Tesis para optar al grado de magister en farmacología / El cáncer de cuello uterino (CCU) es un tipo de cáncer que tiene una etiología viral. Este agente es el virus papiloma humano de alto riesgo (VPH-AR), el cual en un proceso tumoral sobreexpresa las oncoproteínas E6 y E7. Éstas últimas regulan la expresión de Pirin, que es una proteína que participa en la transición epitelial-mesenquimal (TEM) y en la migración celular. Se ha reportado que la TEM y la migración celular disminuyen en presencia del compuesto natural curcumina. Por esta razón, se propuso que dicha disminución causada por curcumina ocurre a través de un mecanismo dependiente de Pirin. Para demostrar esto, se utilizó la línea celular SiHa de CCU, con 1-2 copias integradas de VPH16. Con los ensayos de viabilidad y citotoxicidad celular (MTS) a distintos tiempos y concentraciones de curcumina se determinó que la concentración a utilizar era de 20 μM por 72 horas. Este tiempo y concentración están en concordancia con datos previamente publicados. Se analizó la expresión génica y los niveles proteicos de algunos marcadores de la TEM, con las técnicas RT-qPCR y Western Blotting, respectivamente. Para ello, en células tratadas con curcumina se extrajo ARN total y proteínas, los cuales se cuantificaron para ser utilizados en dichas técnicas. Los resultados obtenidos sugieren una disminución de la transición epitelial-mesenquimal en la línea celular SiHa expuesta a curcumina. Esto se respalda en la disminución de los niveles proteicos de N-cadherina, Vimentina y Slug en presencia de este compuesto natural. Además, se observó que la expresión de PIR y los niveles de Pirin disminuyeron en las células SiHa, al ser expuestas a curcumina. Luego, para analizar como la TEM depende de Pirin, las células SiHa utilizadas fueron transfectadas transientemente con un ARN interferente pequeño (ARNip) para el knockdown de PIR. Se observó un aumento significativo de transcritos de E-cadherina y una disminución significativa de N-cadherina en presencia del interferente. Además, se evidenció una disminución similar en la combinación del interferente con curcumina. Finalmente, se realizó un ensayo fenotípico de migración celular observándose una disminución significativa en presencia de este compuesto natural. La conclusión de esta tesis es que la disminución de la TEM inducida por curcumina, en este modelo experimental, ocurre por un mecanismo dependiente de Pirin. Se requieren experimentos adicionales para confirmar dicho mecanismo. La proteína Pirin podría ser un importante blanco farmacológico en el tratamiento del cáncer de cuello uterino. / Cervical cancer (CCU) has a viral etiology and it is induced by high-risk human papilloma virus (HR-HPV) that in turn, overexpresses E6 and E7 oncoproteins. These viral proteins regulate the expression of Pirin, which is a protein that participates in the epithelial-mesenchymal transition (EMT) and cell migration. It has been reported that EMT and cell migration decrease in the presence of the natural compound curcumin. For this reason, it was proposed in this thesis that such decrease is caused by curcumin through a Pirin-dependent mechanism. To demonstrate this statement, SiHa cell line derived from cervical cancer was used since it contains 1-2 integrated copies of HPV16. Viability and cytotoxicity cell tests (MTS) were used to determine curcumin dose and exposures times. Results indicated a significant decrease in EMT after exposure to 20 μM curcumin for 72 hours in SiHa cell line. This is supported by a decrease in the protein levels of N-cadherin, Vimentin and Slug in the presence of curcumin. Furthermore, it was observed that PIR expression and Pirin protein levels significantly decreased in SiHa cells when exposed to curcumin. Then, to analyze if EMT depends on Pirin, SiHa cells were transfected with a small interfering RNA (siRNA) for the silencing of PIR. It was observed a significant increase of E-cadherin transcripts and a significant decrease of N-cadherin proteins levels in the presence of the siRNA. In addition, a similar decrease in the combination of the interferer with curcumin was evidenced. Finally, a phenotypic assay of cell migration was performed observing a significant decrease in the presence of this natural compound. It can be concluded in this thesis that the reduction of curcumin-induced EMT in this experimental model, occurs in a Pirin-dependent manner. To confirm this mechanism, additional experiments are warranted. Pirin protein could be an important pharmacological target in the treatment of cervical cancer.

SAMPAIO, João Paulo Aguiar. Imunoexpressão de Caderina-E no câncer colorretal primário e nas metástases linfonodais. 2013. 69 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T11:14:49Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-21T11:18:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-21T11:18:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jpasampaio.pdf: 18070044 bytes, checksum: 26426c1707ecbfd7857d05920f0fdc36 (MD5) Previous issue date: 2013 / E-cadherin is closely related to epitelial-mesenchymal transition and tumor progression in many cancers, including colorectal cancer. The aim of this study is to evaluate the expression of E-cadherin in primary colorectal cancer as well as in lymph node metastasis, establishing also a comparison with the expression of E-cadherin in normal colonic mucosa. We utilized 77 cases of colectomies for colorectal carcinoma and 10 cases of metastatic lymph nodes from the files of the Department of Pathology and Forensic Medicine/Federal University of Ceara. Tissue microarray and immunohistochemistry were performed with monoclonal anti-E-cadherin, evaluated using the following scores: 0 = no staining; 1 = cytoplasmic staining; 2 = mixed staining (cytoplasmic and membranous); 3 = membranous staining. It was used the classification proposed by Jawahri et al. which includes cases of abnormal expression (0, 1 and 2 scores) and cases of normal expression (3 score), and was also used the classification proposed by Almeida et al. which includes cases of non-membranous expression (0 and 1 scores) and membranous expression (2 and 3 scores). Primary tumors presented more cases of abnormal E-cadherin expression in comparison to normal colonic mucosa (p < 0.0001). There were no differences between E-cadherin expression in the primary tumor in comparison to lymph node metastasis. The grouped cell tumors showed increased expression of E-cadherin in comparison to isolated cell tumors, either using the classification proposed by Jawhari et al. (p = 0.0230) and the classification proposed by Almeida et al. (p = 0.0043). In conclusion, abnormal expression of E-cadherin in the primary tumor, with frequent membranar immunostaining associated with the cytoplasmic marking (abnormal heterogeneous or mixed staining), reinforces the evidence that E-cadherin expression change in cancer is more qualitative than quantitative. The predominance of membranar expression in primary tumor and lymph node metastasis, with or without associated cytoplasmatic expression, particularly in cell-grouped tumors, suggests that E-cadherin presence is essential for local invasion and tumor progression, as opposed to the classical paradigm that tumor progression is exacerbated by the loss of this adhesion molecule. / A Caderina-E está intimamente relacionada com a transição epitelial-mesenquimal e com a progressão tumoral em muitos tipos de câncer, inclusive no câncer colorretal. O objetivo deste trabalho foi avaliar a imunoexpressão de Caderina-E no câncer colorretal primário e nas respectivas metástases linfonodais, na mucosa colônica normal, e investigar possíveis correlações desta expressão com parâmetros clínicopatológicos. Setenta e sete casos de colectomias por carcinoma colorretal e dez casos de linfonodos metastáticos, dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal/Universidade Federal do Ceará, foram utilizados. Realizou-se o Tissue Microarray e imunohistoquímica, com anticorpo monoclonal anti-Caderina-E. Foram avaliados os seguintes escores: 0 = ausência de expressão; 1 = expressão citoplasmática; 2 = expressão mista (citoplasmática e membranar); 3 = expressão membranar pura. Foi utilizada tanto a classificação proposta por Jawhari et al., agrupando os casos em expressão anormal (escores 0, 1 e 2) e expressão normal (escore 3), como os critérios propostos por Almeida et al., agrupando os casos como expressão não-membranar (escores 0 e 1) e expressão membranar (escores 2 e 3). Os tumores primários tiveram mais casos de expressão de Caderina-E anormal em comparação com a mucosa normal (p < 0.0001). Não houve diferença significante entre expressão de Caderina-E no tumor intestinal e em metástases linfonodais, embora nestas a expressão membranar tenha sido mais freqüente do que no sítio primário. Tumores de células agrupadas apresentaram maior expressão de Caderina-E membranar do que os de células isoladas, tanto utilizando a classificação de Jawhari et al. (p = 0.0230), como os critérios propostos por Almeida et al. (p = 0.0043). Em conclusão, a expressão anormal de Caderina-E no tumor primário, com persistência freqüente da imunomarcação membranar associada à marcação citoplasmática (marcação anormal heterogênea ou mista), reforça as evidências de que esta alteração no câncer é mais qualitativa do que propriamente quantitativa. O predomínio da expressão membranar no sítio primário da neoplasia e na metástase, com ou sem expressão citoplasmática associada, principalmente em tumores de células agrupadas, sugere que a presença da Caderina-E é essencial para a invasão local e progressão tumoral, em oposição ao clássico paradigma de que a progressão tumoral se exacerba com a perda desta molécula de adesão.

Orientador: Prof. Dr. Newton Sérgio de Carvalho / Orientador: Profª. Drª. Teresa C. Cavalcante / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 12/08/2016 / Inclui referências : f. 57-64;72-74;82-84;95-97 / Resumo: Introdução: Avaliar a expressão do biomarcador p16INK4a no produto de conização de mulheres com diagnóstico de NIC-AG e correlacionar a sua expressão com a severidade das lesões, a habilidade de prever a recorrência, as diferenças biológicas entre NIC 2 e 3 e a tipagem de HPV. Método: um estudo transversal, conduzido em pacientes que foram submetidas a conização por NIC-AG, com DNA-HPV previamente conhecido, entre janeiro 2009 e agosto 2011, no Hospital Erasto Gaertner/ Brasil. A pesquisa do p16 foi avaliada por meio da técnica de microarranjos teciduais e sua expressão correlacionada com o diagnóstico clínico, índice de recorrência e as diferenças biológicas entre NIC 2 e 3. O teste do X2 foi usado para análise estatística com valor de p?0.05, e a sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e acurária dos testes calculadas. Resultados: 192 mulheres, entre 22 e 48 anos (35 ± 6), divididas em 2 grupos: 102 NIC 2 e 90 NIC 3. A média de idade, paridade, hábito de fumar e técnica de conização foi semelhantes nos 2 grupos. O p16 foi positivo em 86% dos NIC 2 e 92% dos NIC 3. Em relação a recorrência o p16 teve VPP de 11%, VPN de 95%, sensibilidade de 95%, especificidade de11% e acurácia de 93%. A habilidade do p16 em predizer as diferenças entre NIC 2 e 3 resultou em VPP de 48% e VPN de 66%, sensibilidade de 92%, especificidade de 13% e acurácia de 89%. Conclusão: A expressão do p16 isoladamente não foi capaz de predizer a recorrência da NIC-AG tratada e nem de demonstrar as diferenças biológicas entre NIC 2 e 3, entretanto sua expressão se relaciona diretamente com a severidade da doença. Palavras-chaves: Neoplasia intraepitelial cervical, recorrência, marcadores biológicos, NIC-AG. / Abstract: Background: The aim of this study is to evaluate the expression of biomarker p16INK4a on the product of conization in women diagnosed with HSIL, to correlate immunostaining with lesion severity, the ability to predict recurrence and the biological differences between CIN 2 and CIN 3. Methods: A cross-sectional study was conducted in patients who had undergone conization due to HSIL and detected HPV DNA, at Erasto Gaertner Cancer Center (EGCC) Hospital, in Brazil. The expression of p16INK4a was evaluated using tissue microarray technique and overexpression was correlated to diagnosis and clinical evolution. A chi-square test was used for statistical analysis with p-value less than or equal to 0.05 and the sensitivity, specificity, PPV, NPV, and accuracy of the tests calculated. Results: The review included 192 women, between 22 and 48 years old (35 ± 6), divided into two groups: 102 CIN 2 and 90 CIN 3 cases. The epidemiological data were similar in the two groups. p16 was positive in 86% of the CIN 2 and 92% of CIN 3. To predict recurrence p16 has PPV of 11%, NPV of 95%, sensitivity of 95%, specificity of 11%, and accuracy 93%. Applied to distinguish between CIN 2 and 3 p16 has VPP of 48%, VPN of 66%, sensitivity of 92%, specificity of 13%, and accuracy 89%. Conclusion: Immunostaging of biomarker p16 alone cannot predict the rate of recurrence of HSIL or can it demonstrate the biological differences between CIN 2 and 3; however, overexpression does increase with the degree of lesion severity. Key words: Cervical intraepithelial neoplasia, recurrence, biological biomarkers, HSIL

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:29:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3516_1.pdf: 522070 bytes, checksum: d94517e52f5e8b7cc6ac6155488319fe (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / O objetivo deste estudo foi avaliar a evolução da lesão intra-epitelial escamosa anal (ASIL) numa coorte de 22 mulheres com diagnóstico histológico de condiloma ou neoplasia intra-epitelial anal (NIA), diagnosticadas no período de junho de 2004 a setembro de 2005. A média de idade foi 35 anos. O tempo de seguimento variou em 13 a 34 meses. Das 22 pacientes, três eram infectadas pelo vírus da imunodeficiência humana e quatro usavam drogas imunossupressoras. Todas foram submetidas à coleta de citologia anal e anuscopia sob visão colposcópica. A biópsia anal foi realizada em 19 mulheres por apresentarem achados anuscópicos anormais. Foi observado progressão para lesão de alto grau em 30,8% das lesões histológicas de baixo grau. Por outro lado, foi identificado regressão em grau em três das lesões anais de alto grau. Os resultados desta pesquisa destacam a importância do seguimento das lesões intra-epiteliais escamosas anais em mulheres

A expressão de diversas proteínas do ciclo celular tem sido estudada em vários tipos de lesões malignas. Entre as principais está a p27, que é codificada pelo gene supressor de tumor de mesmo nome, e que já foi encontrada alterada em carcinomas, inclusive os intra-orais. Outra proteína que atua diretamente no controle do ciclo celular é a c-jun, que é codificada por um protooncogene, e através de outras vias de sinalização acaba agindo como um regulador positivo do ciclo. O presente estudo visou comparar as expressões imunoistoquímicas das proteínas p27 e c-jun, através do método da estreptavidina-biotina em 45 casos de displasia epitelial agrupados em diferentes graus (atipia discreta, moderada e intensa), e 20 casos de carcinoma epidermóide intra-oral, na tentativa de elucidar o papel e a relação existente entre estas proteínas. Foi observado uma diminuição dos níveis de p27 e um aumento significativo da c-jun nos casos com graus elevados de displasia epitelial e carcinoma epidermóide. A análise estatística indicou uma correlação inversa estatísticamente significativa entre as expressões de p27 e c-jun. Os resultados sugerem as alterações destas proteínas como um importante evento no processo de carcinogênese intra-oral. / The expression of many cell cycle proteins has been studied in a number of malignant lesions. Among the main ones is the p27, which is encoded by the same name tumor suppressor gene, and it is altered in carcinomas, including oral cancers. Another protein that plays a role in the cell cycle control is the c-jun, which is encoded by a proto-oncogene, and acts as a positive regulator of the cell cycle, through other signaling pathways. The present study aimed to compare the immunohistochemical expression of p27 and c-jun proteins, using the streptavidinbiotin method, in 45 cases of epithelial dysplasia, classified in different degrees (mild, moderate and intense), and 20 cases of oral squamous cells carcinoma, in an attempt to elucidate the role and the relationship between these proteins. It was observed a decrease of p27 levels and a substantial increase of c-jun in cases with the highest degrees of epithelial dysplasia. The statistical analysis showed a significant inverse correlation between p27 and c-jun expressions. These results suggest these proteins alterations as an important event in the carcinogenic process. p27, c-jun, Immunohistochemistry, Squamous cells carcinoma, Epithelial dysplasia

A expressão de diversas proteínas do ciclo celular tem sido estudada em vários tipos de lesões malignas. Entre as principais está a p27, que é codificada pelo gene supressor de tumor de mesmo nome, e que já foi encontrada alterada em carcinomas, inclusive os intra-orais. Outra proteína que atua diretamente no controle do ciclo celular é a c-jun, que é codificada por um protooncogene, e através de outras vias de sinalização acaba agindo como um regulador positivo do ciclo. O presente estudo visou comparar as expressões imunoistoquímicas das proteínas p27 e c-jun, através do método da estreptavidina-biotina em 45 casos de displasia epitelial agrupados em diferentes graus (atipia discreta, moderada e intensa), e 20 casos de carcinoma epidermóide intra-oral, na tentativa de elucidar o papel e a relação existente entre estas proteínas. Foi observado uma diminuição dos níveis de p27 e um aumento significativo da c-jun nos casos com graus elevados de displasia epitelial e carcinoma epidermóide. A análise estatística indicou uma correlação inversa estatísticamente significativa entre as expressões de p27 e c-jun. Os resultados sugerem as alterações destas proteínas como um importante evento no processo de carcinogênese intra-oral. / The expression of many cell cycle proteins has been studied in a number of malignant lesions. Among the main ones is the p27, which is encoded by the same name tumor suppressor gene, and it is altered in carcinomas, including oral cancers. Another protein that plays a role in the cell cycle control is the c-jun, which is encoded by a proto-oncogene, and acts as a positive regulator of the cell cycle, through other signaling pathways. The present study aimed to compare the immunohistochemical expression of p27 and c-jun proteins, using the streptavidinbiotin method, in 45 cases of epithelial dysplasia, classified in different degrees (mild, moderate and intense), and 20 cases of oral squamous cells carcinoma, in an attempt to elucidate the role and the relationship between these proteins. It was observed a decrease of p27 levels and a substantial increase of c-jun in cases with the highest degrees of epithelial dysplasia. The statistical analysis showed a significant inverse correlation between p27 and c-jun expressions. These results suggest these proteins alterations as an important event in the carcinogenic process. p27, c-jun, Immunohistochemistry, Squamous cells carcinoma, Epithelial dysplasia

Magister en biomedicina celular y molecular / En Chile la incidencia y mortalidad del cáncer de próstata (CaP) está aumentado, siendo actualmente la segunda causa de muerte por cáncer en hombres. Durante la progresión tumoral las células epiteliales disminuyen sus moléculas de adhesión, polaridad, posicionamiento, reordenan su citoesqueleto y aumentan sus capacidades migratorias e invasivas. Todos estos cambios se conocen bajo el concepto de Transición Epitelio-Mesénquima (TEM). La TEM se caracteriza por el aumento de ciertos factores transcripcionales, tales como SNAIL1, que reprime genes característicos de un fenotipo epitelial, como E-cadherina, y aumenta indirectamente la expresión de genes que promueven el fenotipo mesenquimático. Se propone que el factor transcripcional SNAIL1 disminuye la proliferación y aumenta las capacidades migratorias e invasivas en líneas celulares de CaP. Para ello se trabajó con las líneas celulares LNCaP y PC3 con expresión ectópica y silenciamiento de SNAIL1 obtenidas mediante el uso de vectores lentivirales. Se caracterizó la expresión de marcadores de TEM mediante PCR en tiempo real, western blot e inmunofluorescencia. Además, se analizó la sobrevida mediante MTS; proliferación utilizando anticuerpos contra PCNA y Ki-67; migración a través de placas con poros de 8 μm (que permiten el paso de células) e invasividad mediante cámaras de membranas cubiertas con una capa de membrana basal. Complementariamente se determinó la apoptosis mediante un kit que contiene un sustrato que es modificado por las caspasas 3 y 7. Se determinó que ambas líneas celulares de CaP con sobreexpresión y silenciamiento de SNAIL1 la proliferación y sobrevida disminuyen. Sin embargo, la sobreexpresión de SNAIL1 disminuye la apoptosis respecto a las células con silenciamiento de la expresión de éste gen, en las cuales aumenta la muerte celular. Respecto a las capacidades migratorias e invasivas, aumentaron sólo en las células con sobreexpresión de SNAIL1 y disminuyeron en las células con silenciamiento. En conclusión, células de CaP con sobreexpresión de SNAIL1 exhibieron características fenotípicas tipo TEM, mientras que el silenciamiento de éste represor transcripcional condujo a las células a un fenotipo tipo epitelial con la disminución de características mesenquimales como la migración e invasión. / FONDECYT No 1110269

A presença de áreas displásicas em queilites actínicas constitui um fator preditivo importante para o câncer de lábio. Entretanto, a determinação histopatológica da presença e intensidade da displasia epitelial nestas lesões continua sendo um aspecto subjetivo para os patologistas. O objetivo do presente estudo foi verificar em 45 queilites actínicas e 20 carcinomas espinocelulares (CECs) de lábio tratados no Departamento de Otorrinolaringologia e Oftalmologia, da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, a expressão imuno-histoquímica da citoqueratina 10 (CK10) e citoqueratina 13 (CK13) na região labial e comparar a expressão dessas citoqueratinas com o índice de proliferação celular determinado pela imunomarcação com o Ki-67. A intensidade da displasia epitelial nas queilites actínicas foi determinada em coloração de Hematoxilina e Eosina com base nos critérios definidos pela Organização Mundial da Saúde. A associação entre a expressão da CK10 e da CK13 nas queilites actínicas com e sem displasia e nos CECs foi calculada pelo teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher, com nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram uma positividade para CK13 no vermelhão do lábio e mucosa labial, com perda de expressão nas áreas displásicas das queilites actínicas e marcação heterogênea nos CECs de lábio. A imunomarcação da CK10 foi observada no vermelhão do lábio e epiderme, com ausência total de expressão nas áreas displásicas e nos CECs de lábio. Houve uma associação estatisticamente significante entre a expressão da CK10 nos CECs quando comparada às queilites actínicas com displasia epitelial (p<0,001) e sem displasia epitelial (p<0,001). Não houve diferença significativa (p=0,104) no índice de proliferação celular, determinado pela imunomarcação do Ki-67, nas queilites actínicas sem e com displasia epitelial e nos carcinomas espinocelulares de lábio. Assim como também não houve associação, estatisticamente significativa, entre a expressão das citoqueratinas 13 e 10 e os altos índices de proliferação celular, determinados pelo Ki-67, nas queilites actínicas sem e com displasia epitelial. Esses resultados sugerem que as citoqueratinas 13 e 10 participam do processo de malignização das queilites actínicas sendo a expressão alterada ou ausente destes biomarcadores indicativa de áreas displásicas ou carcinoma espinocelular invasivo na região de lábio inferior. / The presence of dysplastic areas in actinic cheilitis is an important predictive factor for lip cancer. However, the histopathologic evaluation of the presence and severity of epithelial dysplasia in these lesions remains subjective. The aim of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of cytokeratin 10 (CK10) and cytokeratin 13 (CK13) in labial region and compare the expression of these cytokeratins with the cell proliferation index, which was determined by Ki-67 immunostaining. The sample was constituted by 45 cases of actinic cheilitis and 20 of squamous cell carcinomas (SCC) of the lip treated at the Department of Otorhinolaryngology and Ophthalmology of Botucatu School of Medicine, UNESP. The severity of epithelial dysplasia in actinic cheilitis was determined by hematoxylin and eosin staining based on World Health Organization criteria. The association between the expression of CK10 and CK13 in actinic cheilitis with and without dysplasia and SCC was calculated by Chi-square test or Fischer´s exact test, with significance level at 5%. The results showed positive correlation for CK13 in the lip vermilion and labial mucosa, with loss of expression in the dysplastic areas of actinic cheilitis, and heterogeneous positivity in SCC of the lip. There was a statistically significant association between the expression of CK10 in SCC and actinic cheilitis with epithelial dysplasia (p < 0.001) or without epithelial dysplasia (p < 0.001).There was not a statistically significant difference (p=0.104) for cell proliferation index in actinic cheilitis with and without dysplasia, and SCC. Furthermore, there was not a statistical association (p>0.05) between the expression of CK10 and CK13 and high cell proliferation index in actinic cheilitis with and without epithelial dysplasia. These results suggest that the cytokeratins 13 and 10 participate in the process of malignant transformation of actinic cheilitis, and absence or alteration of these biomarkers expression are indicative of dysplastic areas or invasive squamous cell carcinoma in the lower lip region.

A presença de áreas displásicas em queilites actínicas constitui um fator preditivo importante para o câncer de lábio. Entretanto, a determinação histopatológica da presença e intensidade da displasia epitelial nestas lesões continua sendo um aspecto subjetivo para os patologistas. O objetivo do presente estudo foi verificar em 45 queilites actínicas e 20 carcinomas espinocelulares (CECs) de lábio tratados no Departamento de Otorrinolaringologia e Oftalmologia, da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, a expressão imuno-histoquímica da citoqueratina 10 (CK10) e citoqueratina 13 (CK13) na região labial e comparar a expressão dessas citoqueratinas com o índice de proliferação celular determinado pela imunomarcação com o Ki-67. A intensidade da displasia epitelial nas queilites actínicas foi determinada em coloração de Hematoxilina e Eosina com base nos critérios definidos pela Organização Mundial da Saúde. A associação entre a expressão da CK10 e da CK13 nas queilites actínicas com e sem displasia e nos CECs foi calculada pelo teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher, com nível de significância de 5%. Os resultados demonstraram uma positividade para CK13 no vermelhão do lábio e mucosa labial, com perda de expressão nas áreas displásicas das queilites actínicas e marcação heterogênea nos CECs de lábio. A imunomarcação da CK10 foi observada no vermelhão do lábio e epiderme, com ausência total de expressão nas áreas displásicas e nos CECs de lábio. Houve uma associação estatisticamente significante entre a expressão da CK10 nos CECs quando comparada às queilites actínicas com displasia epitelial (p<0,001) e sem displasia epitelial (p<0,001). Não houve diferença significativa (p=0,104) no índice de proliferação celular, determinado pela imunomarcação do Ki-67, nas queilites actínicas sem e com displasia epitelial e nos carcinomas espinocelulares de lábio. Assim como também não houve associação, estatisticamente significativa, entre a expressão das citoqueratinas 13 e 10 e os altos índices de proliferação celular, determinados pelo Ki-67, nas queilites actínicas sem e com displasia epitelial. Esses resultados sugerem que as citoqueratinas 13 e 10 participam do processo de malignização das queilites actínicas sendo a expressão alterada ou ausente destes biomarcadores indicativa de áreas displásicas ou carcinoma espinocelular invasivo na região de lábio inferior. / The presence of dysplastic areas in actinic cheilitis is an important predictive factor for lip cancer. However, the histopathologic evaluation of the presence and severity of epithelial dysplasia in these lesions remains subjective. The aim of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of cytokeratin 10 (CK10) and cytokeratin 13 (CK13) in labial region and compare the expression of these cytokeratins with the cell proliferation index, which was determined by Ki-67 immunostaining. The sample was constituted by 45 cases of actinic cheilitis and 20 of squamous cell carcinomas (SCC) of the lip treated at the Department of Otorhinolaryngology and Ophthalmology of Botucatu School of Medicine, UNESP. The severity of epithelial dysplasia in actinic cheilitis was determined by hematoxylin and eosin staining based on World Health Organization criteria. The association between the expression of CK10 and CK13 in actinic cheilitis with and without dysplasia and SCC was calculated by Chi-square test or Fischer´s exact test, with significance level at 5%. The results showed positive correlation for CK13 in the lip vermilion and labial mucosa, with loss of expression in the dysplastic areas of actinic cheilitis, and heterogeneous positivity in SCC of the lip. There was a statistically significant association between the expression of CK10 in SCC and actinic cheilitis with epithelial dysplasia (p < 0.001) or without epithelial dysplasia (p < 0.001).There was not a statistically significant difference (p=0.104) for cell proliferation index in actinic cheilitis with and without dysplasia, and SCC. Furthermore, there was not a statistical association (p>0.05) between the expression of CK10 and CK13 and high cell proliferation index in actinic cheilitis with and without epithelial dysplasia. These results suggest that the cytokeratins 13 and 10 participate in the process of malignant transformation of actinic cheilitis, and absence or alteration of these biomarkers expression are indicative of dysplastic areas or invasive squamous cell carcinoma in the lower lip region.

La función barrera intestinal constituye la primera línea de defensa del tracto digestivo. Ésta se ve condicionada por el transporte hidroelectrolítico, la permeabilidad y la motilidad intestinales. Alteraciones de estas funciones favorecen la estimulación continua, por antígenos y microorganismos luminales, del sistema inmune local llevando a estados inflamatorios más o menos crónicos. Estos cambios parecen caracterizar diversas patologías inflamatorias y funcionales gastrointestinales, incluyendo la enfermedad inflamatoria intestinal y el síndrome de intestino irritable. Los mastocitos (MCs), a través de un proceso de activación y liberación de mediadores neuroinmunes, participan como células efectoras en la respuesta inmune asociada a estas enfermedades. Este trabajo profundiza en las implicaciones de los MCs en las disfunciones intestinales, haciendo un especial énfasis en la función barrera. Para ello, se empleó un modelo de parasitosis por Trichinella spiralis en ratas. Tras la infección, se observó la evolución temporal (días 2 a 30 post‐infección) en las poblaciones de MCs de mucosa y de tejido conectivo en el yeyuno. Las variaciones en los infiltrados mastocitarios se acompañaron de una sobreexpresión en las proteinasas mastocitarias. Las proteinasas, actuando como enzimas sobre sustratos específicos, incluyendo la activación de receptores activados por proteinasas (PARs), regulan las funciones secretomotoras y sensoriales gastrointestinales. Acompañando estos cambios, se han caracterizado remodelaciones neuroepiteliales post‐infecciosas que resultan en una alteración de la función barrera, en concreto: una alteración de la secreción hidroelectrolítica basal, de la respuesta a secretagogos y en el incremento de la permeabilidad intestinal. Estas disfunciones de la barrera tienen como base cambios temporales específicos en la expresión de proteínas de las uniones estrechas intercelulares. A su vez, la parasitosis produjo un aumento de la actividad motora espontánea intestinal, en parte mediada por los MCs, ya que se revierte parcialmente en animales tratados con el estabilizador mastocitario ketotifeno. Por otro lado, las respuestas secretoras intestinales a la degranulación mastocitaria y a la activación de PAR‐2 se vieron reducidas en la fase post‐infecciosa (día 30 post‐infección). Si bien, ello sugeriría una desensibilización epitelial a los mediadores mastocitarios, la estabilización de los MCs con ketotifeno no tuvo efectos sobre las respuestas secretoras basales o mediadas por PAR‐2 ni sobre los incrementos post‐infecciosos en la permeabilidad. En resumen, hemos definido los cambios en las poblaciones mastocitarias y la función barrera intestinal, así como su relación con la expresión de proteínas de uniones intercelulares y con la expresión de PAR‐2 y sus efectos secretores en un modelo de disfunción intestinal post‐infecciosa. Aunque estos datos apoyan una implicación de los MCs en los cambios morfo‐funcionales asociados a la infección cuestionan una participación directa de los mismos en la función barrera intestinal. Mecanismos de regulación similares pueden operar en enfermedades inflamatorias y funcionales gastrointestinales. / Epithelial barrier function is considered part of the defensive mechanisms of the gastrointestinal tract. Barrier function results from an interplay of at least three components: hydroelectrolytic transport, permeability and intestinal motility. Alterations of these functions favor a state of luminal antigens‐ and microorganismsdependent stimulation of the local immune system, leading to an inflammatory‐like stage. These changes are common to several gastrointestinal pathologies, including inflammatory bowel disease and irritable bowel syndrome. Mast cells (MCs), throught a process of activation and release of endogenous neuroimmune mediators, act as effector cells in the neuroimmune responses associated to these alterations. This work aims the characterization of MCs’ implications in gastrointestinals dysfunctions, with emphasis in barrier function. For this, we used a model of Trichinella spiralis infection in rats. After the infection, time‐related (days 2 to 30 postinfection) changes in mucosal and connective tissue MCs were assessed in the jejunum. Changes in MCs infiltrates occurred together with an up‐regulation of proteinases gene expression. MC‐derived proteinases, throught the enzymatic cleavage of specific substrates, including proteinase‐activated receptors (PARs), regulate gastrointestinal secretomotor and sensory functions. In addition, we characterized postinfectious neuroepithelial remodelations, leading to functional changes in barrier function. In particular, alterations in basal electrolytic secretion, secretory responses to secretagogues and an increase in epithelial permeability were observed. These barrier dysfunctions are associated to time‐related changes in the expression of tight junctions‐related proteins. In parallel, an increase in spontaneous intestinal motor activity was also observed. Treatment with the MC stabilizer ketotifen partially prevented these motor alterations, thus suggesting that MCs are implicated, at least partially, in these responses. In addition, secretory responses to MCs degranulation and PAR‐2 activation were reduced during the postinfectious phase (day 30 postinfection). This might suggest a desensitization of the epithelium to MC mediators. However, treatment with the MC stabilizer ketotifen was without effect, thus suggesting the contribution of additional, MCs‐independent mechanisms. In summary, this work characterizes changes in MCs populations and epithelial barrier function in a model of postinfectious gut dysfunction in rats. Furthermore, the relationship with the expression of tight junction‐related proteins and PAR‐2 and its secretory effects was characterized. Overall, results obtained support an implication of MCs in the morphological and functional alterations associated to the infection. However, they also question a direct role of MCs in the control of epithelial barrier function. Similar mechanisms might operate in inflammatory and functional gastrointestinal disorders.