Orientador: Prof. Dr. Nelson A. Rosário Filho / Co-orientadora: Profª. Drª. Lilian Pereira Ferrari / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 06/06/2014 / Inclui referências / Resumo: A doença pulmonar é um componente importante na Fibrose Cística (FC), pois a maioria dos pacientes vai á óbito devido este quadro ocasionado por infecções bacterianas, e pelo diagnóstico tardio na maioria dos centros de atendimento da FC. Os objetivos do trabalho foram verificar a microbiota das vias aéreas de pacientes com FC do Estado do Paraná, triados e acompanhados pelo ambulatório de FC do Hospital de Clínicas -UFPR (HC) no ultimo quinquênio (2008-2012). Para fins de análise os pacientes foram organizados da seguinte forma: grupo 1: pacientes acompanhados a partir de 2 anos de idade e grupo 2: pacientes acompanhados desde o 1º mês de idade. A pesquisa foi um estudo retrospectivo de análise de dados registrados no sistema informatizado do HC e acessados através do serviço de Alergia, Imunologia e Pneumologia, com 83 pacientes, visando acompanhar a evolução das colonizações do trato respiratório nos primeiros anos de vida. Durante a pesquisa foi realizada a busca de informações referentes ao número de culturas: realizadas, positivas, negativas durante 5 anos. Os resultados apontaram que o tempo de inclusão no programa foi em média 2 meses, semelhante aos dados da Cystic Fibrosis Foundation. S. aureus foi o primeiro patógeno isolado, a média de idade de 1,5 anos e apresentou a maior ocorrência por paciente (47%), a colonização por MRSA foi menor que a observada na literatura (7,7% no grupo 1 e 7% no grupo 2). A prevalência do complexo Burkholderia cepacia (cBc) nas crianças a partir de 1 mês de idade foi em torno de 10%, houve aumento do número de culturas positivas para os principais patógenos no 3º ano de acompanhamento com posterior queda no 5º ano nos 2 grupos, mas com comportamento das colonizações semelhante entre grupos. Foi também observado relação inversa entre a frequência de culturas positivas para fungos em relação à frequência dos principais patógenos, sugerindo efeito inibidor da P. aeruginosa em relação à colonização por fungos. Embora tenha sido observada alta taxa de colonização pelos principais patógenos, ao final do 5º ano de acompanhamento houve diminuição das colonizações, possivelmente decorrente do tratamento. Os dados observados corroboram com a literatura que atribui a estratégia de triagem neonatal à possibilidade de diagnóstico e tratamento precoces das colonizações sugerindo ser esta a única forma de prolongar a sobrevivência ao paciente com qualidade de vida. Palavras- chave: Fibrose cística, epidemiologia, microbiologia / Abstract: Respiratory tract disease is an important component in Cystic Fibrosis (CF), since the vast majority of patients died due to pulmonary disease caused by bacterial infections, and due to a late diagnosis in most CF medical centers. The aim of this research were to verify the microorganism colonization of the airways of CF patients from Paraná state, screened and monitored by CF ambulatory, HC- UFPR, in the last five-year period ( 2008-2012). For purposes of analysis, patients were divided as follows: group 1: patients followed since 2 years old and group 2: patients followed since the first month of age.The study was an observational retrospective cohort study of 83 patients, to monitor the progress of colonization of the respiratory tract early in life, through a survey done in the database of Allergy, Immunology, Pulmonology from HC service from HC. Information regarding the number of cultures was obtained and if they were positive or negative in the last 5 years. The results showed that the time of inclusion in the program was on average 2 months, similar to data from the Cystic Fibrosis Foundation. The S. aureus was first isolated pathogen, at the mean age of 1.5 years and had the highest incidence per patient (47%) colonization with MRSA was lower than that observed in the literature (7.7% in group 1 and 7% in group 2). The prevalence of the complex of Burkholderia cepacia (cBc) in children from 1 month of age was around 10%, there was an increase in the number of positive cultures for the pathogens in the 3rd year of follow up with further decrease in the 5th year in both groups , but with the behavior of colorization similar between the groups. It was also observed an inverse relationship between the frequency of positive cultures for fungi and yeasts in the frequency of the main pathogens, suggesting an inhibitory effect of P. aeruginosa in relation to colonization by fungi and yeasts. Although high colonization rate was observed by major pathogens, at the end of the 5th year of follow-up there was a decrease of colonization, probably due to treatment. These data corroborate the literature that attributes to the neonatal screening the possibility of early diagnosis and treatment suggesting that this is the only way to prolong the survival of patients with quality of life. Keywords: Cystic Fibrosis, Epidemiology, Microbiology

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-07Bitstream added on 2014-06-13T21:06:08Z : No. of bitstreams: 1 porto_cd_dr_botfmvz.pdf: 1382971 bytes, checksum: 28cb91b96745b48451d036819e9d1632 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivos avaliar os índices de proliferação celular e apoptótico, nos endométrios sadios, portadores de endometrite crônica e com endometrose por método imunoistoquímico. Ainda, verificou-se a expressão e distribuição do TGF-β1 e das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 e sua relação com os índices de proliferação celular e apoptóticos, além da inter-relação entre esse fator de crescimento e as enzimas colagenolíticas estudadas. Os resultados obtidos foram comparados aos diferentes graus de alteração endometrial das éguas, e os tipos de colágeno presentes e sua proporção nas endometrites crônicas, especificados por técnicas histoquímicas. Foram utilizadas 60 biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts & Alonso (1991) para endometrite crônica infiltrativa e endometrose. A avaliação do colágeno foi realizada pelos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson e Picrosirius Red - Polarização. Estudo morfométrico da fibrose periglandular foi realizado utilizando-se a técnica histoquímica do Picrosirius Red - Polarização. Os resultados mostraram que nos endométrios portadores de endometrite grave há deposição de colágeno do tipo III e do tipo I, sendo este predominante. Não houve diferença significativa na extensão da fibrose periglandular entre as endometrites crônicas infiltrativas e endometroses. A expressão do TGF-β1 foi escassa, presente nos endométrios normais e com alterações inflamatórias e degenerativas, e teve como principal fonte as células inflamatórias, embora tenha mostrado positividade nas células estromais em grande número de amostras, esparsamente. Não foi possível relacionar a presença do TGF-β1... (Acesso ao texto completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The aim of this study was to evaluate the indexes of cellular proliferation and apoptosis in healthy endometrium and with chronical lesions by means of immunohistochemical method. It was also verified the expression and distribution of TGF-β1 and metalloproteinases (MMP) 2 and 9 and its relation with the rates of cellular proliferation and apoptosis, besides the interrelation between that growth factor and the studied collagenolytic enzymes. The results were compared to the different degrees of endometrial alteration of the mares, and the present types of collagen and its proportion in chronical lesions, specified by histochemical techniques. Sixty endometrial biopsies were classified in agreement with Kenney and Doig (1986) and according to the definitions of Ricketts & Alonso (1991) for infiltrative chronic endometritis and endometrosis. The collagen evaluation was made by Masson’s trichrome and Picrosirius Red staining methods. The endometrial periglandular fibrosis morphometric analysis was carried out by using Picrosirius Red stained slides. Deposition of type III collagen and type I collagen was seen in severe endometritis with type I predominance. The chronic infiltrative endometritis and endometrosis didn’t show significant difference in the extension of periglandular fibrosis. The expression of TGF-β1 was scanty, present in normal endometrium and with chronical lesions, and it had as main source the inflammatory cells, although it has shown assertiveness in the stromal cells in a great number of samples, sparsely. It was not possible the correlation of TGF-β1... (Complete abstract click electronic access below)

A fibrose cística (FC) é a doença autossômica recessiva mais comum em euro-descendentes, com uma incidência estimada de 1 caso a cada 2.500 nascimentos. A FC é uma doença multissistêmica, caracterizada principalmente por doença pulmonar progressiva, disfunção pancreática exócrina e concentração elevada de eletrólitos no suor. O gene associado a essa doença é denominado CFTR e se localiza no cromossomo 7, sendo dividido em 27 éxons. Até o momento, mais de 1.600 variações de sequência foram identificadas no gene CFTR, sendo que a mutação F508del é a mais frequente entre os pacientes de FC. No Brasil, a frequência da F508del não é tão elevada, devido provavelmente à miscigenação e, consequentemente, o locus CFTR apresenta maior heterogeneidade alélica. Este fato dificulta o diagnóstico molecular dos pacientes com FC e metodologias de varredura para a detecção de mutações precisam ser utilizadas. O objetivo deste trabalho foi identificar alterações em regiões codificantes do gene CFTR em pacientes com FC provenientes da região sul do Brasil, através de análise de dissociação em alta resolução (HRM) e sequenciamento de DNA. Onze éxons e regiões adjacentes foram analisados por HRM e 10 alterações de sequência diferentes foram detectadas (R75Q, R334W, F508del, 1717-1G>A, G542X, R553X, 1812-1G>A, A561E, G576A e N1303K). Além disso, uma alteração denominada L453X, ainda não descrita na literatura, foi identificada em um paciente de FC através do sequenciamento do éxon 9 do CFTR. A região polimórfica (TG)nTm presente no íntron 8 foi caracterizada e nenhum paciente apresentou a variante alélica contendo 5T. Através da estratégia utilizada, 30 dos 52 alelos mutantes (57,7%) nos 26 pacientes incluídos nesse estudo foram identificados. O genótipo de 7 (26,9%) pacientes foi definido e alteração em um dos alelos mutantes foi identificada em 16 (61,6%) pacientes. Portanto, a aplicação do método HRM foi eficaz para identificação de variações de sequência em regiões do gene CFTR na amostra estudada. O método pode ser expandido para análise de toda a região codificante desse gene e, posteriormente, ser usado como metodologia de escolha para diagnóstico molecular de pacientes com suspeita clínica de FC, seja em casos sintomáticos como em programas de triagem neonatal. / Cystic fibrosis (CF) is the most common autosomal recessive disease in euro-descendents with an estimated incidence in 1 case in each 2,500 live births. CF is a multisystem disease, characterized mainly by progressive obstructive pulmonary disease, pancreatic insufficiency, and high electrolytes levels of electrolytes in sweat. The gene responsible for CF, named CFTR, is located on chromosome 7 and is organized into 27 exons. Up to date, more than 1,600 sequence variations have been reported in CFTR, and the F508del mutation is the most frequent worldwide. In Brazil, F508del frequency is lower than in other countries probably due to population admixture. This indicates that CFTR locus can be more heterogeneous. Therefore, CF molecular diagnosis can be very hard and new methods for mutation scanning would be useful to improve this task. The aim of this work was to identify allelic variants in CFTR coding regions of CF patients from South Brazil through high-resolution melting (HRM) analysis and DNA sequencing. Eleven exons and adjacent regions were analyzed by HRM, and 10 different sequence variants were identified (R75Q, R334W, F508del, 1717-1G>A, G542X, R553X, 1812-1G>A, A561E, G576A and N1303K). A novel variant (L453X) was detected in CFTR gene through exon 9 DNA sequencing, besides these known mutations. The polyvariant (TG)nTm region at intron 8 was also analyzed and 5T allelic variant was not present in any allele. The strategy described above was able to identify 30 out of 52 CF mutant alleles (57.7%) in 26 patients. Genotype of 7 (26.9%) patients was defined and mutation in one mutant allele was identified in 16 (61.6%) patients. Therefore, application of HRM analysis was efficient to detect sequence variations in specific regions of CFTR gene in this sample population. The methodology can be expanded to cover the whole coding region of this gene. Subsequently, this methodology can be adapted to be applied in the molecular diagnosis of symptomatic CF cases as well as samples from neonatal screening programs.

Introdução: A Fibrose Cística é uma doença autossômica recessiva associada a infecções respiratórias crônicas e que leva a considerável morbidade e mortalidade. O Pneumocystis jirovecii é um fungo que causa pneumonia em imunossuprimidos e cuja colonização em várias doenças pulmonares mostrou ser um fenômeno clínico importante. Objetivo: Avaliar a taxa de colonização e a distribuição dos genótipos do P. jirovecii entre pacientes com Fibrose Cística. Material e métodos: Foram estudados 34 pacientes com Fibrose Cística que realizaram broncoscopia no Hospital de Clínicas de Porto Alegre entre março de 2004 e agosto de 2007. A detecção do P. jirovecii no lavado broncoalveolar (LBA) foi feita através de nested-PCR com a utilização dos primers pAZ 102-E e pAZ 102-H no primeiro round e pAZ 102-X e pAZ 102-Y no segundo. A caracterização do gene da Diidropteroato sintetase (DIPS) e da Grande Subunidade do RNA ribossômico mitocondrial (mtLSUrRNA) foi realizada através do uso de enzimas de restrição e de seqüenciamento genético, respectivamente. Os dados clínico-demográficos dos pacientes foram obtidos dos prontuários médicos e analisados quanto à presença de colonização. Resultados: A colonização pelo P. jirovecii foi detectada em 38,2% (13/34) dos pacientes com Fibrose Cística. Nenhum dado clínico-demográfico pôde ser associado significativamente (p<0,05) à presença da colonização nos 34 pacientes estudados. Na caracterização genotípica da DIPS, o genótipo selvagem - ausência de mutações nas posições 55 e 57 – foi observado em todos os casos. Na tipagem da mtLSUrRNA, o genótipo 1 (85C/248C) foi observado em 41,6% dos casos, o genótipo 2 (85A/248C) em 16,6% , o genótipo 3 (85T/248C) em 25% e o genótipo misto 1 e 3 em 16,6% dos casos. Conclusão: Foi observada uma alta taxa (38,2%) de colonização pelo P. jirovecii entre os 34 pacientes. Este achado sugere que os portadores de Fibrose Cística podem constituir um reservatório significativo do fungo, uma importante fonte de infecção do microorganismo a outros pacientes. Quanto a uma possível associação entre a colonização pelo P. jirovecii e o curso clínico da doença, faz-se necessário estudar um número maior de pacientes. Os resultados da distribuição genotípica da mtLSUrRNA do P. jirovecii confirmam a predominância dos subtipos 1 e 3 entre os portadores da Fibrose Cística. / Introduction: Cystic Fibrosis is na autosomal recessive disorder associated to chronic respiratory infections, which leads to considerable morbidity and mortality. Pneumocystis jirovecii is a fungus that causes pneumonia in immunosuppressed patients and its colonization rate on several pulmonary diseases is a significant clinical phenomenon. Objective: Assess the rate of P. jirovecii genotypes colonization and distribution in patients with Cystic Fibrosis. Material and methods: 34 patients with Cystic Fibrosis who have undergone bronchoscopy at Hospital de Clínicas de Porto Alegre between March 2004 and August 2007 were evaluated. Detection of P. jirovecii by analysis of bronchoalveolar lavage (BAL) was carried out with nested-PCR, with the use of primers pAZ 102-E and pAZ 102-H in the first round, and pAZ 102-X and pAZ 102-Y in the second round. Characterization of the diihydropteroate synthase (DHPS) gene and the mitochondrial Large Subunit ribosomal RNA (mtLSUrRNA) was performed with the use of restriction enzymes and genetic sequencing, respectively. The clinical and demographic data of patients was obtained from their medical records and analyzed for the presence of colonization. Results: P. jirovecii colonization was detected in 38,2% (13/34) of the patients with Cystic Fibrosis. No clinical-demographic data was significantly associated (p<0,05) to the presence of colonization in the 34 studied patients. Genotypical characterization of DHPS, the wild genotype – absence of mutations in the 55 and 57 positions – was observed in all the cases. In mtLSUrRNA typing genotype 1 (85C/248C) was observed in 41,6% of the cases, genotype 2 (85A/248C) in 16,6%, genotype 3 (85T/248C) in 25% and mixed genotype 1 and 3 in 16,6% of the cases. Conclusion: A high rate (38,2%) of P. jirovecii colonization was found in the 34 patients. This finding suggests that Cystic Fibrosis patients may constitute a major reservoir and source of infection for other patients. As for a possible association between P. jirovecii colonization and the clinical evolution of the disease, further research with a greater number of subjects is needed. The results of P. jirovecii mtLSUrRNA genotypical distribution confirm the predominance of subtypes 1 and 3 among Cystic Fibrosis patients.

Resumo não disponível

Resumo: A fibrose cística (FC) tem incidência de 1:9.520 nascidos vivos no Estado do Paraná. A principal causa de morbidade e mortalidade da doença é a infecção crônica por Pseudomonas aeruginosa (PA), o que torna a detecção e o tratamento precoces da colonização cruciais para prevenir a instalação da bactéria. Os objetivos do presente trabalho foram documentar a evolução da colonização por PA em crianças com FC na primeira infância, e determinar o método laboratorial mais eficaz, cultura de orofaringe ou detecção de anticorpos anti-LPS de PA, na detecção precoce da presença da bactéria. Trata-se de um estudo observacional de coorte prospectivo longitudinal. Quarenta e quatro crianças diagnosticadas com FC foram acompanhadas por três anos. Foram coletados swabs de faringe posterior para cultura e amostras de sangue para quantificação de anticorpos IgG contra uma preparação padronizada de antígeno de lipopolissacáride purificado de PA, a intervalos de aproximadamente 6 meses. Foi encontrada nas culturas uma frequência total de colonização por PA em 75% dos pacientes, dos quais aproximadamente 15% eram crônicos durante todo o tempo de acompanhamento. O método laboratorial mais eficaz para o diagnóstico precoce da infecção pulmonar por PA nos pacientes estudados foi a cultura de orofaringe. A utilização do LPS purificado de PA como antígeno demonstrou soroconversão significativa anterior à cultura somente na faixa etária entre 2 e 4 anos de idade, indicando que o método sorológico utilizado não foi capaz de detectar a infecção por PA antes da cultura em todos os pacientes estudados. Entretanto, o uso concomitante de métodos tradicionais bacteriológicos (cultura) e sorológicos pode contribuir para o diagnóstico precoce da presença de PA em crianças pequenas incapazes de obter amostras respiratórias ideais para o isolamento de PA. A baixa incidência de exacerbações respiratórias, o estado nutricional adequado da maioria dos pacientes, e a baixa prevalência de colonização crônica por PA podem ser explicados, pelo menos em parte, pela eficácia do monitoramento ambulatorial oferecido aos pacientes.

Submitted by Amanda Ribeiro dos Santos null (amandashalar@hotmail.com) on 2018-04-09T20:47:32Z No. of bitstreams: 1 2018-04-09_Dissertação_AmandaRibeiro-VersãoFinal.pdf: 5828961 bytes, checksum: d332ff1b02f6b315b3c46c6eb3e0fe4c (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Pizzani null (luciana@btu.unesp.br) on 2018-04-10T18:58:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santos_ar_me_bot.pdf: 5828961 bytes, checksum: d332ff1b02f6b315b3c46c6eb3e0fe4c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-10T18:58:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santos_ar_me_bot.pdf: 5828961 bytes, checksum: d332ff1b02f6b315b3c46c6eb3e0fe4c (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por fungos do gênero Paracoccidioides; suas principais formas clinicas são aguda/subaguda, crônica (FC) e residual. A maioria dos pacientes com a FC da doença, mesmo após tratamento eficaz, apresenta sequelas, principalmente fibrose pulmonar (FP) e enfisema. Os problemas sociais, econômicos e psicológicos desencadeados pela FP são subestimados. Apesar da fibrogênese na PCM ser reconhecida como um processo precoce, seus mecanismos não são totalmente conhecidos. No presente estudo, determinamos o perfil proteômico sérico de pacientes com PCM-FC com diferentes desfechos de FP. Vinte e nove pacientes com PCM pulmonar foram acompanhados periodicamente e as amostras de soro sanguíneo foram coletadas em quatro momentos: antes do tratamento (M0), cura clínica (M1), cura sorológica (M2) e cura aparente (M3). O grupo controle foi constituído por amostras de quinze indivíduos fumantes, pareados com idade e sexo dos pacientes avaliados. Ao final do tratamento (M3), os pacientes foram submetidos à avaliação de tomografia computadorizada e dois grupos de pacientes foram formados com base nos resultados de PF: PF menor (n = 17) e PF maior (n = 12). As proteínas de elevada abundância no soro foram removidas e, em seguida, submetidas à análise proteômica shotgun através do sistema nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS. A identificação e quantificação das proteínas foram realizadas usando o software PLGS Expression E. Análise de enriquecimento e análise de rede de interação proteína-proteína (PPI) foram realizadas usando o software String. Antes do tratamento, os pacientes com PF menor, em comparação aos controles, apresentavam 91 proteínas diferencialmente expressas (60 sub-reguladas 31 superreguladas). Soro de pacientes com maior PF apresentaram 70 proteínas diferencialmente expressas (66 sub-reguladas 4 reguladas). A maioria dessas proteínas estavam envolvidas na regulação do processo celular e resposta inflamatória. Nas condições ensaiadas, o estudo permitiu identificar as proteínas APOH, A2M, GC e SERPINA1 como alvos envolvidos nos mecanismos moleculares da fibrogênse pulmonar na paracoccidioidomicose. Foi observado, ainda, que o momento de cura clínica apresentou maior atividade pró-fibrótica durante o seguimento dos pacientes. Além disso, foram identificadas 20 proteínas candidatas a biomarcadores no prognóstico da fibrose pulmonar, conforme segue: família das hemoglobulinas (HBB, HBD, HBG2, HBE1, HBG1, HBA1), ENO3, A2M, APOH, GC, IGHG-1, -2 e 3, IGLC1, -2 e -3, HP, SERPINA1, LRG1 e PZP. Nossos achados fornecem novos alvos para estudos futuros envolvendo a FP na PCM, assim como biomarcadores séricos em potencial. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is systemic mycosis caused by fungi of the genus Paracoccidioides; its main clinical forms are acute / subacute, chronic (CF) and residual. Most FC-PCM patients, even after effective treatment, present sequelae, mainly pulmonary fibrosis (PF) and emphysema. The social, economic and psychological problems triggered by PF are underestimated. Although fibrogenesis in PCM is recognized as an early process, its mechanisms are not fully known. In the present study, we aimed to determine the serum proteomic profile of patients with FC-PCM with different (PF) outcomes. Twenty-nine patients with pulmonary PCM patients were followed up periodically, and blood serum samples were collected in four moments: before treatment (M0), clinical cure (M1), serological cure (M2), and apparent cure (M3). For control group (n=15), serum samples of sex and age-matched smokers were also collected. At the end of treatment (M3), the patients were submitted to CT Scan evaluation and two groups of patients were formed based on PF outcomes: minor PF (n=17) and major PF (n=12). High-abundance proteins were removed from serum and submitted to shotgun proteomic assay using a nanoACQUITY UPLC-Xevo QTof MS system. The identification and quantification of proteins were performed using PLGS Expression E software. Enrichment analysis and protein-protein interaction (PPI) network analysis were performed using String software. Before treatment, patients with minor PF, in comparison to controls, showed 91 differentially expressed proteins (60 down-regulated and 31 up-regulated). Serum of patients with major PF exhibited 70 differentially expressed proteins (66 down-regulated and 4 up-regulated). Most of these proteins are involved in the regulation of cellular process and inflammatory response. The results allowed the identification of APOH, A2M, GC and SERPINA1 as targets involved in the molecular mechanisms of pulmonary fibrogenesis in paracoccidioidomycosis. It was also observed that the clinical cure presented greater pro-fibrotic activity during the follow-up of the patients. In addition, 20 candidate biomarkers were identified in the prognosis of pulmonary fibrosis, as follows: hemoglobin family (HBB, HBD, HBG2, HBE1, HBG1, HBA1), ENO3, A2M, APOH, GC, IGHG-1, -2 and 3, IGLC1, -2 and -3, HP, SERPINA1, LRG1 and PZP. Our findings provide new targets for further studies involving mechanisms of PF in PCM, as well as for promising potential biomarkers. / CNPq 470221/2014-3

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Noeme Sousa Rocha / Banca: Carlos Alberto Hussni / Banca: Louisiane de Carvalho Nunes / Banca: Anaglória Pontes / Resumo: O presente trabalho teve por objetivos avaliar os índices de proliferação celular e apoptótico, nos endométrios sadios, portadores de endometrite crônica e com endometrose por método imunoistoquímico. Ainda, verificou-se a expressão e distribuição do TGF-β1 e das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 e sua relação com os índices de proliferação celular e apoptóticos, além da inter-relação entre esse fator de crescimento e as enzimas colagenolíticas estudadas. Os resultados obtidos foram comparados aos diferentes graus de alteração endometrial das éguas, e os tipos de colágeno presentes e sua proporção nas endometrites crônicas, especificados por técnicas histoquímicas. Foram utilizadas 60 biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts & Alonso (1991) para endometrite crônica infiltrativa e endometrose. A avaliação do colágeno foi realizada pelos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson e Picrosirius Red - Polarização. Estudo morfométrico da fibrose periglandular foi realizado utilizando-se a técnica histoquímica do Picrosirius Red - Polarização. Os resultados mostraram que nos endométrios portadores de endometrite grave há deposição de colágeno do tipo III e do tipo I, sendo este predominante. Não houve diferença significativa na extensão da fibrose periglandular entre as endometrites crônicas infiltrativas e endometroses. A expressão do TGF-β1 foi escassa, presente nos endométrios normais e com alterações inflamatórias e degenerativas, e teve como principal fonte as células inflamatórias, embora tenha mostrado positividade nas células estromais em grande número de amostras, esparsamente. Não foi possível relacionar a presença do TGF-β1... (Acesso ao texto completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the indexes of cellular proliferation and apoptosis in healthy endometrium and with chronical lesions by means of immunohistochemical method. It was also verified the expression and distribution of TGF-β1 and metalloproteinases (MMP) 2 and 9 and its relation with the rates of cellular proliferation and apoptosis, besides the interrelation between that growth factor and the studied collagenolytic enzymes. The results were compared to the different degrees of endometrial alteration of the mares, and the present types of collagen and its proportion in chronical lesions, specified by histochemical techniques. Sixty endometrial biopsies were classified in agreement with Kenney and Doig (1986) and according to the definitions of Ricketts & Alonso (1991) for infiltrative chronic endometritis and endometrosis. The collagen evaluation was made by Masson's trichrome and Picrosirius Red staining methods. The endometrial periglandular fibrosis morphometric analysis was carried out by using Picrosirius Red stained slides. Deposition of type III collagen and type I collagen was seen in severe endometritis with type I predominance. The chronic infiltrative endometritis and endometrosis didn't show significant difference in the extension of periglandular fibrosis. The expression of TGF-β1 was scanty, present in normal endometrium and with chronical lesions, and it had as main source the inflammatory cells, although it has shown assertiveness in the stromal cells in a great number of samples, sparsely. It was not possible the correlation of TGF-β1... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-07-04T02:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000459023-Texto+Completo-0.pdf: 766453 bytes, checksum: df09225ab12d18f640f368a0a5436a50 (MD5) Previous issue date: 2014 / Introduction : Cystic Fibrosis (CF) is a disease of autosomal recessive character, chronic and progressive, with involvement in various organs and systems. Respiratory and gastrointestinal disorders are more prevalent, which usually results in nutritional deficit. However, when there is a worsening of the clinical condition, requiring hospitalization, the risk of nutritional inbalance increases. The aim of this study was to evaluate variation in weight and body composition during hospitalization of children and adolescents with cystic fibrosis who received hypercaloric and hyperlipidic diet during hospitalization.Methods : This is a longitudinal study involving children and adolescents with CF hospitalized at São Lucas's Hospital/ PUCRS. Bioimpedance analysis was used to assess body composition. The evaluation took place within 48 hours after admission and 24 hours prior to hospital discharge. The energy and nutrient intake was investigated through a food record during three consecutive days. Comparisons between weight and body composition during hospitalization were performed through the corresponding statistical tests (t test and the Mann - Whitney test). Differences were considered significant at p < 0. 05.Results : The sample consisted of 13 patients, 8 (62 %) male. The mean age was 10. 8 ± 3. 61 years. The mean hospital stay was 14. 5 ± 3. 75 days. At the beginning of hospitalization, most patients were eutrophic (n = 9). Regarding categorization by pulmonary function, patients had moderate pulmonary disease according to FEV1 (52. 08 ± 22. 2). Patients received hypercaloric and hyperlipidic diet during hospitalization , and the findings showed significant changes in the variables, weight and fat mass (weight = 1. 47 kg and fat mass 1. 06 kg , p < 0. 0001).Conclusion : The hypercaloric and hyperlipidic diet recommended during hospitalization was associated with significant weight gain and fat mass, with improvement of the nutritional status of most patients. / Introdução : A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética de caráter autossômico recessivo, crônica e progressiva, com acometimento em diversos órgãos e sistemas. As alterações respiratórias e gastrointestinais são mais prevalentes, o que resulta geralmente em um comprometimento nutricional. Todavia, quando existe uma piora do estado clínico com necessidade de internação hospitalar, o risco ou falência nutricional aumenta. O objetivo deste estudo foi avaliar a variação de peso e da composição corporal durante a internação hospitalar de crianças e adolescentes portadores de Fibrose Cística que receberam dieta hipercalórica e hiperlipídica durante a internação hospitalar.Métodos : Estudo longitudinal, envolvendo crianças e adolescentes com Fibrose Cística internados no Hospital São Lucas/PUCRS. A análise de bioimpedância foi utilizada para avaliação da composição corporal. A avaliação ocorreu em até 48 horas após a internação e 24 horas antes da alta hospitalar. A ingestão energética e de nutrientes foi investigada por meio do registro alimentar de três dias consecutivos. As comparações entre o peso e a composição corporal durante a internação foram realizadas mediante os testes estatísticos correspondentes (teste t e teste de Mann-Whitney). As diferenças foram consideradas significativas com p < 0,05.Resultados : A amostra estudada constituiu-se de 13 pacientes, sendo 8 (62%) do sexo masculino. A média de idade foi de 10,8± 3,61 anos. O tempo médio de internação foi 14,5±3,75 dias. No início da internação, a maioria dos pacientes encontravam-se eutróficos (n=9). Quanto à categorização pela função pulmonar, os pacientes apresentaram doença pulmonar moderada conforme os valores de VEF1 (52,08±22,2). Os pacientes receberam dieta hipercalórica e hiperlipídica durante a internação, e os achados demonstraram alteração significativa nas médias das variáveis, peso e massa gorda (peso= 1,47 kg e massa gorda 1,06 kg; p<0,0001).Conclusão : A dieta hipercalórica e hiperlipídica preconizada durante a internação esteve associada a um ganho significativo de peso e de massa gorda, com melhoria do estado nutricional de grande parte dos pacientes.

O trabalho avalia a contribuição da tomografia computadorizada de alta resolução (TCAR) para o estudo das alterações torácicas na fibrose cística, através da comparação com o exame radiologico convencional do tórax (ERCT). Determina os achados patológicos de 25 pacientes (com 5 a 17 anos) na TCAR e os compara com os identificados no ERCT. Os exames foram realizados em sucessão imediata. Utilizaram-se cortes axiais de 2 mm de espessura, com ]Omm de intervalo entre eles; tempo de rastreamento de 1,4 e 2,0 s; 125 kV e 150 mA. As TCAR foram fotografadas em 3 janelas de densidades apropriadas ao estudo do tórax: parênquima (nível-l024 e janela de 1200 a 2050), brônquios (nível- 550 a - 1000 e janela 1700 a 2300) e mediastino (nível - 30 a -80 e janela 320 a 500). Os achados mais freqüentemente detectados na TCAR do que no ERCT são: espessamento brônquico (100 %), bronquiectasias cilíndricas (96 %), adenomegalias (92 %), impacção mucóide (84 0/0), consolidação e/ou atelectasia (48 %), espessamento pleural costal (32 %), bolhas (20 %) e enfisema localizado (8 %). Bronquiectasias císticas (52 %) e deformação e/ou espessamento das cissuras (60 %) foram mais freqüentes no ERCT. A identificação de alterações das VIas aéreas nos segmentos broncopulmonares foi significativamente superior na TCAR (p<0,05). Em ambos exames, os lobos à direita foram mais freqüentemente comprometidos, especialmente o superior. Verificou-se, em 16 % das TCAR, espessamento do tecido intersticial ao longo dos feixes broncovasculares dos segmentos basais de ambos os pulmões, incluil1do vasos venosos e a gordura presente entre estas diferentes estruturas. A aplicação de sistema de escores para os achados da TCAR permite avaliação mais objetiva da extensão e intensidade das alterações detectadas, diminuindo o componente subjetivo da interpretação radiológica. A TCAR contribui para o entendimento da natureza de alguns achados do ERCT. / This study evaluate the contribution of high resolution computed tomography (HRCT) in assessing thoracic involvement in cystic fibrosis, as compared to chest plain radiography (CPR). The HRCT findings of 25 patients (5 to 17 years old) were determined and compared with those obtained by CPR. The two investigations were performed in elose succession. Sections 2 mm thick were obtained at 10 mm intervals with IA to 2.0 s acquisition time at 125 kV and 150 mA. AlI images were photographed at three leveIs and windows settings appropriated for evaluation of the thorax: parenchyma (widths 1200 to 2050 at leveI -1024), bronchi (widths 1700 to 2300 at leveI -550 to -] 000) and mediastinum (widths 320 to 500 at leveI -30 to -80). The findings more frequently detected by HRCT than by CPR were: peribronchial thickening (100 %), cylindrical bronchiectasis (96 %), adenomegaly (92 %), mucus plugging (84 %), consolidationlatelectasis (48 %), costal pleural thickening (32 %), bullae (20 %) and local emphysema (8 %). Cystic bronchiectasis (52 0/0) and fissures deformationlthickening (60%) were more frequent1y detected by CPR. Detection of airways abnormalities in the bronchopulmonary segments was significant1y superior by HRCT (p<0,05). By either exam the right lobes were more frequently involved, specially the upper lobe. Thickening of the intersticial tissue along the bronchovascular bundles in bilateral basilar segments, ineluding venous vessels and the fat present between these different structures, were manifested in ]6 % of the HRCT exams. The use of a scoring system to HRCT findings allows a more objetive evaluation of the extent and severity of the abnormalities detected and diminish the subjective component of radiographic interpretation. HRCT did contribute to the understanding ofthe pathologic nature of some CPR findings.