Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 448197.pdf: 1838361 bytes, checksum: 7924b0b15d7d6da94d6a3c9d188d1048 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Two species of parasites nematode of Angiostrongylidae family, genus Angiostrongylus intra-arterial localization are capable of human desease production: Angiostrongylus costaricensis and Angiostrongylus cantonensis. Both species are rodent s parasites and the human infection is considered incidental. On humans, A. cantonensis cause eosinophilic meningitis and A. costaricensis cause abdominal angiostrongiliase. Since there is no elimination of parasitic forms in human infection, diagnosis becomes difficult and molecular methods are necessary. After years of discovery of angiostrongil?ases, there are still many efforts in the study and development of a specific and sensitive diagnostic test capable of discriminating Angiostrongyliases of the other parasites. In this context, cross-reactivity becomes a problem in specificity of serologic tests. The main objective of this study was to analyze the sharing of antigens between Angiostrongylus spp. and parasites Strongyloides spp., Fasciola hepatica, Ascaris lumbricoides, Hymenolepis diminuta and Toxocara canis, and identify these molecules shared. To obtain antigens, some rats were captures and their feces analyzed by the method of Baerman addition to being seeded Agar Plates. Were obtained larvae of Strongyloides spp. and Angiostrongylus spp. In pulmonary arteries were found 11 female worms and 2 male worms of A. cantonensis, which led to the first report of the occurrence of this parasite in Rio Grande do Sul. In the small intestine was obtained a Strongyloides spp worm and analysis of small intestine were obtained Hymenolepis diminuta worms. From the adult worms of parasites were obtained antigens used in this study. Furthermore, we used antigens of allergens such as peanut, tomato, strawberry and pollen. To identify shared antigens, proteins were separated by one and two dimensional electrophoresis technique assayed by Western blot using sera of patients with angiostrongyliases. All antigens were recognized by sera from patients infected with angiostrongyliases, being a total of fourteen bands identified as being immunogenic. The fourteen bands were cut out of polyacrylamide gels and analyzed by mass spectrometry. The proteins identified were: Phosphoenolpyruvate carboxykinase, heat shock protein 70 (HSP70), DAPPUDRAFT hypothetical protein, 60 kDa Chaperonin 5, Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, sigma class GST Chain A, Glucose-6-phosphate isomerase, pyruvate dehydrogenase subunit E1, Glutamate dehydrogenase 2, arachin Ahy-1, Full = Allergen Ara h 1, clone P41B, Gly1. The data generated in this study show that there is sharing of antigens between organisms of different taxonomic groups, but also with allergens tested. Moreover, the description and analysis of shared molecular components can help in understanding the evolutionary history and phylogeny of these organisms. / Duas esp?cies de parasitos nemat?deos da fam?lia Angiostrongylidae, do g?nero Angiostrongylus de localiza??o intra-arterial s?o capazes de produzir doen?a em humanos: Angiostrongylus costaricensis e Angiostrongylus cantonensis. Ambas as esp?cies s?o parasitos pr?prios de roedores e a infec??o humana ? considerada acidental. No homem, A. cantonensis ? o causador da meningite eosinof?lica e A. costaricensis causador da angiostrongil?ase abdominal. Como n?o h? elimina??o de formas parasit?rias na infec??o humana, o diagn?stico se torna dif?cil e m?todos moleculares se tornam necess?rios. Depois de anos da descoberta das angiostrongil?ases, ainda h? muitos esfor?os no estudo e desenvolvimento de um teste de diagn?stico espec?fico e sens?vel capaz de discriminar as Angiostrongil?ases de outras parasitoses. Neste contexto, a reatividade cruzada se torna um problema na especificidade de testes sorol?gicos. O objetivo principal deste trabalho foi analisar o compartilhamento de ant?genos entre Angiostrongylus spp. e os parasitos Strongyloides spp., Fasciola hepatica, Ascaris lumbricoides, Hymenolepis diminuta e Toxocara canis, assim como identificar essas mol?culas compartilhadas. Para obten??o de ant?genos, algumas ratazanas foram capturas e suas fezes analisadas atrav?s do m?todo de Baerman al?m de terem sido semeadas em Placas de ?gar. Foram obtidas larvas de Strongyloides spp. e Angiostrongylus spp. Nas art?rias pulmonares de uma ratazana foram encontrados 11 vermes f?meas e 2 vermes machos de A. cantonensis, que deu origem ao primeiro relato da ocorr?ncia deste parasito no Rio Grande do Sul. No intestino delgado foi obtido um verme de Strongyloides spp e da an?lise do intestino delgado foram obtidos vermes de Hymenolepis diminuta. A partir dos vermes adultos dos parasitos, foram obtidos os ant?genos utilizados neste trabalho. Al?m disso, foram utilizados ant?genos de alergenos como o amendoim, tomate, p?len e morango. Para identifica??o dos ant?genos compartilhados, as prote?nas foram separadas por eletroforese uni e bidimensional ensaiadas pela t?cnica de Western-Blot utilizando-se soro de pacientes com angiostrongil?ases. Todos os ant?genos foram reconhecidos pelo soro de pacientes infectados com angiostrongil?ases, sendo um total de quatorze bandas identificadas como imunog?nicas. As quartorze bandas foram recortadas dos g?is de poliacrilamida e analisadas por espectrometria de massas. As prote?nas identificadas foram: Fosfoenolpiruvato carboxiquinase, Prote?na de choque t?rmico 70 (HSP70), Prote?na hipot?tica DAPPUDRAFT, 60 kDa Chaperonina 5, Gliceralde?do-3-fosfato-desidrogenase, Cadeia A sigma classe GST, Glucose-6-fosfato isomerase, Piruvato desidrogenase subunidade E1, Glutamato desidrogenase 2 , arachin Ahy-1, Full=Allergen Ara h 1, clone P41B , Gly1. Os dados gerados no presente trabalho demonstram que h? compartilhamento de ant?genos entre organismos de diferentes grupos taxon?micos, como tamb?m com os alergenos testados. Al?m disso, a descri??o e a an?lise de componentes moleculares compartilhados podem ajudar na compreens?o da hist?ria evolutiva e da filogenia destes organismos.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DalianaMBOS_DISSERT.pdf: 1178965 bytes, checksum: a8c57235d95835138c537bc774c7af70 (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / The expression of human leukocyte antigen G (HLA-G) and human leukocyte antigen E (HLA-E) in physiological and pathological processes remains unknown, it is believed that these molecules play a fundamental role in the establishment and maintenance of immune tolerance by inhibiting the functions of immunocompetent cells. In literature we found no published study involving the bacterium Helicobacter pylori (H. pylori) with expression of HLA-G and HLA-E. The objective this study is investigated the expression of this protein in gastric biopsies of patients with the bacterium H. pylori. Sixty-four biopsies of the patients with diagnosis of infection by H. pylori were evaluated to expression of HLA-G and HLA-E. The samples were stratified according to the presence of carcinoma or peptic ulcers. Patients without H. pylori were used to control. To investigate the expression of this protein were used immunohistochemistry technique with monoclonal antibody anti-HLA-G and anti-HLA-E. Other criteria such as analysis of the inflammatory infiltrate (hematoxylin-eosin) and identification of H. pylori (Giemsa) were analyzed. We detected HLA-G and HLA-E molecules in the most samples containing ulcer and gastric carcinoma. In negative control group was not detected the presence of HLA-G and HLA-E. The presence of H. pylori seems modulate the expression of HLA-G and HLA-E, favoring the evolution of infection, giving different degrees of gastric lesion in epithelium of these patients / A express?o do ant?geno leucocit?rio humano G (HLA-G) e do ant?geno leucocit?rio humano E (HLA-E) em processos fisiol?gicos e patol?gicos permanece pouco conhecida. Acredita-se que essas mol?culas desempenham papel fundamental no estabelecimento e manuten??o da toler?ncia imunol?gica, inibindo as fun??es das c?lulas imunocompetentes. Na literatura internacional, at? o momento, n?o foi encontrado nenhum estudo publicado correlacionando Helicobacter pylori (H. pylori) com express?o de HLA-G e HLA-E. O presente trabalho tem como objetivo correlacionar a express?o dessas prote?nas em bi?psias g?stricas de pacientes acometidos com H. pylori. Sessenta e quatro esp?cimes g?stricas de pacientes acometidos com H. pylori foram avaliados para express?o de HLA-G e HLA-E. As amostras foram estratificadas de acordo com a presen?a de carcinoma ou de ?lcera p?ptica. Como controle foram analisados esp?cimes g?stricas de pacientes vivos sem H. pylori. Para detectar a express?o dessas mol?culas utilizou-se a t?cnica de imunohistoqu?mica com os anticorpos monoclonais anti-HLA-G e anti-HLA-E. Outros crit?rios como an?lise do infiltrado inflamat?rio (hematoxilina-eosina) e identifica??o do H. pylori (Giemsa) foram analisados. As mol?culas de HLA-G e HLA-E foram detectadas em grande parte das amostras contendo ?lcera e carcinoma g?strico. No grupo controle n?o foi detectada a presen?a de HLA-G e HLA-E, indicando que a bact?ria H. pylori modula a express?o dessas mol?culas no grupo dos pacientes que apresentaram ?lcera ou carcinoma g?strico. A presen?a da bact?ria H. pylori parece modular a express?o do HLA-G e do HLA-E, favorecendo assim a evolu??o da infec??o, o que confere diferentes graus de les?o do epit?lio g?strico desses pacientes

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 407730.pdf: 978627 bytes, checksum: 207551daea7acbf96e0c911484083687 (MD5) Previous issue date: 2008-10-29 / Herpes Simplex V?rus-1 (HSV-1) ? um membro da fam?lia Herpesviridae e subfam?lia alfaherpesvirinea bastante disseminado entre os seres humanos. Esse v?rus inicia seu processo de infec??o a partir das c?lulas epiteliais da superf?cie da pele e mucosas, atingindo o sistema nervoso perif?rico. O HSV-1 inicia a infec??o atrav?s da mucosa oral e fica localizado na forma latente no nervo trig?mio da face, algumas vezes, pela a??o de fatores end?genos ou ex?genos, esse v?rus volta a sua forma ativa, ocasionando a reincidiva . Nesse processo de reativa??o do v?rus ele pode se localizar, na mucosa oral (gengivoestomatite herp?tica), no nervo ?ptico (queratite herp?tica) e no sistema nervoso central (encefalite). No caso da gestante, a reativa??o herp?tica pode ser assintom?tica, o que pode infectar o filho no momento do parto, levando a danos neurol?gicos irrevers?veis ou a morte. O processo de lat?ncia ? coordenado por dois mecanismos principais, a express?o dos genes LAT e a resposta imunol?gica. As c?lulas da resposta imune que bloqueiam a reativa??o viral a partir do nervo s?o os linf?citos T CD8+ de mem?ria. Esses linf?citos ficam justapostos ? membrana do corpo celular do neur?nio, interagindo com o ep?topo SSIEFARL de uma glicopote?na gB do envelope viral. Os linf?citos T CD8+ SSIEFARL espec?ficos produzem citocinas, como IFN-g, que penetram no neur?nio e impedem a express?o de genes que est?o envolvidos na constru??o do caps?deo, determinantes para forma??o de novos v?rions. Quando o n?mero dessas c?lulas diminui, o v?rus volta a sua forma ativa. A prolifera??o e fun??o das c?lulas T CD8+ ? controlada por citocinas, principalmente a IL-15 e a IL-21. Muitos estudos indicam que elas t?m um papel na prolifera??o homeost?tica de c?lulas T CD8+. Nesse trabalho, foram elaboradas constru??es g?nicas com o DNA da IL-15 e da IL-21 para avaliar o potencial dessas citocinas na otimiza??o da resposta T CD8+ de mem?ria ao HSV-1. In vitro, a IL-21 aumentou a freq??ncia de c?lulas T CD8+, com ou sem estimula??o de TCR. Na fase efetora, a IL-15 e IL-21 aumentaram os n?meros de c?lulas T CD8+ ant?genoespec?ficas produtoras de IFN-g. Para os estudos de mem?ria foi utilizado um sistema de transfer?ncia de c?lulas SSIEFARL transg?nicas de camundongos CD90.2 doadores para camundongos CD90.1 receptores. Os camundongos receptores foram infectados com HSV-1 pela rota intraperitoneal e tratados com o plasm?deo contendo de cada citocina ou a combina??o deles, um plasm?deo que codificava a glicoprote?na gB do HSV-1 foi utilizado com fonte de ant?geno Os resultados mostraram que cada pIL-15 ou pIL-21 isoladamente induz a prolifera??o de c?lulas T CD8+ de mem?ria ao herpes e que a administra??o do ant?geno n?o teve grande influ?ncia. Por outro lado, a combina??o de pIL-15, pIL-21 e pgB foi mais eficiente, tanto no aumento dos n?meros de c?lulas T CD8+, quanto na express?o de IFN-g.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 408007.pdf: 7713390 bytes, checksum: bf92d92b7f1e311023e32849423ed23c (MD5) Previous issue date: 2008-12-17 / O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus ? um ectoparasito hemat?fago de bovinos, amplamente distribu?do nos rebanhos da Am?rica, ?sia, ?frica e Oceania. O uso de acaricidas ? o principal m?todo para o controle do carrapato, por?m o custo das drogas e da m?o-de-obra requerida para aplicar o tratamento, o aparecimento crescente de carrapatos resistentes a v?rios acaricidas, a perman?ncia de res?duos qu?micos nos alimentos e a polui??o ambiental decorrente do seu uso tornam importante o desenvolvimento de outras formas de controle. O desenvolvimento de um m?todo de controle imunol?gico como uma alternativa para o controle qu?mico depende da identifica??o de mol?culas antig?nicas que geram uma resposta imune protetora. Como bovinos desenvolvem resist?ncia ao carrapato durante sucessivas infesta??es, a an?lise da resposta imune desenvolvida por bovinos infestados pode tornar-se de grande import?ncia na busca por ant?genos protetores. ELISA e Western Blot foram utilizados para investigar o padr?o de respostas de anticorpos de seis bovinos infestados doze vezes com R. microplus (seis infesta??es pesadas seguidas por seis infesta??es leves) contra extratos de gl?ndula salivar, intestino e larva. Durante infesta??es pesadas foram observados n?veis maiores de IgGs reconhecendo extratos prot?icos de gl?ndula salivar, intestino e larva, e uma diminui??o no n?mero e no peso de carrapatos que completam o ciclo parasit?rio. O padr?o mudou iniciando na s?tima infesta??o, mostrando uma diminui??o nos n?veis de IgG, e um aumento inicial seguido por uma significante diminui??o na propor??o de carrapatos que completam o ciclo parasit?rio. O n?mero de mol?culas reconhecidas em Western Blot foi maior pelos soros das infesta??es pesadas do que das infesta??es leves, embora uma grande varia??o nos perfis detectados pode ser visto entre os bovinos. Esses resultados indicam que n?veis de anticorpos contra o carrapato n?o est?o necessariamente relacionados de forma direta com n?veis de resist?ncia. Al?m disso, infesta??es pesadas e leves parecem modular de forma diferente a magnitude da resposta humoral e possivelmente os mecanismos imunes na aquisi??o natural de resist?ncia ao carrapato.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 432438.pdf: 2038170 bytes, checksum: 505895940d1e38c8e3925441d22f197d (MD5) Previous issue date: 2011-03-29 / Vermes do g?nero Angiostrongylus s?o parasitos intra-arteriais em roedores. A. costaricensis vive no sistema mesent?rico, enquanto A. cantonensis habita as art?rias pulmonares de ratos. No homem, hospedeiro acidental destas parasitoses, elas causam a gastroenterite eosinof?lica e meningite devido ? migra??o de adultos jovens de A. cantonensis nos tecidos do sistema nervoso central. O exame parasitol?gico de fezes n?o pode ser utilizado para diagn?stico humano das angiostrongil?ases porque n?o s?o encontradas larvas nas fezes, o que torna importante o desenvolvimento de t?cnicas moleculares. Os m?todos de imunodiagn?stico empregando ant?genos brutos apresentam reatividade cruzada com outras parasitoses e tamb?m resultados falso-negativos. Com o objetivo de aprimorar o diagn?stico molecular das angiostrongil?ases, direcionamos os esfor?os na tentativa de reduzir a complexidade dos extratos de ant?genos a fim de encontrar prote?nas mais espec?ficas e sens?veis para o diagn?stico. Primeiramente foi testado o uso de ant?genos de A. cantonensis para o diagn?stico de A. costaricensis pela t?cnica de ELISA. A partir disso, ant?genos de tubo reprodutor (TR) de f?meas de A. cantonensis foram fracionados por diversas t?cnicas e sua reatividade a soros controle foi testada por Western blot (WB). Colunas de prote?na A foram incubadas com soro de pacientes infectados, por?m este fracionamento n?o teve sucesso. Foi realizado o fracionamento subcelular dos extratos TR e com a fra??o de ant?genos de membrana celular (F2) foi realizado o fracionamento por ponto isoel?trico. As fra??es de pH apresentaram reatividade espec?fica aos soros controle positivos quando submetidas ao WB, sugerindo que as prote?nas encontradas possam ser importantes alvos para o diagn?stico das angiostrongil?ases. A possibilidade de clonar as prote?nas de interesse para produ??o em grande escala, poder? constituir fonte permanente de ant?genos com redu??o do volume de trabalho e do emprego de animais no laborat?rio

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-28T12:30:06Z No. of bitstreams: 1 469532 - Texto Completo.pdf: 772339 bytes, checksum: b1ca6d60639abd0248f0ea693f8f7d1f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-28T12:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 469532 - Texto Completo.pdf: 772339 bytes, checksum: b1ca6d60639abd0248f0ea693f8f7d1f (MD5) Previous issue date: 2015-03-04 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Introduction: There has been a continuous search for safe tests that can predict antibody-mediated rejection in organ transplants, and the positive complement dependent cytotoxic crossmatch, developed in the 1960?s, was until recently considered the gold standard and the main test for prediction of rejection. The new methods for assessing humoral immunity, notably flow cytometric crossmatching and the Luminex? technology significantly increased the sensitivity of these assessments, but also the complexity in the interpretation of these results, as well as in the correlation of different methodologies. Despite the sensitivity of these methods, not any donor-specific antibody detected by solid phase assay results in positive or negative crossmatch. Information obtained with the specificities (such as fluorescence intensity) of anti-HLA antibodies may define the immunological risk for the patient, assisting in the selection of the ideal donor, as well as in the immunosuppressive regimen, for prophylactic and therapeutic uses. Objectives: The present study aimed to establish a cut-off point at the fluorescence intensity of antibodies detected by the panel Single Antigen Beads of class I and II that correlates to positive flow cytometric crossmatching (FCXM). It also aimed to assess whether there are differences between the use of DSAs with higher MFI alone and the sum of all the DSAs of a given patient. Methodology: A cross-sectional study of two databases of results of panels (Luminex?) and flow cytometric crossmatching of patients on a waiting list for kidney transplantation registered at the Laborat?rio de Imunologia de Transplantes da Santa Casa de Miseric?rdia, in Porto Alegre. Database 1 was composed of 1,316 crossmatches against deceased donors and panels of anti-HLA antibodies for loci A, B and DRB1 performed in 2010. Database 2 was composed of 2,288 crossmatches against deceased donors and panels of anti-HLA antibodies for loci C and DQB1 performed between July 2013 and July 2014. As an inclusion criterion for both databases, only samples with results available in the Panel on the same date of the serum tested in flow cytometry crossmatches were used resulting in 834 samples in database 1. Besides, for database 2 only samples with donor-specific antibody (DSA) for loci C and or DQB1, resulting in 348 crossmatches. Results and Conclusions: we demonstrated that 97.6% of the patients with DSAs anti-HLA- ABDRB1 with MFI ? 5000 resulted in positive FCXM. These were the optimal MFI cut-off values for donor selection when we assessed sensitivity and specificity for correlation with positive flow cytometric crossmatching. For DSAs HLA-DQB1, fluorescence intensities above 15,000 MFI offer high specificity (97.8%). Anti-HLA-C sensitization is less frequent (n=40). Only 5 patients showed MFI?5000. Of these, the crossmatch was positive in only one patient (20%). Virtual crossmatch is a resource that can assist in making pre-kidney transplantation decisions. / Introdu??o: A busca por testes seguros que possam prever a rejei??o mediada por anticorpo em transplantes de ?rg?os tem sido cont?nua e a prova cruzada por citotoxicidade dependente de complemento, desenvolvida na d?cada de 60, at? pouco tempo era considerada padr?o ouro e principal teste preditor de rejei??o. Os novos m?todos de aferi??o da imunidade humoral, notadamente a prova cruzada por citometria de fluxo e a tecnologia Luminex?, aumentaram significativamente a sensibilidade destas avalia??es, mas tamb?m a complexidade na interpreta??o destes resultados, assim como na correla??o das diferentes metodologias Embora bastante sens?vel, nem todo anticorpo doador espec?fico detectado pelo teste de fase s?lida resulta em uma prova cruzada positiva ou com rejei??o. As informa??es obtidas com as especificidades (assim como a intensidade de fluoresc?ncia) dos anticorpos anti-HLA podem definir o risco imunol?gico do paciente, auxiliando a escolha do doador ideal, bem como do esquema imunossupressor, tanto profil?tico quanto terap?utico. Objetivos: O objetivo deste trabalho foi estabelecer um ponto de corte no n?vel de fluoresc?ncia de anticorpos detectados pelo painel Single Antigen Beads de classe I e II que se correlacione com a prova cruzada positiva por citometria de fluxo (XMCF). Tamb?m objetivou-se avaliar se existem diferen?as entre o emprego de apenas DSAs com maior MFI e a soma de todos os DSAs de um determinado paciente. Metodologia: Foi realizado estudo transversal de dois bancos de dados de resultados de Paineis (Luminex?) e prova cruzada por citometria de fluxo de pacientes em lista de espera para transplante renal cadastrados no Laborat?rio de Imunologia de Transplantes da Santa Casa de Miseric?rdia de Porto Alegre. O banco n?mero 1 era composto de 1316 provas cruzadas contra doadores falecidos e pain?is de anticorpos anti-HLA dos loci A, B e DRB1, realizados no ano de 2010. O banco n?mero dois era composto de 2288 provas cruzadas contra doadores falecidos e pain?is de anticorpos anti-HLA dos loci C e DQB1 realizadas entre julho de 2013 e julho de 2014. Como crit?rio de inclus?o para ambos os bancos de dados foram utilizadas somente amostras que possu?am resultados de Painel na mesma data do soro testado nas provas cruzadas por citometria de fluxo, resultando em 834 amostras no banco de n?mero 1. Al?m disso, para o banco de dados n?mero 2 foram utilizados apenas amostras que possu?am anticorpo espec?fico contra o doador (DSA) dos loci C e ou DQB1, resultando em 348 provas cruzadas. Resultados e Conclus?es: demonstramos que 97,6% dos pacientes com DSAs anti-HLA- ABDRB1 com MFI?5000 resultaram em XMCF positiva. Os n?veis de MFI nesta faixa corresponderam aos melhores pontos de corte de escolha quando avaliamos a sensibilidade e especificidade para a correla??o com a prova cruzada positiva por citometria de fluxo. Para os DSAs HLA-DQB1, n?veis de fluoresc?ncia acima de 15.000 MFI ofereceram elevada especificidade (97,8%). A sensibiliza??o anti-HLA-C ? menos frequente (n=40). Apenas 5 pacientes apresentaram MFI?5000. Destes, apenas em um (20%) a prova cruzada foi positiva. A prova cruzada virtual ? um recurso que pode auxiliar na tomada de decis?es pr?-transplante renal.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 440746.pdf: 8186310 bytes, checksum: 2ddc0fe8a6260707c7754fc8b9f27f5b (MD5) Previous issue date: 2012-05-07 / The Angiostrongylus genus includes two species that can infect humans, A. cantonensis and A. costaricensis. They may cause infections known as eosinophilic meningitis and abdominal angiostrongyliasis, respectively. In A. costaricensis infection, eggs and larvae are central elements in the inflammatory reactions, which may get worse with death of the worms. The currently available anthelmintics act on the parasite essential metabolic pathways with a killing effect. Therefore, an alternative substance to treat angiostrongyliasis, acting mainly in worms reproduction is necessary. An in vitro study conducted with Schistosoma mansoni showed inhibition of oviposition by Phenanthroline. In another study with Caenorhabditis elegans, it was shown that serotonin increases the egg-laying rate of the female nematode, besides controlling the change of its posture state (rest and activation). Serotonin is a neurotransmitter present in vertebrates and invertebrates. In order to test the effect on egg laying of Angiostrongylus spp., two substances that interfere with serotonin neurotransmission in humans, Buspirone and Pizotifen, were used in an experimental model in vivo. 28 rodents of species Rattus norvegicus were divided into three groups and infected with 100 L3 of A. cantonensis: a control group (untreated) and two groups treated with each substance. The substances were administered as soon as all rodents started releasing larvae, once a day, orally, for 10 days, at a concentration of 0.03 mg / mL each. In this period rodent feces were collected daily for counting the number of L1 and after 10 days the animals were euthanized for collection of the worms. The average number of larvae released in feces was 37,934 by the Control group, 10,658 by the Buspirone group and 6,658 by the Pizotifen group. The worms were counted and separated by sex: in the Control group 59 females and 40 males were obtained; in Buspirone group 86 females and 41 males were found; and in the Pizotifen group 83 females and 64 males were counted. The comparison of data from Control and Experimental groups was statistically analyzed by ANOVA and no significant difference was observed. Females were measured using a millimetric eyepiece installed in a stereomicroscope. The ANOVA analysis resulted in a significant difference between Control and Pizotifen, which had an average size of 18 mm, compared with to average size of 19 mm of Control, indicating that Pizotifen would have some effect in the nematodes development, but not affecting their reproduction. These results indicate that the search for alternative drugs that act on egg laying needs a better understanding of the pathways that regulate the reproductive system of parasitic organisms. / O g?nero Angiostrongylus engloba duas esp?cies A. cantonensis e A. costaricensis, que podem infectar o ser humano e causar infec??es conhecidas como meningite eosinof?lica e angiostrongil?ase abdominal, respectivamente. Na infec??o por A. costaricensis, ovos e larvas s?o elementos centrais nas rea??es inflamat?rias podendo haver o agravamento dessas les?es, pela morte dos vermes. Os anti-helm?nticos atualmente dispon?veis, atuam em vias metab?licas essenciais ao parasito, culminando com a morte dos vermes. Portanto, uma droga alternativa para o tratamento das angiostrongil?ases, que atue principalmente na reprodu??o dos vermes, se torna necess?ria. Um estudo in vitro realizado com Schistosoma mansoni demonstrou a inibi??o da oviposi??o pela fenantrolina. Em outro estudo com Caenorhabditis elegans foi demonstrado que a serotonina estimula o aumento da taxa de ovos liberados pela f?mea do nemat?deo, al?m de controlar a altera??o do seu estado de postura (repouso e ativa??o). A serotonina ? um neurotransmissor presente tanto em vertebrados como em invertebrados. Com o objetivo de testar o efeito na oviposi??o de Angiostrongylus cantonensis, duas subst?ncias que interferem na neurotransmiss?o da serotonina em humanos, Buspirona e Pizotifeno, foram utilizadas em modelo experimental in vivo. 28 roedores da esp?cie Rattus norvegicus foram divididos em 3 grupos e infectados com 100 L3 de A. cantonensis: um grupo controle (n?o tratado) e 2 grupos tratados com cada subst?ncia. As subst?ncias foram administradas a partir do momento em que todos os roedores iniciaram a larvipostura, uma vez ao dia por via oral, durante 10 dias, numa concentra??o de 0,03 mg/mL cada. Neste per?odo as fezes dos roedores foram recolhidas diariamente para a contagem do n?mero de L1 eliminadas e, ap?s os 10 dias, os animais foram eutanasiados para coleta dos vermes. A m?dia de larvas eliminadas nas fezes para o grupo controle foi 37.934, para o grupo Buspirona 10.658 e para o grupo Pizotifeno 6.658. Os vermes foram contados e separados pelo sexo: no grupo controle foram obtidas 59 f?meas e 40 machos; no grupo Buspirona foram encontradas 86 f?meas e 41 machos e no grupo Pizotifeno 83 f?meas e 64 machos. A compara??o dos dados dos grupos experimentais e do controle foram analisadas estatisticamente pelo teste ANOVA e nenhuma diferen?a significativa foi verificada. As f?meas foram medidas atrav?s de uma ocular milimetrada instalada em um estereomicrosc?pio. A an?lise foi feita tamb?m pelo teste ANOVA e resultou numa diferen?a significativa entre o grupo controle e o Pizotifeno, no qual teve um tamanho m?dio de 18 mm, em compara??o com o tamanho m?dio do controle de 19 mm, indicando que o Pizotifeno poderia ter algum efeito no desenvolvimento dos nemat?deos, por?m n?o afetando a reprodu??o. Estes resultados indicam que para a procura de drogas alternativas, que atuem na oviposi??o, ? necess?rio uma melhor compreens?o das vias reguladoras do sistema reprodutivo dos organismos parasitos.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Isabele da Costa Angelo.pdf: 1629986 bytes, checksum: 663b35706e830a57e185c3e0a68096c9 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Boophilus microplus is an ectoparasite which causes great economic losses around the world. The exclusive use of acaricides and the inadequate management have conducted the development of resistance in ticks populations, environmental and food contamination by acaricides and their residues. The use of entomopathogenic fungi to arthropods control has shown interesting responses. Several studies have proved the pathogenicity of fungi toward various ticks species. The aim of the present study was to evaluate the effect of Isaria farinosa, I. fumosorosea, Paecilomyces lilacinus and Lecanicillium lecanii toward engorged females, eggs and larvae of B. microplus tick. The isolates were cultured on malt extract medium at 25 ? 1?C and 80% of relative humidity for 15 days. Conidial suspensions were prepared in Tween 80 water solution (0.1% v/v). There were 4 treatment groups according to the following conidial concentrations: 105, 106, 107 and 108 conidia mL-1. The control group was made up of water and Tween 80 only (0.1% v/v). Treatment was based on immersion of the specimen in 1 mL of the conidial suspension. Each treatment group was made up of 10 repetitions. Changes in biology of engorged females, eggs viability and larvae mortality, were observed every 5 days up to the 20th day after treatment. The results have shown that L. lecanii changed biological parameters in engorged females through the reduction in posture period, nutritional rate, eggs production rate, and increase of incubation period. Isaria farinosa has shown reduction in posture period and in nutritional rate. Paecilomyces lilacinus was the unique isolate able to reduce the eclosion period of larvae from infected females. Isaria fumosorosea has reduced the nutritional rate and was the unique isolate that changed significantly in eclosion period when eggs were infected. Conidial concentrations reduced reproduction capacity of engorged females. The isolates of I. fumosorosea and L. lecanii have presented major potential to control B. microplus engorged females. All tested isolates have shown pathogenicity toward unfed larvae of B. microplus after in vitro infection. / Boophilus microplus ? um ectoparasito que causa grandes perdas na pecu?ria mundial. A utiliza??o exclusiva de produtos qu?micos no controle de carrapatos, associada ao manejo inadequado tem conduzido o desenvolvimento de popula??es de carrapatos resistentes, e a contamina??o dos produtos de origem animal e do ambiente pelos seus res?duos. O uso de fungos entomopatog?nicos no controle de artr?podes tem se tornado uma abordagem cada vez mais atrativa. In?meros trabalhos comprovam experimentalmente a patogenicidade dos fungos sobre diversas esp?cies de carrapatos. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito in vitro de Isaria farinosa, I. fumosorosea, Paecilomyces lilacinus e Lecanicillium lecanii sobre f?meas ingurgitadas, ovos e larvas de B. microplus. Os fungos foram repicados em meio de cultura extrato de malte, e mantidos em c?mara climatizada sob temperatura de 25?C ? 1 e umidade relativa de 80% por quinze dias. Suspens?es conidiais foram preparadas a partir do crescimento do fungo, cujos con?dios foram adicionados a solu??o de ?gua destilada e Tween 0,1%. As concentra??es 105, 106, 107 e 108 con?dios mL-1 formaram os grupos tratamento, juntamente com o grupo controle, constitu?do por ?gua destilada est?ril e Tween 0,1%. O tratamento constituiu-se de um mililitro da concentra??o conidial testada, e cada grupo foi formado por 10 repeti??es. Os par?metros de avalia??o observados para demonstrar o efeito dos fungos sobre o carrapato foram as altera??es biol?gicas de f?meas ingurgitadas, viabilidade de ovos tratados e percentual de mortalidade de larvas, acompanhado a cada cinco dias at? o 20? dia ap?s infec??o. Os resultados mostraram que L. lecanii causou altera??es nos par?metros biol?gicos de f?meas ingurgitadas, diminuindo o per?odo de postura, o ?ndice nutricional, o ?ndice de produ??o de ovos, e aumentando o per?odo de incuba??o. Isaria farinosa mostrou redu??o no per?odo da postura e no ?ndice nutricional de f?meas ingurgitadas. P. lilacinus foi o ?nico fungo capaz de reduzir o per?odo de eclos?o das larvas provenientes da infec??o de f?meas ingurgitadas. I. fumosorosea reduziu o ?ndice nutricional e foi o ?nico isolado que causou altera??o significativa no per?odo de eclos?o de larvas provenientes da infec??o de ovos. Diferentes concentra??es dos entomomopat?genos reduziram o potencial reprodutivo das f?meas ingurgitadas dos grupos tratados. Os isolados de I. fumosorosea e L. lecanii apresentaram maior potencial de controle para f?meas ingurgitadas de B. microplus. Todos os isolados testados mostraram patogenicidade para larvas n?o alimentadas de B. microplus ap?s infec??o in vitro.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Thiago Campanharo Bahiense.pdf: 1378749 bytes, checksum: ef9fdcee9b7f5b82132b5b8d53a3fbe5 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Boophilus microplus can cause several cattle pathology and thus economic losses. Moreover, this tick species is able to develop resistance to acaricides. The biological control is a great promise to control cattle ticks populations. The aim of the present study was to contribute to the development of a new complementary method to control B. microplus. Therefore, it has been evaluated the compatibility between deltamethrin and the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae toward B. microplus tick in a stable test. It was used a tick strain resistant to pyrethroid and calves were artificially infested. A total of 8 calves were held in individual housing and infested with B. microplus larvae every other day for 25 days. After that, 4 treatments were realized with 2 calves per group. The control group was tested receiving just water; the second group was tested receiving M. anisopliae in a 108 conidia ml-1 suspension; the third one was tested receiving a 25 ppm deltamethrin solution; and the forth group was tested receiving a solution containing a 108 conidia ml-1 M. anisopliae suspension associated with a 25 ppm deltamethrin solution. The mortality rate was 32.57% in the second group, 38.58% in the third group, and 30.92% in the forth one. The main changes in ticks biology were a decreased nutritional rate until the forth day after treatment. The deltamethrin group was an exception with a decreased rate until the second day after treatment. The production of eggs rate was also decreased until the second day after treatment in all 3 tested groups. Therefore, the association between deltamethrin and B. bassiana and M. anisopliae could be used for B. microplus integrated management. Based on compatibility between acaricide and biological agents, it could be possible the use of both simultaneously on infested cattle. Thus, it is possible to control ticks resistant to deltamethrin if an association with entomogenous fungi such as Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae is established. The best performance of these fungi, associated or not with deltamethrin, was observed for a short period after treatment. / O principal ectoparasito dos bovinos ? o carrapato Boophilus microplus, que tem como caracter?stica grande capacidade de resistir ?s adversidades do meio ambiente sendo causador de diversas patologias, severos preju?zos econ?micos aos produtores e possui grande capacidade de desenvolver resist?ncia a carrapaticidas qu?micos. As pesquisas realizadas utilizando controle alternativo de B. microplus t?m apontado que os fungos que naturalmente promovem a infec??o e at? a morte de diversas esp?cies e est?gios de vida de carrapatos s?o, promissores candidatos a esse papel de agente de controle microbiano. Com o objetivo de fornecer subs?dios que complementar?o o controle desta parasitose, avaliou-se in vivo a compatibilidade entre a deltametrina e os fungos Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae sobre cepa resistente de B. microplus a deltametrina, atrav?s do teste de est?bulo, com bovinos infestados artificialmente. Foram utilizados oito bezerros, para cada bioensaio, alojados individualmente, infestados em dias alternados com larvas de B. microplus por um per?odo de 25 dias. Ao t?rmino da infesta??o, foram realizados quatro tratamentos com dois animais por grupo. O grupo controle recebeu somente ?gua; o grupo tratado com fungo recebeu suspens?o conidial na concentra??o de 108 con?dios/ml; o grupo tratado com deltametrina recebeu solu??o na concentra??o de 25 ppm e o grupo tratado com associa??o recebeu suspens?o do fungo na concentra??o de 108 con?dios/ml com deltametrina a 25 ppm. Os resultados foram obtidos atrav?s da contagem di?ria dos carrapatos desprendidos do corpo dos animais, al?m da avalia??o dos par?metros biol?gicos das f?meas, as quais foram incubadas em c?mara climatizada. Realizaram-se dois bioensaios, sendo o primeiro com o fungo Metarhizium anisopliae, onde os percentuais m?dios de mortalidade foram: 32,57% para este fungo, 38,58 % para deltametrina e 30,92% para associa??o entre ambos. No segundo bioensaio foi utilizado o fungo Beauveria bassiana, onde os percentuais m?dios de mortalidade foram: 26,06% para este fungo, 64,30% para deltametrina e 70,64% para associa??o entre ambos. Quanto aos par?metros biol?gicos, as principais altera??es em ambos bioensaios foram a redu??o do ?ndice nutricional, principalmente at? o quarto dia ap?s tratamento, com exce??o da deltametrina que reduziu at? o segundo dia ap?s o tratamento. O ?ndice de produ??o de ovos s? foi reduzido at? o segundo dia ap?s tratamento para todos os grupos do primeiro bioensaio e somente no quarto dia ap?s o tratamento para o B. bassiana. Sendo assim, a associa??o entre deltametrina e os fungos testados pode ser utilizada como ferramenta para o manejo integrado de B. microplus, demonstrando compatibilidade in vivo entre acaricida qu?mico e bio l?gico, sendo poss?vel sua utiliza??o, simult?nea sobre bovinos infestados com B. microplus. O melhor desempenho desses fungos, associados ou n?o, foi observado em um per?odo curto ap?s o tratamento.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-04-20T19:55:43Z No. of bitstreams: 1 2014 - Natalia Soares Carvalho de Souza.pdf: 1682645 bytes, checksum: 735e64aaebc51422ceec8e7b4eda4d99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-20T19:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014 - Natalia Soares Carvalho de Souza.pdf: 1682645 bytes, checksum: 735e64aaebc51422ceec8e7b4eda4d99 (MD5) Previous issue date: 2014-08-26 / CAPES / Premenopausal women are less prone to develop cardiovascular diseases than men and this advantage do not persist in postmenopausal women. Thus herein we aimed to investigate the gender difference and the estrogen influence in cardiac function, fluid balance and thyroid status, in Wistar rats subjected to experimental model of myocardial infarction (MI). In the first step, adult male (n = 18) and female (n = 21) rats underwent experimental MI (MIm and MIf,) or sham-operation (ShamM and ShamF) respectively. One and four weeks post-MI rats were placed in metabolic cages, subjected to echocardiography (ECHO), electrocardiography and then euthanized for blood sample collection and tissue collection (heart, lung and liver). In the second step female rats were ovariectomized (n = 24) or continued intact (n = 21), two weeks later they were subjected to MI (MIOVX and MIINT, respectively) or sham operation (ShamOVX and ShamINT). Four weeks post-MI, they were subjected to the same evaluations of the first step, not only the electrocardiography. In the third step, female rats were subjected to ovariectomy and treated with estrogen (E2) (n = 13) or vehicle (n = 22). Two weeks later they underwent experimental MI (MIOVX+E2 and MIOVX+Veh). Four weeks post-MI they were subjected to the same evaluations of the second step. Male infarcted rats developed cardiac dysfunction (shortening fraction, SF, reduction, ~ 70%) and fluid homeostasis changes (sodium intake increasing, ~ 146% and urinary volume reduction, ~55%) earlier than female, in the first week post-MI while female presented these changes (SF reduction, ~28% and sodium intake increasing, ~143%) only in the fourth week and attenuated compared to male. MIM showed reduction in LF/HF ratio (~70%), one week post-MI. And only male rats presented hypothyroidism after MI (T4 ~52% and T3 ~38%, reduction). We also verified reduction in SF (~55%), increasing in LA/Ao ratio (~75%) and changes in fluid balance (sodium intake reduction, ~67% and urinary volume reduction, ~40%) more pronounced in MIOVX than in MIINT. MIOVX group reduced thyroid hormone levels after MI (T3 ~35%). MIOVX+Veh showed more pronounced reduction in SF (~55%) and increasing in LA/Ao ratio (~75%) than the MIOVX+E2 group. The sodium intake reduced in MIOVX+Veh (~67%) and in the urinary volume we verified significant reduction in ShamOVX+Veh and MIOVX+Veh groups compared to ShamOVX+E2 and MIOVX+E2 groups (P < 0.05). Serum T3 reduced significantly (~35%) only in MIOVX+Veh group. The pathophysiological development of heart failure post-MI was attenuated in female compared to male. And female rats subjected to MI presented fluid balance more favorable and related to the less pronounced development of heart failure. Estrogen seems to influence positively the cardiac function and attenuate the dysfunction that occur post-MI. The euthyroid status in female intact do not seems to be determinant to the less pronounced development of heart failure. / Sabe-se que mulheres na pr?-menopausa apresentam menor preval?ncia de doen?as cardiovasculares do que homens e, esta diferen?a desaparece ap?s a menopausa. Sendo assim, o presente estudo buscou avaliar o dimorfismo sexual e a influ?ncia do estr?geno nas altera??es da fun??o card?aca, do equil?brio hidroeletrol?tico e do status tireoidiano de ratos Wistar submetidos ao infarto do mioc?rdio (IM) experimental. Na primeira etapa ratos wistar machos (n = 18) e f?meas (n = 21) foram submetidos ao infarto experimental (INF.M e INF.F) ou ? falsa cirurgia (Sham.M e Sham.F). Na primeira e quarta semana p?s-IM foram colocados em gaiolas metab?licas e submetidos ? ecodopplercardiografia (ECO) e eletrocardiografia (an?lise espectral), seguido de eutan?sia para coleta de sangue (dosagem s?rica de horm?nios tireoidianos) e de tecidos (cora??o, pulm?o e f?gado, para biometria). Na segunda etapa, f?meas foram ovariectomizadas (n = 24) ou mantidas intactas (n = 21) e ap?s duas semanas submetidas ao infarto do mioc?rdio (INFOVX e INFINT) ou ? falsa cirurgia (ShamOVX e ShamINT). Quatro semanas ap?s p?s-IM, as mesmas avalia??es da etapa anterior foram realizadas exceto a eletrocardiogr?fica. Na terceira etapa, foi realizada ovariectomia e reposi??o com estr?geno (E2) ( n = 13) ou ve?culo (n = 22). Ap?s duas semanas foi realizada a cirurgia de indu??o ao infarto (INFOVX+E2 e INFOVX+Veic) e a falsa cirurgia (ShamOVX+E2 e ShamOVX+Veic). Decorridas quatro semanas foram feitas as mesmas avalia??es da segunda etapa. O grupo INFM desenvolveu disfun??o card?aca (fra??o de encurtamento, FEnc%, ~70% de redu??o) e altera??es na regula??o hidroeletrol?tica (aumento do apetite por s?dio, ~146% e redu??o do volume urin?rio, ~55%), uma semana p?s-IM e, portanto, mais cedo que as f?meas, que apresentaram altera??es na fun??o card?aca (FEnc%, ~28% de redu??o) e regula??o hidroeletrol?tica (aumento do apetite por s?dio, ~143%) na quarta semana p?s-IM. O grupo INFM apresentou redu??o na rela??o LF/HF (~70%), uma semana p?s-IM. E, apenas os ratos machos desenvolveram hipotireoidismo ap?s o infarto. Tamb?m foi observada redu??o da FEnc% (~55%), aumento da rela??o ?trio esquerdo/ aorta (AE/Ao, ~75%) e altera??es na regula??o hidroeletrol?tica (redu??o do apetite por s?dio, ~67% e do volume urin?rio, ~40%) mais pronunciadas em INFOVX do que em INFINT. O grupo INFOVX tamb?m apresentou redu??o dos n?veis s?ricos de T3 (~35%) p?s-IM. O grupo INFOVX+Vei mostrou redu??o da FEnc% (~55%) e aumento na rela??o AE/Ao (~75%) mais pronunciadas que o grupo INFOVX+E2. INFOVX+Vei reduziu o apetite por s?dio (~67%) e, no volume urin?rio, foi observada redu??o significativa nos grupos ShamOVX+Vei e INFOVX+Vei em rela??o aos grupos ShamOVX+E2 e INFOVX+E2 (P<0,05). O T3 s?rico reduziu significativamente (~35%) apenas no grupo INFOVX+Vei. Houve diferen?a no desenvolvimento fisiopatol?gico da insufici?ncia card?aca (IC) p?s-IM entre machos e f?meas, sendo mais brando nas f?meas. E f?meas infartadas apresentaram uma regula??o hidroeletrol?tica mais favor?vel e compat?vel com o desenvolvimento menos acentuado da IC. O estr?geno influenciou positivamente a regula??o hidroeletrolitica de f?meas infartadas, o que favoreceu a fun??o card?aca e atenuou desta forma, a disfun??o que ocorre ap?s o infarto. A manuten??o do status eutire?ideo n?o pareceu ser determinante para o desenvolvimento menos pronunciado da IC.