A partir da atividade antibacteriana in vitro, predeterminada em doze plantas com indicativo etnográfico condimentar, testou-se este atributo in loco no modelo caldo com frango cozido. Primeiramente, procedeu-se ao treinamento de 10 avaliadores, segundo a legislação vigente quanto ao Consentimento Livre e Esclarecido, oportunizando conhecimentos prévios sobre as plantas: salsa (Petroselinum sativum), manjerona branca (Origanum X aplii), manjerona preta (Origanum majorana), manjericão (Ocimum basilicum), sálvia (Salvia officinalis), tomilho (Thymus vulgaris), anis verde (Ocimum selloi), alfavaca (Ocimum gratissimum), alho nirá (Allium tuberosum), alho poró (Allium porrum), cúrcuma (Curcuma longa) e pimenta dedode- moça (Capsicum baccatum). Realizou-se, através da adição individualizada desses condimentos ao caldo com frango cozido, um Teste de Aceitação tipo escala hedônica, selecionando, dentre os doze condimentos, quatro deles que se destacaram sensorialmente, quais sejam: pimenta dedo-de-moça, alho nirá, alho poró e tomilho. Foi feito, então, um Teste de Aceitação de quantidades denominadas pequena, média e grande destes quatro condimentos, para determinação de sua intensidade sensorialmente melhor aceita. As quantidades eleitas (0,5 g de pimenta dedo-de-moça, 15 g de alho nirá, 15 g de alho poró e 5 g de tomilho) foram acrescidas ao caldo com frango cozido, sendo estes desafiados frente a Escherichia coli (ATCC 11229) a 10 UFC/ml, tendo como grupo-controle o caldo com frango cozido sem condimentos. O crescimento bacteriano foi aferido a cada duas horas após a inoculação, até às 24 horas de confronto, utilizando-se meio seletivo para coliformes termoresistentes e incubação constante a 25ºC em DBO, sendo atribuídos valores arbitrários às variações logarítmicas de crescimento. Comparados ao controle, todos os tratamentos condimentados apresentaram, individualmente, atividade antibacteriana significativa, mesmo que sem significância quando comparados entre si. Contudo, em relação ao tempo de início da atividade antibacteriana, destacou-se a pimenta dedo-de-moça, enquanto que, em relação ao prolongamento dessa ação no tempo, destacou-se o tomilho. As plantas condimentares testadas tiveram sua atividade anticoliforme termo-resistente comprovada in loco, indicando sua aplicabilidade relacionada à qualificação sanitária e sensorial de caldo com frango cozido nos paradigmas da alimentação e nutrição sustentáveis. / From the antibacterial activity of 12 spice plants predetermined in tests in vitro by the Universidade do Rio Grande do Sul’s researchers, this activity was tested in the model “broth with cooked chicken”. A ten panelists group was firstly trained, as prescribed by the Free and Informed Consent, providing knowledge about the previously studied plants: parsley (Petroselinum sativum), marjoram (Origanum X aplii and Origanum majorana), basil (Ocimum basilicum), common sage (Salvia officinalis), thyme (Thymus vulgaris), anis-like spice (Ocimum selloi), african basilicum (Ocimum gratissimum), nirá garlic (Allium tuberosum), leek (Allium porrum), turmeric (Curcuma longa) and “dedo-de-moça” chili (Capsicum baccatum). Those spices were individualized added in the broth, then were tested by an Acceptation Hedonic Test Scale-like, to provide the four more sensory acceptable: “dedo-de-moça” chili, nirá garlic, leek and thyme. A new Acceptation Test was performed using small, medium and large quantities of those spices, establishing their more acceptable sensory intensities. The elected quantities (0,5 g of “dedo-de-moça” chili, 15 g of nirá garlic, 15 g of leek and 5 g of thyme) was singly added to the broth with chicken, then challenged with Escherichia coli (ATCC 11229), in a 10 CFU/mL concentration. The control-group was the broth without spices. The bacterial growth was measured each two hours after the inoculation, until the 24 hours of confront, using a selective medium for thermoresistant coliforms under constant incubation at 25ºC in DBO. Arbitrary values were assigned to the logarithmic growth variations. Compared to the control-group, all the spiced treatments presented significant antibacterial activity, with no significant activity when compared with each other. However, in regard of the antibacterial activity starting time, “dedo-de-moça” chili stood out, whereas the thyme stood out in regard of the activity time extension. The spice plants tested had your anti thermoresistant coliforms activity testified in loco, indicating their applicability in the sanitary and sensory sustainable nourish qualification.

Fecal pollution of surface water is a significant environmental health issue. Indicator organisms are used to monitor microbial water quality, but often their presence does not coincide with the presence of pathogens. Bacterial source tracking is a term describing methods to determine the origin of fecal pollution based on bacterial traits. The objective of this research is to evaluate the use of 2 bacterial source tracking techniques, antibiotic resistance analysis (ARA) and ribotyping, to determine the sources of bacteria isolated from Sinking Creek. Based on the results of this study, ARA and ribotyping are not useful techniques for identifying sources of fecal pollution in Sinking Creek. ARA classification rates were low, and ribotype pattern generation success was 37%. The results of this study bring into question the reliability and reproducibility of these 2 source tracking methods for routine use in small watersheds.

Source water protection is important to maintain public health by keeping harmful pathogens out of drinking water. Non-point source pollution is often times a major contributor of pollution to surface waters, and this form of pollution can be difficult to quantify. This study examined physical, chemical, and microbiological water quality parameters that may indicate pollution and may help to identify sources of pollution. These included measures of organic matter, particles, and indicator organisms (fecal coliforms and E. coli). The parameters were quantified in the West Boylston Brook, which serves as a tributary to the Wachusett Reservoir and is part of the drinking water supply for the Metropolitan Boston area. Water quality was determined over four seasons at seven locations in the brook that were selected to isolate specific land uses. The water quality parameters were first analyzed for trends by site and by season. Then, a correlation analysis was performed to determine relationships among the water quality parameters. Lastly, ANOVA analyses were used to determine statistically significant variations in water quality along the tributary.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Buscamos detectar evidências da presença de genes envolvidos na produção de Enzimas Modificadoras de Aminoglicosídeos (EMAs), Beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs) e Mecanismos Plasmidiais de Resistência a Quinolonas (PMQRs) em cepas de K. pneumoniae, K. ozaenae e E. coli isoladas de amostras de água de rios afluentes da Baía de Guanabara e de materiais clínicos de origem hospitalar, além de avaliar o "status sanitário" dos corpos aquáticos abordados no tocante à contaminação fecal recente e indicações de contaminação hospitalar e por outros ambientes de alta seletividade. As cepas de materiais clínicos foram selecionadas entre Maio e Julho de 2010, a partir da semeadura em meio de cultura contendo 8g/mL de gentamicina. As amostras de água foram coletadas em Abril e em Julho de 2009. Realizamos testes de colimetria, empregando para tal, a metodologia convencional e outra, na qual adicionamos 32g/mL de cefalotina e 8g/mL de gentamicina aos caldos Lactosado e Escherichia coli (caldo EC), a fim de detectar e quantificar coliformes resistentes. Para o isolamento das cepas empregamos meios de cultura contendo 32g/mL de cefalotina e 8g/mL de gentamicina. As cepas foram identificadas e submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos (TSA), testes presuntivos para presença de ESBLs, extração de DNA plasmidial e ensaios de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para a detecção dos genes. A utilização de agentes antimicrobianos nos testes de colimetria nos permitiu detectar a presença e quantificar coliformes totais e fecais resistentes nas amostras de água analisadas nos diferentes pontos. O TSA das cepas isoladas de amostras de água exibiu perfis de multirresistência, compatíveis com o de bactérias de origem hospitalar, semelhante ao encontrado nas cepas isoladas de materiais clínicos. Todas as cepas isoladas de amostras de água e 90% das cepas de materiais clínicos apresentaram pelo menos uma banda plasmidial. Os ensaios de PCR evidenciaram a presença de produtos de amplificação para EMAs, ESBLs e PMQRs, sendo que 7,4% das cepas de amostras de água e 20% das cepas de materiais clínicos apresentaram produtos de amplificação para as três classes de antimicrobianos. A realização de testes de colimetria empregando antimicrobianos, como gentamicina e cefalotina, pode ser uma ferramenta adicional importante ao teste convencional, quando o interesse for, o monitoramento e a prevenção de contaminação ambiental, especialmente associada a microrganismos carreando genes de resistência. O uso criterioso de antimicrobianos em atividades de cunho hospitalar e veterinário e medidas no sentido de prevenção de lançamento de esgoto e/ou tratamento dos efluentes, são fundamentais para o controle da disseminação de elementos genéticos de resistência transferíveis entre os microrganismos. A detecção e identificação de microrganismos apresentando elementos de resistência em ambiente extra-hospitalar como em água e solo, em particular, o emprego de testes de colimetria empregando antimicrobianos, se faz necessária, como forma de prevenção e controle de disseminação destes microrganismos com potencial de causar infecções em humanos e outros animais que eventualmente entram em contato com estes ambientes. / We seek to detect evidence of the presence of genes involved in the production of Aminoglycoside Modifying Enzymes (AME), Extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) and Plasmid Mechanisms of Resistance to Quinolones (PMQRs) in strains of K. pneumoniae, K. ozaenae and E. coli isolated from water samples from rivers of Guanabara Bay and clinical samples of hospital origin, and to evaluate the "health status" of water bodies addressed in relation to recent fecal contamination and signs of hospital contamination and other environments with high selectivity. The strains from clinical materials were selected between May and July 2010, using culture media containing 8g/mL gentamicin. Water samples were collected in April and July 2009. Colimetric assays were performed, using the conventional methodology and other which we added 32g/mL cephalothin and 8g/mL of gentamicin at Lactose and Escherichia coli broth (EC broth), in order to detect and to count resistant coliforms. For isolation of the strains we employed culture media containing 32g/mL cephalothin and 8g/mL gentamicin. The strains were identified and submitted to tests for antimicrobial susceptibility (TSA), presumptive tests for the presence of ESBLs, plasmid DNA extraction and tests of the Polymerase Chain Reaction (PCR). The use of antimicrobial agents in colimetric assays allowed us to detect and to count the resistant total and fecal coliforms in the water samples analyzed at different points. The TSA of the isolates recovered from water samples showed multidrug-resistance profiles, compatible with that of nosocomial bacteria, similar to that found in isolates recovered from clinical materials. All isolates from water samples and 90% of the isolates of clinical samples showed at least one plasmid band. PCR assays demonstrated the presence of amplification products to AME, ESBLs and PMQRs, and 7.4% of the isolates recovered of samples of water and 20% of the isolates of clinical materials showed amplification products for the three antimicrobial classes. The colimetric assays using antimicrobials as gentamicin and cephalotin, may be important additional tool to conventional colimetric test, when the interest is the monitoring and prevention of environmental contamination, especially associated with drug-resistant microorganisms, carrying resistance genes. We believe that besides the judicious use of antimicrobial in hospital and veterinary activities, measures to prevent discharge of sewage and / or sewage treatment, are essential to control the dissemination of transferable genetic elements of resistance among microorganisms. The detection and identification of microorganisms presenting genetic elements in environment, as water and soil, privately colimetric assays using antimicrobials, are necessary to prevent and to control of dissemination to these microorganisms with potential to infect humans and other animals in eventual contact with this environment.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Buscamos detectar evidências da presença de genes envolvidos na produção de Enzimas Modificadoras de Aminoglicosídeos (EMAs), Beta-lactamases de espectro estendido (ESBLs) e Mecanismos Plasmidiais de Resistência a Quinolonas (PMQRs) em cepas de K. pneumoniae, K. ozaenae e E. coli isoladas de amostras de água de rios afluentes da Baía de Guanabara e de materiais clínicos de origem hospitalar, além de avaliar o "status sanitário" dos corpos aquáticos abordados no tocante à contaminação fecal recente e indicações de contaminação hospitalar e por outros ambientes de alta seletividade. As cepas de materiais clínicos foram selecionadas entre Maio e Julho de 2010, a partir da semeadura em meio de cultura contendo 8g/mL de gentamicina. As amostras de água foram coletadas em Abril e em Julho de 2009. Realizamos testes de colimetria, empregando para tal, a metodologia convencional e outra, na qual adicionamos 32g/mL de cefalotina e 8g/mL de gentamicina aos caldos Lactosado e Escherichia coli (caldo EC), a fim de detectar e quantificar coliformes resistentes. Para o isolamento das cepas empregamos meios de cultura contendo 32g/mL de cefalotina e 8g/mL de gentamicina. As cepas foram identificadas e submetidas a testes de susceptibilidade aos antimicrobianos (TSA), testes presuntivos para presença de ESBLs, extração de DNA plasmidial e ensaios de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) para a detecção dos genes. A utilização de agentes antimicrobianos nos testes de colimetria nos permitiu detectar a presença e quantificar coliformes totais e fecais resistentes nas amostras de água analisadas nos diferentes pontos. O TSA das cepas isoladas de amostras de água exibiu perfis de multirresistência, compatíveis com o de bactérias de origem hospitalar, semelhante ao encontrado nas cepas isoladas de materiais clínicos. Todas as cepas isoladas de amostras de água e 90% das cepas de materiais clínicos apresentaram pelo menos uma banda plasmidial. Os ensaios de PCR evidenciaram a presença de produtos de amplificação para EMAs, ESBLs e PMQRs, sendo que 7,4% das cepas de amostras de água e 20% das cepas de materiais clínicos apresentaram produtos de amplificação para as três classes de antimicrobianos. A realização de testes de colimetria empregando antimicrobianos, como gentamicina e cefalotina, pode ser uma ferramenta adicional importante ao teste convencional, quando o interesse for, o monitoramento e a prevenção de contaminação ambiental, especialmente associada a microrganismos carreando genes de resistência. O uso criterioso de antimicrobianos em atividades de cunho hospitalar e veterinário e medidas no sentido de prevenção de lançamento de esgoto e/ou tratamento dos efluentes, são fundamentais para o controle da disseminação de elementos genéticos de resistência transferíveis entre os microrganismos. A detecção e identificação de microrganismos apresentando elementos de resistência em ambiente extra-hospitalar como em água e solo, em particular, o emprego de testes de colimetria empregando antimicrobianos, se faz necessária, como forma de prevenção e controle de disseminação destes microrganismos com potencial de causar infecções em humanos e outros animais que eventualmente entram em contato com estes ambientes. / We seek to detect evidence of the presence of genes involved in the production of Aminoglycoside Modifying Enzymes (AME), Extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs) and Plasmid Mechanisms of Resistance to Quinolones (PMQRs) in strains of K. pneumoniae, K. ozaenae and E. coli isolated from water samples from rivers of Guanabara Bay and clinical samples of hospital origin, and to evaluate the "health status" of water bodies addressed in relation to recent fecal contamination and signs of hospital contamination and other environments with high selectivity. The strains from clinical materials were selected between May and July 2010, using culture media containing 8g/mL gentamicin. Water samples were collected in April and July 2009. Colimetric assays were performed, using the conventional methodology and other which we added 32g/mL cephalothin and 8g/mL of gentamicin at Lactose and Escherichia coli broth (EC broth), in order to detect and to count resistant coliforms. For isolation of the strains we employed culture media containing 32g/mL cephalothin and 8g/mL gentamicin. The strains were identified and submitted to tests for antimicrobial susceptibility (TSA), presumptive tests for the presence of ESBLs, plasmid DNA extraction and tests of the Polymerase Chain Reaction (PCR). The use of antimicrobial agents in colimetric assays allowed us to detect and to count the resistant total and fecal coliforms in the water samples analyzed at different points. The TSA of the isolates recovered from water samples showed multidrug-resistance profiles, compatible with that of nosocomial bacteria, similar to that found in isolates recovered from clinical materials. All isolates from water samples and 90% of the isolates of clinical samples showed at least one plasmid band. PCR assays demonstrated the presence of amplification products to AME, ESBLs and PMQRs, and 7.4% of the isolates recovered of samples of water and 20% of the isolates of clinical materials showed amplification products for the three antimicrobial classes. The colimetric assays using antimicrobials as gentamicin and cephalotin, may be important additional tool to conventional colimetric test, when the interest is the monitoring and prevention of environmental contamination, especially associated with drug-resistant microorganisms, carrying resistance genes. We believe that besides the judicious use of antimicrobial in hospital and veterinary activities, measures to prevent discharge of sewage and / or sewage treatment, are essential to control the dissemination of transferable genetic elements of resistance among microorganisms. The detection and identification of microorganisms presenting genetic elements in environment, as water and soil, privately colimetric assays using antimicrobials, are necessary to prevent and to control of dissemination to these microorganisms with potential to infect humans and other animals in eventual contact with this environment.

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Este estudo foi conduzido para otimizar um protocolo de floculação orgânica para recuperação viral a partir de lodo de esgoto e efluente tratado, bem como realizar um monitoramento de HAdV e RVA na estação de tratamento de esgoto (ETE) de Juiz de Fora, MG. Nos estudos de otimização, foram propostas adaptações no protocolo de floculação com leite desnatado para lodo e efluente tratado, com modificações no tempo de agitação da amostra, na concentração final de leite desnatado e/ou na etapa de centrifugação. No estudo de monitoramento, esgoto bruto (P1), esgoto primário (P2), lodo (P3) e efluente tratado (P4) foram coletados bimensalmente em 2014 (durante as épocas seca e chuvosa), totalizando 96 amostras (simples e compostas). As cargas virais foram determinadas por PCR quantitativo e o bacteriófago PP7 foi usado como controle interno. Amostras de HAdV e RVA foram submetidas ao sequenciamento e a viabilidade das partículas de HAdV foi avaliada em amostras de P4. Os parâmetros físico-químicos e a contagem de coliformes termotolerantes (CT) foram determinados em cada ponto. Nos estudos de otimização, foram selecionadas duas condições que apresentaram as maiores taxas de recuperação viral no lodo (menor tempo de agitação e maior concentração de leite desnatado) e no efluente tratado (sem primeira etapa de centrifugação e com maior concentração de leite desnatado). Ambas provaram ser ferramentas úteis para pesquisa viral em amostras de campo, inclusive para a pesquisa de vírus gigantes. No monitoramento, o HAdV foi detectado em 85,4% (82/96) dos concentrados, com cargas virais variando de 3,27 x 102 a 2,42 x 106 cópias do genoma por mililitro (cg/mL), ao longo do ano. A presença de RVA foi observada em 52,1% (50/96) dos concentrados (1,38 x 103 a 3,65 x 105 cg/mL), com maior detecção na época seca. A carga viral não foi influenciada pelo tipo de amostra, sendo detectada tanto em amostras simples, quanto em amostras compostas. Todas as amostras de HAdV sequenciadas pertenciam à espécie F tipo 41 e as amostras de RVA pertenciam ao genótipo I1. O tratamento de esgoto reduziu a quantidade de matéria orgânica e sólidos, bem como a contagem de CT e as cargas virais. No entanto, a presença de HAdV e RVA foi observada mesmo após o tratamento, inclusive em amostras de efluente tratado consideradas adequadas pelas legislações atuais, com detecção de partículas infecciosas de HAdV. Foram observadas correlações positivas entre a carga viral e a demanda bioquímica de oxigênio, os sólidos sedimentáveis e sólidos suspensos totais. Os dois protocolos otimizados neste estudo podem ser facilmente adequados para uso em laboratório de rotina, podendo impulsionar o monitoramento viral nos subprodutos gerados na ETE. A carga viral detectada na ETE salienta a disseminação ambiental de RVA e HAdV e aponta o potencial do HAdV como um marcador viral de contaminação em ambientes aquáticos. / Sewage treatment may be insufficient for the complete elimination of enteric viruses such as human adenoviruses (HAdV) and group A rotaviruses (RVA). Thus, the return of sewage sludge and treated effluent to the environment poses concerns potential for public health. This study was conducted to optimize an organic flocculation procedure for viral recovery from sludge and treated effluent, and carry out a surveillance of HAdV and RVA in a wastewater treatment plant (WWTP) at Juiz de Fora, MG. In optimization studies, conditions were proposed for sludge and treated effluent with changes in the stirring time, in the final concentration of skimmed-milk and/or in the centrifugation step. In surveillance study, raw sewage (P1), primary sewage (P2), sludge (P3) and treated effluent (P4) were collected bimonthly in 2014 (during the dry and the rainy season), totaling 96 samples (simple and composite). Quantitative PCR determined viral loads and PP7 bacteriophage was used as internal control. HAdV and RVA strains were selected for sequencing, and the HAdV viability was evaluated in P4 samples. Physicochemical parameters and thermotolerant coliforms (TC) counting were determined at each point. After the optimization studies, two conditions were selected: the ones that showed the highest viral recovery rates in sludge (lower stirring time and higher concentration of skimmed-milk) and treated effluent (without the first centrifugation step and with a higher concentration of skimmed-milk). These conditions proved to be a useful tool for viral search in the field samples, including for the research of giant virus. In surveillance study, HAdV was detected in 85.4% (82/96) of the concentrated, with viral loads ranging from 3.27 x 102 to 2.42 x 106 genome copies per milliliter (gc/mL), throughout the year. RVA presence was observed in 52.1% (50/96) of the samples (1.38 x 103 to 3.65 x 105 gc/mL) with detection greater in the dry season. Viral load was not influenced by the type of sample being detected both in single samples, as in composite samples. All the sequenced HAdV strains belonged to species F type 41, and RVA strains belonged to genotype I1. Sewage treatment reduced the content of organic matter and solids, as well as the TC counts and the viral loads. However, the presence of HAdV and RVA was observed after treatment, even in samples considered adequate by current laws with detection of infectious HAdV particles. Positive correlations were observed between viral load and biochemical oxygen demand, sedimented solids and total suspended solids. Two optimized protocols in this study are easily suitable for routine laboratory use and can boost viral monitoring in by-products generated in the WWTP. Viral load detected in WWTP stress the environmental dissemination of HAdV and RVA and addressed the potential of HAdV as a virological marker of contamination in aquatic environments.