A melatonina é um antioxidante muito eficaz e protege as células contra o estresse oxidativo causado pelas espécies reativas, e indiretamente, modula a expressão de genes associados ao ciclo celular, metabolismo oxidativo e apoptose celular. Deste modo, a suplementação da melatonina ao meio de maturação in vitro, a torna uma alternativa para promover melhorias na viabilidade das células germinativas e embrionárias. O estudo 1 avaliou o efeito da adição de melatonina ao meio de maturação por meio da maturação nuclear (progressão meiótica) e citoplasmática (migração de grânulos corticais) e dos níveis de ROS em oócitos suínos maturados in vitro. A suplementação do meio de maturação com melatonina estimulou a progressão da meiose, a migração de grânulos corticais e reduziu os níveis intracelulares de ROS nos oócitos. O estudo 2 avaliou o efeito da melatonina na expressão de genes antioxidantes (Catalase, SOD1, SOD2 e GPX) envolvidos na proteção celular de oócitos e células do cumulus. A adição da melatonina ao meio de maturação influenciou positivamente a expressão dos genes antioxidantes nos oócitos e células do cumulus. O estudo 3 avaliou o efeito da melatonina nos processos biológicos por meio do perfil de trascriptomas, via RNA-Seq, em células do cumulus oriundas de oócitos suínos maturados in vitro. A partir da análise de expressão diferencial foi possível identificar que a adição da melatonina ao meio de maturação influenciou 80 genes associados a nove processos biológicos (ciclo celular; proteólise; organização de citoesqueleto; via energética; adesão e transporte celular; via de sinalização; fator de transcrição; metabolismo oxidativo e apoptose; e componente celular). A suplementação do meio de maturação com melatonina potencialmente influencia a viabilidade e o funcionamento celular, uma vez que modulou a expressão de genes associados à processos fisiológicos essenciais, tais como: divisão celular, metabolismo energético e oxidativo, vias de sinalização e apoptose. O estudo 4, avaliou o efeito da melatonina sobre os genes associados à viabilidade oocitária e o subsequente desenvolvimento embrionário por meio do perfil de trascriptomas, via RNA-Seq, de células do cumulus oriundas de oócitos suínos. A adição da melatonina ao meio de maturação influenciou 59 genes associados a nove funções biológicas (expansão do cumulus, comunicação em COCs, maturação nuclear, maturação citoplasmática, reparo e integridade do DNA, viabilidade oocitária, esteroidogênese, fertilização e embriogênese). Em conclusão, a suplementação do meio de maturação com melatonina influencia positivamente a maturação oócitária, reduz os níveis intracelulares de ROS, aumenta a expressão de genes antioxidantes, em adição, interfere no transcriptoma de um número expressivo de genes associados à aquisição da competência oócitária, da viabilidade embrionária e desenvolvimento subsequente. / Melatonin is a very effective antioxidant and protects cells against oxidative stress caused by reactive species, and indirectly modulates expression of genes associated with cell cycle, oxidative metabolism, and apoptosis. Thus, melatonin supplementation to in vitro maturation media becomes an alternative to improve the viability of germ and embryonic cells. The first study assessed the effects of adding melatonin to the maturation medium on nuclear (meiotic progression) and cytoplasmic (cortical granules migration) maturation and ROS levels in in vitro matured porcine cumulus-oocyte complexes (COCs). Melatonin supplementation stimulated meiosis progression and cortical granules migration, and reduced intracellular ROS levels in oocytes. The second study evaluated the effects of melatonin on the expression of antioxidant genes (Catalase, SOD1, SOD2, and GPX) involved in cellular protection in oocytes and cumulus cells. The addition of melatonin to the maturation medium positivity influence the expression of antioxidant genes in oocytes and cumulus cells. The third study evaluated the effect of melatonin on genes associated with biological processes through transcriptomic profile via RNA-Seq in cumulus cells derived from porcine COCs in vitro matured. Melatonin addition to maturation medium differentially affected expression of 80 genes associated with nine biological processes (cell cycle, proteolysis, cytoskeletal organization, energy pathaway, cell adhesion and transport, signalling pathway, transcription factor, oxidative metabolism and apoptosis, and cell components). The fourth study assessed the effect of melatonin on genes associated with oocyte viability and subsequent embryo development through transcriptomic profile via RNA-Seq in cumulus cells derived from porcine COCs. Melatonin in the maturation medium affected 59 genes associated with nine biological functions related with oocyte viability and embryo development (cumulus expansion, communication between cumulus cells and oocytes, nuclear maturation, cytoplasmic maturation, DNA repair and integrity, oocyte viability, steroidogenesis, fertilization and embryogenesis). In conclusion, supplementation of melatonin to maturation environment influences oocyte nuclear and cytoplasmic maturation, reduces intracellular ROS levels, positivity influence the expression of antioxidant and also interferes in the transcriptome of a significant number of genes associated with oocyte competence acquisition, embryo viability and subsequent development.

Esta dissertação tem como objetivo discutir o princípio do anonimato de doadores de gametas na reprodução assistida. Inspiramo-nos no termo cunhado pela antropóloga norte-americana Charis Thompson, coreografia ontológica – termo que visa explicitar os diferentes modos pelos quais os aspectos técnicos, científicos, legais, políticos e financeiros do parentesco são coordenados nas clínicas de RA. Para melhor entender os diferentes elementos da questão, escolhemos três agentes centrais que, ao mesmo tempo, revelam e influenciam essa “coreografia”. São eles: a divulgação jornalística, os especialistas da área e a legislação. Entendemos que ainda que a ciência impressa nessas tecnologias tenha pretensões universais, os modos de conhecer tais procedimentos são dados a partir de “epistemologias cívicas” e operacionalizados a partir de “estratégias nacionais de regulamentação”. Por essa razão acreditamos que o método comparativo ilumina a especificidade dos diferentes casos e faz com que esses objetos produzam comentários recíprocos um sobre o outro. Além de conduzir entrevistas entre médicos e embriologistas especializados na reprodução assistida, nessa dissertação nos comparamos a divulgação jornalística de quatro países e a legislação de outros cinco. Tais comparações nos permitem visualizar o modo como a reprodução assistida e mais especificamente o anonimato de doadores tem sido configurados no jogo de semelhanças e diferenças; as lógicas que conduzem da prática a proibição; as razões que explicam por que a busca por irmãos é mais aceitável do que a busca por pais genéticos, e os pesos relativos da adoção e da doação de gametas. / In this dissertation, we discuss the principle of anonymity concerning the donors of gametes in the process of assisted reproduction. Our analysis is inspired in the term ontological choreography, coined by North American anthropologist Charis Thompson to describe the technical, scientific, legal, political and financial aspects of kinship that are coordinated in the clinics of assisted maternity. In order to better understand the different elements in question, we have chosen three central agents that simultaneously reveal and influence this “choreography”: journalistic articles, specialists in the area and legislation. We consider that, although the science present in these technologies has universal pretensions, the ways in which we come to know these procedures are conditioned by “civic epistemologies” and operationalized according to “national styles of regulamentation”. For this reason, we believe that the comparative method illuminates the specificity of different cases, causing each context to shed light on the others. Aside from conducting interviews among Brazilian doctors and embryologists specialized in assisted reproduction, we compare in this dissertation the journalistic divulgation of four countries and the legislation of another five. Such comparisons permit us to visualize the way in which assisted reproduction, and specifically donor anonymity, take shape in the play between similarities and differences; the logics that lead from practice to prohibition; the explanations why the search for siblings is more easily accepted than the search for genetic parents, and the relative weights attributed to adoption and the donation of gametes.

Esta dissertação tem como objetivo discutir o princípio do anonimato de doadores de gametas na reprodução assistida. Inspiramo-nos no termo cunhado pela antropóloga norte-americana Charis Thompson, coreografia ontológica – termo que visa explicitar os diferentes modos pelos quais os aspectos técnicos, científicos, legais, políticos e financeiros do parentesco são coordenados nas clínicas de RA. Para melhor entender os diferentes elementos da questão, escolhemos três agentes centrais que, ao mesmo tempo, revelam e influenciam essa “coreografia”. São eles: a divulgação jornalística, os especialistas da área e a legislação. Entendemos que ainda que a ciência impressa nessas tecnologias tenha pretensões universais, os modos de conhecer tais procedimentos são dados a partir de “epistemologias cívicas” e operacionalizados a partir de “estratégias nacionais de regulamentação”. Por essa razão acreditamos que o método comparativo ilumina a especificidade dos diferentes casos e faz com que esses objetos produzam comentários recíprocos um sobre o outro. Além de conduzir entrevistas entre médicos e embriologistas especializados na reprodução assistida, nessa dissertação nos comparamos a divulgação jornalística de quatro países e a legislação de outros cinco. Tais comparações nos permitem visualizar o modo como a reprodução assistida e mais especificamente o anonimato de doadores tem sido configurados no jogo de semelhanças e diferenças; as lógicas que conduzem da prática a proibição; as razões que explicam por que a busca por irmãos é mais aceitável do que a busca por pais genéticos, e os pesos relativos da adoção e da doação de gametas. / In this dissertation, we discuss the principle of anonymity concerning the donors of gametes in the process of assisted reproduction. Our analysis is inspired in the term ontological choreography, coined by North American anthropologist Charis Thompson to describe the technical, scientific, legal, political and financial aspects of kinship that are coordinated in the clinics of assisted maternity. In order to better understand the different elements in question, we have chosen three central agents that simultaneously reveal and influence this “choreography”: journalistic articles, specialists in the area and legislation. We consider that, although the science present in these technologies has universal pretensions, the ways in which we come to know these procedures are conditioned by “civic epistemologies” and operationalized according to “national styles of regulamentation”. For this reason, we believe that the comparative method illuminates the specificity of different cases, causing each context to shed light on the others. Aside from conducting interviews among Brazilian doctors and embryologists specialized in assisted reproduction, we compare in this dissertation the journalistic divulgation of four countries and the legislation of another five. Such comparisons permit us to visualize the way in which assisted reproduction, and specifically donor anonymity, take shape in the play between similarities and differences; the logics that lead from practice to prohibition; the explanations why the search for siblings is more easily accepted than the search for genetic parents, and the relative weights attributed to adoption and the donation of gametes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O estudo trata da induÃÃo anestÃsica, caracterizaÃÃo do lÃquido seminal, refrigeraÃÃo e congelaÃÃo do sÃmen de tilÃpia-do-Nilo, Oreochromis niloticus. No primeiro capÃtulo foram testados os anestÃsicos naturais mentol e eugenol em espÃcimes adultos objetivando determinar a concentraÃÃo ideal para manejo de tilÃpia-do-Nilo. No segundo capÃtulo, o lÃquido seminal da tilÃpia-do-Nilo foi caracterizado de acordo com os seguintes parÃmetros: volume coletado, que revelou a viabilidade de coleta em volumes suficientes, sem a necessidade de sacrificar o peixe; concentraÃÃo espermÃtica, que mostrou relevante variaÃÃo entre espÃcimes; pH e osmolaridade, que ratificam as informaÃÃes presentes na literatura; tempo de motilidade, que comprovou ser o espermatozoide de tilÃpia diferenciado quanto à energia acumulada quando comparado a outras espÃcies de Ãgua doce; e morfometria da cabeÃa do espermatozoide por meio das seguintes medidas: comprimento, largura, perÃmetro e Ãrea. TambÃm foram registrados quatro parÃmetros derivados do formato da cabeÃa: elipticidade, rugosidade, elongaÃÃo e regularidade. No terceiro capÃtulo foi avaliada a viabilidade do sÃmen de tilÃpia-do-Nilo submetido a diferentes diluentes e refrigerado a 4ÂC. A avaliaÃÃo foi realizada por meio da taxa de motilidade espermÃtica determinada pelo sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). Neste, o ACP-104, diluente à base de Ãgua de coco em pÃ, ofereceu melhor taxa de motilidade dos espermatozoides por atà 72 horas de estocagem. Esta resposta mostrou que o ACP-104 à um diluente promissor para o sÃmen da referida espÃcie. No quarto capÃtulo foi avaliado o efeito de diferentes criodiluentes sobre do sÃmen de tilÃpia-do-Nilo pÃs-descongelaÃÃo, utilizando o software (Sperm Class Analyser, SCA). Os resultados de motilidade espermÃtica e de parÃmetros de velocidade do espermatozoide revelaram que o ACP-104 combinado ao dimetilsulfÃxido apresenta-se como um criodiluente promissor para a criopreservaÃÃo do sÃmen de tilÃpia-do-Nilo em longo prazo. / The present study deals with anesthetic induction, characterization of sperm fluid, cooling and freezing of sperm of the Nile tilapia Oreochromis niloticus. In the first chapter the natural anesthetics menthol and eugenol were tested in adult specimens aiming to determine the ideal concentration for handling the Nile tilapia. In the second chapter the sperm fluid of the Nile tilapia was characterized according to the following parameters: collected volume, which showed the feasibility of collect in sufficient volume without the need of sacrificing the fish; sperm concentration, which showed significant variation between specimens; pH and osmolarity, which confirm the information of the literature; sperm motility time, which proved that the spermatozoa of tilapia are differentiated concerning accumulated energy when compared to other freshwater species; and sperm head morphometry, characterized by size (length, width, perimeter and area) and head shape (ellipticity, rugosity, elongation and regularity). In the third chapter we evaluated the feasibility of preservation of tilapia sperm using different extenders and cooled at 4ÂC. The sperm motility rate was evaluated with the aid of the Computer-assisted Sperm Analyzer (CASA) System. In this, the ACP-104, media based on powdered coconut water, showed best sperm motility rate for up to 72 hours after storage. In the fourth chapter was evaluated the effects of different cryoprotectants on the post-thaw Nile tilapia sperm, using the software Sperm Class Analyzer (SCA). The results of the sperm motility rate and sperm velocity parameters revealed that ACP-104 in combination with dimethylsulfoxide is a promising cryodiluent for Nile tilapia sperm in long-term conservation.

Esta dissertação tem como objetivo discutir o princípio do anonimato de doadores de gametas na reprodução assistida. Inspiramo-nos no termo cunhado pela antropóloga norte-americana Charis Thompson, coreografia ontológica – termo que visa explicitar os diferentes modos pelos quais os aspectos técnicos, científicos, legais, políticos e financeiros do parentesco são coordenados nas clínicas de RA. Para melhor entender os diferentes elementos da questão, escolhemos três agentes centrais que, ao mesmo tempo, revelam e influenciam essa “coreografia”. São eles: a divulgação jornalística, os especialistas da área e a legislação. Entendemos que ainda que a ciência impressa nessas tecnologias tenha pretensões universais, os modos de conhecer tais procedimentos são dados a partir de “epistemologias cívicas” e operacionalizados a partir de “estratégias nacionais de regulamentação”. Por essa razão acreditamos que o método comparativo ilumina a especificidade dos diferentes casos e faz com que esses objetos produzam comentários recíprocos um sobre o outro. Além de conduzir entrevistas entre médicos e embriologistas especializados na reprodução assistida, nessa dissertação nos comparamos a divulgação jornalística de quatro países e a legislação de outros cinco. Tais comparações nos permitem visualizar o modo como a reprodução assistida e mais especificamente o anonimato de doadores tem sido configurados no jogo de semelhanças e diferenças; as lógicas que conduzem da prática a proibição; as razões que explicam por que a busca por irmãos é mais aceitável do que a busca por pais genéticos, e os pesos relativos da adoção e da doação de gametas. / In this dissertation, we discuss the principle of anonymity concerning the donors of gametes in the process of assisted reproduction. Our analysis is inspired in the term ontological choreography, coined by North American anthropologist Charis Thompson to describe the technical, scientific, legal, political and financial aspects of kinship that are coordinated in the clinics of assisted maternity. In order to better understand the different elements in question, we have chosen three central agents that simultaneously reveal and influence this “choreography”: journalistic articles, specialists in the area and legislation. We consider that, although the science present in these technologies has universal pretensions, the ways in which we come to know these procedures are conditioned by “civic epistemologies” and operationalized according to “national styles of regulamentation”. For this reason, we believe that the comparative method illuminates the specificity of different cases, causing each context to shed light on the others. Aside from conducting interviews among Brazilian doctors and embryologists specialized in assisted reproduction, we compare in this dissertation the journalistic divulgation of four countries and the legislation of another five. Such comparisons permit us to visualize the way in which assisted reproduction, and specifically donor anonymity, take shape in the play between similarities and differences; the logics that lead from practice to prohibition; the explanations why the search for siblings is more easily accepted than the search for genetic parents, and the relative weights attributed to adoption and the donation of gametes.

Submitted by Silvana Teresinha Dornelles Studzinski (sstudzinski) on 2016-05-23T16:31:17Z No. of bitstreams: 1 Daniel Agostini_.pdf: 1034713 bytes, checksum: 17d486b0a13c571c764066c4c881ef7f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T16:31:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniel Agostini_.pdf: 1034713 bytes, checksum: 17d486b0a13c571c764066c4c881ef7f (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Nenhuma / Considerando os impactos das novas tecnologias de reprodução humana assistida (RHA) no campo do Direito das Famílias Contemporâneo, o presente trabalho tem como objetivo geral analisar em que medida o acesso a elas pode consistir em um fator de valorização dos vínculos familiares biológicos em detrimento dos vínculos socioafetivos, analisando as práticas discursivas e os argumentos presentes no debate em torno do anonimato ou conhecimento do doador de gametas. O tema despertou especial atenção por, à primeira vista, verificar-se uma biologização na substituição do paradigma do anonimato para o paradigma do conhecimento do doador, ao passo que se percebe no Direito uma prevalência para as relações afetivas. Foram analisadas as normativas ético-médicas do Conselho Federal de Medicina, representadas especialmente pela Resolução nº 2013, que prevê o anonimato, e projetos de lei do Congresso Nacional do Brasil, Projeto de Lei do Senado nº 1.184, de 2003, e seus apensos, tendo como pano de fundo discutir as transformações e diversas concepções de família e parentesco, que passa de um modelo patriarcal fechado e de prole consanguínea, para modelos plurais fundados em laços afetivos. Empregou-se como referencial teórico de base a análise de discurso, abordagem qualitativa e dialética, sobre documentação direta e indireta, analisando-se o texto legal, debates, votos e pareceres existentes, com sistematização das conclusões. Conclui-se que o debate político brasileiro, embora esteja inserido nas formações discursivas correlatas da questão (ciência, religião, filosofia e juridicidade), possui fragilidade argumentativa-epistemológica e é permeado por subjetivismos, interesses pessoais e político-partidários, além de sofrer forte influência midiática, não adentrando de forma mais objetiva e fundamentada nas diversas implicações de um ou outro paradigma. A opção pelo conhecimento do doador parece possuir caráter biologizante do indivíduo, mas não da relação entre os indivíduos. Se é verdade que, na contemporaneidade, como afirma Marilyn Strathern, o corpo mantém a pessoa enquanto partícula tão indivisa que torna os relacionamentos algo abstratos e fora dela, isso se coaduna com disposições internacionais de que o gene constitui o homem biologicamente, mas não é tudo o que ele é. Dito de outra maneira, o moderno conhecimento do corpo humano e a evolução da ciência vista na exacerbação das técnicas de RHA, aprofundaram uma noção de desvinculação do corpo do espírito e, com isso, da autonomia das relações entre as pessoas, levando-se à percepção de que o doador de gametas representa nada mais que um doador de material biológico e ‘ascendente estritamente biológico’ porque a noção de parentesco é relacional, feita com conexões cultural e individualmente significadas, de forma que o desvelamento genético do homem oferece uma escolha: as pessoas podem estabelecer conexões ativas por conta da genética ou podem, justamente, se desconectar, apesar dela. No Brasil, embora não se aprofundem essas discussões de forma mais sofisticada, percebe-se essa separação, aliada ao caráter biologizante do indivíduo, com desvinculação das relações formadas entre estes. / Considering the impact of new assisted human reproductive technologies (RHA) in the field of Law of Contemporary Families, this work has as main objective to analyze to what extent access to them may consist of a factor of appreciation of biological family ties to the detriment of social-affective ties, analyzing the discursive practices and the arguments present in the debate on anonymity or knowledge of the gamete donor. The issue aroused special attention at first glance, check it a biologization the replacement of anonymity paradigm for the giver of knowledge paradigm, while it is perceived in the law a prevalence for affective relationships. We analyzed the ethical-medical regulations of the Brazil Federal Council of Medicine, especially represented by Resolution No. 2013, which provides anonymity, and the National Congress bills in Brazil, Senate Bill No. 1184, 2003, and its accompanying, having as a backdrop to discuss the changes and different conceptions of family and kinship, passing a patriarchal model closed and inbred offspring to plural models based on emotional ties. He was employed as the basis of theoretical discourse analysis, qualitative and dialectical approach on direct and indirect documentation, analyzing the legal text, debates, existing votes and opinions, with systematization of the findings. We conclude that the Brazilian political debate, even though it is inserted in the related discursive formations of the issue (science, religion, philosophy and legality), has argumentative and epistemological fragility and is permeated by subjectivism, personal interests and political partisanship, in addition to suffering strong influence media, not entering in a more objective and reasoned manner in the various implications of a paradigm or the other. The choice of the donor's knowledge seems to have biologizing character of the individual, but not the relationship between individuals. If it is true that, in contemporary times, as stated by Marilyn Strathern, the body keeps a person as particle so indivisible that makes relationships something abstract and beyond, it is consistent with international provisions that the gene is the man biologically, but not all he is. In other words, the modern knowledge of the human body and the evolution of view science in exacerbation of AHR techniques, deepened a sense of disconnection from the spirit body, and with it, the autonomy of relations between people, leading to the perception that the gamete donor is nothing more than a biological material donor and 'up strictly biological' because kinship notion is relational, made with cultural connections and individually meant, so that the genetic man unveiling offers a choice: people can establish active connections due to genetic or can precisely disconnect despite it. In Brazil, although it does not deepen these discussions in a more sophisticated way, we perceive this separation, coupled with biologizing character of the individual, with untying the relationships formed between them.

Submitted by CHERLYNN DANIELA DA SILVA ARCE null (cdprado@outlook.com) on 2018-04-03T20:24:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Cherlynn_Daniela_da_Silva_Arce.pdf: 1179630 bytes, checksum: c8a13228e501d97cb1dd118aca364265 (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2018-04-04T13:21:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 arce_cds_me_jabo.pdf: 1179630 bytes, checksum: c8a13228e501d97cb1dd118aca364265 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-04T13:21:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arce_cds_me_jabo.pdf: 1179630 bytes, checksum: c8a13228e501d97cb1dd118aca364265 (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Com o avanço dos estudos em genética e da tecnologia aplicada à genotipagem de marcadores moleculares, a identificação de polimorfismos associados às características de interesse econômico se tornou mais acessível, possibilitando a sua utilização aumentar a acurácia de modelos de predição do mérito genético dos animais. Esse avanço também possibilitou aumentar a acurácia dos estudos para identificação de QTLs para características de interesse econômico. Entretanto, os marcadores comumente utilizados para tal fim são os SNPs, que por serem bi-alélicos podem não ser muito eficientes na identificação dos QTLs. Os haplótipos, multi-alélicos, apresentam maior possibilidade de estarem em desequilíbrios de ligação (DL) com os QTLs. Dessa forma, objetivou-se no presente trabalho identificar o melhor método de construção de haplótipos para utilização em estudos de detecção de QTLs, a partir da comparação dos três métodos mais comumente utilizados para este fim. Foram utilizadas três populações simuladas representando características com três diferentes valores de herdabilidade, para as quais foram armazenados os dados fenotípicos, genotípicos e de pedigree dos 6.000 animais da população mais recente: Pop1 com herdabilidade baixa (0,10); Pop2 com herdabilidade moderada (0,25); e, Pop3 com herdabilidade alta (0,35). Os genomas simulados consistiram de 750.000 marcadores do tipo SNP, e 750 QTLs, com dois a quatro alelos, dispostos aleatoriamente em 29 cromossomos com tamanho total de 2.333 centimorgans (cM). A partir da simulação foram eliminados os SNPs cuja frequência do menor alelo foi menor que 0,1, restando 576.027, 577.189 e 576.675 marcadores para as populações Pop1, Pop2 e Pop3, respectivamente. A variação fenotípica foi de 1,0 e a variação dos QTLs foi de 50% das herdabilidades, para cada população. As médias dos DL para cada cromossomo, medidas pela estatística D', variaram de 0,20 até 0,30 para todas as populações, na última geração. Foram construídos haplótipos utilizando três métodos: Intervalo de Confiança (IC), Regra de Quatro Gametas (RQG) e Janelas Sobrepostas (JS). Para Pop1, no cromossomo 15, os métodos IC, RQG e JS identificaram cinco, oito e sete QTLs, respectivamente. Somente um QTL foi identificado nos cromossomos 19 e 29. Para a característica de herdabilidade alta, foi identificado um QTL no cromossomo 11. Em relação às análises de associação utilizando SNPs individuais, foram identificados quatro QTLs no cromossomo 15. Para a característica de herdabilidade moderada, não foram encontrados haplótipos ou SNPs isolados significativos. A metodologia de formação de haplótipos baseado na RQG foi considerada a mais eficiente para detecção de QTLs em relação aos métodos IC e JS, bem como ao uso dos SNPs isolados. / With the advancement of genetic studies and the technology applied to the genotyping of molecular markers, the identification of polymorphisms associated with the characteristics of economic interest became more accessible, allowing its use to increase the accuracy of prediction models of the genetic merit of the animals. This advance also made it possible to increase the accuracy of studies to identify QTLs for characteristics of economic interest. However, the commonly used markers for this purpose are SNPs, which because they are bi-allelic may not be very efficient in identifying QTLs. The haplotypes, multi-allelic, are more likely to be in linkage disequilibrium (LD) with QTLs. Thus, the objective of this work was to identify the best haplotype construction method for use in QTLs detection studies, by comparing the three methods most commonly used for this purpose. Three simulated populations representing characteristics with three different heritability values were used for which the phenotypic, genotypic and pedigree data of the 6,000 animals were stored: Pop1 with low heritability (0.10); Pop2 with moderate heritability (0.25); and, Pop3 with high heritability (0.35). The simulated genomes consisted of 750,000 SNP-type markers, and 750 QTLs, with two to four alleles, arranged randomly on 29 chromosomes with a total size of 2,333 centimorgans (cM). From the simulation the SNPs whose frequency of the lowest allele was less than 0.1 were eliminated, leaving 576,027, 577,189 and 576,675 markers for Pop1, Pop2 and Pop3 populations, respectively. The phenotypic variation was 1.0 and the variation of QTLs was 50% of the heritabilities, for each population. The mean LD for each chromosome, measured by the D' statistic, ranged from 0.20 to 0.30 for all populations in the last generation. Haplotypes were constructed using three methods: Confidence Interval (CI), Four Gametes Rule (FGR) and Sliding-Window (SW). For Pop1, on chromosome 15, CI, FGR and SW methods identified five, eight and seven QTLs, respectively. Only one QTL was identified on chromosomes 19 and 29. For the high heritability characteristic, a QTL was identified on chromosome 11. Regarding the association analyzes using individual SNPs, four QTLs were identified on chromosome 15. For the moderate heritability characteristic, no significant isolated haplotypes or SNPs were found. The methodology of haplotype formation based on the FGR was considered the most efficient for the detection of QTLs in relation to CI and SW methods, as well as to the use of isolated SNPs.

TEIXEIRA, Erivânia Gomes. Caracterização, resfriamento e criopreservação de sêmen de tilápia-do-nilo cultivada no estado do Ceará. 2013. 92 f. : Tese (doutorado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia de Pesca, Fortaleza-CE, 20113 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-26T12:26:41Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_egteixeira.pdf: 1255411 bytes, checksum: 260b5caf7b5bf38819e087108c82096e (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-26T12:26:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_egteixeira.pdf: 1255411 bytes, checksum: 260b5caf7b5bf38819e087108c82096e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T12:26:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_egteixeira.pdf: 1255411 bytes, checksum: 260b5caf7b5bf38819e087108c82096e (MD5) Previous issue date: 2013 / The present study deals with anesthetic induction, characterization of sperm fluid, cooling and freezing of sperm of the Nile tilapia Oreochromis niloticus. In the first chapter the natural anesthetics menthol and eugenol were tested in adult specimens aiming to determine the ideal concentration for handling the Nile tilapia. In the second chapter the sperm fluid of the Nile tilapia was characterized according to the following parameters: collected volume, which showed the feasibility of collect in sufficient volume without the need of sacrificing the fish; sperm concentration, which showed significant variation between specimens; pH and osmolarity, which confirm the information of the literature; sperm motility time, which proved that the spermatozoa of tilapia are differentiated concerning accumulated energy when compared to other freshwater species; and sperm head morphometry, characterized by size (length, width, perimeter and area) and head shape (ellipticity, rugosity, elongation and regularity). In the third chapter we evaluated the feasibility of preservation of tilapia sperm using different extenders and cooled at 4°C. The sperm motility rate was evaluated with the aid of the Computer-assisted Sperm Analyzer (CASA) System. In this, the ACP-104, media based on powdered coconut water, showed best sperm motility rate for up to 72 hours after storage. In the fourth chapter was evaluated the effects of different cryoprotectants on the post-thaw Nile tilapia sperm, using the software Sperm Class Analyzer (SCA). The results of the sperm motility rate and sperm velocity parameters revealed that ACP-104 in combination with dimethylsulfoxide is a promising cryodiluent for Nile tilapia sperm in long-term conservation. / O estudo trata da indução anestésica, caracterização do líquido seminal, refrigeração e congelação do sêmen de tilápia-do-Nilo, Oreochromis niloticus. No primeiro capítulo foram testados os anestésicos naturais mentol e eugenol em espécimes adultos objetivando determinar a concentração ideal para manejo de tilápia-do-Nilo. No segundo capítulo, o líquido seminal da tilápia-do-Nilo foi caracterizado de acordo com os seguintes parâmetros: volume coletado, que revelou a viabilidade de coleta em volumes suficientes, sem a necessidade de sacrificar o peixe; concentração espermática, que mostrou relevante variação entre espécimes; pH e osmolaridade, que ratificam as informações presentes na literatura; tempo de motilidade, que comprovou ser o espermatozoide de tilápia diferenciado quanto à energia acumulada quando comparado a outras espécies de água doce; e morfometria da cabeça do espermatozoide por meio das seguintes medidas: comprimento, largura, perímetro e área. Também foram registrados quatro parâmetros derivados do formato da cabeça: elipticidade, rugosidade, elongação e regularidade. No terceiro capítulo foi avaliada a viabilidade do sêmen de tilápia-do-Nilo submetido a diferentes diluentes e refrigerado a 4°C. A avaliação foi realizada por meio da taxa de motilidade espermática determinada pelo sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). Neste, o ACP-104, diluente à base de água de coco em pó, ofereceu melhor taxa de motilidade dos espermatozoides por até 72 horas de estocagem. Esta resposta mostrou que o ACP-104 é um diluente promissor para o sêmen da referida espécie. No quarto capítulo foi avaliado o efeito de diferentes criodiluentes sobre do sêmen de tilápia-do-Nilo pós-descongelação, utilizando o software (Sperm Class Analyser, SCA). Os resultados de motilidade espermática e de parâmetros de velocidade do espermatozoide revelaram que o ACP-104 combinado ao dimetilsulfóxido apresenta-se como um criodiluente promissor para a criopreservação do sêmen de tilápia-do-Nilo em longo prazo.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA12MA036.pdf: 1592456 bytes, checksum: 158df0da96e6278ad45402fbb94c2c38 (MD5) Previous issue date: 2012-07-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The adequate embryo development depends on proper nuclear-cytoplasmic interactions in the embryo. Such interactions are influenced by the donor cell type and quality of recipient oocyte on cloning, as well as by the characteristics of the sperm and the oocyte on in vitro fertilization (IVF). The first study (two experiments) investigated the effect of donor cell type (fibroblastic-like cells - FIB vs. adipocyte-derived mesenchymal stem cells - ADMSC), and host cytoplast (porcine reconstructed with 2 hemi-porcine cytoplasts; mosaic reconstructed with one-hemi-porcine and one hemi-bovine cytoplast; bovine reconstructed using 2 hemi-bovine cytoplasts), on development of porcine somatic cell nuclear transfer (SCNT) embryos. Somatic cell cultures were established from two animals of endangered pig breeds (Mule-foot and Moura) and embryos were reconstructed by hand-made cloning and cultured for 7 days in PZM-3 medium. Mosaic and bovine groups produced lower blastocyst rates than porcine (5.5, 1.9 and 18.0%, respectively). The group ADMSC-mosaic from Moura animal showed an intermediate embryo development on porcine and bovine groups, which is higher than the FIB-mosaic group of the same animal. The percentage of fragmented blastomeres in cleaved embryos and morulas from the mosaic and bovine groups were higher than the porcine. The dynamic of fusion was different according the group of cytoplasm, as observed through mitochondria staining. In the second study (three experiments), we investigated the effect of the histones de-acethylase inhibitor Scriptaid on the in vitro development of the three groups of SCNT reconstructed embryos. Reconstructed embryos were exposed to 500 nM of Scriptaid for 12 h starting just after activation, being then cultured in PZM-3 for 7 days. The blastocyst rates in the porcine (9.2 vs. 17.3%) and mosaic (1.0 vs. 9.2%) groups were increased by Scriptaid treatment (p < 0.05), and the proportion of fragmented morulas was reduced in mosaic (p < 0.05). However, Scriptaid treatment did not increase embryo development in the bovine group. In the second study (three experiments) the influence of distinct oocyte and spermatozoa qualities in their interaction in embryo IVP by IVF was evaluate. On experiment 1 and 3 the blastocyst rates were evaluated (day 7). On experiment 2, two bulls were used for IVF with good or poor oocytes. Bull A did not show difference according the oocyte quality: good (19.8%) and poor (12.7%). Bull B showed higher blastocyst rates in good quality (25.7%) than poor quality oocytes (9.2%). On experiment 2, sperm penetrating capacity was evaluated for both bulls in oocytes of low quality, by sub-zonal sperm injection. The penetration rate observed 3h after the injection from bull A (34.0%) was lower than for bull B (44.3%) (p < 0.05). On experiment 3, both bulls were used for ICSI of good or low quality oocytes and no bull or oocyte quality effect has affected blastocyst rates. In conclusion, the use of reprogramming modulators such as Scriptaid, and alternative technologies such as ICSI are adequate to provide, at least under particular conditions, an increase in embryo development / O desenvolvimento embrionário depende da adequada interação nucleo-citoplasmática, o que é influenciado pelo tipo de célula doadora e pela qualidade do oócito receptor na clonagem, assim como por características dos espermatozóides e oócitos na fecundação in vitro (FIV). O primeiro estudo foi constituído de dois experimentos. O primeiro experimento avaliou o tipo de célula doadora de núcleo (células fibroblásticas - FIB vs. células mesenquimais derivadas de adipócitos - ADMSC), com diferentes citoplastos receptores (suíno reconstruído com dois hemi-citoplasto suínos; mosaico reconstruído com um citoplasto suíno e um citoplasto bovino; bovino reconstruído com dois hemi-citoplastos bovinos), no desenvolvimento de embriões suínos, clonados por transferência nuclear de células somáticas (TNCS). Os cultivos celulares foram estabelecidos a partir de dois suínos de raças ameaçadas de extinção (casco de mula e moura), sendo os embriões reconstruídos por clonagem manual e cultivados in vitro por 7 dias, em meio PZM-3. Os grupos mosaico e bovino apresentaram produção embrionária menor que o grupo suíno (5,5; 1,9 e 18,0%, respectivamente). O grupo ADMSC-mosaico do animal moura apresentou produção embrionária intermediaria em relação ao controle e ao bovino, e superior ao grupo FIB-mosaico do mesmo animal. A porcentagem de blastômeros fragmentados em embriões clivados e mórulas foi superior nos grupos mosaico e bovino, em relação ao grupo suíno. A dinâmica de fusão, observada conforme a migração mitocondrial entre os citoplastos, foi diferente em função do citoplasto empregado. No segundo experimento foi investigado o efeito do inibidor de desacetilases Scriptaid no desenvolvimento embrionário in vitro dos grupos suíno, mosaico e bovino, utilizando-se células fibroblastos do animal moura. Os embriões reconstruídos foram expostos a 500 nM de Scriptaid por 12 h, iniciando a partir da ativação, sendo então cultivados em PZM-3 por 7 dias. A taxa de produção de blastocistos do grupo controle (9,2 vs. 17,3%) e mosaico (1,0 vs. 9,2%) aumentou com o uso de Scriptaid (p < 0,05), enquanto a proporção de fragmentos em mórulas reduziu no grupo mosaico (9,8 vs. 2,8%) (p < 0,05). No entanto, o uso de Scriptaid não aumentou a produção embrionária no grupo bovino. No segundo estudo, constituído de três experimentos, avaliou-se a influência de distintas qualidades de gametas na produção embrionária por FIV, em bovinos. Nos experimentos 1 e 3, foram avaliadas as taxas de produção embrionária no sétimo dia de cultivo. No experimento 2, dois touros de comprovada eficiência na produção embrionária in vivtro, foram utilizados na FIV de oócitos de qualidade boa e ruim. O touro 1 não mostrou diferença na produção embrionária com oócitos de qualidade boa (19,8%) ou ruim (12,7%). O touro 2 apresentou maior produção embrionária com oócitos bons (25,7%) do que com oócitos ruins (9,2%). No experimento 2, a capacidade penetrante dos dois touros foi avaliada em oócitos de qualidade ruim através da técnica de injeção espermática sub-zonal. A taxa de penetração, observada 3 h apos a injeção, foi menor no touro 1 (34,0%) em comparação ao touro 2 (44,3%) (p < 0,05). No experimento 3, o sêmen de ambos touros foi usado para injeção intra-citplasmática de espermatozóides com oócitos de viii ambas qualidades. Não foi observado nenhum efeito de touro ou oócito na produção embrionária. Os resultados permitem concluir que o uso de moduladores da reprogramação como Scriptaid e tecnologias como a ICSI são alternativas adequadas para incrementar, ao menos em condições particulares, o desenvolvimento embrionário

Submitted by Verena Pereira (verenagoncalves@uefs.br) on 2018-07-03T23:23:34Z No. of bitstreams: 1 TESE 2018 - Doutorado RGV_UEFS - Carla Maria de Jesus Silva.pdf: 1687907 bytes, checksum: 3e9fe14e189c00f951079ca2a71e3c66 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-03T23:23:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE 2018 - Doutorado RGV_UEFS - Carla Maria de Jesus Silva.pdf: 1687907 bytes, checksum: 3e9fe14e189c00f951079ca2a71e3c66 (MD5) Previous issue date: 2018-03-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The watermelon (Citrullus lanatus) is a very important vegetable for a region of Northeast Brazil due to its adaptation as the natural conditions and the good characteristics of the fruit that are obtained. The aims of the current study are to assess watermelon genotype responses to calluses in anthers by using growth and temperature regulators, and to induce polyploidy through colchicine use (at different concentrations), exposure time, mechanical scarification and application methods. Anthers of Smile and Sugar Baby lines were inoculated in MS medium at different concentrations of 2.4-D or of BAP with 2.4-D, in combination with the pre-treatment (low temperature). Crimson Sweet cultivar seedlings were treated with different colchicine concentrations at two different times, with and without scarification, in order to induce polyploidy. Line LDRO was subjected to different colchicine concentrations at two different times and application methods: a) direct in the seed method (with, and without, scarification) (DSM, WE and WOE), b) Radicle emission method (ERM), c) Hypocotyl and root insertion point method (HRIM), d) At the apex of the seedling method (ASM) and e) Inverted hypocotyl method (IHM). Crimson Sweet flower buds were subjected to colchicine, at two different times, in order to induce polyploidy. Results have shown that 2.4-D often induced callus formation in both lines, but BAP/2.4-D interaction and pre-treatment did not increase the induction frequency. Crimson Sweet showed higher induction rate at 0.2% colchicine for 48h, WE. Line LDRO presented plants with tetraploid cells at 0.2% colchicine for 24 and 48h. The method 0.2% DSM, WE and WOE also generated plants with tetraploid cells. The diameter of treated pollen grains in flower buds have increased; the higher rate of non-reduced gametes induction was 16.07% and flower bud diameter (1.5mm) was estimated as adequate for induction / A melancia (Citrullus lanatus) ? uma hortali?a muito importante para a regi?o Nordeste do Brasil por sua adapta??o as condi??es clim?ticas e pelas boas caracter?sticas de fruto que se obt?m. Os objetivos desse trabalho foram avaliar as respostas de gen?tipos de melancia quanto ? indu??o de calos em anteras utilizando reguladores de crescimento e temperatura; e induzir a poliploidia mediante o uso da colchicina em diferentes concentra??es, tempos de exposi??o, escarifica??o mec?nica e m?todos de aplica??o. Anteras das linhagens de Smile e Sugar Baby foram inoculadas em meio MS sob diferentes concentra??es de 2,4-D ou BAP com 2,4-D, associado ao pr?-tratamento (baixa temperatura). Para indu??o de poliploidia, sementes da cultivar Crimson Sweet foram tratadas com diferentes concentra??es de colchicina, em dois tempos, com e sem escarifica??o. Para a linhagem LDRO, utilizaram-se diferentes concentra??es de colchicina em dois tempos e m?todos de aplica??o: a) M?todo direto na semente (com escarifica??o e sem escarifica??o) (MDS, CE e SE), b) M?todo da semente com emiss?o da rad?cula (MER), c) M?todo no ponto de inser??o do hipoc?tilo e raiz (MIHR), d) M?todo no ?pice da pl?ntula (MAP) e e) M?todo do hipoc?tilo invertido (MHI). Na indu??o de poliploidia em bot?es florais de Crimson Sweet utilizou-se colchicina em dois tempos. Os resultados mostraram que o 2,4-D induziu a maior frequ?ncia de calos nas duas linhagens, a intera??o BAP com 2,4-D e o pr?-tratamento, n?o aumentaram a frequ?ncia de indu??o. Para Crimson Sweet, o maior percentual de indu??o foi obtido com colchicina a 0,2% por 48 h, SE. Para LDRO, observou-se uma frequ?ncia de plantas com c?lulas tetraploides com colchicina a 0,2% por 24 h e 48 h. Nos m?todos 0,2% MDS CE e MHI observou-se tamb?m plantas com c?lulas tetraploides. Em bot?es florais, o di?metro dos gr?os de p?len tratados aumentou; o maior percentual de indu??o de gametas n?o reduzidos foi de 16,07% e; o di?metro em torno de 1,5 mm do bot?o floral foi estimado como adequado para indu??o