Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O aumento da poluição/degradação ambiental tem sido observado com uma crescente preocupação pelas comunidades globais, considerando como sua principal resultante os problemas de saúde e perdas significativas dos sistemas naturais. Dentre os contaminantes, os metais pesados vêm obtendo destaque por sua toxicidade e acumulação nas cadeias tróficas. Dentre os métodos de remoção/minimização de metais, a biorremediação vem ganhando espaço como alternativa viável para o tratamento de ambientes poluídos. O cádmio é um metal de altíssima toxicidade, e induz alterações celulares, que atingem a morfologia, bem como a atividade de polímeros e sistemas enzimáticos dos sistemas vivos. Contudo, alguns sistemas exibem tolerância á presença do cádmio e o estudo dessas modificações poderá fornecer dados importantes para contribuir com a biorremediação de metais pesados. Dessa formal, a presente proposta visa avaliar o comportamento de enzimas oxidativas, bem como proteínas totais, polifosfatos e estrutura celular e sorção do íon metálico em Aspergillus nidulans como resposta ao crescimento em presença de 1mM, 2mM e 3mM de cádmio. Os resultados servirão como elemento de base para o entendimento dos mecanismos metabólicos associados á sobrevivência e manutenção e viabilidade celular, que podem ser aplicados em protocolos de biorremediação de ambientes contaminados com metais pesados. Com isso, a fim de uma melhor compreensão do potencial tóxico de um componente ambiental e seus efeitos sobre a biota local, é necessária um visão ampla que envolva conhecimentos relacionados à genética, proteômica, metabolismo celular e de níveis de organização biológica mais elevada, a fim de tornar este tipo de estudo com biomarcadores uma ferramenta fundamental para o manejo e conservação do meio ambiente. / Increased pollution / environmental degradation has been observed with a growing concern for global communities , considering its main resulting health problems and significant losses of natural systems . Among the contaminants , heavy metals have been gaining prominence for its toxicity and accumulation in food chains . Among the methods of removing / minimizing metals , bioremediation is gaining momentum as a viable alternative for the treatment of polluted environments . Cadmium is a metal of high toxicity , and induces cellular changes that affect the morphology and activity of polymers and enzyme systems of living systems . However , some systems exhibit tolerance to the presence of cadmium and the study of these changes may provide important data to contribute to the bioremediation of heavy metals . This formal, this proposal aims to evaluate the behavior of oxidative enzymes and total proteins , polyphosphates and cellular structure and sorption of metal ion in Aspergillus nidulans in response to growth in the presence of 1 mM , 2 mM and 3 mM cadmium. The results will serve as input for understanding the metabolic mechanisms associated with survival and maintenance and cell viability , which can be applied in bioremediation of heavy metal contaminated environments protocols . Thus , in order to better understand the potential toxicity of an environmental component and its effects on local biota , one broad view is needed that involves knowledge related to genetics, proteomics , cellular metabolism and higher levels of biological organization, order to make this type of study biomarkers with an essential tool for the management and conservation of the environment .

MACIEL, V. T. Qualidade e metabolismo antioxidante em frutos de clones de aceroleira armazenados a 4 e 8 ºC. 2012. 125 f. Tese (Doutorado em Agronomia/Fitotecnia) - Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-08-04T23:30:58Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_vtmaciel.pdf: 1903190 bytes, checksum: c251cdbf3d56d048bcd0af2f20cc28e9 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2014-08-06T20:45:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_vtmaciel.pdf: 1903190 bytes, checksum: c251cdbf3d56d048bcd0af2f20cc28e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-06T20:45:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_vtmaciel.pdf: 1903190 bytes, checksum: c251cdbf3d56d048bcd0af2f20cc28e9 (MD5) Previous issue date: 2012 / The present work aimed to study the effect of fruit storage of six clones of acerola (BRS 152 BRS 235 BRS 236 BRS 237 BRS 238 and II47/1) at temperature below the temperature minimum security (TMS), analyzing the effects on fruit quality, the content of bioactive compounds and enzyme activity. The fruits were harvested at the beginning of ripening stage on the experimental field of Embrapa Tropical, in the city of Pacajus being packed in plastic trays involved with PVC film, which were stored in cold storage at temperatures of 4 °C and 8 °C for up to 12 days. Every three days samples were withdrawn (tray containing about 180 g of fruit) for carrying out analyzes, and the fruits are then subjected to a processing multiprocessor 1 mm screen to obtain the pulp. The experimental design was completely randomized in factorial scheme 6 x 5 with three replications, with the first factor corresponding to six clones of acerola and the second one corresponding to the five times of fruit storage (0, 3, 6, 9 and 12 days). The data were subjected to analysis of variance and, when the interaction between the two factors was significant, they were subjected to regression analysis; when there was no significant interaction, the means were compared by Tukey’s test at 5% of probability. To assess the quality of fruits, it was analyzed their physical (strength, weight loss and color) and physico-chemical and chemical characteristics (pH, soluble solids, titratable acidity and total soluble sugars). As a result, it was observed that the characteristics of the fruit stored at 4 °C to 8 °C were practically the same, except with respect to mass loss, which was 31% lower at 4 °C. Therefore, in general, the fruit storage at 4 °C did not affect the quality parameters of fruits, compared to those stored in the TMS to the acerola (8 °C). Regarding the content of bioactive compounds (ascorbic acid, carotenoids and anthocyanins), the fruit stored at 4 °C, generally did not differ from that of the fruit stored at 8 °C. There was a trend towards a decrease in the ascorbic acid content during storage at both temperatures, a result also observed for the anthocyanins to 8 °C. On the other hand, the carotenoid content increased at 4 °C and did not change with time of storage at 8 °C. The fruits of clone II47/1 had the higher contents of ascorbic acid, carotenoids and anthocyanins in the two storage temperatures. In general the phenol oxidizing enzymes (polyphenol oxidase and guaiacol peroxidase) of fruit clones stored at 4 and 8 °C had similar behavior during cold storage, and the fruits of clones II47/1 and BRS 152 had the higher enzyme activity during storage at both temperatures The study about the antioxidant enzymes (superoxide dismutase catalase and ascorbate peroxidase) revealed that fruits stored at 4 °C showed respectively activity values of superoxide dismutase and catalase 263% and 37% on average higher than those stored at TMS for acerola (8 °C) These results suggest that the fruits storaged at 4 °C are under oxidative stress Catalase was the main hydrogen peroxide removing enzyme in fruit which activity increased after 6 days of storage The results suggest that clones II47 / 1 and BRS 152 are resistant storage conditions at temperatures 4 and 8 °C. / O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito do armazenamento dos frutos de seis clones de aceroleira (BRS 152, BRS 235, BRS 236, BRS 237, BRS 238 e II47/1) à temperatura abaixo da temperatura mínima de segurança (TMS), analisando os efeitos na qualidade dos frutos, no conteúdo de compostos bioativos e na atividade enzimática. Os frutos foram colhidos no início do estádio de maturação, no campo experimental da Embrapa Agroindústria Tropical, na cidade de Pacajus, sendo acondicionados em bandejas de plástico envolvidas com filme de PVC, as quais foram armazenadas em câmara fria às temperaturas de 4 e 8 ºC por até 12 dias. A cada três dias foram retiradas amostras (bandejas contendo cerca de 180 g de frutos) para realização das análises, sendo os frutos, em seguida, submetidos a um processamento em multiprocessador com peneira de 1 mm para obtenção da polpa. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 6 x 5, com três repetições, sendo o primeiro fator os seis clones de aceroleira e o segundo os tempos de armazenamento dos frutos (0, 3, 6, 9 e 12 dias). Os dados foram submetidos à análise de variância e, quando a interação entre os dois fatores foi significativa, eles foram submetidos à análise de regressão; quando não houve interação significativa foi realizado o teste de Tukey a 5%. Para avaliar a qualidade dos frutos, foram analisadas as características físicas (firmeza, perda de massa e cor) e físico-químicas e químicas (pH, sólidos solúveis, acidez titulável e açúcares solúveis totais). Como resultado, foi observado que tais características dos frutos acondicionados a 4 e 8 ºC foram praticamente as mesmas, exceto com relação à perda de massa que foi 31% menor a 4 ºC. Portanto, de modo geral, o armazenamento dos frutos a 4 ºC não comprometeu os parâmetros de qualidade dos frutos, quando comparados com aqueles armazenados na TMS para a acerola (8 °C). Com relação ao conteúdo dos compostos bioativos (ácido ascórbico, carotenoides e antocianinas) dos frutos armazenados a 4 ºC, de modo geral, ele não diferiu muito daquele dos frutos armazenados na temperatura de 8 °C. Houve uma tendência de queda nos teores de ácido ascórbico durante o armazenamento nas duas temperaturas, resultado também observado para os teores de antocianinas a 8 ºC. Por outro lado, os de carotenoides apresentaram tendência de aumento à 4 ºC, mas não variaram com o tempo de armazenamento a 8 °C. O clone II47/1 foi o que apresentou frutos com maiores teores de ácido ascórbico, carotenoides e antocianinas nas duas temperaturas de armazenamento. De modo geral, as enzimas oxidativas de fenóis (polifenoloxidase e peroxidase do guaiacol) dos frutos dos clones armazenados a 4 e 8 °C apresentaram comportamentos semelhantes durante o acondicionamento refrigerado. O estudo com as enzimas antioxidativas (dismutase do superóxido, catalase e peroxidase do ascorbato) revelou que os frutos armazenados a 4 ºC apresentaram, respectivamente, valores de atividade da dismutase do superóxido e da catalase 263% e 37%, em média, maiores que aqueles armazenados na TMS para a acerola (8 ºC). Tais resultados sugerem que a 4 °C os frutos estão sob estresse oxidativo. A catalase foi a principal enzima removedora de peróxido de hidrogênio nos frutos, tendo sua atividade intensificada após o 6º dia de armazenamento. Os resultados sugerem que os clones II47/1 e o BRS 152 são resistentes as condições de armazenamento nas temperaturas 4 e 8 °C.

Made available in DSpace on 2017-06-01T18:20:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ana_claudia_claudina_nascimento_parte1.pdf: 27305878 bytes, checksum: 527cea9fbcd120e48c6f54d11987d84b (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / Increased pollution / environmental degradation has been observed with a growing concern for global communities , considering its main resulting health problems and significant losses of natural systems . Among the contaminants , heavy metals have been gaining prominence for its toxicity and accumulation in food chains . Among the methods of removing / minimizing metals , bioremediation is gaining momentum as a viable alternative for the treatment of polluted environments . Cadmium is a metal of high toxicity , and induces cellular changes that affect the morphology and activity of polymers and enzyme systems of living systems . However , some systems exhibit tolerance to the presence of cadmium and the study of these changes may provide important data to contribute to the bioremediation of heavy metals . This formal, this proposal aims to evaluate the behavior of oxidative enzymes and total proteins , polyphosphates and cellular structure and sorption of metal ion in Aspergillus nidulans in response to growth in the presence of 1 mM , 2 mM and 3 mM cadmium. The results will serve as input for understanding the metabolic mechanisms associated with survival and maintenance and cell viability , which can be applied in bioremediation of heavy metal contaminated environments protocols . Thus , in order to better understand the potential toxicity of an environmental component and its effects on local biota , one broad view is needed that involves knowledge related to genetics, proteomics , cellular metabolism and higher levels of biological organization, order to make this type of study biomarkers with an essential tool for the management and conservation of the environment . / O aumento da poluição/degradação ambiental tem sido observado com uma crescente preocupação pelas comunidades globais, considerando como sua principal resultante os problemas de saúde e perdas significativas dos sistemas naturais. Dentre os contaminantes, os metais pesados vêm obtendo destaque por sua toxicidade e acumulação nas cadeias tróficas. Dentre os métodos de remoção/minimização de metais, a biorremediação vem ganhando espaço como alternativa viável para o tratamento de ambientes poluídos. O cádmio é um metal de altíssima toxicidade, e induz alterações celulares, que atingem a morfologia, bem como a atividade de polímeros e sistemas enzimáticos dos sistemas vivos. Contudo, alguns sistemas exibem tolerância á presença do cádmio e o estudo dessas modificações poderá fornecer dados importantes para contribuir com a biorremediação de metais pesados. Dessa formal, a presente proposta visa avaliar o comportamento de enzimas oxidativas, bem como proteínas totais, polifosfatos e estrutura celular e sorção do íon metálico em Aspergillus nidulans como resposta ao crescimento em presença de 1mM, 2mM e 3mM de cádmio. Os resultados servirão como elemento de base para o entendimento dos mecanismos metabólicos associados á sobrevivência e manutenção e viabilidade celular, que podem ser aplicados em protocolos de biorremediação de ambientes contaminados com metais pesados. Com isso, a fim de uma melhor compreensão do potencial tóxico de um componente ambiental e seus efeitos sobre a biota local, é necessária um visão ampla que envolva conhecimentos relacionados à genética, proteômica, metabolismo celular e de níveis de organização biológica mais elevada, a fim de tornar este tipo de estudo com biomarcadores uma ferramenta fundamental para o manejo e conservação do meio ambiente.

A ocorrência do ácaro vermelho das palmeiras (AVP), Raoiella indica Hirst (Acari: Tenuipalpidae), foi relatada no Novo Mundo em 2004 e desde então este ácaro tem colonizado várias espécies de aceráceas e musáceas, assim como plantas ornamentais de outras famílias nas ilhas do Caribe, Florida (USA), Venezuela, Brasil e Colômbia. Desde aquele primeiro relato, essa espécie tem produzido consideráveis perdas econômicas em coqueiro nos países onde foi encontrada, o que tem conduzido a um interesse cada vez maior em se conhecer o impacto da praga às plantas em que este ácaro tem sido encontrado. Com o objetivo de conhecer aspectos bioecológicos do AVP na Venezuela foram feitas amostragens para determinar a distribuição geográfica nesse país assim como as plantas hospedeiras e inimigos naturais com os quais a praga tem sido encontrada. A biologia da praga foi estudada em plantas ornamentais e em espécies de palmeiras nativas do Neotrópico, para avaliar o seu potencial em causar dano a estas plantas. Além disso, foi estudada sua distribuição intra-planta, sua flutuação populacional em plantios comerciais de coqueiro e também as variações na expressão das enzimas oxidativas (POD e PPO) e o grau de peroxidação de lipídeos em genótipos de coqueiro, como respostas à alimentação deste ácaro. Foram verificados altos níveis populacionais do AVP em plantios comerciais de coqueiro e em outras plantas crescendo naturalmente no litoral na Venezuela. Em apenas oito espécies de Arecaceae, uma de Musaceae e uma de Strelitziaceae foram verificados todos os estágios de desenvolvimento do AVP, sugerindo que este se desenvolve e se reproduz nestas plantas. O ácaro fitoseídeo Amblyseius largoensis (Muma) foi o predador mais frequentemente associado com o AVP em todos os locais estudados. Maiores densidades do AVP foram observadas nas regiões mediana e basal das folhas coletadas nos estratos mediano e basal da copa da planta. Em 2010, os níveis populacionais do AVP foram mais elevados que em 2011, aparentemente em função dos níveis menores de precipitação naquele ano. O AVP conseguiu se desenvolver sobre as espécies de plantas ornamentais, mas não nas espécies de arecáceas nativas do Novo Mundo. Com relação às enzimas oxidativas, as atividades das POD, PPO e a peroxidação de lipídeos foram maiores em plantas infestadas dos cultivares Anão Amarelo da Malásia (AAM) e Gigante do Caribe (GC) quando comparadas com os respectivos controles. Além disso, maiores atividades de POD e PPO foram detectadas no cultivar AAM que no cultivar GC, tanto em plantas infestadas quando não infestadas. Em contraste, maior peroxidação de lipídeos foi verificada em plantas do cultivar GC infestadas. Estes resultados sugerem que provavelmente esses genótipos de coqueiro possuim mecanismos de resistência ao AVP, porem estudos complementares precisam ser realizados. / Occurrence of the red palm mite, Raoiella indica Hirst (Acari: Tenuipalpidae), was related in the New World in 2004 and since then this mite species has colonized several arecaceaous and musaceous plant species, but also ornamental species in the Caribbean Islands, Florida (USA), Venezuela, Brazil and Colombia. Since firstly reported, this mite species has provoked considerable economic losses in coconut in countries where it has been found thus raising more interest to know pest impact on plant species on which mite has been found. In order to know biological aspects of R. indica samplings were made to determine geographical distribution, and also host plants and natural enemies which are found with it. Pest biology was assessed in ornamental plants and also on palms species native to Neotropical region in order to evaluated potential to cause damage on these plant species. Besides intra-plant distribution and population fluctuation was evaluated in coconut commercial plots and also variations in oxidative enzyme expression (POD and PPO) and extent of lipid peroxidation in coconut genotypes as response to R. indica feeding. Higher population levels of RPM were verified in coconut commercial plots but also in naturally growing plants in the coastal line in Venezuela. All developmental stages of the RPM were verified only on eight Arecaceae species, one Musaceae and one Strelitziaceae species thus suggesting that mite is able to develop and reproduce on these plant species. Phytoseiid mite Amblyseius largoensis (Muma) was the most frequent predator species associated to the RPM in all of the sampling areas. Higher mite densities were observed in middle and basal portions from leaf collected from middle and basal canopy. In 2010, RPM population levels were higher than in 2011, probably as function to lower rainfall levels in that year. The RPM completed development on ornamental plant species but did not on arecaeous native to New World. In regard to oxidative enzymes, POD and PPO activities and lipid peroxidation were higher in infested plants from Malaysian Yellow Dwarf (MYD) and Caribbean Tall (CT) as compared to respective controls. Besides higher POD or PPO activities were detected in MYD cultivar than in CT both in infested or no infested plants. In contrast, higher lipid peroxidation was verified in infested CT cultivar. Our results suggest that probably these coconut genotypes exhibit resistance mechanism to the RPM, however more detailed studies are required.

A biomassa vegetal pode ser uma importante fonte de obtenção de diversos produtos a partir da desestruturação de suas frações por um vasto grupo de enzimas. No entanto, a geração de compostos de alto valor agregado a partir da biomassa lignocelulósica requer o desenvolvimento de novos sistemas enzimáticos. Pensando nisso, a prospecção e a caracterização de novas enzimas que estão presentes no secretoma de fungos degradadores da biomassa lignocelulósica tem sido fonte de pesquisa por pesquisadores do mundo todo. O objetivo deste trabalho foi prospectar, clonar e expressar de maneira heteróloga o gene codificante de uma enzima putativa do fungo termofílico T. terrestris em cepas do fungo filamentoso A. nidulans A773 e promover sua caracterização bioquímica e biofísica. O gene da enzima foi amplificado, clonado e inserido no vetor pEXPYR antes de ser inserido no sistema de expressão do A. nidulans. Os transformantes obtidos foram induzidos em meio mínimo de cultivo contendo 3% (m/v) de maltose e 1% (m/v) de glicose em meio estacionário para a produção, seguido da purificação da enzima. Estudos bioquímicos foram realizados para determinar o pH e a temperatura ótima de reação, bem como, a especificidade aos substratos e a determinação dos parâmetros cinéticos. A termoestabilidade da enzima também foi avaliada por estudo de dicroísmo circular (DC). Além disso, foi avaliado o efeito colaborativo entre uma xilanase GH10 e a enzima em estudo na hidrólise do bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado. A enzima obtida por expressão heteróloga foi caracterizada como uma xilo-oligossacarídeo oxidase (XylO). Por meio da análise filogenética das sequências de aminoácidos entre a enzima expressa e outras enzimas oxidativas, a XylO foi classificada como pertencente a família das flavoproteínas e subfamília das BBE. A enzima TtXylO demonstrou ter especificidade em oligossacarídeos de C5 apresentando boa atividade enzimática em substratos complexos de xilana. A enzima possui pH ótimo de 5,5 e temperatura ótima de 25 ºC. As análises de DC indicaram temperatura de desnaturação de 62,7 ºC, caracterizando esta enzima como termofílica. Contudo, novos estudos ainda são necessários para avaliar os produtos gerados a partir da oxidação dos diferentes xilo-oligossacarídeos pela XylO e seu potencial uso na indústria. / Plant biomass is an important source for generation of several products obtained from enzymatic cleavage of its fractions by a large group of enzymes. However, the generation of high value compounds from lignocellulosic biomass requires the development of new enzymatic systems. Considering that, prospection and characterization of enzymes present in the biomass-degrading fungi secretome has been a source of study by researchers around the world. The aim of this work was to prospect, clone and heterologously express a putative enzyme encoding gene from the thermophilic fungus T. terrestris in A. nidulans A773 strains and to promote its biochemical and biophysical characterization. The gene was amplified, cloned and inserted into the pEXPYR vector before being inserted into A. nidulans expression system. The transformants were induced by culture in minimal médium containing 3% (w/v) maltose and 1% (w/v) glucose by stationary culture for the production, followed by enzyme purification. Biochemical analyses were performed to determine optimum pH and temperature as well as the substrate specificities and kinetic parameters. The enzyme thermostability was also evaluated by circular dichroism (CD). In addition, the collaborative effect between the enzyme and a GH10 on hydrolys of pre-treated sugarcane bagasse was evaluated. The enzyme obtained by heterologous expression was characterized as a xylooligosaccharide oxidase (XylO). Phylogenetic analysis between amino acid sequences of expressed enzyme and other oxidative enzymes classified XylO as belonging to flavoproteins family and subfamily of BBE. TtXylO has been shown to have specificity on C5 oligosaccharides exhibiting good enzymatic activity on complex xylan substrates. The enzyme has an optimum pH of 5.5 and optimum temperature of 25 ºC. DC analyses showed melting temperature of 62.7 ºC, characterizing this enzyme as thermophilic. In general, further studies are still needed to evaluate the products generated from oxidation of xylooligosaccharides by XylO and their potential use in the industry.

A biomassa vegetal pode ser uma importante fonte de obtenção de diversos produtos a partir da desestruturação de suas frações por um vasto grupo de enzimas. No entanto, a geração de compostos de alto valor agregado a partir da biomassa lignocelulósica requer o desenvolvimento de novos sistemas enzimáticos. Pensando nisso, a prospecção e a caracterização de novas enzimas que estão presentes no secretoma de fungos degradadores da biomassa lignocelulósica tem sido fonte de pesquisa por pesquisadores do mundo todo. O objetivo deste trabalho foi prospectar, clonar e expressar de maneira heteróloga o gene codificante de uma enzima putativa do fungo termofílico T. terrestris em cepas do fungo filamentoso A. nidulans A773 e promover sua caracterização bioquímica e biofísica. O gene da enzima foi amplificado, clonado e inserido no vetor pEXPYR antes de ser inserido no sistema de expressão do A. nidulans. Os transformantes obtidos foram induzidos em meio mínimo de cultivo contendo 3% (m/v) de maltose e 1% (m/v) de glicose em meio estacionário para a produção, seguido da purificação da enzima. Estudos bioquímicos foram realizados para determinar o pH e a temperatura ótima de reação, bem como, a especificidade aos substratos e a determinação dos parâmetros cinéticos. A termoestabilidade da enzima também foi avaliada por estudo de dicroísmo circular (DC). Além disso, foi avaliado o efeito colaborativo entre uma xilanase GH10 e a enzima em estudo na hidrólise do bagaço de cana-de-açúcar pré-tratado. A enzima obtida por expressão heteróloga foi caracterizada como uma xilo-oligossacarídeo oxidase (XylO). Por meio da análise filogenética das sequências de aminoácidos entre a enzima expressa e outras enzimas oxidativas, a XylO foi classificada como pertencente a família das flavoproteínas e subfamília das BBE. A enzima TtXylO demonstrou ter especificidade em oligossacarídeos de C5 apresentando boa atividade enzimática em substratos complexos de xilana. A enzima possui pH ótimo de 5,5 e temperatura ótima de 25 ºC. As análises de DC indicaram temperatura de desnaturação de 62,7 ºC, caracterizando esta enzima como termofílica. Contudo, novos estudos ainda são necessários para avaliar os produtos gerados a partir da oxidação dos diferentes xilo-oligossacarídeos pela XylO e seu potencial uso na indústria. / Plant biomass is an important source for generation of several products obtained from enzymatic cleavage of its fractions by a large group of enzymes. However, the generation of high value compounds from lignocellulosic biomass requires the development of new enzymatic systems. Considering that, prospection and characterization of enzymes present in the biomass-degrading fungi secretome has been a source of study by researchers around the world. The aim of this work was to prospect, clone and heterologously express a putative enzyme encoding gene from the thermophilic fungus T. terrestris in A. nidulans A773 strains and to promote its biochemical and biophysical characterization. The gene was amplified, cloned and inserted into the pEXPYR vector before being inserted into A. nidulans expression system. The transformants were induced by culture in minimal médium containing 3% (w/v) maltose and 1% (w/v) glucose by stationary culture for the production, followed by enzyme purification. Biochemical analyses were performed to determine optimum pH and temperature as well as the substrate specificities and kinetic parameters. The enzyme thermostability was also evaluated by circular dichroism (CD). In addition, the collaborative effect between the enzyme and a GH10 on hydrolys of pre-treated sugarcane bagasse was evaluated. The enzyme obtained by heterologous expression was characterized as a xylooligosaccharide oxidase (XylO). Phylogenetic analysis between amino acid sequences of expressed enzyme and other oxidative enzymes classified XylO as belonging to flavoproteins family and subfamily of BBE. TtXylO has been shown to have specificity on C5 oligosaccharides exhibiting good enzymatic activity on complex xylan substrates. The enzyme has an optimum pH of 5.5 and optimum temperature of 25 ºC. DC analyses showed melting temperature of 62.7 ºC, characterizing this enzyme as thermophilic. In general, further studies are still needed to evaluate the products generated from oxidation of xylooligosaccharides by XylO and their potential use in the industry.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito do armazenamento dos frutos de seis clones de aceroleira (BRS 152, BRS 235, BRS 236, BRS 237, BRS 238 e II47/1) à temperatura abaixo da temperatura mÃnima de seguranÃa (TMS), analisando os efeitos na qualidade dos frutos, no conteÃdo de compostos bioativos e na atividade enzimÃtica. Os frutos foram colhidos no inÃcio do estÃdio de maturaÃÃo, no campo experimental da Embrapa AgroindÃstria Tropical, na cidade de Pacajus, sendo acondicionados em bandejas de plÃstico envolvidas com filme de PVC, as quais foram armazenadas em cÃmara fria Ãs temperaturas de 4 e 8 ÂC por atà 12 dias. A cada trÃs dias foram retiradas amostras (bandejas contendo cerca de 180 g de frutos) para realizaÃÃo das anÃlises, sendo os frutos, em seguida, submetidos a um processamento em multiprocessador com peneira de 1 mm para obtenÃÃo da polpa. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 6 x 5, com trÃs repetiÃÃes, sendo o primeiro fator os seis clones de aceroleira e o segundo os tempos de armazenamento dos frutos (0, 3, 6, 9 e 12 dias). Os dados foram submetidos à anÃlise de variÃncia e, quando a interaÃÃo entre os dois fatores foi significativa, eles foram submetidos à anÃlise de regressÃo; quando nÃo houve interaÃÃo significativa foi realizado o teste de Tukey a 5%. Para avaliar a qualidade dos frutos, foram analisadas as caracterÃsticas fÃsicas (firmeza, perda de massa e cor) e fÃsico-quÃmicas e quÃmicas (pH, sÃlidos solÃveis, acidez titulÃvel e aÃÃcares solÃveis totais). Como resultado, foi observado que tais caracterÃsticas dos frutos acondicionados a 4 e 8 ÂC foram praticamente as mesmas, exceto com relaÃÃo à perda de massa que foi 31% menor a 4 ÂC. Portanto, de modo geral, o armazenamento dos frutos a 4 ÂC nÃo comprometeu os parÃmetros de qualidade dos frutos, quando comparados com aqueles armazenados na TMS para a acerola (8 ÂC). Com relaÃÃo ao conteÃdo dos compostos bioativos (Ãcido ascÃrbico, carotenoides e antocianinas) dos frutos armazenados a 4 ÂC, de modo geral, ele nÃo diferiu muito daquele dos frutos armazenados na temperatura de 8 ÂC. Houve uma tendÃncia de queda nos teores de Ãcido ascÃrbico durante o armazenamento nas duas temperaturas, resultado tambÃm observado para os teores de antocianinas a 8 ÂC. Por outro lado, os de carotenoides apresentaram tendÃncia de aumento à 4 ÂC, mas nÃo variaram com o tempo de armazenamento a 8 ÂC. O clone II47/1 foi o que apresentou frutos com maiores teores de Ãcido ascÃrbico, carotenoides e antocianinas nas duas temperaturas de armazenamento. De modo geral, as enzimas oxidativas de fenÃis (polifenoloxidase e peroxidase do guaiacol) dos frutos dos clones armazenados a 4 e 8 ÂC apresentaram comportamentos semelhantes durante o acondicionamento refrigerado. O estudo com as enzimas antioxidativas (dismutase do superÃxido, catalase e peroxidase do ascorbato) revelou que os frutos armazenados a 4 ÂC apresentaram, respectivamente, valores de atividade da dismutase do superÃxido e da catalase 263% e 37%, em mÃdia, maiores que aqueles armazenados na TMS para a acerola (8 ÂC). Tais resultados sugerem que a 4 ÂC os frutos estÃo sob estresse oxidativo. A catalase foi a principal enzima removedora de perÃxido de hidrogÃnio nos frutos, tendo sua atividade intensificada apÃs o 6 dia de armazenamento. Os resultados sugerem que os clones II47/1 e o BRS 152 sÃo resistentes as condiÃÃes de armazenamento nas temperaturas 4 e 8 ÂC. / The present work aimed to study the effect of fruit storage of six clones of acerola (BRS 152 BRS 235 BRS 236 BRS 237 BRS 238 and II47/1) at temperature below the temperature minimum security (TMS), analyzing the effects on fruit quality, the content of bioactive compounds and enzyme activity. The fruits were harvested at the beginning of ripening stage on the experimental field of Embrapa Tropical, in the city of Pacajus being packed in plastic trays involved with PVC film, which were stored in cold storage at temperatures of 4 ÂC and 8 ÂC for up to 12 days. Every three days samples were withdrawn (tray containing about 180 g of fruit) for carrying out analyzes, and the fruits are then subjected to a processing multiprocessor 1 mm screen to obtain the pulp. The experimental design was completely randomized in factorial scheme 6 x 5 with three replications, with the first factor corresponding to six clones of acerola and the second one corresponding to the five times of fruit storage (0, 3, 6, 9 and 12 days). The data were subjected to analysis of variance and, when the interaction between the two factors was significant, they were subjected to regression analysis; when there was no significant interaction, the means were compared by Tukeyâs test at 5% of probability. To assess the quality of fruits, it was analyzed their physical (strength, weight loss and color) and physico-chemical and chemical characteristics (pH, soluble solids, titratable acidity and total soluble sugars). As a result, it was observed that the characteristics of the fruit stored at 4 ÂC to 8 ÂC were practically the same, except with respect to mass loss, which was 31% lower at 4 ÂC. Therefore, in general, the fruit storage at 4 ÂC did not affect the quality parameters of fruits, compared to those stored in the TMS to the acerola (8 ÂC). Regarding the content of bioactive compounds (ascorbic acid, carotenoids and anthocyanins), the fruit stored at 4 ÂC, generally did not differ from that of the fruit stored at 8 ÂC. There was a trend towards a decrease in the ascorbic acid content during storage at both temperatures, a result also observed for the anthocyanins to 8 ÂC. On the other hand, the carotenoid content increased at 4 ÂC and did not change with time of storage at 8 ÂC. The fruits of clone II47/1 had the higher contents of ascorbic acid, carotenoids and anthocyanins in the two storage temperatures. In general the phenol oxidizing enzymes (polyphenol oxidase and guaiacol peroxidase) of fruit clones stored at 4 and 8 ÂC had similar behavior during cold storage, and the fruits of clones II47/1 and BRS 152 had the higher enzyme activity during storage at both temperatures The study about the antioxidant enzymes (superoxide dismutase catalase and ascorbate peroxidase) revealed that fruits stored at 4 ÂC showed respectively activity values of superoxide dismutase and catalase 263% and 37% on average higher than those stored at TMS for acerola (8 ÂC) These results suggest that the fruits storaged at 4 ÂC are under oxidative stress Catalase was the main hydrogen peroxide removing enzyme in fruit which activity increased after 6 days of storage The results suggest that clones II47 / 1 and BRS 152 are resistant storage conditions at temperatures 4 and 8 ÂC

A ocorrência do ácaro vermelho das palmeiras (AVP), Raoiella indica Hirst (Acari: Tenuipalpidae), foi relatada no Novo Mundo em 2004 e desde então este ácaro tem colonizado várias espécies de aceráceas e musáceas, assim como plantas ornamentais de outras famílias nas ilhas do Caribe, Florida (USA), Venezuela, Brasil e Colômbia. Desde aquele primeiro relato, essa espécie tem produzido consideráveis perdas econômicas em coqueiro nos países onde foi encontrada, o que tem conduzido a um interesse cada vez maior em se conhecer o impacto da praga às plantas em que este ácaro tem sido encontrado. Com o objetivo de conhecer aspectos bioecológicos do AVP na Venezuela foram feitas amostragens para determinar a distribuição geográfica nesse país assim como as plantas hospedeiras e inimigos naturais com os quais a praga tem sido encontrada. A biologia da praga foi estudada em plantas ornamentais e em espécies de palmeiras nativas do Neotrópico, para avaliar o seu potencial em causar dano a estas plantas. Além disso, foi estudada sua distribuição intra-planta, sua flutuação populacional em plantios comerciais de coqueiro e também as variações na expressão das enzimas oxidativas (POD e PPO) e o grau de peroxidação de lipídeos em genótipos de coqueiro, como respostas à alimentação deste ácaro. Foram verificados altos níveis populacionais do AVP em plantios comerciais de coqueiro e em outras plantas crescendo naturalmente no litoral na Venezuela. Em apenas oito espécies de Arecaceae, uma de Musaceae e uma de Strelitziaceae foram verificados todos os estágios de desenvolvimento do AVP, sugerindo que este se desenvolve e se reproduz nestas plantas. O ácaro fitoseídeo Amblyseius largoensis (Muma) foi o predador mais frequentemente associado com o AVP em todos os locais estudados. Maiores densidades do AVP foram observadas nas regiões mediana e basal das folhas coletadas nos estratos mediano e basal da copa da planta. Em 2010, os níveis populacionais do AVP foram mais elevados que em 2011, aparentemente em função dos níveis menores de precipitação naquele ano. O AVP conseguiu se desenvolver sobre as espécies de plantas ornamentais, mas não nas espécies de arecáceas nativas do Novo Mundo. Com relação às enzimas oxidativas, as atividades das POD, PPO e a peroxidação de lipídeos foram maiores em plantas infestadas dos cultivares Anão Amarelo da Malásia (AAM) e Gigante do Caribe (GC) quando comparadas com os respectivos controles. Além disso, maiores atividades de POD e PPO foram detectadas no cultivar AAM que no cultivar GC, tanto em plantas infestadas quando não infestadas. Em contraste, maior peroxidação de lipídeos foi verificada em plantas do cultivar GC infestadas. Estes resultados sugerem que provavelmente esses genótipos de coqueiro possuim mecanismos de resistência ao AVP, porem estudos complementares precisam ser realizados. / Occurrence of the red palm mite, Raoiella indica Hirst (Acari: Tenuipalpidae), was related in the New World in 2004 and since then this mite species has colonized several arecaceaous and musaceous plant species, but also ornamental species in the Caribbean Islands, Florida (USA), Venezuela, Brazil and Colombia. Since firstly reported, this mite species has provoked considerable economic losses in coconut in countries where it has been found thus raising more interest to know pest impact on plant species on which mite has been found. In order to know biological aspects of R. indica samplings were made to determine geographical distribution, and also host plants and natural enemies which are found with it. Pest biology was assessed in ornamental plants and also on palms species native to Neotropical region in order to evaluated potential to cause damage on these plant species. Besides intra-plant distribution and population fluctuation was evaluated in coconut commercial plots and also variations in oxidative enzyme expression (POD and PPO) and extent of lipid peroxidation in coconut genotypes as response to R. indica feeding. Higher population levels of RPM were verified in coconut commercial plots but also in naturally growing plants in the coastal line in Venezuela. All developmental stages of the RPM were verified only on eight Arecaceae species, one Musaceae and one Strelitziaceae species thus suggesting that mite is able to develop and reproduce on these plant species. Phytoseiid mite Amblyseius largoensis (Muma) was the most frequent predator species associated to the RPM in all of the sampling areas. Higher mite densities were observed in middle and basal portions from leaf collected from middle and basal canopy. In 2010, RPM population levels were higher than in 2011, probably as function to lower rainfall levels in that year. The RPM completed development on ornamental plant species but did not on arecaeous native to New World. In regard to oxidative enzymes, POD and PPO activities and lipid peroxidation were higher in infested plants from Malaysian Yellow Dwarf (MYD) and Caribbean Tall (CT) as compared to respective controls. Besides higher POD or PPO activities were detected in MYD cultivar than in CT both in infested or no infested plants. In contrast, higher lipid peroxidation was verified in infested CT cultivar. Our results suggest that probably these coconut genotypes exhibit resistance mechanism to the RPM, however more detailed studies are required.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Vitamin A is a fat soluble compound occurring in three chemical forms in animal tissues: alcohol (retinol), aldehyde (retinal) and acid (retinoic acid). It is an essential nutrient for fish, required in small quantities, important for the health, growth and reproduction. In this study, the objective was to determine the nutritional requirement and the response in growth, hematological disorders and oxidative parameters of juvenile catfish (Rhamdia quelen) fed diets with vitamin A. We conducted an experiment lasting 70 days, with 500 silver catfish (initial weight = 23.00 ± 4.27 g), distributed in 20 tanks (25 fish per tank), with four replications. The semi-purified diets were formulated to meet the protein and energy requirements of the species (37% CP and 3.400 kcal/kg DE). Five vitamin A levels were tested: 0; 1500; 3000; 4500; 6000 IU kg-1. Fish were fed three times a day (8, 12 and 18 hours), at 3% PV. Three sampling was performed at the beginning, the middle and the end of the experiment. The following parameters were measured: average weight (g), total length and standard length (cm). Fish used to collect tissue samples were killed by benzocaine overdose (dose: 35 mg L-). Liver, gills and muscle samples were collected to determine oxidative stress parameters (tissue protein, TBARS non-protein thiols, catalase, superoxide dismutase, glutathione-S-transferase). Hematological analyzes of fish were made by analyzing the total number of red blood cells, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin and mean corpuscular hemoglobin concentration. Analysis of body composition (crude protein, fat, dry matter and mineral matter) of silver catfish to whole fish and fillet samples were also carried out. It has been found that providing diets with levels greater than 3500 IU of vitamin A kg- is ideal for better growth, animals increased proportionally to the increase of vitamin A in the diet. There were no effects on hematological and biochemical parameters of plasma. Considering the fillet quality parameters the level of 4500 IU kg- of vitamin A in the diet showed better results, there were a higher amount of protein and less fat in the fillet. To oxidative protection the level of 4500 IU kg- of vitamin A in the diet showed better results too, was observed lower activity of enzymes that act as an antioxidant, proving that retinoids and carotenoids act by donating electrons to reactive oxygen species, saving the enzymatic protection. / A vitamina A é lipossolúvel e ocorre de três formas químicas no tecido animal: álcool (retinol), aldeído (retinal) e ácido carboxílico (ácido retinóico). É um nutriente essencial para os peixes, exigido em pequenas quantidades, importante para a saúde, crescimento e reprodução. Neste estudo, o objetivo foi determinar a exigência nutricional e a resposta em crescimento, alterações hematológicas e parâmetros oxidativos de juvenis de jundiá (Rhamdia quelen) alimentados com dietas contendo níveis de vitamina A. Para isso, foi realizado um experimento com duração de 70 dias, com 500 jundiás (peso médio inicial = 23,00 ± 4,27 g), distribuídos em 20 tanques (25 peixes por tanque), com quatro repetições por tratamento. As dietas utilizadas foram semi-purificadas e formuladas para atender às exigências proteicas e energéticas da espécie (37% proteína bruta e 3.400 kcal/kg de energia digestível). Foram testados cinco níveis de vitamina A: 0; 1500; 3000; 4500; 6000 UI/kg na dieta. Os peixes foram alimentados três vezes ao dia (8, 12 e 18 horas), 3% do peso vivo, em três refeições. Foram realizadas três biometrias para coleta de dados: no dia 0, aos 35 e aos 70 dias (final do experimento). Foram mensurados os seguintes parâmetros: peso médio (g), comprimento total e comprimento padrão (cm). Os peixes utilizados para coleta de amostras de tecidos foram eutanasiados por meio de overdose de benzocaína (dose: 250mg/L). Foi realizada coleta de amostras de fígado, brânquias e músculo para a determinação de parâmetros oxidativos (proteína tecidual, TBARS, tióis não proteicos, catalase, superóxido dismutase, glutationa-S-transferase). Foram realizadas análises hematológicas dos peixes, quantificando número total de eritrócitos, hematócrito, taxa de hemoglobina, volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média e concentração de hemoglobina corpuscular média. Também foram realizadas análises de composição corporal (proteína bruta, gordura, matéria seca e matéria mineral) dos jundiás utilizando amostras de peixe inteiro e amostras de filé. Constatou-se que fornecer dietas com níveis acima de 3500 UI de vitamina A/kg é ideal para melhor crescimento, animais cresceram proporcionalmente ao aumento de quantidade de vitamina A na dieta. Não ocorreu efeitos nos parâmetros hematológicos e bioquímicos de plasma. Considerando os parâmetros de qualidade de filé e proteção oxidativa o nível de 4500 UI/kg de vitamina A na dieta apresentou melhores resultados. No filé, houve maior quantidade de proteína e menor quantidade de gordura e quanto ao estresse oxidativo, foi observado menor atividade de enzimas que atuam como antioxidante, provando que retinóides e carotenoides agem doando elétrons para espécies reativas ao oxigênio, poupando a proteção enzimática.