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Estabilidade de genes de referência e expressão das proteínas Morfogenéticas Ósseas (BMPs), receptores de BMP e mensageiros intracelulares (SMADS) em folículos ovarianos caprinos / Stability of housekeeping genes and levels of mRNA for Bone Morphogenetic Proteins (BMPs), BMP receptors and intracellular messengers (SMADs) in goat ovarian follicles

Costa, José Jackson do Nascimento January 2011 (has links)
COSTA, J. J. N. Estabilidade de genes de referência e expressão das proteínas Morfogenéticas Ósseas (BMPs), receptores de BMP e mensageiros intracelulares (SMADS) em folículos ovarianos caprinos. 2011. 122 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2011. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-10-11T14:59:36Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_jjncosta.pdf: 1257278 bytes, checksum: f857470526f08c441bb3b2cddf120db6 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-10-11T15:01:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_jjncosta.pdf: 1257278 bytes, checksum: f857470526f08c441bb3b2cddf120db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-11T15:01:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_jjncosta.pdf: 1257278 bytes, checksum: f857470526f08c441bb3b2cddf120db6 (MD5) Previous issue date: 2011 / The aims this study to evaluate the stability of reference genes and the expression of bone morphogenetic protein (BMP-2, 4, 6, 7 and 15), their receptors (BMPR-IA, IB and II) and intracellular messengers (SMADs- 1, 5 and 8) in goat follicles before and after culture for 18 days. To evaluate the stability of reference genes and the expression of BMPs, receptors and SMADs, follicles of approximately 0.2, 0.5 and 1 mm were mechanically isolated from goats ovaries. In addition, approximately 0.2 mm follicles were isolated and cultured for 18 days in culture medium supplemented with FSH. Both fresh and cultured follicles were subjected to total RNA extraction and synthesis of cDNA, the quantification of mRNA was carried out by real-time PCR using specific primers for genes of reference (GAPDH, β-tubulin, β-actin, PGK, UBQ, RPL - 19, rRNA18S) and BMPs (2, 4, 6, 7 and 15) receptors of BMPs (BMPR-IA, IB and II) and SMADs (1, 5 and 8). Results showed that β-tubulin and PGK are the most stable reference genes in goats preantral and antral follicles. The messengers RNA for BMP (2, 4, 6, 7 and 15), their receptors (BMPR-IA, IB and II) and Smads (1, 5 and 8) are expressed at different levels in preantral and antral goats, and mRNA expression for BMP-4, BMP-6 and BMP-7 in 1-mm follicles are significantly higher than in follicles of 0.2 and 0.5 mm. However, the levels of mRNA for BMP-2 were reduced in follicles 1 mm, as BMP-15 did not differ between follicular categories. The levels of mRNA for BMPR-IB were higher in follicles of 0.2 mm than in follicles of 0.5 and 1 mm, whereas the mRNA for BMPR-II was significantly higher in follicles than 0.5 mm in follicles of 0.2 to 1 mm. Moreover, mRNA levels for BMPR-1A did not differ between follicles examined. The levels of mRNA for SMAD-5 were significantly higher in 0.2 mm follicles than in follicles of 0.5 and 1 mm. However, follicles of 0.5 mm showed higher levels of mRNA for SMAD-8 than follicles 0.2 and 1 mm. The levels of mRNA for SMAD-1 did not differ between follicles. After the comparisons within each category follicle, BMP-15 expression was higher than BMP-7 in follicles between 0.2 and 0.5 mm. Follicles 0.5 mm in the expression of BMPR-IB was greater than BMPR-II. In all three follicular categories studied, the expression of SMAD-5 was superior to SMAD-8. After culture, follicles showed reduced levels of mRNA for BMP-2, BMP-4, BMP-7, BMPR-IA and SMAD-5. In conclusion, β-tubulin and PGK genes are the two most stable housekeeping for fresh goat follicles 0.2, 0.5 to 1 mm in diameter. BMPs, their receptors and SMADs have specific expression patterns in each category follicular studied. However, in cultured follicles showed a variation in the variation in the expression of BMP system components, differing from in vivo expression of follicles with the same size. / Este trabalho tem como objetivo avaliar a estabilidade de genes de referência e a expressão das proteínas morfogenéticas ósseas (BMP-2, 4, 6, 7 e 15), seus receptores (BMPR-IA, IB e II) e seus mensageiros intracelulares (SMADs-1, 5 e 8) em folículos caprinos antes e após cultivo por 18 dias. Para avaliar a estabilidade dos genes de referência e o nível de expressão das BMPs, receptores e SMADs, folículos com aproximadamente 0,2, 0,5 e 1 mm foram isolados mecanicamente de ovários caprinos. Além disso, folículos com aproximadamente 0,2 mm foram isolados e cultivados por 18 dias em meio de cultura suplementado com FSH. Após a extração do RNA total e síntese de cDNA, foi realizada a quantificação do RNAm, por PCR em tempo real, utilizando-se primers específicos para genes de referência (β-actina, PGK, GAPDH, β-tubulina, UBQ, RPL-19, rRNA18S), e para as BMPs (2, 4, 6, 7 e 15) receptores de BMPs (BMPR-IA, IB e II) e SMADs (1, 5 e 8). Os resultados mostraram que β-tubulina e PGK são os genes de referência mais estáveis em folículos frescos pré-antrais e antrais caprinos. Os RNAs mensageiros para as BMPs (2, 4, 6, 7 e 15), seus receptores (BMPR-IA, IB e II) e SMADs (1, 5 e 8) são expressos em diferentes níveis em folículos pré-antrais e antrais caprinos, sendo que a expressão do RNAm para BMP-4, BMP-6 e BMP-7 em folículos de 1 mm são significativamente maiores do que em folículos de 0,2 e 0,5 mm. Entretanto, os níveis de RNAm para BMP-2 foi reduzido em folículos de 1 mm, já os níveis de BMP-15 não diferiram entre as categorias foliculares analisadas. Os níveis de RNAm para BMPR-IB foram maiores em folículos de 0,2 mm do que em folículos de 0,5 e 1 mm, enquanto que o RNAm para BMPR-II foi significativamente maior em folículos de 0,5 mm do que em folículos de 0,2 e 1 mm. Por outro lado, níveis de RNAm para BMPR-1A não diferiram entre folículos analisados. Os níveis de RNAm para SMAD-5 foram significativamente maiores em folículos de 0,2 mm do que em folículos de 0,5 e 1 mm. Contudo, folículos de 0,5 mm mostraram níveis maiores de RNAm para SMAD-8 do que folículos de 0,2 e 1 mm. Os níveis de RNAm para SMAD-1 não diferiram entre os folículos. Após as comparações dentro de cada categoria folícular, BMP-15 foi mais expressa do que BMP-7 em folículos de 0,2 e 0,5 mm. Em folículos de 0,5 mm a expressão do BMPR-IB foi maior do que BMPR-II. Em todas as três categorias foliculares estudadas, a expressão da SMAD-5 foi superior a SMAD-8. Após o cultivo, os folículos apresentaram redução dos níveis de RNAm para BMP-2, BMP-4, BMP-7, BMPR-IA e SMAD-5. Em conclusão, β-tubulina e PGK são os dois genes housekeeping mais estáveis para folículos frescos caprinos com 0,2, 0,5 e 1 mm de diâmetro. BMPs, seus receptores e SMADs apresentam padrões de expressão específicos em cada categoria folicular estudada. No entanto, em folículos cultivados há uma variação na expressão dos componentes do sistema BMP, diferindo da expressão in vivo de folículos com o mesmo tamanho.
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Efeito da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre o desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos / Effect of Bone Morphogenetic Protein 15 (BMP-15) and Follicle Stimulating Hormone (FSH) on development of bovine ovarian follicles.

Passos, Maria Juliane January 2012 (has links)
PASSOS, M.J. Efeito da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre o desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos. 2012. 239 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T12:13:07Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) Previous issue date: 2012 / This study aims to 1) evaluate the effect of BMP-15 and FSH, alone or in different combinations on the in vitro development, survival and antrum formation of bovine secondary follicles and 2) quantify the levels of mRNA expression for BMP-15 receptors (BMPR-IB and BMPR-II), FSH receptor and Kit Ligand in follicles grown in vivo and in vitro. With regard to culture, secondary follicles were microdissected and cultured for twelve days in α-MEM+ alone, or supplemented with BMP-15 and/or FSH, alone or in various associations. After culture, follicular diameter were evaluated, viability and rate of antrum formation. For the analyzes gene expression, by real time PCR, were used follicles cultured in the different treatments for comparisons of the levels of mRNA. After the culture period it was found that the association of BMP+FSH (0-12) stimulated a significant increase in follicular diameter in relation to other treatments (p<0.05), as well as stimulated the formation of antral cavity more effectively the control (MEM) and BMP-15 alone (p<0.05). However, for survival, after 12 days treatment BMP+FSH (0-12) significantly reduced follicular viability when compared to other treatments (p<0.05). The results showed that the levels of mRNA for BMP receptor type I (BMPR-IB) were significantly higher in follicles cultured with MEM when compared to other treatments, while levels of mRNA for the receptor type II (BMPR-II) did not differ between treatments. The highest levels of mRNA for the FSH receptor were detected in follicles cultured with BMP-15 alone. In conclusion, this study demonstrated that combination of BMP-15+FSH (D0-D12) accelerates the growth of bovine preantral follicles cultured for 12 days, but this effect reduces the follicular viability, affecting the ultrastructural integrity of the follicles. Furthermore, the addition of BMP alone increased expression levels of RNAm for FSHR after 12 days of culture , showing that BMP-15 and FSH may contribute significantly to the in vitro development of preantral follicles cultured for 12 days in this specie. / Este trabalho tem como objetivo 1) avaliar o efeito da BMP-15 e do FSH, sozinhos ou em diferentes associações sobre o crescimento, sobrevivência e formação de antro em folículos secundários bovinos e 2) avaliar os níveis de expressão do RNAm para os receptores de BMP-15 (BMPR-IB e BMPR-II) em folículos crescidos in vitro. Com relação ao cultivo, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por doze dias em α-MEM+ sozinho, ou suplementado com BMP-15 e/ou FSH, sozinhos ou em diferentes associações. Após o cultivo, foram avaliados o diâmetro folicular, a viabilidade e a taxa de formação de antro. A análise de expressão gênica foi realizada por PCR em tempo real, utilizando folículos cultivados nos diferentes tratamentos, para comparações dos níveis de RNAm. Após o período de cultivo verificou-se que a utilização da BMP+FSH (0-12) estimulou um aumento significativo no diâmetro folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05), bem como estimulou a formação da cavidade antral de forma mais efetiva que o controle (MEM) e a BMP-15 sozinha (p<0,05). No entanto, em relação à sobrevivência, após12 dias o tratamento BMP+FSH (0-12) reduziu significativamente a viabilidade folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para o receptor de BMP-15 do tipo I (BMPR-IB) foram significativamente maiores nos folículos cultivados com MEM quando comparado aos demais tratamentos, enquanto que os níveis de RNAm para o receptor do tipo II (BMPR-II) não diferiram entre os tratamentos. Os maiores níveis de RNAm para o receptor de FSH foram detectados em folículos cultivados com BMP-15 sozinha. Em conclusão, este estudo demonstrou que a combinação de BMP-15 + FSH durante todo o período de cultivo (D0-D12) acelera o crescimento de folículos pré-antrais bovinos cultivados por 12 dias, mas este efeito reduz a viabilidade folicular, afetando a integridade ultra-estrutural dos folículos. Além disso, a adição de BMP isoladamente aumentou os níveis de expressão de RNAm para FSHR após 12 dias de cultivo,mostrando que BMP-15 e FSH podem contribuir significativamente para o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais cultivados por 12 dias nesta espécie.
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Efeito da lectina jacalina (artocarpus integrifolia) sobre a sobrevivência e ativação in vitro de folículos primordiais caprinos / Effect of jacalin lectin (Artocarpus integrifolia) on survival and activation in vitro goat primordial follicles

Ribeiro, Regislane Pinto January 2013 (has links)
RIBEIRO, R.P. Efeito da lectina jacalina (artocarpus integrifolia) sobre a sobrevivência e ativação in vitro de folículos primordiais caprinos. 2013. 89 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2013. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:14:04Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rpribeiro.pdf: 973114 bytes, checksum: 26b8c3ca48857ad4fe2a0408971c17f5 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:46:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rpribeiro.pdf: 973114 bytes, checksum: 26b8c3ca48857ad4fe2a0408971c17f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:46:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rpribeiro.pdf: 973114 bytes, checksum: 26b8c3ca48857ad4fe2a0408971c17f5 (MD5) Previous issue date: 2013 / The aims of this study were to investigate the effect of different concentrations of jacalin and the interaction of jacalin and FSH on survival, activation and gene expression of goat primordial follicles cultured in vitro. For this, fragments of ovarian cortex were cultured in Minimum Essential Medium (MEM) supplemented with different concentrations of jacalin (0, 10, 25, 50 and 100 mg/mL - experiment I) for one and six days. After the end of cultured period, the fragments of ovarian cortex were fixed for histology. Then, the percentage of primordial follicles in uncultured or cultured ovarian tissue in different treatments were evaluated. After determining the most effective concentration of jacalin (50 μg/mL), ovarian cortex fragments were cultured in MEM supplemented with jacalin (50 μg/ml), FSH (50 ng/ml) or both (experiment II). After 6 days of culture, the ovarian fragments were fixed for histology. Furthermore, for each treatment, tissue samples were collected to evaluate the expression profile of mRNA for c-kit, KL, GDF-9, BMP-15 and PCNA in goats ovarian follicles cultured in vitro for 6 days. The results showed that after six days of culture, the presence of 50 μg/ml jacalin in culture medium increased the percentage of normal follicles, and promoted a reduction in the percentage of primordial follicles and increase of developing follicles, when compared to control medium. In experiment II, jacalin or FSH stimulated primordial follicle activation and contributed to maintain follicle viability, but there was no positive interaction between these two substances. The levels of mRNA for BMP-15 and KL after in vitro culture of ovarian fragments in different treatments was not altered. However, the presence of FSH increased levels of mRNA for c-kit and PCNA, while the GDF-9 expression was reduced in medium supplemented with jacalin. In conclusion, jacalin and FSH were able to promote the survival and activation of goat primordial follicles after 6 days of culture. The presence of FSH increased expression mRNA of PCNA and c-kit, while the presence of jacalin reduced the expression of GDF-9. / Os objetivos deste estudo foram investigar o efeito de diferentes concentrações de jacalina e da interação de jacalina e FSH sobre a sobrevivência, ativação e expressão gênica em folículos primordiais caprinos cultivados in vitro. Para isto, os fragmentos do córtex ovariano foram cultivados em Meio Essencial Mínimo (MEM) suplementado com diferentes concentrações de jacalina (0, 10, 25, 50 e 100 μg/mL - experimento I), por um e seis dias. Após o término do período de cultivo, os fragmentos de córtex ovariano foram fixados para histologia clássica. Em seguida, avaliou-se a percentagem de folículos primordiais ou em desenvolvimento no controle não cultivado e no tecido ovariano cultivado nos diferentes tratamentos. Após a determinação da concentração de jacalina mais eficiente (50 μg/mL), realizou-se o cultivo de fragmentos de córtex ovariano em MEM suplementado com a jacalina (50 μg/mL), FSH (50 ng/mL) ou ambos (experimento II). Após 6 dias de cultivo, os fragmentos ovarianos foram fixados para histologia clássica. Além disso, para cada tratamento, foram coletadas amostras de tecido para avaliar o perfil de expressão de RNAs mensageiros para BMP-15, KL, c-kit, GDF-9 e PCNA em folículos ovarianos caprinos cultivado in vitro por 6 dias. Os resultados demonstraram que após seis dias de cultivo, a presença de 50 μg/mL de jacalina no meio de cultivo promoveu um aumento de folículos morfologicamente normais, bem como uma redução da percentagem de folículos primordiais e aumento de folículos em desenvolvimento, quando comparado ao meio controle. No experimento II, demonstrou-se que jacalina ou FSH estimulam a ativação dos folículos e contribuem para a manutenção da viabilidade, mas não foi observada uma interação positiva entres essas duas substâncias. A expressão de RNAm para a BMP-15 e KL após o cultivo in vitro de fragmentos de ovário nos diferentes tratamentos por 6 dias não foi alterada. No entanto, a presença de FSH aumentou os níveis de RNAm para o c-kit e para o PCNA, enquanto que o GDF-9 teve sua expressão reduzida em meio suplementado com jacalina. Em conclusão, jacalina e FSH foram capazes de promover a sobrevivência e ativação de folículos primordiais caprinos após 6 dias de cultivo. A presença de FSH aumentou a expressão do RNAm para PCNA e c-kit, enquanto que a presença da jacalina reduziu a expressão do GDF-9.
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Influência da Artrite Encefalite Caprina sobre a expressão de RNAm para GDF-9, BMP-15 e BMPR-IB em folículos ovarianos e ativação in vitro de folículos primordiais em meio suplementado com fitohemaglutinina e EGF / Influence of caprine arthritis encephalitis on expression of mRNAs for GDF-9, BMP-15 and BMPR-IB in ovarian follicles and on in vitro activation of primordial follicles in medium supplemented with phytohemagglutinin and EGF

Lopes, Tânia de Azevedo January 2014 (has links)
LOPES, T.A. Influência da Artrite Encefalite Caprina sobre a expressão de RNAm para GDF-9, BMP-15 e BMPR-IB em folículos ovarianos e ativação in vitro de folículos primordiais em meio suplementado com fitohemaglutinina e EGF. 2014. 101 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2014. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T13:34:45Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-10-03T14:50:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T14:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_tdalopes.pdf: 1351150 bytes, checksum: 65ee09c841d91119c1eb7a31b1f26ee5 (MD5) Previous issue date: 2014 / This study aims to investigate the effects of caprine arthritis encephalitis (CAE) on the expression of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in ovarian follicles, as well as the effects of phytohemagglutinin (PHA) and EGF on the survival and activation of primordial follicles, and on expression of mRNA for TNF-α and its receptors in cultured goat ovarian tissue. The levels of BMP-15, BMPR-IB and GDF-9 in primordial/primary and secondary follicles, as well as in COCs and follicular walls from antral follicles were evacuated by real-time PCR (experiment 1). Ovarian tissues were cultured for six days in α-MEM+ alone or supplemented with EGF (100μg/mL), PHA (10μg/mL) or both (experiment 2). Before and after culture, ovarian fragments were processed for morphological analysis or stored to evaluate the expression of mRNA for TNFα and its receptors. The results showed that the expression of BMP-15 and GDF-9 in primordial/primary follicles from infected goats was significantly higher than in health animals, but the expression of GDF-9 in secondary follicles from infected goats was significantly lower. Additionally, the expression of mRNA for BMP-15 in follicular wall of antral follicles from infected goats was significantly higher than in healthy goats. After culturing ovarian fragments in all tested media, reduced percentages of primordial follicles, and increased of developing follicles was observed when compared to uncultured control. Furthermore, there was a significant increase in follicular diameter after culture in medium supplemented with EGF. Ovarian tissue from infected goats cultured in medium supplemented with PHA had primordial follicles with higher diameters than those from healthy animals. An increase in the levels of mRNAs for TNF-α was observed after culturing ovarian tissue in presence of both EGF and PHA in healthy animals, but this same treatment promoted a reduction of mRNAs for TNF-α and and increase of TNFR-II transcripts in infected animals. In conclusion, CAE influences the expression of mRNA for BMP-15 and GDF-9 in goat ovarian follicles and PHA and EGF differentially regulate the expression of TNFα and TNFR-II in cultured ovarian tissue. / O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos da artrite encefalite caprina (CAE) sobre a expressão de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folículos ovarianos, bem como os efeitos de fitohemaglutinina (PHA) e EGF na sobrevivência e ativação de folículos primordiais, e na expressão de genes para o sistema de TNF-α no tecido ovariano cultivado caprino. Os níveis de BMP-15, BMPR-IB e GDF-9 em folículos primordiais/primários e secundários, bem como em CCOs e parede folicular de folículos antrais foram avaliados por PCR em tempo real (experimento 1). Para os estudos in vitro, fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por seis dias em α-MEM sozinho ou suplementado com EGF (100ug), PHA (10μg/mL) ou ambos (experimento 2). Antes e depois do cultivo, o tecido ovariano foi processado para análise morfológica ou armazenado para avaliar a expressão de RNAm para TNF-α e seus receptores. Os resultados mostraram que a expressão de BMP-15 e GDF-9 em folículos primordiais/primários de cabras infectadas foram significativamente maiores do que em animais saudáveis, mas a expressão de GDF-9 em folículos secundários de cabras infectadas foi significativamente menor. Além disso, a expressão de RNAm para BMP-15 na parede folicular de folículos antrais de cabras infectadas foi significativamente maior do que em cabras saudáveis. Após o cultivo dos fragmentos ovarianos em todos os meios testados, observou-se a redução nos percentuais de folículos primordiais, e aumento de folículos em desenvolvimento quando comparado ao grupo controle não cultivado. Além disso, houve um aumento significativo no diâmetro folicular após cultivo em meio suplementado com EGF. Após o cultivo de tecido ovariano de cabras infectadas em meio suplementado com PHA, os folículos primordiais apresentavam diâmetros maiores do que os de animais saudáveis. Além disso, observou-se um aumento nos níveis de RNAm para TNF-α após cultivo de tecido ovariano na presença de ambos EGF e PHA em animais saudáveis, mas este mesmo tratamento proporcionou uma redução de RNAm para TNF-α e aumento dos transcritos de TNFR-II em animais infectados. Pode-se concluir que a CAE influencia a expressão de RNAm para BMP-15 e GDF-9 em folículos ovarianos caprinos e a PHA e o EGF diferencialmente regulam a expressão de TNF-α e TNFR-II em tecidos ovarianos.
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Efeitos da Utilização de Fenilbutazona e Meloxicam no Desenvolvimento de Folículos Pré-ovulatórios em Éguas

LIMA, A. G. 24 May 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7166_DISSERTAÇÃO ANDRÉ LIMA GOMES.pdf: 633138 bytes, checksum: 6b5fe5635f1938a61f63a6ce41100c2a (MD5) Previous issue date: 2013-05-24 / Fármacos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), como meloxicam e fenilbutazona, tem sido utilizados para o tratamento de muitas desordens em éguas e podem interferir na atividade reprodutiva pela inibição da COX-2 e, consequentemente, a inibição da formação de PGs. Dessa forma, objetivou-se com este estudo avaliar os efeitos do tratamento com AINEs no desenvolvimento de folículos pré-ovulatórios em éguas. Utilizou-se onze éguas durante três ciclos estrais consecutivos, realizando exames ginecológicos e ulltrassonográficos a cada 12 horas durante o período pré-ovulatório. Quando folículos de 32 mm de diâmetro foram detectados, administrou-se 1 mg de deslorelina para induzir a ovulação. O primeiro ciclo foi usado como controle e as éguas receberam somente a dose de deslorelina, sem a administração de AINEs. Nos ciclos subsequentes as éguas foram tratadas com deslorelina e AINEs, a saber: no segundo ciclo, cada égua recebeu uma dose deslorelina associada a 4,4 mg/kg de fenilbutazona. No terceiro ciclo administrou-se deslorelina associada a 0,6 mg/kg de meloxicam, uma vez por dia, até o momento da ovulação ou início da hemorragia folicular. Observou-se que todas as éguas pertencentes ao grupo controle ovularam entre 36 e 48 horas após a indução. Durante o ciclo de tratamento com meloxicam, observou-se que 92% (n=10) das éguas não ovularam e, durante o ciclo de tratamento com fenilbutazona, 83% (n=9) não ovularam e pontos hiperecóicos intrafoliculares foram observados durante o exame ultrassonográfico, compatíveis com folículos hemorrágicos, evoluindo para folículos anovulatórios luteinizados. Assim, pode-se inferir que o tratamento com meloxicam e fenilbutazona, em doses terapêuticas, induz a formação de hemorragia intrafolicular e luteinização de folículos anovulatórios
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Expressão do sistema interleucina 1 (il-1) em folículos ovarianos bovinos e efeitos in vitro da il-1β na ativação de folículos primordiais. / Expression of interleukin 1 system members in bovine ovarian follicles and effects of interleukin -1β on primordial follicle activation in vitro.

Passos, José Renato de Sousa January 2015 (has links)
PASSOS, J.R.S. Expressão do sistema interleucina 1 (il-1) em folículos ovarianos bovinos e efeitos in vitro da il-1β na ativação de folículos primordiais. 2015. 95 f. Dissertação (DISSERTAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2015. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-08-23T13:25:03Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-26T16:00:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jrdspassos.pdf: 2733592 bytes, checksum: c3aee8f721ab539ee80cb2a9ae2c6aa4 (MD5) Previous issue date: 2015 / This study aims to investigate the expression of interleukin 1 system (proteins and mRNA of ligands and receptors) and its distribution in ovaries of cyclic cows, as well as to evaluate the effects of IL-1β on the survival and activation of primordial follicles in vitro. The ovaries were processed for localization of interleukin 1 system in preantral and antral follicles by immunohistochemical, qPCR and western blot analysis. For in vitro studies, ovarian fragments were cultured in α-MEM+ supplemented with IL-1β (0, 1, 10, 50 or 100 ng/mL), and aftes 6 days the tissues cultured were processed for histological analysis. Immunohistochemical results showed that the proteins for interleukin 1 system (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in the various follicular compartments. Unfortunately, IL-1α antibodies tested did not react in bovine ovaries. All the proteins tested were observed in the cytoplasm of oocytes and granulosa cells from all follicular categories, and theca cells of antral follicles, with the exception that IL-1α has not been found in any analyzed cell. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system in the follicular size and classes analysed. After 6 days of culture, the presence of IL-1β (10 or 50 ng/mL) was effective in maintaining the percentage of normal follicles and in promoting primordial follicle activation. In conclusion, interleukin 1 system is differentially expressed in the ovarian cells according to the stage of follicular development. Moreover, IL-1β promotes the development of primordial follicles. These results suggest an important role of the interleukin 1 system in the regulation of folliculogenesis in bovine species. / O objetivo deste estudo foi investigar a expressão do sistema interleucina 1 (proteínas e RNAm de ligantes e receptores) e sua distribuição nos ovários de vacas cíclicas, bem como avaliar os efeitos da IL-1β na sobrevivência e ativação de folículos primordiais in vitro. Os ovários foram processados para a localização do sistema interleucina 1 em folículos pré-antrais e antrais utilizando as técnicas de imunohistoquímica, qPCR e análise de Western blot. Para os estudos in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados em α-MEM+ suplementado com IL-1β (0, 1, 10, 50 ou 100 ng/mL), e após 6 dias foram processados para análise histológica. Os resultados de imunohistoquímica mostraram que a proteína para os integrantes do sistema interleucina I (IL-1β, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em diferentes compartimentos foliculares. Infelizmente, o anticorpo testado para localização de IL-1α não reagiu em ovários bovinos. Todas as proteínas testadas foram observados no citoplasma dos oócitos e nas células da granulosa de todas as categorias foliculares, e nas células da teca de folículos antrais, com a exceção da IL-1α, que não foi encontrada em nenhuma das célula analisados. Foram observados níveis variáveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. Após 6 dias de cultivo, a presença de IL-1β (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folículos normais e de promover a ativação dos folículos primordiais. Em conclusão, os componentes do sistema de interleucina 1 são expressos diferencialmente em células ovarianas de acordo com a fase do desenvolvimento folicular. Além disso, a IL-1β promove o desenvolvimento de folículos primordiais in vitro. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema interleucina 1 na regulação da foliculogênese em bovinos.
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Estabilidade de genes de referência e influência das BMPs-6 e 7 sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos / Stability of reference genes and influence of BMP-6 and 7 on the in vitro development of caprine preantral follicles

Frota, Isana Mara Aragão January 2010 (has links)
FROTA, I. M. A. Estabilidade de genes de referência e influência das BMPs-6 e 7 sobre o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos. 2010. 114 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará. 2010. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2016-04-04T14:52:49Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_imafrota.pdf: 1470611 bytes, checksum: afb3ce2b8c7bbc8dbd88c66e1c9331c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa(djeannecosta@gmail.com) on 2016-04-04T14:53:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_imafrota.pdf: 1470611 bytes, checksum: afb3ce2b8c7bbc8dbd88c66e1c9331c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T14:53:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_imafrota.pdf: 1470611 bytes, checksum: afb3ce2b8c7bbc8dbd88c66e1c9331c5 (MD5) Previous issue date: 2010 / This study aims to evaluate the stability of reference genes and the expression of growth factors and hormone receptors in goat secondary follicles. It also seeks to quantify the expression of messenger RNA for BMP-6 and BMP-7 in goat preantral follicles and to evaluate the effects of FSH, BMP-6 and BMP-7 on growth and gene expression in secondary follicles goats after 6 days of culture. To evaluate the stability of reference genes, secondary follicles (150-200 μm) were mechanically isolated from goat ovaries. After extraction of total RNA and synthesis of complementary DNA, the quantification of mRNA was carried out by real-time PCR using specific primers for genes of reference (GAPDH, β-tubulin, β-actin, PGK, UBQ, RPL - 19, rRNA18S), growth factors (GDF-9, BMP-15, BMP-6, FGF-2, VEGF, KL and IGF-1) and hormone receptor (FSH-R, LH-R and GH-R). To evaluate expression of BMP-6 and BMP-7, primordial follicles, primary and secondary as well as small and large antral follicles were obtained and the mRNA levels of BMP-6 and 7 were measured. For in vitro studies, the effects of BMP-6 (50 ng / mL) and BMP-7 (50 ng / mL) in the presence or absence of FSH (50 ng / mL) on the development of secondary follicles and on the expression of mRNA for BMP-6 and 7 and FSH-R was evaluated after 6 days of culture. Results showed that mRNA for growth factors (EGF, GDF-9, BMP-15, VEGF, FGF-2, BMP-6, IGF-1 and KL) and the receptors for FSH, LH and GH are expressed in at different levels in preantral follicles of goats. Moreover, among the growth factors studied, IGF-1 and EGF had higher and lower levels or RNA, respectively. UBQ and β-actin genes were the mostr stable reference in fresh and cultured preantral follicles. The level of mRNA for BMP-6 in primary and secondary follicles was significantly higher than those in primordial follicles, while the levels of mRNA for BMP-7 was higher in granulosa cells / theca in large antral follicles than in small antral follicles. After culture of secondary follicles for 6 days, FSH increased follicular diameter and FSH and BMP-7 significantly increased the levels of mRNA for BMP- 7 and FSH-R. In addition, BMP-6 in the presence or absence of FSH increased the diameter of secondary follicles after 6 days of culture. Real-time PCR shoed that FSH increased the levels of mRNA for BMP-6, while both BMP-6 and FSH and increased levels of mRNA for FSH-R, after a period of 6 days of culture. In conclusion, UBQ and β-actin are the two most stable genes for secondary follicles goats and FSH and BMPs of types 6 and 7 stimulate the growth of preantral follicles after 6 days of in vitro culture. / Este trabalho tem como objetivo avaliar a estabilidade de genes de referência e a expressão de fatores de crescimento e de receptores de hormônios em folículos secundários de caprinos. Além disso, visa quantificar a expressão dos RNA mensageiros para BMP-6 e BMP-7 em folículos pré-antrais e antrais caprinos e avaliar os efeitos de FSH, BMP-6 e BMP-7 sobre o crescimento e expressão gênica em folículos secundários caprinos durante 6 dias de cultivo. Para avaliar a estabilidade dos genes de referência, folículos secundários (150-200 µm) foram isolados mecanicamente de ovários caprinos. Após a extração do RNA total e síntese de DNA complementar, realizou a quantificação dos mRNA, por PCR em tempo real, utilizando-se primers específicos para genes de referência (GAPDH, β-tubulina, β-actina, PGK, UBQ, RPL-19, rRNA18S), fatores de crescimento (GDF-9, BMP-15, BMP-6, FGF-2, VEGF, KL e IGF-1) e receptores de hormônio (FSH-R, LH-R e GH-R). Para avaliar a expressão de BMP-6 e BMP-7, folículos primordiais, primários e secundários, bem como pequenos e grandes folículos antrais foram obtidos e os níveis de mRNA de BMP-6 e 7 foram quantificados. Nos estudos in vitro, os efeitos da BMP-6 (50 ng/mL) e BMP-7 (50 ng/mL) na presença ou ausência de FSH (50 ng/mL) sobre o desenvolvimento in vitro de folículos secundários e sobre a expressão de mRNA para BMP-6 e 7 e FSH-R foi avaliada após 6 dias de cultivo. Os resultados mostraram que UBQ e β-actina são os genes de referência mais estáveis em folículos pré-antrais caprinos fresco cultivados por 12 dias. Os RNAs mensageiros para os fatores de crescimento (EGF, GDF-9, BMP-15, VEGF, FGF-2, BMP-6, IGF-1 e KL) e os receptores de FSH, LH e GH são expressos em diferentes níveis em folículos pré-antrais de caprinos, sendo que o IGF-1 e o EGF apresentaram, respectivamente, o maior e o menor nível de mRNA. O nível de mRNA para BMP-6 em folículos primários e secundários foi significativamente maior do que aqueles em primordial, enquanto que os níveis de mRNA para BMP-7 foi maior nas células da granulosa/teca de grandes do que nos pequenos folículos antrais. Após o cultivo de folículos secundários durante 6 dias, FSH aumentou o diâmetro folicular e FSH e BMP-7 aumentou significativamente os níveis de mRNA para BMP-7 e FSH-R. Já a BMP-6 na presença ou ausência de FSH aumentou o diâmetro dos folículos secundários. Além disso, FSH aumentou os níveis de mRNA para BMP-6, enquanto ambos BMP-6 e FSH e aumentaram os níveis de mRNA para FSH-R, após o período de cultivo. Em conclusão, UBQ e β-actina são os dois genes mais estáveis para folículos secundários caprinos e o FSH e as BMPs dos tipos 6 e 7 estimulam o crescimento de folículos pré-antrais in vitro durante 6 dias de cultivo.
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Avaliação reprodutiva e congelação de sêmen em serpentes / Reproductive evaluation and semen cryopreservation in snakes

Rogério Loesch Zacariotti 12 December 2008 (has links)
Os répteis compõem hoje uma classe com mais de 8.000 espécies e em razão das restrições na importação desses animais, o risco na introdução de doenças exóticas, o crescente número de espécies ameaçadas no mundo, entre outros, a reprodução e a manutenção em cativeiro desses animais é muito importante. No Sul da Califórnia, que é considerado um Hotspot para a biodiversidade, a Zoological Society of San Diego mantém uma reserva ecológica com aproximadamente 400 hectares e formada por vegetação tipo Chaparral, Coastal Sage Scrub e áreas cobertas por cactos (Opuntia sp.). Durante o período de junho de 2005 a julho de 2006 foram capturadas 96 cascavéis das espécies Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri e C. mitchellii phyrrus, durante os trabalhos de campo pela procura visual limitada por tempo. Foram realizadas avaliações morfológicas e reprodutivas em todas essas serpentes capturadas. Nos machos realizou-se a colheita e avaliação de sêmen, incluindo duas colorações específicas para avaliar integridade de membrana espermática e do acrossoma. Nas fêmeas foi realizada a avaliação ultra-sonográfica dos ovários, com mensuração e contagem de folículos, além do diagnóstico de gestação. Para a C. ruber ruber, a serpente mais abundante neste estudo, foram observadas fêmeas prenhes no verão e vitelogênicas na primavera, outono e inverno. Apenas as fêmeas desta espécie com condição corporal boa ou muito boa apresentaram-se vitelogênicas ou prenhes. Nos machos dentre as características seminais avaliadas, não foi observada a diferença estatisticamente significante ao longo das estações do ano. Em paralelo a este estudo, também foram testados protocolos para a congelação de sêmen de serpentes, com a obtenção de resultados promissores, discutidos em capítulo específico. As informações obtidas neste estudo visam contribuir para a compreensão da biologia reprodutiva e conservação das serpentes, em cativeiro ou vida-livre. / There are more than 8,000 reptile species in world. Today´s restrictions to importation of these species around world, the risk of introduction of exotic diseases, the growing number of endangered reptiles, among other reasons, emphasize the importance of reproduction in captivity and ex-situ conservation. South California is a Hotspot for biodiversity and the Zoological Society of San Diego maintains a nature preserve in Escondido City. In an area of about 400 hectares, composed by vegetation types like Chaparral and Coastal Sage Scrub, it has been found the greatest diversity of snake in region. Between May 2005 and July 2006, 96 rattlesnakes of species Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri and C. mitchellii phyrrus were captured by active searching during field work. In the Laboratory of Reproductive Physiology the snakes were measured, weighted, and marked the captured snakes. We evaluated their body condition, collected and evaluated semen from males and performed ultrasound exams in females. Snakes were released up to 24 hours after capture. The Crotalus ruber ruber studied initiated vitellogenesis in fall, courtship and mating occurred in spring and gravid snake were observed in spring and summer. Only females with a good or very good body condition were in secondary vitellogenesis or gravid. There were no statistical differences in seminal parameters among season in males of the Crotalus ruber ruber. Protocols to freeze snake´s semen were tested in this study, with positive results that are discussed in specific chapter. This study results contribute to understand of snake´s biology of reproduction and in or ex-situ conservation.
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Determinación de finura de fibra de alpaca asociado a la relación folículo secundario/folículo primario (S/P) entre las razas Suri y Huacaya

Badajoz Lava, Elmer January 2007 (has links)
El documento digital no refiere asesor (asesor) / Determina el grado de asociación con la medida del diámetro de su respectiva fibra en cada raza y entre ambas razas. Para ello se tomaron muestras de fibra y piel mediante biopsia de la zona del costillar medio. Las muestras de fibra fueron medidas a través del laserscan, mientras que las biopsias de piel fueron procesadas mediante estudio histológico. La histología demostró que los folículos primarios pueden ser solitarios denominados folículo primario extra grupo folicular (FPEGF) o formando parte de un grupo folicular compuesto denominado folículo primario intra grupo folicular (FPIGF). Además estos últimos pueden distribuirse de manera central (FPC) y lateral (FPL) mientras que los secundarios pueden ser solitarios formando grupos foliculares simples o formando parte de los grupos foliculares compuestos. Los valores promedio de relación folicular S/P fueron de 13.9 ( ± 4.7) para la raza huacaya y de 14.5 ( ± 6.3) para la raza suri , mientras que el diámetro de fibra para la raza huacaya fue de 20.8 micras ( ± 1.9) y para la raza suri de 21.4 micras ( ± 2.0 ). No se encontró diferencia estadística para los valores de relación folicular S/P ni para los valores de medida del diámetro medio de fibra entre ambas razas de alpacas. Sin embargo al hacer el análisis de correlación, los resultados indican que a mayor relación folicular S/P el diámetro de fibra de alpaca es menor en ambas razas, debido a que ambas variables presentan una correlación negativa (r = - 0.72). / Tesis
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Avaliação reprodutiva e congelação de sêmen em serpentes / Reproductive evaluation and semen cryopreservation in snakes

Zacariotti, Rogério Loesch 12 December 2008 (has links)
Os répteis compõem hoje uma classe com mais de 8.000 espécies e em razão das restrições na importação desses animais, o risco na introdução de doenças exóticas, o crescente número de espécies ameaçadas no mundo, entre outros, a reprodução e a manutenção em cativeiro desses animais é muito importante. No Sul da Califórnia, que é considerado um Hotspot para a biodiversidade, a Zoological Society of San Diego mantém uma reserva ecológica com aproximadamente 400 hectares e formada por vegetação tipo Chaparral, Coastal Sage Scrub e áreas cobertas por cactos (Opuntia sp.). Durante o período de junho de 2005 a julho de 2006 foram capturadas 96 cascavéis das espécies Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri e C. mitchellii phyrrus, durante os trabalhos de campo pela procura visual limitada por tempo. Foram realizadas avaliações morfológicas e reprodutivas em todas essas serpentes capturadas. Nos machos realizou-se a colheita e avaliação de sêmen, incluindo duas colorações específicas para avaliar integridade de membrana espermática e do acrossoma. Nas fêmeas foi realizada a avaliação ultra-sonográfica dos ovários, com mensuração e contagem de folículos, além do diagnóstico de gestação. Para a C. ruber ruber, a serpente mais abundante neste estudo, foram observadas fêmeas prenhes no verão e vitelogênicas na primavera, outono e inverno. Apenas as fêmeas desta espécie com condição corporal boa ou muito boa apresentaram-se vitelogênicas ou prenhes. Nos machos dentre as características seminais avaliadas, não foi observada a diferença estatisticamente significante ao longo das estações do ano. Em paralelo a este estudo, também foram testados protocolos para a congelação de sêmen de serpentes, com a obtenção de resultados promissores, discutidos em capítulo específico. As informações obtidas neste estudo visam contribuir para a compreensão da biologia reprodutiva e conservação das serpentes, em cativeiro ou vida-livre. / There are more than 8,000 reptile species in world. Today´s restrictions to importation of these species around world, the risk of introduction of exotic diseases, the growing number of endangered reptiles, among other reasons, emphasize the importance of reproduction in captivity and ex-situ conservation. South California is a Hotspot for biodiversity and the Zoological Society of San Diego maintains a nature preserve in Escondido City. In an area of about 400 hectares, composed by vegetation types like Chaparral and Coastal Sage Scrub, it has been found the greatest diversity of snake in region. Between May 2005 and July 2006, 96 rattlesnakes of species Crotalus ruber ruber, C. oreganus helleri and C. mitchellii phyrrus were captured by active searching during field work. In the Laboratory of Reproductive Physiology the snakes were measured, weighted, and marked the captured snakes. We evaluated their body condition, collected and evaluated semen from males and performed ultrasound exams in females. Snakes were released up to 24 hours after capture. The Crotalus ruber ruber studied initiated vitellogenesis in fall, courtship and mating occurred in spring and gravid snake were observed in spring and summer. Only females with a good or very good body condition were in secondary vitellogenesis or gravid. There were no statistical differences in seminal parameters among season in males of the Crotalus ruber ruber. Protocols to freeze snake´s semen were tested in this study, with positive results that are discussed in specific chapter. This study results contribute to understand of snake´s biology of reproduction and in or ex-situ conservation.

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