Submitted by DAIANA CAVALLI null (daiana.cavalli@gmail.com) on 2017-02-17T11:12:38Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO FINALIZADA + FICHA CATALOGRÁFICA DAIANA CAVALLI.pdf: 2334414 bytes, checksum: fb47eeb7d11ed5a1b0e89770fef8b691 (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-02-21T20:10:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cavalli_d_me_sjc.pdf: 2334414 bytes, checksum: fb47eeb7d11ed5a1b0e89770fef8b691 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-21T20:10:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cavalli_d_me_sjc.pdf: 2334414 bytes, checksum: fb47eeb7d11ed5a1b0e89770fef8b691 (MD5) Previous issue date: 2016-12-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os objetivos deste trabalho são: 1) Quantificar por checkerboard a carga microbiana e pelo método de LAL endotoxinas (EU/mL) nas infecções endodônticas primárias; 2) Realizar o monitoramento dos níveis de endotoxinas (EU/mL) e de carga microbiana antes do tratamento, após o preparo biomecânico com sistemas de instrumentação rotatória, reciprocante e híbrida e após o uso da medicação intracanal; 3) Relacionar sinais e sintomas clínicos com níveis de endotoxinas, micro-orgnismos e com complexos bacterianos; 4) Relacionar volumetria dos canais radiculares por meio de TCFC com níveis de endotoxina, micro-organismos e complexos bacterianos. Trinta dentes com infecção endodôntica primária e presença de lesão periapical foram submetidos a TCFC antes do tratamento e avaliados quanto a presença de sinais e sintomas clínicos. Após abertura coronária, foi realizada a coleta inicial nos canais radiculares, e em seguida, procedeu-se com o tratamento endodôntico, sendo os dentes divididos em diferentes grupos experimentais de acordo com o sistema de instrumentação utilizado (n=10): rotatório Mtwo (MTWO), reciprocante Reciproc (REC), e híbrido Genius (GEN). Durante o preparo biomecânico, os canais foram irrigados com 24 mL de NaOCl 2,5%. Foram realizadas coletas do conteúdo dos canais radiculares: logo após a abertura coronária (1 col), após a instrumentação (2 col), e após a MIC por 14 dias, realizada com pasta de hidróxido de cálcio associada a solução salina fisiológica (3 col). A detecção de micro-organimos foi realizada pelo teste checkerboard DNA-DNA hybridization. A quantificação de endotoxinas foi realizada pelo teste cinético cromogênio do lisado de amebócito de Limulus. As volumetrias dos canais radiculares foram realizadas com auxílio do software Nemotec®. Todos os dados foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram a detecção de micro-organismos e endotoxinas em 100% das amostras iniciais, sendo as bactérias C. ochracea e F. nucleatum as mais prevalentes (53%). Após o PBM, os micro-organismos mais encontrados foram F. nucleatum e L. buccalis (50%); e após a MIC C. gracilis (53,3%). Não houve diferença estatística entre os grupos quanto à redução da carga microbiana. Quanto as endotoxinas, logo após o PBM, o grupo que mais reduziu foi o MTWO, seguido por GEN e REC; após a MIC, o grupo que mais reduziu foi o GEN, seguido pelo MTWO e REC, porém todos os grupos se comportaram de maneira semelhante. Dor espontânea foi relacionada com P. nigrescens; dor a percussão com P. gingivalis, V. parvula, S. sputigena, P. nigrescens e E. saburreum; presença de fístula foi relacionada com o complexo laranja, Gram-positivas e anaeróbios facultativos, e micro-organismos E. corrodens, P. micra, C. showae e E. saburreum. O maior volume do canal radicular foi correlacionado fortemente com anaeróbios estritos, com o complexo laranja e o micro-organismo P. micra. O PBM foi efetivo na redução de bactérias e endotoxinas do canal radicular, mas sem diferença estatística entre os três sistemas utilizados. Conclui-se que o PBM com NaOCl 2,5% é eficaz na redução de endotoxinas e na remoção de micro-organimos do canal radicular; sinais e sintomas são relacionados com micro-organismos, assim como a volumetria do canal radicular. / The aims of this study are: 1) Quantify by checkerboard test the microbial load and endotoxins through LAL method (EU/ml) in primary endodontic infections; 2) To monitore levels of endotoxin (EU/ml) and microbial load before treatment, after biomechanical preparation with rotatory, reciprocating and hybrid instrumentation systems, and after use of intracanal medication; 3) To associate clinical signs and symptoms with endotoxin levels, microorganism and bacterial complexes; 4) To relate volumes of root canals through cone beam computed tomography (CBCT), with endotoxin levels, microorganisms and bacterial complexes. Thirty teeth with primary endodontic infection and periapical lesion were submitted to endodontic treatment after CBCT and evaluated the presence of clinical signs and symptoms. After coronary opening, the initial samples were collected to verify the presence of infection in root canals. Then, teeth were divided into different experimental groups according to the instrumentation system used (n=10): rotatory Mtwo (MTWO), reciprocating Reciproc (REC), and hybrid Genius (GEN). During biomechanical preparation, the canals were irrigated with 24 mL of 2.5% NaOCl. Samples were collected: after coronary opening (S1), after the instrumentation (S2) and after intracanal medication for 14 days with calcium hydroxide paste and physiological saline solution (S3). The detection of microorganisms was performed by checkerboard DNA-DNA hybridization technique. The endotoxin quantification was performed by chromogenic kinetic test of the Limulus amoebocyte lysate. The root canal volumetries were performed by Nemotec® software. All data were analyzed statistically. The results showed the detection of microorganisms and endotoxins in 100% of the S1, with the most prevalent bacteria being C. ochracea and F. nucleatum (53%). After biomechanical preparation, the most found microorganisms were F. nucleatum and L. buccalis (50%); And after intracanal medication C. gracilis (53.3%). There was no statistical difference between the groups regarding the reduction of the microbial load. In relation to endotoxins, after biomechanical preparation, the group with greatest reduction was MTWO, followed by GEN and REC; after intracanal medication, the group with greatest reduction was GEN, followed by MTWO and REC, but there was no statistical difference between them. Spontaneous pain was associated to P. nigrescens; tenderness to percussion with P. gingivalis, V. parvula, S. sputigena, P. nigrescens and E. saburreum; sinus tract was related to the orange complex, Gram-positive and facultative anaerobes, and microorganisms E. corrodens, P. micra, C. showae and E. saburreum. The root canal volume was strongly correlated with strict anaerobes, with the orange complex and the P. micra microorganism. Biomechanical preparation was effective in decreasing bacteria and endotoxin, but with no statistical difference were found between the three systems. Microorganisms are related to signs and symptoms and to root canal volume. In conclusion, biomechanical preparation with 2.5% NaOCl was effective on reducing endotoxins and decreasing microorganisms from root canals; signs and symptoms are related to microorganisms as well as root canal volumetry.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-11. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:22Z : No. of bitstreams: 1 000843488.pdf: 1478921 bytes, checksum: aae6e57b8b56e0bb80bad68bcf07de14 (MD5) / A lesão endo-periodontal é caracterizada pela associação da doença endodôntica e periodontal no mesmo elemento dentário. A evolução dessa lesão ocorre pela infecção por microrganismos, na sua grande maioria gram-negativas anaeróbias. O presente estudo teve como objetivo, identificar os microrganismos presentes em lesões endo-periodontais pelo método do DNA-DNA checkerboard hybridization, avaliar os níveis de endotoxinas pelo ensaio LAL e correlacionar com sinais e sintomas clínicos de pacientes com lesões endo-periodontais. Dez pacientes com lesões endo-periodontais foram selecionados do ICT-UNESP, foram coletadas 10 amostras endodônticas e 10 periodontais, as amostras foram armazenadas e posteriormente realizado os ensaios laboratoriais(LAL para endotoxinas e Checkerboard para microbiológico). Os resultados mostraram maiores níveis de endotoxinas na bolsa periodontal com média e desvio padrão de 39096 ± 39312. A média e desvio padrão dos valores de endotoxinas no canal radicular foram 3240 ± 4001 (significativamente menores p = 0,002). O teste de correlação de Pearson mostrou correlação moderada, com p = 0,084. A espécie P. nigrescens foi associada com a microbiota periodontal (p = 0,0198) enquanto na microbiota endodôntica as espécies E. faecium(p =0,0031), P. acnes(p= 0,0325), G. morbillorum(p=0,0108), C. sputigena(p = 0,0031) e L. buccalis(p = 0,0055), foram fortemente relacionadas. Os microrganismos P. intermedia, V parvula e P. endodalis tiveram pequena correlação quando associadas as microbiotas endodônticas e periodontais. O estudo concluiu que a bolsa periodontal apresenta maiores níveis de endotoxinas em relação ao canal radicular. O estudo sugere que a microbiota das lesões endo-periodontais parece a mesma presente em lesões endodônticas e periodontais separadamentes. No entanto,devido a sua grande prevalência, o complexo laranja parece exercer um papel importante neste tipo de lesão / The endo-periodontal lesion is characterized by the association of endodontic and periodontal disease in the same tooth. The evolution of this lesion occurs by the presence of microorganisms with vast majority gram-negative anaerobes. Therefore this study aims to identify the microorganisms in endo-periodontal lesions by DNA-DNA checkerboard hybridization method, evaluate and compare the levels of endotoxins with clinical signs and symptoms. 10 teeth with endo-periodontal lesions in agree with the inclusion criteria were selected from patients in the ICT-UNESP, 10 endodontic and 10 periodontal samples were collected, stored and subsequently performed the laboratory assays. The results showed higher levels of endotoxin in periodontal pockets with mean and standard deviation of 39096 ± 39312. The mean and standard deviation values of endotoxins in root canals were 3240 ± 4001 (significantly lower p = 0.002). The Pearson correlation test showed moderate correlation, with p = 0.084. P. nigrescens species was associated with periodontal microflora (p = 0.0198) whereas in endodontic microbiota the species E. faecium (p = 0.0031), P. acnes (p = 0.0325), G. morbillorum (p = 0.0108) C. sputigena (p = 0.0031) and L. buccalis (p = 0.0055) were strongly correlated. The species P. intermedia, V parvula and P. endodontalis showed low correlation in endo-periodontal microflora. The study concluded that the periodontal pocket has higher levels of endotoxins in relation to the root canal. The microbiota of endo-periodontal lesions seems to be almost the same in their infections separated. The study suggests that the orange complex must play an important role in this type of infection

Orientador: Marcia Carneiro Valera Garakis / Coorientador: Flávia Goulart da Rosa Cardoso / Banca: Claudio Talge Carvalho / Banca: Flaviana Bombarda de Andrade / Resumo: Os objetivos deste trabalho são: 1) Quantificar por checkerboard a carga microbiana e pelo método de LAL endotoxinas (EU/mL) nas infecções endodônticas primárias; 2) Realizar o monitoramento dos níveis de endotoxinas (EU/mL) e de carga microbiana antes do tratamento, após o preparo biomecânico com sistemas de instrumentação rotatória, reciprocante e híbrida e após o uso da medicação intracanal; 3) Relacionar sinais e sintomas clínicos com níveis de endotoxinas, micro-orgnismos e com complexos bacterianos; 4) Relacionar volumetria dos canais radiculares por meio de TCFC com níveis de endotoxina, micro-organismos e complexos bacterianos. Trinta dentes com infecção endodôntica primária e presença de lesão periapical foram submetidos a TCFC antes do tratamento e avaliados quanto a presença de sinais e sintomas clínicos. Após abertura coronária, foi realizada a coleta inicial nos canais radiculares, e em seguida, procedeu-se com o tratamento endodôntico, sendo os dentes divididos em diferentes grupos experimentais de acordo com o sistema de instrumentação utilizado (n=10): rotatório Mtwo (MTWO), reciprocante Reciproc (REC), e híbrido Genius (GEN). Durante o preparo biomecânico, os canais foram irrigados com 24 mL de NaOCl 2,5%. Foram realizadas coletas do conteúdo dos canais radiculares: logo após a abertura coronária (1 col), após a instrumentação (2 col), e após a MIC por 14 dias, realizada com pasta de hidróxido de cálcio associada a solução salina fisiológica (3 col). A detecç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of this study are: 1) Quantify by checkerboard test the microbial load and endotoxins through LAL method (EU/ml) in primary endodontic infections; 2) To monitore levels of endotoxin (EU/ml) and microbial load before treatment, after biomechanical preparation with rotatory, reciprocating and hybrid instrumentation systems, and after use of intracanal medication; 3) To associate clinical signs and symptoms with endotoxin levels, microorganism and bacterial complexes; 4) To relate volumes of root canals through cone beam computed tomography (CBCT), with endotoxin levels, microorganisms and bacterial complexes. Thirty teeth with primary endodontic infection and periapical lesion were submitted to endodontic treatment after CBCT and evaluated the presence of clinical signs and symptoms. After coronary opening, the initial samples were collected to verify the presence of infection in root canals. Then, teeth were divided into different experimental groups according to the instrumentation system used (n=10): rotatory Mtwo (MTWO), reciprocating Reciproc (REC), and hybrid Genius (GEN). During biomechanical preparation, the canals were irrigated with 24 mL of 2.5% NaOCl. Samples were collected: after coronary opening (S1), after the instrumentation (S2) and after intracanal medication for 14 days with calcium hydroxide paste and physiological saline solution (S3). The detection of microorganisms was performed by checkerboard DNA-DNA hybridization technique. The endotoxin quantification was performed by chromogenic kinetic test of the Limulus amoebocyte lysate. The root canal volumetries were performed by Nemotec® software. All data were analyzed statistically. The results showed the detection of microorganisms and endotoxins in 100% of the S1, with the most prevalent bacteria being C. ochracea and F. nucleatum (53%). After biomechanical preparation, the most found microorganisms were F. nucleatum.. (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo / Mestre

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-01T04:23:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_SindeliaSilvade_M.pdf: 2917291 bytes, checksum: a7ddc74ca932328e3ca1c767ce60ad33 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A indústria farmacêutica enfrenta dificuldades com relação a susceptibilidade de seus produtos à contaminação por endotoxinas (ETs). Estas moléculas são lipopolissacarídeos presentes na parede externa de bactérias Gram negativas e devido apresentar alta toxicidade a sua remoção é essencial para administração parenteral segura. Este trabalho visou a remoção de ETs de soro antiofidico, produto farmacêutico que consiste na única forma de tratamento de vítimas de acidentes antiofidicos. A técnica utilizada foi a filtração em membrana reticulada de quito sana por esta demonstrar potencial para a interação com endotoxinas. A membrana de quito sana foi sintetizada em nosso laboratório e apresentou valores de vazão, tensão e área de adsorção (13 rnL.min°1, 0,81 MPa e 15,9 cm2, respectivamente) adequados para a execução dos experimentos. Inicialmente, investigou-se a existência de adsorção de anticorpos do soro na membrana e notou-se que em soluções tamponantes acetato de sódio pH 5,0 e Tris-HCI pH 7,0 (4,25% e 4,67%, respectivamente) obteve-se uma menor adsorção. Em seguida, estudou-se a adsorção de ETs em membranas a partir das soluções tamponantes definidas anteriormente. Neste estudo verificou-se que em tampão Tris-HCI pH 7,0 foram alcançados maiores porcentagens de remoção (97,7% e 99,0% para soluções contaminadas nas concentrações de 150 EU.rnL-1e 1000 EU.rnL-t, respectivamente). Na despirogenação de soluções de soro antiofidico contendo baixa concentração de anticorpos (1 mg.rnL-1) altos valores para a remoção de endotoxinas e recuperação de anticorpos foram observados, chegando a apresentar 1 % de endotoxinas remanescentes e 94,6% de proteína recuperada no produto final inicialmente contaminado com 1000 EU.rnL-1. Os resultados obtidos para a remoção de ETs de soluções de soro contendo alta concentração de anticorpos (cerca de 15 mg.rnL-1), também foram significativos quanto a eficiência de remoção de ETs e recuperação de anticorpos para soluções inicialmente contaminadas com 1000 EU.rnL-1 (98,7% e 82% de ET removida e de proteína recuperada, respectivamente). Além disso, notou-se também que o aumento na concentração de anticorpos resultou em uma maior dificuldade na recuperação destes, sem contudo representar uma dificuldade ao processo de remoção por adsorção / Abstract: Contamination of therapeutic solutions by endotoxins (ET's) are ofmajor concem in the pharmaceutical industry. The ET's are lipopolyscaccharides found in the outer cell membranes of Gram-negative bacteria and are known to cause strong reactions in man after intravenous application. For this reason, the removal of ET's ftom therapeutic solutions is a major challenge in downstream processing. In this work, we studied the removal of ET' s ftom snake antivenom serum, the therapeutic employed on the treatment of snake bite accidents. The technique studied for the this removal was the membrane filtration using cross-linked chitosan membranes. We investigated the chitosan membrane synthesis that presented appropriated features of flowrate, resistance to stress and adsorption area (13 rnL.min-l, 0,81 MPa and 15,9 cm2, respectively). The adsorption of proteins (antibodies) and ET's on the membrane was also investigated. The influence of three different buffer systems (Tris-HCI, sodium acetate and phosphate) on the adsorption of antibodies was studied. The best conditions found (lower antibody adsorption) were: pH 5,0 using acetate buffer, and pH 7,0 using Tris-HCI buffer (4,25% and 4,67% of antibody adsorption, respectively). The adsorption of ET's on the membrane when using the selected conditions was studied. Higher ET clearances were obtained using the Tris-HCI pH 7,0 buffer (97,7% and 99,0% for solutions containing initial ET concentrations of 150 and 1000 EU.rnL- / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Sonia Maria Alves Bueno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-25T20:52:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Acconci_Cesar_M.pdf: 4878752 bytes, checksum: e676df1bdd00cf82ca88caa85c4d33f2 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Apesar das medidas preventivas serem tomadas durante as etapas de produção ou purificação de soros hiperimunes, esses podem vir a ser contaminados com endotoxinas (ET), um tipo de pirogênio liberado pela parede de bactérias Gram-negativas. Endotoxinas produzem uma reação febril quando injetado em humanos ou outros mamíferos., podendo ocasionar a morte em alguns casos. Desta forma, a sua concentração em soluções a serem administradas parenteralmente deve ser reduzida a níveis toleráveis pelo organismo. Neste trabalho, para a remoção de ET de soros antiofidicos, utilizou-se o método de filatrção em membranas de afinidade com o aminoácido histidina imobilizado em fibras ocas de álcool poli etileno vinílico (PEV A). Histidina imobilizada neste tipo de suporte apresentou pseudo-bioafinidade por anticorpos (IgG) do soro e ET. Para evitar competições entre estas duas moléculas pelo ligante imobilizado, foi avaliada a adsorção de anticorpos do soro nestas membranas de afinidade a fim de determinar as melhores condições nas quais ET pudessem ser removidas sem implicar em adsorção significativa de anticorpos do soro antiofidico. As condições menos favoráveis para a adsorção de anticorpos ocorreram nas soluções tamponantes acetato a pH 6,0 e fosfato pH 6,5. Testes foram realizados para determinar qual destas soluções promoveria uma maior remoção de ET, porém em presença de tampão acetato, obteve-se uma redução mais significativa. Encontrada a solução que favoreceu a remoção deste pirogênio, estudou-se a influência das variáveis QF/Qr (vazão do filtrado/vazão da alimentação) e da concentração inicial de ET na etapa de retenção através de um planejamento estatístico experimental. A razão QF/QI não apresentou efeito significativo na retenção de ET e a quantidade deste pirogênio retida nas membranas aumentou de acordo com a sua concentração inicial na solução (quanto maior a concentração de ET (1000 EU/rnL), maior a quantidade retida por unidade de área de membrana (190 EU/cm2». A remoção média de ET alcançada no processo foi de 92%, sequida de uma recuperação total de anticorpos em tomo de 90%. Constatou-se também que a quantidade máxima de adsorção das membranas de afinidade não foi atingida e que para baixas concentrações de pirogênios, a remoção foi quase total (99%), enquanto que o aumento na concentração de anticorpos na solução não provocou alterações na quantidade de ET removida / Abstract: Contamination by pyrogens may occur during the production and purification of hiperimum serum. Endotoxins (ET) or lipopolysaccharides (LPS) are a kind of pyrogens present at the cell wall of gram-negative bacteria. LPS are able to induce fever reaction when injected in to mammals. In some cases, even death may occur. Thus, endotoxins should be removed to be reduced to tolerable levels for the host organismo There are several methods for ET removal as ultrafiltration, adsorption on activated charcoal and on ion-exchange resins, and chromatography. In the present study, adsorption on histidine-linked hollow fiber membrane (His-PEVA) was used to remove ET from anti snake serum. Immobilized histidine presents pseudobioaffinity to horse antibodies (IgG) and to ET. The adsorption of serum IgG in the His-PEV A membranes was analysed to determine the best conditions for ET removal without a significant adsorption of antibodies. The lowest adsorption of IgG was obtained with acetate (pH 6,0) and phosphate (pH 6,5) buffers. Both conditions removed LPS, but the highest efficient was found to acetate buffer. This buffer was used to determine the optimal combination of ET concentration and ratio (QF,/QI) to reach high LPS removal without significant loss of IgG. Removal of 92% of ET and recuperation of90% of IgG was obtained with this processo In low pirogen concentrations, the remotion was 99% and higher antibodies concentrations didn't induce changes in the quantity of removed ET / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Coorientadora: Flávia Goulart da Rosa Cardoso / Banca: Claudio Antonio Talge Carvalho / Banca: José Flávio Affonso De Almeida / Resumo: Os objetivos deste estudo foram: a) Monitorar carga microbiana (UFC/mL) e níveis de endotoxinas (EU/mL) em dentes com infecção endodôntica primária submetidos a tratamento endodôntico em sessão única (SU) e múltipla sessões (SM); b) relacionar (EU/mL) e (UFC/mL) com sinais e sintomas clínicos, volume do canal radicular e da lesão periapical (mm³), através do uso de tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC); c) comparar o volume da lesão periapical (mm³) antes e após um ano de tratamento nos grupos SU e SM; d) comparar a redução do volume da lesão periapical (mm³) após um ano de tratamento com EU/mL e UFC/mL iniciais e antes da obturação; e) comparar taxa de sucesso encontrado após um ano de tratamento Entre SU e SM. Foram selecionados vinte dentes com necrose pulpar e lesão periapical que foram submetidos à TCFC. Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular: após abertura coronária (S1), após instrumentação com sistema reciprocante Reciproc® e irrigação com hipoclorito de sódio 2,5% (NaOCl) (S2), após uso de EDTA 17% (S3) e após medicação intracanal (MIC) a base de hidróxido de cálcio e solução salina fisiológica (S4). Os conteúdos foram avaliados quanto à atividade antimicrobiana por cultura microbiológica e quanto aos níveis de endotoxinas pelo teste Lisado Amebócito de Limulus. Foi realizada a volumetria dos canais radiculares e da destruição óssea periapical através da TCFC utilizando o software Nemotec®. Por fim, foi realizado controle do tratamento en... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was: a) to investigate microbial load (UFC/mL) and endotoxin levels (EU/mL) in primary endodontic infections in permanent teeth submitted to endodontic treatment in single visit (SV) versus multiple visit (MV) treatment; b) to correlate EU/mL and UFC/mL with clinical signs and symptoms and root canal and periapical lesion volume (mm³) using cone bean computed tomography (CBCT); c) to compare the periapical lesion volume (mm³) before and after one year follow up in the SV and MV groups; d) to compare the reduction of periapical lesion volume (mm³) after one year of treatment with EU/mL and CFU/mL in the beginning of the treatment and before the obturation process; E) to compare the success rate after one year follow up between SV and MV.Twenty teeth with pulp necrosis and periapical lesion were selected and submitted to CBCT. Root canal contents were collected: after coronary opening (S1), after the instrumentation with Reciproc® and irrigation with sodium hipoclorite 2,5% (S2), after irrigation with EDTA 17% (S3) and after intracanal medication for 14 days with calcium hydroxide paste and physiological saline solution (S4). Antimicrobial activity was evaluated by microbiological culture and endotoxin levels by the Lysed Amebocyte Limulus test. Root canal volumetry and bone destruction were analyzed through the CBCT using Nemotec® software. Finally, one year follow up visit was conducted to compare both treatments regarding the periapical lesion healing p... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-03-04T19:19:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 305017.pdf: 1234167 bytes, checksum: 2818a0c83b8dc9366e881cc4f0adaab6 (MD5) / A agregação plaquetária ocorre fisiologicamente para ocluir lesões em vasos ou em condições anormais como na disfunção endotelial ou na sepse. Diversos estímulos fisiológicos podem ativar as plaquetas tanto in vivo quanto in vitro. Alguns destes agentes agregantes são colágeno, ADP, 5-HT, trombina, TxA2 entre outros. O óxido nítrico, assim como a prostaglandina I2 (prostaciclina), atua como inibidor fisiológico da agregação plaquetária. O NO atua de diversas maneiras sobre a agregação plaquetária, desde a mobilização de cálcio até a inibição de receptores plaquetários. Um dos mecanismos de ação do NO na inibição da agregação plaquetária é através da ativação da enzima guanilato ciclase solúvel, e conseqüente formação do GMPc. O aumento de GMPc intracelular diminui as concentrações de cálcio intracelular, contribuindo para a inibição plaquetária. Neste estudo, foi avaliado se o NO apresentaria efeito inibitório na agregação plaquetária em ratos mesmo após a sua remoção e se esta inibição seria duradoura. A agregação plaquetária foi induzida por ADP ou colágeno em plasma rico em plaquetas de ratos, e como ferramentas farmacológicas para estudar o efeito do NO, foram usados o GTN (trinitrato de glicerila) e o GSNO (S-nitrosoglutationa), ambos doadores de NO. O inibidor da enzima guanilato ciclase solúvel ODQ foi utilizado para verificar a participação desta enzima na inibição da agregação plaquetária. O presente estudo mostrou que distintos doadores de NO causam perfis diferentes de inibição da agregação plaquetária e que este efeito agudo parece envolver ativação da guanilato ciclase. Outro achado importante e inédito foi que este efeito anti-agregante do NO é duradouro e que, talvez, possa ser explicado por S-nitrosilação de proteínas presentes em plaquetas. Por fim, um choque endotoxêmico induzido por endotoxina bacteriana (LPS) diminuiu o número de plaquetas circulantes e a agregação plaquetária. / Platelet aggregation occurs physiologically to occlude vessels lesions or abnormal conditions as endothelial dysfunction or sepsis. Several physiological stimuli can activate platelets in vivo and in vitro. Some of these aggregating agents are collagen, ADP, 5-HT, thrombin, TxA2 and others. Nitric oxide (NO) and prostaglandin I2 (prostacyclin) work as physiological platelet aggregation inhibitors. NO acts on platelet aggregation in several manners from mobilization of calcium to platelet receptors inhibition. One NO mechanism of action in inhibiting platelet aggregation is through the soluble guanylate cyclase enzyme activation and subsequent cGMP formation. Increased cGMP reduces intracellular calcium concentrations contributing to platelet inhibition. In this study, it was evaluated whether NO would present inhibitory effect in platelet aggregation even after its removal and whether that effect would last. Platelet aggregation was induced by ADP or collagen in platelet rich plasma from rats and as pharmacological tools to study the NO effect, we used the GTN (glyceryl trinitrate) and GSNO (S-nitrosoglutathione), both NO donors. The inhibitor of soluble guanylate cyclase enzyme (ODQ) was used to verify the involvement of this enzyme in the platelet aggregation inhibition. The present study showed that NO donors cause different profiles of platelet aggregation inhibition and this effect seems to involve acute activation of guanylate cyclase. Another important finding was that this unprecedented and anti-aggregating effect of NO is sustained and perhaps can be explained by S-nitrosylation of proteins present in platelets. Finally, the endotoxemic shock induced by bacterial endotoxin (LPS) decreased the number of circulating platelets and platelet aggregation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T05:59:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T22:59:27Z : No. of bitstreams: 1 183470.pdf: 2453428 bytes, checksum: eda21befa64120ff686c47632c0453f7 (MD5) / Tendo em conta que na [sepse] a forma cálcio-independente da óxido nítrico sintase (iNOS) é induzida, que os níveis de [glicocorticóides] circulantes estão aumentados na sepse e que o tratamento com corticóides sintéticos não funciona em pacientes sépticos o objetivo deste estudo foi avaliar [in vivo] a relação entre o [óxido nítrico] e o efeito da dexametasona em animais tratados com LPS. Assim, observamos que: i) o tratamento de animais com endotoxina aumentou os níveis de NOS cálcio-independente no pulmão, baço e rim e os níveis de NOS cálcio-dependente na musculatura esquelética; ii) a injeção prévia de dexametasona inibiu a expressão de NOS nos órgãos estudados, exceto no rim; iii) um doador de NO (SNAP) injetado previamente em animais tratados com dexametasona + LPS decresceu o efeito inibitório do glicocorticóide na expressão das NOS no pulmão, baço e na musculatura esquelética; e iv) o mesmo pré-tratamento com SNAP antes de dexametasona e LPS fez retornar os níveis séricos de NOx e a apoptose de células linfóides do baço aos valores obtidos com a administração de LPS somente. Sabendo da afinidade do NO por sulfidrilas livres presentes em vários alvos proteicos e com base nos nossos resultados, sugerimos que a redução do efeito da dexametasona causado pelo NO é um dos possíveis mecanismos responsáveis pela falha do efeito anti-inflamatório dos glicocorticóides em pacientes sépticos, talvez pela interação do NO com sulfidrilas críticas ao funcionamento do [receptor] de glicocorticóides, via [S-nitrosilação].

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T20:22:00Z : No. of bitstreams: 1 borges_jhs_dr_jabo.pdf: 283985 bytes, checksum: b9c4395bd3d21e16f86c5a71e29c87e1 (MD5) / A endotoxemia é um distúrbio grave na clínica veterinária, sendo uma das principais causas de mortalidade em equinos.Trabalhos recentes relatam a eficácia do azul de metileno na prevenção dos danos impostos pelo óxido nítrico. Este estudo foi concebido com o fito de avaliar os efeitos do azul de metileno sobre as respostas clínica, celular e bioquímica, na endotoxemia experimental em equinos. Os animais foram divididos em três grupos. LPS+AM recebeu LPS e foi tratado com 3mg/kg de azul de metileno 60 minutos após a indução da endotoxemia; LPS+NaCl também recebeu LPS e foi tratado com 3mg/kg de azul de metileno 255 minutos após a indução da endotoxemia, e NaCl+AM que recebeu NaCl e foi tratado com azul de metileno 60 minutos após a infusão do NaCl. Foram realizados exames clínicos e laboratoriais durante 12 horas em quatro momentos. Observou-se aumento de temperatura, leucopenia e aumento no fibrinogênio nos animais pré-tratados com LPS, a partir do momento 90minutos. Não foi possível afirmar se houve efeito benéfico do azul de metileno sobre a resposta dos equinos frente à endotoxemia experimental. / Endotoxemy is a severe disturb in Veterinary Clinics and one of the most important causes of deaths in equine. Recent papers report the efficiency of methylene blue in preventing the damage caused by nitric oxide. The aim of this work was to study the effects of methylene blue in clinic, cellular and biochemistry responses in experimental endotoxemy of horses. The animals were divided in three groups. The group LPS+AM received LPS and was treated with 3mg/Kg of methylene blue 60 minutes after the induction of endotoxemy; LPS+NaCl also received LPS and was treated with 3mg/Kg of methylene blue 255 minutes after the induction of endotoxemy and NaCl+AM that received NaCl and was treated with methylene blue 60 minutes after NaCl infusion. Clinical and laboratorial exams were done in four moments during 12 hours. There was an increase in temperature levels, leucopenia and increase in fibrinogen in the animals treated with LPS, beginning within 90 minutes. It was not possible to affirm if there was any benefit in the use of methylene blue in inflammatory response of horses with induced endotoxemy.

Orientador : Prof. Dr. Aleksander Roberto Zampronio / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 29/04/2016 / Inclui referências : f. 91-116 / Área de concentração / Resumo: A febre pode ser definida como um aumento controlado da temperatura corporal interna de um organismo para níveis acima dos normais, decorrente de uma alteração do ponto de termorregulagem hipotalâmico (set point). Existem diferentes maneiras de mimetizar a febre em animais de laboratório, porém o modelo de administração intraperitoneal de lipopolissacarídeo (LPS) é amplamente utilizado e estável. Uma vez injetada, essa substância se liga à receptores do tipo Toll-Like 4 em células do sistema imune como macrófagos, que passam a sintetizar e liberar diversos pirogênios endógenos, tais como interleucina(IL) -1?, IL-1?, IL-6, IL-8, proteína inflamatória de macrófago (MIP-1?) e o ligante do receptor ativador de fator nuclear ?B (RANKL) entre outros. Estes mediadores induzem a formação e liberação de diversos mediadores centrais como prostaglandinas (PG), endotelina-1 (ET-1), fator liberador de corticotrofina (CRF), substância P (SP), opióides endógenos e endocanabinóides que por sua vez irão atuar em respostas complexas culminando na resposta febril. Entretanto, esses estudos foram todos realizados em animais de experimentação machos. Considerando-se que há evidências de diferenças na resposta inflamatória e febril relacionadas ao gênero em animais experimentais e que mulheres possuem maior incidência de patologias inflamatórias e relacionadas à dor, o objetivo deste trabalho foi avaliar a resposta febril induzida por LPS e por diferentes mediadores que são liberados por este pirogênio em ratas, bem como a influência de hormônios sexuais femininos nestas respostas. Em complementação, investigamos a expressão de ciclooxigenase-2 (COX-2) e de diversos receptores destes mediadores centrais em ratas e a influência da ovariectomia sobre esta expressão. Verificamos que fêmeas ovariectomizadas (OVX) apresentaram temperaturas basais maiores que fêmeas falso-operadas. A injeção de LPS (50 ?g/kg,i.p.) em animais falso-operados induziu uma resposta febril significativamente menor quando comparado com ratas OVX. Estas apresentaram um perfil de resposta febril similar ao observado em machos. O tratamento subcrônico com 17?-estradiol (1 mg/kg, s.c.) em animais OVX reduziu a febre induzida pelo LPS. Fêmeas OVX apresentaram uma redução nos níveis de estradiol plasmático. A administração de LPS aumentou os níveis de testosterona em animais falso-operados e OVX. A administração intracerebroventricular (i.c.v.) de TNF-? (250 ng) e MIP-1? (500 ng) promoveram um aumento da temperatura corporal em animais falso-operados que foi abolida em ratas OVX. Já a administração de IL-1? (3.1 pg) em animais falso-operados e OVX induziu uma resposta febril similar em ambos os grupos. O tratamento com antagonista para RANK, osteoprotegerina, aboliu a resposta febril induzida pelo LPS em animais OVX, porém não modificou essa resposta em animais falso-operados. A administração de LPS aumentou a expressão de receptores RANK em neurônios hipotalâmicos de ratas falso-operadas e este aumento foi reduzido após a ovariectomia. A fim de avaliar o envolvimento de prostaglandinas nestas respostas, observamos que o tratamento com o inibidor não seletivo de ciclooxigenase indometacina reduziu a resposta febril induzida pelo LPS tanto em animais falso-operados e OVX. A injeção de LPS aumentou a concentração de PGE2 no fluido cerebroespinhal tanto em animais falso-operados como em OVX mas os níveis deste eicosanoide foi significativamente maior em animais OVX quando comparado com falso-operados. A administração de LPS também aumentou a expressão de COX-2 no hipotálamo em ambos os grupos mas a expressão desta enzima foi significativamente maior em OVX quando comparado com animais falso-operados. A administração i.c.v. de PGE2 (250 ng) também induziu uma resposta febril maior em animais OVX quando comparado com animais falso-operados. No mesmo sentido, a expressão de receptores de prostaglandinas EP3 aumentou em neurônios hipotalâmicos de ambos os grupos após a administração de LPS mas foi significativamente maior em animais OVX quando comparada à animais falso-operados. A injeção i.c.v. de CRF (2,5?g), ET-1 (1 pg), do agonista opiodérgico morfina (10 ?g) e de substância P (500 ng) induziu febre em animais falso-operados. A ovariectomia reverteu a resposta febril induzida por CRF, ET-1 e substância P mas não aquela induzida por morfina. Por outro lado, a administração de LPS aumentou a expressão de receptores CRFI/II, ?-opioidérgicos, e NK1 sem alterar significativamente a expressão de receptores ETB em animais falso-operados. A ovariectomia não modificou o aumento promovido pelo LPS de receptores de CRF e de opióides, mas um aumento significativo na expressão de receptores ETB e NK1 foi observado em fêmeas OVX que receberam LPS quando comparadas a falso-operadas. No presente estudo discutimos as relações entre estes diferentes mediadores e seus receptores na resposta febril e a modulação destas respostas por hormônios ovarianos. Os dados obtidos sugerem que a resposta febril em fêmeas, embora menor do que em machos envolve mediadores similares. No entanto, a ação de alguns destes mediadores é modificada pela na ausência dos hormônios gonadais apresentando-se mais dependente de prostaglandinas nesta condição que simula a menopausa do que de outros mediadores centrais. Palavras-chave: Febre, Lipopolissacarídeo, Endotoxina, Hormônios sexuais. / Abstract: Fever can be defined as a controlled increase in internal body temperature resulting from a change in the hypothalamic thermoregulatory set point. There are different ways to mimic this phenomenon in laboratory animals, but the model of intraperitoneal administration of lipopolysaccharide (LPS) is widely used and stable. Once injected, LPS binds to Toll-Like type 4 receptor in immune cells such as macrophages, and induces the synthesis and release various endogenous pyrogens such as interleukin (IL) -1?, IL-1?, IL-6, IL -8, macrophage inflammatory protein (MIP-1?) and the receptor-activator of nuclear factor ?B ligand (RANKL), among others. These mediators induce formation and release of several central mediators such as prostaglandins (PG), endothelin-1 (ET-1), corticotrophin-releasing factor (CRF), substance P (SP), endogenous opioids and endocannabinoids which in turn will act in complex ways culminating in the febrile response. However, these studies were all performed in male experimental animals. Considering that there is evidence of differences in inflammatory and febrile response related to gender in experimental animals and that women have a higher incidence of inflammatory disorders and related pain, the aim of this study was to evaluate the fever induced by LPS and different mediators that are released by this pyrogen in female rats as well as the influence of female sex hormones in these responses. Additionally, we investigated the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and various receptors of these central mediators in female rats and the influence of ovariectomy on this expression. We found that ovariectomized (OVX) female rats had higher baseline temperatures than sham-operated female rats. The injection of LPS (50 ?g/kg, i.p.) in sham-operated animals induced a significantly lower febrile response when compared to OVX rats. OVX female rats had a febrile response similar to that observed in males. The subchronic treatment with 17?-estradiol (1 mg/kg, s.c.) in OVX animals reduced the LPS-induced fever. OVX females showed a reduction in plasma oestradiol levels. The LPS administration increased testosterone levels in sham-operated and OVX animals. The intracerebroventricular (i.c.v.) administration of TNF-? (250 ng) and MIP-1? (500 ng) promoted an increase in body temperature sham-operated animals was abolished in OVX rats. However, the administration of IL-1? (3.1 pg) in sham-operated and OVX animals induced a similar febrile response. The treatment with RANK receptor antagonist, osteoprotegerin, abolished the fever induced by LPS in OVX animals but did not modify this response in sham-operated animals. The LPS administration increased expression of RANK receptors on hypothalamic neurons of sham-operated rats, and this increase was reduced after ovariectomy. In order to assess the involvement of prostaglandins in these responses, we observed that the treatment with the nonselective cyclooxygenase inhibitor indomethacin reduced the fever induced by LPS in both sham-operated and OVX animals. The injection of LPS increased the PGE2 concentration in the cerebrospinal fluid in both sham-operated and OVX animals but the levels of this eicosanoid was significantly higher in OVX rats compared to sham-operated ones. The LPS administration also increased COX-2 expression in the hypothalamus in both groups but the expression of this enzyme was significantly higher in OVX female rats compared to sham-operated animals. The i.c.v. administration of PGE2 (250 ng) also induced a higher febrile response in OVX compared to sham-operated animals. Similarly, the expression of prostaglandin EP3 receptors was increased in hypothalamic neurons of both groups after administration of LPS but was significantly higher in OVX compared to sham-operated animals. The i.c.v. injection of CRF (2,5?g), ET-1 (1 pg), opiod receptor agonist morphine (10 g) and substance P (500 ng) induced fever in sham-operated animals. The ovariectomy reversed the febrile response induced by CRF, ET-1 and substance P but not that induced by morphine. Moreover, LPS administration increased the expression of CRFI/II, ?-opioid and NK1 receptors without significantly altering the expression of ETB receptors sham-operated animals. Ovariectomy did not affect the increase in the expression of CRF and ?-opioid receptors promoted by LPS but a significant increase in the expression of NK1 and ETB receptors was observed in OVX females which received LPS as compared to sham-operated rats. In the present study we discuss the relationship between these different mediators and their receptors in the febrile response and modulation of these responses by ovarian hormones. The data suggest that the febrile response in females, although lower than in males involves similar mediators. However, the action of some of these mediators is modified by the absence of gonadal hormones, being more dependent on prostaglandin synthesis in this condition that simulates menopause than other central mediators. Key-words: Fever, Lipopolysaccharide, Endotoxin, Sexual Hormones.