A diferenciação diagnóstica entre colestase extra-hepática e colestase intra-hepática no neonato é um desafio que exige solução antes das primeiras oito semanas de vida. Este estudo compara os resultados da cintilografia de vias biliares seqüencial de 24 horas, do Índice Hepático e do estudo de variáveis histopatológicas hepáticas na diferenciação diagnóstica das causas da colestase neonatal de 49 pacientes internados no Hospital de Clinicas de Porto Alegre entre 1984 e 1991. Vinte e três pacientes foram avaliados prospectivamente pela cintilografia seqüencial de 24 horas e Índice Hepático. Vinte e seis pacientes foram avaliados retrospectivamente, não tendo sido submetidos ao Índice Hepático. Do total de pacientes, em 47 foi realizado estudo histopatológico de figado. A etiologia da colestase neonatal entre os casos estudados inclui atresia de vias biliares (24 pacientes) , hepatite neonatal idiopática (20 pacientes), lues congênita (1 paciente), doença de Caroli (1 paciente), sindrome de Alagille (1 paciente), galactosemia (1 paciente) e sepse (1 paciente). A distribuição sexual na amostra foi 32 meninos e 17 meninas, sendo a relação masculino:feminino próxima de 3:1 na colestase intra hepática e em torno de 1 : 1 na colestase extra-hepática. A freqüência de anomalias extra-hepáticas congênitas associadas à colestase neonatal foi semelhante nas colestases intra e extra-hepática. Um caso de sindrome de polisplenia foi encontrado em um paciente com colestase intra-hepática. A sensibilidade da cintilografia seqüencial de 24 horas e do Índice Hepático foi de 100%. No estudo histopatológico hepático a sensibilidade foi de 95,8%. A especificidade da cintilografia seqüencial de 24 horas em avaliação retrospectiva foi de 45, 5%, a do Índice Hepático foi de 42,8%. Quanto à cintilografia seqüencial em estudo prospectivo a especificidade foi de 71, 4%. Não houve relação entre bilirrubinemia total e de reação direta, e os resultados da cintilografia seqüencial de 24 horas em pacientes com colestase intra-hepática. A especificidade do estudo das variáveis histopatológicas hepáticas foi de 60,9%. As variáveis histopatológicas hepáticas mais importantes na diferenciação entre colestase intra e extra-hepática pelo teste da Análise Discriminante foram proliferação ductal peri-portal, proliferação ductal portal, expansão portal , colestase em duetos neoformados e pontes porta-porta sugerindo colestase extra-hepática. Metaplasia mielóide mostrou-se sugestiva de colestase intra- hepática. Nenhuma variável histopatológica hepática foi discrimi nadora entre coles tase intra e extra-hepática nas primeiras oito s e manas de vida. Os pacientes, tanto com colestase intra-hepática como com coles tase extra- hepática, fizeram a cintilografia, na média com mais de oito semanas de vida <77,94 ~ 42 , 98 dias de vida) e o estudo histopatológico hepático cerca de duas semanas após a realização do teste cintilográfico. Apenas seis pacientes (12,8% dos 47 casos) fizeram o estudo histopatológico hepático antes dos primeiros 60 dias de vida.

Introdução: A doença hepática alcóolica (DHA) e a doença hepática gordurosa não alcóolica (DHGNA) estão entre as principais causas de morte por doenças hepáticas no mundo. Apesar das etiologias distintas, sendo a DHA causada pelo consumo excessivo de álcool e a DHGNA por dieta inadequada e sedentarismo, apresentam curso de doença semelhante, que pode evoluir de esteatose, para esteato-hepatite, fibrose, cirrose e carcinoma hepatocelular. Tanto a DHA quanto a DHGNA estão relacionadas à disbiose, aumento de permeabilidade intestinal, inflamação e dano hepático. Entretanto, ainda não está claro se a doença hepática precede as alterações no epitélio intestinal ou se é o aumento da permeabilidade que promove o dano hepático. Objetivo: Avaliar a expressão gênica de Tight Junctions em modelo de DHA e DHGNA em zebrafish (Danio rerio). Métodos: No modelo de DHA, os peixes foram divididos em dois grupos: Etanol (n=30), expostos a 0,5% de etanol por 28 dias e controle (n=30). No modelo de DHGNA, os peixes foram divididos também em dois grupos: Frutose (n=24), expostos à frutose 6% durante 2 horas por 14 dias e controle (n=24). Ao término dos experimentos os animais foram eutanasiados e coletados fígados, para avaliação histológica por coloração hematoxilina-eosina (HE) e de esteatose por Oil Red, e intestinos para avaliação da expressão gênica dos marcadores de permeabilidade intestinal cldnC, cldn15a, cldn15b e f11r por Real Time qPcr. Resultados: Tanto os animais expostos ao álcool quanto à frutose apresentaram esteatose hepática por coloração HE e Oil Red quando comparados aos seus respectivos controles, sem sinais de infiltrados inflamatórios e de fibrose hepática à microscopia óptica. Não houve diferença significativa na expressão gênica das tight junctions intestinais, tanto para a DHA quanto DHGNA (p  0,05). Conclusão: Os resultados sugerem que em estágios iniciais de DHA e DHGNA não ocorre alteração da permeabilidade intestinal, e que possivelmente o dano hepático precede o dano intestinal. / Introduction: Alcoholic liver disease (ALD) and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) are among the leading causes of death from liver disease worldwide. Despite the different etiologies, ALD is caused by excessive alcohol consumption and NAFLD is due to inadequate diet and sedentary lifestyle, they have a similar disease course, which can progress from steatosis to steatohepatitis, fibrosis, cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Both ALD and NAFLD are related to dysbiosis, increased gut permeability, inflammation, and liver damage. However, it is not yet clear whether liver disease precedes changes in the intestinal epithelium or whether it is the increased permeability that promotes liver damage. Objective: To evaluate the gene expression of tight junctions in ALD and NAFLD models in zebrafish (Danio rerio). Methods: In the ALD model, fish were divided into two groups: Ethanol (n=30), exposed to 0.5% ethanol for 28 days and control (n=30). In the NAFLD model, fish were also divided into two groups: Fructose (n=24), exposed to 6% fructose for 2 hours for 14 days and control (n=24). At the end of the experiments the animals were euthanized and livers were collected for histological evaluation by hematoxylin-eosin (HE) staining and steatosis by oil red staining and intestines for evaluation of the gene expression of gut permeability markers cldnC, cldn15a, cldn15b and f11r by Real Time qPcr. Results: Both animals exposed to alcohol and fructose presented hepatic steatosis by HE and Oil Red staining when compared to their respective controls, without signs of inflammatory infiltrates under optical microscopy. There was no significant difference in the gene expression of the tight junctions for both ALD and NAFLD (p0.05) Conclusion: The results suggest that in the early stages of ALD and NAFLD there are no changes in intestinal tight junctions, and that possibly liver damage precedes intestinal damage.

Orientador: Maria Jaqueline Mamprim / Coorientador: Carlos Roberto Teixeira / Banca: Raquel Sartor Marcelino / Banca: Alessandra Melchert / Resumo: O atendimento de cães com sobrepeso e obesos na rotina clínica de animais de companhia tem sido cada vez mais frequente. O objetivo do presente estudo foi avaliar as alterações hepáticas parenquimatosas e hemodinâmicas, por meio da ultrassonografia bidimensional e Doppler, em três grupos de cães com diferentes escores de condição corporal - G1 (peso ideal/controle), G2 (sobrepeso) e G3 (obesos) -, sem doenças hepáticas por outras causas de base. Houve correlação positiva entre o G3 e os seguintes fatores: aumento da ecogenicidade do parênquima hepático, aumento das dimensões hepáticas, hiperlipidemia, e morfologia anormal da onda da veia hepática (VH). Diferença significativa na velocidade média do fluxo portal (Vméd.VP) foi observada entre G1 (17,23 ± 3,7cm/s) e G3 (13,66 ± 2,56cm/s), no volume do fluxo portal (VFVP) entre G1 (32,69 ± 11,86mL/min/kg) e G2 (19,58 ± 7,68mL/min/kg) e entre G1 e G3 (15,22 ± 8mL/min/kg), no índice hepatorrenal entre G2 (1,1 ± 0,29) e G3 (1,28 ± 0,22), nos níveis séricos de fosfatase alcalina (FA) entre G1 e G3, de gama glutamiltransferase (GGT) entre G1 e G2 e de colesterol entre G1 e os demais grupos. Não houve diferença significativa no índice de congestão portal (ICP), no índice de resistividade da artéria hepática (IRAH), no diâmetro e área da veia porta e nos níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT) e triglicérides, entre os grupos. Concluiu-se que a obesidade pode levar ao desenvolvimento de alterações parenquimatosas e hemodinâmicas no fígado de cães / Abstract: Veterinary care of overweight and obese dogs in small animal clinical sciences has become increasingly common. The aim of the present study was to investigate, using two dimensional and Doppler sonography, parenchymal and hemodynamic changes in three groups of dogs, according to body score condition (G1, ideal body weight/control; G2, overweight; G3, obese), without hepatic diseases due to other causes. A positive correlation was found between G3 and the characteristics described below: increased liver echogenicity, hepatomegaly, hiperlipidemia and abnormal hepatic vein Doppler waveform pattern. There was statistical difference in the mean portal blood flow velocity between G1 (17,23 ± 3,7cm/s) and G3 (13,66 ± 2,56cm/s), in the portal blood flow between G1 (32,69 ± 11,86mL/min/kg) and G2 (19,58 ± 7,68mL/min/kg) and between G1 and G3 (15,22 ± 8mL/min/kg), in the hepatorenal index between G2 (1,1 ± 0,29) and G3 (1,28 ± 0,22), in serum levels of alkaline phosphatase (ALP) between G1 and G3, in levels of gamma glutamyltranspeptidase (GGT) between G1 and G2 and in levels of cholesterol between G1 and the other groups. There was no statistical difference in the portal vein congestion index, hepatic artery resistance index, portal vein diameter and area and on serum levels of alanine aminotransferase (ALT) and triglycerides between the groups. It was concluded that obesity may be responsible for the development of parenchymal and hemodynamic changes in dog's liver / Mestre

Orientador: Maria Jaqueline Mamprim / Banca: Sheila Canavese Rahal / Banca: Raquel Sartor Marcelino / Resumo: O presente estudo teve como objetivo descrever as imagens ultrassonográficas realizadas pelo modo B, dopplerfluxometria dos vasos hepáticos, juntamente com o perfil bioquímico e a analise histopatológica do fígado de cães naturalmente acometidos pela Leishmaniose visceral canina. Foram avaliados 46 cães, naturalmente infectados, com diagnóstico sorológico ou parasitológico positivo para Leishmania spp., oriundos do município de Bauru, São Paulo. Como resultado do exame histopatológico apresentou característica processo inflamatório crônico presente em todos os animais. No ultrassom ecogenicidade do fígado diminuída em 56,5% dos casos e característica espectral das veias hepáticas alterada em 73,9% dos animais. Nos valores quantitativos a velocidade media da veia porta foi de 22,06cm/s, do pico sistólico da artéria hepática foi de 76,8cm/s e o índice de resistividade da artéria hepática 0,65 demonstrando uma correlação positiva entre as duas variáveis. O perfil bioquímico do fígado se mostrou inconclusivo, pois não demonstrou valores relevantes, mesmo os animais com alterações significativas nos exames de ultrassom e histopatológico. Não foram caracterizadas lesões especificas para a leishmaniose visceral canina, porém pode-se confirmar o curso crônico da doença, e que o ultrassom, principalmente o modo Doppler, tem se mostrado precoce na detecção de alterações hepáticas em cães / Abstract: O presente estudo teve como objetivo descrever as imagens ultrassonográficas realizadas pelo modo B, dopplerfluxometria dos vasos hepáticos, juntamente com o perfil bioquímico e a analise histopatológica do fígado de cães naturalmente acometidos pela Leishmaniose visceral canina. Foram avaliados 46 cães, naturalmente infectados, com diagnóstico sorológico ou parasitológico positivo para Leishmania spp., oriundos do município de Bauru, São Paulo. Como resultado do exame histopatológico apresentou característica processo inflamatório crônico presente em todos os animais. No ultrassom ecogenicidade do fígado diminuída em 56,5% dos casos e característica espectral das veias hepáticas alterada em 73,9% dos animais. Nos valores quantitativos a velocidade media da veia porta foi de 22,06cm/s, do pico sistólico da artéria hepática foi de 76,8cm/s e o índice de resistividade da artéria hepática 0,65 demonstrando uma correlação positiva entre as duas variáveis. O perfil bioquímico do fígado se mostrou inconclusivo, pois não demonstrou valores relevantes, mesmo os animais com alterações significativas nos exames de ultrassom e histopatológico. Não foram caracterizadas lesões especificas para a leishmaniose visceral canina, porém pode-se confirmar o curso crônico da doença, e que o ultrassom, principalmente o modo Doppler, tem se mostrado precoce na detecção de alterações hepáticas em cães / Mestre

Orientador: Karen Cristiane Martinez de Moraes / Banca: Marcia Regina Brochetto Braga / Banca: Marcia Regina Cominetti / Resumo: As doenças hepáticas são consideradas um problema sério em todo o mundo e vários elementos influenciam o desenvolvimento dessas patologias. Diabetes, doenças de síndrome metabólica, problemas nutricionais e infecção por vírus são elementos responsáveis pelo surgimento de doenças hepáticas. Não há nenhuma estratégia terapêutica eficaz disponível para tais doenças e, por isso, são necessários mais estudos para elucidar um entendimento molecular dos mecanismos celulares. As células estreladas hepáticas (HSCs) sustentam o desenvolvimento da fibrogênese hepática pela produção exacerbada de colágeno e outros elementos da matriz, quando ativadas. Além disso, algumas terapias alternativas apontam o peptídeo Angiotensina-(1-7) [Ang-(1-7)] como importante elemento modulador da fibrogênese hepática. Entre os elementos alvo do heptapeptídeo, os microRNAs (miRNAs) apresentam alterações em seu perfil de expressão gênica. Essas pequenas moléculas vêm sendo amplamente investigadas por suas múltiplas funções no equilíbrio celular. Assim, para o desenvolvimento de novos fármacos é muito importante entender a função moduladora da Ang-(1-7) e dos miRNAs sobre a homeostase celular. Neste estudo, foram investigados por meio da linhagem HSCs humana LX-2 elementos moduladores do citoesqueleto dessas células em diferentes condições de cultivo: culturas quiescidas, ativadas/ pró-fibrosadas, ativadas/ pró-fibrosadas e tratadas com o peptídeo vasoativo e ativadas/ pró-fibrosadas que superexpressam os miRNAs 1179 ou o miRNA 1254, por serem esses uns dos miRNAs superexpressos quando com o tratamento com o peptídeo vasoativo. Utilizando ensaios de microscopia de fluorescência e análise de expressão gênica, os resultados apontaram para efeito modulador do peptídio na reversão do processo fibrosante hepático; também foram apontados a característica deletéria .... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Liver diseases are considered a serious problem worldwide and several elements influence the development of these pathologies. Diabetes, diseases of metabolic syndrome, nutritional problems and virus infection are elements responsible for the emergence of liver diseases. However, no effective therapeutic strategy is available for such diseases, and therefore further studies are needed to elucidate a complete molecular view of cellular mechanisms. However, hepatic stellate cells (HSCs) are known to support the development of liver fibrogenesis by the exacerbated production of collagen and other matrix elements when activated. In addition, some alternative therapies point to the peptide Angiotensin-(1-7) [Ang-(1-7)] as a relevant modulatory element in the control of liver fibrogenesis. Considering the heptapetide target elements microRNAs (miRNAs) changes their expression pattern in cells under the effect of the ang-(1-7). Such small molecules have been widely investigated for their multiple roles in cell balance and homeostasis. Thus, for the development of new drugs, it is very important to understand the modulatory function of Ang-(1-7) and miRNAs on cellular homeostasis. In this study, the human HSC strain LX-2 was investigated by cytoskeletal modulators of these cells under different culture conditions: quiescent, activated / pro-fibrous, activated / pro-fibrous and vasoactive peptide-activated fibroblasts overexpressing the 1179 miRNAs or 1254 miRNA. Using fluorescence microscopy assays and gene expression analysis, the results indicated a modulatory effect of the peptidium on the reversal of the liver fibrosing process. The deleterious characteristic of clone-1179 and the potential controller of fibrogenesis modulated by clone 1254 were also demonstrated. Moreover, the combined results reinforce that the pepetide acts in system biolgy in a manner to compensate negative and ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Roberto Bosqueiro / Resumo: O Diabetes mellitus (DM) é uma desordem metabólica caracterizada por hiperglicemia decorrente de defeitos na secreção ou ação da insulina, que acarreta distúrbios no metabolismo de carboidratos, lipídeos e proteínas. A incidência do DM aumenta de maneira alarmante em todo o mundo e os estudos com plantas que possuam efeitos antidiabéticos despertam cada vez mais o interesse por parte de pesquisadores. Em resultados anteriores, observamos que camundongos induzidos por estreptozotocina exibiram melhora no quadro diabético após serem submetidos ao tratamento com extrato bruto das folhas de Myrcia bella. Neste trabalho, decidimos avaliar os mecanismos moleculares envolvidos nos processos de captação e armazenamento de glicose em tecidos periféricos como fígado, músculo esquelético e tecido adiposo neste modelo experimental. No mais, procuramos avaliar a atividade inibitória in vitro e in vivo do extrato de M. bella sobre as enzimas alfa glicosidase e alfa amilase, bem como o conteúdo de insulina no pâncreas. Camundongos diabéticos (STZ SAL e STZ EXT) e controles normoglicêmicos (CTL SAL e CTL EXT) foram tratados durante 21 dias com salina ou extrato bruto de M. bella na dose de 600 mg/kg. Foram coletados porções de fígado para avaliação da expressão de genes e proteínas envolvidos nos processos de glicogênese, glicogenólise e neoglicogênese. Ainda, amostras de músculo gastrocnêmio foram obtidas para avaliação de genes e proteínas envolvidas na via de sinalização de insulina e cap... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diabetes mellitus (DM) is a metabolic disease characterized by hyperglycemia resulting from defects in insulin secretion or action, which results in carbohydrates, proteins and lipids metabolism disturbances. DM incidence increases alarmingly worldwide and studies with plants, which exhibit anti-diabetic effects, arouse researcher’s interests. In previous results we observed that streptozotocin-induced diabetic mice showed an improvement in diabetic condition after the treatment with Myrcia bella leaves crude extract. In this work, we have decided to evaluate the molecular mechanisms involved in glucose uptake and storage process in peripheral tissues such as liver, gastrocnemius muscle and adipose tissue. Furthermore, to evaluate the extract in vivo and in vitro inhibitory activity of alpha glycosidase and alpha amylase enzymes and insulin content in pancreas. Diabetic mice (STZ SAL and STZ EXT) and normoglicemic control mice (CTL SAL and CTL EXT) were treated during 21 days with saline or M. bella crude extract at 600 mg/kg. Liver was collected to gene and protein expression involved in glycogenesis, glycogenolysis and gluconeogenesis process. Gastrocnemius muscle to gene and protein expression involved in insulin signaling pathway and glucose uptake and white adipose tissue to the expression of the mainly proteins involved in insulin signaling pathway. Pancreas was collected to evaluate the insulin content. The treatment with M. bella crude extract seems to modulate the pr... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Foi realizado um estudo das hepatopatias de cães, dando ênfase aos achados patológicos de doenças hepáticas infecciosas. Foram realizadas, no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2009, 4.573 necropsias de cães e em 396 casos (8,66%) corresponderam a doenças hepáticas. Diagnosticaram-se doenças hepáticas infecciosas ou inflamatórias em 48,74% dos casos (193/396). A leptospirose canina foi a principal hepatopatia encontrada, diagnosticada em 150 cães (37,88% das doenças hepáticas). Selecionaram-se 112 caninos com leptospirose para avaliação dos achados patológicos. Os principais achados de necropsia incluíam icterícia (94,6%) e hemorragias (82,1%) em diferentes locais anatômicos. Pela histologia, identificou-se no fígado dissociação de hepatócitos (100%), e nos rins degeneração e necrose de túbulos renais (75,89%) e nefrite intersticial (54,46%). Nos pulmões, visualizaram-se congestão (78,57%), hemorragia (67,86%) e edema (61,61%). Onze filhotes pertencentes a duas ninhadas foram analisados pelos seus sinais clínicos, achados patológicos e por métodos de diagnósticos complementares para confirmação da infecção por herpesvírus canino tipo 1. Hemorragia cortical renal característica da infecção por herpesvírus canino foram identificadas (9/11). Observaram-se comumente hepatomegalia (7/11), palidez do fígado (6/11), pulmões firmes e não colapsados (11/11), esplenomegalia (9/11) e linfonodomegalia (8/11). As lesões histológicas caracterizaram-se por quadro hemorrágico e necrótico atingindo o fígado, rins, pulmões e órgãos linfoides. O diagnóstico específico foi obtido pela imunofluorescência direta. Cães com hepatite infecciosa canina (HIC) foram analisados com base nos seus dados clínicos, achados patológicos e pelos resultados imuno-histoquímicos. Realizaram-se 23 diagnósticos de HIC no período de 1996 a 2009. Os principais achados de necropsia foram palidez do fígado (17/23), hepatomegalia (10/23) e hemorragia em grande parte dos casos. Observaram-se também edema de vesícula biliar (11/23), material fibrinoso na superfície hepática (8/23) e icterícia (6/23). Histologicamente, acentuada necrose do fígado (23/23) foram encontradas associadas à identificação de corpúsculos intranucleares (22/23) característicos de HIC. Visualizaram-se marcações imuno-histoquímicas positivas de adenovírus canino tipo 1 em maior quantidade no fígado (23/23), cérebro (22/22), cerebelo (16/20) e rim (16/21). / The study presented here was performed to investigate hepatic diseases of dogs, emphasizing pathological findings related to infectious diseases. It was performed from January 2000 to December 2009, 4573 necropsies of dogs were made and 396 (8,66%) cases corresponded to hepatic diseases. Infectious or inflammatory hepatic diseases were diagnosed in 48,74% (193/396) of the cases. Canine leptospirosis was the main hepatic disease found, diagnosed in 150 dogs (37,88% of the liver diseases). 112 cases of leptospirosis were selected for evaluation of pathological findings. During the necropsies, jaundice (94,6%) and hemorrhages (86,1%) were commonly seen in several organs. Trough histology were identified dissociation of hepatocytes in the liver, tubular degeneration and necrosis (82.14%) and interstitial nephritis (54,46%) in the kidneys. In the lungs, congestion (78,57%), hemorrhage (67,86%) and edema (61,61%) were observed. Eleven puppies belonging to two different litters were analyzed through clinical signs, pathological findings and complementary diagnostic methods for confirmation of canine herpesvirus type 1 infection. Were identified cortical hemorrhages (9/11), characteristic of canine herpesvirus type 1 infection. Hepatomegaly (7/11), paleness of liver (6/11), firm lungs (11/11) and not collapsed (11/11), splenomegaly (9/11) and limphadenomegaly (8/11). Histological lesions were characterized by an hemorrhagic and necrotic presentation affecting the liver, kidneys, lungs and lymphoid organs. Specific diagnosis was obtained by direct immunoflorescence. Dogs with infectious canine hepatitis (ICH) were analyzed based on their clinical data, pathological findings and immunohistochemichal results. 23 ICH diagnoses were performed in the period of 1996 to 2009. The main necropsy findings were liver paleness (17/23), hepatomegaly (10/23), and hemorrhage in the majority of cases. Gallbladder edema (11/23), fibrinous material at the liver surface (8/23) and jaundice (6/23) were also observed. Histologically, severe necrosis of the liver (23/23) was found, related to identification of intranuclear inclusion bodies, a characteristic finding of ICH. Positive immunohistochemichal staining for canine adenovirus type 1 were seen in greater amount in liver (23/23), brain (22/22), cerebellum (16/20) and kidney (16/21).

Introdução: A Esteato-Hepatite Não-Alcoólica (EHNA) é uma doença com alta incidência, difícil diagnóstico e tratamentos ainda não efetivos, o que impulsiona a utilização de modelos experimentais para indução da EHNA e o estudo das rotas de desenvolvimento desta doença, bem como tentativas de tratamento. Objetivo: Tem-se como objetivo desenvolver um modelo experimental de EHNA a partir do uso de uma dieta deficiente de metionina e colina (MCD) fabricada no Brasil, avaliar as alterações hepáticas, o estresse oxidativo, os danos ao DNA e os parâmetros moleculares de inflamação e fibrose decorrentes da doença, bem como avaliar a modulação resultante da suplementação do flavonóide antioxidante quercetina (Q). Métodos: Foram utilizados camundongos machos da linhagem C57BL/6 com 8 semanas. No primeiro experimento, que visou estabelecer o modelo experimental de EHNA, os animais foram divididos em dois grupos (n=15), onde um grupo foi alimentado com dieta MCD e o outro com dieta controle no período de duas semanas. No segundo experimento, utilizaram-se quatro grupos (n = 16): (i) controle + veículo (ração controle com carboximetilcelulose sódica a 1%, usada como veículo, CO + V), (ii) ração controle mais Q 50 mg / kg administrada intragastricamente (CO + Q), (iii) dieta MCD mais veículo (EHNA + V), e (iv) dieta MCD mais Q (EHNA + Q). As dietas foram administradas por 4 semanas e avaliou-se as alterações bioquímicas hepáticas, a repercussão histopatológica e imuno-histoquímica, a lipoperoxidação e as enzimas antioxidantes, os danos causado ao DNA por ensaio cometa, bem como, os parâmetros moleculares de inflamação e fibrose através da avaliação de mRNA de TNF-α, HMGB-1, COX-2, CTGF, TGF-β, MMP-9 e AREG por RT-PCR, e a expressão proteíca de TLR-4, JNK e pJNK por Western blotting, avaliando-se o efeito da suplementação do flavonóide antioxidante Q. Resultados: Os camundongos que receberam a dieta MCD apresentaram perda de peso e aumento significativo das enzimas de integridade hepática e diminuição dos níveis bioquímicos sistêmicos de glicemia, triglicerídeos, colesterol total, HDL e VLDL. Todos os animais EHNA mostraram, pelo menos, algum grau de esteatose macrovesicular. O diagnóstico de EHNA foi realizado em 100% dos camundongos que receberam a dieta MCD e nenhum dos animais que recebeu dieta controle apresentou alterações histológicas. Os animais EHNA apresentaram aumento de lipoperoxidação e do antioxidante glutationa (GSH). O ensaio cometa revelou um aumento significativo nos danos de DNA no fígado do grupo EHNA + V em comparação com CO + V. O grupo EHNA + Q mostrou danos ao DNA significativamente menores do que EHNA + V e uma significativa diminuição do processo inflamatório através da avaliação da expressão de: TNF-α, HMGB1, TLR-4, a COX-2 e JNK e na fibrose pela expressão de CTGF, TGF-β, MMP-9 e AREG no fígado. Conclusão: A dieta deficiente de metionina e colina induziu no fígado de camundongos C57BL/6 características histopatológicas semelhantes à esteatose e à esteato-hepatite de humanos. A suplementação com o flavonoide antioxidante quercetina (50 mg / kg) reduziu os níveis de lipoperoxidação, os danos ao DNA no fígado, os níveis enzimáticos hepáticos, bem como os níveis dos parâmetros moleculares inflamatórios e de fibrose estudados, sugerindo proteção hepática neste modelo. / Introduction: Non-alcoholic steatohepatitis is a disease with a high incidence, difficult diagnosis, and yet no effective treatment. This reasons lead to the use of experimental models for induction of NASH, and the study of routes developing this disease, as well as attempts to a effective therapy. Aims: This study was designed to develop an experimental model of non-alcoholic steatohepatitis based on a methionine- and choline-deficient diet which is manufactured in Brazil. Furthermore, evaluate the liver alterations, oxidative stress parameters, lipoperoxidation, DNA damage, and the molecular parameters of inflammatory and fibrosis, as well as the response to the antioxidant flavonoid quercetin (Q). Methods: Male C57BL/6 mice were used with 8 weeks of age. In the first experiment, which aimed to establish an experimental model of NASH, the animals were divided into two groups (n = 15), the experimental group fed with a methionine- and choline-deficient diet manufactured by Brazilian company PragSoluções®, and the control group fed with a normal diet, for a period of 2 weeks. In the second experiment, we used four groups (n = 16): (i) Control plus Vehicle (control ration plus carboxymethylcellulose 1% used as vehicle, CO + V); (ii) Control ration plus Q 50 mg/kg (CO + Q); (iii) MCD diet plus vehicle (NASH + V); and (iv) MCD diet plus Q (NASH + Q). Diets were administered for 4 weeks, which aimed to evaluate the hepatic biochemical changes, the histopathological impact and immunohistochemical analysis, lipid peroxidation and antioxidant enzymes, the damage caused to DNA, and the molecular parameters of inflammation and fibrosis by assessment of mRNA of TNF-α, HMGB-1, COX-2, CTGF, TGF-β, MMP-9 and AREG by RT-PCR Protein expression and TLR-4, pJNK and JNK by Western blotting to assess the effects of supplementation of the antioxidant flavonoid Q. Results: The mice that received the methionine- and choline-deficient diet showed weight loss and significant increase in hepatic damage enzymes, as well as a decrease on systemic levels of glycemia, triglycerides, total cholesterol, HDL and VLDL. The diagnosis of non-alcoholic steatohepatitis was performed in 100% of the mice that were fed the methionine- and choline-deficient diet. All non-alcoholic steatohepatitis animals showed some degree of macrovesicular steatosis, ballooning, and inflammatory process. None of the animals which were fed with the control diet presented histological alterations. All non-alcoholic steatohepatitis animals showed significantly increased lipoperoxidation and antioxidant GSH activity. The comet assay revealed a significant increase in DNA damage in the NASH + V group, in comparison to CO + V. The NASH + Q group showed significantly lower DNA damage than NASH + V. The NASH+Q group showed a significant reduction of inflammation based on the expression of TNF-α, HMGB1, TLR-4, COX-2 and JNK and a reduction in fibrosis based on the expression of CTGF, TGF-β, MMP-9 and AREG in the liver. Conclusion: The low cost and easily accessible methionine- and choline-deficient diet explored in this study is highly effective in inducing steatosis and steatohepatitis in animal model, leading to alterations that are similar to those observed in human livers. The results demonstrate that an antioxidant supplementation of Q 50 mg / kg reduced the levels of lipid peroxidation, DNA damage, liver enzymes, as well as the levels of inflammation and fibrosis in the liver, suggesting protective effects of the liver in this model.

A obesidade é uma doença multifatorial fortemente associada com a síndrome metabólica e com as doenças hepáticas. A distribuição da gordura corporal é um fator relevante, e especificamente o tecido adiposo visceral parece ser o elo entre o aumento de peso, a síndrome metabólica e o acúmulo de gordura hepática. Os adipócitos estão envolvidos na regulação do balanço energético e podem ser modulados por hormônios, citocinas e nutrientes, entre eles o resveratrol. São dois os objetivos principais deste trabalho: (1) identificar os níveis basais de expressão do mRNA de SIRT1, adiponectina, FOXO1, PPARg e PPARb/d em diferentes tecidos adiposos (retroperitoneal, subcutâneo e visceral) de indivíduos obesos grau III com diferentes níveis de esteatose hepática; e (2) identificar a ação do resveratrol sobre a expressão do mRNA dos genes citados em adipócitos isolados do tecido adiposo visceral de indivíduos obesos grau III. Os tecidos adiposos foram obtidos durante cirurgia bariátrica. O RNA total foi extraído usando o reagente TRIzol e o mRNA foi quantificado por PCR em tempo real. Para a análise da expressão basal dos genes, dividimos os pacientes em dois grupos: aqueles com esteatose simples ou moderada e aqueles com esteatose severa associada ou não à fibrose e inflamação. Comparando os dois grupos estudados, os pacientes com esteatose severa apresentaram uma menor expressão do mRNA de SIRT1 (p=0,006), apenas no tecido adiposo visceral. Os níveis de adiponectina, FOXO1, PPARg1-3 e PPARb/d não diferiram estatisticamente entre os dois grupos de pacientes nos três depósitos de gordura corporal. O valor de HOMA-IR foi diferente estatisticamente entre os grupos estudados, sendo maior no grupo de pacientes com diagnóstico de esteatose severa associada ou não a fibrose e necroinflamação (p=0,006). Neste mesmo grupo de pacientes, a expressão de SIRT1 e o valor de HOMA-IR correlacionaram-se positivamente no tecido adiposo visceral (r=0,607; p=0,048). Quanto à modulação por resveratrol, houve aumento significativo nos níveis do mRNA de SIRT1 (p=0,021), adiponectina (p=0,025) e FOXO1 (p=0,001) nos adipócitos isolados do tecido adiposo visceral de obesos grau III. A expressão do mRNA de PPARg1-3 foi modulada negativamente (p=0,003) nas células estudadas. Considerando a expressão do PPARb/d, não houve modulação por resveratrol na concentração, tempo e modelo celular estudados. Analisando a literatura, verificamos que valores diminuídos de SIRT1 já foram associados à progressão da esteatose, em modelos experimentais. Neste trabalho, observamos menor transcrição de SIRT1 no tecido adiposo visceral de obesos com esteatose severa, o que poderia prejudicar a biogênese mitocondrial e a oxidação de ácidos graxos, contribuindo com o aumento de ácidos graxos livres na circulação portal, favorecendo o acúmulo hepático de lipídeos nestes pacientes. Desta forma, sugerimos que o aumento da expressão de SIRT1 no tecido adiposo visceral pode ter efeito protetor contra a evolução da esteatose em obesos grau III. Também constatamos que resveratrol ativa a expressão do mRNA de SIRT1, adiponectina e FOXO1 e diminui a expressão de PPARg1-3. Os resultados indicam que resveratrol pode modular o metabolismo dos adipócitos de obesos grau III, possivelmente favorecendo o metabolismo das células estudadas. / Obesity is a complex disease, strongly associated with metabolic syndrome and hepatic disease. The distribution of body fat is important, and specifically visceral adipose tissue seems to be the link between weight gain, metabolic syndrome and hepatic fat accumulation. Adipocytes are involved in the regulation of energy balance and can be modulated by hormones, cytokines and nutrients as resveratrol. The objectives of this study were: (1) to determine the expression pattern of SIRT1, adiponectin, FOXO1, PPARg1-3 and PPARb/d mRNA in different adipose tissues (retroperitoneal, subcutaneous and visceral) of morbidly obese with different levels of hepatic steatosis; and (2) analyze whether resveratrol could modulate the mRNA expression of the cited genes in isolated visceral adipocytes of morbidly obese. The adipose tissue was obtained by bariatric surgery. Total RNAs were extracted using TRIzol reagent and genes reverse transcripts were determined by quantitative polymerase chain reaction. For analysis of basal genes expression, we divided patients in two groups: those with slight or moderate steatosis and other comprising individuals with severe steatosis associated or not with necroinflammation and fibrosis. When comparing the two groups of patients, we found that the amount of SIRT1 mRNA in the visceral adipose tissue of morbidly obese with severe steatosis was decreased (p=0.006). The levels of adiponectin, FOXO1, PPARg1-3 and PPARb/d did not differ statistically between the two groups of patients in the fat depots studied. We found that HOMA-IR value was significantly higher in severe steatosis patients group (p=0.006). Our results also show that the mRNA expression of SIRT1 and HOMA-IR was positively correlated in the visceral adipose tissue of patients with severe steatosis (r=0.654; p=0.048). Regarding the modulation by resveratrol, there was significant increase in SIRT1 (p=0.021), adiponectina (p=0.025) and FOXO1 (p=0.001) mRNA in isolated visceral adipocytes. The mRNA expression of PPARg1-3 was negatively modulated by resveratrol (p=0.003). Considering PPARb/d, there was not a significantly modulation by resveratrol, in the studied model. Reduced quantities of SIRT1 mRNA have been described in severe steatosis using experimental models. We found lower transcription of SIRT1 expression in the visceral adipose tissue of obese patients with severe steatosis, which may impair mitochondrial biogenesis and fatty acids oxidation, contributing to the increase of free fatty acids in portal circulation, impairing liver function. Thus, we suggest that the increased SIRT1 mRNA expression may have a protective role on steatosis in visceral adipose tissue of morbidly obese individuals. Also, we observed that resveratrol activated the expression of SIRT1, FOXO1 and adiponectin and decreases PPARg1-3, which indicate that resveratrol can control adipocytes metabolism, possibly favoring the metabolism of studied cells.

Dissertação (mestrado profissional) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Cuidados Intensivos e Paliativos, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-05-19T04:09:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 333246.pdf: 1012418 bytes, checksum: 681e5b49e82f29b2865c7fd831063667 (MD5) Previous issue date: 2015 / O transplante hepático surgiu durante a década de 1960, como alternativa terapêutica para pacientes com falência hepática aguda ou crônica. Objetivo: Elaborar um protocolo para cuidados no pós-operatório imediato de transplante hepático. Método: Foi realizada extensa revisão bibliográfica nas bases de dados Pubmed, Medline, Scielo e Cochrane, utilizando os termos "liver transplantation" ou "transplante hepático" combinados com "intensive care" e "cuidados intensivos". A seleção dos guidelines e artigos encontrados foi realizada através da leitura do título dos mesmos. Durante reuniões do serviço de transplante hepático do HU-UFSC, os dados obtidos foram apresentados e seguiu-se ampla discussão dos tópicos e elaboração do protocolo. Resultados: Após a revisão de literatura e discussão dos tópicos com os especialistas, foi possível a elaboração de um protocolo para cuidados pós-operatórios em pacientes submetidos a transplante hepático que trata dos seguintes temas: estabilização hemodinâmica, suporte ventilatório e desmame de ventilação mecânica, avaliação da função do enxerto, imunossupressão, profilaxia de infecções, terapia nutricional, transfusão sanguínea e complicações pós-operatórias precoces. Conclusão: A revisão bibliográfica e a avaliação dos especialistas permitiram a elaboração do protocolo adaptado à realidade do serviço.<br> / Abstract : Liver transplantation has emerged during the 1960s as an alternative therapy for patients with acute or chronic liver failure. Objective: To develop a protocol for intensive care for immediate postoperative care following liver transplantation. Method: An extensive literature review was performed in Pubmed, Medline, SciELO and Cochrane databases using the terms "liver transplantation" or "transplante hepático" combined with "intensive care" and "cuidados intensivos . A selection of articles and guidelines found was done by reading the title thereof. During meetings of the HUUFSC service of liver transplantation, data were presented and followed by a discussion of the topics and protocol development. Results: After the literature review and discussion of topics with experts, it was possible to draw up a protocol for postoperative care in patients undergoing liver transplantation which covers the following subjects: hemodynamic stabilization, ventilatory support and weaning from mechanical ventilation, assessment of graft function, immunosuppression, prevention of infections, nutritional therapy, blood transfusion and early postoperative complications. Conclusion: The literature review and the evaluation of experts led to the drafting of the protocol adapted to the reality of the service.