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Thesis (M.Sc. (Med.) (Epidemiology and Biostatistics))--University of the Witwatersrand, Faculty of Health Sciences, 2012. / Introduction Cryptococcal disease (CD) is the most common cause of morbidity and mortality among patients living with HIV I AIDS in many parts of sub-Saharan Africa. Globally the highest number of HIV -associated CD cases occur in sub-Saharan Africa (720 000/957 900) and mortality rates among patients on antifungal treatment remain unacceptably high. This study aimed to estimate and compare in-hospital mortality of HIV-associated CD among patients who were treated with amphotericin B versus fluconazole versus mixed treatment with amphotericin B and fluconazole. Materials and Methods We performed an analytical, cross-sectional analysis of data from a national laboratory-based surveillance programme through a network of public sector laboratories in South Africa. The study period was 1 January 2005 to 31 December 2006. The analysis used a subset of data from laboratory confirmed cases with completed case report forms and available data on outcome. The exposure was measured in 3 levels defined as treatment during the induction phase of therapy for at least 7 days with either amphotericin B or fluconazole or mixed treatment (initiation of treatment with one regimen and switching on to the other within 7 days of treatment). Outcome was defined as: patients who died between 7 and 30 days in hospital. Chi-squared test was used to compare characteristics among the treatment groups and multiple logistic regression models were constructed to identify risk factors for in-hospital death. Results Sixty two percent of the patients (1,363/2,211) were treated for ?:.7 days and 38% (848/2,211) for <7 days. In the group treated for ?:.7 days, mortality was 359/1,363 (26%) and the median time to death was 12 days (IQR 9-18). There was no significant difference in case fatality among patients treated with: amphotericin B (29%), fluconazole (27%) or mixed treatment (24%), (p-value = 0.28). On multivariate analysis, factors significantly associated with in-hospital mortality were: patients between the age group of 40-59 years, province in which the patients resided and altered mental status. In the group treated for <7 days patients treated with fluconazole were 82% less likely to die than patients treated with amphotericin B. Discusslon and Conclusion In-hospital mortality was high and similar among all treatment regimens in the ?:.7 days group. However a significant reduction in mortality was noted in the <7 days group treated with fluconazole. The reason for the later findings is unclear. It may be that amphotericin B alone is not superior but equivalent to fluconazole in the first 7 days of treatment and 5-flucytocine may be the intervention required to improve outcome in the first 7 days. Or it may be that patients are reaching care too late for a significant impact in disease outcome to be observed and prevention of CD is required in the form of ART and primary prophylaxis. Selection bias in that patients in the fluconazole group are less sick than in the amphotericin B-group is the most likely reason for lower mortality. The study findings call for more standardization of optimum treatment as well as advocacy for the availability of 5-flucytocine. Factors associated with high mortality require further investigations for interventions to improve patient outcomes.

Thèse d'exercice : Médecine. Médecine générale : Paris 12 : 2007. / Titre provenant de l'écran-titre. 65 f. ill. Bibliogr. f. 52-65.

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CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Tendo em vista que algumas propriedades terapÃuticas da curcumina jà sÃo bem descritas, dessa forma o presente estudo aponta para um efeito antifÃngico da curcumina frente a cepas de leveduras patogÃnicas resistentes ao fluconazol, cepas de Candida spp. e Cryptococcus neoformans. Todas as cepas estudadas foram inibidas pela curcumina, com diferentes graus de inibiÃÃo entre as espÃcies com CIMs variando entre 8-64 &#956;g/mL. ApÃs a exposiÃÃo das cepas de C. albicans a curcumina, foi observado uma diminuiÃÃo no nÃmero de cÃlulas viÃveis, indicando assim danos Ãs membranas celulares, com possÃvel comprometimento de suas funÃÃes. Os nossos resultados revelaram que apÃs o tratamento com a curcumina, constatamos uma intensificaÃÃo na marcaÃÃo com PI (Iodeto de propÃdio), indicando alteraÃÃes nas membranas celulares. No presente trabalho, a funÃÃo mitocondrial das cÃlulas de C. albicans parece ter sido afetada apÃs exposiÃÃo à curcumina. O colapso no &#916;&#968;m (Potencial Transmembrana Mitocondrial) pode conduzir a aberturas de poros transientes nas membranas mitocondriais. Em relaÃÃo aos diversos mecanismos de aÃÃo descritos para a curcumina, existem evidÃncias de que o DNA à um dos alvos celulares desta molÃcula. Nossos dados sugerem que apÃs a exposiÃÃo à curcumina, as cÃlulas de C. albicans, apresentaram quebras totais nas cadeias de DNA. Em conclusÃo, o composto curcumina apresenta atividade antifÃngica in vitro contra cepas de Candida spp. e Cryptococcus neo-formans resistentes ao fluconazol. AlÃm de promover danos ao DNA e externalizaÃÃo da fosfatidilserina, o respectivo composto parecem atuar em sÃtios especÃficos prÃximos a mitocÃndria das cÃlulas de C. albicans, levando à morte por apoptose. / Considering that some therapeutic properties of curcumin are well described, so the present study points to an antifungal effect of curcumin against strains of pathogenic yeasts resistant to fluconazole, strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans. All strains studied were inhibited by curcumin with different degrees of inhibition among species with MICs ranging from 8-64 mg / ml. After exposure strains of C. albicans, curcumin a decrease in the number of viable cells was observed, thus indicating damage to cell membranes, with possible compromise of their functions. Our results showed that after treatment with curcumin, found in more intense staining with PI (Propidium iodide), indicating changes in cell membranes. In this study, the mitochondrial function of C. albicans cells appears to have been affected after exposure to curcumin. The collapse in &#916;&#968;m (Mitochondrial Transmembrane Potential) can lead to openings of transient pores in the mitochondrial membranes. In relation to the different mechanisms of action described for curcumin, there is evidence that DNA is one of the celular targets of this molecule. Our data suggest that after exposure to curcumin, cells of C. albicans showed total breaks in DNA strands. In conclusion, the compound curcumin has antifungal activity in vitro against strains of Candida spp. and Cryptococcus neoformans resistant to fluconazole. In addition to promoting DNA damage and externalization of phosphatidylserine, the respective compound seem to act at specific sites near mitochondria of C. albicans cells, leading to death by apoptosis.

Por muitos anos o fluconazol tem sido uma opção usual para tratamento de infecções por Candida. Entretanto, o uso indiscriminado desta terapia antimicótica tem favorecido o surgimento de microrganismos resistentes. A redução da afinidade da enzima alvo dos antifúngicos, 14--demetilase (ERG11p), tem sido descrita como um importante mecanismo de resistência, caracterizado por mutações em seu gene codificante ERG11. Neste estudo, foi investigada a suscetibilidade ao fluconazol de 87 isolados de C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei e C. glabrata, com valores de MIC determinados através do método de microdiluição em caldo M27-A3 (CLSI, 2008); verificou-se que dezessete isolados apresentavam decréscimo da suscetibilidade ao fluconazol. A triagem de mutações foi realizada através da amplificação de quatro regiões do gene ERG11 com primers específicos delineados neste estudo, para cada espécie de Candida, seguida de análise pela técnica de eletroforese SSCP e seqüenciamento automatizado. Foram identificadas 217 mutações, incluindo 185 silenciosas e 32 por troca de sentido (que altera o aminoácido resultante). Estas últimas foram observadas em 19 isolados e 17 resíduos distintos, sendo 7 deles ainda não descritos anteriormente: L321F em C. albicans; K53M em C. krusei; Y221F, K344T, V362M e R371S em C. tropicalis; e R398I em C. parapsilosis. Confrontando os resultados entre a técnica de eletroforese SSCP e seqüenciamento automatizado, não houve associação direta entre as mudanças na migração eletroforética e alterações na seqüência nucleotídica do gene ERG11. Sugerimos que a freqüência elevada de alterações no gene ERG11 de Candida deve ser considerada no design de novos fármacos que visem a enzima ERG11p / For many years, fluconazole has been a usual option for treatment of Candida infections. However, the indiscriminate use of antimycotic therapy has favored the emergence of resistant organisms. The decrease in the affinity of the enzyme target of antifungal agents, 14--demethylase (ERG11p), has been described as an important mechanism of resistance, characterized by mutations in its encoding gene ERG11. In this study, we investigated the susceptibility to fluconazole of 87 strains of C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei and C. glabrata with MIC values determined by broth microdilution M27-A3 (CLSI, 2008), found that seventeen isolates showed decreased susceptibility to fluconazole. Mutation screening was performed by the amplification of four regions of the ERG11 gene with specific primers designed in this study for each Candida species, followed by electrophoresis SSCP analysis and sequencing. We identified 217 mutations, including 185 silent mutations and 32 missense mutations. Missense mutations were observed in 19 isolates and 17 distinct residues, 7 of them still not described earlier: L321F in C. albicans, K53M in C. krusei; Y221F, K344T, V362M and R371S in C. tropicalis, and R398I in C. parapsilosis. Comparing the results between SSCP electrophoresis technique and sequencing, there was no direct association between changes in electrophoretic migration and changes in the nucleotide sequence of the ERG11 gene. We suggest that the high frequency of changes in ERG11 gene of Candida should be considered in the design of new drugs targeting the enzyme ERG11p

O fluconazol é um fármaco antifúngico utilizado na prevenção e tratamento de infecções micóticas. Atualmente, no mercado brasileiro, vários laboratórios farmacêuticos comercializam produtos a base de fluconazol na forma de cápsulas de 150 mg. Estes produtos são considerados similares e, portanto, teoricamente intercambiáveis, por conterem o mesmo princípio ativo nas mesmas dosagem e forma farmacêutica. No entanto, não existem estudos atestando a bioequivalência entre eles. Pretendeu-se, nesse trabalho, realizar avaliação biofarmacotécnica in vitro (cinética de dissolução) e in vivo (bioequivalência) de duas formulações do mercado nacional contendo fluconazol: Zoltec® 150 mg (laboratórios Pfizer Ltda.), considerado produto referência (R) e Flunazol® 150 mg (Laboratórios Sintofarma S.A.), considerado produto teste (T). Inicialmente, desenvolveu-se método para a análise da cinética de dissolução, já que não existe teste oficial de dissolução para formas farmacêuticas contendo fluconazol. Após padronização do método, avaliou-se a cinética de dissolução de cápsulas de fluconazol provenientes de dois lotes de R e dois lotes de T por meio dos parâmetros ks (constante de velocidade de dissolução) e t85% (tempo necessário para dissolução de 85% do fármaco presente na forma farmacêutica), derivados dos perfis de dissolução. Obteve-se ks de 0,1079 min-1 e 0,1377 min-1 para os dois lotes de R testados e 0,5421 min-1 para os dosi lotes de T, e t85% entre 15,09 min e 20,06 min para R e entre 5,64 min e 6,02 min para T. O ensaio de bioequivalência foi do tipo aleatório cruzado, com coleta de amostras de sangue até 96 horas após administração dos produtos R e T a 28 voluntários em jejum. Para quantificação do fluconazol em amostras de plasma desenvolveu-se e validou-se método simples, exato, preciso e sensível por cromatografia líqüida de alta eficiência (CLAE) sem utilização de padrão interno, e detecção em ultravioleta a 210 nm, após extração com solvente orgânico em meio básico. A bioequivalência entre os produtos foi determinada através da comparação dos parâmetros farmacocinéticos Cmax (concentração plasmática máxima), tmax (tempo necessário para Cmax) e AUCT (área sob a curva de decaimento plasmático) obtidos para R e T. Os resultados foram submetidos a análise estatística conforme recomendado pelo FDA-USA, determinando-se os intervalos de confiança 90% (I.C. 90%) para as relações entre Cmax de T e R e AUCT de T e R. Os valores médios de Cmax, tmax e AUCT para R e T foram, respectivamente: 3,64 mg/L e 3,75 mg/L; 2,96 h e 2,79 h; 153,33 mgh/L e 154,45 mgh/L. Os I.C. 90% para Cmax e AUCT foram, respectivamente, 101,06% a 105,45% e 97,96% a 103,36%. Concluiu-se que R e T são bioequivalentes, podendo ser administrados de forma intercambiável, sem prejuízo do efeito terapêutico. / Fluconazole is an antifungal agent widely used in the prevention and treatment of invasive fungal infections. Many brazilian pharmaceutical industries manufacture capsules containing 150 mg of fluconazole. As such products contain the same amount of the same therapeutically active ingredient in the same dosage form, they are considered to be interchangeable, indeed no bioequivalence study have been conducted to assess this. The present study was designed to perform in vitro (dissolution kinetics) and in vivo (bioequivalence) biopharmaceutical evaluation of two commercial products available in Brazil: Zoltec® 150 mg (Pfizer) as the reference product (R) and Flunazol® 150 mg (Sintofarma) as the test product (T). There is no official dissolution method for fluconazole dosage forms so initially a methos was developed and standardized for the evaluation of dissolution kinetics of fluconazole capsules. Dissolution kinetics for samples from two batches of R and two batches of T was analysed through ks (dissolution rate constant) and t85% (time for dissolution of 85% of the drug in the dosage form), obtained from dissolution profiles. Results showed ks values of 0,1079 min-1 and 0,1377 min-1 for the two tested batches of R and 0,5421 min-1 for both tested batches of T, and t85% values between 15,09 min and 20,06 min for R and between 5,64 min and 6,02 min for T. Bioequivalence assay was crossover and randomized. Blood samples were collected throughout a 96 hours period after administration of R and T to 28 fasting volunteers. A simple, accurate, precise and sensitive high-performance liquid chromatographic (HPLC) method without internal standard, and ultraviolet detection at 210 nm, was developed and validated for quantification of fluconazole im plasma samples after liquid-liquid extraction. Bioequivalence was assessed through pharmacokinetic parameters Cmax (peak plasma concentration), tmax (time to reach Cmax) and AUCT (área under the “plasma concentration vs time" curve) for R and T. Results were submitted to statistical analysis according to the FDA-USA and 90% confidence intervals (90% C.I.) were calculated for T and R Cmax ratios and T and R AUCT ratios. Average Cmax, tmax and AUCT values for R and T were, respectively: 3,64 mg/L and 3,75 mg/L; 2,96 h and 2,79 h; 153,33 mgh/L and 154,45 mgh/L. 90% C.I. for Cmax and AUCT were, respectively, 101,06% - 105,45% and 97,96% - 103,36%. Results show that R and T are bioequivalent and can be administered in an interchangeable way, without any prejudice of therapeutic effect.

nÃo hà / A leishmaniose cutÃnea à um importante problema de saÃde no Brasil, existindo como doenÃa autÃctone em todos os estados brasileiros. No perÃodo de 1980 a 2005, foram registrados 613.644 casos no paÃs. No CearÃ, à uma doenÃa endÃmica em vÃrias regiÃes e em muitos municÃpios faz centenas de vÃtimas todos os anos. Em Ãpocas de epidemias, o nÃmero de registros tem chegado a mais de 4000 notificaÃÃes por ano. Nos Ãltimos 28 anos (1980-2008) foram diagnosticados 55.925 pessoas acometidas da doenÃa, o que reflete uma mÃdia de 2000 vÃtimas de leishmaniose cutÃnea por ano. Sabe-se que os primeiros registros da doenÃa no Cearà datam de 1925. Apesar de ter todo este impacto na saÃde pÃblica do estado, existem muitas lacunas no conhecimento desta infecÃÃo, quer seja do ponto de vista histÃrico; do ponto de vista clÃnico e relacionadas ao tratamento. Objetivo: Fazer um levantamento sobre os aspectos histÃricos e as descobertas mais relevantes relacionadas Ãs leishmanioses; investigar quando e como foi introduzida no estado do CearÃ, bem como seus descobridores; descrever de modo detalhado as manifestaÃÃes clÃnicas da leishmaniose cutÃnea no CearÃ; relatar a evoluÃÃo histÃrica do tratamento, bem como apresentar uma alternativa de tratamento para a leishmaniose cutÃnea. Metodologia: Foram consultadas fontes primÃrias e fontes secundÃrias. Fontes SecundÃrias 1. Livros textos clÃssicos sobre leishmaniose; livros de escritores cearenses sobre tema envolvendo saÃde do inÃcio do sÃculo passado; teses; artigos de revistas cientÃficas. 2. Acervo de bibliotecas em Fortaleza (CE), Salvador (BA), Rio de Janeiro (RJ), SÃo Paulo(SP), Estados Unidos (Universidade de VirgÃnia, Universidade de Miami) e Inglaterra (London School of Tropical Medicine & Hygiene e FundaÃÃo Wellcome). 3. Pesquisas no Pubmed, Lilacs e Medline; 4. Pesquisa de microfilmes de jornais e de RelatÃrios da Provincia do CearÃ, do perÃodo de 1850 a 1930, do Acervo da Biblioteca PÃblica Menezes Pimentel (Fortaleza-CE). 5. Pesquisa nas pÃginas da OMS e do yahoo e google, em especial para as biografias. Fontes PrimÃrias: 1. Entrevistas com pesquisadores que viveram a histÃria da leishmaniose, com familiares de pesquisadores que fizeram a histÃria; 2. Dados e fotografias de lesÃes de pacientes de acervo pessoal. Resultados: Os primeiros registros da doenÃa (em livros) no Cearà sÃo de 1909 e registros oficiais (documentos de governo) somente existem a partir de 1917. O surgimento da leishmaniose cutanea ocorreu apÃs a grande seca e a epidemia de varÃola (1877-1879), que forÃaram a migraÃÃo de milhares de cearenses para a regiÃo AmazÃnica, para trabalhar na exploraÃÃo da borracha. Ao retornarem para o Cearà trouxeram a infecÃÃo, que aqui encontrou condiÃÃes propÃcias para se transmitir. Os primeiros registros da leishmaniose na AmazÃnia datam de 1820. Do ponto de vista clÃnico observamos que a infecÃÃo pela Leishmania braziliensis causa febre, adinamia e linfadenopatia satÃlite e alguns pacientes apresentam hepatoesplenomegalia. O aspirado dos linfonodos mostrou, na maioria dos casos, a presenÃa de leishmania e a cultura do creme leucocitÃrio em um paciente isolou o parasita. Do ponto de vista terapÃutico, de 21 pacientes tratados com fluconazol na dose de 7mg/kg/dia, durante uma mÃdia de 7 semanas, 18 tiveram as Ãlceras totalmente cicatrizadas e dois pacientes dos trÃs que inicialmente nÃo responderam, obtendo a cura com associaÃÃes de medicamentos que incluÃram o fluconazol como uma das drogas administradas. ConclusÃo: A leishmaniose cutÃnea do Cearà à uma doenÃa importada da AmazÃnia, onde a enfermidade jà existia desde o inÃcio do sÃculo XIX e que deve ter chegado no Cearà antes do inicio do sÃculo XX; a infecÃÃo pela Leishmania braziliensis causa uma doenÃa sistÃmica devido ao parasitismo e à provavelmente nesta fase que a leishmania se localiza nas mucosas onde poderà causar doenÃa mais tarde; o fluconazol à uma alternativa para o tratmento da leishmaniose cutÃnea. / Cutaneous leishmaniasis is an important health problem in Brazil.The disease has spread to all regions and autochtonous cases have been reported from all states. The total number of cases reported in the country from 1980 to 2005, was 613, 644. In CearÃ, cutaneous leishmaniasis is an endemic disease in all regions of the state and in many municipalities hundreds of cases are reported every year. In times of epidemics the number of cases has reached more than 4000 per year. In the 28 years from 1980 to 2008, 55.925 new cases were reported in the state. The first well documented cases of cutaneous leishmaniasis in Cearà date back to 1925. Even though it causes a great impact in public health, many informations related to the knowledge of the disease are lacking in its historical, clinical and therapeutics aspect. Objective:1.To study all relevant historical aspects related to the leishmaniasis;2. To investigate when and how it emerged in CearÃ, as well as who studied it; 3. To describe in a detailed form the clinical manifestations of cutaneous leishmaniasis; 4. To describe the historical evolution of therapy as well as to propose a therapeutic alternative for the disease. Methods:We consulted primary and secondary sources. Secondary sources. 1. Old books (classics) on leishmaniais; Books and articles from the beginning of the XX century by writers from Cearà as well as thesis and articles from scientific journals. 2. Archives of Libraries in Fortaleza(Ce), Salvador(BA), Rio de Janeiro(RJ), SÃo Paulo (SP), EUA( Universidade de Virginia, Universidade de Miami) and England (London School of Tropical Medicine & Hygiene and Wellcome Foundation); 3. Search in pubmed, Medline and lilacs; 4. To search information from microfilms of newspapers and reports from the Government Province of Cearà from 1850 to 1930 in the archives of Menezes Pimentel Public Library in Fortaleza (Ce); 5. WHO home page, yahoo.com and google.com, specially for scientists biographies. Primary sources: 1. Interview with researchers, family members of old researchers that made the history. 2. Author personal archives of photographs of cutaneous leishmaniasis patients skin and mucosal lesions as well as lymph nodes. Results: The first references to the existence of the disease (in books) in Cearà are form 1909 and in government reports are from 1917. The emergence of the disease in Cearà occurred after the great drought and the smallpox epidemic (1877-1879). These phenomenons forced migration of dozens thousands of people to the Amazon, to work on rubber production. In their return they brought with them the infection and the disease found here the appropriate conditions to develop. The first documented information on the disease in the Amazon region date back to 1820. From the clinical point of view, we documented that the infection by Leishmania braziliensis causes fever, malaise and satellite lymph nodes enlargement and in some patients liver and spleen enlargement is seen. Lymph nodes aspirates demonstrated Leishmania in most patients and Leishmania was cultured from Buffy coat of one patient. Concerning therapy, 21 patients were treated with fluconazole 7mg/kg/day for an average of 7 weeks, 18 were cured, and 2 of the three that did not responded to fluconazole initially, were cured with drugs associations that included fluconazole in the therapeutic scheme. Conclusion: 1. Cutaneous leishmaniasis in Cearà is an imported disease from the Amazon region, where the condition exists since the beginning of the XIX century and had its arrival in Cearà at the end of the XIX century; 2. Leishmania braziliensis infection causes a systemic disease due to parasite dissemination and it is probable in this phase, that leishmania locates in the mucosa, where it may causes disease in a later phase; 3. Fluconazole is a therapeutic alternative for cutaneous leishmaniasis.

O fluconazol é um fármaco antifúngico utilizado na prevenção e tratamento de infecções micóticas. Atualmente, no mercado brasileiro, vários laboratórios farmacêuticos comercializam produtos a base de fluconazol na forma de cápsulas de 150 mg. Estes produtos são considerados similares e, portanto, teoricamente intercambiáveis, por conterem o mesmo princípio ativo nas mesmas dosagem e forma farmacêutica. No entanto, não existem estudos atestando a bioequivalência entre eles. Pretendeu-se, nesse trabalho, realizar avaliação biofarmacotécnica in vitro (cinética de dissolução) e in vivo (bioequivalência) de duas formulações do mercado nacional contendo fluconazol: Zoltec® 150 mg (laboratórios Pfizer Ltda.), considerado produto referência (R) e Flunazol® 150 mg (Laboratórios Sintofarma S.A.), considerado produto teste (T). Inicialmente, desenvolveu-se método para a análise da cinética de dissolução, já que não existe teste oficial de dissolução para formas farmacêuticas contendo fluconazol. Após padronização do método, avaliou-se a cinética de dissolução de cápsulas de fluconazol provenientes de dois lotes de R e dois lotes de T por meio dos parâmetros ks (constante de velocidade de dissolução) e t85% (tempo necessário para dissolução de 85% do fármaco presente na forma farmacêutica), derivados dos perfis de dissolução. Obteve-se ks de 0,1079 min-1 e 0,1377 min-1 para os dois lotes de R testados e 0,5421 min-1 para os dosi lotes de T, e t85% entre 15,09 min e 20,06 min para R e entre 5,64 min e 6,02 min para T. O ensaio de bioequivalência foi do tipo aleatório cruzado, com coleta de amostras de sangue até 96 horas após administração dos produtos R e T a 28 voluntários em jejum. Para quantificação do fluconazol em amostras de plasma desenvolveu-se e validou-se método simples, exato, preciso e sensível por cromatografia líqüida de alta eficiência (CLAE) sem utilização de padrão interno, e detecção em ultravioleta a 210 nm, após extração com solvente orgânico em meio básico. A bioequivalência entre os produtos foi determinada através da comparação dos parâmetros farmacocinéticos Cmax (concentração plasmática máxima), tmax (tempo necessário para Cmax) e AUCT (área sob a curva de decaimento plasmático) obtidos para R e T. Os resultados foram submetidos a análise estatística conforme recomendado pelo FDA-USA, determinando-se os intervalos de confiança 90% (I.C. 90%) para as relações entre Cmax de T e R e AUCT de T e R. Os valores médios de Cmax, tmax e AUCT para R e T foram, respectivamente: 3,64 mg/L e 3,75 mg/L; 2,96 h e 2,79 h; 153,33 mgh/L e 154,45 mgh/L. Os I.C. 90% para Cmax e AUCT foram, respectivamente, 101,06% a 105,45% e 97,96% a 103,36%. Concluiu-se que R e T são bioequivalentes, podendo ser administrados de forma intercambiável, sem prejuízo do efeito terapêutico. / Fluconazole is an antifungal agent widely used in the prevention and treatment of invasive fungal infections. Many brazilian pharmaceutical industries manufacture capsules containing 150 mg of fluconazole. As such products contain the same amount of the same therapeutically active ingredient in the same dosage form, they are considered to be interchangeable, indeed no bioequivalence study have been conducted to assess this. The present study was designed to perform in vitro (dissolution kinetics) and in vivo (bioequivalence) biopharmaceutical evaluation of two commercial products available in Brazil: Zoltec® 150 mg (Pfizer) as the reference product (R) and Flunazol® 150 mg (Sintofarma) as the test product (T). There is no official dissolution method for fluconazole dosage forms so initially a methos was developed and standardized for the evaluation of dissolution kinetics of fluconazole capsules. Dissolution kinetics for samples from two batches of R and two batches of T was analysed through ks (dissolution rate constant) and t85% (time for dissolution of 85% of the drug in the dosage form), obtained from dissolution profiles. Results showed ks values of 0,1079 min-1 and 0,1377 min-1 for the two tested batches of R and 0,5421 min-1 for both tested batches of T, and t85% values between 15,09 min and 20,06 min for R and between 5,64 min and 6,02 min for T. Bioequivalence assay was crossover and randomized. Blood samples were collected throughout a 96 hours period after administration of R and T to 28 fasting volunteers. A simple, accurate, precise and sensitive high-performance liquid chromatographic (HPLC) method without internal standard, and ultraviolet detection at 210 nm, was developed and validated for quantification of fluconazole im plasma samples after liquid-liquid extraction. Bioequivalence was assessed through pharmacokinetic parameters Cmax (peak plasma concentration), tmax (time to reach Cmax) and AUCT (área under the “plasma concentration vs time” curve) for R and T. Results were submitted to statistical analysis according to the FDA-USA and 90% confidence intervals (90% C.I.) were calculated for T and R Cmax ratios and T and R AUCT ratios. Average Cmax, tmax and AUCT values for R and T were, respectively: 3,64 mg/L and 3,75 mg/L; 2,96 h and 2,79 h; 153,33 mgh/L and 154,45 mgh/L. 90% C.I. for Cmax and AUCT were, respectively, 101,06% - 105,45% and 97,96% - 103,36%. Results show that R and T are bioequivalent and can be administered in an interchangeable way, without any prejudice of therapeutic effect.

Por muitos anos o fluconazol tem sido uma opção usual para tratamento de infecções por Candida. Entretanto, o uso indiscriminado desta terapia antimicótica tem favorecido o surgimento de microrganismos resistentes. A redução da afinidade da enzima alvo dos antifúngicos, 14--demetilase (ERG11p), tem sido descrita como um importante mecanismo de resistência, caracterizado por mutações em seu gene codificante ERG11. Neste estudo, foi investigada a suscetibilidade ao fluconazol de 87 isolados de C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei e C. glabrata, com valores de MIC determinados através do método de microdiluição em caldo M27-A3 (CLSI, 2008); verificou-se que dezessete isolados apresentavam decréscimo da suscetibilidade ao fluconazol. A triagem de mutações foi realizada através da amplificação de quatro regiões do gene ERG11 com primers específicos delineados neste estudo, para cada espécie de Candida, seguida de análise pela técnica de eletroforese SSCP e seqüenciamento automatizado. Foram identificadas 217 mutações, incluindo 185 silenciosas e 32 por troca de sentido (que altera o aminoácido resultante). Estas últimas foram observadas em 19 isolados e 17 resíduos distintos, sendo 7 deles ainda não descritos anteriormente: L321F em C. albicans; K53M em C. krusei; Y221F, K344T, V362M e R371S em C. tropicalis; e R398I em C. parapsilosis. Confrontando os resultados entre a técnica de eletroforese SSCP e seqüenciamento automatizado, não houve associação direta entre as mudanças na migração eletroforética e alterações na seqüência nucleotídica do gene ERG11. Sugerimos que a freqüência elevada de alterações no gene ERG11 de Candida deve ser considerada no design de novos fármacos que visem a enzima ERG11p / For many years, fluconazole has been a usual option for treatment of Candida infections. However, the indiscriminate use of antimycotic therapy has favored the emergence of resistant organisms. The decrease in the affinity of the enzyme target of antifungal agents, 14--demethylase (ERG11p), has been described as an important mechanism of resistance, characterized by mutations in its encoding gene ERG11. In this study, we investigated the susceptibility to fluconazole of 87 strains of C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis, C. krusei and C. glabrata with MIC values determined by broth microdilution M27-A3 (CLSI, 2008), found that seventeen isolates showed decreased susceptibility to fluconazole. Mutation screening was performed by the amplification of four regions of the ERG11 gene with specific primers designed in this study for each Candida species, followed by electrophoresis SSCP analysis and sequencing. We identified 217 mutations, including 185 silent mutations and 32 missense mutations. Missense mutations were observed in 19 isolates and 17 distinct residues, 7 of them still not described earlier: L321F in C. albicans, K53M in C. krusei; Y221F, K344T, V362M and R371S in C. tropicalis, and R398I in C. parapsilosis. Comparing the results between SSCP electrophoresis technique and sequencing, there was no direct association between changes in electrophoretic migration and changes in the nucleotide sequence of the ERG11 gene. We suggest that the high frequency of changes in ERG11 gene of Candida should be considered in the design of new drugs targeting the enzyme ERG11p