mg, porém, não promoveu acessos de coceira. A co-injeção i.d. de histamina (50 mg) juntamente com capsaicina (10 mg) resultou em diminuição ambas as repostas. A injeção i.d. de ET-1 (3 - 60 pmol) induziu tanto coceira, quanto nocicepção, proporcionais à dose administrada. A coceira induzida pela ET-1 (30 pmol) foi inibida pelo antagonista de receptores ETA BQ-123 (10 nmol, i.d., 5 min antes) e aumentada pelo antagonista de receptores ETB BQ-788 (10 nmol, i.d, 5 min antes). A injeção de BQ-123 não inibiu a nocicepção, porém, a coinjeção de ambos os antagonistas reduziu a hipernocicepçãoà ET-1 causada por BQ-788. A co-injeção com naltrexona (5 mg, i.d.) não alterou a coceira, mas aumentou a nocicepção. Porém os antagonistas seletivos µ (CTOP, 20 nmol) e . (Nor-BNI, 68 nmol) opióides aumentaram os acessos de coceira sem alterarem a nocicepção. Enquanto a coceira causada pela ET-1 foi inibida pelo agonista seletivo µ opióide (DAMGO, 100 nmol), mas não pelo agonista seletivo . opióide (U50488-H, 100 nmol) a nocicepção foi reduzida por ambas as dorgas. A loratadina (10 mg/Kg, i.p., 60 min antes), antagonista dos receptores H1 para histamina reduziu ambas as respostas à ET-1. A análise histológica revelou aumento no número de mastócitos intactos e degranulados na derme, 15 e 30 min após injeção de ET-1. Assim, ambas as respostas à ET-1, neste modelo, são mediadas por receptores ETA e por mastócitos, sendo dependentes de histamina. Este efeito parece ser limitado pela ativação de receptores ETB acoplados a liberaç0ão local de opióides. / This study aimed to replicate the experimental model described by Shimada and Lamotte (2008) and use it to differentiate and quantify the itch and nociception responses promoted by ET-1 in the check of mice. Histamine elicited scratching bouts, with maximal effect at 50 mg, but did not induce wipes bouts. Capsaicin evoked wiping responses in the maximum dose of (40 mg), but did not causes scratching. Responses induced by i.d. co-injection of histamine (50 mg) with capsaicin (10 mg) were reduce in comparison to those promoted by each drug alone. The i.d injection of ET-1 (3 - 60 pmol) induced both sctraching and wiping response, with maximum response at a dose of 60 pmol. Scratching induced by ET-1 (30 pmol) as inhibited by ETA receptor antagonist, BQ- 123 (10 nmol, i.d, 5 min before) and incresead by ETB receptor antagonist, BQ-788 (10 nmol, i.d, 5 min before). The BQ-123 treatment did not inhibit the wiping, but the co-injection of both antagonists reduced hypernociception to ET-1 induced by BQ 788. Co-injected with ET-1, naltrexone (5 mg, i.d.), did not alter the scratching bouts, but increase wiping. However, the selective antagonist as ì opioids (CTOP, 20 nmol) and ê opioid receptor (Nor-BNI, 68 nmol) augmented the scratching bouts without affecting wiping. While the scratching bouts were inhibited only by the selective ì opioid agonist (DAMGO,100 nmol) but not ê selective agonist (U50488-H,100 nmol) the wiping was reduced by both opioid agonist. The treatment with loratadine (10 mg/kg, i.p., 60 min before) reduced both ET-1 induced responses. Cheek skin sections obtained 15 and 30 min after ET-1 i.d. injection showed an increased number of intact and degranulated mast cells. Thus, both responses to ET-1 in this model are mediated by ETA receptors, being mediated by mast cells and histamine-dependent. This effect can be limited by activation of anti-pruritic ETB receptors coupled to local opioid release.

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Introdução: A reestenose intra-stent ocorre basicamente por uma resposta proliferativa da parede vascular à lesão. Além de ser um marcador de disfunção endotelial, a endotelina-1 (ET-1) exerce atividade proliferativa sobre as células musculares lisas. Evidências experimentais sugerem que a ET-1 possa contribuir para fisiopatogenia da reestenose. Porém, a relação entre os níveis de ET-1 com o implante de stent coronariano e a reestenose intrastent em humanos não está definida. Objetivo: Avaliar o comportamento dos níveis plasmáticos da ET-1 em pacientes submetidos a implante de stent coronariano e determinar se há associação desses com a ocorrência de reestenose. Métodos: Foram incluídos 41 pacientes (44 stents), encaminhados para revascularização coronariana eletiva com implante de stent, por indicação da equipe assistente. Os níveis séricos de ET-1 foram dosados pelo método de ELISA antes do procedimento, logo após e seis meses após o procedimento, quando se realizou nova angiografia quantitativa para avaliar a presença de reestenose. Os níveis de ET-1 foram comparados nos grupos com e sem reestenose e correlacionados com a perda luminal tardia. Resultados: A incidência de reestenose angiográfica foi de 41%. Ocorreu um aumento significativo da ET-1 logo após o procedimento em ambos os grupos (P<0,001), retornando a valores semelhantes aos basais no sexto mês. Não houve diferença significativa entre os grupos com e sem reestenose quanto aos valores de ET-1 em nenhum dos momentos analisados. Não houve correlação entre os níveis de ET-1 e a perda luminal tardia. Conclusões: Ocorre um aumento significativo dos níveis de ET-1 após o implante de stent, possivelmente por ser a ET-1 um marcador da disfunção endotelial provocada pela lesão. Entretanto, não houve uma associação entre os níveis de ET-1 e a ocorrência de reestenose pós-stent em humanos. / Background: Experimental evidence suggests that endothelin-1 (ET-1) levels may play a role in the occurrence of restenosis following percutaneous revascularization procedures. However, the relationship between serum ET-1 with coronary stent implantation and restenosis in humans is not well defined yet. The objective of this study was to evaluate the serum levels of ET-1 in patients submitted to coronary stenting and to determine if there is an association between ET-1 levels and the occurrence of in-stent restenosis. Methods: 41 patients (44 stents) submitted to elective coronary stent implantation were included in the study. Serum ET-1 levels were measured right before and after the procedure and after 6 months. ET-1 levels were compared in patients with and without restenosis and correlated with late luminal loss. Results: The incidence of restenosis was 41%. A significant increase in ET-1 levels right after the procedure was observed in both groups (P < 0.001), with return to basal values after 6 months. No difference was observed between the groups, with and without restenosis, in ET-1 levels pre-procedure, post-procedure or at 6-months. No correlation was observed between late luminal loss and ET-1 levels. Conclusions: There is a significant increase in ET-1 levels right after coronary stenting, probably as a marker of endothelial dysfunction associated arterial lesion. However, there was no association between ET-1 levels and in-stent restenosis in humans.

Introdução: A reestenose intra-stent ocorre basicamente por uma resposta proliferativa da parede vascular à lesão. Além de ser um marcador de disfunção endotelial, a endotelina-1 (ET-1) exerce atividade proliferativa sobre as células musculares lisas. Evidências experimentais sugerem que a ET-1 possa contribuir para fisiopatogenia da reestenose. Porém, a relação entre os níveis de ET-1 com o implante de stent coronariano e a reestenose intrastent em humanos não está definida. Objetivo: Avaliar o comportamento dos níveis plasmáticos da ET-1 em pacientes submetidos a implante de stent coronariano e determinar se há associação desses com a ocorrência de reestenose. Métodos: Foram incluídos 41 pacientes (44 stents), encaminhados para revascularização coronariana eletiva com implante de stent, por indicação da equipe assistente. Os níveis séricos de ET-1 foram dosados pelo método de ELISA antes do procedimento, logo após e seis meses após o procedimento, quando se realizou nova angiografia quantitativa para avaliar a presença de reestenose. Os níveis de ET-1 foram comparados nos grupos com e sem reestenose e correlacionados com a perda luminal tardia. Resultados: A incidência de reestenose angiográfica foi de 41%. Ocorreu um aumento significativo da ET-1 logo após o procedimento em ambos os grupos (P<0,001), retornando a valores semelhantes aos basais no sexto mês. Não houve diferença significativa entre os grupos com e sem reestenose quanto aos valores de ET-1 em nenhum dos momentos analisados. Não houve correlação entre os níveis de ET-1 e a perda luminal tardia. Conclusões: Ocorre um aumento significativo dos níveis de ET-1 após o implante de stent, possivelmente por ser a ET-1 um marcador da disfunção endotelial provocada pela lesão. Entretanto, não houve uma associação entre os níveis de ET-1 e a ocorrência de reestenose pós-stent em humanos. / Background: Experimental evidence suggests that endothelin-1 (ET-1) levels may play a role in the occurrence of restenosis following percutaneous revascularization procedures. However, the relationship between serum ET-1 with coronary stent implantation and restenosis in humans is not well defined yet. The objective of this study was to evaluate the serum levels of ET-1 in patients submitted to coronary stenting and to determine if there is an association between ET-1 levels and the occurrence of in-stent restenosis. Methods: 41 patients (44 stents) submitted to elective coronary stent implantation were included in the study. Serum ET-1 levels were measured right before and after the procedure and after 6 months. ET-1 levels were compared in patients with and without restenosis and correlated with late luminal loss. Results: The incidence of restenosis was 41%. A significant increase in ET-1 levels right after the procedure was observed in both groups (P < 0.001), with return to basal values after 6 months. No difference was observed between the groups, with and without restenosis, in ET-1 levels pre-procedure, post-procedure or at 6-months. No correlation was observed between late luminal loss and ET-1 levels. Conclusions: There is a significant increase in ET-1 levels right after coronary stenting, probably as a marker of endothelial dysfunction associated arterial lesion. However, there was no association between ET-1 levels and in-stent restenosis in humans.

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