Os répteis compõem hoje uma classe com mais de 8.000 espécies e em razão das restrições na importação desses animais, o risco na introdução de doenças exóticas, o crescente número de espécies ameaçadas no mundo, entre outros, a reprodução e a manutenção em cativeiro desses animais é muito importante. No Sul da Califórnia, que é considerado um Hotspot para a biodiversidade, a Zoological Society of San Diego mantém uma reserva ecológica com aproximadamente 400 hectares e formada por vegetação tipo Chaparral, Coastal Sage Scrub e áreas cobertas por cactos (Opuntia sp.). Durante o período de junho de 2005 a julho de 2006 foram capturadas 96 cascavéis das espécies Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri e C. mitchellii phyrrus, durante os trabalhos de campo pela procura visual limitada por tempo. Foram realizadas avaliações morfológicas e reprodutivas em todas essas serpentes capturadas. Nos machos realizou-se a colheita e avaliação de sêmen, incluindo duas colorações específicas para avaliar integridade de membrana espermática e do acrossoma. Nas fêmeas foi realizada a avaliação ultra-sonográfica dos ovários, com mensuração e contagem de folículos, além do diagnóstico de gestação. Para a C. ruber ruber, a serpente mais abundante neste estudo, foram observadas fêmeas prenhes no verão e vitelogênicas na primavera, outono e inverno. Apenas as fêmeas desta espécie com condição corporal boa ou muito boa apresentaram-se vitelogênicas ou prenhes. Nos machos dentre as características seminais avaliadas, não foi observada a diferença estatisticamente significante ao longo das estações do ano. Em paralelo a este estudo, também foram testados protocolos para a congelação de sêmen de serpentes, com a obtenção de resultados promissores, discutidos em capítulo específico. As informações obtidas neste estudo visam contribuir para a compreensão da biologia reprodutiva e conservação das serpentes, em cativeiro ou vida-livre. / There are more than 8,000 reptile species in world. Today´s restrictions to importation of these species around world, the risk of introduction of exotic diseases, the growing number of endangered reptiles, among other reasons, emphasize the importance of reproduction in captivity and ex-situ conservation. South California is a Hotspot for biodiversity and the Zoological Society of San Diego maintains a nature preserve in Escondido City. In an area of about 400 hectares, composed by vegetation types like Chaparral and Coastal Sage Scrub, it has been found the greatest diversity of snake in region. Between May 2005 and July 2006, 96 rattlesnakes of species Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri and C. mitchellii phyrrus were captured by active searching during field work. In the Laboratory of Reproductive Physiology the snakes were measured, weighted, and marked the captured snakes. We evaluated their body condition, collected and evaluated semen from males and performed ultrasound exams in females. Snakes were released up to 24 hours after capture. The Crotalus ruber ruber studied initiated vitellogenesis in fall, courtship and mating occurred in spring and gravid snake were observed in spring and summer. Only females with a good or very good body condition were in secondary vitellogenesis or gravid. There were no statistical differences in seminal parameters among season in males of the Crotalus ruber ruber. Protocols to freeze snake´s semen were tested in this study, with positive results that are discussed in specific chapter. This study results contribute to understand of snake´s biology of reproduction and in or ex-situ conservation.

Os répteis compõem hoje uma classe com mais de 8.000 espécies e em razão das restrições na importação desses animais, o risco na introdução de doenças exóticas, o crescente número de espécies ameaçadas no mundo, entre outros, a reprodução e a manutenção em cativeiro desses animais é muito importante. No Sul da Califórnia, que é considerado um Hotspot para a biodiversidade, a Zoological Society of San Diego mantém uma reserva ecológica com aproximadamente 400 hectares e formada por vegetação tipo Chaparral, Coastal Sage Scrub e áreas cobertas por cactos (Opuntia sp.). Durante o período de junho de 2005 a julho de 2006 foram capturadas 96 cascavéis das espécies Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri e C. mitchellii phyrrus, durante os trabalhos de campo pela procura visual limitada por tempo. Foram realizadas avaliações morfológicas e reprodutivas em todas essas serpentes capturadas. Nos machos realizou-se a colheita e avaliação de sêmen, incluindo duas colorações específicas para avaliar integridade de membrana espermática e do acrossoma. Nas fêmeas foi realizada a avaliação ultra-sonográfica dos ovários, com mensuração e contagem de folículos, além do diagnóstico de gestação. Para a C. ruber ruber, a serpente mais abundante neste estudo, foram observadas fêmeas prenhes no verão e vitelogênicas na primavera, outono e inverno. Apenas as fêmeas desta espécie com condição corporal boa ou muito boa apresentaram-se vitelogênicas ou prenhes. Nos machos dentre as características seminais avaliadas, não foi observada a diferença estatisticamente significante ao longo das estações do ano. Em paralelo a este estudo, também foram testados protocolos para a congelação de sêmen de serpentes, com a obtenção de resultados promissores, discutidos em capítulo específico. As informações obtidas neste estudo visam contribuir para a compreensão da biologia reprodutiva e conservação das serpentes, em cativeiro ou vida-livre. / There are more than 8,000 reptile species in world. Today´s restrictions to importation of these species around world, the risk of introduction of exotic diseases, the growing number of endangered reptiles, among other reasons, emphasize the importance of reproduction in captivity and ex-situ conservation. South California is a Hotspot for biodiversity and the Zoological Society of San Diego maintains a nature preserve in Escondido City. In an area of about 400 hectares, composed by vegetation types like Chaparral and Coastal Sage Scrub, it has been found the greatest diversity of snake in region. Between May 2005 and July 2006, 96 rattlesnakes of species Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri and C. mitchellii phyrrus were captured by active searching during field work. In the Laboratory of Reproductive Physiology the snakes were measured, weighted, and marked the captured snakes. We evaluated their body condition, collected and evaluated semen from males and performed ultrasound exams in females. Snakes were released up to 24 hours after capture. The Crotalus ruber ruber studied initiated vitellogenesis in fall, courtship and mating occurred in spring and gravid snake were observed in spring and summer. Only females with a good or very good body condition were in secondary vitellogenesis or gravid. There were no statistical differences in seminal parameters among season in males of the Crotalus ruber ruber. Protocols to freeze snake´s semen were tested in this study, with positive results that are discussed in specific chapter. This study results contribute to understand of snake´s biology of reproduction and in or ex-situ conservation.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:30:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3255493 bytes, checksum: e4ccfc1992b603193191f051cce2e358 (MD5) Previous issue date: 2007-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The male reproductive system of the Lymeon dieloceri and Myschocyttarus atramentarius parasitoids is formed by a pair of testes with one folicles each, a pair of accessory glands, a pair of vasa deferentia and one ejaculatory duct. The vasa deferentia are thin, long, without characteristic dilatation of the seminal vesicle, and they get in the base of the testicular lobule. The accessory glands open in the vas deferens and, in Lymeon dieloceri they are oval shape and in M. atramentarius parasitoid, they are spherical. In both Ichneumonidae the spermatozoa are similar to those ones described for other Hymenoptera, with : (1) the acrosome formed by the acrosomal vesicle covering the perforatorium, which has its base inserted in a gap located in the nucleus point; (2) thin and long nucleus with a electron-dense chromatin; (3) an electron-dense centriole adjunct located between the nucleus and one of the two mitochondrial derivatives; (4) axoneme with 9+9+2 microtubes arrangement; (5) two long mitochondrial derivatives with peripheral cristae and; (6) two accessory bodies located between the two mitochondrial derivatives and the axoneme. They also present structural characteristics only common to the parasitic wasps, as a layer of extracellular material involving the acrosome and one region of the nucleus and the axoneme accessory microtubes ending before the other ones. However, the male reproductive system and the sperm presented morphologic characteristics that allowed differentiating themselves, as the form of the accessory glands and the mitochondrial derivatives. In L. dieloceri, the glands have an oval shape and the mitochondrial derivatives are symmetrical, no longer, in the M. atramentarius parasitoid, the glands have a spherical shape and asymmetrical derivatives. Therefore, this work shows that, in Hymenoptera, the male reproductive system and the spermatozoa supply morphologic characters that can be used in phylogenetic analyses in different taxonomic levels. / O sistema reprodutor masculino de Lymeon dieloceri, parasitóide do Symphyta Digelasinus diversipes e do parasitóide do Vespidae Myschocyttarus atramentarius é formado por um par de testículos com um folículo cada, um par de glândulas acessórias, um par de ductos deferentes e um ducto ejaculatório. Os ductos deferentes são finos, longos, sem dilatação característica de vesícula seminal, e se enovelam na base do folículo testicular. As glândulas acessórias desembocam nos ductos deferentes e, em Lymeon dieloceri elas são ovaladas e no parasitóide de M. atramentarius, esférica. Os espermatozóides desses dois Ichneumonidae são semelhantes àqueles descritos para os demais Hymenoptera, apresentando: (1) o acrossomo formado pela vesícula acrossômica revestindo o perforatorium, o qual tem sua base inserida em uma cavidade na ponta do núcleo; (2) núcleo fino, longo e de cromatina eletrondensa; (3) um adjunto do centríolo eletrondenso e localizado entre o núcleo e um dos dois derivados mitocondriais; (4) axonema com arranjo 9 + 9 + 2 microtúbulos; (5) dois derivados mitocondriais longos com cristas periféricas e; (6) dois corpos acessórios localizados entre os dois derivados mitocondriais e o axonema. Os espermatozóides também apresentam características estruturais comuns apenas às vespas parasíticas, como uma camada de material extracelular envolvendo o acrossomo e parte do núcleo e os microtúbulos acessórios do axonema terminado antes dos demais. Entretanto, tanto o sistema reprodutor como os espermatozóides apresentaram características morfológicas que permitiram diferenciá-las entre si, como a forma das glândulas acessórias e dos derivados mitocondriais. Onde em L. dieloceri as glândulas são ovaladas e os derivados mitocondriais são simétricos, já no parasitóide de M. atramentarius as glândulas são esféricas e os derivados assimétricos. Portanto, esse trabalho confirma que, em Hymenoptera, tanto o sistema reprodutor masculino como os espermatozóides fornecem caracteres morfológicos que podem ser usados em análises filogenéticas em diferentes níveis taxonômicos.

Submitted by Mendes Eduardo (dasilva@ufba.br) on 2013-08-20T17:03:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anne final.pdf: 248989 bytes, checksum: 556edb331e3a22f145841593d8d4c90c (MD5) / Approved for entry into archive by Alda Lima da Silva(sivalda@ufba.br) on 2013-08-22T17:51:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anne final.pdf: 248989 bytes, checksum: 556edb331e3a22f145841593d8d4c90c (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-22T17:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Anne final.pdf: 248989 bytes, checksum: 556edb331e3a22f145841593d8d4c90c (MD5) / Cnpq / Neste trabalho foi avaliada a interação de dois aspectos fisiológicos dos machos de Ceratitis capitata - idade e status nutricional - na sua capacidade de inibir a recópula da fêmea. Avaliou-se, também, se variáveis como quantidade de espermatozóides transferidos durante a cópula e a duração da mesma interferiam neste aspecto. Os experimentos foram realizados com uma população de laboratório com introdução periódica de moscas selvagens. Após a emergência, os adultos foram mantidos em grupos separados de acordo com a sua alimentação (alto teor protéico – 6,5 g de proteína e baixo teor protéico – 3,5 g de proteína) e idades (4, 8, 12, 16 e 20 dias). Quando analisada a interação desses dois fatores, os resultados demonstraram que: (1) machos com 4 dias e alimentados com uma dieta com baixo teor protéico são menos eficientes em inibir a recópula da fêmea; (2) machos com 20 dias, independente do status nutricional, tiveram mesma eficiência em inibir a recópula da fêmea; (3) machos de 12 e 16 dias, alimentados com uma dieta com alto teor protéico, transferem e produzem mais espermatozóides que os machos dos outros grupos; (4) não houve correlação entre a quantidade de espermatozóides transferidos e duração da cópula. Os resultados obtidos neste trabalho sugerem que as características fisiológicas e comportamentais dos machos são influenciadas pela sua idade e condição nutricional, e que a quantidade de espermatozóides transferidos para a fêmea, ou alguma substância presente no fluido da glândula acessória, que determina a capacidade de inibir a recópula da fêmea. Os dados são discutidos quanto a aplicação desses estudos na técnica do inseto estéril, uma vez que a inibição de uma nova cópula da fêmea é uma das chaves para o sucesso desta técnica. / Salvador (BA)

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-01T14:05:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-01T14:05:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5) Previous issue date: 2015-12-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta tese compreende quatro capítulos. Todos os estudos aqui relatados foram executados na Colorado State University (CSU), em Fort Collins-CO/USA. Foram utilizados sêmen de seis garanhões com idade entre 15 e 21 anos, das raças Puro-Sangue Inglês, Quarto de Milha e Árabe; estabulados no Laboratório de Reprodução Equina da CSU. Capítulo 1: dividido em três experimentos. Experimento 1: objetivou-se avaliar efeito do tratamento com 2 mg de ciclodextrina carregada com colesterol e estigmastanol (CCC , CCE); 1, 2 e 3 mg de ciclodextrina carregada com óleo de salmão (S1, S2 e S3) e com óleo de semente de linho (L1, L2 e L3) nas motilidades total (MT) e progressiva (MP) dos espermatozóides após descongelamento. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos (p>0,05). Experimento 2: objetivou-se avaliar MT e MP do sêmen tratado com diferentes fontes de lipídeos sonicados em meio Whitten’s Modificado (MW), após congelamento convencional e congelamento precedido por choque pelo frio; e avaliar efeito do tratamento com 2 mg de CCC e CCE sobre motilidades após choque pelo frio. Os tratamentos usando lipídeos foram: 3 e 6 mg de óleo de salmão (S3 e S6), de óleo de semente de linho (L3 e L6), de gema de ovo de galinha (G3 e G6), de óleo fígado de bacalhau (B3 e B6) e de óleo de açafrão (A3 e A6). Nenhum dos tratamentos utilizando lipídeos melhorou motilidade após congelamento convencional (p>0,05). Para o sêmen submetido a 0 oC por 30 minutos, os tratamentos G6, CCC e CCE melhoraram MT e MP (p<0,05). Experimento 3: utilizou-se cromatografia gasosa para avaliar eficiência dos tratamentos em alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática. Os tratamentos foram: 6 μg de óleo de semente de linho diluído em etanol (L1); 2 mg de ciclodextrina carregada com óleo de semente de linho (L2) e 6 mg de óleo de semente de linho sonicado em MW (L3). Nenhum dos tratamentos foi capaz de alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática (p>0,05). Capítulo 2: objetivou-se mensurar quantidade de colesterol e estabelecer a relação colesterol:fosfolipídeos na membrana plasmática de células espermáticas tratadas com diferentes quantidades de CCC (0, 2, 4, 6 e 8 mg). Foram utilizados kit comercial (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) para mensuração do colesterol e ensaio de ferrotiocianato de amônio para mensuração dos fosfolipídeos totais. A quantidade de colesterol encontrada nas células tratadas com 0, 2, 4, 6 e 8 mg de CCC foram respectivamente 0,22; 0,58; 0,77; 0,91 e 1,07 μg/10 6 de espermatozóides, e a relação colesterol:fosfolipídeos para os mesmos tratamentos foram 0,39; 0,72; 1,0; 1,16 e 1,36. A quantidade de colesterol na membrana foi maior a partir do uso de 2 mg de CCC (p<0,05), e a relação colesterol:fosfolipídeos a partir do tratamento com 4 mg de CCC (p<0,05). Capítulo 3: neste estudo o objetivo foi avaliar o comportamento do sêmen sem tratamento (CT) ou tratado com 20% de plasma seminal (PS) e 40 μM de PC-12 (PC) em eventos ligados à capacitação espermática durante incubação por 30 minutos (avaliações foram feitas no tempo 0 – T0, 5 – T5, 15 – T15 e 30 minutos – T30). Para isso cada um dos tratamentos foi submetido a quatro diferentes corantes: 1- CoroNa Green, que quantifica sódio intracelular (CG); 2- Fluo-3, que quantifica cálcio intracelular (Fluo); 3- FITC-PNA, que quantifica reação acrossômica (FP) e 4- Merocianina, que caracteriza fluidez/desorganização da membrana plasmática (Mero). Yo-Pro-1 ou iodeto de propídeo foram utilizados para avaliar integridade de membrana plasmática. As amostras foram lidas em citometria de fluxo. O tratamento com PC-12 aumentou o percentual de células com acrossoma reagido, detectada na avaliação aos 30 minutos. Este percentual, de 33%, foi maior que o dos demais tratamentos no mesmo tempo (CT: 13% e PS: 4%) e superior aos percentuais para o próprio PC-12 nos tempos 0 (7%), 5 (9%) e 15 minutos (16%). Com relação à fluidez da membrana plasmática não houve diferença no percentual de células com merocianina elevada entre os diferentes tratamentos, nem entre um mesmo tratamento ao longo do tempo (p>0,05). O estudo revelou efluxo de sódio das células espermáticas equinas viáveis após 15 minutos de incubação, sendo que nos tempos 15 e 30 minutos o percentual de celulas positivas para CG foram menores para tratamento com plasma seminal (8,8 e 4,8%) e maiores para tratamento com PC-12 (36 e 15,4%), em relação ao controle (23,6 e 11,8%, p<0,05). Após 15 minutos de incubação o sêmen dos três tratamentos apresentou percentual de células positivas para Fluo superior ao tempo 0, porém o plasma seminal retardou a entrada deste íon nas células, visto que, no T15 percentual de células Fluo+ foi menor que nos outros tratamentos (CT: 87%; PS: 59% e PC: 95%, p<0,05), voltando a se igualar no tempo 30 minutos (CT: 98%%; PS: 85% e PC: 97%, p>0,05). O meio MW utilizado foi capaz de induzir efluxo de sódio e influxo de cálcio, alterações que caracterizam capacitação espermática. Capítulo 4: os objetivos aqui foram avaliar eficiência de diluidores a base de gema de ovo (Lactose-EDTA) ou gema de ovo associada a leite em pó (FR5 modificado – FR5M) e eficiência do glicerol (GLI) ou da combinação deste com metilformamida (MF) em manter MT e MP dos espermatozóides após congelamento usando diferentes protocolos (0: congelamento sem resfriamento; 20: resfriamento em palhetas por 20 minutos a 5 oC antes do congelamento; 120T: resfriamento do sêmen em tubos por 120 minutos a 5 oC; 120P: resfriamento do sêmen em palhetas por 120 minutos a 5 oC). O FR5M preservou melhor a MP de células espermáticas em todos os protocolos de congelamento utilizados, mostrando benefício da combinação da gema de ovo com leite em pó no diluente de congelamento (15%, 21%, 26% e 25% para 0, 20, 120T e 120P, respectivamente, vs. 9%, 14%, 19% e 17%, para lactose-EDTA, p<0,05). A utilização de Lactose-EDTA 5%GLI apresentou resultados superiores para MT e MP se comparado ao mesmo diluidor com 3%MF + 2%GLI, o que mostra que o glicerol é um crioprotetor que pode ser utilizado em diferentes protocolos de congelamento (MT para Lactose-EDTA 5%GLI = 33%, 45%, 56% e 53% para 0, 20, 120T e 120P vs. 20%, 30% 35% e 36% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05; MP para Lactose-EDTA 5%GLI = 19% e 17% para 120T e 120P vs. 11% e 10% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05). O resfriamento do sêmen antes do congelamento pode ser realizado tanto em tubos quanto em palhetas de 0,5 mL, sem prejuízos às motilidades total e progressiva do sêmen após congelamento. / This thesis is compounded by four chapters. All work reported here were performed at Colorado State University (CSU), located in Fort Collins, CO / USA. Six stallions between 15 and 21 years old (Thoroughbred, Quarter Horse and Arabian breeds) and stabled at Equine Reproduction Laboratory at CSU were used in all experiments. Chapter 1: comprised by three experiments. Experiment 1: aimed to evaluate the effects on total motility (TM) and progressive motility (PM) after semen thawing from treatments with 2 mg of cyclodextrin-loaded-cholesterol and 2 mg of cyclodextrin-loaded-stigmastanol (CLC, CLS); 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin-loaded-salmon oil (S1, S2 and S3); and 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin- loaded-flax seed oil (F1, F2, and F3). No differences among treatments were detected (p>0.05). Experiment 2: aimed to evaluate TM and PM of semen treated with different sonicated lipids into Modified Whitten’s Medium (MW), after conventional freezing and freezing preceded by cold shock, and assess the effect of treatment with 2 mg of CLC and CLS on motility after cold shock. Treatments using lipids were: 3 and 6 mg of salmon oil (S3 and S6); 3 and 6 mg of flax seed oil (F3, F6); 3 and 6 mg of egg yolk (E3 and E6); 3 and 6 mg of cod liver oil (C3 and C6), 3 and 6 mg of safflower oil (SF3 and SF6). None of the lipid treatments improved motility after conventional freezing (p>0.05). For semen subjected to 0 °C for 30 minutes, TM and PM increased in semen treated with E6, CLC and CLS (p<0.05). Experiment 3: gas chromatography was used to evaluate effectiveness of treatments in altering the sperm membrane fatty acid profile. The treatments were: 6 μg of flax seed oil diluted with ethanol (F1); 2 mg of cyclodextrin-loaded- flax seed oil (F2) and 6 mg of flax seed oil sonicated in MW (F3). None of the treatments was able to change fatty acid profile in the sperm membrane (p>0.05). Chapter 2: aimed to measure the amount of cholesterol and to establish the cholesterol:phospholipids ratio in plasma membrane of fresh equine sperm cells treated with different amounts of CLC (0, 2, 4, 6 and 8 mg). A commercial kit was used to measure cholesterol (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) and an ammonium ferrothiocyanate assay for total phospholipids measurement. Amount of cholesterol found for cells treated with 0, 2, 4, 6 and 8 mg CLC were, respectively, 0.22; 0.58; 0.77; 0.91 and 1.07 micrograms/10 6 sperm, and cholesterol:phospholipids ratios to the same treatments were 0.39; 0.72; 1.0; 1.16 and 1.36, respectively. Increase in cholesterol amount was observed when 2 mg of CLC was used (p<0.05), and cholesterol:phospholipids ratio was higher with 4 mg of CLC (p<0.05). Chapter 3: in this study the objective was to evaluate the response of fresh equine semen without treatment (CT) or treated with 20% of seminal plasma (SP) and 40 μM PC-12 (PC) in events related to sperm capacitation during incubation for 30 minutes (evaluations made at time 0 - T0, 5 - T5, 15 – T15 and 30 minutes - T30). Each treatment was subjected to four different dyes: 1- CoroNa Green, which measures intracellular sodium (CG); 2- Fluo-3, which measures intracellular calcium (Fluo); 3- FITC-PNA, which measures acrosome reaction (FP) and 4- Merocyanine, which characterizes plasma membrane fluidity/destabilization (Mero). Yo-Pro-1 or propidium iodide were used to assess cell membrane integrity. Samples were read in flow cytometry. An increased percentage of cells with reacted acrosome was observed in semen treated with PC-12 at T30. This proportion (33%) was higher than the other treatments at the same time (CT: 13% and SP: 4%) and higher than the proportion for PC-12 at T0 (7%), T5 (9%) and T15 (16%). There was no difference in the percentage of cells with high merocyanine between different treatments or between the same treatment over time (p>0.05). The study showed sodium efflux after 15 minutes incubation, and at times 15 and 30 minutes the percentage of positive cells for GC were lower in SP treatment (8.8 and 4.8%) and higher for PC-12 (36 and 15.4%) compared to the CT (23.6 and 11.8%, p <0.05). At T15 the semen of all treatments showed higher proportion of Fluo positive cells than T0, but seminal plasma delayed entry of the ion into the cells, since at T15 Fluo proportion of positive cells was lower than the other treatments (CT: 87%; SP: 59% and PC: 95%, p<0.05) and became similar at T30 (CT = 98%, SP= 85% and PC=97%, p> 0.05). The semen extender used was able to inducing sodium efflux and calcium influx, changes characterizing sperm capacitation. Chapter 4: the objectives were to evaluate efficiency of an egg yolk–based medium (lactose-EDTA) or egg yolk associated with powdered milk (modified FR5 - MFR5), and efficiency of glycerol (GLY) or a combination between GLY and dimethylformamide (MF) to maintain TM and PM sperm after freezing using different protocols (0: no cooling; 20: cooling straws for 20 minutes at 5 °C before freezing; 120T: cooling in tubes for 120 minutes at 5 °C; and 120P: cooling in straws for 120 minutes at 5 °C). MFR5 preserved PM in all freezing protocols, showing the benefit of the combination of egg yolk with powdered milk for freezing diluent (15%, 21%, 26% and 25% for 0, 20, 120T and 120P, respectively, vs. 9%, 14%, 19% and 17% for lactose-EDTA, p<0.05). The use of lactose-EDTA 5%GLY showed superior results for TM and PM if compared to the same medium with 3%MF + 2%GLY, indicating that glycerol is a cryoprotectant that can be used in several different freezing protocols (TM for Lactose-EDTA 5%GLY = 33%, 45%, 56% and 53% for 0, 20, 120T and 120P vs. 20% 30% 35% and 36% for LactoseEDTA 3%MF + 2%GLY, p <0.05; MP for Lactose-EDTA 5%GLY = 19% and 17% at 120T and 120P vs. 11% and 10% for Lactose-EDTA 3%MF + 2%GLY, p<0.05). The cooling before freezing can be performed either in tubes as in 0.5 mL straws for 120 minutes, without damage to total and progressive motility of thawed semen.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-26Bitstream added on 2014-06-13T18:58:59Z : No. of bitstreams: 1 rodello_l_me_botfmvz.pdf: 226950 bytes, checksum: b009f4db5df84afd8c9c3af24e35fe7b (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se avaliar e validar o sistema automatizado de refrigeração e congelação de fabricação nacional TK 3000, comparativamente ao sistema de refrigeração e de congelação pelo método geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. Foram utilizados dez carneiros da raça Santa Inês sendo colhidos, por meio de vagina artificial, três ejaculados de cada reprodutor. Após as avaliações do ejaculado, o sêmen foi diluído em meio para congelação Glicina-Gema-Leite e envasado em palhetas de 0,25 Ml com 100 x 106 espermatozóides totais/doses, sob temperatura de 32° C. As amostras foram refrigeradas em geladeira e/ou com controle automatizado e posteriormente congeladas em vapor de nitrogênio líqüido e/ou com controle automatizado. Os resultados foram similares (P<0,05) entre a refrigeração em geladeira e a refrigeração com controle automatizados em todos os parâmetros avaliados pós descongelação e ao final do teste de exaustão, o mesmo observou-se entre a refrigeração em geladeira e congelação em vapor de nitrogênio líqüido e refrigeração e congelação com controle automatizado e as combinações refrigeração em geladeira e congelação com controle automatizado e refrigeração com controle automatizado e congelação em vapor de nitrogênio líqüido. Concluí-se que o sistema automatizado TK 3000 é adequado a criopreservação do sêmen ovino, com qualidade equivalente àquela processada no sistema geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. / The objectives of the present study were to validate and evaluate a programmed automatic system for freezing and cooling, using a national equipment TK 3000, compared to a method using refrigerator and liquid nitrogen for the same procedures. Ten rams from Santa Ines breed were submitted to semen collection by artificial vagina, with a total of three ejaculates from each sire. After the ejaculate evaluation, semen was diluted in a freezing extender Egg- Glycine - Milk and stored in a 0.25 mL straws with a total of 100 x 10 6 sperm per dose at 32° C. The samples were cooled inside a refrigerator and /or utilizing an automatic programmed system, being then frozen in liquid nitrogen vapor and/ or using automatic control. The results were simmilar (P< 0.05) between samples submitted to cooling using refrigerator and automatic control for all analyzed parameters after thawing and at the end of the resistant test. The same was observed among samples submitted to cooling in refrigerator followed by liquid nitrogen vapor for freezing, samples cooled and frozen both using an automatic control, samples processed by the combinations of cooling in refrigerator followed by freezing with an automatic control, and samples cooled with automatic control followed by freezing in liquid nitrogen vapor. In conclusion, the TK 3000 is an adequate automatic system for ovine semen cryopreservation and it provides a quality which is equivalent to semen processed in refrigerator/ liquid nitrogen vapor system.

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Banca: Carlos Antonio de Miranda Bomfim / Banca: André Luis Rios Rodrigues / Resumo: Objetivou-se avaliar e validar o sistema automatizado de refrigeração e congelação de fabricação nacional TK 3000, comparativamente ao sistema de refrigeração e de congelação pelo método geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. Foram utilizados dez carneiros da raça Santa Inês sendo colhidos, por meio de vagina artificial, três ejaculados de cada reprodutor. Após as avaliações do ejaculado, o sêmen foi diluído em meio para congelação Glicina-Gema-Leite e envasado em palhetas de 0,25 Ml com 100 x 106 espermatozóides totais/doses, sob temperatura de 32° C. As amostras foram refrigeradas em geladeira e/ou com controle automatizado e posteriormente congeladas em vapor de nitrogênio líqüido e/ou com controle automatizado. Os resultados foram similares (P<0,05) entre a refrigeração em geladeira e a refrigeração com controle automatizados em todos os parâmetros avaliados pós descongelação e ao final do teste de exaustão, o mesmo observou-se entre a refrigeração em geladeira e congelação em vapor de nitrogênio líqüido e refrigeração e congelação com controle automatizado e as combinações refrigeração em geladeira e congelação com controle automatizado e refrigeração com controle automatizado e congelação em vapor de nitrogênio líqüido. Concluí-se que o sistema automatizado TK 3000 é adequado a criopreservação do sêmen ovino, com qualidade equivalente àquela processada no sistema geladeira/vapor de nitrogênio líqüido. / Abstract: The objectives of the present study were to validate and evaluate a programmed automatic system for freezing and cooling, using a national equipment TK 3000, compared to a method using refrigerator and liquid nitrogen for the same procedures. Ten rams from Santa Ines breed were submitted to semen collection by artificial vagina, with a total of three ejaculates from each sire. After the ejaculate evaluation, semen was diluted in a freezing extender Egg- Glycine - Milk and stored in a 0.25 mL straws with a total of 100 x 10 6 sperm per dose at 32° C. The samples were cooled inside a refrigerator and /or utilizing an automatic programmed system, being then frozen in liquid nitrogen vapor and/ or using automatic control. The results were simmilar (P< 0.05) between samples submitted to cooling using refrigerator and automatic control for all analyzed parameters after thawing and at the end of the resistant test. The same was observed among samples submitted to cooling in refrigerator followed by liquid nitrogen vapor for freezing, samples cooled and frozen both using an automatic control, samples processed by the combinations of cooling in refrigerator followed by freezing with an automatic control, and samples cooled with automatic control followed by freezing in liquid nitrogen vapor. In conclusion, the TK 3000 is an adequate automatic system for ovine semen cryopreservation and it provides a quality which is equivalent to semen processed in refrigerator/ liquid nitrogen vapor system. / Mestre

Objetivo: Avaliar a função testicular em pacientes do sexo masculino com espondilite anquilosante (EA). Métodos: Vinte pacientes com EA e vinte e quatro adultos masculinos saudáveis foram avaliados quanto às características demográficas, exame urológico, ultrassonografia testicular, avaliações dos espermatozóides, anticorpo anti-espermatozóide e perfil hormonal. Critérios de seleção foram: período de pelo menos 3 meses sem o uso de sulfasalazina e metotrexato e nunca terem usado agentes biológicos ou imunossupressores. As avaliações da EA incluíram investigações clínica e laboratorial. Resultados: A mediana da idade atual foi similar no grupo controle e EA (p=0,175). A freqüência de varicocele foi significantemente maior nos pacientes com EA em comparação com os controles (40% vs 8%, p=0,027). A mediana das formas normais de espermatozóides foi similar em pacientes com EA versus controles [17,25 (2-32,5) vs. 22,5 (1,5-45)%, p=0,215], assim como os outros parâmetros dos espermatozóides (p>0,05). Em contraste, a mediana das formas normais de espermatozóides foi significantemente menor em pacientes com EA com varicocele versus aqueles sem varicocele [13,5 (2-27) vs. 22 (10-32,5)%, p=0,049]. Reforçando esse achado, não foi observada nenhuma diferença nesse parâmetro comparando pacientes com EA e controles sem varicocele (p=0,670). Além disso, outros fatores relevantes para a disfunção testicular (anticorpo anti-espermatozóide, hormônios, marcadores inflamatórios e escores da EA) foram comparáveis em pacientes com e sem varicocele (p>0,05). Conclusão: Nós identificamos uma freqüência alta de varicocele em pacientes com EA associada a anormalidades espermáticas, contudo sem associação com tratamento, anticorpos anti-espermatozóides, alterações hormonais ou parâmetros da doença. A exclusão desses fatores sugere que a varicocele pode ser a responsável pela disfunção testicular em pacientes com EA e não o processo da doença ou a autoimunidade. Investigação da varicocele deve ser sempre realizada em pacientes com EA e problemas de fertilidade / Objective: To assess reproductive function in male ankylosing spondylitis (AS) patients in comparison to healthy controls. Methods: 20 AS patients were compared to 24 male healthy subjects in regard to demographic data, urologic examination, testicular ultrasound (US), semen analysis, anti-sperm antibodies and hormone profile. Exclusion criteria were present use of sulfasalazine or methotrexate, and ever use of biological/cytotoxic agents. Disease activity of AS was evaluated by clinical and laboratory assessments. Results: Demographic data were similar in AS and controls (p=0.175). Varicocele was significantly more frequently found in AS patients than in controls (40% vs. 8%, p=0.027). Semen analysis revealed no significant differences in sperm quality between AS patients and controls (p>0.05). In contrast, the median of normal sperm forms was significantly lower in AS patients with versus those without varicocele [13.5 (2-27) vs. 22 (10-32.5) %, p=0.049] whereas no difference in sperm morphology was observed comparing AS patients and controls without varicocele (p=0.670). Comparison of AS patients with and without varicocele showed that anti-sperm antibodies, hormones, inflammatory markers and disease activity scores did not contribute to the impaired sperm morphology observed in AS patients with varicocele. Conclusion: An increased frequency of varicocele was found in AS patients associated with sperm abnormalities, but independent of therapy, anti-sperm antibodies, hormonal alterations or disease parameters. The exclusion of these factors suggests that varicocele may underlie testicular dysfunction in AS patients and not the disease process or autoimmunity. Investigation for varicocele should be done in AS patients with fertility problems

Objetivo: Avaliar a função testicular em pacientes do sexo masculino com espondilite anquilosante (EA). Métodos: Vinte pacientes com EA e vinte e quatro adultos masculinos saudáveis foram avaliados quanto às características demográficas, exame urológico, ultrassonografia testicular, avaliações dos espermatozóides, anticorpo anti-espermatozóide e perfil hormonal. Critérios de seleção foram: período de pelo menos 3 meses sem o uso de sulfasalazina e metotrexato e nunca terem usado agentes biológicos ou imunossupressores. As avaliações da EA incluíram investigações clínica e laboratorial. Resultados: A mediana da idade atual foi similar no grupo controle e EA (p=0,175). A freqüência de varicocele foi significantemente maior nos pacientes com EA em comparação com os controles (40% vs 8%, p=0,027). A mediana das formas normais de espermatozóides foi similar em pacientes com EA versus controles [17,25 (2-32,5) vs. 22,5 (1,5-45)%, p=0,215], assim como os outros parâmetros dos espermatozóides (p>0,05). Em contraste, a mediana das formas normais de espermatozóides foi significantemente menor em pacientes com EA com varicocele versus aqueles sem varicocele [13,5 (2-27) vs. 22 (10-32,5)%, p=0,049]. Reforçando esse achado, não foi observada nenhuma diferença nesse parâmetro comparando pacientes com EA e controles sem varicocele (p=0,670). Além disso, outros fatores relevantes para a disfunção testicular (anticorpo anti-espermatozóide, hormônios, marcadores inflamatórios e escores da EA) foram comparáveis em pacientes com e sem varicocele (p>0,05). Conclusão: Nós identificamos uma freqüência alta de varicocele em pacientes com EA associada a anormalidades espermáticas, contudo sem associação com tratamento, anticorpos anti-espermatozóides, alterações hormonais ou parâmetros da doença. A exclusão desses fatores sugere que a varicocele pode ser a responsável pela disfunção testicular em pacientes com EA e não o processo da doença ou a autoimunidade. Investigação da varicocele deve ser sempre realizada em pacientes com EA e problemas de fertilidade / Objective: To assess reproductive function in male ankylosing spondylitis (AS) patients in comparison to healthy controls. Methods: 20 AS patients were compared to 24 male healthy subjects in regard to demographic data, urologic examination, testicular ultrasound (US), semen analysis, anti-sperm antibodies and hormone profile. Exclusion criteria were present use of sulfasalazine or methotrexate, and ever use of biological/cytotoxic agents. Disease activity of AS was evaluated by clinical and laboratory assessments. Results: Demographic data were similar in AS and controls (p=0.175). Varicocele was significantly more frequently found in AS patients than in controls (40% vs. 8%, p=0.027). Semen analysis revealed no significant differences in sperm quality between AS patients and controls (p>0.05). In contrast, the median of normal sperm forms was significantly lower in AS patients with versus those without varicocele [13.5 (2-27) vs. 22 (10-32.5) %, p=0.049] whereas no difference in sperm morphology was observed comparing AS patients and controls without varicocele (p=0.670). Comparison of AS patients with and without varicocele showed that anti-sperm antibodies, hormones, inflammatory markers and disease activity scores did not contribute to the impaired sperm morphology observed in AS patients with varicocele. Conclusion: An increased frequency of varicocele was found in AS patients associated with sperm abnormalities, but independent of therapy, anti-sperm antibodies, hormonal alterations or disease parameters. The exclusion of these factors suggests that varicocele may underlie testicular dysfunction in AS patients and not the disease process or autoimmunity. Investigation for varicocele should be done in AS patients with fertility problems

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:31:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo de Matos Morais.pdf: 1128286 bytes, checksum: 9923268bc53385988192b697ca9ecd35 (MD5) Previous issue date: 2009-03-13 / The techniques of artificial reproduction by inducing reproductive fish that inhabit running waters(reofílicos) is part of everyday life in the fish farms in Goiás.These techniques must be refine in order to provide a better fertilization rate of sperm/oocyte.The hybrid tambacu is one of the most grown fish in Brazil, from the cross of tambaqui´s female(Colossoma macropomum) and pacu´s male(Piaractus mesopotamicus), because it stands better low temperatures, and it shows faster growth than pacu and tambaqui. In order to determine a better sperm concentration of tambacu´s cross-bred fertilization (Colossoma macropomum x Piaractus mesopotamicus), it was selected tambaqui´s female with advanced gonadal maturation, domed abdomen and redish genital papilla and a pacu´s male with semen output by light abdominal massage in the anterior-posterior sense. The female and the male were prompted to reproduction with pituitary extract: female (1º dose 0,5 mg/kg and 2º dose 5mg/kg), male (songle dose 3mg/kg) The female released 654g of oocytes with 1560 oocytes/g, with a reason of 170.040 oocytes/kg, the oocytes were distributed in 5 treatments with three repetition: T1=1g, T2=1,5g, T3=2g, T4=2,5g e T5=3g. The male produced 2ml of semen with 10x109sperm/ml with more than 90% of motility. For fertilization were applied 2 Xl of fresh semen in each repetition (T1=128.205, T2=85.470, T3=64.102, T4=51.282, T5=42.735 sperm /oocyte). After 11 hours of incubation were analyzed the fertilization rates for each treatment. Te best connection sperm/oocyte was found in T4=51.282 sperm/oocyte. For a better fertilization rate of the hybrid tambacu it is recommended 1ml of pacu´s semen for each 125g of tambaqui´s oocyte. / As técnicas de reprodução artificial através da indução reprodutiva de peixes que habitam águas correntes (reofílicos), faz parte do cotidiano nas pisciculturas de Goiás. Estas técnicas devem ser aprimoradas para que se tenha melhor taxa de fertilização espermatozóides/ovócitos. O híbrido tambacu é um dos peixes mais cultivados no Brasil, oriundo do cruzamento da fêmea do tambaqui (Colossoma macropomum) com macho de pacu (Piaractus mesopotamicus), pois tolera melhor as baixas temperaturas, e apresenta crescimento mais rápido que o pacu e tambaqui. Para determinar a melhor concentração espermática de fertilização do híbrido tambacu (Colossoma macropomum x Piaractus mesopotamicus), foi selecionado uma fêmea de tambaqui com maturação gonadal avançada, abdômem abaulado e papila genital avermelhada e um macho de pacu com saída de sêmem mediante leve massagem abdominal no sentido ântero-posterior. A fêmea e o macho foram induzidos a reprodução com extrato de hipófise: fêmea (1&#730; dose 0,5mg/kg e 2&#730; dose 5mg/kg), macho (dose única de 3mg/kg). A fêmea liberou 654g de ovócitos contendo 1560 ovócitos/g, com uma razão de 170.040 ovócitos/kg, os ovócitos foram distribuídos em 5 tratamentos com três repetições: T1=1g, T2=1,5g, T3=2g, T4=2,5g, e T5=3g. O macho produziu 2ml de sêmem com 10x109 espermatozóides/ml com mais de 90% de motilidade. Para fertilização utilizou-se 20Xl de sêmem fresco em cada repetição (T1=128.205, T2=85.470, T3=64.102, T4=51.282, T5=42.735 espermatozóides/ovócitos). Após 11 horas de incubação foram analisadas as taxas de fertilização para cada tratamento. A melhor relação espermatozóide/ovócito foi encontrado no T4=51.282 espermatozóides/ovócitos. Para melhor taxa de fertilização do híbrido tambacu é recomendado 1 ml do sêmem de pacu para cada 125g de ovócito do tambaqui