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Estimulador elétrico funcional com utilização de ponte H e fonte de corrente no estágio de potência /

Blanco Rodríguez, Jorge Esteban January 2016 (has links)
Orientador: Aparecido Augusto de Carvalho / Resumo: Implementou-se um estimulador elétrico funcional para uso na reabilitação de pacientes hígidos e paraplégicos e que não necessita de alimentação simétrica. O equipamento é constituído por dois estágios, o formador de onda, no qual se define os parâmetros do sinal de estimulação, e o de potência. No formador de onda foi utilizado uma placa Raspberry pi e uma interface de usuário, desenvolvida em Python. O estágio de potência é composto por um espelho de corrente que possibilita a utilização de transistores não casados, e uma estrutura em ponte H, para formar o sinal de eletroestimulação bifásico, sem a necessidade de fonte simétrica, diminuindo assim pela metade a diferença de potencial aplicada na alimentação do circuito. Com o estimulador implementado gerou-se correntes com forma de onda retangular, amplitude de até 120 mA e características adequadas para utilização na reabilitação dos membros inferiores e superiores de pacientes. / Abstract: A functional electrical stimulator for use in the rehabilitation of paraplegic and healthy patients was implemented. It does not need symmetrical power supply. The equipment consists of two stages, the wave generator, which defines the stimulation signal parameters, and the power stage. In the wave generator we have used a Raspberry Pi board and a user interface, developed in Python. In the power stage we have used a current mirror which enables the use of unmarried transistors and a H-bridge circuit to generate a biphasic signal. With the implemented stimulator, currents with rectangular waveform, range of up to 120 mA, and suitable characteristics for using in rehabilitation of the lower and upper limbs of patients were generated. / Mestre
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Caracterização físico-química e produtiva de frutos e sementes e propagação de Eugenia calycina Camb. (Myrtaceae) / Physicochemical characterization and production of fruits and seeds and propagation of pitangeira-do-cerrado (Eugenia calycina)

Borges, Kelly Cristiene de Freitas 29 January 2016 (has links)
Submitted by Franciele Moreira (francielemoreyra@gmail.com) on 2017-09-21T20:15:51Z No. of bitstreams: 2 Tese - Kelly Cristiene de Freitas Borges - 2016.pdf: 3212495 bytes, checksum: 6b27bd9b4a7f85529d60666a3156a338 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-22T11:42:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Kelly Cristiene de Freitas Borges - 2016.pdf: 3212495 bytes, checksum: 6b27bd9b4a7f85529d60666a3156a338 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-22T11:42:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Kelly Cristiene de Freitas Borges - 2016.pdf: 3212495 bytes, checksum: 6b27bd9b4a7f85529d60666a3156a338 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-01-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Many native fruit species of the Cerrado biome have great food potential, however, in this respect, still very poorly studied. This research aimed to evaluate the physical-chemical and productive characteristics of fruits and seeds and propagation of Surinam Eugenia calycina, the Private Natural Heritage Reserve (RPPN) Hunt Club and Itororó Fishing, municipality of Uberlândia- GO. The readings to obtain the phenological data were always performed in the second ten days of each month. Biometrics fruit and seeds were carried out in 50 selected fruit materials collected at four separate locations in the area of RPPN. It was obtained length (mm) and width (mm) of the fruits and seeds using a digital caliper, and made to count the number of seeds per fruit. Seed germination test consisted of the evaluation of various types of substrates (A-screen, B-blotting; C-germitest, D-vermiculite; E-sand), in the School of Agronomy Seed Laboratory, Faculty of Philosophy and Human Sciences Goiatuba, municipality of Goiatuba, GO, Brazil. The seedling emergence test was installed in a greenhouse, adopting a randomized block design (RBD), with four treatments, corresponding to different locations of collections of fruits (1, 2, 3 and 4), with five repetitions totaling 20 plots. The test evaluation of vegetative propagation, adopted the factorial experimental design with three types of cuttings: basal, middle and apical, and six different times of soaking of the stakes in the Indole-butiric acid: 0.5 second, 15, 30, 45 and 60 seconds), with three replications and 10 cuttings per repetition. The evaluations were performed at 60 days after installation of the experiment. It was collected 300 g of fruit randomly at each location, as identified by the physical characteristics of the soil, considering the relationship clay/sands these locations. The fruit samples were sent to the Center for Food Research (CPA) for chemical analysis. All data were subjected to statistical tests as the characteristics of the collected data. Regarding the phenophases, E. calycina features flowering August to January, with the highest peak bloom, 75% and 100% in September and October respectively the fruits have widths ranging from 6 to 9 mm in different collection sites, and lengths of 14 to 30 mm; while the width of the seeds ranged from 5 to 7 mm and a length of 10 to 14 mm. Collected seeds in E. plant calycina established in soils with different proportions of clay and sand, do not differ in their potential to spread. The different immersion times and the IBA solution at a concentration of 6,000 mg L-¹ did not induce the rooting of cuttings of Surinam E. calycina. The fruits have nutritional importance by the presence of significant levels of minerals that contribute to human health, such as potassium, iron, manganese, magnesium and high percentage of Brix. Regarding the results of this study, it is recommended to carry out further research in relation to the species E. calycina urgently because its natural population has declined apace. / Muitas espécies frutíferas nativas do bioma Cerrado apresentam grande potencial alimentar, porém, neste aspecto, ainda foram pouco estudadas. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar as características físico-química e produtiva de frutos e sementes e propagação de pitangueira-do-cerrado (Eugenia calycina), da Reserva Particular do Patrimônio Natural (RPPN) do Clube Caça e Pesca Itororó, município de Uberlândia-GO. As leituras para obtenção dos dados fenológicos foram realizadas sempre no segundo decêndio de cada mês. A biometria dos frutos e sementes foi realizada em materiais de 50 frutos selecionados coletados em quatro locais distintos na área da RPPN. Foram obtidos o comprimento (mm) e a largura (mm) dos frutos e das sementes utilizando um paquímetro digital, e fez-se a contagem da quantidade de sementes por fruto. O teste de germinação de sementes consistiu da avaliação de diversos tipos de substratos (A-tela; B-mata-borrão; C-germitest; D-vermiculita; E-areia), no Laboratório de Sementes da Escola de Agronomia, Faculdade de Filosofia e Ciências Humanas de Goiatuba, município de Goiatuba, GO. O teste de emergência de plântulas foi instalado em casa de vegetação, adotando-se o delineamento de blocos casualizados (DBC), com quatro tratamentos, correspondentes aos diferentes locais de coletas dos frutos (1, 2, 3 e 4), com cinco repetições, totalizando 20 parcelas. No ensaio de avaliação da propagação vegetativa, adotou-se o delineamento experimental esquema fatorial, com três tipos de estacas: basal, mediana e apical, e seis tempos diferentes de imersão das estacas no ácido Indol-bútirico: 0,5 segundo, 15, 30, 45 e 60 segundos), com três repetições e 10 estacas por repetição. As avaliações foram realizadas aos 60 dias após a instalação do experimento. Foram coletados 300 gramas de frutos, aleatoriamente, em cada local, identificado segundo as características físicas do solo, considerando a relação argila/areia nesses locais. As amostras de frutos foram, encaminhadas ao Centro de Pesquisas de Alimentos (CPA), para as análises químicas. Todos os dados foram submetidos a testes estatísticos, conforme, as características dos dados coletados. Em relação às fenofases, E. calycina apresenta floração de agosto a janeiro, com o maior pico de floração, de 75% e 100% em setembro e outubro, respectivamente. Os frutos apresentaram larguras variando de 6 a 9 mm nos diferentes locais de coleta, e comprimentos de 14 a 30 mm; enquanto que a largura das sementes variou de 5 a 7 mm e o comprimento de 10 a 14 mm. Sementes coletadas em plantas de E. calycina estabelecidas em solos com diferentes proporções de argila e areia, não apresentam diferenças no seu potencial de propagação. Os diferentes tempos de imersão e a solução de AIB na concentração de 6.000 mg L-¹ não induziram o enraizamento de estacas de pitangueira-do-cerrado. Os frutos têm importância nutricional pela presença de teores significativos de minerais que contribuem para a saúde humana, como potássio, ferro, manganês, magnésio e alta porcentagem de ºBrix. Em relação aos resultados obtidos neste estudo, recomenda-se a realização de novas pesquisas em relação à espécie E. calycina, urgentemente, pois sua população natural tem diminuído em ritmo acelerado.
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Análisis de procesos de transcripción, traducción y degradación del virus del arabesco del Pelargonium

Blanco Pérez, Marta 08 February 2017 (has links)
Tesis por compendio / [EN] Pelargonium line pattern virus (PLPV) is one of the most frequent viral agents in geranium. It's an icosahedral virus, with a monopartite, positive-sense, single-stranded RNA genome, lacking a cap structure at the 5' end and poly(A) tail at its 3' end. Its genomic RNA (gRNA) contains five genes that encode two proteins involved in replication, two proteins involved in movement, (MP1 and MP2), and a coat protein (CP) that also acts as viral suppressor of RNA silencing. The first two genes are translated from the gRNA whereas the remaining three are translated from the single subgenomic RNA (sgRNA) that the virus produces during infection. The PLPV belongs to the family Tombusviridae and presents unique characteristics such as: i) production of a sole sgRNA that is structural and functionally tricistronic, ii) presence of a non-AUG start codon (CUG or GUG) initiating the MP2 ORF, iii) absence of AUG codons in any frame between the AUG initiation codons of MP1 and CP genes, and iv) sequence-based phylogenetic clustering of all encoded proteins in separate clades from those of other family members. In this doctoral thesis we have tried, on the one hand, to further study the regulation of PLPV gene expression and, on the other hand, to obtain information on degradation processes to which its genome is subjected, particularly on those related to the mechanism of RNA silencing. The first objective in this work was to determine the mechanism and the viral RNA elements involved in the generation of the sgRNA of PLPV. An RNA-RNA interaction involving distant segments of the gRNA of plus polarity has been identified. Such long-range interaction seems to act in cis and specifically mediates the production of the negative strand of the sgRNA, a type of molecule easily detectable in infected tissue. These results together with the possibility of uncoupling the synthesis of negative and positive strands of the sgRNA and with the observation of sequence similarity between the 5' ends of the gRNA and the sgRNA (with promoter function in their complementary strands), suggest that PLPV follows a model of premature termination for the formation of its unique sgRNA. The second objective of this work was to identify the elements of the viral genome that are involved in its translation through a cap-independent mechanism. Transfection of N. benthamiana protoplasts with PLPV-based reporter constructs has allowed us to corroborate the functionality of the CITE in the context of both the gRNA and the sgRNA. Additionally, it has been shown that this element establishes a long-distance RNA-RNA interaction with the 5'-region of the corresponding RNA which is essential for its activity. Moreover, data that support the relevance of the CITE during the infectious cycle of the virus have been obtained. Finally, in order to gain information on the role of PLPV as inducer and target of RNA silencing that the plant triggers as a defense against the virus, we have characterized the viral small RNAs (vsRNAs) present in PLPV-infected N. benthamiana plants. High-throughput sequencing, computational analysis and molecular hybridization assays have shown that: i) vsRNAs of the PLPV accumulate in extraordinarily high proportions in infected tissue, ii) 21 and 22 nt vsRNAs are the most frequent ones, iii) the vsRNAs of positive and negative polarities are in similar proportions, and, iv) there is variability in the vsRNAs 5'-proximal nucleotide. These results have provided clues on the viral molecules that must act as substrates for the formation of the vsRNAs and, also, about the components of the silencing machinery of the host that are likely involved in the response against the virus. / [ES] El virus del arabesco del Pelargonium (PLPV) es uno de los agentes virales más frecuentes en geranio. Se trata de un virus icosaédrico, con un genoma monopartito de RNA de simple cadena y de polaridad positiva que carece de estructura cap en su extremo 5' y de cola poli(A) en su extremo 3'. Su RNA genómico (gRNA) contiene 5 genes que codifican dos proteínas implicadas en replicación, dos proteínas implicadas en movimiento, (MP1 y MP2), y una proteína de cubierta (CP) que funciona además como supresor del silenciamiento por RNA. Las dos primeras se traducen a partir del gRNA y las tres restantes lo hacen a partir de un único RNA subgenómico (sgRNA) que el virus produce en el curso de la infección. El PLPV pertenece a la familia Tombusviridae y presenta características peculiares como son: a) la generación de un solo sgRNA estructural y funcionalmente tricistrónico, b) la presencia de un codón de iniciación no canónico (CUG o GUG) en el gen de la MP2, c) la ausencia de codones AUG en cualquier pauta de lectura entre los codones de inicio AUG de los genes MP1 y CP, y d) la agrupación filogenética en un clado separado de otros miembros de la familia Tombusviridae. En esta tesis se ha pretendido, por una parte, profundizar en el estudio de las estrategias de regulación de la expresión génica del PLPV y, por otra, recabar información sobre los procesos de degradación a los que se encuentra sometido su genoma, particularmente sobre aquellos relacionados con el mecanismo de silenciamiento por RNA. El primer objetivo abordado en este trabajo ha sido determinar el mecanismo y los elementos del RNA viral implicados en la generación del sgRNA del PLPV. Se ha identificado una interacción entre segmentos alejados del gRNA de polaridad positiva, que actúa en cis y que media la producción de la cadena negativa del sgRNA, un tipo de molécula fácilmente detectable en tejido infectado. Estos resultados junto con la posibilidad de desacoplar la síntesis de cadenas negativas y positivas del sgRNA y con la observación de similitud de secuencia entre el extremo 5' del gRNA y del sgRNA (con una función promotora en las cadenas complementarias), sugieren que el PLPV sigue un modelo de terminación prematura para la formación de su único sgRNA. El segundo objetivo de este trabajo ha sido identificar los elementos del genoma viral que están implicados en su traducción a través de un mecanismo independiente de cap. Mediante trasfección de protoplastos de N. benthamiana con construcciones delatoras, se ha corroborado la presencia de un estimulador traduccional (CITE) tanto en el contexto del gRNA como del sgRNA. Adicionalmente, se ha constatado que este elemento establece una interacción RNA-RNA a larga distancia con la región 5' del RNA correspondiente que es esencial para su actividad. Asimismo, se han obtenido datos que apoyan la relevancia del CITE durante el ciclo infeccioso del virus. Por último, para intentar recabar información sobre el papel del PLPV como inductor y diana de mecanismos de silenciamiento por RNA disparados por la planta como defensa frente al virus, se han caracterizado los pequeños RNAs virales (vsRNAs) presentes en plantas de N. benthamiana infectadas. Mediante secuenciación masiva, análisis computacionales e hibridación molecular, se ha podido determinar que: a) los vsRNAs del PLPV se acumulan en proporciones extraordinariamente elevadas en tejido infectado, b) los vsRNAs de 21 y 22 nt son los mayoritarios, c) los vsRNAs de polaridad positiva y negativa están en proporciones similares, y d) existe variabilidad en el nucleótido 5'-proximal de los vsRNAs. Estos resultados han permitido obtener pistas acerca de las moléculas virales que deben actuar cómo sustratos para la formación de los vsRNAs y, también, acerca de los componentes de la maquinaria de silenciamiento del huésped que deben participar en la respuesta del mismo frente al virus. / [CA] El virus de l'arabesc del Pelargonium (PLPV) és un dels agents virals més freqüents en gerani. Es tracta d'un virus icosaèdric, amb un genoma monopartit de RNA de simple cadena i de polaritat positiva que manca d'estructura cap en el seu extrem 5', i de cua poli(A) en el seu extrem 3'. La seua RNA genòmic (gRNA) conté 5 gens que codifiquen dues proteïnes implicades en replicació, dues proteïnes implicades en moviment, (MP1 i MP2), i una proteïna de coberta (CP) que funciona a més com supresor del silenciamiento per RNA. Les dues primeres es tradueixen a partir del gRNA i les tres restants ho fan a partir d'un únic RNA subgenómico (sgRNA) que el virus produeix en el curs de la infecció. El PLPV pertany a la família Tombusviridae, i presenta característiques peculiars com són: a) la generació d'un sol sgRNA estructural i funcionalment tricistrònic, b) la presència d'un codó d'iniciació no canònic (CUG o GUG) en el gen de la MP2, c) l'absència de codons AUG en qualsevol pauta de lectura entre els codons d'inici AUG dels gens MP1 i CP, i d) l'agrupació filogenètica en un clade separat d'altres membres de la família Tombusviridae. En aquesta tesi s'ha pretès, d'una banda, aprofundir en l'estudi de les estratègies de regulació de l'expressió gènica del PLPV i, per una altra, recopilar informació sobre els processos de degradació als quals es troba sotmès el seu genoma, particularment sobre aquells relacionats amb el mecanisme de silenciament per RNA. El primer objectiu abordat en aquest treball ha sigut determinar el mecanisme i els elements del RNA viral implicats en la generació del sgRNA del PLPV. S'ha identificat una interacció entre segments allunyats del gRNA de polaritat positiva, que actua en cis i que intervé en la producció de la cadena negativa del sgRNA, un tipus de molècula fàcilment detectable en teixit infectat. Aquests resultats juntament amb la possibilitat de desacoblar la síntesi de cadenes negatives i positives del sgRNA i amb l'observació de similitud de seqüència entre l'extrem 5' del gRNA i del sgRNA (amb una funció promotora en les cadenes complementàries), suggereixen que el PLPV segueix un model de terminació prematura per a la formació del seu únic sgRNA. El segon objectiu d'aquest treball ha sigut identificar els elements del genoma viral que estan implicats en la seua traducció a través d'un mecanisme independent de cap. Mitjançant trasfección de protoplastos de N. benthamiana amb construccions delatores, s'ha corroborat la presència d'un estimulador traduccional (CITE) tant en el context del gRNA com del sgRNA. Addicionalment, s'ha constatat que aquest element estableix una interacció RNA-RNA a llarga distància amb la regió 5' del RNA corresponent que és essencial per a la seua activitat. Així mateix, s'han obtingut dades que recolzen la rellevància del CITE durant el cicle infecciós del virus. Finalment, per intentar recopilar informació sobre el paper del PLPV com inductor i diana de mecanismes de silenciament per RNA disparats per la planta com a defensa davant del virus, s'han caracteritzat els xicotets RNAs virals (vsRNAs) presents en plantes de N. benthamiana infectades. Mitjançant seqüenciació massiva, anàlisis computacionals i hibridació molecular, s'ha pogut determinar que: a) els vsRNAs del PLPV s'acumulen en proporcions extraordinàriament elevades en teixit infectat, b) els vsRNAs de 21 i 22 nt són els majoritaris, c) els vsRNAs de polaritat positiva i negativa estan en proporcions similars, i d) existeix variabilitat en el nucleòtid 5'-proximal dels vsRNAs. Aquests resultats han permès obtenir pistes sobre les molècules virals que han d'actuar com substrats per a la formació dels vsRNAs i, també, sobre els components de la maquinària de silenciament de l'hoste que han de participar en la resposta del mateix enfront del virus. / Blanco Pérez, M. (2016). Análisis de procesos de transcripción, traducción y degradación del virus del arabesco del Pelargonium [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/63452 / Compendio
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Estudo do efeito do fator estimulador de colônia de granulócitos associado a metilprednisolona na lesão medular aguda experimental em ratos / Study of the effect of granulocyte colony-stimulating factor associated with methylprednisolone in experimental acute spinal cord injury in rats

Teixeira, William Gemio Jacobsen 29 August 2017 (has links)
Introdução: Várias são as propostas descritas para tratar farmacologicamente a lesão traumática da medula espinal. A metilprednisolona já foi padronizada para uso clínico. O fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF) tem sido promissor em estudos experimentais e clínicos. Não há pesquisas quanto ao efeito da associação dos dois fármacos. Objetivo: Avaliar o efeito do tratamento com o fator estimulador de colônia de granulócitos associado a metilprednisolona na lesão medular aguda experimental em ratos. Material e métodos: Foram avaliados 40 ratos Wistar submetidos a lesão medular moderada com o NYU-Impactor. Os animais foram divididos em quatro grupos de 10 ratos. O Grupo Controle não recebeu tratamento; o Grupo G-CSF, foi tratado com G-CSF no momento da lesão e diariamente ao longo dos cinco dias subsequentes; o Grupo Metilprednisolona, com metilprednisolona durante 24 horas; e o Grupo G-CSF/Metilprednisolona, com metilprednisolona durante 24 horas e G-CSF no momento da lesão e ao longo de cinco dias. Os animais foram mantidos vivos durante 42 dias; a avaliação funcional foi realizada com a aplicação da escala funcional de Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) nos dias 2, 7, 14, 21, 28, 35 e 42 subsequentes à lesão. A avaliação dos potenciais evocados motores foi realizada no dia 42 e a avaliação histológica da lesão da região da medula espinal lesada, realizada logo após a eutanásia ocorrida no dia 42. Resultados e conclusões: A associação de metilprednisolona e G-CSF no tratamento do traumatismo medular contuso experimental em ratos promoveu melhora neurológica avaliada pela escala BBB superior à melhora promovida pela metilprednisolona e G-CSF quando utilizadas isoladamente. A associação teve também efeito sinérgico que resultou em melhora nos parâmetros histológicos no local da lesão. Não houve diferença entre os grupos quanto à avaliação neurofisiológica / Introduction: There are several proposals to pharmacologically treat traumatic spinal cord injury. Methylprednisolone has already been standardized for clinical use. Granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) has been promising in experimental and clinical studies. There is no research on the effect of the association of the two drugs. Objective: to evaluate the effect of combined treatment of the granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) associated with methylprednisolone in experimental acute spinal cord injury in rats. Material and methods: Forty male Wistar rats were submitted to a moderate spinal cord injury with the NYU-Impactor. The animals were divided into four groups of ten rats each. The Control Group was not treated; the G-CSF Group was treated with G-CSF at the time of injury and daily over the next five days; the Methylprednisolone Group was treated with methylprednisolone for 24 hours; the G-CSF/methylprednisolone Group, was treated with methylprednisolone for 24 hours and G-CSF at the time of injury and daily over the next five days. The animals were kept alive for 42 days; Functional evaluation was performed using the Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) score on days 2, 7, 14, 21, 28, 35 and 42 following the spinal cord injury. Evaluation of motor evoked potentials was held and histological examination of the lesion of the spinal cord was done immediately after euthanasia on day 42. Results and conclusions: The combination of methylprednisolone and G-CSF in the treatment of experimental spinal cord injury in rats promoted neurological improvement as assessed by BBB scale with greater improvement than with methylprednisolone or G-CSF when used alone. The combination of treatment had also a synergistic effect resulting in improvement in histological parameters at the injury site. There was no difference between groups regarding neurophysiological evaluation
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Coleta de células progenitoras hematopoéticas de sangue periférico após administração de ciclofosfamida e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF): uma análise de 307 pacientes / Collection of peripheral blood progenitor cell after administration of cyclophosphamide and granulocyte-colony stimulating factor (GCSF): an analysis of 307 patients

Mendrone Junior, Alfredo 23 April 2008 (has links)
Mobilização inadequada de células progenitoras hematopoéticas (CPH) tem sido observada em 10 - 30% dos pacientes submetidos a transplante de medula óssea (TMO) autogênico para tratamento de doenças onco-hematológicas. Os fatores relacionados com má resposta à mobilização ainda não estão totalmente estabelecidos. Apresentamos uma análise retrospectiva de pacientes submetidos à TMO autogênico com o objetivo de identificar variáveis associadas com resposta ruim ao regime de mobilização utilizado. Casuística e Métodos: Fizeram parte desta análise 307 pacientes com diferentes diagnósticos, tratados com TMO autogênico em uma única Instituição, no período de Abril de 2001 a Abril de 2007. Todos os pacientes incluídos no estudo foram submetidos a um único regime de mobilização baseado na administração de ciclofosfamida (dose total de 60-120 mg/kg de peso IV) e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) (dose diária de 6 - 17 ug/(kg de peso)/dia SC). O sucesso na resposta ao regime de mobilização foi definido quando um número maior ou igual a 2,0x10 (6) células CD34 + /(kg de peso) foi coletado do sangue periférico com até três procedimentos de leucaférese. Resultados: Dos pacientes analisados, 260 apresentaram sucesso na mobilização (84,7%). Nestes pacientes, um número mediano de 3,67 (2,0 - 46,0) células CD34+ /(kg de peso) foi coletado por paciente com um número mediano de 1 (1-3) procedimento de leucaférese. O insucesso na mobilização foi observado em 47 pacientes (15,3%): 24 (7,8%) que foram submetidos à coleta de CPH de sangue periférico, porém não coletaram número maior ou igual 2,0x10 (6) células CD34+/(kg de peso) com pelo menos três procedimentos de leucaférese; e, 23 (7,5%) foram submetidos à coleta de CPH por punção da medula óssea, por não terem atingido número mínimo de 10 células CD34+/mm3 no sangue periférico para realização de leucaférese. De acordo com análise univariada, os fatores associados com o insucesso foram: diagnóstico (P < 0,0001), tempo de doença (P < 0,0001), número prévio de ciclos de quimioterapia (P = 0,0001), exposição prévia a agentes alquilantes (P = 0.0003) e a mitoxantrone (P = 0,0006), contagem de plaquetas pré-mobilização <150.000/mm3 (P = 0,0006) e intervalo entre o início da mobilização e o pico de células CD 34+ no sangue periférico (P < 0,0001). Idade, sexo, atividade da doença e envolvimento medular ao início da mobilização, tratamento prévio com radioterapia e exposição a análogos da platina não mostraram correlação significativa na resposta à mobilização. Após análise multivariada, as variáveis que permaneceram associadas com insucesso na mobilização foram: diagnóstico (P = 0,0232), número prévio de ciclos da quimioterapia (P = 0,0167), tratamento prévio com mitoxantrone (P = 0,0285) e contagem de plaquetas pré-mobilização < 150.000/mm3 (P = 0,0423). Conclusão: A carga cumulativa de quimioterapia administrada, exposição prévia à mitoxantrone, contagem de plaquetas pré-mobilização e diagnóstico foram os fatores independentes relacionados com a falha na resposta à mobilização. Os achados obtidos podem auxiliar no reconhecimento de pacientes de risco para resposta ruim à mobilização e permitir um planejamento alternativo ou mais agressivo no regime de mobilização para este grupo de pacientes. / Inadequate stem cells mobilization is seen in 10-30% of patients undergoing autotransplantation for hematologic malignancies. Factors affecting peripheral blood progenitor cell (PBSC) mobilization have not been clearly established. We retrospectively reviewed the data of patients treated by autologous bone marrow transplantation (BMT) with the aim to identify factors associated with poor PBSC mobilization. Design and Methods: We evaluated 307 patients with different diagnoses, submitted to autologous BMT between April 2001 and April 2007. PBSC were collected following mobilization with cyclophosphamide (60-120 mg/kg of weight IV) and granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) (dose of 6-17 ug/kg of weight/day SC). Success in mobilization was defined when > ou = a 2,0x10(6) CD34+ cells/(kg weight) could be collected from the peripheral blood with a maximum of three leukapheresis procedures. Clinical and laboratory parameters at the time of mobilization were analyzed for correlations with the number of CD34+ cells collected. Results: Two hundred and sixty patients (84.7%) presented success in mobilization. In this group, a median of 3.67 (2.0-46.0) CD34+ cells/(kg weight) was collected per patient in a median of 1(1-3) leukapheresis procedure. Poor response to mobilization was observed in 47 patients (15.3%): 24 (7.8%) were submitted to PBSC collection but didn\'t collected at least 2.0 x 106 CD34+ cells/(kg weight) with three leukapheresis procedures and 23 (7.5%) didn\'t reach an absolute number count of 10 CD34+ cells/mm3 in the peripheral blood to start collection by leukapheresis. In univariate analysis poorer PBSC mobilization was associated with diagnosis (Pp < 0.0001), time interval from the diagnosis to mobilization (P < 0.0001), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0001), previous treatment with alkylating agents (P = 0.0003) and mitoxantrone (P = 0.0006), platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0006) and interval between mobilization and peak of CD34+ cells in peripheral blood (P < 0.0001). No significant correlation was found with age, gender, disease status, marrow involvement at mobilization, prior radiation therapy and exposition to platin analogues. In the stepwise regression model, diagnosis (P = 0.0232), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0167), previous treatment with mitoxantrone (P = 0.0285) and platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0423) were found to be independent negative predictive factors for CD34+ cells mobilization. Conclusion: Cumulative load of chemotherapy, exposition to Mitoxantrone, platelet count just prior to mobilization and diagnosis were independent factors related to poor progenitor cells mobilization. These results could help in the previously recognition of patients at risk for poor or no response to mobilization and allow to plan an alternative or more aggressive regimen for this group of patients.
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Ação educativa do enfermeiro no cuidado domiciliar de adolescentes e crianças: uso do fator estimulador de crescimento de colônia granulocítica (G-CSF) – uma perspectiva fenomenológica

Silva, Elizabeth Maria Oliveira da January 2016 (has links)
Submitted by Fabiana Gonçalves Pinto (benf@ndc.uff.br) on 2017-08-28T20:29:28Z No. of bitstreams: 1 Elizabeth Maria Oliveira da Silva.pdf: 2307471 bytes, checksum: 8d4691afbac0bcd5899bff0e397c4b96 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T20:29:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elizabeth Maria Oliveira da Silva.pdf: 2307471 bytes, checksum: 8d4691afbac0bcd5899bff0e397c4b96 (MD5) Previous issue date: 2016 / Mestrado Profissional em Enfermagem Assistencial / Problema: Atualmente o câncer infantil representa a segunda causa de morte na faixa etária de 5 a 19 anos, ultrapassado apenas pelos óbitos provocados por causas externas. E, a partir do diagnóstico, traça-se uma das propostas de tratamento, a terapêutica com os agentes antineoplásicos, conhecidos como quimioterápicos, os quais são responsáveis pelo longo período de internação, tendo em vista que um dos efeitos adversos desta terapêutica com maior incidência é a neutropenia pós-quimioterapia. Tal condição representada pela contagem de neutrófilos inferior a 1500/m3 torna necessário o uso de moduladores de resposta muitas vezes em domicílio. Objetivo: Este estudo tem como objetivo construir uma ação educativa durante a utilização em domicílio do fator estimulador de colônias granulocíticas (G-CSF), pelo paciente e/ou familiar, buscando conhecer o significado desta ação educativa a ser construída em conjunto com os familiares, considerando e respeitando o conhecimento e saber emanado por eles, em todo o processo holístico de saúde onde o indivíduo apresenta necessidades interligadas ao meio que o cerca. Método: É um estudo de natureza qualitativa, tipo descritivo com apropriação do método fenomenológico na percepção de Maurice Merleau Ponty, e a teoria transpessoal de Jean Watson e teve como cenário o centro de quimioterapia infantil do Instituto Nacional de Câncer, que é uma Instituição Pública Federal de referência na área oncológica, e obteve aprovação no CEP em 22/12/2015n° do CAAE-51715515.500005243 e no CEP da instituição coparticipante em 07/01/2016 n0 do CAAE-51715515.5.3001.5274. O estudo foi desenvolvido em conformidade com os princípios éticos estabelecidos na Resolução do Conselho Nacional de Saúde (CNS) 466/12. Resultado: A coleta de dados ocorreu no serviço de quimioterapia infantil por meio de entrevista com participação de dezoito familiares. As entrevistas foram transcritas na integra com apropriação do método de Giorgi e após analise a luz da fenomenologia da Percepção de Maurice Merleau-Ponty originou-se a formação de quatro categorias: Categoria 1-O impacto do diagnóstico de câncer na perspectiva do familiar; Categoria 2-O significado do câncer e tratamento na percepção do familiar; Categoria 3-A importância da espiritualidade na percepção do familiar da criança com câncer; 4-O significado do cuidado domiciliar na perspectiva do familiar. Considerações finais: Durante o decorrer deste estudo percorreu-se um caminho direcionado ao cuidado, tanto ao cuidador quanto do ser a ser cuidado com o objetivo de compreender e auxiliar os familiares no processo do cuidar a partir da percepção da experiência vivenciada por estes em um contexto familiar. Tais propósitos incluíram o respeito e valorização do conhecimento e das experiências desses familiares, incluindo suas crenças, cultura, e hábitos sociais. E, neste contexto é de extrema importância que o enfermeiro vivencie a experiência a partir da percepção do sujeito deste estudo, considerando os conceitos humanísticos, visando almejar uma assistência cada vez mais qualificada e de excelência, o que propiciou a construção de uma tecnologia educacional (cartilha educativa), no que se refere ao uso em domicilio do fator estimulador de crescimento de colônias de granulócitos / Problem: Currently, childhood cancer represents the second cause of death in the age group of 5 to 19 years, surpassed only by deaths caused by external causes. From the diagnosis, one of the treatment proposals is the treatment with antineoplastic agents, known as chemotherapeutic agents, which are responsible for the long period of hospitalization, considering that neutropenia is one of the adverse effects of this therapy with a higher incidence after chemotherapy. That condition, represented by the neutrophil count below 1500 / m3 makes it necessary to use response modulators often at home. Objective: This study aimed to construct an educational action during the use of the granulocytic colony-stimulating factor (G-CSF), by the patient and / or family member at home. It seeks to know the meaning of this educational action built together with the family, considering and respecting the knowledge and knowledge emanated by them, throughout the holistic process of health where the individual present needs interconnected to the environment that surrounds him. Method: It is a descriptive qualitative study, based on the phenomenological method from the perspective of Maurice Merleau Ponty, and the transpersonal theory of Jean Watson. It had as setting the child chemotherapy center of the National Cancer Institute, which is a public federal hospital, specialized in oncology area, and obtained approval in the CEP on 12/22/2015 under protocol number CAAE-51715515.500005243 and in the CEP of the participating Institution on 07/01/2016 under protocol number CAAE-51715515.5.3001.5274. The study was developed in conformity with the ethical principles set out in National Health Council (CNS) Resolution No.466/12. Results: Data collection took place in the infant chemotherapy service through an interview with the participation of eighteen relatives. We transcribed the interviews in full, with appropriation of the Giorgi method, followed by analysis under the perspective of the phenomenology of Perception by Maurice Merleau Ponty. Then, four categories originated category 1. The impact of the cancer diagnosis from the family perspective; category; 2. The meaning of the cancer and treatment under the perception of the family member; category 3. The importance of the spirituality under the perception of the family member of the child with cancer; -the meaning of home care from the perspective of the family member. Final Considerations. During the development of this study, we went through a path directed to care that reached both the caregiver and the being to be cared for with the objective of understanding and helping the family in the care process from the perception of experiences lived by them in a family context. Such purposes included the respect and valorization of the knowledge and experiences of these relatives, including their beliefs, culture, and social habits. And in this context, it is extremely important that nurses live the experience from the perception of the subject of this study, considering the humanistic concepts, aiming for an increasingly qualified and excellent assistance, which has enabled the construction process of an educational technology (educational leaflet) as regards the use at home of granulocytes colony stimulating factor
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Coleta de células progenitoras hematopoéticas de sangue periférico após administração de ciclofosfamida e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF): uma análise de 307 pacientes / Collection of peripheral blood progenitor cell after administration of cyclophosphamide and granulocyte-colony stimulating factor (GCSF): an analysis of 307 patients

Alfredo Mendrone Junior 23 April 2008 (has links)
Mobilização inadequada de células progenitoras hematopoéticas (CPH) tem sido observada em 10 - 30% dos pacientes submetidos a transplante de medula óssea (TMO) autogênico para tratamento de doenças onco-hematológicas. Os fatores relacionados com má resposta à mobilização ainda não estão totalmente estabelecidos. Apresentamos uma análise retrospectiva de pacientes submetidos à TMO autogênico com o objetivo de identificar variáveis associadas com resposta ruim ao regime de mobilização utilizado. Casuística e Métodos: Fizeram parte desta análise 307 pacientes com diferentes diagnósticos, tratados com TMO autogênico em uma única Instituição, no período de Abril de 2001 a Abril de 2007. Todos os pacientes incluídos no estudo foram submetidos a um único regime de mobilização baseado na administração de ciclofosfamida (dose total de 60-120 mg/kg de peso IV) e fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) (dose diária de 6 - 17 ug/(kg de peso)/dia SC). O sucesso na resposta ao regime de mobilização foi definido quando um número maior ou igual a 2,0x10 (6) células CD34 + /(kg de peso) foi coletado do sangue periférico com até três procedimentos de leucaférese. Resultados: Dos pacientes analisados, 260 apresentaram sucesso na mobilização (84,7%). Nestes pacientes, um número mediano de 3,67 (2,0 - 46,0) células CD34+ /(kg de peso) foi coletado por paciente com um número mediano de 1 (1-3) procedimento de leucaférese. O insucesso na mobilização foi observado em 47 pacientes (15,3%): 24 (7,8%) que foram submetidos à coleta de CPH de sangue periférico, porém não coletaram número maior ou igual 2,0x10 (6) células CD34+/(kg de peso) com pelo menos três procedimentos de leucaférese; e, 23 (7,5%) foram submetidos à coleta de CPH por punção da medula óssea, por não terem atingido número mínimo de 10 células CD34+/mm3 no sangue periférico para realização de leucaférese. De acordo com análise univariada, os fatores associados com o insucesso foram: diagnóstico (P < 0,0001), tempo de doença (P < 0,0001), número prévio de ciclos de quimioterapia (P = 0,0001), exposição prévia a agentes alquilantes (P = 0.0003) e a mitoxantrone (P = 0,0006), contagem de plaquetas pré-mobilização <150.000/mm3 (P = 0,0006) e intervalo entre o início da mobilização e o pico de células CD 34+ no sangue periférico (P < 0,0001). Idade, sexo, atividade da doença e envolvimento medular ao início da mobilização, tratamento prévio com radioterapia e exposição a análogos da platina não mostraram correlação significativa na resposta à mobilização. Após análise multivariada, as variáveis que permaneceram associadas com insucesso na mobilização foram: diagnóstico (P = 0,0232), número prévio de ciclos da quimioterapia (P = 0,0167), tratamento prévio com mitoxantrone (P = 0,0285) e contagem de plaquetas pré-mobilização < 150.000/mm3 (P = 0,0423). Conclusão: A carga cumulativa de quimioterapia administrada, exposição prévia à mitoxantrone, contagem de plaquetas pré-mobilização e diagnóstico foram os fatores independentes relacionados com a falha na resposta à mobilização. Os achados obtidos podem auxiliar no reconhecimento de pacientes de risco para resposta ruim à mobilização e permitir um planejamento alternativo ou mais agressivo no regime de mobilização para este grupo de pacientes. / Inadequate stem cells mobilization is seen in 10-30% of patients undergoing autotransplantation for hematologic malignancies. Factors affecting peripheral blood progenitor cell (PBSC) mobilization have not been clearly established. We retrospectively reviewed the data of patients treated by autologous bone marrow transplantation (BMT) with the aim to identify factors associated with poor PBSC mobilization. Design and Methods: We evaluated 307 patients with different diagnoses, submitted to autologous BMT between April 2001 and April 2007. PBSC were collected following mobilization with cyclophosphamide (60-120 mg/kg of weight IV) and granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) (dose of 6-17 ug/kg of weight/day SC). Success in mobilization was defined when > ou = a 2,0x10(6) CD34+ cells/(kg weight) could be collected from the peripheral blood with a maximum of three leukapheresis procedures. Clinical and laboratory parameters at the time of mobilization were analyzed for correlations with the number of CD34+ cells collected. Results: Two hundred and sixty patients (84.7%) presented success in mobilization. In this group, a median of 3.67 (2.0-46.0) CD34+ cells/(kg weight) was collected per patient in a median of 1(1-3) leukapheresis procedure. Poor response to mobilization was observed in 47 patients (15.3%): 24 (7.8%) were submitted to PBSC collection but didn\'t collected at least 2.0 x 106 CD34+ cells/(kg weight) with three leukapheresis procedures and 23 (7.5%) didn\'t reach an absolute number count of 10 CD34+ cells/mm3 in the peripheral blood to start collection by leukapheresis. In univariate analysis poorer PBSC mobilization was associated with diagnosis (Pp < 0.0001), time interval from the diagnosis to mobilization (P < 0.0001), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0001), previous treatment with alkylating agents (P = 0.0003) and mitoxantrone (P = 0.0006), platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0006) and interval between mobilization and peak of CD34+ cells in peripheral blood (P < 0.0001). No significant correlation was found with age, gender, disease status, marrow involvement at mobilization, prior radiation therapy and exposition to platin analogues. In the stepwise regression model, diagnosis (P = 0.0232), number of cycles of previous chemotherapy (P = 0.0167), previous treatment with mitoxantrone (P = 0.0285) and platelet count <150.000/mm3 before mobilization (P = 0.0423) were found to be independent negative predictive factors for CD34+ cells mobilization. Conclusion: Cumulative load of chemotherapy, exposition to Mitoxantrone, platelet count just prior to mobilization and diagnosis were independent factors related to poor progenitor cells mobilization. These results could help in the previously recognition of patients at risk for poor or no response to mobilization and allow to plan an alternative or more aggressive regimen for this group of patients.
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ESTUDO DE MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS PARA AVALIAÇÃO DE POTÊNCIA DE FILGRASTIMA E CORRELAÇÃO COM ENSAIO BIOLÓGICO / STUDY OF CHROMATOGRAPHYC METHODS FOR THE POTENCY EVALUATION OF FILGRASTIM AND CORRELATION WITH BIOLOGICAL ASSAY

Masiero, Silvia Maria Krug 23 June 2006 (has links)
The granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) is a hematopoietic cytokine that stimulates and regulates the proliferation and differentiation of neutrophil precursor cells of the bone marrow. The recombinant hormone (rhG-CSF) non-glycosylated, filgrastim, is used to treat the neutropenia induced by chemotherapy and bone marrow transplantion. The identification and characterization was carried out by electrophoresis and western blotting, showing the typical band in the region of 18.8 kDa. The neutropenia mouse bioassay was standardized with the BALB/c strain, previously treated with ifosfamide and used for the potency assessment of pharmaceutical products. A gradient reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) was validated for the analysis of rhG-CSF in pharmaceutical formulations. The LC method was carried out on a Jupiter C4 column 300 Å (250 mm x 4.6 mm i.d.), maintained at ambient temperature. The mobile phase A consisted of water:acetonitrila (90:10, v/v) with 0.1% trifluoroacetic acid and the mobile phase B was water:acetonitrile (20:80, v/v) with 0.1% trifluoroacetic acid, run at a flow rate of 0.5 mL/min with detection at 280 nm. The chromatographic separation was obtained with the retention time of 31.9 minutes and the method was linear in the range of 10 300 μg/mL. Validation parameters such as sensitivity, precision, accuracy, detection limit, quantitation limit and robustness were evaluated giving results in the acceptable range. The specificity was evaluated by the peak purity of the rhG-CSF biological reference preparation subjected to oxidative conditions. The proposed method was applied for the analysis of filgrastim pharmaceutical products, evaluating the sulphoxides and deamidates forms as well. Moreover, the size-exclusion chromatography (SE-LC) was performed for the potency evaluation of 7 filgrastim, dimers and high-molecular-mass forms. Samples of pharmaceutical formulations were subjected to aggregation, degradation and than each one evaluated by the neutropenia mouse bioassay giving biological activities of 14.60%, 13.47% and 15.63%, for the dimers, high-molecular-mass substances and the sulphoxides/deamidates, respectively. The pharmaceutical samples were analysed by the chromatographyc methods and compared to the bioassay showing mean difference between the estimated potencies of 2.04% lower for the RP-LC, and 4.03% lower for the SE-LC, with significant correlation (p>0.05). Due to the reduced bioactivity of the rhG-CSF-related proteins, the SE-LC is proposed in combination with the RP-LC as an alternative to the bioassay for the potency assessment of filgrastim in pharmaceutical dosage forms. The alternative established represents a contribution towards the replacement of the animals improving the quality control and assuring the safety and efficacy of the biological product. / O fator estimulador da colônia de granulócitos humanos é uma citocina hematopoiética que estimula e regula a proliferação e diferenciação de células precursoras de neutrófilos da medula óssea. O hormônio recombinante (rhG-CSF) sob a forma nãoglicosilada, filgrastima, é usado para o tratamento de neutropenias. Realizou-se a identificação de filgrastima em produtos farmacêuticos por eletroforese, transferência e detecção com anticorpos específicos, demonstrando-se banda única na região de peso molecular de, aproximadamente, 18,8 kDa. Avaliou-se a atividade pelo ensaio biológico da neutropenia em camundongos da linhagem BALB/c, pré-tratados com ifosfamida. Desenvolveu-se e validou-se o método por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR), utilizando coluna Júpiter C4 300 Å (250 mm x 4,6 mm, i.d.), mantida a temperatura ambiente. A fase móvel A foi constituída de água/acetonitrila (90:10, V/V)/ 0,1% ácido trifluoroacético e a fase móvel B de água/acetonitrila (20:80, V/V)/ 0,1% ácido trifluoroacético, eluída em gradiente na vazão de 0,5 mL/min com detecção no ultravioleta a 280 nm. A análise cromatográfica viabilizou a separação da filgrastima no tempo de retenção de 31,9 min, sendo linear na faixa de concentração de 10 300 μg/mL. Avaliaram-se os parâmetros de precisão, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação e robustez. Estudou-se também a especificidade, através da determinação da pureza do pico da Substância biológica de referência de rhG-CSF, submetida à degradação sob condições oxidativas. O método proposto foi utilizado para análise de filgrastima em produtos farmacêuticos, determinando-se as formas de sulfóxidos e desamidados. Paralelamente, efetuaram-se avaliações de potência por cromatografia líquida por exclusão molecular (CL-EM), determinando as formas diméricas e de alta massa molecular. Amostras de produtos farmacêuticos foram submetidas a condições de agregação e degradação e, então, avaliadas pelo bioensaio da neutropenia em 5 camundongos, obtendo-se atividades biológicas de 14,60%, 13,47% e 15,63%, para os dímeros, substâncias de alta massa molecular e sulfóxidos/desamidados, respectivamente. Estudou-se a correlação entre métodos e demonstrou-se que as análises dos produtos farmacêuticos forneceram diferenças médias 2,04% menor por CL-FR, e significativa de 4,03% menor por CL-EM, em relação ao ensaio biológico. Devido à reduzida bioatividade das formas alteradas, conclui-se sugerindo a adoção do método por CL-EM para a avaliação de potência de filgrastima, em combinação com CL-FR. Desse modo, estabeleceu-se alternativa no contexto da substituição do uso de animais, contribuindo para aprimorar o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do produto biológico.
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VALIDAÇÃO DE MÉTODO POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA EM FASE REVERSA PARA AVALIAÇÃO DE POTÊNCIA DE MOLGRAMOSTIMA. CORRELAÇÃO COM O BIOENSAIO / VALIDATION OF A REVERSED-PHASE LIQUID CHROMATOGRAPHY METHOD FOR THE POTENCY EVALUATION OF MOLGRAMOSTIM. CORRELATION WITH THE BIOASSAY

Leal, Diogo Paim 24 September 2010 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) is a cytokine that regulates the proliferation and differentiation of hematopoietic progenitor cells and activates mature granulocytes and macrophages. Clinically is used in enhancing hematopoietic recovery after cancer chemotherapy and bone marrow transplantation. A reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) method was validated for the determination of the non-glycosylated recombinant rhGM-CSF (Molgramostim) in biopharmaceutical formulations. The RP-LC method was carried out on a Jupiter C4 column (250 mm x 4.6 mm i.d.), maintained at 45 ºC. The mobile phase A consisted of 0.1% TFA and the mobile phase B consisted of 0.1% TFA in acetonitrile, run at a gradient from: 0.01 34 min, 37% 50% of B; 34 35 min linear back to 37% of B and 35 40 min, 37% of B. The flow rate was 1 mL/min, and using photodiode array (PDA) detection at 214 nm. The chromatographic separation was obtained with the retention time of 29.2 min, and was linear over the concentration range of 2-300 μg/mL (r2 = 0.9992). The procedure was validated evaluating parameters such as the specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection and limit of quantitation. The specificity was proven through degradation studies, showing that also there was no interference of the excipients. Moreover, the in vitro cytotoxicity test of the degraded products showed significant differences (p<0.05). The proposed method was applied for the analysis of molgramostim and their related proteins, and the results were correlated to the bioassay, showing mean differences of the potency 1.02% higher for the RP-LC method, contributing to establish alternatives to characterize and monitoring its instability, improving the quality control and assuring the therapeutic efficacy. / O fator estimulador da colônia de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) é uma citocina que regula a proliferação e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas e ativa granulócitos e macrófagos maduros. É clinicamente indicado após quimioterapia para o câncer e após transplante de medula óssea. No presente trabalho foi validado método por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) para a avaliação da molgramostima, forma recombinante não-glicosilada do GM-CSF, em formulação biofarmacêutica. Utilizou-se coluna Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm d.i.), mantida a 45 °C. A fase móvel A foi composta de ácido trifluoracético 0,1% e a fase móvel B de ácido trifluoracético 0,1% em acetonitrila, eluídas no gradiente: 0,01 34 min, 37 50% de B; 34 35 min, 50 37% de B, mantendo-se nesta proporção até 40 min. Utilizou-se vazão de 1 mL/min, usando detector de arranjo de diodos (DAD) a 214 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 29,2 min, sendo linear na faixa de concentração de 2 300 μg/mL (r2 = 0,9992). O procedimento foi validado, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação. A especificidade foi comprovada através de estudos de degradação, demonstrando também que não houve interferência dos excipientes. Além disso, realizou-se o teste de citotoxicidade in vitro dos produtos degradados que apresentaram diferença significativa (p<0,05). O método foi aplicado para avaliação de potência de molgramostima e de proteínas relacionadas, e os resultados foram correlacionados com o bioensaio, observando-se diferenças médias de potência 1,02% superiores por CL-FR. Contribuiu-se assim para o estabelecimento de alternativas que aprimoram o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica.
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Estratégia alimentar e densidade de estocagem para acarádisco (Symphysodon aequifasciata) / Feeding strategy and stocking density for discus fish (Symphysodon aequifasciata)

BEERLI, Eduardo Lopes 29 May 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Eduardo FINAL.pdf: 833614 bytes, checksum: 73be39460b25a5571084c5593253b76b (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / Four diets were tested to verify the effect of beef heart as feed enhancer for discus fish, studding the growth, weight gain, survivor, consumption, water quality and economic performance variables. Is was utilized 12 aquariums, distributed in 4 treatments and 3 replications. The treatments were: T1- 100% ration (42%PB); T2- 75% ration and 25% beef heart; T3- 50% ration and 50% beef heart and T4- 25% ration and 75% beef heart. The diets were feed until fish s satiation, twice by day, at 8:00h and 17:00h. After each feed time, 40% of water was changed. Each aquarium contained 20 fishes, totalizing 240 discus fishes. The following water quality parameters were available: pH, dissolved oxygen, temperature and ammonia. There wasn`t effect of treatments on survivor. The dry matter consumption was higher in 50% and 75% of beef heart diets, and better growth and weight gain were obtained, but 50% of beef heart were at a low price, and were considered the best diet. The relative condition factor (Kn) analysis indicate better body condition of fishes according beef heart was higher in tested diets. The economic performance shows that 75% of beef heart obtain lower cost index, but 50% of beef heart obtain higher partial liquid income. However beef heart diets turn water cloudy, the analyzed water quality parameters keep suitable for fishes. The conclusion is that beef heart is efficient as feed enhancer for discus fish and that 50% of beef heart with 50% of ration provide better performance and higher economic gain. / Foram elaborados dois experimentos para obter dados zootécnicos que auxiliem a produção comercial do acará-disco (Symphysodon aequifasciata), com os seguintes objetivos: a) verificar a eficácia da adição de coração de boi como estimulador de consumo, sobre as variáveis de desempenho, sobrevivência, consumo, qualidade de água e desempenho econômico; b) avaliar o efeito da densidade de estocagem sobre o desempenho do acará-disco e obter informações econômicas para determinar qual a melhor densidade para cultivo desta espécie em aquários. No primeiro experimento foram utilizados 12 aquários, com 20 peixes, totalizando 240 acará-disco, divididos em quatro tratamentos e três repetições. Os tratamentos foram: T1- 100% ração (42%PB); T2- 75% ração e 25% coração de boi; T3- 50% ração e 50% coração de boi e T4- 25% ração e 75% coração de boi. As dietas foram fornecidas aos peixes até a saciedade, duas vezes por dia, nos horários de 8:00h e 17:00h. Os tratamentos com 50% e 75% de coração de boi proporcionaram crescimento e ganho de peso significativamente superior, entretanto a dieta com 50% de coração de boi foi mais econômica, sendo considerada a melhor. O segundo experimento recebeu a dieta com 25% ração e 75% coração de boi. As dietas foram fornecidas aos peixes até a saciedade, duas vezes por dia, nos horários de 8:00h e 17:00h. Foram testadas densidades de 8, 12, 16 e 20 peixes/aquário. Os resultados foram submetidos a análises de regressão e a densidade calculada que proporcionaria maior desempenho seria de 17,5 peixes/aquário.

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