Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Lia de Alencar Coelho / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Banca: César Roberto Esper / Banca: Gilson Helio Toniollo / Resumo: Os objetivos deste trabalho foram de facilitar os procedimentos de formação de gradientes de- densidade de Percoll e OptiPrep para separação de espermatozóides X; avaliar a eficiência da sexagem de espermatozóides X, a viabilidade espermática e integridade do acrossoma e do DNA após a centrifugação nestes gradientes e avaliar taxa de clivagem e blastocisto durante a produção in vitro de embriões. Para isso, doses de sêmen de touros foram descongeladas e cerca de 40 milhões de espermatozóides foram colocados sobre cada gradiente de densidade compostos por Percoll ou OptiPrep com três camadas que variaram entre 1.11 Og/mL a 1.123g/mL em tubos de poliestireno de 15mL. Centrifugou-se o gradiente a 500xg por 15 min a 22°C. Os sobrenadantes foram aspirados e recuperados para verificação da viabilidade espermática e integridade do acrossoma, fragmentação do DNA, produção in vitro de embriões, avaliação da eficiência da sexagem pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR) e sexagem dos embriões pela PCR. A porcentagem de espermatozóides vivos com acrossoma intacto diminuiu (P<0,05) após a centrifugação nos gradientes de densidade, mas não influenciou, de modo geral, a produção in vitro de embriões (taxa de clivagem e blastocistos) utilizando estes espermatozóides centrifugados. Não foi detectada fragmentação do DNA dos espermatozóides nas amostras centrifugadas. Os resultados demonstraram que o Percoll enriqueceu as amostras com espermatozóides X (62% de fêmeas, P<0,05). No OptiPrep e grupo Controle a porcentagem de fêmeas foi de 47,1 e 48,7%, respectivamente. Estes resultados foram confirmados pela qPCR do DNA dos espermatozóides, com uma subestimação apenas no Percoll. Foi possível realizar a sexagem, por uma metodologia mais simples, facilitando o procedimento de centrifugação em gradiente de densidade e sem provocar danos aos espermatozóides. / Abstract: The objectives of this work were to facilitate the procedures of formation of density gradients of Percoll and OptíPrep for separation of X-bearing bovine spermatozoa; to evaluate the efficiency of sexing and viability of acrosome integrity and DNA after centrifugation in these gradients and to assess the cleavage and blastocyst rate during in vitro production of embryos. For this, frozen-thawed spermatozoa (20 to 40 millions) were deposited on each density gradient composed of Percoll or OptiPrep with three layers that varied between 1.110g/mL to 1.123g/mL, in 15mL polystyrene tubes. The tubes were centrifuged at 500xg for 15 min at 22oC. Supernatants were carefully aspirated and sediments recovered for verification of sperm quality, DNA fragmentation, in vitro fertilization of embryos, evaluation of the efficiency of sexing by real time polymerase chain reaction (qPCR) and sexing of embryos by PCR. Percentage of live spermatozoa with intact acrosome decreased (P<0.05) after centrifugation in density gradients, however, it not influence, in general, the production of embryos in vitro (cleavage and blastocyst rates) using these centrifuged sperm. No sperm DNA fragmentation was detected in centrifuged samples. The results of embryo sexing by PCR showed deviation to female in the Percoll group (62%, P<0.05). In the OptiPrep and Control group the percentage of females was 47.1 and 48.7%, respectively. These results were confirmed by qPCR of DNA of spermatozoa, with an underestimation only in the Percoll group. It was possible the sexing, by a simple approach, facilitating the process of the centrifugation in density gradient and without damage to sperm. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Rodrigo Arruda de Oliveira - ciencia animal.pdf: 240323 bytes, checksum: 9271974d672bf2ee948422285040bd20 (MD5) Previous issue date: 2011-04-18 / In the equine world is increasing the use of frozen semen and cooled due to the recent release of its use for most of breeders' associations. However, the fertility of frozen semen is still low and this hinders their widespread use. The objective was to evaluate the effect In vitro addition of glutathione on sperm concentrations in five of 12 stallions in different protocols of freezing, and I Experiment (EI): automated freezing immediately after harvest and Experiment II (EII): automated freezing (MRI) and manual (RG) after passive cooling 24 h at 16 ° C. The variables assessed were total and progressive motility, vigor, plasma membrane integrity and acrosomal. The addition of glutathione in concentration of 2.5 mM in the midst of freezing preserves the total motility, significantly increases the motility and integrity of plasma membrane, both for semen frozen immediately after harvesting and for the refrigerated and frozen manually. Concentrations exceeding 2.5 mM were deleterious to sperm in different freezing protocols, with or without passive cooling. In chapter 3 aimed to evaluate the in vitro effect of the addition of cysteine &#8203;&#8203;and glutathione in seven treatments on sperm from 12 stallions in protocol passive cooling to 16 ° C for 36h. The variables assessed were total motility and progressive force and plasma membrane integrity and acrosomal in seven different times (0, 6, 12, 18, &#8203;&#8203;24, 30 and 36h). For discussion of data were taken into account only the values &#8203;&#8203;of the moments 1, 3, 5 and 7 (0, 12, 24 and 36h). The concentration of 1.0 mM cysteine &#8203;&#8203;was more effective in protection of sperm cells in the trading system of the passive cooling 16 º C for 36h, with higher values &#8203;&#8203;of motility and membrane integrity. / Na equinocultura mundial é cada vez maior a utilização do sêmen congelado e refrigerado devido a recente liberação do seu uso por grande parte das associações de criadores. Entretanto, a fertilidade do sêmen congelado ainda é baixa e isto dificulta a sua utilização em larga escala. Objetivou-se avaliar o efeito in vitro da adição de glutationa em cinco concentrações sobre espermatozóides de 12 garanhões em diferentes protocolos de congelamento, sendo Experimento I (EI): congelamento automatizado imediatamente pós-colheita e Experimento II (EII): congelamento automatizado (RM) e manual (RG) após refrigeração passiva por 24h a 16ºC. As variáveis avaliadas foram motilidade total e progressiva, vigor, integridade das membranas plasmática e acrossomal. A adição de glutationa na concentração de 2,5mM ao meio de congelamento preserva a motilidade total, incrementa significativamente a motilidade progressiva e a integridade de membrana plasmática, tanto para sêmen congelado imediatamente pós-colheita quanto para o refrigerado e congelado de forma manual. Concentrações superiores a 2,5mM foram deletérias aos espermatozóides nos diferentes protocolos de congelamento, com ou sem refrigeração passiva. No capítulo 3 objetivou-se avaliar o efeito in vitro da adição de cisteína e glutationa em sete tratamentos, sobre espermatozóides de 12 garanhões em protocolo de refrigeração passiva a 16ºC por 36h. As variáveis avaliadas foram motilidade total e progressiva, vigor e integridade das membranas plasmática e acrossomal em sete momentos diferentes (0, 6, 12, 18, 24, 30 e 36h). Para discussão dos dados foram levados em consideração somente os valores dos momentos 1, 3, 5 e 7 (0, 12, 24 e 36h). A concentração de cisteína 1,0mM mostrou-se mais eficiente para proteção da célula espermática no sistema comercial de refrigeração passiva a 16ºC por 36h, com valores maiores de motilidade e integridade de membrana.

O sucesso da fecundação e da sustentação do desenvolvimento embrionário subseqüente é dependente de atributos espermáticos relacionados à qualidade seminal. A produção in vitro de embriões em bovinos é uma ferramenta fundamental para a aceleração do ganho genético do rebanho, porém o uso comercial depende diretamente da melhoria do sistema de produções in vitrode embriões a um baixo custo. Técnicas que proporcionem melhoria da qualidade seminal possibilitando um incremento na produção in vitro de embriões e ainda a um baixo custo possuem apelo econômico. O laser de baixa potência emite ondas eletromagnéticas com efeitos biológicos. Este efeito é dependente dos parâmetros de irradiação e do tipo celular alvo. Trabalhos avaliando o laser de baixa potência em amostras seminais sugerem que seja utilizado para melhorar os atributos espermáticos e, conseqüentemente, a produção in vitro de embriões. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do laser de baixa potência sobre a viabilidade espermática e averiguar o efeito desta estimulação na produção in vitro de embriões bovinos. Para isso, amostras comerciais de sêmen criopreservado foram descongeladas e submetidas à irradiação com laser He-NE. No experimento 1 foram testadas as potências de 0; 5; 7,5 e 10mW, por 5 ou 10 minutos de tratamento. As amostras de sêmen foram avaliadas imediatamente após a irradiação e após 30 minutos de incubação. Foram verificadas possíveis interações duplas (Potência*Duração do Tratamento, Potência*Tempo e Duração do Tratamento*Tempo) e tripla (Potência*Duração do Tratamento*Tempo). No experimento 2 foi avaliado o efeito da melhor combinação potência X duração dos tratamentos utilizados no Experimento 1, para irradiar o sêmen utilizado para a produção in vitro de embriões. O laser de baixa potência apresentou efeito sobre diversos atributos relacionados à viabilidade espermática. Este efeito foi dependente da potência e da duração do tratamento. Nas condições experimentais, a potência de 5mW com duração de 10 minutos de aplicação sugere efeitos positivos no aumento na viabilidade espermática. No entanto, o tratamento de espermatozóides nesta potência e duração do tratamento, não apresenta incremento nas taxas de produção nem na qualidade embrionária. / Success of fertilization and the maintenance of subsequent embryo development rely on sperm attributes related to seminal quality. The in vitro production of bovine embryos is an essential tool for genetic gain in the herd. However, its commercial use directly depends on improvement of the production system at a low cost. Inexpensive techniques which provide an increase of seminal quality, allowing the increment of in vitro production of embryos are of great interest to cattle breeding. Low-power laser emits electromagnetic waves with biological effects. These effects are dependent of irradiation parameters and target cell type. Studies with seminal samples irradiated by low potency laser suggest its use to improve several sperm features and, therefore, in vitro production of embryos. This study aimed to evaluate the effect of low potency laser on sperm viability and fertilization ability of irradiated sperm. Briefly, in Experiment 1, samples of frozen/thawed commercial semen were subjected to He-NE laser irradiation. Laser potencies of 0, 5, 7.5 or 10mW were tested for 5 or 10 min of treatment. Samples were evaluated immediately and 30 min after irradiation. Double (Potency*Treatment length, Potency*Time and Treatment length*Time) and triple interactions (Potency*Treatment length*Time) were assessed. Afterwards, in Experiment 2, the effect of the best combination of potency and exposure length on in vitro production of embryos was verified. Low potency laser affected several semen attributes related to sperm viability. This effect was dependent on laser potency and the length of treatment. In the experimental conditions tested in this study, 5mW potency combined to 10 min of exposure had appeared to have positive effect of increasing sperm viability. However, 5mW potency laser for 10 min sperm irradiation did not improve in vitro embryo production rates and bovine embryo quality.

INTRODUÇÃO: A Região Metropolitana de São Paulo é a mais populosa do Brasil. A grande frota veicular contribui para uma maior concentração de poluentes atmosféricos. Diversos poluentes podem interferir na fertilidade humana, alterando os principais parâmetros seminais. Este estudo teve como objetivo avaliar a influência dos níveis atuais de poluição atmosférica de origem veicular nos parâmetros seminais em controladores de tráfego. MÉTODOS: Foram realizadas anamnese e avaliação clínica urológica (volume testicular, presença de varicocele, criptorquidia, má formações) em 62 controladores de tráfego da CET (grupo exposto) e 210 homens comprovadamente férteis do grupo de pré-vasectomia do ambulatório da urologia do HC-FMUSP (grupo controle). Os parâmetros seminais avaliados foram concentração, motilidade (quantitativa e qualitativa), morfologia pelos critérios da OMS e critério estrito de Kruger, teste para detecção de leucócitos e testes de função espermática, CK, ROS e anticorpo anti-espermatozóide. Parâmetros hormonais também foram avaliados. Avaliação de exposição à poluição foi realizada através da dispersão de poluentes registrado pela Cetesb, gerada pelo software SURFER 8.0. RESULTADOS: Os controladores de tráfego apresentaram volume testicular maior em relação ao grupo pré-vasectomia (p<0,001). Quanto aos níveis de Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) e Testosterona total (p=0,365), ambos os grupos apresentaram valores dentro da normalidade. A concentração espermática apresentou-se homogênea nos grupos (p= 0,395); os controladores de tráfego apresentaram média de 124,9 x 106/ml e os pré-vasectomia 110,1 x 106/ml. Os controladores de tráfego apresentaram motilidade quantitativa (total) reduzida (60%) em relação aos prévasectomia (65%) (p= 0,047). A motilidade qualitativa (progressiva) também se apresentou diminuída no grupo exposto (p<0,001). As morfologias espermáticas tanto pelo critério da OMS (grupo exposto = 12%; grupo controle = 20%), quanto pelo critério estrito de Kruger (grupo exposto = 3%; grupo controle = 6%) estavam significativamente diminuídas no grupo exposto em relação ao controle (p<0,001). O marcador de maturidade Creatina Quinase apresentou-se dentro da normalidade em ambos os grupos, porém maior no grupo controle (p<0,001). Anticorpos anti-espermatozóides estavam elevados nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,382). Radicais livres de oxigênio apresentaram-se em altas concentrações nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,141). CONCLUSÕES: A análise dos dados obtidos nessa pesquisa sugere que a poluição atmosférica exerce uma influência negativa sobre os parâmetros seminais motilidade e morfologia. Causa elevação dos níveis de ROS em todos os indivíduos, indicando perda da função espermática. Ainda demonstrou-se a elevação em todos os indivíduos dos níveis de anticorpos anti-espermatozóides, sugerindo que os poluentes teriam transposto a barreira hemato-testicular. O volume testicular do grupo exposto à poluição veicular apresentar-se maior em relação ao volume testicular do grupo controle nos leva a supor que isto se deva a uma reação inflamatória aos agentes poluidores. Apesar da diferença significativa na concentração de poluentes entre os grupos, uma correlação direta com parâmetros seminais não pôde ser demonstrada / Metropolitan Region of Sao Paulo is the most populous of Brazil. The huge number of vehicles contributes for a higher concentration of air pollutants. Various pollutants can interfere in human fertility, altering the main seminal parameters. The aim of this study was to evaluate the influence of air pollution of vehicular origin on seminal parameters of traffic controllers. Clinical history and urological evaluation (testicular volume, presence of varicocele, cryptorchidism, bad formations) were carried out in 62 traffic controllers (exposed group) and 210 proven fertile men from the pre-vasectomy group of urologic clinic at Hospital of Clinics University of Sao Paulo (control group). Seminal parameters evaluated were concentration, motility (quantitative and qualitative), morphology by WHO´s criteria and Kruger´s strict criteria, test for detection of leukocytes and tests of sperm function, CK, ROS and antisperm antibody. Hormonal parameters also were evaluated. Exposition to air pollution was analyzed through the dispersion of pollutants recorded by Cetesb, generated in the software SURFER 8.0. Traffic controllers presented bigger testicular volume than prevasectomy group (p<0,001). Hormonal levels were at normal range in both groups; Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) and Total Testosterone (p=0,365). Sperm concentration was homogeneous in both groups (p= 0,395); traffic controllers presented mean of 124.9x106/ml and pre vasectomy group 110.1x106/ml. The exposed group presented quantitative (total) motility (60%) diminished than control group (65%) (p=0,047). The qualitative (progressive) motility was also diminished in the exposed group (p <0,001). The sperm morphologies as by WHO´s criteria (exposed group = 12%; control group = 20%), as by Kruger´s strict criteria (exposed group = 3%; control group = 6%) were significantly diminished in the exposed group (p<0,001). The sperm maturity marker Creatine Kinase was at normal range at both groups, but higher in the control one (p<0,001). Antisperm antibodies was elevated in both groups, however it was not significant (p=0,382). ROS presented higher concentrations in both groups, however it was not significant (p=0,141). The facts presented in this study suggest that air pollution exercises negative effects on the seminal parameters motility and morphology. It causes elevation of ROS levels in all individuals, indicating loss of sperm function. It also showed, elevation of antisperm antibodies levels, suggesting that pollutants would have transposed the blood-testis barrier. The testicular volume in the exposed group was higher than the testicular volume of the control group; we can suppose that it must occur due to an inflammatory reaction against the polluting agents. Although the significant difference in pollutants concentrations between groups, no direct correlation to seminal parameters could be demonstrated

Submitted by Ubirajara Cruz (ubirajara.cruz@gmail.com) on 2016-09-23T13:21:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_fernanda_santos.pdf: 546934 bytes, checksum: 93c3d8b5c22732ee2c5eb72d5be87606 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2016-09-23T16:04:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_fernanda_santos.pdf: 546934 bytes, checksum: 93c3d8b5c22732ee2c5eb72d5be87606 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T16:04:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_fernanda_santos.pdf: 546934 bytes, checksum: 93c3d8b5c22732ee2c5eb72d5be87606 (MD5) Previous issue date: 2014-07-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O resfriamento seminal tem como intuito o prolongamento da viabilidade espermática e capacidade fecundante pela redução no metabolismo energético dos espermatozoides, proporcionando período hábil para transporte do sêmen do garanhão até a égua. O processo de resfriamento pode resultar em alterações ultraestruturais, bioquímicas e funcionais na célula espermática. O objetivo deste experimento foi avaliar o efeito do extrato de própolis verde adicionado ao diluente para resfriamento de sêmen equino a 5ºC. Para isso, foram coletados 4 ejaculados de 5 garanhões da raça Crioula e Quarto de Milha (n=20). Estes ejaculados foram submetidos aos seguintes tratamentos: controle (diluente a base de leite desnatado) e grupos com adição de extrato de própolis verde em diferentes concentrações (2,5μl/mL; 5μl/mL; 7,5μl/mL; 10μl/mL). As análises espermáticas incluíram motilidade, funcionalidade mitocondrial, integridade de membrana plasmática, DNA e acrossoma, sendo utilizados ejaculados contendo ≥70% de células íntegras ás 0h. As avaliações foram realizadas ás 0; 30; 60; 120; 180; 240; 300; 360 e 1440 minutos durante o resfriamento a 5ºC. Os parâmetros seminais diminuíram de acordo com o aumento do tempo em resfriamento em todos tratamentos (P<0,05). A motilidade espermática atingiu 0% em 360 minutos nos tratamentos com própolis. A adição de extrato de própolis verde ao diluente de resfriamento seminal manteve as características estruturais da célula espermática equina, no entanto prejudicou as caraterísticas funcionais. / Seminal cooling aims to prolong spermatic lifespan and fertilizing capacity due to reduction in energy metabolism of spermatozoa, providing enough period for transportation from the stallion to the mare. Cooling process can result in ultraestructural, biochemical and functional alterations to spermatozoa. The aim of this study was to evaluate the effect of green propolis hydroalcoholic extract (GPHE) added into equine semen extender and stored at 5ºC. For that, semen was collected from five stallions (Crioulo and Quarter horse) in four opportunities (n=20). These ejaculates were submitted to the following treatments: control group (skim milk glucose semen extender) and groups with the addition of green propolis extract in different concentrations (2,5μl/mL; 5μl/mL; 7,5μl/mL; 10μl/mL). Seminal analyses included motility, mitochondrial functionality, integrity of plasma membrane, DNA and acrossome, being used ejaculates with ≥70% of intact cells. Evaluation was performed at 0; 30; 60; 120; 180; 240; 300; 360 and 1440 minutes during cooled storage at 5ºC. Seminal parameters declined according to storage time in all treatments (P<0.05). Sperm motility reached 0% in 360 minutes in the groups with propolis. The addition of green propolis extract into the semen extender maintained structural characteristics of stallion sperm cell, however it was detrimental no functional characteristics.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_HUBERSON_FINAL.pdf: 232987 bytes, checksum: 845a7b338d4388c6a546aefabcc59018 (MD5) Previous issue date: 2010-06-21 / For the economy, the Brazilian industry of cattle is a very important activity because it is one area that gives the possibility of having a very big potential in terms of growth. Having this in mind, it can conclude that the artificial insemination is probably one of the most important way for contributing with the advancement of the modern animal techniques used for the production, however, it requires the use of the frozen semen for this realization. During the cryopreservation process, a decrease in the number of sperm viability happens because of the osmotic effects, temperature, and morphological changes that occur because of the organization changes, fluidity, permeability and the lipid composition of sperm membranes. The interaction presents between sperm cells and the thinner represents a crucial factor to preserve the integrity and the fertilizing ability. The thinner has as main objective to protect the sperm cells during the cold shock, and also in the freezing and thawing. Conventional parameters used in the sperm evaluation have showed that they are limited in their ability of predicting the semen potential fertility, and then tests that have different characteristics of the sperm and evaluation of many attributes can provide a better fertility estimate. To evaluate the integrity of the plasmatic membrane, it was successfully utilized one combination of fluorescent probe (IP that means propidium iodide and CFDA that means carboxyfluorescein diacetate). The system CASA (one computer program that analyzes the semen) provides real information about the individual cell movement and also the subpopulations of sperm cells realizing draw for each sperm that has as objective to represent the real path. This review has the objective of presenting the relevant information to the effect of thinners in the frozen ox semen (Bos taurus indicus). / A pecuária brasileira é uma atividade de grande importância para a economia do país por se destacar pelo seu elevado potencial e possibilidade de crescimento. Neste sentido, a inseminação artificial é um dos instrumentos mais importantes para contribuir no avanço das modernas técnicas de produção animal, entretanto, para sua realização é necessário o uso do sêmen congelado. Durante o processo de criopreservação, ocorre diminuição da viabilidade espermática devido aos efeitos osmóticos, temperatura e alterações morfológicas que ocorrem por mudanças na organização, fluidez, permeabilidade e composição lipídica das membranas espermáticas. A interação entre as células espermáticas e o meio diluidor representa um fator crucial para a preservação da integridade espermática e habilidade de fecundação. O meio diluente tem como finalidade proteger a célula espermática durante o choque térmico, na congelação e descongelação. Parâmetros convencionais utilizados na avaliação espermática têm se mostrado limitados quanto à capacidade de predizer o potencial de fertilidade do sêmen, assim testes que mensuram diferentes características do espermatozóide e avaliação de vários atributos podem fornecer uma melhor estimativa da fertilidade. Para avaliar a integridade da membrana plasmática foi utilizada, em diversos trabalhos com sucesso a associação de sondas fluorescentes como Iodeto de Propídeo (IP) e Diacetato de Carboxifluoresceína (CFDA). O CASA (sistema informatizado para análise de sêmen) oferece informações precisas do movimento individual de cada célula bem como as subpopulações de células espermáticas realizando um desenho para cada espermatozóide com a finalidade de representar a sua trajetória real. A presente revisão de literatura tem o objetivo de apresentar informações relativas ao efeito de meios diluentes sobre a viabilidade de sêmen congelado bovino (Bos taurus indicus).

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO_HUBERSON_FINAL.pdf: 232987 bytes, checksum: 845a7b338d4388c6a546aefabcc59018 (MD5) Previous issue date: 2010-06-21 / For the economy, the Brazilian industry of cattle is a very important activity because it is one area that gives the possibility of having a very big potential in terms of growth. Having this in mind, it can conclude that the artificial insemination is probably one of the most important way for contributing with the advancement of the modern animal techniques used for the production, however, it requires the use of the frozen semen for this realization. During the cryopreservation process, a decrease in the number of sperm viability happens because of the osmotic effects, temperature, and morphological changes that occur because of the organization changes, fluidity, permeability and the lipid composition of sperm membranes. The interaction presents between sperm cells and the thinner represents a crucial factor to preserve the integrity and the fertilizing ability. The thinner has as main objective to protect the sperm cells during the cold shock, and also in the freezing and thawing. Conventional parameters used in the sperm evaluation have showed that they are limited in their ability of predicting the semen potential fertility, and then tests that have different characteristics of the sperm and evaluation of many attributes can provide a better fertility estimate. To evaluate the integrity of the plasmatic membrane, it was successfully utilized one combination of fluorescent probe (IP that means propidium iodide and CFDA that means carboxyfluorescein diacetate). The system CASA (one computer program that analyzes the semen) provides real information about the individual cell movement and also the subpopulations of sperm cells realizing draw for each sperm that has as objective to represent the real path. This review has the objective of presenting the relevant information to the effect of thinners in the frozen ox semen (Bos taurus indicus). / A pecuária brasileira é uma atividade de grande importância para a economia do país por se destacar pelo seu elevado potencial e possibilidade de crescimento. Neste sentido, a inseminação artificial é um dos instrumentos mais importantes para contribuir no avanço das modernas técnicas de produção animal, entretanto, para sua realização é necessário o uso do sêmen congelado. Durante o processo de criopreservação, ocorre diminuição da viabilidade espermática devido aos efeitos osmóticos, temperatura e alterações morfológicas que ocorrem por mudanças na organização, fluidez, permeabilidade e composição lipídica das membranas espermáticas. A interação entre as células espermáticas e o meio diluidor representa um fator crucial para a preservação da integridade espermática e habilidade de fecundação. O meio diluente tem como finalidade proteger a célula espermática durante o choque térmico, na congelação e descongelação. Parâmetros convencionais utilizados na avaliação espermática têm se mostrado limitados quanto à capacidade de predizer o potencial de fertilidade do sêmen, assim testes que mensuram diferentes características do espermatozóide e avaliação de vários atributos podem fornecer uma melhor estimativa da fertilidade. Para avaliar a integridade da membrana plasmática foi utilizada, em diversos trabalhos com sucesso a associação de sondas fluorescentes como Iodeto de Propídeo (IP) e Diacetato de Carboxifluoresceína (CFDA). O CASA (sistema informatizado para análise de sêmen) oferece informações precisas do movimento individual de cada célula bem como as subpopulações de células espermáticas realizando um desenho para cada espermatozóide com a finalidade de representar a sua trajetória real. A presente revisão de literatura tem o objetivo de apresentar informações relativas ao efeito de meios diluentes sobre a viabilidade de sêmen congelado bovino (Bos taurus indicus).

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-02-03T21:24:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EfeitoUtilizacaoOleo.pdf: 677559 bytes, checksum: e04f4f441ff43ab8d6994adcf0344776 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-04T12:17:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EfeitoUtilizacaoOleo.pdf: 677559 bytes, checksum: e04f4f441ff43ab8d6994adcf0344776 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-04T12:17:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_EfeitoUtilizacaoOleo.pdf: 677559 bytes, checksum: e04f4f441ff43ab8d6994adcf0344776 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da incorporação de óleo de palma sobre os níveis lipídicos séricos e a qualidade espermática de touros bubalinos. O trabalho foi desenvolvido na Embrapa Amazônia Oriental, com 12 touros bubalinos previamente selecionados, com idade média de 3,47 ± 0,92 anos e peso inicial de 456,8 ± 50,4 kg. Os touros foram confinados e divididos em dois grupos, de acordo com a raça, idade e a alimentação recebida. A alimentação (milho triturado, farelo de trigo e silagem de milho; proporção volumoso/concentrado de 50%) em cocho coletivo. O Grupo CONT recebeu dieta sem adição de óleo de palma e o Grupo ÓLEO recebeu dieta com adição de 2% de óleo de palma sobre a MS. Foram realizadas as análises bromatológica e de perfil de ácidos graxos dos alimentos. Foram investigados o perfil lipídico sérico, os aspectos físicos e morfológicos do sêmen in natura e as relações entre eles. A análise estatística contemplou a análise de variância (Anova), a comparação de médias pelo teste de Tukey, além das correlações de Pearson (P<0,05). O Grupo ÓLEO teve consumo 71,23% superior de ácidos graxos saturados e 55,40% superior de ácidos graxos insaturados em relação ao Grupo CONT. Efeitos significativos em relação aos grupos, para os parâmetros séricos, foram observados para triglicerídeos, colesterol, HDL e lipídeos totais, com valores maiores para o Grupo ÓLEO e, efeitos significativos em relação a período para colesterol, LDL, VLDL e lipídeos totais (P<0,05). Com relação aos parâmetros seminais, houve significativa redução em turbilhonamento e integridade de membrana plasmática, e redução da concentração seminal em função do período para o Grupo ÓLEO. Houve correlação significativa entre as variáveis: triglicerídeos e defeitos menores (r=-0.412; P=0,006), LDL e defeitos totais (r=-0,333; P=0,030), VLDL e viabilidade espermática (r=0,381; P=0,012), lipídeos totais e defeitos menores (r=-0.366; P= 0,017), e lipídeos totais e defeitos totais (r=-0,309; P= 0,046). Apesar de haver relação entre maiores níveis de lipídeos séricos e melhor morfologia espermática e do uso do óleo de palma não reduzir a qualidade do sêmen in natura a níveis abaixo dos fisiológicos, seu uso a 2% na dieta não favoreceu efetivamente os parâmetros relacionados com elevação da qualidade seminal e potencial fertilidade dos touros. / The objective of this study was to evaluate the effect of incorporation of palm oil on serum lipid levels and sperm quality of buffalo bulls, since research about palm oil seed for reproductive purposes are scarce. The study was conducted at Embrapa Eastern Amazon, and used 12 pre-selected buffalo bulls, with a mean age of 3.47 ± 0.92 years and weight of 456.8 ± 50.4 kg. The bulls were fed and divided into two groups according to diet received. Diets were isoproteic (cracked corn, wheat bran and corn silage; proportion roughage / concentrate 50%) and were offered in collective pens. Animals of CONT Group (n = 5) received a control diet and OIL Group (n = 7) received the same diet with addition of 2% of palm oil on the DM. Analyses were performed using chemical and fatty acid profile of foods. Serum lipid profile, physical and morphological features of raw semen were investigated, including the relations between them. Statistical analysis included analysis of variance (ANOVA), comparison of means by Tukey test and Pearson correlations (P <0.05). Increased lipid consumption was noted related to saturated fat acids (71.23%) and unsaturated fat acids (55.40%) in OIL Group. Significant effects for serum parameters were observed for triglycerides, cholesterol, HDL and total lipids, with higher values for the OIL Group, and significant effects over time for cholesterol, LDL, VLDL and total lipids (P <0.05). Regarding to semen parameters, there was a significant reduction in gross motility and integrity of plasmatic membrane, and reduced seminal concentration on the period for the OIL Group. There was significant correlation between the variables: triglycerides and minor defects (r = -0412, P = 0.006), LDL and total defects (r = -0.333, P = 0.030), VLDL and viability (r = 0.381, P = 0.012), total lipids and minor defects (r = -0366, P = 0.017), and total lipids and total defects (r = -0.309, P = 0.046). Although an observed relationship between higher levels of serum lipids and better sperm morphology, and no reduction of fresh semen quality by palm oil addition below the physiological levels, the use of 2% of palm oil in the diet did not improve effectively the parameters related to semen quality and bulls fertility.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-05-15T11:33:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MorfologiaEpidimariaCaititus.pdf: 2391119 bytes, checksum: 78e310d4a4b4a070a932332aad609056 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-05-16T17:51:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MorfologiaEpidimariaCaititus.pdf: 2391119 bytes, checksum: 78e310d4a4b4a070a932332aad609056 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T17:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MorfologiaEpidimariaCaititus.pdf: 2391119 bytes, checksum: 78e310d4a4b4a070a932332aad609056 (MD5) Previous issue date: 2015-05-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho visou estudar os aspectos histológicos epidídimo de caititus (Pecari tajacu) e as patologias espermáticas associadas às diferentes regiões desse órgão. Fato que contribuirá para o melhor entendimento da biologia reprodutiva da espécie, e consequentemente para a sua conservação. Foram utilizados oito animais adultos, na faixa etária de dois a quatro anos, procedentes do criatório de pesquisas científicas da Embrapa-Amazônia Oriental, localizado em Belém, Pará, Brasil. Cada uma das quatro partes do epidídimo (cabeça proximal, cabeça distal, corpo e cauda) foi dividida em duas porções, sendo que uma das porções foi macerada, enquanto a outra permaneceu intacta. A cauda do epidídimo foi submetida à técnica de fluxo retrógado. As amostras celulares foram armazenadas em formol salino, sendo utilizadas posteriormente para a análise de morfologia espermática. As amostras do órgão foram embaladas em gaze, identificadas e fixadas em ALFAC. Posteriormente, foram submetidas ao processamento histológico de rotina. Foram mensurados os diâmetros de até 20 túbulos e as alturas do epitélio de até 30 túbulos, de cada região do epidídimo, por animal. O teste ANOVA (One Way), apontou diferenças entre o diâmetro do túbulo da cabeça proximal e da cabeça distal (p=0,0008); entre a cabeça proximal e o corpo (p=0,0009); entre a cabeça proximal e a cauda (p=0,0002). Não houve diferenças significativas (p>0,05) entre as demais partes do epidídimo. Foi verificado que a cabeça proximal apresenta a média de diâmetro dos túbulos menor em relação às demais porções do epidídimo. O teste de Newman Keuls apontou semelhanças entre a média da altura do epitélio do corpo e da cauda (p=0,551). Todavia, foram observadas diferenças significativas entre a cabeça distal e a cabeça proximal (p=0,0009); a cabeça distal e a cauda (p=0,0055); cabeça distal e corpo (p=0,0021); cabeça proximal e corpo (p=0,0008); cabeça proximal e cauda (p = 0,0055). Em todas as regiões do epidídimo de caititu, foi observada a presença de epitélio pseudoestratificado colunar com estereocílios. Foram observadas 13 tipos diferentes de alterações morfológicas, sendo que espermatozoides subdesenvolvidos e cabeças soltas foram as mais frequentes ao longo do epidídimo de caititus. Não foram observadas diferenças em relação ao número de patologias nas diferentes regiões do epidídimo, (teste de Man-Whitney) (cabeça proximal: U=19,500; p=0,189; cabeça distal: U= 31,500; p=0,958; corpo: U=27,000; p=0,599 e cauda: U=20,00; p=0,207). Em muitas espécies as análises histopatológicas são frequentemente estudadas, todavia em animais silvestres, como o caititu, ainda são pouco pesquisadas. Dessa forma, os dados deste trabalho são pioneiros, e servirão como base para futuras pesquisas comparativas sobre a biologia reprodutiva dos artiodátilos, contribuindo para a sua conservação e produção. / This work aimed to study the histology of epididymis peccaries (Pecari tajacu) and sperm pathologies associated with different regions of the organ. A fact that will contribute to a better understanding of the reproductive biology of the species, and consequently for their conservation. Eight adult animals were used, aged two to four years, coming from breeding scientific research of Embrapa Amazônia Oriental, located in Belém, Pará, Brazil. Each of the four parts of the epididymis (proximal the head and distal the head, body and tail) was divided into two portions, and one of the portions was macerated, while the other remained intact. The epididymal tail underwent retrograde flow technique. The cell samples were stored in formol saline, and then used for the analysis of sperm morphology. Samples of the body were wrapped in gauze, identified and fixed in ALFAC. Later, they were submitted to routine histological processing. Diameters were measured up to 20 tubules and the heights of up to 30 tubules epithelium, the epididymis of each region for each animal. ANOVA (One Way), pointed out differences between the diameter of the proximal tubule of the head and distal head (p = 0.0008); between the proximal head and the body (p = 0.0009); between the proximal head and the tail (p = 0.0002). There were no significant differences (p> 0.05) among the other parts of the epididymis. It was found that the proximal head has a diameter of less tubules average compared to other portions of the epididymis. The Newman Keuls test showed similarities between the average body epithelium height and tail (p = 0.551). However, significant differences were observed between the distal head and the proximal head (p = 0.0009); the distal head and the tail (p = 0.0055); distal head and body (p = 0.0021); proximal head and body (p = 0.0008); proximal head and tail (p = 0.0055). In all regions of the epididymis of peccary, it observed the presence of pseudostratified columnar epithelium with stereocilia. 13 different types of morphological changes were found, and underdeveloped sperm and loose heads were the most frequent along the epididymis of peccaries. There were no differences in the number of pathologies in different regions of the epididymis (Man-Whitney test) (proximal head: U = 19.500, p = 0.189; distal head: U = 31.500, p = 0.958; body: U = 27,000; p = 0.599 and tail: U = 20.000, p = 0.207). In many species the histopathological analysis are often studied, however in wild animals, such as peccary, are still poorly researched. Thus, this study data are pioneers, and will serve as a basis for future comparative research on the reproductive biology of artiodactyls, contributing to their conservation and production.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pre textuais aline franca.pdf: 261338 bytes, checksum: 26489ba3dd2eb948a58b73b531aee0b2 (MD5) Previous issue date: 2010-10-05 / The evaluation of the reproductive capacity of stallions and semen cooled and / or frozen is of fundamental importance in practical breeding of horses. Whereas predicting the fertility of a stallion is still a subjective decision, the present study was conducted to evaluate different staining techniques, as well as tests that assess the viability of semen in horses, studying the effects of the addition of cysteine and glutathione in plasma membrane integrity of sperm DNA, and to evaluate the effects of the addition of these antioxidants in preserving the viability of sperm undergoing incubation and refrigerated for short periods. We used semen from six stallions, wich were split into seven samples, one kept as control (Control Group) and other antioxidants cysteine was added at a ratio of 1.0 mM (Group C1, 0), 1.5 mM (Group C1, 5), 2.5 mM (Group C 2.5) and glutathione also at 1.0 mM (Group G1, 0), 1.5 mM (Group G1, 5) and 2.5 mM (Group G 2.5 ). All tests were performed every six hours. The three treatments were: Treatment I cooled to 12 &#8304;C for 12 hours (zero hour; 6h resf.; 12h resf.) Chilled in boxes; Treatment II incubated in a water bath at 37 &#8304;C for 12 hours (6h 37 ° C, 12h 37 ° C) and Treatment III - cooled and subsequently incubated, according to the treatments I and II. The evaluation of plasma membrane integrity was performed by staining eosine-nigrosin; acrosomal membrane by FITC-PSA and DNA by acridine orange. For each analysis were numbered 200 to 500 cells. The evaluation of the viability of sperm was performed by MTT assay according to Mosmann (1983). The results showed that antioxidants were effective (p <0.05) in keeping the DNA intact chromatin, especially glutathione. In the acrosome of antioxidants were protective, at times 18 and 24 hours, and in other treatments, no significant difference (p> 0.05) between control and treated groups. The MTT test showed that groups treated with antioxidants had absorbance values similar to those of control, showing positive effect (p <0.05) only when cooled by six o'clock in the cysteine group 2.5. In relation to the plasma membrane of spermatozoa stained with eosin-nigrosin, no protective effect of antioxidants in the samples. The values of their averages were close to the control group (p> 0.05). One factor was estimated that cooling per se, independent of the addition of antioxidants used, has been effective in protecting the sperm. And the incubation at 37 &#8304; C causes these cells, and the addition of cysteine and glutathione were efficient, if not protect, but to maintain the integrity of the factors evaluated, not causing more damage to sperm. / A avaliação da eficácia reprodutiva do garanhão e do sêmen resfriado e&#8260;ou congelado é de fundamental importância na prática reprodutiva dos eqüinos. Predizer a fertilidade de um garanhão constitui uma decisão subjetiva. O presente estudo foi realizado com o objetivo de testar diferentes técnicas de coloração, assim como testes que avaliem a viabilidade do sêmen de eqüinos, estudando os efeitos da adição de cisteína e glutationa na integridade da membrana plasmática, do DNA espermático, além de avaliar os efeitos da adição desses antioxidantes na preservação da viabilidade dos espermatozóides submetidos à incubação e refrigeração por curtos períodos. Foi utilizado sêmen de seis garanhões, que foram fracionados em sete amostras, sendo uma mantida como controle (Grupo Controle) e às outras foi adicionado os antioxidantes cisteína, na proporção de 1,0mM (Grupo C1,0); 1,5mM (Grupo C1,5); 2,5mM (Grupo C 2,5) e glutationa também na proporção de 1,0mM (Grupo G1,0); 1,5mM (Grupo G1,5) e 2,5mM (Grupo G 2,5). Todas as análises foram realizadas a cada seis horas. Os três tratamentos foram: Tratamento I resfriado a 12 °C, por 12 horas (zero hora; 6h resf.; 12h resf.), em caixas refrigeradas; Tratamento II incubado em banho-maria a 37 °C, por 12 horas (6h 37° C; 12h 37° C) e Tratamento III resfriado e posteriormente incubado, conforme os Tratamentos I e II. A avaliação da integridade da membrana plasmática foi feita pela coloração eosina-nigrosina; da membrana acrossomal pelo FITC-PSA e do DNA pela laranja de acridina. A avaliação da viabilidade do sêmen foi realizada pelo ensaio do MTT, de acordo com Mosmann(1983). Os resultados obtidos mostraram que os antioxidantes foram eficientes (p<0,05) em manter a cromatina do DNA intacta, especialmente a glutationa. Na membrana acrossomal houve proteção dos antioxidantes, nos momentos 18 e 24 horas, sendo que nos demais tratamentos, não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos tratados e o grupo controle. O teste do MTT mostrou que os grupos tratados com antioxidantes tiveram valores de absorbância próximos aos do controle, mostrando efeito positivo (p<0,05) apenas quando resfriados por seis horas, no grupo cisteína 2,5. Em relação à membrana plasmática dos espermatozóides, corados por eosina-nigrosina, não houve efeito protetor dos antioxidantes nas amostras avaliadas. Um fator avaliado foi que o resfriamento, por si só, independente da adição dos antioxidantes utilizados, já foi eficaz em proteger os espermatozóides. E a incubação a 37&#8304; C causa danos a essas células, e a adição de cisteína e glutationa foi eficiente em, senão proteger, mas manter a integridade dos fatores avaliados, não causando mais danos aos espermatozóides.