Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Co-Orientadora: Marcia Carneiro Valera / Banca: Gleyce Oliveira Silva / Banca: Adriana de Jesus Soares / Banca: Eduardo Bresciani / Banca: Cláudio Antonio Talge Carvalho / Resumo: O momento ideal para o reimplante de um dente avulsionado é imediatamente após a avulsão, no entanto, isso nem sempre é possível. Uma série de fatores influenciam na viabilidade das células do ligamento periodontal (PDL) contribuindo para acelerar ou minimizar a ocorrência da reabsorção radicular ou anquilose, consequências mais frequentes dos reimplantes. Um destes fatores é o período extra-oral e o tratamento da superfície radicular. O EDTA (ácido etilenodiamino tetracético) a 17% e o ácido hialurônico (AH) são utilizados para tratar a superfície radicular, visando menor ocorrência de reabsorção inflamatória e por substituição. Sendo assim, os objetivos deste estudo foram: a) avaliar a viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal (PDLF) em contato com discos radiculares submetidos ou não ao ressecamento de superfície por diferentes tempos e tratados com EDTA e/ou AH; b) quantificar as citocinas inflamatórias IL-6, IL-8, IL-1β e TNF-α expressas por PDLF; c) observar a adesão de PDLF na superfície do discos radiculares tratados. Foram obtidos 108 discos de dentina e cemento da superfície radicular de dentes bovinos, com 4,5 mm de diâmetro, que foram previamente submetidos a dissolução do ligamento periodontal em solução de hipoclorito de sódio 1% por 15 min. Em seguida os discos foram esterilizados em concentrações decrescentes de álcool (100%,90%,80% e 70%). Os espécimes foram submetidos ou não ao ressecamento radicular por 1h ou 24h e tratados com EDTA associado ou ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The ideal time for reimplantation of an avulsed tooth is immediately after avulsion, however, this is not always possible. A number of factors influence the viability of the cells of the periodontal ligament (PDL) contributing to accelerate or minimize the occurrence of root resorption or ankylosis, more frequent consequences of reimplantation. One of these factors is the extra-oral period and root surface treatment. EDTA (17% ethylenediaminetetraacetic acid) and hyaluronic acid (HA) are used to treat the root surface, aiming for a lower occurrence of inflammatory resorption and replacement. Thus, the objectives of this study were: a) to evaluate the viability of periodontal ligament fibroblasts (PDLF) in contact with root disks submitted to surface dryness at different times and treated with EDTA and / or AH; b) quantify the inflammatory cytokines IL-6, IL-8, IL-1β and TNF-α expressed by PDLF; c) observe the adhesion of PDLF on the surface of the treated root discs. 108 dentin and cementum disks were obtained from the root surface of bovine teeth, 4.5 mm in diameter, which were previously submitted to dissolution of the periodontal ligament in 1% sodium hypochlorite solution for 15 min. Then the disks were sterilized in decreasing concentrations of alcohol (100%, 90%, 80% and 70%). The specimens were submitted to root resection for 1 h or 24 h and treated with EDTA, whether or not associated with hyaluronic acid, placed in 96-well plates where cells from PDLF primary culture... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A candidíase nosocomial é grande preocupação em hospitais terciários em todo o mundo. A infecção ocorre geralmente em pacientes com doenças neoplásicas e degenerativas e é considerada a quarta causa mais freqüente de infecções sangüíneas. O diagnóstico da candidemia ou candidíase hematogênica tem sido problemático porque os sinais e sintomas clínicos são inespecíficos, o que conduz a atrasos no diagnóstico e, conseqüentemente, na terapia antifúngica apropriada. Desenvolvemos a técnica de ELISA de inibição para a detecção do antígeno de 65 kDa em modelo experimental de candidemia e para o diagnóstico de pacientes em UTI com suspeita de candidemia. Anticorpo monoclonal anti-65 kDa foi produzido e testado para a detecção do antígeno comum de 65 kDa produzido por C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis em modelos murinos candidemia. No modelo experimental o antígeno de 65 kDa foi detectado no soro do camundongos em concentrações variando de 0,012 a 3,25 μg / ml. Vinte pacientes com candidemia foram avaliados pelo teste de ELISA de inibição em soros seqüenciais. Dezesseis (80%) pacientes apresentavam o antígeno de 65 kDa em concentrações variando de 0,07 a 5,0 μg/ml. Os soros sequenciais de pacientes com candidemia apresentaram 3 diferentes padrões de antigenemia; 1 – clareamento total da antigenemia; 2-clareamento inicial e recidiva da antigenemia; e 3 – clareamento parcial da antigenemia. Nossos resultados indicam que a detecção da molécula de 65 kDa pode ser muito útil para o diagnóstico de candidemia por C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis. Avaliamos também um possível papel biológico da molécula de 65 kDa. Os ensaios demonstraram que a proteína de 65 kDa tem ligantes de fibronectina de matriz extracelular, tendo um possível papel da adesão do fungo no hospedeiro. / Nosocomial candidiasis is a major concern in tertiary care hospitals worldwide. This infection generally occurs in patients with degenerative and neoplastic diseases and is considered the fourth most frequent cause of bloodstream infections. Diagnosis of candidemia or hematogenous candidiasis has been problematic because clinical signs and symptoms are nonspecific, leading to delays in diagnosis and, consequently, in appropriate antifungal therapy. We developed an inhibition ELISA for detection of a 65 kDa-antigen in an experimental model of candidemia and for diagnosis of patients in ICUs with suspected candidemia. An anti-65 kDa monoclonal antibody was tested for detection of the 65 kDa antigen produced by C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis in murine candidemia models. The 65 kDa-antigen was detected in sera at concentrations ranging from 0.012 to 3.25 μg/ml. A total of 20 human patients with candidemia were then evaluated with the inhibition ELISA using sequential sera. Sixteen (80%) patients had the 65 kDa-antigen in concentrations ranging from 0.07 to 5.0 μg/ml. Sequential sera from patients with candidemia presented 3 different patterns of antigenemia of the 65 kDa molecule; 1- total clearance of antigenemia; 2-initial clearance and relapse of antigenemia; and 3- partial clearance of antigenemia. Our results indicate detection of the 65 kDa protein may be a valuable tool in the diagnosis of candidemia by C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis. We also evaluated a possible biological role of the molecule of 65 kDa from C. albicans. The tests showed that the protein of 65 kDa is bound to fibronectin from extracellular matrix, and a possible role of the adhesion of the fungus in the host. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

MONTEIRO, Daniela Cristina Sensato. Prevalência de Leishmaniose visceral assintomática em doadores de sangue, em área endêmica para leishmaniose no Ceará. 2013. 106 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-05T12:36:48Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_dcsmonteiro.pdf: 3514198 bytes, checksum: 28e5c1aa9adb328d9c9eb888317bd64c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-05T12:37:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_dcsmonteiro.pdf: 3514198 bytes, checksum: 28e5c1aa9adb328d9c9eb888317bd64c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-05T12:37:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_dcsmonteiro.pdf: 3514198 bytes, checksum: 28e5c1aa9adb328d9c9eb888317bd64c (MD5) Previous issue date: 2013 / Visceral Leishmaniasis (VL) is a public health problem worldwide. The urban transmission of Leishmania infantum (L. infantum) has been growing the prevalence of asymptomatic carriers of this parasite in large center. Occurrence of L. infantum transmission by blood transfusion has been reporting around the world, therefore it is important to evaluate the possibility of blood products as a potential risk for Leishmania transmission in endemic urban center. The aim of this study was to determine the prevalence of asymptomatic carriers of L. infantum among blood donors of Hemocenter of Ceará. It was used buffy coat of 438 blood donors, from May through November 2011. The positive samples for HIV, Hepatitis B and C, syphilis, HTLV, and Chagas’ disease were excluded from the study, resulting in 351 samples. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and plasma were separated through Histopaque® centrifugation. For detection of the parasite, PBMC were used to perform the microculture in NNN medium and conventional PCR. Anti-leishmanial antibodies were detected through ELISA. The prevalence of L infantum in blood donors of asymptomatic carriers was high (16.5%), with 43 (12.2%) by serology and 15 (4.3%) by PCR. The DNA sequencing confirmed to be the genus Leishmania in 6 samples analyzed. Promastigote was not detected in micro cultures. The risk of LV transmission by blood transfusion exists. In Brazil, the blood banks do not performed routine screening for Leishmania, thus, the recommendation to include screening for Leishmania or the use of pathogen inactivation technology appears to be essential in endemic areas of VL. / A Leishmaniose Visceral (LV) é considerada um problema de saúde pública mundial. Com a urbanização da Leishmania infantum (L. infantum), tem sido mais crescente o número de portadores assintomáticos, em grandes centros. Em diversos lugares do mundo, tem sido relatada a ocorrência de transmissão de L. infantum por transfusão sanguínea, como nas áreas de transmissão, os portadores assintomáticos representam um grande contingente, é importante avaliar a possibilidade dos hemoderivados serem um risco em potencial, para a transmissão sanguínea de Leishmania. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de infecção assintomática por L. infantum em doadores de sangue do Hemocentro do Ceará. Para estabelecer a prevalência de LV entre doadores de sangue, foi avaliado creme leucocitário de 438 doadores de sangue, de maio a novembro de 2011. As amostras positivas para HIV, Hepatite B e C, Sífilis, HTLV I e II e Doença de Chagas, na triagem do Hemoce, foram excluídas do estudo nos resultados finais, resultando um numero amostral de 351. As amostras foram centrifugadas em Histopaque®, para separação das células mononucleares do sangue periférico (CMSP) e do plasma. As CMSP foram utilizadas para a realização de microculturas, em meio NNN, e também para o PCR convencional. O plasma foi utilizado para a sorologia anti-Leishmania por ELISA, empregando o antígeno de promastigotas de L. chagasi. A prevalência de doadores assintomáticos foi de 16,5%, sendo 43 (12,2%) pela sorologia e 15 (4,3%) pelo PCR. Foi realizado o sequenciamento do DNA de parte das amostras positivas no PCR. Destes, 6 amostras foram sequenciados o DNA e todas confirmaram ser do gênero Leishmania. Não foi isolado promastigota de nenhuma cultura. A possibilidade de risco de transmissão de LV por transfusão existe. Nos bancos de sangue do Brasil não é realizada triagem de rotina para Leishmania, deste modo, parece ser essencial à recomendação de incluir a triagem para Leishmania, nos bancos de sangue de áreas endêmicas de LV.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 56.pdf: 1462155 bytes, checksum: 8fc751b5b82ed7e89810da08aec2279a (MD5) Previous issue date: 2009 / O vírus da hepatite B (HBV) infecta o homem e primatas não humanos. A Organização Mundial da Saúde estima que cerca de dois bilhões de pesos já tiveram contato com o HBV, sendo mais de 350 milhões portadores crônicos, O estudo do HBV teve inicio nos anos 60 com a descoberta do antígeno Austrália, cuja correlação com o antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) foi estabelecida em 1968. Em 1986 foi licenciada a primeira vacina humana contra a hepatite B, utilizando-se a tecnologia de DNA recombinante, para uso geral da população. A potencia das vacinas contra a hepatite B pode ser avaliada através da ação in vivo (camundongos) ou pela determinação do conteúdo antigênico pelo método de avaliação in vitro. O método in vitro pode ser realizado através do uso de kit ELISA comercial ou desenvolvido in house, padronizado e validado conforme os parâmetros estatísticos descritos para a validação de metodologia para biológicos. Durante o desenvolvimento de um projeto institucional em Bio Manguinhos, na FIOCRUZ, quatorze MAbs anti-HBs foram caracterizados quanto a especificidade para o HBsAg e determinação do perfil isotípico sendo identificado como subclasse IgGl. Oito MAbs foram selecionados e avaliados para o estabelecimento de um ELISA in house para avaliação de potencia das vacinas contra o HBV usadas pelo PNI. Dentre estes o MAb CG2 foi selecionado como anticorpo de captura através dos resultados de reatividade para HBsAg das vacinas dos diferentes produtores (Engerix-B, Hepavax-Gene, Butang, Euvax e Quinvaxem). O ensaio ELISA foi otimizado através de vários parâmetros. A padronização foi realizada considerando as condições básicas do ensaio (placa, tampões, saturação, tempo e agitação da incubação. O MAB CG2 como anticorpo de captura (8ug/ml), as concentrações de vacina (0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1 ug/ml, e foi preparado e titulado (1:2500) um conjugado Mab anti-HBsAG9 ligado a peroxidase...

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 eliame_confort_ipec_dout_2009.pdf: 1662597 bytes, checksum: 2845404a7d2a515a0ca6f5220b3ccd21 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Avaliou-se o ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) com antígeno de Leishmania (V.) braziliensis para a investigação diagnóstica da leishmaniose tegumentar americana (LTA) em suas modalidades cutânea (LC) e cutâneomucosa (LCM) e avaliação da resposta terapêutica a partir de amostras de soro de pacientes atendidos no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC). O grupo I, LTA (n=153) foi formado com amostras de soros de pacientes com pelo menos um resultado positivo nos exames parasitológicos ou na reação em cadeia da polimerase (PCR), e o grupo II, controle (n=103), com amostras de indivíduos representativos da população do estudo, com suspeita inicial de LTA, mas com outro diagnóstico confirmado. As seguintes informações foram obtidas dos prontuários: avaliação clínica, dermatológica otorrinolaringológica; intradermorreação de Montenegro IDRM; pesquisa de Leishmania por exame direto e histopatológico, isolamento em meio de cultura, PCR e exames diretos com colorações especiais, inoculação em meios de cultura para fungos e micobactérias. As amostras foram obtidas nas fases de investigação diagnóstica e pós-tratamento em períodos definidos até dois anos. Comparou-se a sensibilidade do ELISA com a de cada um dos métodos parasitológicos, PCR e com a IDRM. Para avaliação da resposta terapêutica, amostras de 75 pacientes que se mantiveram com as lesões cicatrizadas durante o período do estudo constituíram o subgrupo cura terapêutica (ICT) e aquelas de 31 pacientes com recidivas constituíram o subgrupo recidiva pósterapêutica (IRT). A confiabilidade do teste avaliado pelo coeficiente de correlação intraclasse foi de 0,953 (IC 95%) Encontrou-se sensibilidade de 94,7%, especificidade de 95,1% e valores preditivos, positivo e negativo de 96,6% e 92,4% respectivamente. Não houve diferença com significância estatística entre as sensibilidades encontradas no ELISA, na PCR e na IDRM (CI= 95%, qui-quadrado pvalor= 0,140 e p-valor=0,498). O mesmo não ocorreu com os demais métodos parasitológicos (p-valor<0,001). A análise da resposta humoral à terapia demonstrou haver redução da resposta de anticorpos nos pacientes do subgrupo ICT significativamente menor aos seis meses após o tratamento (Wilcoxon; pvalor= 0,016) com 51,8% de pacientes não reatores ao final de dois anos após a terapia. Os demais se encontravam fracamente reatores. Ao contrário, no subgrupo IRT, houve pequena redução seguida de elevação dos valores de densidade otica atingindo patamares mais elevados na ocasião da recidiva. Comparando-se estes subgrupos (ICT e IRT) quanto à intensidade das reações e frequencia de reatores, em cada ponto do acompanhamento, encontraram-se diferenças a partir do sexto mês após a terapia e a cura clínica (Mann-Whitney; p-valor=0,046 e p-valor 0,009). Os resultados demonstram um bom desempenho do ELISA no diagnóstico diferencial de LTA e na avaliação da resposta terapêutica / Indirect Enzyme Immunoassay (EL ISA) was evaluated with Leishmania (V.) braziliensis antigen to the diagnostic workup of American Tegumentary Leishmaniasis (American Tegumentary Leishmaniasis - ATL ) in their cutaneous (CL) and mucocutaneous (MCL) modalities, and about the therapeutic res ponse from samples of serum from patients at the Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas (IPEC). Group I , ACL (n = 153) was formed with sera samples of patients with at least one positive result in parasitological examinations or in polymerase chain r eaction (PCR), and group II , control (n = 103), with samples of individuals representative of the study population, with initial suspicion of ACL, but with other confirmed diagnosis. The following information was obtained from medical records: clinical, de rmatological, and otorrinolaringology evaluation; measure in mm of Montenegro intradermoreaction (IDRM); search for Leishmania by direct examination and histopathology, isolation in culture media, PCR and direct examination with special staining and inocul ation in culture media for fungi and mycobacteria. Samples were obtained during the diagnostic workup and after treatment, in periods defined as up to two years. We compared the sensitivity of the ELISA with each of the individual parasitological methods, the PCR, and the IDRM. To evaluate the therapeutic response, samples of 75 patients who remained with the lesions healed during the study period were the therapeutic healing subgroup ( ICT ) and those 31 patients with recurrences were the post - therapy relaps e subgroup ( IRT ). The reliability of the test assessed by the intraclass correlation coefficient was 0.953 (95% CI). We found a sensitivity of 94.7% and 95.1% specificity, and positive and negative predictive values of 96.6% and 92.4%, respectively. There was no statistically significant difference between the sensitivities found in ELISA, PCR and IDRM (95% CI, Chi - square p - value = 0.140 and p - value = 0.498). The same did not happen with the remainder parasitological methods ( p - value <0.001). The analysis o f the humoral response to therapy have demonstrated a decrease of the antibody response in patients of subgroup ICT , significantly lower at six months after treatment (Wilcoxon; p - value = 0.016), with 51.8% of patients non reactors at the end of two years after the therapy. The others remained mild reactors. Contrarily, in subgroup IRT, a small reduction of the intensity of the reactions, was followed by the increase in the values of optical density that reached higher levels during recidive. Analyzed toget her, the results of samples from the IRT subgroup were significantly higher than those from the ICT subgroup (Mann - Whitney; p - value <0.0001). The intensity of reactions and the frequency of reactors there were reduce from the six months after the therapia sustaining this thendency afther the clinical cure. When comparing the intensity of reactions and frequency of reactors in each point of follow - up there were differences from the sixth month of therapy and clinical cure (Mann - Whitney; p - value = 0.046 and p - value 0.009). The results show a good performance of the ELISA in the differential diagnosis of ACL and the assessment of therapeutic response.

FONSECA, Thiago de Sousa. Síntese quimioenzimática do Mesilato de Rasagilina (Azilect). 2013. 114 f. Dissertação (Mestrado em química)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Elineudson Ribeiro (elineudsonr@gmail.com) on 2016-06-02T20:57:05Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_tsfonseca.pdf: 1927032 bytes, checksum: 84f632bf5ae2356bf2323decdf5dbfd2 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-20T20:39:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_tsfonseca.pdf: 1927032 bytes, checksum: 84f632bf5ae2356bf2323decdf5dbfd2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-20T20:39:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_tsfonseca.pdf: 1927032 bytes, checksum: 84f632bf5ae2356bf2323decdf5dbfd2 (MD5) Previous issue date: 2013 / Here we describe the synthesis of the chemoenzymatic Rasagilina mesylate (Azilect®), a drug used in monotherapy in patients with early stage Parkinson. One of the goals of this project was to carry out the introduction of chirality via biocatalysis processes. We studied two strategies: i) bioreduction of indanone in the presence of a series of yeast and ii) kinetic resolution of rac-indanol using lipases in organic solvent. In strategy (i) was conducted a screening with six yeasts. In all tests the (S)-indanol was obtained in low conversions (9.4 to 13.2%) and enantiomeric excesses of up to 97.6%. Due to low conversion rates, we decided to implement the strategy (ii). After screening of nine commercial lipases, was possible to verify that the Amano lipase AK from Pseudomonas fluorescens and Lipase from Thermomyces lanuginosus immobilized on immobead-150 were the most efficient in the kinetic resolution of rac- indanila acetate in aqueous medium with enantiomeric ratio equals 111.0 and 167.0 respectively. Thus, such lipases were selected for the kinetic resolution of rac-indanol in organic media. The best results of enzyme activity and selectivity were obtained using hexane as a solvent, reaction time of 15 minutes and 30ºC for Amano lipase AK (free enzyme) and 35ºC for Thermomyces lanuginosus, with enantiomeric ratio equals 200 for both cases. Were held assets of Amano AK (free enzyme) in various media and the best results were obtained selectivity and activity in hexane as organic solvent, reaction time of 6 hours and 30 º C using Amano Lipase AK immobilized chitosan in 2.5% low molecular weight; sodium alginate 2.5% and Amano AK lipase immobilized on chitosan 5.0% low molecular weight. The study was conducted reuse of immobilized lipase, Thermomyces lanuginosus being immobilized on immobead-150, the more efficiently compared to the others, since it has provided excellent results in higher reaction cycles. Subsequently, using a Mitsunobu reaction, (S)-indanol was converted to (R)-azidoindano with 70% yield. Then, the (R)-azidoindano was subjected to Staudinger reaction, producing (R)-indanamine in 60% yield. / Neste trabalho descrevemos a síntese quimioenzimática do Mesilato de Rasagilina (Azilect®), um fármaco utilizado na monoterapia de pacientes com Parkinson no estágio inicial. Um dos objetivos deste trabalho foi realizar a introdução da quiralidade via processos de biocatálise. Foram estudadas duas estratégias: i) biorredução da indanona na presença de uma série de leveduras e ii) resolução cinética do rac-indanol utilizando lipases, em solvente orgânico. Na estratégia (i) realizamos uma triagem com seis leveduras. Em todos os testes realizados o (S)-indanol foi obtido com baixas conversões (9,4-13,2%) e excessos enantioméricos de até 97,6%. Devido aos baixos valores de conversão, decidimos aplicar a estratégia (ii). Após uma triagem com nove lipases comerciais foi possível verificar que a Amano lipase AK a partir da Pseudomonas fluorescens e a Lipase a partir da Thermomyces lanuginosus imobilizada em immobead-150 foram as mais eficientes na resolução cinética do rac-acetato de indanila, em meio aquoso, com razão enantiomérica de 111,0 e 167,0, respectivamente. Com isso, tais lipases foram selecionadas para a resolução cinética do rac-indanol em meio orgânico. Os melhores resultados de seletividade e atividade enzimática foram obtidos utilizando hexano como solvente orgânico, tempo reacional de 15 minutos e temperatura de 30ºC para a Amano lipase AK (enzima livre) e 35ºC para a Thermomyces lanuginosus, com razão enantiomérica>200 para ambos os casos. Foram realizadas imobilizações da Amano AK (enzima livre) em vários suportes e os melhores resultados de seletividade e atividade foram obtidos em hexano como solvente orgânico, tempo reacional de 6 horas e temperatura de 30ºC empregando a Amano lipase AK imobilizada em quitosana 2,5% de baixo peso molecular; alginato de sódio 2,5% e a Amano lipase AK imobilizada em quitosana 5,0% de baixo peso molecular. Foi realizado o estudo de reuso das lipases imobilizadas, sendo a Thermomyces lanuginosus imobilizada em immobead-150, a mais eficiente comparada às demais, uma vez que proporcionou excelentes resultados em maiores ciclos reacionais. Posteriormente, empregando uma reação de Mitsunobu, o (S)-indanol foi convertido no (R)-azidoindano com rendimento de 70%. Em seguida, o (R)-azidoindano foi submetido a uma reação de Staudinger, produzindo a (R)-indanamina com 60% de rendimento.

Estudos vem mostrando resultados promissores na utilização da tecnologia de ultrassom para a produção enzimática de biodiesel. Estes são atribuídos ao fenômeno de cavitação gerado pelo equipamento de ultrassom, o qual promove um aumento da miscibilidade entre os reagentes, melhorando a transferência de massa e a taxa da reação, proporcionando reações mais rápidas, bem como um menor consumo de reagentes. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi otimizar as condições da reação de transesterificação do óleo de soja para a produção de biodiesel, utilizando o conceito de combi-lipase em um reator enzimático assistido por ultrassom. Foram otimizadas as condições do sistema de ultrassom: amplitude (30-70 %), pulso (30-70 %) e tempo de pulso (5-15 s), através de um delineamento composto central rotacional (DCCR). Os parâmetros reacionais: concentração de biocatalisador (5, 15 e 25 % em relação a massa de óleo) e razão molar do substrato (3:1, 6:1 e 9:1) foram estudados, assim como a influência do uso do solvente terc-butanol e de um sistema de agitação combinado ao ultrassom, na conversão de ésteres etílicos. Avaliou-se também a eficiência do combi-lipase (75 % Novozym 435 + 10 % Lipozyme TL-IM and 15 % Lipozyme RM-IM) frente ao uso dos biocatalisadores individualmente. Obteve-se como condições ótimas para o sistema de ultrassom: 30 % de amplitude, 50 % de pulso e 15 s de tempo de pulso, 15 % de enzima em relação a massa de óleo e uma razão molar de 3:1 etanol:óleo de soja Os rendimentos de conversão de ésteres etílicos na ausência do solvente terc-butanol foram similares aos resultados obtidos na presença deste reagente, sugerindo que a tecnologia de ultrassom é capaz de eliminar a necessidade do uso de solventes em reações de transesterificação enzimática. Entretanto, o uso combinado de um sistema de agitação com o ultrassom, reduziu o rendimento da reação. Em relação às enzimas, o combi-lipase mostrou melhores resultados para a síntese enzimática de ésteres etílicos, do que o uso das enzimas individualmente. Utilizando as condições ótimas avaliadas neste estudo e o conceito de combi-lipase em um reator assistido por ultrassom, obteve-se uma conversão de ésteres etílicos de aproximadamente 75 % em 5 horas de reação. / Studies have been showing promising results for the use of ultrasonic technology in enzymatic production of biodiesel, which are attributed to the cavitation phenomenon generated by the ultrasound equipment, that promotes increased miscibility between the reactants, improving mass transfer and reaction rate, providing faster reactions as well as a lower consumption of reagents. The aim of this work was to optimize ultrasonic (amplitude, pulse and time pulse) and reaction (molar ratio and enzyme concentration) parameters, as well as the influence of solvent (tert-butanol) and ultrasound combined with mechanical stirring, on the transesterification of soybean oil catalyzed by combi-lipase biocatalyst. It was also evaluated the efficiency of the combi-lipase (75 % Novozym 435 + 10 % Lipozyme TL-IM and 15 % Lipozyme RM-IM), compared to individual lipases. The optimum conditions for transesterification reaction, were observed being: enzyme concentration, 15 % (by oil mass); ethanol:oil molar ratio, 3:1; ultrasonic amplitude 30 %, pulse, 30 % and time pulse, 15 s. The yields of conversion of ethyl esters with and without solvent were very similar, indicating that ultrasonic technology is able to supply the need of solvents in enzymatic transesterification reactions. The combined use of a mechanical stirring system with ultrasound, reduced the yields of conversion of this reaction, while the combi-lipase showed better results than the use of individual lipases for soybean oil transesterification. Using the optimum conditions evaluated in this study and the concept of combi-lipase in an ultrasonic-assisted batch reactor, led to conversions of ethyl esters of about 75% in 5 hours.

Orientador: Prof. Dr. Hugo Barbosa Suffredini / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2016. / O presente trabalho apresenta os estudos da determinacao de pesticidas organofosforados em um sistema interfacial do tipo agua/oleo de soja, a partir da inibicao enzimatica da Fosfatase acida co-imobilizada com Glicose Oxidase em eletrodo modificado com azul da Prussia. Testes inciais sobre a eficiencia da capacidade eletrocatalitica do filme de Azul da Prussia foram feitas a fim de se estabelecer o potencial de trabalho para as deteccoes de glicose 6-fosfato. As analises em fase aquosa retornaram limites de deteccao e quantificacao de 0,443 e 1,478 mol L-1, respectivamente. A sensibilidade do metodo foi calculada como sendo igual a 0,0445. Em relacao ao testes na interface oleo/agua, os limites de deteccao e quantificacao foram de 0,206 e 0,6872 mol L-1 e a sensibilidade do metodo foi encontrada como sendo igual a 0,035. A inibicao enzimatica foi observada a partir da exposicao do biossensor ao pesticida metil paration por 10, 20 e 30 minutos em fase aquosa e no sistema interfacial. Obervou-se nessas analises a eficiencia deste biossensor em detectar tal pesticida diretamente em oleo de soja a partir da aplicacao da tecnica eletroquimica de interface oleo/agua. / This work is related to the detection of organophosphorus pesticides in a water/oil interfacial system by determining the enzymatic inhibition of acid phosphatase co-immobilized with Glucose Oxidase in a modified electrode with Prussian blue. Initial efficiency tests concerning the electrocatalytic capacity of Prussian blue film were carried out, aiming to establish the working potential related to the detection of glucose 6-phosphate. The aqueous phase analyses returned limits of detection and quantification of 0.443 and 1.478 mol L-1, respectively. The sensitivity of the method was calculated as being equal to 0.0445. Concerning the tests in oil/water interface, limits of detection and quantification were calculated as 0.206 and 0.6872 mol L-1 and the sensitivity of the method was obtained as 0.0035. The enzymatic inhibition of the biosensor was observed after a methyl parathion pesticide exposure of 10, 20 and 30 minutes in the aqueous phase and the interfacial system. It was possible to observe that the efficiency of the biosensor on the detection of the pesticide directly into soybean usin the oil/water interface electrochemistry as the main tool.

Orientador: Prof. Dr. Wanius José Garcia da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2016. / A hidrolise enzimatica da celulose e realizada pela acao sinergica de pelo menos tres tipos de celulases distintas: endoglucanases, exoglucanases e ¿À.glicosidases. As endoglucanases e celobiohidrolases sao frequentemente inibidas pelo aumento da concentracao de celobiose (dimero de glicose) no meio reacional. As ¿À-glicosidases sao enzimas que clivam celobiose em monomeros de glicose. Portanto, as ¿À-glicosidases sao essenciais ao processo de hidrolise da celulose por impedirem o acumulo de celobiose e, assim, evitar a diminuicao da taxa de hidrolise. Processos de pre-tratamento da biomassa lignocelulosica sao empregados, antes da reacao de hidrolise enzimatica da celulose, a fim de retirar a fracao de lignina e aumentar a taxa de conversao da celulose em glicose. Porem, estes processos de pre-tratamento da biomassa lignocelulosica nao sao 100% eficientes na remocao da lignina. Estudos previos mostraram que a adicao de lignina a celulose pura pode causar a reducao da liberacao de acucar em valores superiores a 60%. Assim, neste estudo, nos caracterizamos a adsorcao nao produtiva da enzima ¿À-glicosidase da familia GH1 da bacteria Thermotoga petrophila (TpBGL1) em ligninas extraidas de diferentes biomassas (cana-de-acucar e eucalipto). Em pH 7 e 6, nossos resultados indicaram que a repulsao eletrostatica enfraquece a adsorcao nao produtiva de TpBGL1 em ligninas. Contudo, em pH 4 a atracao eletrostatica fortalece a adsorcao nao produtiva. Alem disso, o aumento da temperatura de 25 oC para 70 oC nao resultou em um aumento significativo da adsorcao de TpBGL1 em ligninas, provavelmente porque nao ocorre um aumento significativo de regioes hidrofobicas na estrutura da enzima expostas ao solvente. Todas as informacoes obtidas neste estudo poderao ser uteis para aplicacoes biotecnologicas no campo de conversao de polissacarideos estruturais em bioenergia. / The enzymatic hydrolysis of cellulose to glucose requires at least three types of enzymes working synergistically: endoglucanases that randomly cleave the â-1,4-glycosidic linkages of cellulose, cellobiohydrolases which cleave off cellobiose units from the reducing or nonreducing end of cellulose chain, and â-glucosidases responsible for hydrolysis of the released cellobiose to glucose. Endoglucanases and cellobiohydrolases are normally inhibited by cellobiose, therefore, â-glucosidases are essential to avoid the decrease the hydrolysis rates of cellulose over time due to cellobiose accumulation. The presence of residual lignin after pretreatments may affect negatively the enzymatic hydrolysis of cellulose to glucose. Cellulases bind to lignin, deactivating the enzymes and reducing the overall enzymatic activities. In this study, we examined the non-productive adsorption of one â-glucosidase from Thermotoga petrophila, belonging to the family GH1, on the lignin preparations from both sugarcane (grasses) and eucalyptus (hardwood). GH1 â-glucosidase adsorption onto lignins was found to be strongly pH-dependent, suggesting that the adsorption is electrostatically modulated. At pH 7 and 6, electrostatic repulsion weakens the non-productive adsorption of GH1 â-glucosidase to lignins. However, at pH 4, attractive electrostatic interactions strengthen the non-productive adsorption of GH1 â-glucosidase to lignins. Finally, the increase of temperature did not result in the increase of GH1 â-glucosidase adsorption, probably because there is no significant increase in hydrophobic regions in the GH1 â-glucosidase structure. These studies can be useful in the field of plant structural polysaccharides conversion into bioenergy.

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:33Z : No. of bitstreams: 1 000849246.pdf: 1143194 bytes, checksum: 654ce47006b730979d6caa6ac9634a32 (MD5) / Sistemas de manejo do solo, assim como a aplicação de adubos podem promover alterações sobre atividade de microrganismos no solo. Nesse sentido, quatro experimentos foram executados com o objetivo de avaliar a atividade respiratória microbiana (ARM), o carbono da biomassa microbiana (CBM), o quociente metabólico (q CO2), o carbono orgânico total (COT), o nitrogênio total (NT), o nitrogênio da biomassa microbiana (NBMS), e a atividade enzimática da urease (AEU), desidrogenase (AED) e amilase (AEA) em solos provenientes de áreas com históricos de manejo e adubação (esterco bovino e ureia). O primeiro experimento foi constituído por plantio de milho como cultura de verão em sistema convencional com adubação com ureia (PC M), nas doses: 0, 90 e 180 kg ha-1 de N; o segundo, por plantio de milho no verão em sistema convencional adubado com esterco bovino (PC E), nas doses: 0, 5 e 60 Mg ha-1; e o terceiro e quarto, por plantio direto com sucessão milho/ milho (PD M/M) e leguminosa/ milho (PD L/M), respectivamente, ambos adubados com ureia, nas mesmas doses do primeiro experimento. O sistema de plantio direto com sucessão leguminosa/ milho é o que melhor propicia condições favoráveis ao desenvolvimento de microrganismos no solo. O plantio convencional adubado com esterco bovino apresenta maior atividade microbiana em relação ao plantio convencional adubado com ureia. As doses de N na forma de ureia proporcionam decréscimo da atividade de microrganismos em sistema de plantio direto com sucessão leguminosa/ milho e acréscimo em plantio direto com sucessão milho/ milho. A atividade de microrganismos no solo aumenta com o incremento das doses de esterco bovino / Soil management systems, as well as the application of fertilizers may promote changes on microorganism activity in the soil. In this regard, four experiments were performed in order to evaluate the microbial respiration (MR), the microbial biomass carbon (MBC), metabolic quotient (q CO2), total organic carbon (TOC), total nitrogen (TN), microbial biomass nitrogen (NBM), and the enzymatic activity of urease (UEA), dehydrogenase (DEA) and amylase (AEA) in soils from areas with a history of management and fertilization (cattle manure and urea). The first experiment consisted of planting maize as a summer crop in conventional tillage system with urea fertilization (CT U), at the rates: 0.90 and 180 kg ha-1 N; the second, of planting maize in summer in conventional tillage fertilized with cattle manure (CT M), at the rates: 0.5 and 60 Mg ha-1; and the third and fourth consisted of no-tillage with maize/maize (NT M/M) and legumes/maize (NT L/M) cover crops, respectively, both fertilized with urea, at the same rates of the first experiment. The no-tillage system with legumes/maize cover crops is the one that best provides favorable conditions for microorganism development in the soil. The conventional tillage fertilized with cattle manure has a higher microbial activity compared to the conventional tillage fertilized with urea. The N rates in the form of urea provide decreased microorganism activity in no-tillage system with legumes/maize cover crops and increase in no-tillage with maize/maize cover crops. The microorganism activity in the soil increases with increasing rates of cattle manure