BARBOSA, Sabrina Carneiro Melo. Efeito protetor da amifostina sobre a mucosite oral, via inibição de TNF-a, IL-1b e NOSi, e sobre a hipossalivação induzidas por 5-fluorouracil em hamsters . 2011. 108 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-03-15T12:09:19Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_scmbarbosa.pdf: 3957690 bytes, checksum: 719ede6aebb7ad2507e0bdb6d6a678f3 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-03-15T12:32:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_scmbarbosa.pdf: 3957690 bytes, checksum: 719ede6aebb7ad2507e0bdb6d6a678f3 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T12:32:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_scmbarbosa.pdf: 3957690 bytes, checksum: 719ede6aebb7ad2507e0bdb6d6a678f3 (MD5) Previous issue date: 2011 / Oral mucositis (OM) is a common complication and limitation of cancer chemotherapy. Amifostine (AMF) is a broad spectrum antioxidant, which is currently being studied in the cytoprotection of the adverse effects of radiotherapy and chemotherapy for cancer. This study evaluated the effect of AMF on inflammation and xerostomia observed in experimental OM as well as evaluate its modulating effect on cytokine and nitric oxide synthase (iNOS). Golden siriam hamsters were injected i.p. 60 and 40 mg/ kg of 5-FU on days 1 and 2, respectively, and the fourth day, had their cheek pouches subjected to mechanical trauma (MT) with blunt-tipped needle. This group also received saline solution (ss) s.c. for 10 days. A control group received only i.p. ss the 1st and 2nd days. A third group received i.p. ss for 2 days, and was submitted to the MT, on day 4. Additionally, three groups of animals were treated with Amifostine (12.5, 25 or 50 mg/ kg, daily, 30 minutes before the 5-FU) over 10 days. Animals were weighed daily. We evaluated the rate of salivation in all animals on the 4th and 10th days under sedation. On the 10th day, the sacrifice was to observe the macroscopic mucosa and removal of samples for histopathology and immunohistochemistry, measurement of myeloperoxidase activity (MPO) and TNF- and IL-1tissue concentration. Treatment with 5-FU was able to induce a significant (p <0.05) increase in TNF-α (1471 ± 452.7) and IL-1(6870 ± 2417) compared to group treated with saline (TNF-α: 0.0 ± 0.0; IL-1: 787.5 ± 356.1). Treatment with AMF (50 mg/ kg) significantly reduced (p <0.05) levels of TNF-α (428.6 ± 246.3) and IL-1β (395.9 ± 86.06) when compared to group treated with 5-FU, reaching an inhibition of 70, 8% and of 100%, respectively. AMF also significantly reduced the immunoreactivity of TNF-α, IL-1β and iNOS. Treatment with 5-FU induced a significant increase (p<0,05) in MPO activity (5.96 ± 1.81) compared to the control group (0.96 ± 0.47). Treatment with AMF significantly (p<0,05) attenuated MPO (1.79 ± 0.32), reaching an inhibition of 64,2%. On the macroscopic and microscopic analysis, doses of AMF can reduce the severity of OM were 25 and 50 mg/kg/day and 12.5 and 50mg/kg/dia respectively. AMF, at all doses used, reversed the reduction in salivation induced by administration of 5-FU, significantly (p<0,05), without however altering the weight loss and leukocyte count. Finally, AMF significantly attenuates the inflammatory events observed in the OM and xerostomia experimentally induced by 5-FU in hamsters. This inhibitory effect seems to occur via modulation of TNF-α, IL-1β and iNOS. / Mucosite oral (MO) é uma complicação comum e limitante da quimioterapia do câncer. Amifostina (AMF) é um agente antioxidante de largo espectro, que vem sendo atualmente estudado na proteção dos efeitos adversos da radioterapia e quimioterapia do câncer. Este trabalho objetivou avaliar o efeito da AMF sobre a inflamação e a xerostomia observadas na MO experimental, bem como avaliar seu efeito modulador sobre citocinas e óxido nítrico sintase induzida (NOSi). Hamsters Goldem siriam receberam injeções i.p. de 60 e 40 mg/kg de 5-FU, nos dias 1 e 2, respectivamente, e, no 4o dia, tiveram suas mucosas jugais submetidas a trauma mecânico (TM) com agulha de ponta romba. Este grupo recebeu ainda solução salina (ss) s.c., durante 10 dias.Um grupo controle recebeu apenas ss i.p. no 1º e 2º dias.Um terceiro grupo, recebeu ss i.p. por 2 dias, tendo sido submetido ao TM, no 4º dia. Adicionalmente, 3 grupos de animais foram tratados com amifostina (12,5, 25 ou 50 mg/kg, diariamente, 30 minutos antes do 5-FU) ao longo dos 10 dias. Os animais foram pesados diariamente. Avaliou-se a taxa de salivação de todos os animais no 4º e 10º dias, sob sedação. No 10º dia, ocorreu o sacrifício para análise macroscópica das mucosas e retirada de amostras para análise histopatológica e imuno-histoquímica, dosagem da atividade demieloperoxidase (MPO) e concentração tecidual de TNF- e IL-1. O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir um significativo (p<0,05) aumento de TNF-α (1471±452,7) e de IL-1 (6870±2417) quando comparado ao grupo tratado apenas com salina (TNF-α:0,0 ± 0,0;IL-1:787,5±356,1). O tratamento com AMF (50 mg/kg) reduziu significativamente (p<0,05) os níveis de TNF-α(428,6±246,3) e de IL-1 (395,9±86,06), quando comparado ao grupo tratado apenas com 5-FU, atingindo uma inibição de 70,8% e de 100% dos níveis de citocinas, respectivamente. AMF também reduziu significativamente a imunoexpressãode TNF-α, IL-1β e NOSi. O tratamento com 5-FU induziu um significativo incremento na atividade de MPO (5,96 ± 1,81) quando comparado ao grupo controle (0,96 ± 0,47). O tratamento com AMF atenuou significativamente (p<0,05) a atividade de MPO (1,79 ± 0,32), alcançando uma inibição de 64,2% dos seus níveis de atividade. Na análise das mucosas, as doses de AMF capazes de reduzir a gravidade da MO foram, de 25 e 50 mg/kg/dia, macroscopicamente e de 12,5 e 50 mg/kg/dia, microscopicamente. AMF, em todas as doses utilizadas, reverteu a redução da taxa de salivação induzida pela administração do 5-FU (6,86 ± 1,59; 5,60 ± 1,72; 4,50 ± 1,20), de forma significativa (p<0,05), quando comparado ao grupo tratado com 5-FU (0,50 ± 0,38). No entanto, os grupos tratados com AMF não foram capazes de alterar a perda ponderal nem a contagem de leucócitos circulantes. Concluindo, AMF atenua significativamente os eventos inflamatórios e a xerostomia observadas na MO experimental induzida por 5-FU em hamsters. Tal efeito inibitório parece ocorrer via modulação das citocinas TNF-α, IL-1β e da NOSi.

BARBOSA, Thayanne Brasil. Efeito do 5-Fluorouracil na reabsorção óssea alveolar induzida por ligadura em ratos. 2015. 84 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-10T12:37:25Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_tbbarbosa.pdf: 15807034 bytes, checksum: 1345037625f988e70d8b4691598a6b58 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-10T12:38:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_tbbarbosa.pdf: 15807034 bytes, checksum: 1345037625f988e70d8b4691598a6b58 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-10T12:38:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_tbbarbosa.pdf: 15807034 bytes, checksum: 1345037625f988e70d8b4691598a6b58 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: 5-fluorouracil (5-FU) is a highly used anticancer drug. Its administration causes several side effects and. its role in bone loss has been recently studied, since 5-FU showed a decrease in bone mineral density and growth inhibition in young rats. The aim of our study was to investigate the effect of 5-FU on the in ligature-induced bone resorption in rats. Methods and results: 146 Wistar rats (180-220 g) were divided in four groups that received distilled water (2 ml/kg, IP) or 5-FU (37.5, 75 or 150 mg/kg, IP 1 hour before the ligature placement. Sacrifice was performed at 11th day. Hemiarcades were submitted to macroscopic (mm²), histologic or histometric (mm²) analyses. In addition, cytokines (TNF-α and IL-1β; pg/mg) were dosed and the assessment of MPO activity (U/mg) and total and bone-specific alkaline phosphatase (U/ml) was performed. Survival, leukogram, body mass variation and liver, kidney and spleen conditions were also evaluated. p<0.05 was considered significant. The study was approved by the ethics committee in animal research. Ligature placement caused an important alveolar area bone loss, including the furcation area. It also caused an increase in the MPO activity, in the concentrations of TNF-α e IL-1β, and diminished bone-specific alkaline phosphatase. It was observed greater furcation lesions, alveolar bone destruction and an increase in the inflammatory infiltrate when compared to normal (p<0.05). Although 5-FU did not increase MPO activity when compared with NT, it promoted an exacerbation of the periodontal destruction, with a severe alveolar bone loss, including the furcation area when compared with NT (p<0.05). Another finding was the increased concentration of TNF-α e IL-1β. In addition, 5-FU groups presented lower values of bone-specific alkaline phosphatase when compared to normal (p<0.05). It was also observed a severe destruction of the periodontum and a marked inflammatory infiltrate. Systemically, 5-FU (150 mg/kg) caused neutropenia, diminished rate of survival and loss of weight. Finally, it was not observed alterations in the hepatic, renal, or splenic conditions. Conclusion: Briefly, 5-FU increased ligature-induced bone resorption and the concentration of TNF-α and IL-1β, cytokines that are involved in the bone resorption process. Neutropenia was caused by the administration of the drug and contributed to exacerbate the destruction of the periodontium. / Introdução: O 5-fluorouracil (5-FU) é uma pirimidina utilizada em diversos protocolos para o tratamento do câncer e sua administração causa diversos efeitos adversos. Recentemente, seu papel na perda óssea tem sido estudado, já que o 5-FU mostrou diminuição da densidade mineral óssea e inibição do crescimento em ratos jovens. Assim, objetivou-se investigar se o efeito do 5-FU na reabsorção óssea alveolar induzida por ligadura em ratos. Métodos e resultados: 146 Ratos Wistar (180-220 g; n=6-10) foram divididos em quatro grupos em que receberam água destilada (2 ml/kg; IP) ou 5-FU (37,5, 75 ou 150 mg/kg; IP), 1 hora antes da colocação da ligadura, sendo sacrificados no 11° dia. As hemiarcadas foram direcionadas análises morfométrica (mm2), histopatológica e histométrica (mm2). Adicionalmente, foram realizadas dosagens de citocinas (TNF-α e IL- 1β; pg/mg), MPO (U/mg) e fosfatase alcalina total e óssea (U/ml) Sobrevida, leucograma, variação de massa corpórea e condições hepáticas, renais e esplênicas também foram avaliadas. p<0,05 foi considerado estatisticamente significante. O trabalho foi aprovado no comitê de ética em pesquisa. Observou-se que a ligadura causou uma importante perda óssea alveolar e na região de furca, aumento na atividade de MPO, nas concentrações de TNF-α e IL-1β, além de diminuição da FAO. Em relação ao histopatológico, foram observadas maiores lesões de furca, destruição de osso alveolar e infiltrado inflamatório em hemiarcadas do grupo NT em comparação ao normal (p<0,05). Embora o 5-FU não tenha sido capaz de aumentar a atividade de MPO em relação ao grupo NT, ele promoveu uma exacerbação da destruição periodontal, evidenciando uma maior perda óssea alveolar e na região de furca (p<0,05). Outro aspecto observado foi o aumento nas concentrações de TNF-α e IL-1β. Ainda, o fármaco promoveu diminuição nos valores de FAO em relação ao gruo normal (p<0,05). Os animais que receberam 5-FU também mostraram intensa destruição das estruturas periodontais e presença de infiltrado inflamatório no histopatológico. Sistemicamente, o 5-FU na dose de 150 mg/kg causou neutropenia, diminuição na sobrevida e da massa corpórea dos animais. Não foram observadas alterações nas condições hepáticas, renais ou esplênicas avaliadas. Conclusão: Em suma, a administração de 5-FU exacerbou a reabsorção óssea induzida por ligadura e induziu o aumento de TNF-α e IL-1β, citocinas envolvidas no processo de reabsorção óssea. A neutropenia causada pela administração do fármaco pode ter contribuído para exacerbar a destruição das estruturas de suporte do dente.

FREITAS, A. P. F. Efeito de subtrações da proteína do látex da Calotropis procera na mucosite oral induzida por 5-fluorouracil. 2016. 116 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-20T17:03:19Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_apffreitas.pdf: 3403371 bytes, checksum: 6a7649e4a7b9d1373aa22ffd5a268f2e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-21T11:21:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_apffreitas.pdf: 3403371 bytes, checksum: 6a7649e4a7b9d1373aa22ffd5a268f2e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T11:21:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_apffreitas.pdf: 3403371 bytes, checksum: 6a7649e4a7b9d1373aa22ffd5a268f2e (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / Oral mucositis is one of the most common collateral effects in patients undergoing treatment with 5-fluorouracil (5-FU). In this context, It has been previously shown that with only two doses of the protein from the latex fraction of Calotropis procera it was possible to prevent damage caused by 5-FU in the oral mucosa. Thus, the aim of this study was investigate the effect of subfractions of the latex protein (PL) of Calotropis procera in the prevention of oral mucositis induced by 5-FU in hamsters. At first, the subfractions (PI, PII and PIII) of the PL of Calotropis procera were identified by chromatography. Hamsters received 0.9% saline, i.p., (Control) or Mechanical Trauma (TM) or 5-FU (60mg / kg and 40mg / kg, i.p., respectively, on the 1st and 2nd day of the experimental protocol). 24h and 72h after of the last dose of the chemotherapeutic, PL 5mg / kg (PL + 5-FU) or its subfractions were administered: PI 5mg / kg (PI + 5-FU); PII 5mg / kg (PII + 5-FU); PIII 5mg / kg (PIII + 5-FU) and PII IAA 5mg / kg (PII IAA + 5-FU). On the 4th day, all experimental groups, except the control, were submitted to TM. The animals were observed daily until the tenth day of the experimental protocol to evaluate survival and weight loss. Then, the animals were anesthetized and their jugal mucosas were exposed for the mascroscopic analysis. Hamsters were euthanized and their jugal mucosa were collected to evaluate the following parameters: histopathological analysis, neutrophil recruitment (myeloperoxidase dosage, MPO), oxidative stress (GSH and MDA levels), inflammation (levels of TNFα and IL- ELISA, including protein expression of IL-1β, ICAM-1 and Iba-1 by immunohistochemistry) and integrity of collagen fibers (PicroSirius Red staining). From the PL fraction of Calotropis procera, the subfractions PI, PII and PIII were identified and showed to be quite distinct. In addition, PII and PIII showed intense proteolytic activity. The proteolytic activity of PII was inhibited with iodoacetamide, leading to PII IAA. 5-FU reduced survival, caused intense weight loss, caused extensive ulcer formation, development of abscesses, marked erythema, haemorrhage and edema. In addition, it also promoted formation of ulcers, characterized by loss of integrity of the jugal epithelium and intense infiltration of inflammatory cells. In addition, 5-FU increased the levels of MPO, MDA, IL-1β and TNF-α, including the expression of ICAM-1 and Iba-1, as well as decreased GSH levels and reduced collagen fibers in the oral mucosa compared to the control group. Whereas only PL or IAA PII were able to prevent these 5-FU promoted alterations. It is concluded that PII with its proteolytic activity inhibited by IAA is the subfraction responsible for the previously observed beneficial effects of PL on oral mucositis induced by 5-FU. Therefore, PII IAA attenuates 5-FU induced oral mucositis by reducing oxidative stress, inflammation (by decreasing the expression of adhesion molecules, neutrophil recruitment and macrophage activation with consequent decrease of IL-1β and TNF- Α). Thus, it prevents degradation of collagen fibers, including weight loss and increased survival in animals submitted to experimental oral mucositis. / A mucosite oral é um dos efeitos colaterais mais comuns em pacientes submetidos ao tratamento com 5-fluorouracil (5-FU). Nesse contexto, foi demonstrado que a fração Proteica do Látex (PL) da Calotropis procera, com apenas duas doses, preveniu os danos causados pelo 5-FU na mucosa oral. Devido a isso, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito de subfrações da proteína do látex (PL) da Calotropis procera na prevenção da mucosite oral induzida por 5-FU em hamsters. As subfrações (PI, PII e PIII) da PL da Calostropis Procera foram obtidas por cromatografia. Hamsters receberam salina 0,9%, i.p., (Controle ou Trauma Mecânico, TM) ou 5-FU (60mg/kg e 40mg/kg, i.p., respectivamente) no 1º e 2º dia do protocolo experimental. Após 24h e 72h da última dose do quimioterápico, administrou-se PL 5mg/kg (PL+5-FU) ou suas subfrações: PI 5mg/kg (PI+ 5-FU); PII 5mg/kg (PII + 5-FU); PIII 5mg/kg (PIII +5-FU) e PII IAA 5mg/kg (PII IAA+ 5-FU). No 4º dia, todos os grupos, exceto o grupo controle, foram submetidos ao TM. Os animais foram observados diariamente até o 10º dia do protocolo experimental para avaliar a sobrevida e a perda ponderal. Após a última análise, os animais foram anestesiados e suas mucosas jugais foram expostas para a análise macroscópica e em seguida, foram eutanasiados e suas mucosas jugais foram coletadas para avaliar os seguintes parâmetros: análise histopatológica, recrutamento de neutrófilos (dosagem de mieloperoxidase, MPO), estresse oxidativo (níveis de GSH e MDA), inflamação (níveis de TNFα e IL-1β por ELISA, incluindo expressão proteica de IL-1β, ICAM-1 e Iba-1 por imunohistoquímica) e integridade das fibras colágenas (coloração de PicroSirius Red). A partir da fração PL da Calotropis procera, foram identificadas 3 subfrações PI, PII e PIII bem distintas. Foi realizado um Zimograma e as frações PII e PIII demonstraram intensa atividade proteolítica. Devido a porcentagem de sobrevida, a atividade proteolítica de PII foi inibida com iodoacetamida, originando PII IAA. 5-FU reduziu a sobrevida, causou intensa perda ponderal, ocasionou formação de úlceras extensas, desenvolvimento de abscessos, de eritema acentuado, de hemorragia e de edema. Além disso, também promoveu formação de úlceras, caracterizado pela perda da integridade do epitélio da mucosa jugal e intenso infiltrado de células inflamatórias. Adicionalmente, 5-FU aumentou os níveis de MPO, MDA, IL-1β e TNF-α, incluindo a expressão de ICAM-1 e Iba-1, bem como, diminuiu os níveis de GSH e reduziu as fibras colágenas nas mucosas jugais comparado ao grupo controle. Por outro lado, apenas PL ou PII IAA foram capazes de prevenir essas alterações promovidas por 5-FU. Conclui-se que PII com sua atividade proteolítica inibida pelo IAA é a subfração responsável pelos efeitos benéficos observados anteriormente da PL na mucosite oral induzida por 5-FU. Adicionalmente, PII IAA atenua a mucosite oral induzida por 5-FU por reduzir o estresse oxidativo, a inflamação (por diminuir a expressão de moléculas de adesão, o recrutamento de neutrófilos e a ativação de macrófagos com consequente diminuição de IL-1β e TNF-α). Além disso, a subfração PII IAA possui efeito antioxidante e anti-inflamatório, previne a degradação das fibras colágenas, incluindo a perda de peso, e aumento da sobrevida em animais submetidos à mucosite oral experimental.

AQUINO, C. C. Estudo das populações de linfócitos T, NK e NKT na lâmina própria no pico da inflamação da mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil em camundongos C57BL6/J. 2016. 92 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-11-21T17:15:15Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccaquino.pdf: 1920706 bytes, checksum: 0107a62831da85415f0463aa2e27e7a3 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-11-21T17:15:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccaquino.pdf: 1920706 bytes, checksum: 0107a62831da85415f0463aa2e27e7a3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-21T17:15:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_ccaquino.pdf: 1920706 bytes, checksum: 0107a62831da85415f0463aa2e27e7a3 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Cancer is a disease that originates through genomic alterations that occur by defects in the systematic process of cell injury and repair. 5-fluorouracil (5-FU) is one of the most used anti-neoplastic drugs in the cancer treatment, exerting multiple effects on abnormal cell growth. 5-FU treatment affects rapidly proliferating tissues, causing mucositis, anorexia, nausea, vomiting and diarrhea. Natural Killer (NK) cells of the innate immunity, T cells of the acquired immunity, and Natural Killer T cells (NKT), which can play immunomodulatory activities, are present mainly in the intestinal mucosa. The aim of this study was to identify and characterize the populations of NK, T lymphocytes, and NKT cells in the lamina propria of C57BL6J mice challenged by 5-FU-induced intestinal mucositis. We have used male mice weighing 19 to 25g, challenged by intraperitoneal injection of 5FU (n=6) or saline (n=6) (150mg/kg, single dose) and euthanized after 72h. The small intestine segments were harvested for histological processing and morphometric analyses and for the myeloperoxidase activity assay. The extraction of the lamina propria lymphocytes from the overall small intestine was also conducted for flow cytometry analyses. Blood was drawn from the retroorbital plexus for leucocyte counting. Mice were weighed daily prior to 5-FU administration until the day of euthanasia. The 5-FU challenge (150 mg/kg, single dose, i.p.) led to weight loss, reduction of leucocyte counts at the time of villi and reason villus/crypt and increased crypt depth in all small intestinal segments. The flow cytometry data have shown that 5-FU-treated group had a reduction in the frequency of NK cells (CD16+) and CD3+ CD4+ cells. In the same group, an increased frequency of NKT cells (CD16+) and CD3+ CD8+ cells was found. Altogether our findings suggest that 5-FU-induced intestinal mucositis affects the frequency of different T and NK cells populations in the lamina propria. More in-depth studies are warranted to unfold the mechanisms that led to these changes, taking into account the immunoinflammatory effects of 5-FU. / O câncer é uma doença que se origina através de alterações genômicas que ocorrem por defeito no processo sistemático de lesão celular e reparo. O 5-fluorouracil (5-FU) é um dos anti-neoplásicos mais utilizados no tratamento do câncer, exercendo múltiplos efeitos sobre o crescimento celular anormal. O tratamento com 5-FU afeta principalmente tecidos de proliferação rápida, causando mucosite, anorexia, náuseas, vômitos e diarreia. As células Natural Killer (NK), da imunidade inata, as células T, da imunidade adquirida, e as células T Natural Killer (NKT), que podem desempenhar ações imunomodulatórias e estão presentes principalmente na mucosa do intestino. O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar as populações de linfócitos NK, T e NKT na lâmina própria de camundongos com mucosite intestinal induzida por 5-FU. Utilizamos camundongos machos com 19 a 25g, desafiados com injeção intraperitoneal de 5-FU (n=6) ou salina (n=6) (150mg/kg, dose única), sendo eutanasiados após 72h. Segmentos do intestino delgado foram coletados para processamento histológico e análise morfométrica e para ensaio da atividade da mieloperoxidase. Foi realizada também a extração de linfócitos da lâmina própria do intestino delgado dos animais para análise por citometria de fluxo e coletado sangue do plexo retroorbital para leucometria. Os animais foram pesados diariamente, antes da administração do 5-FU até o dia da eutanásia. O desafio com o 5-FU (150 mg/kg, dose única, via i.p) levou a perda de peso nos animais, redução da contagem de leucócitos, da altura dos vilos e da razão vilo/cripta em todos os segmentos do intestino delgado e aumentou a profundidade das criptas. Os dados da citometria de fluxo evidenciaram que os animais do grupo 5-FU tiveram uma redução da frequência de células NK (CD16+) e de células CD3+CD4+. Nesse mesmo grupo houve um aumento da frequência de células NKT (CD16+) e de células CD3+CD8+. A partir dos nossos achados, concluímos que a mucosite intestinal induzida pelo 5-FU afeta a frequência das diferentes populações de células T e NK na lâmina própria. São necessários estudos mais aprofundados sobre os mecanismos que levaram a essas alterações, levando em conta os efeitos imunoinflamatórios do 5-FU.

FREITAS, Ana Paula Fragoso de. Fração protéica do látex da Calotropis procera protege contra a mucosite oral induzida por 5-Fluorouracil em hamsters através da inibição de mediadores pró-inflamatórios. 2011. 10 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-06T12:33:20Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_apffreitas.pdf: 879655 bytes, checksum: 599c6f7fffbb9297d2c7f3d5d7bc62df (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-06T12:36:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_apffreitas.pdf: 879655 bytes, checksum: 599c6f7fffbb9297d2c7f3d5d7bc62df (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-06T12:36:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_apffreitas.pdf: 879655 bytes, checksum: 599c6f7fffbb9297d2c7f3d5d7bc62df (MD5) Previous issue date: 2011 / Mucosite oral (MO) induzida por drogas antineoplásicas é um importante fator limitante da dose e efeitos colaterais da terapia do câncer. Calotropis procera é uma planta que produz látex constitutivamente abundante que é relatado possuir propriedades antiinflamatórias, bactericidas, inseticidas, analgésicas. O presente trabalho teve como objetivo descrever o efeito das proteínas do látex da Calotropis procera (LP) na expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1) e enzimas induzíveis, como, ciclooxigenase-2 (COX-2) e óxido nítrico sintase induzível (NOSi) no modelo de MO em hamsters. A mucosite oral foi induzida por duas administrações intraperitoneal (i.p) de 5-fluorouracil (5-FU) no 1 º e 2º dias nas doses de 60 e 40 mg/kg, respectivamente nos animais (n = 5). As LP (0,25; 1; 5 E 25 mg/kg) foi injetado via i.p. 24h antes e 24h após o trauma mecânico da mucosa jugal. O grupo controle recebeu apenas solução salina. No 10º dia, os animais foram sacrificados e os tecidos da mucosa jugal foram colhidos. Foram realizadas no tecido mucosa jugal as análises macroscópicas e histopatológicas (infiltração de células inflamatórias, edema, hemorragia e à formação de ulcerações e abscessos), bem como a imunohistoquímica para TNF-α, IL-1β, NOSi e COX-2. Foram utilizados Kruskal Wallis / Dunn como testes estatísticos, onde P <0,05 foi aceito. O estudo foi submetido ao Comitê de Ética sob o protocolo 036/10. Observou-se que a LP inibiu significativamente parâmetros macroscópicos e histopatológicos, quando comparado ao grupo controle, com efeito máximo nos escores macroscópicos atingindo 75% e 66% do efeito máximo na avaliação histopatológica. A atividade de Mieloperoxidase (MPO) também foi significativamente inibida por LP em 91% com a mesma dose (p <0,001) quando comparado ao grupo controle e também inibiu a perda de peso em animais submetidos a mucosite oral e tratados com LP. A mucosa jugal dos animais submetidos a MO mostrou imunomarcação para TNF-α, IL-1β, NOSi e COX-2 na conjuntiva inflamada (Cj) e tecido epitelial (Ep) em comparação com o tecido jugal do grupo normal. LP causou redução considerável na imunomarcação para TNF-α (62%, Cj, 70%, Ep), IL-1β (87%, Cj, 80%, Ep), NOSi (82% Cj; Ep 52%) e COX -2 (70%, Cj, 100%, Ep) no tecido jugal quando comparado com o grupo de animais submetidos à mucosite experimental que receberam salina, em vez de LP. Esses achados demonstram efeitos anti-inflamatórios de LP em MO induzida por 5-FU. O efeito protetor poderia ser suportado pela redução da expressão das citocinas pró-inflamatórias, como TNF-α e IL-1β e na expressão de enzimas COX-2 e NOSi. O mecanismo de proteção parece envolver a expressão inibitória da NOSi, COX-2, TNF-α e IL-1β. / Oral mucositis (OM) induced by antineoplasic drugs is an important, dose-limiting, and costly side effect of cancer therapy. Calotropis procera is a plant plant constitutively produces abundant latex that is reported to possess anti-inflammatory, bacteriolytic, insecticidal, analgesic properties. The present work aimed to describe the effect of laticifer proteins of Calotropis procera (LP) in the expression of pro-inflammatory cytokines and inducible enzymes, such as, cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in the model of OM in Hamsters. OM was induced by two intraperitoneal (i.p.) administrations of 5-Fluorouracil (5-FU) on the 1st and 2nd days (60 and 40 mg/kg, respectively) in hamsters (n=5). LP (0,25; 1; 5 E 25 mg / kg) was injected i.p. 24h before and 24h after mechanical trauma of the cheek pouches. Control group received only saline. On the 10th day, the animals were sacrificed and tissues from the cheek pouches were harvested. Macroscopical and histopathological (inflammatory cell infiltration, edema, hemorrhage and the formation of ulcerations and abscess) analysis as well as immunohistochemistry for TNF-, IL-1β, iNOS and COX-2 was performed in the cheek pouch tissue. Kruskal Wallis/Dunn was used as statistical tests. P<0.05 was accepted. Ethics Committee 036/10. The LP significantly inhibited macroscopical and histopathological parameters when compared to control group with maximum effect in macroscopic scores reaching 75% and 66% of maximum effect at the histopathological evaluation. The MPO activity was also significantly inhibited by LP in 91% at the same dose (p<0,001) and also inhibited the lost weight of 5- FU induced-oral mucositis. The cheek pouches of hamsters submitted to OM showed marked immunostaining for TNF-, IL-1β, iNOS and COX-2 on inflamed conjunctive (Cj) and epithelial (Ep) tissue compared with the cheek pouches of the normal control group. LP caused considerable reduction in the immunostaining for TNF- (62%,Cj; 70%,Ep), IL-1β (87%,Cj; 80%,Ep), iNOS (82%Cj; 52%Ep) and COX-2 (70%,Cj; 100%,Ep) in the check pouches tissue when compared with the group of animals subjected to experimental mucositis that received saline instead of LP. These findings show anti-inflammatory effects of LP in 5-FU-induced OM. The protective effect could be supported by the reduction of the expression of pro-inflammatory cytokines, such as TNF- and IL-1β and the enzymes iNOS and COX-2. The protective mechanism appears to involve inhibition of the expression of iNOS, COX-2, TNF-, and IL- 1β.

ARAÚJO, Celina Viana De. Efeitos da alanil-glutamina na mucosite intestinal induzida pelo 5-fluorouracil em camundongos deficientes da apolipoproteína-E. 2014. 85 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T11:58:18Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvaraújo.pdf: 1984661 bytes, checksum: edb23df4351ef6d82b7fcf4b77c61ccb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T11:58:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvaraújo.pdf: 1984661 bytes, checksum: edb23df4351ef6d82b7fcf4b77c61ccb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-17T11:58:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_cvaraújo.pdf: 1984661 bytes, checksum: edb23df4351ef6d82b7fcf4b77c61ccb (MD5) Previous issue date: 2014 / A mucosite intestinal é uma reação inflamatória e/ou ulcerativa do revestimento gastrointestinal, podendo ocorrer pelo efeito citotóxico direto dos agentes de quimioterapia e radioterapia antineoplásicas. O 5-fluorouracil (5-FU) é um antineoplásico que está clinicamente indicado no tratamento de diversos tipos de câncer. A glutamina (Gln) é o aminoácido mais comumente encontrado no organismo, sendo benéfica na recuperação da mucosite oral e intestinal. A suplementação com derivados mais estáveis da Gln, tal como alanil-glutanina (Ala-Gln), representa um meio de fornecimento de Gln para o organismo. Um estudo recente do nosso grupo mostrou que animais deficientes da apolipoproteína E tinham agravamento da mucosite intestinal induzida pelo 5-FU. Este trabalho teve como objetivo investigar os efeitos da Ala-Gln no tratamento da mucosite intestinal induzida por 5-FU em camundongos C57BL6J APOE nocautes (ApoE-/-) e selvagens. Utilizamos camundongos com pesos entre 20-25 g, de ambos os sexos, sendo desafiados com injeção intraperitoneal de 5-FU (450 mg/kg), dose única, e controles receberam PBS. Os animais foram tratados com doses de Ala-Gln (100 mM) ou PBS por gavagem (0,5 mL) três dias antes da administração do 5-FU e durante cinco dias consecutivos, sendo sacrificados com solução de eutanásia no sexto dia. Amostras de íleo foram armazenadas em freezer (-80 ºC) para uso em protocolos de biologia molecular. Amostras também foram fixadas em formaldeído para processamento histológico. O peso corporal dos animais foi monitorado diariamente e o efeito citotóxico mielosupressor do 5-FU avaliado pela técnica de leucometria. Também foram considerados parâmetros morfométricos de altura de vilos e profundidade das criptas, índice mitótico e apoptótico, bem como os seus escores para necrose. O Western blot foi usado para a detecção da expressão de vilina e TNF-α intestinais; ELISA para o estudo de citocinas e PCR em tempo real (qPCR) para detecção e quantificação de IGF-1e Bcl-2 intestinais. Os animais selvagens e APOE nocautes, mesmo àqueles tratados com Ala-Gln, apresentaram perda de peso corporal quando desafiados com 5-FU, não havendo diferença entre os grupos. Porém, estes diferiram estatisticamente, apenas, quando comparados aos controles PBS (p<0,001). Verificamos uma leucopenia significativa nos animais selvagens e nocautes desafiados pelo 5-FU em comparação ao grupo PBS (p<0,001), não sendo este efeito revertido ou melhorado com a administração de Ala-Gln. Nas análises morfométricas do íleo, encontramos uma redução na altura de vilos (p<0,001), um aumento da profundidade das criptas (p<0,001 e p<0,01) e uma redução da razão vilo/cripta (p<0,0001) nos animais selvagens e nocautes desafiados pelo 5-FU em comparativo aos respectivos controles PBS. O tratamento com Ala-Gln melhorou a razão vilo/cripta (p<0,0001) e a profundidade das criptas (p<0,001 e p<0,0001) nos animais selvagens e nocautes em relação aos respectivos animais desafiados pelo 5-FU. A altura de vilos foi melhorada (p<0,01) apenas nos animais APOE nocautes tratados com Ala-Gln em relação aos respectivos animais desafiados pelo 5-FU. O desafio pelo 5-FU não aumentou o índice mitótico nas criptas dos animais selvagens e APOE nocautes em relação os controles PBS e os tratados com Ala-Gln. Houve um aumento de células em apoptose nos animais selvagens e nocautes desafiados pelo 5-FU e tratados com Ala-Gln (p<0,01 e p<0,05) em relação aos seus controles PBS. Houve um aumento significativo nos escores para criptas necróticas (p<0,028) em animais selvagens e APOE nocautes desafiados pelo 5-FU em relação aos respectivos controles não desafiados. Apenas os camundongos selvagens tratados com Ala-Gln tiveram uma redução significativa (p<0,04) nos seus escores em comparação com os animais não tratados injetados com 5-FU. Não houve diferença estatística nos níveis da citocina IL-1β detectadas por ELISA no íleo nos animais selvagens desafiados pelo 5-FU comparados aos controles PBS e Ala-Gln. Contudo, houve um aumento significativo nos níveis dessa citocina nos animais APOE nocautes desafiados pelo 5-FU e tratados com Ala-Gln. Não houve diferença na expressão de vilina e TNF-α no íleo nos grupos estudados. Transcritos de RNAm de IGF-1 e Bcl-2 no íleo foram encontrados diminuídos nos animais APOE nocautes em comparação aos animais selvagens. Nossos resultados sugerem que a deficiência de APOE tem um papel fundamental durante a mucosite intestinal induzida pelo 5-FU seguido pelo tratamento com Al.

Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-27T20:16:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gillene Batista Ferreira da Costa.pdf: 1571419 bytes, checksum: 9a32d696aec70ecf4657d46e65dcb369 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-07T22:06:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gillene Batista Ferreira da Costa.pdf: 1571419 bytes, checksum: 9a32d696aec70ecf4657d46e65dcb369 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-07T22:06:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Gillene Batista Ferreira da Costa.pdf: 1571419 bytes, checksum: 9a32d696aec70ecf4657d46e65dcb369 (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / CNPq / O 5-fluoruracila (5-FU) é um quimioterápico de uso já consolidado no tratamento de lesões potencialmente malignas de pele. No entanto, em cavidade oral, o uso de quimioterápicos de forma tópica para o tratamento de lesões potencialmente malignas ainda não é uma realidade. Um tratamento tópico evitaria o desconforto pós-operatório causado por procedimentos invasivos. Sendo assim, esse trabalho objetivou avaliar a efetividade do antineoplásico 5-fluoruracila em orabase em lesões potencialmente malignas do dorso da mucosa lingual de camundongos, através da expressão do marcador biológico Ki 67. Para isso, camundongos machos albinos Swiss (Mus musculus) foram submetidos ao carcinógeno 4-nitroquinolona-1-óxido (4NQO), 100 μg/mL, na água de beber por 8 semanas. Após o período de monitoramento de mais 08 semanas, ao desenvolverem o processo de carcinogênese em língua, foram tratados com 01 aplicação tópica diária de 5-FU em orabase, nas concentrações de 0,5% e 5%, por 3 semanas. Após eutanásia dos animais, as línguas foram removidas, analisadas em microscopia de luz e através de imuno-histoquímica para o marcador biológico Ki 67. Observou-se que os animais tratados com 5-FU 0,5% orabase apresentaram uma menor quantidade de células marcadas pelo Ki 67, com uma menor intensidade de coloração, indicando que houve uma menor proliferação celular nos animais tratados, confirmando que o 5-fluoruracil 0,5% em orabase poderá consistir em um recurso terapêutico eficaz no tratamento de lesões potencialmente malignas da cavidade oral. / 5-fluorouracil (5-FU) is a chemotherapy of already consolidated use in the treatment of potentially malignant skin lesions. However, in the oral cavity, the use of topical chemotherapy for the treatment of potentially malignant lesions is not yet a reality. A topical treatment would avoid the postoperative discomfort caused by invasive procedures. Thus, this work aimed to evaluate the effectiveness of 5-fluorouracil antineoplastic in orabase in potentially malignant lesions of the lingual mucosa of mice, through the expression of the biological marker Ki 67. For this, Swiss albino male mice (Mus musculus) were submitted to the carcinogen 4-nitroquinolone-1-oxide (4NQO), 100 μg / mL, in the drinking water for 8 weeks. After the monitoring period of another 8 weeks, when they developed the carcinogenesis process in language, they were daily treated with a daily topical application of 5-FU in orabase, at concentrations of 0.5% and 5%, for 3 weeks. After euthanasia of the animals, the languages were removed, analyzed by light microscopy and by immunohistochemistry for the Ki 67 biological marker. Animals treated with 5-FU 0.5% orabase showed a lower amount of cells labeled with Ki 67, with a lower staining intensity, indicating that there was less cell proliferation in treated animals, confirming that 5-fluorouracil 0,5% in orabase may be an effective therapeutic resource in the treatment of potentially malignant lesions of the cavity oral.

LUCETTI, Larisse Tavares. Efeito da pentoxifilina e da dexametasona na resposta inflamatória e nas alterações da motilidade digestiva associadas à mucosite intestinal induzida por 5-fluorouracil em ratos. 2009. 75 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-13T13:04:43Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_ltlucetti.pdf: 2602818 bytes, checksum: 9713e09aba4a4edd5e296341d4c44b74 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-13T16:15:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_ltlucetti.pdf: 2602818 bytes, checksum: 9713e09aba4a4edd5e296341d4c44b74 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-13T16:15:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_ltlucetti.pdf: 2602818 bytes, checksum: 9713e09aba4a4edd5e296341d4c44b74 (MD5) Previous issue date: 2009 / One of the most important limitation of antineoplasic chemotherapy is the intestinal mucositis. Mucositis is a clinical term wich describes a syndrome characterized for ulceration in the digestive tract. Gastrointestinal tract is vulnerable because it have elevated proliferation cellular renovation. Intestinal mucositis results in inflammatory events, that leads the alterations in permeability and gastrointestinal motility in the inflammatory phase, as in the post-inflammatory phase. Pentoxifylline (PTX) is important inhibitor of the cytokines synthesis, with a protective effect against 5-FU- induced oral mucositis in hamster. Dexamethasone (DEXA) is glucorticoide with anti-inflammatory and immunosuppressive effects. Aim: To evaluate the effect of the pentoxifylline or dexamethasone treatments in the inflammatory response and alterations of the gastrointestinal motility associate with 5-FU- induced intestinal mucositis. Methods: Male Wistar rats (200 – 250g) treated in d0 by 5-FU (150 mg/Kg, i.p. only dose) or 5-FU + PTX (90 mg/Kg, s.c.) or 5-FU + DEXA (2.5mg/Kg, i.p.). PTX or DEXA were administrated 30’ after 5-FU, and then daily. In d3, animals were sacrificed, samples duodenum, jejunum and ileum were removed for assessment epithelial damage for morphometric, histological scores, MPO activity and GSH concentration. In order to evaluate the concentration of TNF- and IL-1, duodenum samples were removed and ELISA or imunohistoquimic for this cytocines were performed. In order to evaluated the gastrointestinal motility, animals received same treatment described previously, then were fasted for 18h of the d2 to d3. In d3 the animals were gavage-fed with a test meal and sacrificed 20 min later. Stomach and consecutive intestinal segments same (proximal, medial and distal) were obtained. Each segment was placed in a measuring cylinder and the volume measured by adding 100 mL of 0.1 NaOH. The absorbance of the sample was read at a 540 nm. Results: The treatment with 5-FU induced intestinal damage with an important disruption of the functional epithelial barrier and presence of these following alterations: shortening villus, partial necrosis crypts, vacuolated cells, presence of infiltrated mono and polymorphonuclears, production of free radicals with GSH consumption, increase in the concentration of TNF- and IL-1 in the duodenum, and gastrointestinal dismotility. The treatment with DEXA and PTX significantly reduced the intestinal damage, with recovery of the high villus, depth of crypt, reduction of the neutrophil infiltration, increase of the levels of glutathione and reduction in the TNF- and IL-1 concentrations. However, only the treatment with DEXA was able to reverse the delays gastric emptying and gastrointestinal transit induced by intestinal mucositis. Conclusion: 5-FU induces intestinal mucositis in rats with the participation of TNF- and IL-1. It associates with delayed gastric emptying and gastrointestinal transit. We conclude also that PTX or DEXA- treatments decreases the inflammatory response. On the other hand, only DEXA treatment reversed gastrointestinal dismotility associate with 5– FU- induced intestinal mucositis in rats. / A mucosite induzida por antineoplásicos é um fator limitante na terapia anticâncer. Mucosite é um termo clínico que descreve uma síndrome caracterizada por ulceração da mucosa de todo o trato digestivo. O trato gastrintestinal é vulnerável por causa da alta proliferação e freqüência de renovação celular. Assim, a mucosite intestinal resulta de eventos inflamatórios, que levam as alterações de permeabilidade e trânsito intestinal e de alterações na motilidade intestinal tanto na fase inflamatória, como na fase pós-inflamatória. Pentoxifilina (PTX) é um importante inibidor da síntese de citocinas, além de apresentar efeito protetor sobre a mucosite oral por 5-FU em hamster. A dexametasona (DEXA) é um glicocorticóide cujo principal efeito farmacológico decorre de sua ação antiinflamatória e imunossupressora. Objetivos: Avaliar o efeito do tratamento com pentoxifilina ou dexametasona na resposta inflamatória e nas alterações da motilidade digestiva associadas a mucosite intestinal experimental induzida por 5-FU. Métodos: Ratos Wistar machos (200 – 250g) foram tratados no d0 com 5-FU (150 mg/Kg, i.p. dose única) ou com 5-FU + PTX (90mg/Kg, s.c.) ou 5-FU + DEXA (2,5mg/Kg, i.p.). A PTX e a DEXA foram administradas meia hora após a administração de 5-FU no d0 e diariamente até o sacrifício. No d3 os animais foram sacrificados, amostras do duodeno, jejuno e íleo, foram removidas para avaliar a injúria epitelial por morfometria, escores histológicos, pela atividade de MPO e pela concentração de GSH. Para avaliação de citocinas amostras de duodeno foram retiradas e pelo método de ELISA foi determinada a concentração de TNF- e IL-1 e pela imunohistoquímica foi observado a imunomarcação. Já na técnica de esvaziamento gástrico os animais receberam o mesmo tratamento descrito anteriormente. Posteriormente, foram deixados em jejum de 18 horas do d2 para o d3. No d3, foram administrados 1,5 ml da solução glicosada (5%) contendo vermelho de fenol (VF) a 0,75 mg/ml em cada animal. Após 20 min, os animais foram sacrificados e submetidos a uma laparotomia mediana. O intestino delgado foi exposto e divido em 3 partes iguais: proximal, medial e distal. Com o auxílio de uma proveta contendo uma solução de NaOH (100ml, 0,1N) o volume do estômago e dos segmentos do intestino delgado foram determinados. A absorbância da amostra foi lida sob um comprimento de onda de 540 nm. Resultados: O tratamento com 5-FU foi capaz de induzir uma lesão intestinal com um importante comprometimento da barreira epitelial funcional com a presença das seguintes alterações: encurtamento acentuado das vilosidades intestinais, necrose parcial de criptas, vacuolização de células, presença de infiltrado mono e polimorfonucleares, produção de radicais livres com consumo de GSH, aumento na concentração de TNF- e IL-1 com maior imunomarcação (no duodeno) e alterações na motilidade digestiva. O tratamento com DEXA e PTX reduziu significativamente as lesões intestinais, com recuperação da altura dos vilos, recuperação da profundidade das criptas, diminuição do infiltrado neutrofílico, aumento dos níveis de glutationa e redução da concentração de TNF-, IL-1 com uma menor imunomarcação. Contudo somente o tratamento com DEXA foi capaz de reverter o retarde do esvaziamento gástrico e do transito gastrintestinal. Conclusão: 5-FU induz mucosite intestinal em ratos com a participação de TNF- e IL-1, a qual se associa com retarde no esvaziamento gástrico e no transito gastrintestinal. O tratamento com PTX ou DEXA foram capaz de reverter parte dos achados inflamatórios, entretanto, somente o tratamento com DEXA foi capaz de reverter parcialmente às alterações na motilidade digestiva associadas a mucosite por 5- FU em ratos.

O carcinoma colorretal (CCR) está entre os três tipos mais frequentes e mortíferos de câncer do mundo. O tratamento de primeira escolha depende do estágio tumoral, sendo que o regime quimioterápico mais utilizado é o FOLFOX (5-fluoruracila + oxaliplatina + leucovorina). Apesar do amplo uso, o mecanismo de ação deste protocolo, especialmente considerando o período entre ciclos de tratamento, bem como os mecanismos envolvidos na frequente resistência de células de CCR ao tratamento são pouco conhecidos. Aqui nós avaliamos a resposta de células de CCR expostas ao tratamento com 5-fluoruracila (5FU) e oxaliplatina (OXA) em perfil semelhante ao tratamento clínico, nas linhagens de CCR humano HCT116 e HT29, em prol de entender os mecanismos de ação e de resistência ao tratamento. Para isso, as células foram tratadas com os quimioterápicos de maneira isolada ou combinados por 2 dias, seguido do replaqueamento em meio livre de droga por 15 dias, mimetizando o regime de tratamento clínico. Foram realizadas análises da proliferação celular e ciclo celular, além de análises dos mecanismos celulares que vêm sendo mostrados como envolvidos na sensibilidade e resistência de células tumorais a compostos citotóxicos, tais como apoptose, senescência e autofagia. Não houve efeito aditivo citotóxico para a combinação de 5FU e OXA a curto prazo (48h), porém, a longo prazo houve um efeito aditivo importante para o co-tratamento quando comparado aos tratamentos isolados. Este efeito aditivo foi mediado pela indução de apoptose (principalmente pela 5FU) e senescência (principalmente pela OXA). Apesar deste efeito, as células de todos os tratamentos retomaram o crescimento bem como mantiveram capacidade clonogênica a partir do dia 7 após o tratamento. Quando nós avaliamos a autofagia nas células sobreviventes ao tratamento, encontramos um aumento transitório, com pico entre os dias 3 e 7, sendo que um perfil semelhante foi observado para o aumento de ROS, com pico entre os dias 5 e 7. A inibição racional da autofagia no período de ativação máxima do mecanismo reduziu de maneira intensa o número de células e a clonogenicidade das células sobreviventes. Dessa forma, a inibição da autofagia em combinação com 5FU e OXA pode potencializar o efeito do tratamento e reduzir a resistência das células de CCR ao tratamento. / Colorectal carcinoma (CRC) is among the three most frequent and deadly types of cancer in the world. The first-choice treatment depends on the tumor stage, and the most commonly used chemotherapy regimen is FOLFOX (5-fluorouracil + oxaliplatin + leucovorin). Despite the wide use, the mechanism of action of this protocol, mainly considering the interval between two cycles of chemotherapy, as well as the mechanisms involved in the frequent resistance of CRC cells to treatment are poorly understood. In this project, we evaluated the response of HCT116 and HT29 human CRC cells exposed to 5-fluoruracil (5FU) and oxaliplatin (OXA) in a profile similar to clinical treatment. Cells were treated with the chemotherapeutics alone or in combination for 2 days, followed by the replating in drug-free medium for 15 days, mimicking the clinical treatment regimen. Analysis of cell proliferation and cell cycle were performed, as well as the analysis of the cellular mechanisms that have been shown as being involved in the sensitivity and resistance of tumor cells to cytotoxic compounds, such asapoptosis, senescence and autophagy. There was no cytotoxic additive effect for the combination of 5FU and OXA in the short-time (48h), but in the long term it was observed an important additive effect for co-treatment when compared to the isolated treatments. This additive effect was mediated by the induction of apoptosis (mainly by 5FU) and senescence (mainly by OXA). Despite this effect, cells from all treatments resumed growth as well as maintained the clonogenic capacity from day 7 after treatment. When we evaluated autophagy in treatment-surviving cells, we found a transient increase, with a peak between days 4 and 6; a similar transient increase was observed for reactive species, peaking between days 6 and 8. The rational inhibition of autophagy in the period of maximal activation of the mechanism greatly reduced the number of cells and the clonogenicity of the surviving cells. Thus, the rational inhibition of autophagy in combination with 5FU and OXA may potentiate the effect of the treatment and reduce the resistance of CRC cells to the treatment.

COSTA, D. V. S. C. Papel da via S100β/RAGE/NFκB na patogênese da mucosite intestinal experimental por 5-fluorouracil: regulação de células gliais e de neurônios entéricos. 2016. 155 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-08T13:56:23Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_dvscosta.pdf: 7653770 bytes, checksum: 657b91914f13efe21ff21ef656775a6b (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-06-08T13:56:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_dvscosta.pdf: 7653770 bytes, checksum: 657b91914f13efe21ff21ef656775a6b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-08T13:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_dvscosta.pdf: 7653770 bytes, checksum: 657b91914f13efe21ff21ef656775a6b (MD5) Previous issue date: 2016-01-29 / 5-Fluorouracil (5-FU) promotes intestinal mucositis and motility alterations. The mucositis affect about 40% of patients receiving 5-FU and there are reports of patients presenting mucositis after the first dose. Under other inflammatory conditions, the S100β protein is involved in the RAGE activation with subsequent NFκB translocation to the nucleus and transcription of TNF-α and iNOS. The enteric glial cells through several mediators, such as S100β, interact with the intestinal epithelial cells and enteric neurons. Therefore, the aim of this study was investigate the effect of 5-FU in the enteric glial cells and neurons, as well as study the role of the via S100β/RAGE/NFκB in the pathogenesis of the experimental intestinal mucositis. Swiss male mice received saline (control, 0.9%, i.p.) or 5-FU (450 mg/Kg, i.p., single dose). After 24h, mice were treated with pentamidine, a S100β inhibitor (P0.8 mg/Kg +5FU; P4 mg/Kg +5FU; or only P4mg/Kg, i.p.) during two days and euthanized on the fouth day of the experimental protocol. The segments of the small intestine and colon were collected to analyze the following parameters: weight loss; histological alterations; expression of enteric glial cells (GFAP e S100β) and neuronal (HuC/D) marker using immunohistochemistry; expression of iNOS and co-localization of GFAP and Iba-1, and HuC/D and RAGE or NFκB NLS using immunofluorescence; protein expression of S100β, NFκB p65, iNOS and RAGE by Western Blotting; genic expression of GFAP, S100β and iNOS using qPCR; The levels of nitrite/nitrate, GSH, MDA, TNF-α and IL6 by ELISA. The 5-FU promoted reduction of intestinal villus, loss of crypts integrity, intense inflammatory cell infiltrate and hypertrophy of the myenteric plexus, as well as increased the GFAP and S100β immunostaining and diminished the HuC/D immunostaining. 5-FU was also able to elevate RAGE and NFκB NLS immunostaining in the enteric neurons and Iba-1 in the intestine, as well as, augmented the protein expression of S100β, RAGE, NFκB p65 and iNOS, and the genic expression of S100β, GFAP and iNOS. Furthermore, it enhanced the MDA, nitrite/nitrate and proinflammatory cytokines (TNF-α e IL-6) levels in the small intestine and colon. The S100β inhibition was able to revert these changes promoted by 5-FU. We provide evidence that 5-FU promote reactive gliosis, leading reduction of the enteric neurons via S100β/RAGE/NFκB. Together, these results suggest that S100β is a mediator important involved in the pathogenesis of the 5-FU-induced intestinal mucositis. / O 5-Fluorouracil (5-FU) promove mucosite intestinal e alterações da motilidade. A mucosite atinge cerca de 40% dos pacientes em tratamento com 5-FU e há relatos de pacientes que a apresentam na primeira dose administrada. Em outras condições inflamatórias, a proteína S100β está envolvida na ativação de RAGE com consequente translocação de NFκB para o núcleo e transcrição de TNF-α e de iNOS. As células gliais entéricas por meio de S100β, interagem com as células epiteliais intestinais e com os neurônios entéricos. Nesse contexto, o objetivo deste estudo é investigar o efeito do 5-FU nas células gliais e nos neurônios entéricos, bem como estudar o papel da via S100β/RAGE/NFκB na patogênese da mucosite intestinal induzida por esse quimioterápico. Os camundongos Swiss machos receberam salina (0,9%, i.p.) ou 5-FU (450 mg/Kg, i.p. dose única). Após 24h da administração do quimioterápico, administrou-se pentamidina, inibidor de S100β (P0,8 mg/Kg +5FU; P4 mg/Kg +5FU; ou somente P4mg/Kg, i.p.) durante dois dias e os animais foram eutanasiados no quarto dia do protocolo experimental. Os segmentos do intestino delgado e do cólon foram coletados para a análise dos seguintes parâmetros: perda ponderal; alterações histológicas; expressão de marcador de células gliais (GFAP e S100β) e neuronal (HuC/D) por imunohistoquímica; imunofluorescência para iNOS e dupla marcação para GFAP e Iba-1, e para HuC/D e RAGE ou NFκB NLS; expressão proteica de S100β, NFκB p65, iNOS e RAGE por Western Blotting; expressão gênica de GFAP, S100β e iNOS por qPCR; e dosagem dos níveis de nitrito/nitrato, GSH, MDA, TNF-α e IL6. O 5-FU promoveu redução das vilosidades intestinais, perda da integridade das criptas, intenso infiltrado de células inflamatórias e hipertrofia do plexo mioentérico, bem como aumento da área imunomarcada para GFAP e S100β e redução de HuC/D. Esse quimioterápico também foi capaz de elevar a imunomarcação para RAGE e NFκB NLS nos neurônios entéricos e aumentou a imunomarcação para Iba-1, assim como elevou a expressão proteica de S100β, RAGE, NFκB p65 e iNOS, e a expressão gênica de S100β, GFAP e iNOS. Além disso, aumentou os níveis de MDA, de nitrito/nitrato e de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-6) no intestino delgado e no cólon. Ao passo que a inibição de S100β foi capaz de reverter essas alterações promovidas por 5-FU. Conclui-se que 5-FU promove gliose reativa, resultando em redução dos neurônios entéricos pela ativação da via S100β/RAGE/NFκB. Adicionalmente, S100β demonstrou ser um importante mediador envolvido na patogênese da mucosite intestinal.