Orientador : Osvaldo Malafaia / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciencias da Saúde

Objetivo: Estabelecer relação entre a sobrevivência de retalhos cutâneos em ilha submetidos à isquemia prolongada e o uso da estreptoquinase e do alopurinol administrados após o período de isquemia prolongado. Método: Foram utilizados 48 ratos machos da raça Wistar, com pesos entre 300 e 350g, divididos em quatro grupos com 12 cada um, sendo; grupo controle, alopurinol, estreptoquinase e associação de alopurinol com estreptoquinase, submetidos à dissecção de retalho epigástrico em ilha, seguido de clampeamento do feixe vascular, por 8 horas em isquemia mista normotérmica. Após este período, as pinças foram retiradas e cada animal recebeu o esquema terapêutico proposto através de injeção intravenosa. A análise da sobrevivência dos retalhos foi realizada no sétimo dia de pós-operatório. Foram realizadas análises descritivas (% de área necrótica) e de variâncias, bem como, comparações múltiplas de Dunnett T3 entre os quatro grupos e o teste da mediana. Resultados: O grupo controle apresentou em média 79,88% de necrose da área total, aqueles que receberam alopurinol apresentaram em média 64,05% de necrose e o grupo que recebeu estreptoquinase apresentou em média 55,52% de necrose. Com a associação das duas drogas os ratos apresentaram em média 54,30% de área necrótica. Aplicando o teste Dunnett e o teste da mediana verificouse de que o grupo estreptoquinase é o que possui o menor percentual de necrose neste estudo, e o que apresentou diferença estatística significativa em relação ao grupo controle. Conclusão: A administração sistêmica da estreptoquinase após 8 horas de isquemia mista normotérmica resultou em aumento da sobrevivência de retalhos epigástricos em ilha em ratos, quando comparado à administração de alopurinol, associação do alopurinol e estreptoquinase e do grupo controle / Background: To establish a relation between the survival rate of island skin flaps submitted to a prolonged ischemia and the effect of streptokinase and allopurinol administered after the ischemic period. Methods: A total of 48 male Winstar rats, each weighing between 300 and 350 grams, separated in four groups of twelve each, as follows: control, alopurinol, streptokinase and association of allopurinol and streptokinase, were submitted to an epigastric island flap dissection followed by the epigastric vessel bundle clamping. Flaps remained this way for 8 hours in normothermic mixed ischemia. After the ischemic period, the clamps were removed and each rat received the therapeutical scheme proposed for the group through intravenous injections. Flap survival analysis was performed on the seventh post operative day. Variance and descriptive analyses (as a percentage of the necrotic area) as well as Dunnett-T3 multiple comparisons among the 4 groups and median tests were carried out. Results: Rats in the control group presented an average of 79.88% of necrosis in the flap total area; those which received allopurinol presented an average of 64.05% of necrosis whereas the group which received streptokinase showed an average of 55.52% of necrosis. With the association of both drugs, rats presented an average of 54.30% of necrosis in the flap total area. . By applying Dunnet test and the median test, we could verify that the streptokinase group had the lowest necrosis rate in this study. Conclusion: The systemic administration of streptokinase after 8 hours of normothermic global ischemia resulted in an increase in survival rate of epigastric island skin flaps in rats, when compared to the administration of alopurinol, association of the two drugs and the control group

Streptokinase is clinically used as a thrombolytic agent for the treatment of patients with acute myocardial infarction and venous and arterial thrombosis. In the present work, a substrate chromogenic assay was validated for the potency evaluation of biopharmaceutical formulations. Method validation investigated parameters such as the linearity (r²=0.9988) intra- and inter- day precision, accuracy and robustness; the method yielded good results with a quantitation limit of 2.50 IU/mL and a detection limit of 1.10 IU/mL. The biological assay was carried out by chromogenic end point giving potencies between 98.42% and 108.97%. The results demonstrated the validity of the chromogenic assay for the potency assessment of streptokinase in biopharmaceutical formulations. Besides, the activities of streptodornase and streptolysin were evaluated in the same samples by optimized assays based on the biological activity, giving results according to the Pharmacopoeial specifications. The combination of assays is necessary to assure the quality, and to improve the methods that can be applied for the characterization of streptokinase, by ensuring batch-to-batch consistency of the bulk and finished biopharmaceutical products. / A estreptoquinase é clinicamente utilizada como agente trombolítico para o tratamento de pacientes com infarto agudo do miocárdio e trombose arterial e venosa. Neste trabalho, validouse o ensaio com substrato cromogênico para a determinação de potência de formulações biofarmacêuticas. O método foi validado, avaliando-se os parâmetros de linearidade (r² = 0,9988), precisão intra e inter-dias, exatidão e robustez; o método mostrou resultados adequados, os quais cumpriram os requisitos preconizados, com limite de quantificação de 2,50 UI/mL e limite de detecção de 1,10 UI/mL. O ensaio biológico foi realizado pelo método de ponto final cromogênico, fornecendo potências entre 98,42% e 108,97%. Os resultados demonstraram a validade do ensaio cromogênico para a determinação de potência de estreptoquinase nas formulações biofarmacêuticas. Além disto, as atividades de estreptodornase e estreptolisina foram avaliadas nas mesmas amostras, por métodos otimizados baseados na atividade biológica, dando resultados de acordo com as especificações farmacopeicas. A combinação de ensaios é necessária para assegurar a qualidade e aprimorar os métodos que podem ser aplicados para a caracterização de estreptoquinase, assegurando a consistência entre lotes de soluções concentradas e de produtos biofarmacêuticos acabados.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-15Bitstream added on 2014-06-13T19:20:11Z : No. of bitstreams: 1 dias_dpm_dr_jabo.pdf: 1050559 bytes, checksum: 7a07158370abdb59cd93a29b2daf1a46 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A tromboflebite jugular é frequentemente encontrada em equinos causando comprometimento circulatório grave nas regiões cervical e cefálica. Até o presente momento, não há relatos que avaliem as alterações hemodinâmicas em equinos causadas pela obstrução venosa jugular por trombo durante o exercício. Da mesma forma, não há relatos da eficácia da terapia trombolítica regional com estreptoquinase no tratamento desta alteração vascular em equinos. Os objetivos deste trabalho foram: avaliação da técnica cirúrgica de canulação da artéria facial e manutenção prolongada do cateter com solução de heparina e ácido ascórbico, visando realizar de forma seriada colheita de amostras sanguíneas e avaliação invasiva de pressão arterial, durante o exercício em esteira rolante; estabelecimento de um modelo de indução de tromboflebite da veia jugular de equinos utilizando solução de dois agentes esclerosantes associados: oleato de etanolamina 5% e glicose 50%; avaliação da terapia trombolítica regional com estreptoquinase como tratamento da tromboflebite jugular induzida experimentalmente em equinos; avaliação hemodinâmica de equinos submetidos a oclusão unilateral da veia jugular por tromboflebite induzida. Vinte equinos adultos foram utilizados para conclusão dos protocolos. O procedimento de cateterização da artéria facial e manutenção do cateter com solução de heparina e ácido ascórbico, manteve a via arterial viável por 25 dias. O protocolo de indução não cirúrgica de tromboflebite jugular experimental foi eficaz em reproduzir a lesão de forma padronizada. Foram observadas alterações hemodinâmicas significativas nos equinos apresentando oclusão jugular por trombose induzida, durante o exercício de esforço progressivo em esteira rolante... / Thrombophlebitis of the jugular vein is commonly observed in horses leading to head and neck circulatory impairment. To date, there are no reports evaluating hemodynamic changes in horses presenting thrombus obstruction during the exercise. In addition, there are no studies about the use of streptokinase in thrombolytic therapy for treatment of jugular vein thrombophlebitis in horses. The purposes of this study were: to evaluate the technique for facial artery catheter implantation and long-term maintenance using heparin and ascorbic acid as a filling solution, to perform serial blood sampling and invasive arterial pressure measurement during the exercise on treadmill; establishment of an equine jugular vein thrombophlebitis induction model using a solution of two sclerosing agents in association: ethanolamine oleate 5% and glucose 50%; hemodynamic evalution in horses presenting unilateral occlusion of the jugular vein through experimental inducted thrombophlebitis; evaluation of regional thrombolytic therapy using streptokinase as a treatment for jugular vein inducted thrombophlebitis in horses. Twenty adult horses were assessed to conclude all the protocols. Procedures for facial artery catheterization and maintenance using heparin and ascorbic acid as a filling solution kept the arterial line open for 25 days. The nonsurgical protocol to induce experimental jugular thrombophlebitis was efficient in reproduce a standardized lesion. Significative hemodynamic changes were observed in the horses presenting jugular occlusion through induced thrombosis during the exercise on treadmill. Streptokinase thrombolytic therapy test showed that the drug exerts fibrinolytic action on horses’ thrombus, however it was not capable to permanently recanalize injuried vessels

Objetivo: Estabelecer relação entre a sobrevivência de retalhos cutâneos em ilha submetidos à isquemia prolongada e o uso da estreptoquinase e do alopurinol administrados após o período de isquemia prolongado. Método: Foram utilizados 48 ratos machos da raça Wistar, com pesos entre 300 e 350g, divididos em quatro grupos com 12 cada um, sendo; grupo controle, alopurinol, estreptoquinase e associação de alopurinol com estreptoquinase, submetidos à dissecção de retalho epigástrico em ilha, seguido de clampeamento do feixe vascular, por 8 horas em isquemia mista normotérmica. Após este período, as pinças foram retiradas e cada animal recebeu o esquema terapêutico proposto através de injeção intravenosa. A análise da sobrevivência dos retalhos foi realizada no sétimo dia de pós-operatório. Foram realizadas análises descritivas (% de área necrótica) e de variâncias, bem como, comparações múltiplas de Dunnett T3 entre os quatro grupos e o teste da mediana. Resultados: O grupo controle apresentou em média 79,88% de necrose da área total, aqueles que receberam alopurinol apresentaram em média 64,05% de necrose e o grupo que recebeu estreptoquinase apresentou em média 55,52% de necrose. Com a associação das duas drogas os ratos apresentaram em média 54,30% de área necrótica. Aplicando o teste Dunnett e o teste da mediana verificouse de que o grupo estreptoquinase é o que possui o menor percentual de necrose neste estudo, e o que apresentou diferença estatística significativa em relação ao grupo controle. Conclusão: A administração sistêmica da estreptoquinase após 8 horas de isquemia mista normotérmica resultou em aumento da sobrevivência de retalhos epigástricos em ilha em ratos, quando comparado à administração de alopurinol, associação do alopurinol e estreptoquinase e do grupo controle / Background: To establish a relation between the survival rate of island skin flaps submitted to a prolonged ischemia and the effect of streptokinase and allopurinol administered after the ischemic period. Methods: A total of 48 male Winstar rats, each weighing between 300 and 350 grams, separated in four groups of twelve each, as follows: control, alopurinol, streptokinase and association of allopurinol and streptokinase, were submitted to an epigastric island flap dissection followed by the epigastric vessel bundle clamping. Flaps remained this way for 8 hours in normothermic mixed ischemia. After the ischemic period, the clamps were removed and each rat received the therapeutical scheme proposed for the group through intravenous injections. Flap survival analysis was performed on the seventh post operative day. Variance and descriptive analyses (as a percentage of the necrotic area) as well as Dunnett-T3 multiple comparisons among the 4 groups and median tests were carried out. Results: Rats in the control group presented an average of 79.88% of necrosis in the flap total area; those which received allopurinol presented an average of 64.05% of necrosis whereas the group which received streptokinase showed an average of 55.52% of necrosis. With the association of both drugs, rats presented an average of 54.30% of necrosis in the flap total area. . By applying Dunnet test and the median test, we could verify that the streptokinase group had the lowest necrosis rate in this study. Conclusion: The systemic administration of streptokinase after 8 hours of normothermic global ischemia resulted in an increase in survival rate of epigastric island skin flaps in rats, when compared to the administration of alopurinol, association of the two drugs and the control group

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AbdoFN_TESE.pdf: 1739510 bytes, checksum: 7f520b9c4a32fd74e279d017c0bdd143 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Foam was developed as a novel vehicle for streptokinase with the purpose of increasing the contact time and area between the fibrinolytic and the target thrombus, which would lead to a greater therapeutic efficacy at lower doses, decreasing the drug s potential to cause bleeding. Fibrinolytic foams were prepared using CO2 and human albumin (at different v:v ratios), as the gas and liquid phases, respectively, and streptokinase at a low total dose (100,000 IU) was used as fibrinolytic agent conveyed in 1 mL of foam and in isotonic saline solution. The foams were characterized as foam stability and apparent viscosity. The thrombolytic effect of the streptokinase foam was determined in vitro as thrombus lysis and the results were compared to those of a fibrinolytic solution (prepared using the same dose of streptokinase) and foam without the fibrinolytic. In vitro tests were conducted using fresh clots were weighed and placed in test tubes kept at 37 ? C. All the samples were injected intrathrombus using a multiperforated catheter. The results showed that both foam stability and apparent viscosity increased with the increase in the CO2:albumin solution ratio and therefore, the ratio of 3:1 was used for the incorporation of streptokinase. The results of thrombus lysis showed that the streptokinase foam presented the highest thrombolytic activity (44.78 ? 9.97%) when compared to those of the streptokinase solution (32.07 ? 3.41%) and the foam without the drug (19.2 ? 7.19%). We conclude that fibrinolytic foam showed statistically significant results regarding the enhancement of the lytic activity of streptokinase compared to the effect of the prepared saline solution, thus it can be a promising alternative in the treatment of thrombosis. However, in vivo studies are needed in order to corroborate the results obtained in vitro / Uma espuma foi desenvolvida como novo ve?culo para a estreptoquinase com vistas a aumentar a ?rea de contato e o tempo de perman?ncia junto ao trombo, de modo a se obter maior efici?ncia terap?utica em doses menores, diminuindo suas potenciais complica??es hemorr?gicas. A espuma fibrinol?tica foi preparada com CO2, albumina humana e estreptoquinase, em dispositivo desenvolvido para tal fim, com diferentes raz?es de fases g?s/l?quido. Ensaios de estabilidade e viscosidade aparente foram realizados para caracteriza??o das espumas e a escolha da mais est?vel. A estreptoquinase em dose total reduzida (100.000 UI) foi utilizada como fibrinol?tico veiculado em 1 mL de espuma e em solu??o salina isot?nica (0,9%). A espuma sem fibrinol?tico tamb?m foi utilizada como comparativo. Testes in vitro foram realizados utilizando-se co?gulos frescos, que foram pesados e colocados em tubos de ensaio mantidos a 37?C. As espumas com e sem fibrinol?tico e a solu??o fibrinol?tica foram testadas por aplica??o intraco?gulo em doses id?nticas atrav?s de cateter multiperfurado e pistola de inje??o. Os resultados in vitro evidenciaram atrav?s da diminui??o dos pesos dos co?gulos, que a espuma trombol?tica apresentou atividade l?tica de 44,78 ? 9,97%, enquanto as mesmas doses da estreptoquinase em solu??o salina isot?nica promoveram 32,07 ?3,41% de lise dos co?gulos. Na espuma sem fibrinol?tico a redu??o do trombo foi de 19,2 ? 7,19%. Conclui-se que a espuma fibrinol?tica apresentou resultados estatisticamente significativos no tocante ? potencializa??o da atividade l?tica da estreptoquinase, quando comparado ao efeito da solu??o preparada com solu??o salina, podendo ser uma alternativa promissora nos tratamentos das tromboses. Os dados obtidos sinalizam para necessidade de estudos in vivo para comprova??o dos obtidos nos in vitro