Determinou-se a toxicidade de dezoito formulações de agrotóxicos utilizados no controle de Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) biótipo B na cultura do tomate, sobre os fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana (ESALQ 447) Metarhizium anisopliae (ESALQ E9). Para isso, avaliou-se o crescimento vegetativo, esporulação e germinação dos patógenos submetidos a ação das formulações, sugerindo-se uma alteração na expressão matemática para classificação da toxicidade de agrotóxicos. Subdoses (de 5,0 a 1,25 mL/ L) do produto Oberon 240 SC (spiromesifen) foram testadas sobre ninfas de 3º ínstar de B. tabaci. As mortalidades obtidas nos tratamentos variaram de 35,3 a 79,9%. A ação de B. bassiana e M. anisopliae e sua associação com o Oberon 240 SC foi testada sobre larvas do predador de B. tabaci, Delphastus sp. (Coleptera: Coccinellidae), não sendo observado efeito dos produtos sobre os insetos pulverizados. Os melhores tratamentos para o controle de B. tabaci em tomateiros foram obtidos pelo tratamento com 2,5 mL/ L de Oberon 240 SC e sua associação com 20 g/ L de B. bassiana. / The toxicity of eighteen insecticides used to control Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) biotipe B in tomato, was evaluated on the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana (ESALQ 447) and Metarhizium anisopliae (ESALQ E9). It was evaluated the effect of pesticides on the pathogen growth, sporulation and germination. Bases on our findings we suggested a new mathematical expression for classification of the toxicity of pesticides. Sublethal doses (5.0 to 1.25 mL/ L) of Oberon 240 SC were tested on the third nymph instar of B. tabaci, and mortalities varied from 35.3 to 79.9%. Use of Oberon 240 SC combines with B. bassiana and M. anisopliae did not effect Delphastus sp (Coleoptera: Coccinellidae), a predator of B. tabaci larvae. The best treatments for control of B. tabaci in tomato were obtained by spray of 2.5 mL/ L of Oberon 240 SC with 20 g/ L of B. bassiana.

Genes de plantas que codificam inibidores de enzimas digestivas de insetos têm sido introduzidos em plantas cultivadas visando o controle de pragas. Os inibidores de proteinases estão presentes nos tecidos vegetais, principalmente nas sementes, e atuam em resposta a ataques por herbívoros e patógenos. Inibidores de serino-proteinases (IPs) dos tipos Bowman-Birk e Kunitz isolados de sementes de soja foram inseridos em variedades de cana-de-açúcar para aumentar a resistência à broca Diatraea saccharalis (Fabr.), principal praga desta cultura. Para utilização de plantas geneticamente modificadas contendo inibidores de proteinases é necessário um conhecimento profundo de sua sustentabilidade e segurança ambiental, determinando a estabilidade da característica inserida e os seus efeitos nos organismos não-alvo. O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos diretos e indiretos de inibidores de proteinases de soja em organismos não-alvos: um parasitóide larval, Cotesia flavipes (Cam.) (Hymenoptera: Braconidae); um patógeno, Metarhizium anisopliae (Mestch.) Sorokin (Deuteromycotina: Hyphomycetes); um polinizador, Apis mellifera L. (Hymenoptera: Apidae) e um decompositor, Scheloribates praeincisus (Berlese) (Acari: Oribatida: Scheloribatidae); associados à cultura da cana-de-açúcar. O consumo de Kunitz e BBI não afetou a sobrevivência de S. praeincisus. Por outro lado, a ingestão dos inibidores semi-purificados e purificados do tipo Kunitz diminuiu a duração das fases imaturas de S. praeincisus. A ingestão de folhas de cana GM expressando inibidores de proteinases (Kunitz e BBI) não afetou o tempo de desenvolvimento e a sobrevivência dos imaturos deste oribatídeo quando comparada à ingestão de suas isolinhas. Os inibidores de proteinases semi-purificados e purificados não afetaram a duração dos períodos larval e pupal, o peso e número de pupas e percentual de emergência do parasitóide C. flavipes em D. saccharalis. Por outro lado, a proporção de fêmeas em relação a machos de C. flavipes foi maior no tratamento onde as lagartas foram alimentadas com dieta contendo 0,5% de inibidores semi-purificados comparado-se à testemunha. A proporção fêmea:macho foi significativamente maior também quando os parasitóides foram alimentados com o inibidor do tipo Kunitz em relação ao controle e aos parasitóides alimentados com BBI. A adição de 0,5% (p/v) de inibidores de proteinases semi-purificados e 0,05% (p/v) de inibidores purificados do tipo Kunitz nos meios de cultura MC e BDA resultaram em maiores crescimento vegetativo e produção de conídios de M. anisopliae. Os inibidores purificados do tipo BBI não alteraram a esporulação do fungo. Os resultados dos estudos com A. mellifera não foram conclusivos e novas investigações precisam ser conduzidas para esclarecer os potenciais efeitos de inibidores de proteinases em abelhas. De uma forma geral, observou-se que os inibidores de proteinases (Kunitz e BBI) não afetaram negativamente os organismos não-alvo testados. Por outro lado, a ingestão de inibidor do tipo Kunitz alterou positivamente alguns parâmetros biológicos de C. flavipes, M. anisopliae e S. praeincisus. / Genes of plants expressing insect proteinase inhibitors have been introduced into plants for pest control. Proteases inhibitors are present in plant tissues, mainly in seeds, and act in response to predators and pathogens. The Bowman-Birk type and Kunitz type of serine proteases inhibitors (PI) from soybean seeds are been used to increase resistance of sugarcane to Diatraea saccharalis (Fabr.), the most important pest of this crop. The sustainability and environmental safety of PI crops is still unknown. For these reasons, it is necessary to understand the stability and the non-target effects of this new trait. The objective of this study was to evaluate the direct and indirect effects of soybean PI on the following non-target organisms associated to sugarcane: the larval parasitoid, Cotesia flavipes (Cam.) (Hymenoptera: Braconidae); the entomopathogen, Metarhizium anisopliae (Mestch.) Sorokin (Deuteromycotina: Hyphomycetes); the pollinator Apis mellifera L. (Hymenoptera: Apidae) and the soil mite involved in the process of recycling organic matter, Scheloribates praeincisus (Berlese) (Acari: Oribatida: Scheloribatidae). Kunitz and BBI did not affect S. praeincisus survival. On the other hand, Kunitz semi-purified and purified inhibitor ingestion reduced duration of the immature stages of S. praeincisus. Ingestion of GM senescent leaves did not have an effect on mite immatures development time and survival compared to ingestion of its isolines leaves. The semi-purified and purified proteinases inhibitors did not alter either the duration of larval and pupal stages of C. flavipes on D. saccharalis, or weight and number of pupae and parasitoid emergence. In other hand, the parasitism and proportion of female was higher on the treatment where caterpillars were fed with diet containing 0.5% of semi-purified inhibitors, comparing to control. The ratio female:male was significantly higher also when parasitoids were fed to the Kunitz type inhibitor compared to the control and BBI. The addition of 0.5 % (w/v) of semi- purified proteinase inhibitors and 0.05% (w/v) of Kunitz type purified inhibitors on two culture media (CM and PDA), resulted in increase of vegetative growth and production of conidia. BBI type purified inhibitors did not change the fungus sporulation. The results from the studies with A. mellifera were not conclusive and investigations are needed to clarify the potential impact of proteinase inhibitors on A. mellifera. Overall, proteinase inhibitors (Kunitz and BBI) did not negatively affect the non-target organisms tested. Conversely, ingestion of the Kunitz type of proteinase inhibitors altered positively some biological parameters of C. flavipes, M. anisopliae and S. praeincisus.

O objetivo da pesquisa foi selecionar isolados de Metarhizium anisopliae patogênicos para cigarrinha-da-raiz, Mahanarva fimbriolata, e caracterizá-los morfológica e geneticamente, por meio de técnicas de análise de DNA (RAPD). A seleção foi feita em laboratório, utilizando ninfas coletadas a campo que foram pulverizadas com o fungo e mantidas nas raízes de mudas de cana-de-açúcar. A mortalidade corrigida, ao quinto dia após a inoculação, variou de 10,5 a 60%. Verificou-se que todos os isolados apresentaram coloração das colônias variando de verde acinzentado ao verde escuro, com crescimento de 28mm para o isolado IBCB-353 à 38mm para o isolado IBCB-348. O comprimento dos conídios não teve influência na patogenicidade e variou de 5,465µm para o isolado IBCB-345 a 7,970µm para o isolado ESALQ 1301 sendo que todos pertencem à subespécie anisopliae. Constatou-se a presença de RNA de fita dupla em onze dos vinte isolados, mas não houve relação entre a presença desta banda e sua patogenicidade para M. fimbriolata. Foi possível separar os isolados em dois grupos (A e B) com 72,5% de similaridade, sendo observada a composição de dois subgrupos (B1 e B2), com 77,5% de similaridade, dentro do grupo B. A alta similaridade entre os dois grupos e dentro de cada um deles, indicou que os isolados pertencem à mesma subespécie, reforçando o que foi concluído com a caracterização morfológica. O método utilizado confirma a grande diversidade genética da espécie M. anisopliae, porém, não reflete sua similaridade de patogenicidade a ninfas de M. fimbriolata, pois os dois isolados mais patogênicos (IBCB-384 e ICBC-348) foram dispostos em grupos diferentes. Não se observou um padrão específico de agrupamento entre isolados oriundos da mesma região ou hospedeiro, ou seja, a diversidade genética parece ser independente do local de origem do fungo, como seria esperado com um patógeno que, em geral, tem revelado alto grau de especialização ao hospedeiro. / This research was carried out to evaluate the pathogenicity of isolates of the entomopatogenic fungus Metarhizium anisopliae against the spittlebug, Mahanarva fimbriolata, and to characterize them morphologically and genetically through RAPD method. The selection was made under laboratory condition, using nymphs collected at field. The fungus was sprayed on the nymphs by a Potter tower (15 pounds/pol2) and then, they were maintained in roots of sugar-cane seedlings. The mortality was evaluated 5 days after the inoculation, ranging from 10.5 to 60%. The colonies’ color varied from grayish green to dark green and the colonies diameter ranged from 28mm (isolate IBCB-353) to 38mm (isolate IBCB-348). The conidia length ranged from 5.465µm for the isolate IBCB-345 to 7.970µm for the isolate ESALQ 1301. With those results it could be concluded that all the studied strains belong to the subspecies anisopliae. The size did not have influence in the pathogenicity of the isolate. It was evidenced presence of double-stranded RNA (virus) in eleven out of the twenty isolates tested, but it did not have relation between the presence of the virus and its pathogenicity for M. fimbriolata. It was possible to separate isolates in two groups (A and B) with 72.5% of similarity, being observed the composition of two sub-groups (B1 and B2), with 77.5% of similarity, inside of group B. The high similarity between the two groups and inside of each one indicated that the isolates belong to the same subspecies, confirming what it was concluded with the morphologic characterization. The used method confirms the great genetic diversity of species M. anisopliae, however, does not reflect its similarity of pathogenicity the nymphs of M. fimbriolata, therefore the two isolated most pathogenic (IBCB-384 and ICBC-348) were located in different fenetic groups. In the present study a specific standard of grouping between isolated deriving of the same region or host was not observed, or either, the genetic diversity seems to be independent on the fungus origin, as it would be expected from a pathogen that, in general, shows high degree of specialization to the host.

O ácaro Tetranychus evansi Baker e Pritchard é conhecido em diversos países atacando plantas da família Solanaceae. Este ácaro tem chamado a atenção de pesquisadores, por atingir a condição de praga do tomateiro (Lycopersicon esculentum Mill.) na África e por sua recente dispersão a diversos países na região Mediterrânea e na Ásia. Considera-se a América do Sul como a possível região de origem deste ácaro. No contexto de um projeto de controle biológico clássico, buscas de inimigos de T. evansi têm sido realizadas na América do Sul, para sua introdução na África. O presente trabalho relata os resultados de buscas conduzidas no Peru e no norte da Argentina em lugares climaticamente semelhantes a regiões africanas onde T. evansi ocorre. As coletas foram realizadas em 10 Departamentos no Peru e em 6 Províncias da Argentina. Dos ácaros encontrados neste estudo, Phytoseiidae e Tetranychidae foram os mais diversos em ambos os países. T. evansi não foi encontrado no Peru, mas foi o tetraniquídeo mais frequentemente encontrado na Argentina. No Peru Tetranychus desertorum Banks foi o tetraniquídeo mais freqüente Os fitoseídeos mais frequentemente encontrados nos campos amostrados foram Euseius emanus (El-Banhawy), Neoseiulus californicus (McGregor) e Typhlodromus (Anthoseius) evectus (Schuster) no Peru e Euseius concordis (Chant) na Argentina. O fungo patogênico Neozygites floridana Weiser e Muma, Entomophthrales, foi o inimigo natural mais encontrado em associação com T. evansi na Argentina. Este fungo parece ser um agente de controle promissor daquela praga, tendo sido encontrado causando epizootias em um campo de tomateiro e outro de berinjela durante este estudo. Foram escassos os ácaros predadores associados a T. evansi na Argentina; N. californicus, Neoseiulus idaeus Denmark e Muma e Phytoseiulus macropilis (Banks) foram as espécies encontradas ocasionalmente associadas a T. evansi. Phytoseiulus longipes Evans, considerado um agente promissor de controle de T. evansi previamente detectado por outros autores no sul do Brasil, não foi encontrado na Argentina nem no Peru no presente estudo. Estudos complementares dos inimigos naturais encontrados neste estudo em associação com T. evansi devem ser conduzidos. / The mite Tetranychus evansi Baker & Pritchard (Tetranychidae) in known from several countries attacking plants of the family Solanaceae. It has been calling the attention of researchers for its pest status on tomatoes (Lycopersicon esculentum Mill.) in Africa and for its recent dispersal to countries in the Mediterranean region and in Asia. South America has been considered the possible region of origin of this mite. In the context of a classical biological control project, searches for efficient natural enemies of T. evansi have been conducted in South America, for introduction in Africa. The present work reports results of searches conducted in Peru and northern Argentina, in places climatically similarities to regions in Africa where T. evansi is found. The searches were conducted in 10 Departments in Peru and in 6 Provinces in Argentina. Of the mites found in those surveys, Phytoseiidae and Tetranychidae were the most diverse in both countries. T. evansi was not found in Peru, but it was the tetranychid most frequently found in Argentina. In the former country, Tetranychus desertorum Banks was the most frequent tetranychid. The phytoseiids most frequently found were Euseius emanus (El-Banhawy), Neoseiulus californicus (McGregor) e Typhlodromus (Anthoseius) evectus (Schuster) in Peru and Euseius concordis (Chant) in Argentina. The pathogenic fungus Neozygites floridana Weiser and Muma, Entomophthorales, was the natural enemy most commonly found in association with T. evansi in Argentina. This fungus seems a promising control agent of T. evansi; it was found causing epizooties in a tomato and in an egg plant (Solanum melongena L.) plantation during this study. Predaceous mites were rarely found associated with T. evansi in Argentina; N. californicus, Neoseiulus idaeus Denmark & Muma and Phytoseiulus macropilis (Banks) were the phtoseiids occasionally found in association with it. Phytoseilus longipes Evans, considered a promising control agent of T. evansi, found previously by other authors in southern Brazil, was neither found in Argentina nor Peru. Complementary studies on the performance of the natural enemies found in this study in association with T. evansi are warranted.

O objetivo da pesquisa foi selecionar isolados de Metarhizium anisopliae patogênicos para cigarrinha-da-raiz, Mahanarva fimbriolata, e caracterizá-los morfológica e geneticamente, por meio de técnicas de análise de DNA (RAPD). A seleção foi feita em laboratório, utilizando ninfas coletadas a campo que foram pulverizadas com o fungo e mantidas nas raízes de mudas de cana-de-açúcar. A mortalidade corrigida, ao quinto dia após a inoculação, variou de 10,5 a 60%. Verificou-se que todos os isolados apresentaram coloração das colônias variando de verde acinzentado ao verde escuro, com crescimento de 28mm para o isolado IBCB-353 à 38mm para o isolado IBCB-348. O comprimento dos conídios não teve influência na patogenicidade e variou de 5,465µm para o isolado IBCB-345 a 7,970µm para o isolado ESALQ 1301 sendo que todos pertencem à subespécie anisopliae. Constatou-se a presença de RNA de fita dupla em onze dos vinte isolados, mas não houve relação entre a presença desta banda e sua patogenicidade para M. fimbriolata. Foi possível separar os isolados em dois grupos (A e B) com 72,5% de similaridade, sendo observada a composição de dois subgrupos (B1 e B2), com 77,5% de similaridade, dentro do grupo B. A alta similaridade entre os dois grupos e dentro de cada um deles, indicou que os isolados pertencem à mesma subespécie, reforçando o que foi concluído com a caracterização morfológica. O método utilizado confirma a grande diversidade genética da espécie M. anisopliae, porém, não reflete sua similaridade de patogenicidade a ninfas de M. fimbriolata, pois os dois isolados mais patogênicos (IBCB-384 e ICBC-348) foram dispostos em grupos diferentes. Não se observou um padrão específico de agrupamento entre isolados oriundos da mesma região ou hospedeiro, ou seja, a diversidade genética parece ser independente do local de origem do fungo, como seria esperado com um patógeno que, em geral, tem revelado alto grau de especialização ao hospedeiro. / This research was carried out to evaluate the pathogenicity of isolates of the entomopatogenic fungus Metarhizium anisopliae against the spittlebug, Mahanarva fimbriolata, and to characterize them morphologically and genetically through RAPD method. The selection was made under laboratory condition, using nymphs collected at field. The fungus was sprayed on the nymphs by a Potter tower (15 pounds/pol2) and then, they were maintained in roots of sugar-cane seedlings. The mortality was evaluated 5 days after the inoculation, ranging from 10.5 to 60%. The colonies’ color varied from grayish green to dark green and the colonies diameter ranged from 28mm (isolate IBCB-353) to 38mm (isolate IBCB-348). The conidia length ranged from 5.465µm for the isolate IBCB-345 to 7.970µm for the isolate ESALQ 1301. With those results it could be concluded that all the studied strains belong to the subspecies anisopliae. The size did not have influence in the pathogenicity of the isolate. It was evidenced presence of double-stranded RNA (virus) in eleven out of the twenty isolates tested, but it did not have relation between the presence of the virus and its pathogenicity for M. fimbriolata. It was possible to separate isolates in two groups (A and B) with 72.5% of similarity, being observed the composition of two sub-groups (B1 and B2), with 77.5% of similarity, inside of group B. The high similarity between the two groups and inside of each one indicated that the isolates belong to the same subspecies, confirming what it was concluded with the morphologic characterization. The used method confirms the great genetic diversity of species M. anisopliae, however, does not reflect its similarity of pathogenicity the nymphs of M. fimbriolata, therefore the two isolated most pathogenic (IBCB-384 and ICBC-348) were located in different fenetic groups. In the present study a specific standard of grouping between isolated deriving of the same region or host was not observed, or either, the genetic diversity seems to be independent on the fungus origin, as it would be expected from a pathogen that, in general, shows high degree of specialization to the host.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-28T13:09:10Z No. of bitstreams: 1 Marco Aurelio Paes de Oliveira.pdf: 649606 bytes, checksum: 1014053255cef5243152ce143dc1a9b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T13:09:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marco Aurelio Paes de Oliveira.pdf: 649606 bytes, checksum: 1014053255cef5243152ce143dc1a9b7 (MD5) Previous issue date: 2006-07-04 / The sugarcane borer Diatraea saccharalis F. is considered one of the main pests in America, being responsible for direct and indirect damages to this culture. The use of entomophatogenic fungi for the control of pests has been a lot intensified in the last decades, and the fungi Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. and Metarhizim anisopliae (Metch.) Sorok were the most used. The objective of this research was to analyze the effects of these fungi, in different concentrations, on biological parameters of D. saccharalis and to analyze morphologically and quantitatively the types of hemocytes of that insect, on larvae of the 3th instar, challenged immunologically by the studied fungi, in different concentrations. It was analyzed period and viability larval and pupal, fecundity, viability of eggs and longevity of males and females of D. saccharalis, being sprayed concentrations of 103, 104, 105 conidia mL-1 on larvae. In relation to B. bassiana, the results showed that there was no difference for the larval and pupal period and pupal viability. The larval viability was reduced in the concentration of 105 conidia mL-1(56.6%). the fecundity, the viability of eggs and the longevity of males and females were affected, mainly in the concentration 105 conidia mL-1, where they presented averages of 237 eggs, 48.60%, 2.17 and 2.50 days, respectively. For M. anisopliae differences were observed in relation larval viability (56.67%), pupal period (7.86 days)pupal viability (53.33%), viability of eggs (52.34%) and longevity of males and females (2.17 and 2.50 days), in the concentration 105 conidia mL-1. The results relating to the analysis of the hemocytes revealed that the most frequent cells were the spherulocytes, plasmatocytes and granulocytes, with rates of 34.75%, 29.66% and 22.16%, respectively, while the least frequent hemocytes were the prohemocytes (8.33%), adipohemocytes (2.58%) and oenocytoids (2.41%). After inoculation with the fungus B. bassiana it was verified that differences happened only to the granulocytes in the concentration of 107 conídios mL-1 (24 and 36h) and to the plasmatocytes in the concentrations 105 conidia mL-1 (60h) and 107 conidia mL-1 (24 and 36h), where there was an increase of the granulocytes and a decrease of the plamatocytes in the largest concentration, and an increase of the plasmatocytes in the concentration 105 conidia/mL-1. M. anisopliae didn't interfere in the granulocytes and plasmatocytes. Relating to the spherulocytes a larger tendency to reduction of those cells was verified at an interval of 36h for both fungi. However a signicant difference only happened in the concentration of 105 conidia/mL-1 at an interval of 60h resulting in the smallest average for that type of hemocyte when challenged by the M. anisopliae. The obtained results indicated that B. bassiana and M. anisopliae, even being used in low concentrations, they have potential to be used in programs of control, considering that the same ones affected negatively indispensable biological parameters to the cycle of D. saccharalis. / A broca da cana-de-açúcar Diatraea saccharalis F. é considerada uma das principais pragas nas Américas, sendo responsável por danos diretos e indiretos a esta cultura. A utilização de entomopatógenos para o controle de pragas tem se intensificado bastante nas últimas décadas, sendo os fungos Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. e Metarhizim anisopliae (Metch.) Sorok. os mais utilizados. Os objetivos deste trabalho foram avaliar os efeitos destes fungos, em diferentes concentrações, sobre parâmetros biológicos de D. saccharalis e analisar morfologica e quantitativamente os tipos de hemócitos desse inseto, em lagartas do terceiro ínstar, desafiados imunologicamente pelos fungos estudados, em concentrações diferentes. Foram avaliados período e viabilidade larval e pupal, fecundidade, viabilidade de ovos e longevidade de machos e fêmeas de D. saccharalis, pulverizando-se concentrações de 103, 104, 105 conídios mL-1 sobre lagartas do inseto. Com relação a B. bassiana, os resultados mostraram que para o período larval e pupal e viabilidade pupal não houve diferença. A viabilidade larval foi reduzida na concentração de 105 conídios mL-1 (56,67%). A fecundidade, a viabilidade de ovos e a longevidade de machos e fêmeas foram afetadas, principalmente na concentração 105 conídios mL-1, onde apresentaram médias de 237 ovos, 48,60 %, 2,17 e 2,50 dias, respectivamente. Para M. anisopliae foram observadas diferenças em relação viabilidade larval (56,67%), período pupal (7,86 dias), viabilidade pupal (53,33%), viabilidade de ovos (52,34%) e longevidade de machos e fêmeas (2,17 e 2,50 dias), na concentração 105 conídios mL-1. Os resultados referentes à análise dos hemócitos revelaram que as células mais freqüentes foram os esferulócitos, plasmócitos e granulócitos, com percentuais de 34,75%, 29,66% e 22,16%, respectivamente, enquanto que os hemócitos menos freqüentes foram os pró-hemócitos (8,33%), adipohemócitos (2,58%) e oenocitóides (2,41%). Após inoculação com o fungo B. bassiana verificou-se que diferenças só ocorreram para os granulócitos na concentração de 107 conídios mL-1 (24 e 36h) e para os plasmócitos nas concentrações 105 conídios mL-1 (60h) e 107 conídios mL-1 (24 e 36h), onde houve um aumento dos granulócitos e declínio dos plamócitos na maior concentração, e aumento dos plasmócitos na concentração 105 conídios/mL-1. M. anisopliae não interferiu nos granulócitos e plamócitos. No que se refere aos esferulócitos verificou-se uma maior tendência de redução dessas células no intervalo de 36h para ambos os fungos, porém diferença significativa só ocorreu na concentração de 105 conídios/mL-1 no intervalo de 60h resultando na menor média para esse tipo de hemócito quando desafiados pelo M. anisopliae. Os resultados obtidos indicaram que B. bassiana e M. anisopliae, mesmo sendo utilizados em baixas concentrações, têm potencial para serem utilizados em programas de controle, visto que, os mesmos afetaram negativamente parâmetros biológicos imprescindíveis ao ciclo de D. saccharalis.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-25T12:47:20Z No. of bitstreams: 2 Tese - Cíntia das Chagas Bernardo - 2016.pdf: 2168975 bytes, checksum: f20144021bf112df62693342cfba7dae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-25T12:47:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Cíntia das Chagas Bernardo - 2016.pdf: 2168975 bytes, checksum: f20144021bf112df62693342cfba7dae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-25T12:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Cíntia das Chagas Bernardo - 2016.pdf: 2168975 bytes, checksum: f20144021bf112df62693342cfba7dae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The current study compared the virulence of conidia and blastospores of Metarhizium anisopliae s.l. (IP 363), Metarhizium robertsii (IP 146) and Beauveria bassiana s.l. (IP 361 and GC 307) against Rhipicephalus microplus, and the tolerance to heat and UV-B radiation; in addition, it evaluated the development of conidia and blastospores of the isolates IP 146 and IP 361 on the tick cuticle by scanning electron microscopy (SEM). Larvae and engorged females of R. microplus were treated (larvae: 106, 107 or 108 propagules/mL, females: 107 propagules/mL) by immersion in conidia or blastospores suspensions of tested isolates. The higher percentage of larval mortality was obtained in the group treated with conidia of IP 361, which had lower LC50. In bioassays with engorged females, IP 146 and IP 361 blastospores, provided tick percent control superior to 90%, while conidia of the same isolates, promoted 70.97% and 63.29% of tick control, respectively. Ticks were treated topically with 50 μL of fungal suspension (107 propagules/mL) and incubated at different times from 0 to 96 hours to analyze its development on the engorged females cuticle; after each incubation time, the females were fixed and analyzed by SEM. Blastospores of both isolates have started development 4 hours after treatment, demonstrating rapid development and suggesting penetration by the tick natural openings; at 4 hours incubation, indicative of penetration of IP 361 blastospores through the cuticle was observed, but no signs of penetration was observed with IP 146 blastospores at any time evaluated. Furthermore, fungal suspensions (103 propagules/mL) were exposed to heat (45 °C) for several time periods, then inoculated in Petri plates with BDAY medium plus chloramphenicol (0.055% v/v), and incubated for 7 days at 27 °C and RH ≥ 80%. ARSEF 324 conidia (79.1%) were more tolerant to heat than conidia of IP 363 (55.5%), IP 146 (1.5%), GC 307 (0%), and IP 361 (0% ) at 2 hours exposure, as well as blastospores after 60 minutes exposure, demonstrating mean percent CFU of 100%, 12.3%, 30.7%, 55% and 0%, respectively. Fungal suspensions (103 propagules/mL) were also inoculated on BDAY in Petri plates, and exposed to UV-B radiation; after treatment, plates were incubated for 7 days at 27 °C and RH ≥ 80%. No difference in mean relative percent CFU between conidia and blastospores was observed. Suitable adjuvants which aim at protecting fungal propagules against stressful abiotic factors are required for conidia and blastospores; however, the selection of isolates with marked natural tolerance to heat and UV-B radiation may increase performance of bioproducts. Accordingly, it is suggested that blastospores are promising fungal propagules for biological control of ticks, since they were virulent against R. microplus; in addition, the rapid development of blastospores on the tick cuticle indicates they may be exposed shortly to harmful environmental abiotic factors. / O presente estudo comparou conídios e blastosporos de Metarhizium anisopliae s.l. (IP 363), Metarhizium robertsii (IP 146) e Beauveria bassiana s.l. (IP 361 e CG 307) quanto a virulência para Rhipicephalus microplus, e quanto a tolerância ao calor e a radiação UV-B; foi avaliado ainda o desenvolvimento de conídios e blastosporos dos isolados IP 146 e IP 361 na cutícula de carrapatos por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV). Larvas e fêmeas ingurgitadas de R. microplus foram tratadas (larvas: 106, 107 ou 108 propágulos/mL; fêmeas: 107 propágulos/mL) por imersão, com conídios e blastosporos dos isolados avaliados. Maior percentual de mortalidade foi obtido nos grupos de larvas tratadas com conídios de IP 361, o qual obteve menor CL50. No bioensaio com fêmeas, blastosporos de IP 146 e IP 361 proporcionaram percentual de controle superior a 90%, enquanto que conídios dos mesmos isolados promoveram mortalidade de 70,97% e 63,29%, respectivamente. Para análise do desenvolvimento dos propágulos na cutícula de fêmeas ingurgitadas, essas foram tratadas topicamente com 50 µL de suspensão fúngica (107 propágulos/mL), incubadas em diferentes tempos de 0 a 96 horas; após cada tempo de incubação as fêmeas foram processadas e analisadas por MEV. Blastosporos de ambos isolados iniciaram seu desenvolvimento já após 4 horas de tratamento, demonstrando rápido desenvolvimento e sugerindo penetração por aberturas naturais do carrapato; com 4 horas de incubação foi possível ver a penetração de blastosporos de IP 361 através da cutícula, situação não evidenciada pelo isolado IP 146 em nenhum tempo avaliado. Nos testes de tolerância ao calor, o isolado de Metarhizium acridum (ARSEF 324) foi inserido como isolado padrão, por ser conhecida a sua tolerância. Suspensões fúngicas (103 propágulos/mL) foram expostas ao calor (45°C) por diferentes tempos, em seguida inoculadas em placas de Petri com meio BDAY acrescido de cloranfenicol (0,055% v/v) e incubadas por 7 dias a 27°C, e UR ≥ 80%. Conídios de ARSEF 324 (79,1%) demonstraram ser mais tolerantes ao calor do que conídios de IP 363 (55,5%), IP 146 (1,5%), CG 307 (0%) e IP 361 (0%) no tempo de 2 horas de exposição, assim como blastosporos no tempo de 60 minutos, demonstrando percentual relativo médio de 100%, 12,3%, 30,7%, 55% e 0%, respectivamente. Nos testes de exposição à UV-B, suspensões fúngicas (103 propágulos/mL) foram inoculadas em placas de Petri contendo BDAY e expostas a diferentes doses de radiação; após tratamento, as placas foram incubadas por 7 dias a 27°C, e UR ≥ 80%. Não houve diferença do percentual relativo médio de conídios e blastosporos expostos a mesma dose de radiação. Adjuvantes adequados que visem proteger os propágulos fúngicos contra fatores abióticos estressantes são requeridos para formulações de conídios e blastosporos; no entanto, a seleção de isolados naturalmente mais tolerantes ao calor e a radiação UV-B podem favorecer o desenvolvimento de bioprodutos. Nesse sentido, acredita-se que blastosporos sejam promissores para o biocontrole de carrapatos, já que estes se demonstraram virulentos para R. microplus, além de apresentarem rápido desenvolvimento sobre a cutícula desse artrópode, o que pode indicar menor tempo de exposição desses propágulos a fatores abióticos limitantes no ambiente.

Made available in DSpace on 2016-02-26T14:53:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GiovanaDanielaBusarello.pdf: 463836 bytes, checksum: 2081f2ab59e2e39dffe6a3506eddb577 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This research evaluated, under laboratory conditions, the efficiency of different isolates of entomopathogenic fungus Beauveria bassiana to control leaf-cutting ant Atta sexdens rubropilosa. Soldiers and workers were inoculated with suspensions containing 1,0 x 107, 1,0 x 108, 1,0 x 109 e 1,0 x 1010 conidia/mL, maintained in B.O.D., at 25 ± 1°C, 70% RH and 12 hours of photophase, without food. The mortality was evaluated daily, until 15 days after inoculation. The experimental delineation used was entirely randomly. The sporulation data were submitted to the analysis of variance and the TL50 values (in days) were obtained through the Probit analysis. All isolates of B. bassiana were pathogenic to insect, being workers more susceptible than soldiers. The isolates IBCB 21 and IBCB 07 were the most virulent for workers and soldiers, respectively. The isolate IBCB 21 also caused high percentages of confirmed mortality, showing potential for use in the control of A. sexdens rubropilosa / Este trabalho avaliou a eficiência de diferentes isolados do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana no controle de formigas cortadeiras Atta sexdens rubropilosa, em condições de laboratório. Suspensões contendo 1,0 x 107, 1,0 x 108, 1,0 x 109 e 1,0 x 1010 conídios/mL foram inoculadas em soldados e operárias, mantidos em câmara B.O.D., a 25 ± 1°C, 70% UR e fotofase de 12 horas, sem alimentação. A mortalidade foi verificada diariamente, até 15 dias após a inoculação. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Os dados referentes à esporulação foram submetidos à análise de variância e os valores de TL50 (em dias) foram obtidos através da análise de Probit. Todos os isolados de B. bassiana foram patogênicos ao inseto, sendo as operárias mais suscetíveis que os soldados. Os isolados IBCB 21 e IBCB 07 foram os mais virulentos para operárias e soldados, respectivamente. O isolado IBCB 21 também causou altas porcentagens de mortalidade confirmada, apresentando potencial para utilização no controle de A. sexdens rrubropilosa

Determinou-se a toxicidade de dezoito formulações de agrotóxicos utilizados no controle de Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) biótipo B na cultura do tomate, sobre os fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana (ESALQ 447) Metarhizium anisopliae (ESALQ E9). Para isso, avaliou-se o crescimento vegetativo, esporulação e germinação dos patógenos submetidos a ação das formulações, sugerindo-se uma alteração na expressão matemática para classificação da toxicidade de agrotóxicos. Subdoses (de 5,0 a 1,25 mL/ L) do produto Oberon 240 SC (spiromesifen) foram testadas sobre ninfas de 3º ínstar de B. tabaci. As mortalidades obtidas nos tratamentos variaram de 35,3 a 79,9%. A ação de B. bassiana e M. anisopliae e sua associação com o Oberon 240 SC foi testada sobre larvas do predador de B. tabaci, Delphastus sp. (Coleptera: Coccinellidae), não sendo observado efeito dos produtos sobre os insetos pulverizados. Os melhores tratamentos para o controle de B. tabaci em tomateiros foram obtidos pelo tratamento com 2,5 mL/ L de Oberon 240 SC e sua associação com 20 g/ L de B. bassiana. / The toxicity of eighteen insecticides used to control Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) biotipe B in tomato, was evaluated on the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana (ESALQ 447) and Metarhizium anisopliae (ESALQ E9). It was evaluated the effect of pesticides on the pathogen growth, sporulation and germination. Bases on our findings we suggested a new mathematical expression for classification of the toxicity of pesticides. Sublethal doses (5.0 to 1.25 mL/ L) of Oberon 240 SC were tested on the third nymph instar of B. tabaci, and mortalities varied from 35.3 to 79.9%. Use of Oberon 240 SC combines with B. bassiana and M. anisopliae did not effect Delphastus sp (Coleoptera: Coccinellidae), a predator of B. tabaci larvae. The best treatments for control of B. tabaci in tomato were obtained by spray of 2.5 mL/ L of Oberon 240 SC with 20 g/ L of B. bassiana.

Avaliou-se o efeito de Metarhizium anisopliae e dos inseticidas triflumuron e pyriproxifen para adultos e ninfas de Blattella germanica, e a eficiência da associação desses agentes no controle de colônias da praga. Doses elevadas do patógeno ocasionaram altos índices de mortalidade de adultos e ninfas. Não foi observada mortalidade significativa para insetos que se alimentaram de iscas contaminadas com o patógeno. Adultos e ninfas expostos à superfície contaminada com o fungo na formulação pó (5%) apresentaram mortalidade de 93,7% e 82,3% após 9 dias da aplicação, respectivamente. As CL25 para ninfas tratadas com triflumuron e pyriproxifen foram de 0,19% e 0,45% de ingrediente ativo, respectivamente, para um período de alimentação de 72 horas na isca contaminada. Os inseticidas afetaram a produção de ootecas viáveis e o número de ninfas produzidas por ooteca. Após 60 dias, colônias de laboratório não tratadas apresentaram 6,55 vezes mais insetos em relação à população inicial, com uma média de 233,9 insetos. As colônias apresentaram crescimento menor quando submetidas aos inseticidas triflumuron e pyriproxifen, com 60,8 e 81 insetos em média, respectivamente. Os melhores resultados foram obtidos nos tratamentos em que os inseticidas foram associados ao patógeno, resultando populações de 41,8 e 57,7 insetos para triflumuron + M. anisolpiae e pyriproxifen + M. anisopliae, respectivamente. Duas aplicações associando-se o patógeno aos inseticidas na mesma isca atrativa, em uma câmara de infecção, controlou totalmente uma população em campo. Insetos da criação infectados por Gregarina sp. mostraram-se mais sensíveis quando expostos a M. anisopliae e a triflumuron em relação a insetos sadios. Estudos mais detalhados sobre como os inseticidas podem interferir no processo de doença casusada pelo fungo no inseto, além de aspectos relacionados à formulação do micoinseticida e da sua contribuição na mortalidade de populações de B. germanica em campo são ainda necessários. / It was evaluated the effect of Metarhizium anisopliae and the insect growth regulators triflumuron and pyriproxifen for adults and nymphs of the German cockroach Blattella germanica, and the efficacy of its association in the control of this urban pest. High doses of the pathogen caused high mortality of adults and nymphs. There was no mortality of B. germanica nymphs exposed for 72 hours to the food contaminated with M. anisopliae. The mortality of adults and nymphs was of 93.7% and 82.3%, respectively, when exposed to a surface that had been contaminated with the fungus formulation (5%), as early as 9 days after the application. The LC25 for nymphs exposed for a 72-hour period to the triflumuron-bait was 0.19% (active ingredient) and for pyriproxifen-baits 0.45%, after 15-day period. Both inseticides decreased the production of viable oothecae and the number of nymphs in this cases. Untreated colonies presented 6.55 fold in the number of insects after a 60-day period, with 233.9 average insects per colony. The colonies exposed to triflumuron and pyriproxifen had an average of 60.8 and 81 insects, respectively. The insecticides and fungus association presented populations of 41.8 and 57.7 insects for triflumuron + M. anisolpiae and pyriproxifen + M. anisopliae, respectively. Two applications of the association of M. anisolpiae and triflumuron+pyriproxifen-bait, in an infection chamber, eliminated a cockroach colony in the field. Gregarine-infected insects were more susceptible than healthy ones when treated with the entomopathogenic fungus M. anisopliae and the insect growth regulator triflumuron. More detailed studies on how the insecticides could interfere in the disease process caused by M. anisopliae, and aspects related to the fungus formulation and its contribution to the mortality of German cockroach field populations are still necessary.