Submitted by Tatiane Pereira Scarpelli (tati.scarpelli@gmail.com) on 2018-08-15T01:03:56Z No. of bitstreams: 1 Tatiane- dissertação final.pdf: 1984978 bytes, checksum: 95d87d58bd4bea79691e4ec03d530a18 (MD5) / Approved for entry into archive by Elza Mitiko Sato null (elzasato@ibilce.unesp.br) on 2018-08-15T12:42:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 scarpelli_tp_me_sjrp.pdf: 1984978 bytes, checksum: 95d87d58bd4bea79691e4ec03d530a18 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:42:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 scarpelli_tp_me_sjrp.pdf: 1984978 bytes, checksum: 95d87d58bd4bea79691e4ec03d530a18 (MD5) Previous issue date: 2018-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O consumo excessivo de lipídios na dieta constitui um problema na alimentação da sociedade atual, contribuindo para o desenvolvimento de doenças e de cânceres como o de mama, de próstata e de cólon. Se tratando da próstata, os lipídios podem ter ação direta, ou por mediadores celulares deles derivados e desequilibrar os níveis de esteroides sexuais. Contudo, alguns componentes dietéticos exercem papel benéfico para a saúde prostática ou mesmo propriedades terapêuticas, como a curcumina. Existe, portanto, interesse crescente na ação da curcumina sobre a próstata, e seus análogos sintéticos vem sendo testados para aplicação no tratamento de doenças prostáticas. Sabendo-se que componentes da dieta materna podem afetar a próstata masculina permanentemente, por programação do desenvolvimento, este estudo avaliou as consequências da dieta materna enriquecida com lipídios saturados da banha de porco, durante a gestação e lactação de ratos Wistar, associada ou não à suplementação alimentar com curcumina, além da ingestão do óleo de milho comercial, sobre a histofisiologia da próstata ventral da prole na idade adulta. Ratos Wistar foram divididos em cinco grupos (n=12 por grupo; 12 semanas de idade), segundo o regime alimentar ao qual as mães foram submetidas da 8ª sem. de idade até o desmame dos filhotes: C - dieta padrão; O- dieta padrão e óleo de milho (100µL em dias alternados, via gavagem); Cm - dieta padrão e óleo de milho contendo curcumina (100mg/kg de peso corporal, em dias alternados, via gavagem); L- dieta enriquecida com banha de porco (31% de banha de porco) e LCm - dieta enriquecida com banha de porco e óleo de milho/curcumina. Após eutanásia dos animais e realizada coleta dos materiais biológicos, como a próstata ventral e o sangue, realizaram-se análises das quais se obteve aumento nos depósitos de gorduras epididimal e visceral e, consequentemente, aumento no índice de adiposidade dos grupos L e O. Os animais dos grupos O e LCm tiveram aumento nos níveis de triglicerídeos e o grupo O apresentou aumento no nível de colesterol HDL. Os animais de O, L e LCm apresentaram atrofia epitelial, evidenciada tanto pela análise da frequência de ácinos atróficos, pela altura do epitélio e pela diminuição da frequência relativa do epitélio acinar. Ainda, os animais do grupo L apresentaram aumento da frequência relativa do compartimento luminal e de fibras colágenas. Não houve alterações nos níveis de proliferação celular. A expressão de receptores de andrógenos (AR) no epitélio foi maior no grupo L e um pouco menor para os grupos O e LCm. A incidência (número de animais acometidos/número total de animais) de focos inflamatórios aumentou nos grupos O e L (C- 29%; O – 40%; L – 78%) e foi reduzida pelo consumo de curcumina (Cm- 8%; LCm- 38%). Os dados obtidos indicam que, as dietas maternas enriquecidas com lipídios causam respostas na morfologia e na fisiologia da próstata ventral, em diferentes níveis. A banha pareceu alterar a estrutura e a expressão de AR de maneira acentuada, além de propiciar inflamação na glândula, enquanto o óleo de milho altera em menor grau. Além disso, a curcumina sozinha responde positivamente na próstata. / Excessive consumption of lipids in the diet is a problem in the feeding of current society, contributing to the development of diseases and cancers such as breast, prostate and colon. Lipids can have direct action on the prostate gland, or by cellular mediators derived from them and unbalance levels of sexual steroids. However, some dietary components play a beneficial role in prostate health or even therapeutic properties, such as curcumin. There is, therefore, growing interest in the action of curcumin on the prostate, and its synthetic analogues have been tested for application in the treatment of prostatic diseases. Knowing that components of the maternal diet can permanently affect the male prostate gland by developmental programming, this study evaluated the consequences of the maternal diet enriched with lard saturated lipids during gestation and lactation of Wistar rats, associated or not with dietary supplementation with curcumin, in addition to the commercial corn oil intake, on the histophysiology of the ventral prostate of the offspring in adulthood. Wistar rats were divided into five groups (n = 12 per group, 12 weeks old), according to the diet to which the mothers were submitted from the 8th week of age until the weaning of the pups: C - standard diet; O- standard diet and corn oil (100 μL on alternate days, via gavage); Cm - standard diet and corn oil containing curcumin (100mg / kg body weight, every other day, via gavage); L - diet enriched with lard (31% of lard) and LCm - diet enriched with lard and corn oil / curcumina. After the euthanasia of the animals and the collection of biological materials, such as the ventral prostate and blood, analyzes were carried out, which resulted in an increase in the deposits of epididimal and visceral fat and, consequently, an increase in the adiposity index of the L and O groups. The animals in the O and LCm groups had an increase in triglyceride levels and the O group had an increase in the level of HDL cholesterol. The O, L and LCm animals presented epithelial atrophy, evidenced both by the analysis of the atrophic acini frequency, by the height of the epithelium and by the decrease of the relative frequency of the acinar epithelium. Still, the animals in the L group presented increased relative frequency of the luminal compartment and collagen fibers. There were no changes in the levels of cell proliferation. The expression of receptor androgen (AR) in the epithelium was higher in the L group and somewhat lower in the O and LCm groups. The incidence (number of affected animals / total number of animals) of inflammatory foci increased in the O and L groups (C - 29%, O - 40%, L - 78%) and was reduced by the consumption of curcumin (C - 8% (LC-38%). The data obtained indicate that maternal diets enriched with lipids cause responses in the morphology and physiology of the ventral prostate at different levels. The lard appeared to alter the structure and expression of AR very markedly, in addition to providing inflammation in the gland, while the corn oil changes to a lesser degree. In addition, curcumin alone responds positively in the prostate.

Resumo não disponível

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-04-06T16:12:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Lia Pontes Arruda Porto.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T15:09:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Lia Pontes Arruda Porto.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T15:09:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_ Lia Pontes Arruda Porto.pdf: 2438506 bytes, checksum: c90bea353f9f17081cb87d9108e4bbeb (MD5) / Capes / A transição epitelial-mesenquimal (TEM) representa o processo em que as células epiteliais perdem suas características e adquirem propriedades de células mesenquimais típicas. A dissociação das células tumorais devido à alteração na adesão célula-célula representa um dos princípios chave da invasão tumoral e da TEM. O tumor odontogênico queratocístico (TOQ) tem como características principais o seu comportamento clínico agressivo e altas taxas de recorrência. O conhecimento das características moleculares da TEM no TOQ pode fornecer marcadores úteis que auxiliem no prognóstico e na condução terapêutica individualizada desse tumor odontogênico. O presente estudo analisou a imunoexpressão das proteínas E-caderina, N-caderina, Snail, Slug e Vimentina, por estarem envolvidas no processo da TEM, em casos de TOQ em comparação com cistos radiculares (CRs) e folículo dentais (FDs) a fim de fornecer melhores perspectivas na compreensão do comportamento agressivo desses tumores. Foram utilizados 32 casos de TOQ, 15 CRs e 08 FDs para a técnica imunoistoquímica. A análise do perfil de imunoexpressão nos TOQs demonstrou expressão preservada de E-caderina na maioria dos casos, sendo que a N-caderina demonstrou um ganho de expressão em epitélio tumoral em relação ao estroma, o que esteve correlacionado com a expressão positiva de Slug em epitélio, e este por sua vez com a expressão positiva de Snail. No estroma dos TOQs, a N-caderina correlacionou-se positivamente com Slug, e a Vimentina com o Snail no epitélio. Ao comparar os três grupos estudados, a imunoexpressão das proteínas foi influenciada de forma marcante pela inflamação. As expressões aumentadas de N-caderina no epitélio e no estroma, do Slug no epitélio e da Vimentina no estroma estiveram associadas com a localização em mandíbula. A grande maioria dos casos que apresentaram localização posterior (quer isoladamente ou em conjunto com a anterior) apresentou expressão preservada de E-caderina. Estas proteínas provavelmente desempenham papéis diferenciados na mediação da invasividade local em TOQs. Apesar da expressão da E-caderina estar preservada na maioria dos TOQs, há indícios de ocorrência da TEM nesses tumores. A alta intensidade de marcação do Slug nos TOQs sugere que esta proteína é provavelmente o fator de transcrição principal envolvido na indução de TEM nos TOQs.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-04-02T13:47:38Z No. of bitstreams: 1 Rosane Borges Dias - Estudo do perfil... 2014.pdf: 2418992 bytes, checksum: 9a4f389957bc3f98114112321eee18b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-02T13:47:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosane Borges Dias - Estudo do perfil... 2014.pdf: 2418992 bytes, checksum: 9a4f389957bc3f98114112321eee18b4 (MD5) Previous issue date: 2014 / Universidade Federal da Bahia. SAlvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A displasia epitelial oral (DEO) é um aspecto histológico descrito em lesões potencialmente malignas, cujos mecanismos relacionados a patogênese e potencial de transformação são pouco conhecidos. Sabendo-se que a via de sinalização Sonic Hedgehog(SHH)tem participação no desenvolvimento do carcinoma escamocelular de boca(CEB) e que as proteínas relacionadas a esta via de sinalização estão envolvidas nos mecanismos biológicos relacionados a iniciação e progressão de tumores humanos. O objetivo deste trabalho foi estudar a expressão das proteínas da via de sinalização SHH em DEO, a fim de contribuir para o conhecimento do perfil biológico desta lesão. Material e Métodos: As amostras de DEO foram revisadas e classificadas de acordo com o risco de malignidade descrito por Kujan et al.(2006) e OMS(2005). Vinte e cinco casos de DEO foram submetidos a reação imuno-histoquímica para as proteínas SHH, PTCH1, SUFU, HHIP, GLI1 e Ciclina D1(CCND1)utilizando o sistema polimérico AdvanceTM(Dako). Para fins comparativos, cinco casos de hiperqueratose, oito de hiperplasia fibrosa inflamatória(HFI) e quatro de mucosas não-neoplásica(MNN)também foram avaliados.Todos os casos foram analisados de acordo com os parâmetros semiquantitativos descritos por Gurgel et al.(2008)e os dados foram analisados usando Graph Pad Prism5.01. Resultados: Vinte e um(84%)DEO foram classificados como lesões de baixo risco e 4(16%)como alto risco. A proteína SHH foi predominante no citoplasma(n =14, sendo 56%) e a positividade de PTCH1 foi observada em membrana e citoplasma (n=23, 92%). As proteínas HHIP e SUFU foram observadas principalmente no citoplasma das células epiteliais e foram positivas em 17 (68%) e 11 (44%) das DEO, respectivamente. GLI1 foi positivo em 21 (84%), principalmente localizada nos núcleos das células epiteliais (n=12; 70,6%). A proteína CCND1 foi exclusivamente no núcleo 19(76%).Em DEO, os escores predominantes para SHH, PTCH1, HHIP, SUFU, GLI1 e CCND1 foram: 2+ (57,14%), 3+ (73,91%), 3+ (58,82%), 2+ e 3+ (36,36%), 3+ (90,48 %), 1+(47,37 %), respectivamente. Os casos de DEO exibiram maior expressão de HHIP(p=0,02) e GLI1(p=0,00), em comparação com hiperqueratose. Além disso, níveis elevados de PTCH1 (p=0,05), HHIP (p= 0,01) e CCND1 (p=0,00) foram observados em DEO em comparação com HFI. Ainda, uma maior expressão de PTCH(p=0,01) foi observada nos casos de DEO quando comparados com MNN. Conclusões: Os nossos resultados sugerem que a via SHH pode participar da patogênese da DEO e reforçam a relação desta cascata sinalizadora na carcinogênese oral. / Oral epithelial dysplasia (OED) is a histological aspect described in premalignant lesions and the mechanisms related to the pathogenesis and malignant progression are poorly understood. It is known that Sonic Hedgehog (SHH) signaling pathway participates in the development of oral squamous cell carcinoma, and proteins related to this cascade are involved in biological mechanisms related to the initiation and progression of human tumors. The aim of this study was to investigate SHH signaling molecules in OED, in order to contribute to the knowledge of the biological profile of this lesion. Methods: Samples of OED were reviewed and classified according to the risk of malignancy described by Kujan et al. (2006) and WHO (2005). Twenty five cases of DEO were to submitted to immunohistochemical reactions for SHH, PTCH1, SUFU, HHIP, GLI1 and Cyclin D1 (CCND1) proteins using AdvanceTM polymer system (Dako). For comparative purposes, five cases of hyperkeratosis, eight inflammatory fibrous hyperplasia (IFH) and four non- neoplastic (NNM) mucosa were also evaluated. All OED were analyzed according to the semi-quantitative parameters described by Gurgel et al. (2008) and the data was analyzed using Graph Pad Prism 5.01. Results: Twenty- one (84%) OED were classified as low risk lesions and 4 (16%) as high risk. SHH protein was predominant in cytoplasm (n=14; 56%) and PTCH1 positivity was described in both membrane and cytoplasm (n=23; 92%). HHIP and SUFU proteins were observed in cytoplasm of epithelial cells and were positive in 17 (68%) and 11 (44%) OED, respectively. GLI1 protein was positive in 21 (84%), mainly located in the cells nuclei (n=12; 70.6%). CCND1 protein was exclusively in the nucleus 19 (76%). The predominant scores for SHH, PTCH1, HHIP, SUFU, GLI1 and CCND1 were: +2 (57.14%), +3 (73.91%), +3 (58.82%), +2 and +3 (36.36%), +3 (90.48%), +1 (47.37%), respectively. OED sample had higher levels of HHIP (p=0.02) and GLI1 (p=0.00) as compared to hyperkeratosis. Furthermore, high levels of PTCH (p=0.05), HHIP (p=0.01) and CCND1 (p=0.00) were observed in OED as compared to IFH OED. Also, a high level of PTCH (p= 0.01) was observed in OED as compared to NNM. Conclusions: Our results suggest that the SHH pathway may participate in the pathogenesis of DEO and corroborates to the relationship of this signaling cascade in oral carcinogenesis.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2011 / Bibliografia: f. 56-66 / Objetivo: avaliar o risco de vários fatores clínicos de predizer doença persistente ou recorrente, após tratamento de neoplasia intra-epitelial cervical (NIC) por conização e o significado clínico da expressão da p53 e da p16INK4a nestes tumores. Métodos: / Purpose: Evaluate the ability of various factors to predict recurrence or persistence disease, after therapeutic conization on CIN 2 and 3 and the clinical significance of p16 INK4a and p53 in tumor progression. Methods: A retrospective review was conduct

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:34Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:11Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12717.pdf: 633825 bytes, checksum: 9d6b59494fef2e8e7af44734f3976d60 (MD5) / Objetivo: Avaliar as peças cirúrgicas resultantes da cirurgia com alças de alta frequência no tratamento das neoplasias intraepiteliais cervicais de alto grau. Métodos: Foram selecionados 118 prontuários de pacientes com diagnóstico de lesão de alto grau cervical, submetidas à exérese da zona de transformação. As peças resultantes foram avaliadas quanto a idade da paciente, ao grau de lesão, ao número de fragmentos retirados, ao estado de comprometimento das margens e ao grau de artefatos térmicos. Resultados: A idade das pacientes variou de 17 a 55 anos, com média de 27 anos; 63,6% das pacientes tinham diagnóstico de neoplasia intraepitelial cervical grau II (NIC II) e 36,4% de NIC III. A lesão foi retirada em uma passada em 79,6% dos casos e com duas ou mais passadas em 20,3% dos casos. As margens estavam livres de neoplasia intraepitelial em 85,6% dos casos, comprometidas na margem endocervical em 6,8%, comprometida na margem ectocervical em 1,7%, em ambas as margens em 3,4% dos casos. Fragmentos prejudicados por artefatos ocorreram em 2,5% dos casos e não houve nenhum caso de prejuízo do diagnóstico por fragmentação do material. Os graus de artefatos foram considerados leves em 46,6% das peças, moderados em 30,5% e acentuados em 22,8% dos casos. A associação entre as variáveis mostrou que mulheres com idade igual ou superior a 30 anos apresentaram mais casos de NIC III do que aquelas com faixa etária abaixo de 30 anos (p<0,0004). O comprometimento neoplásico de margens cirúrgicas e artefatos de grau severo ocorreram mais vezes nos casos em que foram retirados dois ou mais fragmentos e em pacientes com idade igual ou superior a 30 anos. O mesmo foi observado quando o grau da lesão cervical foi NIC III. Conclusão: As neoplasias intraepiteliais de grau III em mulheres com idade superior a 30 anos quando retiradas em dois ou mais fragmentos na cirurgia com alça de alta frequência apresentam maior número de margens comprometidas e grau severo de artefatos térmicos. / Objective: Evaluate the results of LETZ surgery for Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN). Methods: 118 patients diagnosed with severe cervical lesions were selected and submitted to loop excision of the transformation zone (LETZ). The results were evaluated by patient age, degree of lesion, number of fragments removed, state of compromise of the margins, and degree of thermal artifact. Results: Patient age varied between 17 and 55, with the average being 27; 63.6% of patients had been diagnosed with cervical intraepithelial neoplasia grade II (CIN II) and 36.4% with CIN III. The lesion was removed in one fragment in 79.6% of the cases and in two or more fragments in 20.3% of the cases. The margins were free of intraepithelial neoplasia in 85.6% of the cases, compromised in the endocervical margin in 6.8% of the cases, compromised in the ectocervical margin in 1.7% of the cases, and compromised in both margins in 3.4% of the cases. Fragment damage by artifact occurred in 2.5% of the cases, and there were no cases of fragmented material adversely affecting evaluation. The degree of artifact was light in 46.6% of the cases, moderate in 30.5 %, and serious in 22.8%. The relation between the variables shows that women who were 30 years old or more presented more cases of CIN III than those below 30 (p<0.0004). Neoplasic compromise of the surgical margins and severe grade artifact occurred more often in the cases in which two or more fragments were removed from patients who were 30 years old or more. The same was observed when the cervical lesion grade was CIN III. Conclusion: Grade III cervical intraepithelial neoplasia in women 30 years old or more when removed in two or more fragments during LETZ surgery presents a greater number of margins compromised and a more severe degree of thermal artifact. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2013-02-08T13:30:15Z No. of bitstreams: 1 renata_m_muno_ioc_bcm_0063_2011.pdf: 80505015 bytes, checksum: 41503f5b6c3aed2807dcf9752212e9f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-08T13:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 renata_m_muno_ioc_bcm_0063_2011.pdf: 80505015 bytes, checksum: 41503f5b6c3aed2807dcf9752212e9f1 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz.Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O Toxoplasma gondiié um protozoário parasito intracelular, agente causador da toxoplasmose que é uma das zoonoses mais endêmicas do mundo. O T. gondii possui dois tipos de reprodução: assexuada, que origina dois estágios evolutivos infectivos, os bradizoítos e taquizoítos e a sexuada que ocorre no tecido epitelial intestinal, exclusivamente de felídeos, hospedeirosdefinitivos, resultando na formação de oocistos imaturos que são eliminados nas suas fezes. A disseminação de oocistos no ambiente é o principal fator que explica a distribuição mundial do parasito, associada à formação de cistos teciduais que aumentam a capacidade de transmissão do parasito, através do consumo de carne crua ou mal cozida. Dada a especificidade de o ciclo sexuado ocorrer no tecidoepitelial, o principal objetivo do presente trabalho foi investigar, in vitro,a interação do T. gondiicom células epiteliais oriundas do intestino de ratos e de rim de felídeos, a fim de estabelecer possíveis correlações entre a origem do tecido (epitelial) e a fonte (rato e felídeos) que possam determinar o destino intracelular do parasito. Assim, culturas de linhagens celulares CRFK e IEC-6 foram infectadas com bradizoítos e taquizoítos de T. gondiicom diferentes cargas infectivas. Após os desenhosexperimentais as culturas foram processadas como de rotina para microscopia óptica de luz e fluorescência e para microscopia eletrônica de transmissão e varredura. As análises quantitativas mostraram que a linhagem CRFK foi mais susceptível à infecção frente aos dois estágios infectivos do que a linhagem IEC-6 e que essa diferença foi independente da carga parasitária e do estágio infectivo utilizados. As análises qualitativas mostraram que a linhagem CRFK foi maissusceptível à infecção do que a linhagem IEC-6 e esse evento foi independente da carga infectiva utilizada. As análises qualitativas mostraram que a cistogênese se estabeleceu de forma espontânea na CRFK quando infectada com bradizoítosda cepa ME49 ao se utilizar a carga infectiva de 1:10 (parasito-célula hospedeira). Além disso, esta linhagem celular apontou estágios infectivos morfologicamente distintos de taquizoítos e bradizoítos, similares aos estágios esquizontes de T. gondii. O presente estudo mostrou que existem diferenças no destino intracelular do parasito de acordo com o tipo celular utilizado. O emprego de células epiteliais de felinos como modelo celular da toxoplasmose experimental mostrou que pode contribuir com novos subsídios para o estudo da biologia celular do parasito, assim como contribuir como metodologia alternativa para o melhor entendimento do ciclo enteroepitelial doT. gondii. Este modelo celular abre um novo campo de investigação para aspectos moleculares desta interação que possam contribuir, por exemplo, para introdução de estratégias que venham a interferir em umas das principais vias de disseminação da toxoplasmose. Além disso, a CRFK se mostrou um modelo celular em potencial para a produção de cistos de T. gondii in vitroem larga escala abrindo perspectivas na redução do uso de animais experimentais para isolamento de cistos e inserção na área de inovação e desenvolvimento tecnológico. / Toxoplasma gondiiis an intracellular protozoan parasite, the causative agent of toxoplasmosis which is one of the most endemic zoonoses in the world. T. gondiihas two types of reproduction: the asexual, which leadstwo evolutive infective stages, the bradyzoites and tachyzoites and the sexual thatoccurs in the intestinal epithelial tissue, exclusively in cats, the definitive hosts, resulting in the formation of immature oocysts that are shed in their feces. The spread ofoocysts in the environment is the main factor that explains the global distribution and dissemination of toxoplasmosis, leading to the formation of tissue cysts increasingthe parasite capacity of transmission, through ingestion of raw or undercooked meat. Once the specificity of the sexual cycle occurs in epithelial tissue, the main objective of this study was to investigate the in vitrointeraction of T. gondii epithelial cells derived from the intestine of rats and kidney of cats, in order to establish possible correlations between the origin of tissue (epithelial) and the source (rats and cats) that may determine the intracellular fate of the parasite. Thus CRFK and IEC-6 cell lines were infected with T. gondiibradyzoites and tachyzoites with different infective loads. The kinetic study of the infective capacity of both stages of the parasites was performed by fixing cell cultures at different times of interaction, aiming the quantitative analysis of infection of both cell types fronts of two strains and two infective stages of the parasite. After the experimental designs cultures were processed as routine for light microscopy and fluorescence and transmission and scanning electron microscopy. Quantitative analysis showed that CRFK line was more susceptible to infection than the IEC-6 line, and that this event was independentof the infective stage or the infective load used. The qualitative analysis showed that cystogenesis occurred spontaneously in the CRFK line when infected with the ME49 strain bradyzoites, by using the load of 1:10. In addition, this cell linepointed to morphologically distinct stages of tachyzoites and bradyzoites, similar to schizonts stages of T. gondii. The present study showed that there are differences in the intracellular fate of the parasite according to the cell type used. The use of feline epithelial cells as cellular model of experimental toxoplasmosis showed that it can contribute with new insights for studying the cell biology of the parasite as well as contribute as an alternative methodology for better understanding T. gondiienteroepithelial cycle. This cellular model opens a new field of investigation for molecular aspects of this interaction that can contribute, for example, to introduce strategies that will interfere in one of the main routes of toxoplasmosis spread. In addition, the CRFK line presented itself as a potential cellular model for cysts production in vitro in large scale opening perspectives on reduction in the use of animals forcysts isolation and insertion in inovation an technological development area.

Trichomonas vaginalis é o protozoário flagelado que parasita o sistema urogenital humano causando a tricomoníase, a doença sexualmente transmissível não viral mais comum no mundo, sendo registrados aproximadamente 276 milhões de novos casos a cada ano. O sucesso da colonização das células hospedeiras e desenvolvimento da infecção envolve um complexo processo que culmina em citoaderência e citotoxicidade. Nucleotídeos e nucleosídeos são liberados para o espaço extracelular por células em situações de estresse ou lesão tecidual e desencadeiam seus efeitos sinalizadores através da ativação de purinoceptores. Ainda, a hidrólise sequencial de nucleotídeos pelas ectonucleotidases, nucleosídeo trifosfato difosfoidrolase (NTPDase) e ecto-5’-nucleotidase leva à formação de nucleosídeos que são essenciais para o metabolismo de purinas do parasito. Efeitos antagônicos são desencadeados por nucleotídeos e nucleosídeos, respectivamente próinflamatórios e anti-inflamatórios, na mediação de respostas imunes. A atividade dessas enzimas sobre os nucleotídeos da guanina e o efeito de restrição metabólica sobre a hidrólise de nucleotídeos foi avaliada. Além disso, a participação da sinalização mediada pelos nucleotídeos e nucleosídeos também foi avaliada em um modelo de citotoxicidade. Os resultados demonstram que os nucleotídeos GTP, GDP e GMP são substratos para as ectonucleotidases de T. vaginalis com parâmetros cinéticos compatíveis para enzimas dessa família. A condição de restrição de soro aumentou a atividade da NTPDase e da ecto-5’-nucleotidase e o aumento da expressão gênica das TvNTPDase 2 e 4 pode justificar o aumento da atividade. A recaptação de guanosina extracelular foi menor do que a recaptação de adenosina, demonstrada pela razão isotópica C12/C13 no nucleosídeo detectada no DNA dos parasitos. A fim de investigar um possível papel biológico para o acúmulo de guanosina extracelular, bem como avaliar o envolvimento da sinalização purinérgica na citotoxicidade mediada pelo parasito, diferentes isolados de T. vaginalis foram testados frente à capacidade de promover citólise. Todos os isolados foram capazes de promover efeito citolítico em alguma proporção, com destaque para o isolado TV-LACM6, que apresenta um perfil de hidrólise ATP, GTP > AMP > GMP. Quando nucleotídeos e nucleosídeos foram testados, o efeito citotóxico produzido pelo isolado foi potencializado na presença de ATP e GTP. Por outro lado, o efeito foi revertido na presença de eritro-9-(2-hidroxi-3-nonil) adenina (EHNA), um inibidor da adenosina deaminase. Importante, guanosina não foi capaz de reverter o efeito citotóxico produzido pelos trofozoítos, resultado que corrobora com o perfil de hidrólise de nucleotídeos e acúmulo de guanosina exracelular, sendo uma vantagem para o parasito. A possível participação dos receptores de adenosina foi avaliada, entretando os receptores ADORA1 e ADORA2A não parecem estar envolvidos no efeito protetor mediado pela adenosina. Considerando o potencial farmacológico desempenhado por essas enzimas no metabolismo de purinas em protozoários bem como no controle de respostas imunes, a modulação da hidrólise de nucleotídeos pode ser um alvo terapêutico importante e representar um mecanismo sinérgico na atividade antiparasiária de compostos ativos. Nesse sentido, o estudo demonstrou a atividade anti-T. vaginalis de três compostos, e em especial o isoaustrobrasilol B, com IC50 de 38 μM. O composto não apresentou efeitos hemolíticos frente a eritrócitos humanos e apesar de ter demonstrado efeito citotóxico in vitro frente à linhagem de células epiteliais vaginais humanas (HMVII), nenhuma citotoxicidade foi demonstrada no modelo in vivo. Isoaustrobrasilol B foi o único composto que inibiu significativamente as atividades da NTPDase e ecto-5’-nucleotidase e o efeito imune atribuído ao acúmulo extracelular de nucleotídeos foi avaliado. A produção de espécies reativas de oxigênio e interelucina-6 (IL-6) por neutrófilos estimulados por T.vaginalis não foi afetada pelo tratamento com o composto. Por outro lado, a liberação de interleucina-8 (IL-8), a principal interleucina produzida por neutrófilos na tricomoníase, foi aumentada. O efeito sinérgico de redução de viabilidade de trofozoítos e modulação da NTPDase e ecto-5’-nucleotidase pode aumentar a suscetibilidade do T. vaginalis frente à resposta imune do hospedeiro e consequentemente, sua eliminação do sítio de infecção. / Trichomonas vaginalis is a flagellate protozoan that parasitizes the human urogenital tract causing trichomoniasis, the most common non-viral sexually transmitted disease, infecting approximately 276 million people worldwide annually. To achieve success in parasitism trichomonads develop a complex process against the host cells that culminate in cytoadherence and cytotoxicity. Nucleotides and nucleosides are released into the extracellular space by cells under stress or injury and they exert their signaling effects through activation of the purinoceptors. Moreover, the ectonucleotidases, nucleoside triphosphate diphosphohydrolase (NTPDase) and ecto-5'-nucleotidase, are capable of hydrolyzing the nucleotides producing nucleosides that are essential to the parasite purine metabolism. The enzymatic cascade mediated by ectonucleotidases is relevant in controlling nucleotides and nucleosides levels as these molecules play antagonistic roles in inflammation, as proinflamatory and anti-inflammatory mediators, respectively. This study investigated the hydrolysis profile of guanine nucleotides in T. vaginalis as the effect of serum limitation condition in the enzymatic cascade. Furthermore, we investigated the influence of extracellular nucleotides and nucleosides on the modulation of the host cell cytotoxicity mediated by T. vaginalis. Results show that guanine nucleotides GTP, GDP, GMP are substrates for T. vaginalis ectonucleotidases, with expected kinetic parameters for this enzyme family. The metabolic restriction condition enhanced NTPDase and ecto-5’-nucleotidase activities and the highest gene expressions found for TvNTPDase 2 and 4 which may explain the enzymatic activity enhance. The extracellular guanosine uptake was lower than that observed for adenosine into parasite DNA measured by isotopic ratio C12/C13 of the nucleosides. In order to investigate the possible biological role for extracellular guanosine accumulation as well as to evaluate the involvment of purinergic signaling in the citotoxicity promoted by the parasite, a collection of T. vaginalis isolates were tested against a human epithelial vaginal cell line (HMVII). Fresh clinical T. vaginalis isolates produced cytolytic effect against human vaginal epithelial cells in a heterogeneous profile. The most cytotoxic isolate, TV-LACM6, presents the hydrolysis profile ATP, GTP > AMP > GMP. When the nucleotides and nucleosides were tested, the cytotoxic effect elicited by TV-LACM6 was increased in presence of nucleotides ATP and GTP. In contrast, the cytotoxicity was reversed by adenosine in presence of erythro-9-(2-hydroxy-3-nonyl) adenine (EHNA), but not by guanosine, which is in agreement with the accumulation of extracellular guanosine and the hydrolysis profile, acting as an advantage for the parasite. ADORA1 and ADORA2A are not involved in the protective mechanism of adenosine. Considering the pharmacological potential that ectonucleotidases play in the context of purine metabolism and in the imune response modulation, nucleotide hydrolysis may represent a therapeutic target as an additional mechanism in association with anti T.vaginalis compounds. The study demonstrated promissing activities for three derivatvies with isoaustrobrasilol B the most activity compound with IC50 38 μM. The compound did not demonstrate any hemolytic activity and although induced cytotoxicity against human epithelial vaginal cells (HMVII), absence of toxicity was obtained when in vivo model was studied. Isoaustrobrasilol B was the only compound that significantly inhibited NTPDase and ecto-5’-nucleotidase activities and the immune modulation attributed to extracellular nucleotide accumulation was evaluated. Reactive oxygen species production and interleukin-6 (IL-6) release by T.vaginalis stimulated neutrophils were not affected by phloroglucinol treatment. On the other hand, interleukin-8 (IL-8), the primarily cytokine produced by neutrophils during trichomoniasis, was significantly enhanced. The associative mechanism of trophozoites death and NTPDase and ecto-5’-nucleotidase modulation may increase the susceptibility of T. vaginalis to host immune responses and, consequently, the elimination from the infection site.

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Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T20:15:08Z : No. of bitstreams: 1 monteirojunior_o_me_botfm.pdf: 372086 bytes, checksum: e70c404b57dbf716ae6468fc47c63be9 (MD5) / Objetivando estudar a prevalência de neoplasia intra-epitelial cervical (NIC) em mulheres soro-positivas para o vírus da imunodeficiência humana (HIV) ao compará-las com um grupo controle de mulheres soro-negativas, foi realizado um trabalho retrospectivo em que foram avaliadas 86 mulheres HIV positivas e 86 mulheres HIV negativas, que freqüentaram um serviço público de acompanhamento em DST/AIDS na cidade de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil. Foram realizadas avaliações citológicas pelo Papanocolaou, colposcopias e biópsias quando indicadas. Encontrou-se uma prevalência maior de NIC no grupo de mulheres HIV positivas em comparação ao grupo de mulheres HIV negativas, e esta diferença foi estatisticamente significativa. Conclui o autor que, sendo o câncer do colo uterino uma patologia previnível e com o atual aumento da expectativa de vida das pacientes HIV positivas, este grupo de mulheres merece atenção ginecológica diferenciada com consultas mais frequentes e livre acesso à colposcopia. / Objetiving to study the prevalence of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) in human immunodeficiency virus (HIV) – infected women and to compar with a group control of seronegative women, it was realized a retrospective study being assessed 86 HIV – infected and 86 HIV – unifected women, who were attended in a public service of accompaniment in TSD/AIDS in Campo Grande City, Mato Grosso do Sul, Brazil. Were realized evolution cytologic for the Papanicolaou test, colposcopy and biopsies, when indicated. It was found a prevalence of CIN significantly greater in HIV – seropositive women than in seronegative women. In conclusion, being the cervical cancer a pathology that can be prevented and with the current increase of the life’s expectative of the HIV – seropositive women, this group of women needs a better gynecologic atenttion with visits and Papanicolaou smears more often and free access to colposcopy.