[pt] Os antibióticos eritromicina e canamicina, pertencentes às classes dos macrolídeos e aminoglicosídeos respectivamente, têm sua importância como agentes preservativos no processo de preparação e durante o processo de utilização da vacina contra a febre amarela - apresentação de cinco doses - produzida no Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos, Bio-Manguinhos, FIOCRUZ, RJ. Este trabalho propõe apresentar duas novas abordagens para a determinação espectrofluorimétrica desses antibióticos, considerando o desempenho, inclusive com relação à seletividade, na análise dessa matriz específica (vacina). Um estudo preliminar do comportamento luminescente (fosforescência e fluorescência) dessas substâncias foi realizado em diferentes condições experimentais a fim de encontrar as que permitissem o desenvolvimento dos métodos analíticos. Para a eritromicina, que não apresentou luminescência nativa, foi utilizado um procedimento de derivação fotoquímica de soluções do analito preparadas em meio contendo ácido sulfúrico. Como resultado obteve-se um foto-produto que apresentou fluorescência em 412/465 nm. As condições experimentais foram otimizadas visando a maximização desse sinal fluorescente. Nesse caso, foram estudados o tempo de irradiação com UV, o tipo e a concentração do ácido utilizado, o tempo e a temperatura de aquecimento. O método foi parcialmente validado apresentando limites de detecção e de quantificação iguais a 0,25 ug mL-1 e 0,85 ug mL-1 respectivamente. A faixa linear do método estendeu-se até 200 ug mL-1 e os parâmetros de precisão e robustez foram bastante satisfatórios. O método foi aplicado na análise de uma simulação de vacina contra a febre amarela e na análise de medicamentos comerciais com um percentual de recuperação entre 98,2 e 105,2 %. A metodologia desenvolvida para a canamicina, que também não apresentou fluorescência natural, baseou-se na reação de oxirredução deste composto com o Ce (IV) produzindo o Ce (III), que é uma espécie fortemente fluorescente (255/360 nm). As intensidades dos sinais fluorescentes medidos no par excitação/emissão do Ce (III) foram diretamente proporcionais às concentrações de canamicina. As condições para a realização da reação foram estudadas, avaliando a quantidade de Ce (IV), a concentração e tipo de ácido usado no meio reacional e o tempo e temperatura de aquecimento. A ampla faixa linear (até 1000 ug mL-1) foi obtida, com limites de detecção e quantificação de 1,22 ug mL-1 e 4,08 ug mL-1, respectivamente. O percentual de recuperação obtido na análise da vacina diluída foi de 109,8 % e em amostra diluída de urina enriquecida com o analito foi de 103,4 %. / [en] The antibiotics erythromycin and kanamycin, members of the macrolide and aminoglycoside classes respectively, have their importance as preservative agents for the preparation process and during the using of the yellow fever vaccine, five doses presentation, produced in Technology on Immunobiologicals Institute, Bio- Manguinhos, FIOCRUZ, RJ. In this work two new approaches for the spectrofluorimetric determination of these antibiotics are presented, taking into consideration their selectivity performance for this specific matrix (vaccine). A preliminary study was performed to evaluate the luminescent behavior (phosphorescence and fluorescence) of these substances in different experimental conditions aiming to find the best ones that would lead to the development of the analytical methods. For erythromycin, which does not present native luminescence, a photochemical derivatization was employed using analite solutions prepared in sulfuric acid. As a result, a photo- product was obtained, which presented fluorescence at 412/465 nm. The experimental conditions were optimized aiming the maximization of the fluorescent signal. In this case, the studied parameters were the UV irradiation time, the type and concentration of the acid utilized, and the time and temperature used for the heating step. The method was partially validated, indicating limits of detection and quantification of 0.25 ug mL-1 and 0.85 ug mL-1, respectively. The linear dynamic range of the method extended up to 200 ug mL-1 and the parameters related to precision and robustness were very satisfactory. The method was applied in the analysis of a simulated yellow fever vaccine and in commercial pharmaceutical formulations. Recovery percent between 98.2 and 105.2 % were achieved. The methodology developed for kanamycin, which also do not presented natural fluorescence, was based on the oxirreduction reaction of this compound with Ce (IV), producing Ce (III), a strongly fluorescent species (255/360 nm). The fluorescence intensities, measured in the excitation/emission pair of Ce (III), was directly proportional to the kanamycin concentration. The reaction conditions were studied by the evaluation of the amount of Ce (IV), the type and concentration of the acid utilized in reactional medium and heating time and temperature. Large linear range (up to 1000 ug mL-1) was obtained, with detection and quantification limits of 1.22 ug mL-1 and 4.08 ug mL-1, respectively. The recovery percent obtained in the analysis of a diluted vaccine was 109.8 % while the recovery achieved for diluted spiked urine was 103.4 %.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Objetivos: Analisar a temperatura axilar no estudo da vacina contra difteria, tétano, o componente pertussis e hemófilo (DTP/Hib), a frequência de febre e a associação dos eventos adversos. Analisar a metodologia para verificação da temperatura corpórea e febre utilizada em diferentes estudos clínicos com a vacina DTP/Hib. Materiais e métodos: Este trabalho é baseado em dados obtidos do Estudo de imunogenicidade e reatogenicidade de vacina combinada contra difteria, tétano, pertussis e hemófilo tipo b: validação clínica de produto produzido totalmente no Brasil, com 1000 lactentes, realizado no município do Rio de Janeiro, no ano de 2006. Foi analisada a temperatura axilar nos tempos 3, 6, 12, 24, 48 e 72 horas após a vacinação. Foram analisadas as associações entre os eventos adversos locais e eventos adversos sistêmicos. Resultados: A freqüência de febre foi de 53,4 por cento após a primeira dose, 39,9 por cento após a segunda dose e 31,5 por cento após a terceira dose nas 24 horas após a vacinação. A freqüência de febre foi diminuindo com a aplicação das doses. Não houve padrão de associação entre os eventos adversos locais e sistêmicos. A mediana da distribuição da temperatura axilar foi maior nostempos 6 e 12 horas após a vacinação. Conclusões: A definição de febre e as metodologias utilizadas nos estudos clínicos para verificar a temperatura corpórea ainda são heterogêneas, o que dificulta a comparabilidade entre eles. / Objectives: To analyze the axillary temperature in the study of the vaccine DTP/Hib (Martins et al., 2008), the frequency of fever and the association of the adverse events. To analyze the methodology for checking of the corporal temperature and fever used in different clinical trial with the vaccine DTP/Hib. Materials and methods: This work is based on obtained data of the “Study of immunogenicity and reactogenicity of vaccine combined against diphtheria, tetanus, pertussis and haemophylus type b: clinical validation of product produced totally in Brazil ”, with 1000 infants,carried out in the local authority of the Rio of January, in the year of 2006. The axillary temperature was analyzed in the times 3, 6, 12, 24, 48 and 72 hours after the vaccination. The associations were analyzed between the adverse local events and adverse systemic events. Results: The frequency of fever was 53.4 % after the first dose, 39.9 % after the second dose and 31.5 % after the third dose in 24 hours after the vaccination. The frequency of fever was lessening with the application of the doses. There was no standard of association between the adverse local events and systemic adverse events. The medium one of the distribution of the axillary temperature was bigger in the times 6 and 12 hours after the vaccination. Conclusions: The definition of fever and the methodologies used in the clinical studies to check the corporal temperature they are still heterogeneous what makes difficult the comparability between them.

A Febre Reumática, complicação tardia de uma infecção de orofaringe causada pelo Streptococcus pyogenes (estreptococo -hemolítico do grupo A de Lancefield), tem como conseqüência a Cardiopatia Reumática, explicada pelo mimetismo molecular entre proteínas cardíacas humanas e a associação de proteínas e carboidratos da membrana do S. pyogenes. A profilaxia secundária com a PGB 1.200.000 UI IM propõe-se a evitar novos surtos, sendo administrada em intervalos de vinte e um dias nos países com alto índice de estreptococcia. A lesão valvar predispõe à Endocardite Infecciosa, que resulta de bacteriemias causadas por focos infecciosos de origem bucal em cerca de 40% dos casos. Os Streptococcus Viridans constituem o grupo mais comumente encontrado nas Endocardites Infecciosas, em especial os Streptococcus sanguinis e Streptococcus oralis. O efeito do uso crônico da PGB não foi estudado com especificidade para essa microbiota. Assim, foi avaliada, qualitativa e quantitativamente, a microbiota bucal de 100 pacientes, aos 7 e 21 dias, após profilaxia secundária para a Febre Reumática com a PGB 1.200.000 UI IM e comparada com a de 100 pacientes portadores de doença arterial coronariana sem antecedentes de Febre Reumática. As espécies avaliadas foram divididas em S. sanguinis, S. oralis e outras espécies de Streptococcus Viridans Foram coletadas amostras de saliva pela mastigação de goma de parafina e transportadas em meio VMGA II S. As culturas foram semeadas em ágar Columbia CNA com 5% de sangue desfibrinado puro de carneiro com acréscimo de penicilina G. e incubadas a 35ºC em estufa de CO2 por 72 horas. As colônias sugestivas de Streptococcus foram submetidas a testes bioquímicos para confirmação de gênero e espécie. A concentração inibitória mínima foi determinada pelo método Etest e interpretada segundo os padrões do Clinical and Laboratory Standards Institute. Não houve diferença quanto à presença do S. sanguinis nos grupos estudados (P=0,40). O S. oralis prevaleceu aos 7 dias de PGB em relação ao grupo controle (P=0,01). Quanto à identificação de outras espécies, houve maior número de cepas nos pacientes do grupo controle quando comparados aos do grupo de estudo aos 7 e 21 dias de PGB (P<0,001). Os números de UFC/ml de S. sanguinis, S. oralis e de outras espécies foram comparados entre os grupos e não houve diferença entre eles (P=0,96; P=0,60 e P=0,77; respectivamente). Quanto às CIM do S. sanguinis e do S. oralis, não houve diferença entre os grupos (P=0,79 e P=0,13; respectivamente). Todos os testes estatísticos foram realizados em um nível de significância de 5%. Concluiu-se que o S. oralis prevaleceu aos 7 dias de PGB 1.200.000 UI IM; os Streptococcus Viridans de outras espécies prevaleceram no grupo controle; o número de UFC/mL de saliva não diferiu nos grupos estudados, a susceptibilidade dos S. sanguinis e S. oralis à penicilina G não foi alterada pela ação da PGB 1.200.000 UI IM a cada 21 dias e, por fim, a PGB não provocou reações de hipersensibilidade em nenhum paciente do estudo / Rheumatic fever is the result of a Streptococcus pyogenes (group A -hemolytic Streptococcus) infection of the upper respiratory tract. Rheumatic heart disease is a rheumatic fever consequence and is elucidated by the molecular mimicry between human cardiac proteins and group A streptococcal proteins and carbohydrates association. The secondary prophylaxis with 1,200,000 U BPG every three weeks is used for prevention of recurrent rheumatic fever in developing countries. Valvar defects are a risk for infective endocarditis which is resulted of bacteriemia caused for oral infectious focuses in 40% of cases. Viridans streptococci are the predominant group recovered in infective endocarditis, specially Streptococcus sanguinis and Streptococcus oralis. The effect of chronic BPG wasnt studied with specificity to these pathogens yet. Therefore, the oral microbiota was evaluated, qualitatively and quantitatively, at 7 and 21 days after secondary prophylaxis with BPG to rheumatic fever (study group), in a hundred patients and in comparison to another hundred patients with coronary heart disease who never acquired rheumatic fever (control group). The species evaluated were divided in S. sanguinis, S. oralis and another Streptococcus species. It was collected samples of chewing-stimulated saliva (1ml) and transported in VMGA II S medium. The samples were cultured in pure and with penicillin G 5% sheep blood Columbia ágar (CNA), incubated for 72 hours in an atmosphere containing 5% CO2 at 35ºC. The strains that were suggestive to Streptococcus were identified by biochemical tests to confirm bacteria species and genus. Minimal inhibitory concentration was determined by Etest method and interpreted in accordance to Clinical and Laboratory Standards Institute. The results showed that there was no difference in S. sanguinis presence in all groups (P=0.40). S. oralis prevailed in 7 days BPG group in comparison to control group (P=0.01). The control group showed the highest number of others species in comparison to 7 and 21 days BPG (P<0.001). CFU/ml numbers of S. sanguinis, S. oralis and other species strains were compared in 7 and 21 days BPG to control group and there was no difference among themselves (P=0.96, P=0.60 and P=0.77; respectively). There was no difference in S. sanguinis and S. oralis MICs among the study and control groups (P=0.79 and P=0.13). All statistic tests were done at 5% significance level. It was concluded that S. oralis prevailed in 7 days BPG group in comparison to control group; other species of Viridans streptococci prevailed in control group. The number of CFU/mL did not differ in both studied groups; the penicillin susceptibility of S. sanguinis and S. oralis did not change by BPG every three weeks and, by the end, it was not observed hypersensitivity reactions to penicillin in neither of the patients of this study

As respostas termorregulatórias ao lipopolissacarídeo (LPS) são influenciadas por moduladores que aumentam (febrigênicos) ou diminuem (criogênicos) a temperatura corporal (Tb). Entre eles, o neurotransmissor gasoso sulfeto de hidrogênio (H2S) modula a inflamação sistêmica induzida por endotoxina em ratos, agindo como uma molécula anti-inflamatória e criogênica, embora os mecanismos subjacentes ainda sejam pouco compreendidos. Considerando que a endotoxina é um ligando para o Toll-like receptor 4 (TLR4) e que evidências recentes revelam um cross-talk entre a via de sinalização TLR e fosfo-Akt (p-Akt), o objetivo do presente estudo foi investigar se o H2S atua como um mediador antiinflamatório e antipirético durante as fases termorregulatórias que ocorrem no choque endotoxêmico (hipotermia e febre) induzido por lipopolissacarídeo bacteriano (LPS, 2,5 mg / kg intraperitoneal (ip)) através da modulação sobre a produção de prostaglandina D2 (PGD2) e a ativação de Akt na área pré-óptica ântero-ventral do hipotálamo (AVPO). A Tb profunda de ratos mantidos a uma temperatura ambiente de 25 °C foi registrada antes e depois da inibição farmacológica da enzima cistationina ?-sintase (CBS - responsável pela produção endógena de H2S no cérebro) usando aminooxiacetato (AOA, 100 pmol, intracerebroventricular (icv)), combinado ou não com administração de LPS. Para esclarecer os mecanismos responsáveis por esses ajustes da resposta imune, foram determinados na AVPO os níveis de H2S, a produção de PGD2 e o perfil de expressão das proteínas CBS, p-Akt e p-CREB. Além disso, foi analisada a concentração de citocinas plasmáticas (IL-1?, IL-6, IL-10, TNF?, IFN-? , E IL-4). A injeção ip de LPS causou hipotermia típica seguida de febre. Os níveis de AVPO H2S aumentaram significativamente durante a hipotermia quando comparado com ratos eutérmicos e febris. A microinjeção icv de AOA não causou nenhuma alteração na Tb nem na produção basal de PGD2 durante a eutermia. Em ratos tratados com LPS, o AOA causou uma atenuação na queda da Tb durante a fase de hipotermia e uma febre exacerbada, simultaneamente com o aumento na produção de PGD2 e abolição do aumento induzido pela endotoxina na atividade de Akt. Durante a fase de febre, a expressão relativa de CBS esteve significativamente diminuída enquanto a expressão relativa de p-Akt esteve aumentada, quando comparado com ratos eutérmicos e hipotérmicos. As citocinas plasmáticas aumentaram durante a inflamação sistêmica, mas apenas a IL-4 mostrou um padrão semelhante em relação à Akt. Estes dados são consistentes com a noção de que o neurotransmissor gasoso H2S modula as fases de hipotermia e febre durante o choque endotoxêmico, atuando como uma molécula criogênica. Este papel anti-inflamatório durante a inflamação sistémica envolve uma regulação positiva da PGD2, de Akt e da IL-4 plasmática. / Thermoregulatory responses to lipopolysaccharide (LPS) are affected by modulators that increase (pro-pyretic) or decrease (cryogenic) body temperature (Tb). Among them, the gaseous messenger hydrogen sulfide (H2S) modulates endotoxin-induced systemic inflammation being an anti-inflammatory and cryogenic molecule, although the underlying mechanisms are still poorly understood. Since endotoxin is a Toll-like receptor 4 (TLR4) ligand and recent evidence indicates that there is a possible a cross-talk between the TLR and phospho-Akt (p-Akt) signaling pathway, the current study aimed to investigate whether H2S acts as an anti-inflammatory and anti-pyretic mediator during thermoregulatory phases of endotoxic shock (hypothermia and fever) induced by bacterial lipopolysaccharide (LPS, 2.5 mg/kg intraperitoneal (ip)) through the modulation of prostaglandin D2 (PGD2) production and activation of Akt in the anteroventral preoptic region of the hypothalamus (AVPO). Deep Tb in rats kept at an ambient temperature of 25 °C, was recorded before and after pharmacological inhibition of the enzyme cystathionine ?-synthase (CBS - responsible for H 2S endogenous production in the brain) using aminooxyacetate (AOA; 100 pmol/1 ?l intracerebroventricular (icv)) combined or not with endotoxin administration. To clarify the mechanisms responsible for these adjustments on immune response were verified in the AVPO H 2S levels, PGD2 production and expression profiles of CBS, p-Akt and p-CREB. In addition, plasma cytokines concentration (IL-1?, IL-6, IL-10, TNF?, IFN-?, and IL-4) was analyzed. Intraperitoneal injection of LPS caused typical hypothermia followed by fever. Intracerebroventricular microinjection of AOA neither affected Tb nor basal PGD2 production during euthermia. Levels of AVPO H2S were significantly increased during hypothermia when compared to both euthermic and febrile rats. In LPS-treated rats, AOA increased Tb values during hypothermia and fever, along with enhanced PGD2 production and abolition of endotoxin-induced increase in Akt activity. During fever, CBS relative expression was significantly decreased whereas p-Akt was significantly increased when compared to both euthermic and hypothermic rats. Plasma cytokines were increased during systemic inflammation, but only IL-4 showed a similar pattern in relation to Akt. These data are consistent with the notion that the gaseous messenger H2S modulates hypothermia and fever during endotoxic shock, acting as a cryogenic molecule. This anti-inflammatory role during systemic inflammation involves a H2S-induced up-modulation of PGD2, Akt and plasma IL-4.

A Dengue e a Febre Aftosa são infecções virais que ocorrem tanto no Brasil como no mundo, apresentando enorme impacto socioeconômico. As proteases virais são reconhecidas como alvos de grande interesse para o planejamento de antivirais, devido ao seu papel fundamental no ciclo de vida de muitos vírus, incluindo-se os flavivirus (vírus da Dengue DENV) e os picornavirus (vírus da Febre Aftosa FA). Com o objetivo de buscar e identificar novos inibidores de proteases virais (da NS2B/NS3pro do DENV ou da Lbpro do vírus da FA) propusemos modelos de busca virtual, incluindo diferentes filtros de seleção (ex. farmacofórico, drug-like, similaridade e ancoramento) aplicados, sequencialmente, a bancos de dados de compostos comerciais (280x103 a 23x106 compostos). A seleção final dos compostos foi sempre feita por inspeção visual. Para NS2B/NS3pro do DENV, construíram-se quatro modelos de busca virtual (Modelo I-DENV a Modelo IV-DENV). O primeiro foi construído, baseando-se na estrutura cristalográfica ligada a um inibidor peptidomimético, e aplicado ao banco ZINC. Ao final, dez compostos foram comprados e submetidos a testes de inibição enzimática, frente à NS2B/NS3pro, para validação experimental deste modelo. Dois compostos mostraram alguma atividade inibitória (IC50 150 - 300 &#181;M). Visando-se melhorar estes resultados, a flexibilidade da NS2B/NS3pro foi incluída, usando simulações de dinâmica molecular (DM), e um novo banco de dados construído (ZINC-Curated). Através de uma análise extensiva do banco ZINC-Curated, usando ferramentas estatísticas/quimiométricas, confirmou-se que este foi enriquecido com compostos com características de fármacos. Outros três modelos de busca virtual foram construídos incluindo-se diferentes informações obtidas nas simulações de DM. O modelo II-DENV foi feito usando ancoramento e aplicado ao banco ZINC-Curated, selecionando dezesseis compostos. Nenhum deles apresentou atividade inibitória significativa frente à NS2B/NS3pro do DENV. Os modelos III-DENV e IV-DENV utilizaram modelos farmacofóricos, que tiveram seus desempenhos previamente avaliados usando dados de literatura, e foram aplicados aos bancos NCI e ZINC-Curated, respectivamente. O modelo III-DENV selecionou quinze compostos, tendo quatro deles apresentado atividade inibitória (IC50 30 - 100 &#181;M). O modelo IV-DENV selecionou dezoito compostos, sendo quatro ativos frente a esta protease (IC50 4 - 90 &#181;M), representando uma taxa de acerto de ~22 %. Ainda, uma série de treze análogos estruturais do composto mais ativo foi construída, sendo três deles também ativos. Portanto, as modificações incluídas na busca virtual permitiram melhorar, significativamente, os resultados obtidos. Para Lbpro do vírus da FA, construíram-se dois modelos de busca virtual (Modelos I-FA e II-FA). O primeiro foi construído usando sua estrutura cristalográfica, sem ligantes, e uma série in house de potenciais inibidores covalentes. Seis compostos foram selecionados e testados frente à Lbpro, tendo dois deles baixa atividade inibitória (IC50 300 - 600 &#181;M). A partir da disponibilidade da estrutura da Lbpro com ligante, o modelo IIFA foi construído e aplicado ao banco ZINC-Curated, selecionando quinze compostos. Estes foram adquiridos e testados frente à Lbpro, não apresentando atividade inibitória significativa. Assim, as modificações incluídas ainda não foram suficientes para selecionar inibidores mais potentes. No entanto, estes modelos/resultados contribuíram para o entendimento da(s) interação(ões) no sítio ativo da Lbpro. / Dengue and Food-and-mouth disease are viral infections that occur in Brazil and in the world, causing a huge socioeconomic impact. Viral proteases are recognized as targets for antiviral design, because they are crucial for the life cycle of many viruses, such as flavivirus (Dengue virus DENV) and picornavirus (Food-and-mouth disease virus FMDV). In order to discovery novel inhibitors of viral proteases (of NS2B/NS3pro of DENV or of Lbpro of FMDV) virtual screening models were proposed comprising a sequence of different filters (e.g. pharmacophore, drug-like, similarity and docking) applied to databases of commercial compounds (280x103 to 23x106 compounds). In all models, the final selection of compounds was always done by visual inspection. For DENV NS2B/NS3pro, four virtual screening models were proposed (Model I-DENV to Model IV-DENV). Model I-DENV was built, based on the crystal structure bound to a peptidemimetic inhibitor, and applied to ZINC database. Finally, ten compounds were purchased and submitted to enzymatic assays against this protease to the experimental validation of this model. Two compounds showed some inhibitory activity (IC50 150 - 300 &#181;M). In order to improve these results, NS2B/NS3pro flexibility was included, using molecular dynamics (MD) simulations, and a novel database was built (ZINC-Curated). Throughout an exhaustively analysis of ZINC-Curated, using statistical/chemometrics tools, we confirmed that this new database was enriched with drug like compounds. Other three virtual screening models were built including different information from MD simulations. Model II-DENV was built using docking and applied to the ZINC-Curated database, selecting sixteen compounds. None of them showed a significant inhibitory activity against DENV NS2B/NS3pro. Models III-DENV and IV-DENV were built using pharmacophore models, which have their performance previously evaluated using literature data, and applied to NCI and ZINC-Curated databases, respectively. Model III-DENV selected fifteen compounds, showing four of them inhibitory activity (IC50 30 - 100 &#181;M). Model IV-DENV selected eighteen compounds. Four of them were active against this protease (IC50 4 - 90 &#181;M), representing a hit rate of ~22 %. Moreover, a set of thirteen structural analogues of the most active compound were built, being three of them also active. Thus, the modifications done in the virtual screening procedure really improved our results. For FMDV Lbpro, two virtual screening models were built (Models I-FMDV and II-FMDV). The first one was based on the crystal structure, without ligands, and used a set of in house potential covalent inhibitors. Six of the in house compounds were selected and tested against this protease. Two of them showed a weak inhibitory activity (IC50 300 - 600 &#181;M). Later on, the Lbpro bound with ligands was available being therefore used to build another model. Model II FMDV was applied to the ZINC-Curated database, selecting fifteen compounds that were purchased and also tested against the target protease. But none of them showed a significant inhibition. Thus, the incorporated changes were not enough to retrieve active compounds. However, these models/results contributed to better understand Lbpro binding site interactions

Trata-se de um estudo desenvolvido numa Unidade de Conservação de São Paulo o Parque Estadual Alberto Lofgrën - PEAL, situado na zona norte da cidade e conhecido como Horto Florestal. Visou identificar iniciativas sobre as diretrizes de promoção da saúde no parque, e a relevância dos determinantes sociais, ambientais e de saúde frente à Febre Maculosa Brasileira - FMB. A área de visitação pública do parque tornou-se importante área de estudo por possuir características epidemiológicas, consideradas pelo programa de controle desta doença, como área de alerta e, portanto, potencial para transmissão. Buscou-se identificar também as ações pedagógicas oferecidas pelo Núcleo de Educação Ambiental para entender a atuação dos monitores ambientais e foi efetuado um levantamento da infraestrutura e funcionamento do PEAL. Foram elaboradas oficinas pedagógicas com os monitores e outros profissionais que mantinham uma atuação de interface com a população para abordagem de temas norteadores do estudo como: educação em saúde e ambiental, promoção da saúde, Febre Maculosa Brasileira, planejamento de ações educativas e controle de carrapatos. Para garantir um processo pedagógico participativo nas oficinas, foram discutidos temas de interesse do grupo e utilizadas uma diversidade de estratégias para estimular nos participantes sentimentos de co-responsabilidade e pertencimento ao processo. Um espaço de reflexão sobre promoção da saúde, qualidade de vida, o ambiente do parque, estratégias pedagógicas e ações de cuidados com a FMB, foi criado, com o objetivo de integrar ações de educação ambiental e de saúde, que articuladas poderiam amplificar a atuação dos profissionais. A coleta de dados foi feita por meio de análise documental, observação de campo, entrevista com a gestora e encontros pedagógicos com os monitores. A análise dos resultados foi construída a partir da triangulação dos dados obtidos das técnicas de pesquisa citadas. Os produtos deste estudo foram: um plano de mobilização intersetorial para o controle de carrapatos de importância médica e da FMB no PEAL, produzido pelos monitores; a inclusão do tema sobre cuidados com carrapatos e a FMB na orientação do professor utilizada pelos educadores ambientais; a participação de profissionais de saúde no Plano de Manejo do Parque garantindo um capítulo específico sobre zoonoses no documento oficial de gestão da unidade; um artigo técnico publicado em revista especializada sobre as principais zoonoses do PEAL; a qualificação profissional dos envolvidos nas oficinas pedagógicas; e a contribuição para as discussões sobre as temáticas de saúde e o cuidado ambiental numa área de lazer, porém de risco para zoonoses como pode vir a ser uma Unidade de Conservação com elevado número de visitação e próximo a áreas urbanas. / This is a study developed a Conservation Unit of the São Paulo State Park Alberto Lofgren - PEAL, located in the north of the city and known as \"Horto Florestal\". This research sought to identify initiatives on guidelines for health promotion in the park, and the relevance of social determinants, environmental and health problem facing the Brazilian Spotted Fever - FMB. The area of public visitation to the park has become important for the study of epidemiological characteristics have, as the program of control of FMB as the alert area and, therefore, potential for transmission of the disease. We tried to identify the educational activities offered by the Center for Environmental Education to understand the performance of monitors and has done a survey of infrastructure and operation of PEAL. Educational workshops were developed with tutors and others who had a role to interface with the population approach to guiding the study of topics such as education and environmental health, health promotion, spotted fever, educational planning and control of the FMB. To ensure a participatory process were discussed issues of interest and used a variety of pedagogical strategies in encouraging participants feelings of co-responsibility and belonging to the process. A space of reflection on health promotion, quality of life, the environment of the park, and care strategies for action with the FMB was established with the objective of integrating environmental education activities and health, which could amplify the coordinated action of professionals. Data collection was done by means of documentary analysis, observation of field, interview with the management and educational meetings with the monitors. The analysis was constructed from the triangulation of data and techniques of research cited. The products of this study, are: the plan to mobilize to control the inter FMB in PEAL, produced by monitors and the inclusion of the issue with FMB care about the teacher\'s book used by environmental educators and the participation of the health team in the Management Plan of the Park to a specific chapter on zoonoses in document management unit, a technical paper published in the magazine, on major zoonoses of Peale and the professional growth of those involved in educational workshops, and contribution to the discussions on issues of health and environmental care in an area of leisure but at risk for zoonoses to be of conservation unit.

A febre reumática é um bom exemplo de uma doença auto-imune deflagrada por um processo infeccioso. Num prazo de uma a quatro semanas após a resolução de uma faringite não tratada por cepas reumatogênicas de S. pyogenes, o organismo de um hospedeiro susceptível desencadeia uma resposta imune contra grandes articulações, coração, tecidos subcutâneos e cérebro. Acredita-se que elementos presentes na bactéria e reconhecidos durante a infecção na orofaringe, sejam confundidos com estruturas próprias do organismo, num processo denominado mimetismo molecular. Entre as proteínas envolvidas na reação cruzada, encontram-se a miosina cardíaca, pelo lado do hospedeiro, e a proteína M do microorganismo invasor. Esta última (proteína M) tem sido extensamente estudad. É a base da classificação das cepas de S. pyogenes e importante fator de virulência. Também tem sido explorada como imunógeno em várias estratégias vacinais. O estudo desta patologia tem sido dificultado pela ausência de um modelo animal que reproduza aspectos fundamentais da patologia humana, entre estes as lesões cardíacas. Uma das razões é o fato de que animais não contraem infecção pelo S. pyogenes. Portanto, produzimos a proteína M1 recombinante e mostramos que a imunização de 28 ratos Lewis por um período de 21 dias ou 14 ratos por 41 dias, com esta proteína foi capaz de induzir resposta inflamatória na maioria dos animais com intensidade variável. Células similares aos nódulos de Aschoff e células de Anitschkow, sugestivas das lesões patognomônicas da febre reumática foram observadas em dias e também de um em quatro dos animais controles que receberam PBS e adjuvantes. Estes resultados sugerem a presença de células auto-reativas no miocárdio dos animais imunizados. Em conclusão, o uso de proteína M1 recombinante como imunógeno em modelo animal de ratos Lewis é capaz de desencadear reação inflamatória em miocárdio e tecido valvular e lesões similares às da febre reumática. O modelo do rato Lewis é até o momento o que apresenta maior semelhança com a doença humana e pode ajudar a esclarecer a imunopatologia da febre reumática. Além disso, certamente será importante para a avaliação do potencial de proteção e de segurança em modelos de vacinas contra o S. pyogenes. / Rheumatic fever is a good example of an autoimmune disease triggered by an infectious process. One to four weeks after the resolution of a non treated pharyngitis caused by rheumatogenic strains of S. pyogenes, the susceptible host unravels an immune response targeting joints, heart, conective tissues and brain. It is thought that molecules present in the bacteria and recognized during the infection at the pharynx are confounded with the organism self structure in a process called ?molecular mimicry?. Amongst the proteins involved in the cross reaction, it may be found cardiac myosin, on the host side, and M protein on the invading organism?s side. The latter (Mprotein) has been extensively studied. It is the basis of the S. pyogenes strains classification, and also an important virulence factor. It has also been explored as an immunogen in several vaccine strategies. The nderstanding of this disease has been hampered by the absence of an animal model that reproduces fundamental aspects of the human pathology, specially cardiac lesions. One of the reasons is the fact that animals do not get infected by S. pyogenes. Hence we have produced the recombinant M1 protein and shown that either the immunization of 28 Lewis rats for a period of 21 days or 14 rats for a period of 41 days, was capable of inducing an inflammatory response in most of the animals with variable intensity. Aschoff nodules-like or Anitschkow-like cells resembling rheumatic fever pathognomonic lesions were seen in 50% of the animals immunized subcutaneously and sacrificed on day 21. We have observed an humoral and cellular response (spleen and lymph node derived cells) specifically targeting M1 protein and the amino (M1AB) and carboxy (M1C) terminus of the protein. However, cross reactions with cardiac myosin were not observer. We have derived T lymphocyte lineages obtained from myocardium infiltrating mononuclear cells from 6 of the 10 animals immunized with M1ABC protein subcutaneously and sacrificed on day 41 and also from one out of four PBS - adjuvant immunized animals. These results suggest the presence of autoreactive cells in the myocardium of the immunized animals. In conclusion, the use of the M1 protein as an immunogen on the Lewis rat model is capable of triggering an inflammatory reaction in the myocardium and valvular tissue and it can produce rheumatic fever like lesions. The Lewis rat model is up to this moment the one to present the highest similarity with human disease. Besides, it will certainly be important on the evaluation of the protection and safety of S. pyogenes vaccines.

O vírus da dengue (DENV) e o vírus da febre amarela (YFV) (gênero Flavivirus, família Flaviviridae) representam importantes arbovírus causadores de doenças em humanos que afetam as regiões tropicais e sub-tropicais do planeta, somando milhões de infectados anualmente. Embora exista uma vacina contra o YFV, ainda são notificados muitos casos de febre amarela nas regiões endêmicas das Américas e, principalmente, da África. Recentemente, foi licenciada uma vacina contra o DENV, mas seu uso ainda é bastante restrito. Não existem agentes terapêuticos para tratamento da infecção contra nenhum desses vírus. Portanto, estudos para identificação de fármacos para combaterem a infecção pelos DENV e YFV são de suma importância. Nosso grupo descreveu a ação antiviral da fosfolipase A2 crotoxina B (PLA2-CB) da serpente Crotalus durissus terrificus, a qual tem ação diretamente sobre o envelope de DENV e YFV. A meta principal deste trabalho foi a produção das duas isoformas da PLA2-CB (CB1 e CB2) recombinantes e avaliação de suas atividades antivirais, a fim de contribuir com a prospecção de novas drogas antivirais. Para alcançar tais propósitos, as sequências codificadoras das isoformas foram otimizadas para expressão em sistema procarioto, quimicamente sintetizadas e enzimaticamente inseridas no vetor de expressão pGS-21a. Os plasmídeos gerados foram utilizados para transformar células E. coli das cepas BL21(DE3), Origami B(DE3) e ArcticExpress (DE3). As proteínas recombinantes foram expressas juntamente com uma cauda de polihistidina (6xHis) no extremo C-terminal (CB1+6xHis_opt e CB2+6xHis_opt). Ambas as proteínas foram reconhecidas por anticorpos produzidos contra a PLA2-CB in natura em ensaio de Western Blot. Considerando que as proteínas foram expressas de forma insolúvel, a purificação foi realizada em sistema de cromatografia líquida (FPLC), utilizando coluna com resina de afinidade por níquel sob condições desnaturantes, utilizando ureia como agente solubilizador. As proteínas foram renaturadas na própria coluna de níquel (on-column) durante a purificação, utilizando um gradiente decrescente de ureia (6-0M - 120ml - 0,1ml/min) e o detergente CHAPS como agente estabilizador. As proteínas CB1+6xHis_opt e CB2+6xHis_opt em ensaio colorimétrico de hidrólise de fosfatidilcolina apresentaram atividade fosfolipásica, indicando preservação do sítio catalítico. Em ensaio virucida contra o DENV-2, YFV e outros dois vírus envelopados: Vírus Chikungunya (CHIKV) e vírus Zika (ZIKV), as proteínas recombinantes reduziram a formação de placas de lise exibindo índices de seletividade na média de 0,6. As proteínas CB1+6xHis_opt e CB2+6xHis_opt podem vir a ser um importante modelo na prospecção de novas drogas antivirais e como ferramenta no estudo do mecanismo de replicação viral. / Dengue virus (DENV) and yellow fever virus (YFV) (genus Flavivirus, family Flaviviridae) are important arboviruses that cause diseases in humans affecting the tropical and subtropical regions of the planet with millions of infected annually. Although there is a vaccine against YFV, many cases of yellow fever are still reported in the endemic regions of the Americas, and especially in Africa. A vaccine against DENV has recently been licensed, but its use is still quite restricted. There are no therapeutic agents to treat the infection against any of these viruses. Therefore, studies to identify drugs to combat DENV and YFV infection are of extreme importance. Our group described the antiviral action of the phospholipase A2 crotoxin B (PLA2-CB) isolated from Crotalus durissus terrificus, which acts directly on the envelope of DENV and YFV. The aim of this study was to produce the two recombinant PLA2-CB (CB1 and CB2) isoforms and evaluate their antiviral activities in order to contribute to the prospection of new antiviral drugs. To achieve such purposes, the coding sequences of the isoforms were optimized for prokaryotic expression system, chemically synthesized and enzymatically inserted into the pGS-21a vector. The plasmids generated were used to transform E. coli cells from BL21 (DE3), Origami B (DE3) and ArcticExpress (DE3) strains. Recombinant proteins were expressed tagged with a polyhistidine (6xHis) tail at the C-terminus (CB1+6xHis_opt and CB2+6xHis_opt). Both proteins were recognized by antibodies raised against native PLA2-CB in Western blot assay. Considering that the proteins were expressed in insoluble form, purification was performed in liquid chromatography system (FPLC) using nickel resin column under denaturing conditions, using urea as the solubilizing agent. The proteins were renatured on-column during purification procedure using a decreasing gradient of urea (6-0M - 120ml - 0,1ml/min) and CHAPS as a stabilizing agent. CB1+6xHis_opt and CB2+6xHis_opt proteins showed phospholipase activity in a colorimetric assay based on phosphatidylcholine hydrolysis, indicating preservation of the catalytic site. In a virucidal assay against DENV-2, YFV and two other enveloped viruses: Chikungunya virus (CHIKV) and Zika virus (ZIKV), the recombinant proteins reduced the plaques of lysis formation exhibiting selectivity indices at the mean of 0.6. The CB1+6xHis_opt and CB2+6xHis_opt proteins could be important models for the prospection of new antiviral drugs and as tools for the study of the mechanism of viral replication.

O presente trabalho busca analisar a dinâmica econômica dos fluxos da pecuária bovina no Mato Grosso do Sul (MS) e identificar sua distribuição geográfica dentro do estado. Dado que as barreiras sanitárias e técnicas constituem, atualmente, alguns dos principais obstáculos ao comércio internacional, o conhecimento sobre as características dessa dinâmica e a identificação dos municípios centrais na pecuária do estado permitem analisar o processo de difusão da febre aftosa no MS em um eventual de surto da doença. Dessa forma, foram identificadas as áreas de maior risco de ocorrência e de potenciais maiores impactos econômicos. A metodologia aplicada consiste na análise de redes socioeconômicas, construídas a partir das Guias de Trânsito Animal registradas no estado em 2014 e 2015. Verificou-se que a movimentação dentro do MS se traduz em redes fortemente conectadas, o que poderia resultar em uma alta velocidade de difusão da doença no território. Os municípios de Campo Grande, Corumbá e Ribas do Rio Pardo mostraram-se os mais centrais nesse processo, pois recebem e enviam muitos animais para outros municípios, além de atuarem como intermediadores de fluxos animais dentro das redes de movimentação. Por conta do fornecimento de animais para outros estados, a difusão pode ocorrer a nível nacional, elevando os impactos econômicos da doença. Nesse sentido, foram estimadas as perdas de exportação e custos de controle do último surto de febre aftosa ocorrido no MS, em 2005/2006. As exportações do estado recuaram 81% em 2006, com relação ao ano anterior. A partir do modelo teórico de simulação e das estimativas de custos do último surto, conclui-se que, diante de uma potencial difusão de febre aftosa, com origem no MS, os impactos diretos na pecuária bovina seriam significativos, o que torna indispensável a promoção de estudos sobre impactos e riscos da entrada e difusão da doença no país, de modo a otimizar a alocação de recursos em termos de sua prevenção e, em caso de crise, no Plano de Emergência. / This work seeks to analyze the economic dynamics of cattle flows in Mato Grosso do Sul (MS) state and to identify their geographic distribution within the state. Given that sanitary and technical barriers are currently some of the main obstacles to international trade, knowledge about the characteristics of this dynamics and the identification of central municipalities in terms of livestock flows allow analyzing the diffusion process of the foot-and-mouth disease in MS in a possible outbreak. In this way, the municipalities with the greatest risk of occurrence and potential economic impacts were identified. The applied methodology consists on socioeconomic network analysis, constructed from the Animal Transit Guides registered in MS in 2014 and 2015. The cattle movement within MS produces heavily connected networks, which could result in a high-speed dissemination of the disease in the territory. The municipalities of Campo Grande, Corumbá and Ribas do Rio Pardo were the most central in this process, since they receive and send many animals to other municipalities, besides acting as intermediaries of animal flows within the movement networks. Due to the supply of animals to other states, the diffusion can occur at a national level, raising the economic impacts of an outbreak. In this sense, the export losses and the costs of emergence to control last FMD outubreak in MS, in 2005/2006, were estimated. The State exports declined 81% in 2006, compared to the previous year. Considering the theoretical model of simulation and the costs and losses estimated for the last outbreak, we conclude that a potential diffusion of the FMD, originating in MS, might generate significant direct impacts on livestock. This conclusion highlights how essential it is to promote studies about the impacts and risks of the FMD entry and diffusion in Brazil, in order to optimize the allocation of resources to prevention strategies and, in case of an outbreak, to implement the Emergency Plan.

Microorganismos da cavidade oral têm sido admitidos como causadores de doenças sistêmicas com reconhecido mecanismo de disseminação via corrente sangüínea. Diferentes fatores, incluindo a presença da doença periodontal, têm influência no risco de bacteremia oral, podendo ocasionar endocardite infecciosa por Streptococcus viridans. Sendo assim, a manutenção da saúde bucal adquire elevado grau de importância em gestantes portadoras de doença valvar reumática, em que o risco de endocardite infecciosa é eminente. A escassez científica fez deste tema o objetivo deste estudo: investigar a condição clínica periodontal de gestantes portadoras de cardiopatia valvar, identificando agentes periodontopatógenos nas amostras coletadas de saliva, sulco/bolsa periodontal, Para tanto, foram estudadas 52 gestantes cardiopatas (GC) e 70 gestantes não-cardiopatas (GNC). A condição periodontal foi avaliada empregando-se profundidade clínica de sondagem (PCS), nível clínico de inserção (NCI), linha esmalte cemento/margem gengival (LEC/MG), índice de sangramento (IS) e índice de placa bacteriana (IP). As seguintes médias foram obtidas para os parâmetros periodontais avaliados: PCS: 1.52 (GC) e 1.45 (GNC); NCI: 1.13 (GC) e 1.02 (GNC); LEC/MG: 0.41 (GC) e 0.40 (GNC); IS: 7.34 (GC) e 6.27 (GNC) e IP: 12.19 (GC) e 13.48 (GNC). Não houve diferença entre os grupos para o NCI (p= 0,612). A presença da Porphyromonas gingivalis na saliva foi maior (p= 0,007) no GNC, porém não houve diferença nas amostras de sulco/bolsa periodontal. / Microorganisms of the oral cavity are known to cause systemic diseases, spread through sanguine current. Different factors, including the presence of periodontal disease, influencing the risk of oral bacteremia could cause infectious endocarditis for Streptococcus viridans. Nevertheless, the maintenance of the oral health is extremely important in pregnant women with rheumatic valvar disease, in which the risk of infectious endocarditis is eminent. The aim of this study was to investigate the clinical periodontal condition of pregnant women with valvar disease and to identify the presence of Porphyromonas gingivalis in saliva and subgingival samples. For these purposes, we studied 52 pregnant with valvar disease (GC) and 70 healthy pregnant women (GNC). The following periodontal parameters were evaluated: probing depth (PCS), clinical attachment level (NCI), gingival margin location (LEC/MG), bleeding on probing (IS) and plaque index (IP). The following mean periodontal parameters were obtained: PCS: 1.52 (GC) e 1.45 (GNC); NCI: 1.13 (GC) e 1.02 (GNC); LEC/MG: 0.41 (GC) e 0.40 (GNC); IS: 7.34 (GC) e 6.27 (GNC) e IP: 12.19 (GC) e 13.48 (GNC). There was no statistical difference for NCI among the groups. There was no difference between periodontal clinical conditions in pregnant women with valvar disease and healthy pregnant women. The presence of the Porphyromonas gingivalis in saliva samples of healthy pregnant women is statistically higher than in pregnant woman with valvar disease; however, there was no difference in periodontal samples