Orientador: Wilma de Grava Kempinas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T09:29:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandez_CarlaDalBianco_M.pdf: 4031573 bytes, checksum: 22cce9ddde55fbd43e3ae5addb295ff4 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O epidídimo é um órgão do sistema reprodutor masculino, onde os espermatozóides passam pelo processo de maturação, adquirindo motilidade e capacidade fértil. O tempo de trânsito espermático pelo epidídimo (número de dias necessários para os espermatozóides serem transportados pelo órgão) parece ter um papel importante na maturação dos espermatozóides, e uma alteração desse tempo pode prejudicar o processo. Trabalhos da literatura mostram que a exposição de ratos machos a substâncias estrogênicas, como o dietilestilbestrol (DES), afeta o trato reprodutor masculino e provoca uma aceleração do tempo de trânsito dos espermatozóides pelo epidídimo, comprometendo a fertilidade nestes animais. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência da alteração do tempo de trânsito dos espermatozóides no epidídimo sobre parâmetros espermáticos e fertilidade em ratos, bem como o papel da testosterona nestas alterações. Para tanto, dois modelos experimentais foram utilizados: o DES foi administrado para acelerar o tempo de trânsito espermático nos ratos, e a guanetidina, para retardá-lo, através da simpatectomia química na genitália interna masculina. Ratos machos adultos, da variedade Sprague-Dawley, foram divididos em quatro grupos experimentais: 1) tratado com injeções subcutâneas de dietilestilbestrol (DES), diluído em óleo de milho, na dose de 10µg/rato/dia, durante 12 dias; 2) tratado com injeções intraperitoneais de sulfato de guanetidina, dissolvido em solução salina, na dose de 6,25mg/kg/dia, por 12 dias; 3) mesmo tratamento do grupo 1, mais um suplemento androgênico, através de implantes de cápsulas siliconizadas e preenchidas com testosterona; 4) grupo controle, que recebeu as soluções veículo. O tratamento com guanetidina retardou o tempo de trânsito espermático na cauda do epidídimo, aumentando, assim as reservas de espermatozóides nessa região. Por outro lado, a exposição ao DES acelerou o trânsito espermático no epidídimo, diminuindo o número de espermatozóides na cabeça-corpo e na cauda, e reduziu a motilidade dos espermatozóides. Em ambos os casos, a produção espermática não foi alterada. A reposição de testosterona restaurou o tempo de trânsito espermático a valores próximos da normalidade, uma vez que foram maiores que o do controle. A reposição de testosterona também corrigiu a alteração na motilidade dos espermatozóides. Os animais expostos ao DES apresentaram uma tendência de prejuízo da fertilidade após o procedimento de inseminação artificial in utero, utilizando espermatozóides colhidos da região proximal da cauda do epidídimo. Assim, concluiu-se que a aceleração do tempo de trânsito espermático no epidídimo pareceu prejudicar a maturação normal dos espermatozóides nos ratos, diminuindo a qualidade espermática e a capacidade fértil, de maneira andrógeno-dependente / Abstract: The epididymis is an organ of the male reproductive system where sperm undergoes the maturation process, acquiring motility and fertility capacity. The epididymal sperm transit time (number of days necessary for the sperm to be transported through the organ) seems to have an important role in sperm maturation, and it seems that an alteration of the duration of this transit can harm the process. Data from the literature show that the exposure of male rats to estrogenic substances, such as diethylstilbestrol (DES), affects the male reproductive system and provokes an acceleration of sperm transit in the epididymis, damaging the fertility of the animals. The aim of present work was to evaluate the influence of altered sperm transit time through the epididymis on sperm parameters and fertility of rats, as well as the role of testosterone in the alterations. For this, two experimental models were used: DES was administered to the rats to accelerate the sperm transit time, and guanethidine, to delay it, through a selective chemical sympathectomy of the male internal organs. Sprague- Dawley adult male rats were divided into four experimental groups: 1) treated with sc injections of DES, for 12 days, 10µg/rat/day, dissolved in corn oil; 2) treated with guanethidine sulfate via ip injections, for 12 days, at the dose of 6.25mg/kg/day, dissolved in saline solution; 3) same treatment as group 1, plus androgen supplementation, using testosterone-filled subcutaneous implants; 4) control animals received the vehicles. Guanethidine treatment delayed the sperm transit time through the epididymal cauda, provoking an increase in the sperm reserves in this region. On the other hand, exposure to DES accelerated the sperm transit time in the epididymis, decreasing the sperm density in both epididymal regions, the caput-corpus and cauda, and diminishing sperm motility. In both cases sperm production was not altered. Testosterone supplementation was able to restore the transit time to values close to normality, since they were higher than in the control rats. The same occurred in relation to sperm motility. Rats exposed to DES presented a trend toward lower fertility after in utero artificial insemination using sperm collected from the proximal cauda epididymidis. Thus, it was concluded that the acceleration of sperm transit time seemed to harm the normal sperm maturation in the rat, decreasing / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

INTRODUÇÃO: A Região Metropolitana de São Paulo é a mais populosa do Brasil. A grande frota veicular contribui para uma maior concentração de poluentes atmosféricos. Diversos poluentes podem interferir na fertilidade humana, alterando os principais parâmetros seminais. Este estudo teve como objetivo avaliar a influência dos níveis atuais de poluição atmosférica de origem veicular nos parâmetros seminais em controladores de tráfego. MÉTODOS: Foram realizadas anamnese e avaliação clínica urológica (volume testicular, presença de varicocele, criptorquidia, má formações) em 62 controladores de tráfego da CET (grupo exposto) e 210 homens comprovadamente férteis do grupo de pré-vasectomia do ambulatório da urologia do HC-FMUSP (grupo controle). Os parâmetros seminais avaliados foram concentração, motilidade (quantitativa e qualitativa), morfologia pelos critérios da OMS e critério estrito de Kruger, teste para detecção de leucócitos e testes de função espermática, CK, ROS e anticorpo anti-espermatozóide. Parâmetros hormonais também foram avaliados. Avaliação de exposição à poluição foi realizada através da dispersão de poluentes registrado pela Cetesb, gerada pelo software SURFER 8.0. RESULTADOS: Os controladores de tráfego apresentaram volume testicular maior em relação ao grupo pré-vasectomia (p<0,001). Quanto aos níveis de Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) e Testosterona total (p=0,365), ambos os grupos apresentaram valores dentro da normalidade. A concentração espermática apresentou-se homogênea nos grupos (p= 0,395); os controladores de tráfego apresentaram média de 124,9 x 106/ml e os pré-vasectomia 110,1 x 106/ml. Os controladores de tráfego apresentaram motilidade quantitativa (total) reduzida (60%) em relação aos prévasectomia (65%) (p= 0,047). A motilidade qualitativa (progressiva) também se apresentou diminuída no grupo exposto (p<0,001). As morfologias espermáticas tanto pelo critério da OMS (grupo exposto = 12%; grupo controle = 20%), quanto pelo critério estrito de Kruger (grupo exposto = 3%; grupo controle = 6%) estavam significativamente diminuídas no grupo exposto em relação ao controle (p<0,001). O marcador de maturidade Creatina Quinase apresentou-se dentro da normalidade em ambos os grupos, porém maior no grupo controle (p<0,001). Anticorpos anti-espermatozóides estavam elevados nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,382). Radicais livres de oxigênio apresentaram-se em altas concentrações nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,141). CONCLUSÕES: A análise dos dados obtidos nessa pesquisa sugere que a poluição atmosférica exerce uma influência negativa sobre os parâmetros seminais motilidade e morfologia. Causa elevação dos níveis de ROS em todos os indivíduos, indicando perda da função espermática. Ainda demonstrou-se a elevação em todos os indivíduos dos níveis de anticorpos anti-espermatozóides, sugerindo que os poluentes teriam transposto a barreira hemato-testicular. O volume testicular do grupo exposto à poluição veicular apresentar-se maior em relação ao volume testicular do grupo controle nos leva a supor que isto se deva a uma reação inflamatória aos agentes poluidores. Apesar da diferença significativa na concentração de poluentes entre os grupos, uma correlação direta com parâmetros seminais não pôde ser demonstrada / Metropolitan Region of Sao Paulo is the most populous of Brazil. The huge number of vehicles contributes for a higher concentration of air pollutants. Various pollutants can interfere in human fertility, altering the main seminal parameters. The aim of this study was to evaluate the influence of air pollution of vehicular origin on seminal parameters of traffic controllers. Clinical history and urological evaluation (testicular volume, presence of varicocele, cryptorchidism, bad formations) were carried out in 62 traffic controllers (exposed group) and 210 proven fertile men from the pre-vasectomy group of urologic clinic at Hospital of Clinics University of Sao Paulo (control group). Seminal parameters evaluated were concentration, motility (quantitative and qualitative), morphology by WHO´s criteria and Kruger´s strict criteria, test for detection of leukocytes and tests of sperm function, CK, ROS and antisperm antibody. Hormonal parameters also were evaluated. Exposition to air pollution was analyzed through the dispersion of pollutants recorded by Cetesb, generated in the software SURFER 8.0. Traffic controllers presented bigger testicular volume than prevasectomy group (p<0,001). Hormonal levels were at normal range in both groups; Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) and Total Testosterone (p=0,365). Sperm concentration was homogeneous in both groups (p= 0,395); traffic controllers presented mean of 124.9x106/ml and pre vasectomy group 110.1x106/ml. The exposed group presented quantitative (total) motility (60%) diminished than control group (65%) (p=0,047). The qualitative (progressive) motility was also diminished in the exposed group (p <0,001). The sperm morphologies as by WHO´s criteria (exposed group = 12%; control group = 20%), as by Kruger´s strict criteria (exposed group = 3%; control group = 6%) were significantly diminished in the exposed group (p<0,001). The sperm maturity marker Creatine Kinase was at normal range at both groups, but higher in the control one (p<0,001). Antisperm antibodies was elevated in both groups, however it was not significant (p=0,382). ROS presented higher concentrations in both groups, however it was not significant (p=0,141). The facts presented in this study suggest that air pollution exercises negative effects on the seminal parameters motility and morphology. It causes elevation of ROS levels in all individuals, indicating loss of sperm function. It also showed, elevation of antisperm antibodies levels, suggesting that pollutants would have transposed the blood-testis barrier. The testicular volume in the exposed group was higher than the testicular volume of the control group; we can suppose that it must occur due to an inflammatory reaction against the polluting agents. Although the significant difference in pollutants concentrations between groups, no direct correlation to seminal parameters could be demonstrated

Objetivo: Avaliar a função das células testiculares de Sertoli em homens com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: Trinta e quatro pacientes consecutivos foram prospectivamente selecionados para avaliar a função das células testiculares de Sertoli pelos níveis séricos da inibina B. Características clínicas, tratamento, análises dos espermatozóides, avaliação urológica, ultrasonografia testicular, hormônios e anticorpos anti-espermatozóides foram avaliados. Resultados: Os pacientes foram subdivididos em dois grupos: níveis séricos reduzidos (Grupo 1, n=8) e níveis séricos normais (Grupo 2, n=26) de inibina B. As medianas da concentração média de espermatozóides (p=0,024), da contagem total de espermatozóides (p=0,023) e da contagem total de espermatozóides móveis (p=0,025) foram menores no Grupo 1. Os níveis de inibina B foram positivamente correlacionados com a concentração de espermatozóides (r=0,343) e contagem total de espermatozóides móveis (r=0,357), e negativamente correlacionados com FSH (r=0,699) e LH (r=0,397). A mediana de inibina B sérica foi menor nos pacientes com LES tratados com pulsoterapia com ciclofosfamida endovenosa (CICIV) comparada aos não tratados com este medicamento (p=0,031). Avaliação dos 26 pacientes com LES e níveis normais de inibina B e FSH revelou que a mediana da relação inibina B/FSH foi menor nos pacientes lúpicos com oligozoospermia comparada aos pacientes com normozoospermia (p=0,004). Esta relação também foi menor nos pacientes com LES tratados com CICIV do que naqueles sem esta terapia (p=0,04). Conclusão: Este é o primeiro estudo que identificou uma alta freqüência de disfunção das células testiculares de Sertoli em homens com LES associada a anormalidades dos espermatozóides. Outros estudos prospectivos são necessários para determinar se os níveis séricos de inibina e a relação inibina B/FSH serão um marcador útil e precoce de toxicidade pela CICIV neste pacientes / Objective: To assess the testicular Sertoli cell function in male SLE patients. Methods: 34 consecutive patients were prospectively selected to evaluate the testicular Sertoli cell function by serum inhibin B levels. Clinical features, treatment, semen analysis, urologic evaluation, testicular ultrasound, hormones, and antisperm antibodies were determined. Results: Patients were subdivided into two Groups: low serum inhibin B (Group 1, n=8) and normal levels (Group 2, n=26). The medians of sperm concentration (p=0.024), total sperm count (p=0.023) and total motile sperm count (p=0.025) were lower in Group 1. Inhibin B levels were positively correlated with sperm concentration (r=0.343), total motile sperm count (r=0.357), and negatively correlated with FSH (r=0.699) and LH (r=0.397). The median serum inhibin B was lower in SLE patients treated with intravenous cyclophosphamide pulsetherapy (IVCYC) compared to those without this therapy (p=0.031). Further evaluation of the 26 SLE patients with normal inhibin B and FSH levels revealed that medians of inhibin B/FSH ratio were lower in SLE patients with oligozoospermia compared to normozoospermia (p=0.004). This ratio was also lower in SLE patients treated with IVCYC than those without this therapy (p=0.04). Conclusions: This is the first study to identify a high frequency of testicular Sertoli cell dysfunction in male SLE associated with sperm abnormalities. Further prospective studies are necessary to determine if inhibin levels and inhibin B/FSH ratio will be an earlier and useful marker of IVCYC toxicity in these patients

Objetivo: Avaliar a função das células testiculares de Sertoli em homens com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: Trinta e quatro pacientes consecutivos foram prospectivamente selecionados para avaliar a função das células testiculares de Sertoli pelos níveis séricos da inibina B. Características clínicas, tratamento, análises dos espermatozóides, avaliação urológica, ultrasonografia testicular, hormônios e anticorpos anti-espermatozóides foram avaliados. Resultados: Os pacientes foram subdivididos em dois grupos: níveis séricos reduzidos (Grupo 1, n=8) e níveis séricos normais (Grupo 2, n=26) de inibina B. As medianas da concentração média de espermatozóides (p=0,024), da contagem total de espermatozóides (p=0,023) e da contagem total de espermatozóides móveis (p=0,025) foram menores no Grupo 1. Os níveis de inibina B foram positivamente correlacionados com a concentração de espermatozóides (r=0,343) e contagem total de espermatozóides móveis (r=0,357), e negativamente correlacionados com FSH (r=0,699) e LH (r=0,397). A mediana de inibina B sérica foi menor nos pacientes com LES tratados com pulsoterapia com ciclofosfamida endovenosa (CICIV) comparada aos não tratados com este medicamento (p=0,031). Avaliação dos 26 pacientes com LES e níveis normais de inibina B e FSH revelou que a mediana da relação inibina B/FSH foi menor nos pacientes lúpicos com oligozoospermia comparada aos pacientes com normozoospermia (p=0,004). Esta relação também foi menor nos pacientes com LES tratados com CICIV do que naqueles sem esta terapia (p=0,04). Conclusão: Este é o primeiro estudo que identificou uma alta freqüência de disfunção das células testiculares de Sertoli em homens com LES associada a anormalidades dos espermatozóides. Outros estudos prospectivos são necessários para determinar se os níveis séricos de inibina e a relação inibina B/FSH serão um marcador útil e precoce de toxicidade pela CICIV neste pacientes / Objective: To assess the testicular Sertoli cell function in male SLE patients. Methods: 34 consecutive patients were prospectively selected to evaluate the testicular Sertoli cell function by serum inhibin B levels. Clinical features, treatment, semen analysis, urologic evaluation, testicular ultrasound, hormones, and antisperm antibodies were determined. Results: Patients were subdivided into two Groups: low serum inhibin B (Group 1, n=8) and normal levels (Group 2, n=26). The medians of sperm concentration (p=0.024), total sperm count (p=0.023) and total motile sperm count (p=0.025) were lower in Group 1. Inhibin B levels were positively correlated with sperm concentration (r=0.343), total motile sperm count (r=0.357), and negatively correlated with FSH (r=0.699) and LH (r=0.397). The median serum inhibin B was lower in SLE patients treated with intravenous cyclophosphamide pulsetherapy (IVCYC) compared to those without this therapy (p=0.031). Further evaluation of the 26 SLE patients with normal inhibin B and FSH levels revealed that medians of inhibin B/FSH ratio were lower in SLE patients with oligozoospermia compared to normozoospermia (p=0.004). This ratio was also lower in SLE patients treated with IVCYC than those without this therapy (p=0.04). Conclusions: This is the first study to identify a high frequency of testicular Sertoli cell dysfunction in male SLE associated with sperm abnormalities. Further prospective studies are necessary to determine if inhibin levels and inhibin B/FSH ratio will be an earlier and useful marker of IVCYC toxicity in these patients

Resumo: O experimento foi realizado em uma suinocultura de produção comercial da linhagem Topigs, utilizando dez machos reprodutores, com o objetivo de avaliar o efeito das suplementações intramusculares com vitaminas e minerais (Selen- Fos® e Zimag®) na qualidade espermática do sêmen in natura e após a congelação. Foram realizadas duas análises estatísticas: Multivariada para descrição das alterações observadas; ANOVA utilizando o modelo inteiramente casualizado. As variáveis seminais analisadas foram: volume, concentração, turbilhonamento, motilidade, vigor, porcentagem de espermatozóides vivos, mortos, e vivos sem acrossomo, morfologia e integridade da membrana (Teste hiposmótico). O experimento foi dividido em duas fases. Na primeira fase o sêmen in natura dos 10 cachaços foi avaliado e posteriormente congelado. Uma vez terminada esta fase iniciou-se a segunda fase onde sete animais receberam as suplementações com vitaminas e minerais via intravenosa e três permaneceram sem recebê-las. Após um período de 60 dias contados a partir do dia da administração das vitaminas e dos minerais se iniciaram novamente as coletas de sêmen e as avaliações tanto in natura como o descongelado. O sêmen in natura apresentou melhor qualidade espermática quando comparado com o sêmen descongelado e o sêmen dos cachaços que receberam as suplementações tiveram melhora (p 0,05) significativa na qualidade do sêmen e na criotolerância / Abstract: The experiment was conducted in a commercial swine production using ten boars of Topigs® line. The aim was to evaluate the effect of intramuscular supplementation of vitamins and minerals (Selen-Fos® and Zimag®) on fresh semen quality and after freezing. Two statistical analysis were used: multivariate description of the observed changes and ANOVA with randomized design. Analyzed seminal variables were: concentration, turbilhamento, motility, vigor, percentage of live sperm, dead and alive without acrosome, morphology and membrane integrity (HO). The experiment was divided into two phases. In the first phase, the fresh semen of 10 boars was evaluated and subsequently frozen. About three days after the freezing process, the semen was thawed and the quality was assessed. After this in the second phase, seven boars received intramuscular supplementation of minerals and vitamins and three boars received without the supplementation for control. About 60 days later, all these boars were submitted to semen collection and the semen was again evaluated both, fresh and thawed. The fresh semen showed better quality than the frozenthawed in the two phases of the experiment (p< 0,05). The semen of boars that received the supplementation had a significant improvement on semen quality and freezing resistant (p< 0,05) / Orientadora: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientadora: Maria Cristina Thomaz / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Mestre

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27 / Objetivos:Avaliar o efeito da varicocele na integridade do DNA nuclear,na atividade mitocondrial,na peroxidação lipídica e na integridade acrossômica dos espermatozóides.Métodos:as amostras foram obtidas e analisadas de acordo com os parâmetros da OMS(1999) e morfologia segundo critério estrito de Kruger.O grupo de estudo incluiu 30 homens com varicocele grauII ou III e o grupo controle incluiu 32 homens sem varicocele.A integridade do DNA nuclear dos espermatozóides foi avaliada pelo ensaio Cometa alcalino, e as células foram classificadas de acordo com a intensidade de dano no DNA:grau I(alta integridade do DNA),grau II(DNA ainda íntegro ou em início de fragmentação),grau III(DNA moderadamente fragmentado)e grau IV(DNA altamente fragmentado).A atividade mitocondrial foi avaliada pelo método colorimétrico proposto por Hrudka(1987),e as células foram classificadas em:classe I(mitocôndrias todas ativas),classe II (mais de 50 por cento de mitocôndrias ativas),classe III(menos de 50 por cento de mitocôndrias ativas)e classe IV(mitocôndrias todas inativas).A peroxidação lipídica foi determinada usando-se o método descrito por Ohkawa(1979),que se baseia na determinação de MDA devido à sua reação com o TBA, e o nível de peroxidação lipídica foi descrito em nanogramas de TBARS/mL de sêmen.A integridade do acrossoma foi avaliada através da sonda fluorescente PNA(Peannut Agglutinin)-FITC (Fluorescein isothiocyanite)conjugada, e o resultado foi expresso em porcentagem de espermatozóides com acrossoma íntegro.Resultados: quanto à integridade do DNA,o grupo de homens com varicocele apresentou uma menor porcentagem de espermatozóides com DNA nuclear íntegro(grau II, p=0,040).Não houve diferença na porcentagem de células grau I,III e IV.Quanto à atividade mitocondrial, o grupo de homens com varicocele apresentou uma porcentagem maior de espermatozóides com mitocôndrias inativas(classe III, p=0,020)e uma porcentagem menor de espermatozóides com mitocôndrias ativas(classe I, p=0,005).Não houve diferença na porcentagem de células classe II e IV.Quanto à integridade acrossômica, o grupo de homens com varicocele apresentou uma menor porcentagem de espermatozóides com acrossoma íntegro(p=0,0002).Por fim, com relação ao nível de peroxidação lipídica,não foi encontrada nenhuma diferença estatisticamente significante entre os grupos com e sem varicocele.Conclusões: Neste estudo, homens com varicocele apresentaram um aumento nas taxas de fragmentação de DNA e uma redução na atividade mitocondrial e na integridade acrossômica dos espermatozóides.Todavia, nenhuma diferença entre os níveis seminais de MDA foi encontrada, o que sugere que talvez as alterações funcionais encontradas não estejam associadas diretamente com o estresse oxidativo, ou que o estresse oxidativo leve a alterações no DNA, mitocôndrias e acrossoma durante a espermatogênese, e não após a ejaculação / Objectives: to assess the effect of varicocele on sperm nuclear DNA integrity, mitochondrial activity, lipid peroxidation and acrosome integrity. Methods: semen samples were obtained and analyzed according to the World Health Organization guidelines (1999) and sperm morphology was evaluated by Kruger’s strict criteria (1986). The study group included 30 men with varicocele grades II or III and the control group included 32 men without varicocele. Sperm nuclear DNA integrity was assessed by the alkaline Comet assay, and cells were graded according to the intensity of DNA damage: class I (high DNA integrity), class II (DNA still intact or initiating fragmentation), class III (DNA fairly fragmented) and class IV (DNA extremely fragmented). Mitochondrial activity was evaluated by the colorimetric method proposed by Hrudka (1987). Cells were classified according to the proportion of active mitochondria: class I (100% of active mitochondria), class II (more than 50% of active mitochondria), class III (less than 50% of active mitochondria) and class IV (100% of inactive mitochondria). Lipid peroxidation was determinated by Ohkawa’s method, which is based on the measurement of malondialdehyde (MDA) due to its reaction with thiobarbituric acid (TBA), and the levels of lipid peroxidation were described as nanograms of TBARS/mL. Acrosome integrity was assessed by use of the conjugated fluorescent probe PNA-FITC and the results were expressed in percentages of intact acrosomes (fluorescence was observed over the entire acrosomal region of the sperm head). Results: Concerning DNA integrity, the varicocele group showed less spermatozoa with intact nuclear DNA (grade II, p=0,040). There was no significant difference in classes I, III and IV between the two groups. Regarding mitochondrial activity the varicocele group showed more cells with inactive mitochondria (class III, p=0,001) and less cells with active mitochondria (class I, p=0,005). There was no difference in classes II and IV. Also, the varicocele group showed less spermatozoa with intact acrosomes (p=0,0002), when compared to the controls. Finally, no significant differences were observed in lipid peroxidation levels. Conclusions: This study was able to demonstrate that varicocele in adults is associated with increased DNA fragmentation, reduced mitochondrial activity and decreased acrosome integrity even when semen quality does not differ from men without varicocele. However, levels of seminal products of lipid degradation (MDA) are not increased in these patients, suggesting that perhaps the functional changes found are not directly associated with oxidative stress, or that oxidative stress leads to changes in DNA, acrosomes and mitochondria during spermatogenesis, and not after ejaculation. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:08:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toledo_FabiolaChoquetade_M.pdf: 1000398 bytes, checksum: 9cf86bfc7f87dcc8b95868615ad606b2 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Nos últimos anos vem aumentando o reconhecimento mundial sobre a relevância da nutrição como pilar básico para o desenvolvimento econômico e social. Em países em desenvolvimento como o Brasil, por exemplo, a desnutrição é um problema sócio-econômico causado pela má alimentação e pela baixa renda. O nascimento de crianças com baixo peso é reconhecido como um importante problema de saúde pública, com efeitos devastadores no desenvolvimento, na sobrevivência e na saúde humana. Milhares de crianças têm seu crescimento retardado pela má nutrição, no entanto poucos trabalhos relacionam a desnutrição protéica materna e o desenvolvimento do sistema reprodutor. Dessa forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar o impacto da desnutrição protéica in utero sobre parâmetros morfofuncionais do trato reprodutivo masculino em diferentes fases do desenvolvimento sexual: pré-puberal, peripuberal e adulta, assim como sobre a instalação da puberdade em filhotes fêmeas, utilizando o rato como modelo experimental. Para tanto, foram obtidas ratas prenhes e divididas em dois grupos experimentais: grupo que recebeu ração padrão (n=12, grupo RP, 17% de proteína) e grupo que recebeu ração hipoprotéica (n=16, grupo RH, 6% de proteína) durante toda a prenhez. Durante a lactação os dois grupos experimentais receberam ração padrão. No 20º dia gestacional, 10 ratas (grupo RP n=4, grupo RH n=6) foram sacrificadas procedendo-se em seguida a laparotomia para avaliação da performance reprodutiva das progenitoras. As demais ratas prenhes (grupo RP n=8, grupo RH, n=10) foram mantidas para permitir o nascimento e amamentação dos filhotes. A restrição protéica provocou redução do peso placentário, aumento do consumo de ração das progenitoras durante o início da gestação e redução deste consumo no final da gestação e início da lactação. No entanto, esta variação no consumo de ração não foi suficiente para compensar o efeito da dieta hipoprotéica sobre o organismo materno e fetal, uma vez que o ganho de peso das progenitoras durante a gestação e o peso dos filhotes nas diferentes fases do desenvolvimento apresentaram redução significativa. Os filhotes fêmeas do grupo RH tiveram aumento da distância anogenital, sugerindo um processo de masculinização do fenótipo feminino. Nos filhotes de ambos os sexos a restrição protéica in utero provocou atraso no início da puberdade. Nos filhotes machos a restrição protéica provocou redução do peso testicular na fase pré-puberal e no adulto provocou danos em alguns parâmetros morfofuncionais do sistema reprodutivo reduzindo o peso do ducto deferente, o número de células de Sertoli, a motilidade espermática, a produção diária de espermatozóides e a reserva espermática na cauda do epidídimo. Os níveis séricos de testosterona foram reduzidos em 27% quando comparado ao grupo RP. Por outro lado, a incidência de espermatozóides com anormalidades morfológicas e retenção de gota citoplasmática aumentou. Assim, conclui-se que a restrição protéica in utero, nestas condições experimentais, provocou restrição de crescimento, comprometeu o desenvolvimento sexual, atrasando o início da puberdade e provocando danos espermáticos no adulto. / Abstract: In the past few years the worldwide recognition of the relevance of nutrition as a basis for social and economic development has been growing. In developing countries such as Brazil undernutrition is a socioeconomic problem caused by poor nutrition and low income. The birth of children with low birth weight is considered an important public health problem, with devastating effects on human development, survival and health. Although millions of children have their growth retarded due to poor nutrition, few works relate maternal proteic undernutrition to the development of the reproductive system. Thus, the objective of the present work was to evaluate the impact of in utero proteic undernutrition on morphofunctional endpoints in the male reproductive tract during the following phases of sexual development: prepubertal, peripubertal and adult, as well as on the installation of puberty in the female pups, utilizing the rat as the experimental model. For this, pregnant female rats were obtained and divided into two experimental groups: one treated with standard chow (SC, n=12, 17% protein) and the other treated with hypoproteic chow (HC, n=16, 6% protein) throughout gestation. During the lactation period the two groups received standard chow. On the 20th gestational day 10 rats (SC n=4, HC n=6) were sacrificed and laparotomy was performed to evaluate maternal reproductive performance. The remaining pregnant rats (SC n=8, HC n=10) were left to deliver and nurse the offspring. The proteic restriction provoked reduction in the placental weight, increase in the maternal chow consumption at the beginning of pregnancy and reduction at the end of pregnancy and beginning of lactation. However, this variation in the chow consumption was not sufficient to compensate for the hypoproteic effect on the maternal and fetal organisms, since the maternal weight gain over gestation and the weight of the pups in the different phases of the development were significantly reduced. The anogenital distance increased in the female pups of the HC group suggesting a process of masculinization of the female phenotype. In both sexes the in utero proteic restriction delayed pubertal installation. In the male offspring the proteic restriction caused reduction in the testicular weight at prepuberty and, at adulthood, damage to some of the morphofunctional endpoints of the reproductive system by reducing: the vas deferens weight, number of Sertoli cells, sperm motility, daily sperm production and sperm reserves in the epididymal cauda. Serum testosterone levels were lowered by 27% compared to the SC group. On the other hand, the incidence of sperm cells with morphological abnormalities and retention of the cytoplasmatic droplet increased. It was concluded that the proteic restriction in utero, in these experimental conditions, restricted growth, compromised the sexual development by delaying the beginning of puberty and leaded to damage in adulthood. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Wilma de Grava Kempinas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T17:40:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Favareto_AnaPaulaAlves_M.pdf: 1827762 bytes, checksum: d744cd05981fc722ad8dc5063be9ece7 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Vários estudos têm demonstrado que a proteína espermática de membrana SP22 (22-28 kDa) é altamente correlacionada com a fertilidade. A localização desta proteína no segmento equatorial da cabeça espermática em várias espécies mamíferas, e a inibição de fertilização in vivo e in vitro, obtida com a incubação de espermatozóides com anticorpos anti-rSP22, sugerem sua participação na interação espermatozóide-oócito e sua importância para a capacidade reprodutiva masculina. Assim, os objetivos do presente estudo foram avaliar a presença da proteína SP22 em espermatozóides de carneiros adultos (raças Dorper e Santa Inês), identificando sua localização; quantificar os níveis desta proteína mediante as técnicas de ELISA e imunomarcação fluorescente utilizando anticorpo anti-rSP22; e correlacionar os seus níveis com os parâmetros espermáticos de morfologia, integridade de membrana avaliada por sondas fluorescentes (diacetato de carboxifluoresceína e iodeto de propídio), e cinética obtida por sistema computadorizado (CASA). A SP22 foi especificamente localizada no segmento equatorial da cabeça e no colo do espermatozóide ovino. As técnicas de ELISA e imunomarcação fluorescente mostraram-se eficientes para a quantificação da SP22 nos espermatozóides ovinos e altamente correlacionadas (R2 = 0,70). Não houve diferença significativa (P > 0,05) nos níveis de SP22 obtidos por estes dois métodos entre as raças estudadas. Para o estudo da cinética espermática foi realizada análise estatística multivariada, considerando os valores individuais obtidos pelo sistema CASA (1 ejaculado por carneiro, n = 3847 espermatozóides). Através da análise de agrupamento foi possível estabelecer um número de 3 sub-populações espermáticas coexistentes no ejaculado dos carneiros. A sub-população 1 foi a mais ativa e progressiva. A subpopulação 3 teve movimento pouco progressivo e não-linear, e a sub-população 2 teve um padrão de cinética intermediário. Houve diferença significativa (qui-quadrado = 824,39; grau de liberdade = 34; P < 0,0001) na distribuição das 3 sub-populações nos carneiros. No entanto, não houve correlação significativa (P > 0,05) entre a proporção de cada sub-população nos carneiros e os níveis de SP22 avaliados por ELISA e imunomarcação fluorescente. A integridade de membrana espermática foi positivamente correlacionada (R2 = 0,48; P = 0,02) com a proporção de espermatozóides da sub população 1 e negativamente correlacionada (R2 = 0,30; P = 0,02) com a sub-população 3. Porém, este parâmetro espermático não foi correlacionado (P > 0,05) com a proporção de espermatozóides da sub-população 2. Além disso, a morfologia espermática não foi correlacionada (P > 0,05) às proporções das três sub-populações cinéticas encontradas. Os níveis de SP22 obtidos por ELISA foram negativa e positivamente correlacionados (R2 para as 3 variáveis = 0,47) com as porcentagens de espermatozóides morfologicamente anormais e de espermatozóides com membrana plasmática íntegra, respectivamente. A quantificação de SP22 por análise de imunomarcação fluorescente não foi correlacionada com nenhum dos parâmetros espermáticos avaliados. Estes resultados demonstraram que o estudo da proteína SP22 em espermatozóides ovinos pode trazer importantes informações a respeito da capacidade reprodutiva destes animais. Entretanto, para a validação desta proteína como um biomarcador de fertilidade nesta espécie são necessários estudos que correlacionem os níveis da SP22 com as taxas de fertilidade obtidas in vivo e/ou in vitro / Abstract: Several studies have shown that the SP22 sperm membrane protein (22-28 kDa) is highly correlated with fertility. The location of this protein on the equatorial segment of the sperm head in several mammallian species, and the inhibition of in vivo and in vitro fertilization, obtained by the incubation of spermatozoa with anti-rSP22 antibodies, suggest its paticipation in spermatozoon-oocyte interaction and its importance for the male reproductive capacity. Thus, the goals of the present study were to evaluate the presence of the SP22 protein on spermatozoa from adult rams (Dorper and Santa Inês breeds), identifying its location; to quantify the levels of this protein by ELISA and FITC immunostaning analysis using anti-rSP22 Ig; and to correlate its levels with sperm parameters of morphology, membrane integrity evaluated by fluorescent probes (carboxyfluorescein diacetate and propidium iodide) and kinetics by computer-assisted sperm analysis (CASA). The SP22 was specifically located on the equatorial segment of the head and neck of the ram spermatozoon. The ELISA and FITC immunostaning techniques appear to be efficient for the SP22 quantification in ovine spermatozoa and were significantly correlated (R2 = 0.70). There was no significant difference (P > 0.05) in SP22 levels assessed by these two methods between the studied breeds. For the study of the sperm kinetics, multivariate statistical analysis was performed, considering the individual values obtained by CASA system (1 ejaculate per ram, n = 3847 spermatozoa). Through clustering analysis, it was possible to set up a number of 3 sperm subpopulations coexistent within ejaculate from rams. The subpopulation 1 was the most active and progressive. The subpopulation 3 had little progressive and non-linear movement and the subpopulation 2 had an intermediate kinetic pattern. There was significant difference (chi-square = 824.39; degrees of freedom = 34; P < 0.0001) in the distribution of the 3 subpopulations among the rams. However, there was no significant correlation (P > 0.05) between the proportion of each subpopulation in the rams and the SP22 levels evaluated by ELISA and FITC immunostaining analysis. The membrane integrity was positively correlated (R2 = 0.48; P = 0.02) with the proportion of spermatozoa in subpopulation 1 and it was negatively correlated (R2 = 0.30; p = 0.02) with subpopulation 3. However, this sperm parameter was not significantly correlated (P > 0.05) with proportion of spermatozoa in subpopulation 2. Moreover, sperm morphology was not significantly correlated (P > 0.05) with the proportions of the three kinematics subpopulations found within ejaculate semen. The SP22 levels obtained by ELISA were negatively and positively correlated (R2 = 0.47 for 3 variable) with percentages of spermatozoa morphologically abnormal and of spermatozoa with intact plasma membrane, respectively. The SP22 quantification by FITC immunostaning analysis was no correlated with any of the sperm parameters. These results showed that study of the SP22 protein in ram spermatozoa can bring important information about the reproductive capacity of these animals. Nevertheless, studies that correlate the SP22 levels with in vivo and/or in vitro fertility rate are necessary for validation of this protein as a fertility biomarker in this species / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

INTRODUÇÃO: A Região Metropolitana de São Paulo é a mais populosa do Brasil. A grande frota veicular contribui para uma maior concentração de poluentes atmosféricos. Diversos poluentes podem interferir na fertilidade humana, alterando os principais parâmetros seminais. Este estudo teve como objetivo avaliar a influência dos níveis atuais de poluição atmosférica de origem veicular nos parâmetros seminais em controladores de tráfego. MÉTODOS: Foram realizadas anamnese e avaliação clínica urológica (volume testicular, presença de varicocele, criptorquidia, má formações) em 62 controladores de tráfego da CET (grupo exposto) e 210 homens comprovadamente férteis do grupo de pré-vasectomia do ambulatório da urologia do HC-FMUSP (grupo controle). Os parâmetros seminais avaliados foram concentração, motilidade (quantitativa e qualitativa), morfologia pelos critérios da OMS e critério estrito de Kruger, teste para detecção de leucócitos e testes de função espermática, CK, ROS e anticorpo anti-espermatozóide. Parâmetros hormonais também foram avaliados. Avaliação de exposição à poluição foi realizada através da dispersão de poluentes registrado pela Cetesb, gerada pelo software SURFER 8.0. RESULTADOS: Os controladores de tráfego apresentaram volume testicular maior em relação ao grupo pré-vasectomia (p<0,001). Quanto aos níveis de Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) e Testosterona total (p=0,365), ambos os grupos apresentaram valores dentro da normalidade. A concentração espermática apresentou-se homogênea nos grupos (p= 0,395); os controladores de tráfego apresentaram média de 124,9 x 106/ml e os pré-vasectomia 110,1 x 106/ml. Os controladores de tráfego apresentaram motilidade quantitativa (total) reduzida (60%) em relação aos prévasectomia (65%) (p= 0,047). A motilidade qualitativa (progressiva) também se apresentou diminuída no grupo exposto (p<0,001). As morfologias espermáticas tanto pelo critério da OMS (grupo exposto = 12%; grupo controle = 20%), quanto pelo critério estrito de Kruger (grupo exposto = 3%; grupo controle = 6%) estavam significativamente diminuídas no grupo exposto em relação ao controle (p<0,001). O marcador de maturidade Creatina Quinase apresentou-se dentro da normalidade em ambos os grupos, porém maior no grupo controle (p<0,001). Anticorpos anti-espermatozóides estavam elevados nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,382). Radicais livres de oxigênio apresentaram-se em altas concentrações nos dois grupos, porém não foi significativo (p=0,141). CONCLUSÕES: A análise dos dados obtidos nessa pesquisa sugere que a poluição atmosférica exerce uma influência negativa sobre os parâmetros seminais motilidade e morfologia. Causa elevação dos níveis de ROS em todos os indivíduos, indicando perda da função espermática. Ainda demonstrou-se a elevação em todos os indivíduos dos níveis de anticorpos anti-espermatozóides, sugerindo que os poluentes teriam transposto a barreira hemato-testicular. O volume testicular do grupo exposto à poluição veicular apresentar-se maior em relação ao volume testicular do grupo controle nos leva a supor que isto se deva a uma reação inflamatória aos agentes poluidores. Apesar da diferença significativa na concentração de poluentes entre os grupos, uma correlação direta com parâmetros seminais não pôde ser demonstrada / Metropolitan Region of Sao Paulo is the most populous of Brazil. The huge number of vehicles contributes for a higher concentration of air pollutants. Various pollutants can interfere in human fertility, altering the main seminal parameters. The aim of this study was to evaluate the influence of air pollution of vehicular origin on seminal parameters of traffic controllers. Clinical history and urological evaluation (testicular volume, presence of varicocele, cryptorchidism, bad formations) were carried out in 62 traffic controllers (exposed group) and 210 proven fertile men from the pre-vasectomy group of urologic clinic at Hospital of Clinics University of Sao Paulo (control group). Seminal parameters evaluated were concentration, motility (quantitative and qualitative), morphology by WHO´s criteria and Kruger´s strict criteria, test for detection of leukocytes and tests of sperm function, CK, ROS and antisperm antibody. Hormonal parameters also were evaluated. Exposition to air pollution was analyzed through the dispersion of pollutants recorded by Cetesb, generated in the software SURFER 8.0. Traffic controllers presented bigger testicular volume than prevasectomy group (p<0,001). Hormonal levels were at normal range in both groups; Estradiol (p=0,119), LH (p=0,644), FSH (p=0,140) and Total Testosterone (p=0,365). Sperm concentration was homogeneous in both groups (p= 0,395); traffic controllers presented mean of 124.9x106/ml and pre vasectomy group 110.1x106/ml. The exposed group presented quantitative (total) motility (60%) diminished than control group (65%) (p=0,047). The qualitative (progressive) motility was also diminished in the exposed group (p <0,001). The sperm morphologies as by WHO´s criteria (exposed group = 12%; control group = 20%), as by Kruger´s strict criteria (exposed group = 3%; control group = 6%) were significantly diminished in the exposed group (p<0,001). The sperm maturity marker Creatine Kinase was at normal range at both groups, but higher in the control one (p<0,001). Antisperm antibodies was elevated in both groups, however it was not significant (p=0,382). ROS presented higher concentrations in both groups, however it was not significant (p=0,141). The facts presented in this study suggest that air pollution exercises negative effects on the seminal parameters motility and morphology. It causes elevation of ROS levels in all individuals, indicating loss of sperm function. It also showed, elevation of antisperm antibodies levels, suggesting that pollutants would have transposed the blood-testis barrier. The testicular volume in the exposed group was higher than the testicular volume of the control group; we can suppose that it must occur due to an inflammatory reaction against the polluting agents. Although the significant difference in pollutants concentrations between groups, no direct correlation to seminal parameters could be demonstrated

Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T05:07:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hermanny_Alexia_D.pdf: 843759 bytes, checksum: 4b2ff42ff4ef1f995e85e5f8b86bf7f2 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O mecanismo de ação do levonorgestrel (LNG) na anticoncepção de emergência (AE) ainda não está totalmente esclarecido e seu efeito nas funções espermáticas também não está explicado. Os objetivos deste trabalho foram avaliar se o LNG, em dose igual à observada após a ingestão oral para AE, poderia afetar espermatozoides expostos in vitro à tuba uterina humana e realizar uma revisão bibliográfica sobre o efeito do LNG nas diferentes funções espermáticas. Foram realizados 15 experimentos. As tubas uterinas foram removidas através de mini-laparotomias e foram perfundidas com uma suspensão contendo 1x106 espermatozoides móveis, com e sem LNG. A tuba correspondente ao lado onde o folículo dominante estava presente recebeu a suspensão com LNG em pacientes alternados. Após um período de incubação de 4 horas, o istmo e a ampola de cada tuba foram separados. Cada segmento foi lavado separadamente e o material obtido foi avaliado quanto ao número de espermatozoides móveis recuperados, número de espermatozoides aderidos ao epitélio tubário e taxa de reação acrossômica (RA). A presença do LNG não afetou significativamente o número de espermatozoides móveis recuperados do istmo e da ampola, e não afetou o número de espermatozoides aderidos ao epitélio tubário. O LNG também não influenciou a taxa de RA. Diferenças significativas também não foram observadas quando o lado ovulatório foi considerado. A revisão bibliográfica realizada deixou evidente que existem poucos estudos que analisam a influência do LNG como AE sobre as funções espermáticas, apesar de este ser um possível mecanismo de ação. Além disso, os estudos revisados utilizam diferentes métodos de avaliação e os resultados são, muitas vezes, contraditórios. De acordo com os resultados observados na literatura, quando o LNG é usado na AE, provavelmente não atinge concentração plasmática suficiente para ser reconhecido pelos receptores de progesterona (P). Resultados positivos só foram observados quando a dose de LNG utilizada nos experimentos foi comparável ao sistema intrauterino liberador de LNG (SIU-LNG), ou seja, muito maior que a utilizada na AE. O LNG, em dose similar à observada no plasma após a ingestão oral para AE, não afetou o número, a aderência ao epitélio tubário, a distribuição e a taxa de RA de espermatozoides na tuba uterina humana, in vitro. De acordo com os resultados observados na literatura, se o LNG, na concentração utilizada para AE, afeta ou não a função espermática ainda não está claro, e mais estudos são necessários / Abstract: The mechanism of action of levonorgestrel (LNG) as emergency contraception (EC) is still under debate and the effect upon sperm function is partially explained. The aim of this study was to assess if LNG in a similar dose to those observed in serum after oral intake for EC could affect the spermatozoa when exposed in vitro to human tubes and also to give an overview of the effect of LNG as EC on several sperm functions. Fifteen mini-laparotomies were performed, the ovulatory side was recorded and both tubes were removed and perfused with a suspension of 1x106 of motile spermatozoa, one with LNG and the other without it. After an incubation period of 4hours the tubes were cut to separate the isthmus and the ampulla. Each segment was flushed and the material was evaluated regarding the motile sperm number, the number of spermatozoa adhering to the oviductal epithelium and acrosome reaction (AR) rate. The addition of LNG did not significantly affect the number of recovered spermatozoa neither at the isthmus nor at the ampulla or the number of recovered spermatozoa adhered at the human tubal epithelium. Additionally, LNG did not influence the rate of AR. There were no significant differences even when the ovulatory side was taken into account. The present review showed that there are few studies which focus on the influence of LNG as EC upon sperm functions; albeit it is a plausible mechanism of action. Additionally, the different studies used different methods of evaluation and the results were in many cases contradictories. According to the results observed at the literature, when LNG is used as EC, it is probable that the drug does not achieved sufficient serum concentrations in order to be recognized by the progesterone (P) receptors. Positive results only were observed when the dose of LNG used in the experiments was much higher (comparable to the LNG-IUS) than the proposed for EC. LNG in a similar dose to that observed in serum after oral intake for EC did not affect the number, the adhesion to tubal epithelium, distribution, and AR rate of spermatozoa at the human Fallopian tubes in vitro. According to the results observed at the literature, if the LNG in doses used for EC, affects sperm function or not, it is still uncertain and warrants further studies / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutor em Ciências da Saúde