INTRODUÇÃO: O desenvolvimento das glândulas salivares envolve um processo coordenado de interações moleculares complexas, nas quais as integrinas têm papel fundamental. As integrinas são uma família de receptores transmembrânicos, heterodímeros, compostos por duas subunidades: alfa e beta que estão ligadas de forma não covalente e dependentes de cations bivalentes. Estes heterodímeros medeiam sinais intra e extracelulares envolvidos na organização das células em tecidos e órgãos durante seu desenvolvimento. Em particular a integrina beta1 está envolvida na proliferação e diferenciação de células no desenvolvimento dos tecidos epiteliais. OBJETIVOS: Para compreender o papel da integrina beta1 no desenvolvimento das glândulas salivares humanas, estudamos a sua expressão por meio da hibridização in situ em tecido fetal humano em desenvolvimento. MATERIAL E MÉTODOS: A hibridização in situ com o método chromogenic in situ hibridization (CISH) foi utilizada para investigar a expressão genética da integrina beta1 em espécimes de glândulas salivares em desenvolvimento derivados de 30 fetos humanos em vários estágios gestacionais (de 825 semanas de vida intrauterina). Os resultados obtidos com a hibridização in situ foram relacionados com os aspectos morfológicos das glândulas salivares em desenvolvimento em cada fase da evolução da morfogênese glandular, por meio de análise qualitativa. RESULTADOS: Expressão da integrina beta1 foi detectada em raras células na fase prebotão. A expressão dessa molécula foi detectada em mais estruturas com a evolução do desenvolvimento morfogenético das glândulas salivares. CONCLUSÕES: A expressão a integrina beta1 parece ser regulada de forma temporoespacial e é associada ao estabelecimento do fenótipo maduro das glândulas salivares / INTRODUCTION: Salivary gland development entails coordinated processes involving complex molecular interactions in which integrins have a fundamental role. The integrins are a family of heterodimeric transmembrane receptors comprising alpha and beta subunits that mediate intercellular and extracellular signals involved in the organisation of cells in tissues and organs during development. The beta1 integrin in particular have been implicated in proliferation and differentiation of cells involved in the development of epithelial tissues. OBJECTIVE: To understand the role of beta1 integrin in salivary gland development we have studied its expression in human foetal tissues. MATERIAL AND METHODS: In situ hybridisation CISH technique was used to compare the expression and localisation of integrin beta1 with differentiation markers in developing human salivary glands obtained from foetuses of 825 gestational weeks. RESULTS: Integrin beta1 first appeared during bud stage in a few cells and its distribution increased as salivary gland morphogenesis progressed. CONCLUSIONS: The developmentally regulated expression of integrin beta1 in association with the establishment of a mature phenotype of salivary glands is suggestive of its role in salivary gland morphogenesis

Protocolos hormonais amplamente utilizados no Brasil em reprodução animal melhoram qualitativa e quantitativamente os rebanhos. Os protocolos de estimulação do folículo dominante e superovulação que utilizam a aplicação dos hormônios folículo-estimulante (FSH) e/ou gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem se mostrado eficientes para aumentar a taxa de prenhez e o número de descendentes de alto valor genético, respectivamente. Neste contexto o útero é um órgão essencial para a reprodução em mamíferos e provavelmente alvo destes protocolos. Vários fatores regulam o seu desenvolvimento, como por exemplo, a angiogênese inerente aos órgãos genitais femininos, a implantação e o desenvolvimento da placenta e as ações da progesterona (P4) plasmática. O Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF-A) é uma proteína que tem uma função dinâmica de regulação do crescimento vascular endotelial, angiogênese e permeabilidade vascular. Entre os fatores que aumentam a sua expressão, podemos citar os hormônios esteróides ovarianos, as prostaglandinas, o FSH e o próprio eCG. Em geral, estas ações em conjunto estão relacionadas à preparação do ambiente uterino para uma futura prenhez. Deste modo, o objetivo deste trabalho é analisar a expressão do sistema VEGF-A (VEGF-A e seus recpetores FLT-1 e KDR) no útero bovino após o tratamento com diferentes doses de eCG e quantificar as glândulas uterinas presentes nos animais dos diferentes grupos. Para tanto, os animais foram divididos em três grupos: controle, estimulado e superovulado, os quais foram sincronizados e receberam 400 UI (grupo estimulado), 2000 UI (grupo superovulado) ou não receberam eCG (grupo controle). Aos 6 dias após a ovulação, os animais foram abatidos e as amostras coletadas destinadas aos protocolos de imunoistoquímica e PCR em tempo real. Para a estimativa das glândulas uterinas foi utilizado o método morfométrico de contagem. O sistema VEGF-A foi localizado por meio da imunoistoquímica em diferentes tipos celulares, como nos epitélios uterinos e glandulares sem diferenças qualitativas em relação aos locais de expressão ou intensidade do sinal positivo. A expressão do mRNA do sistema VEGF-A não apresentou diferença significativa (P>0,05) entre os diferentes grupos. No que se refere à contagem do número de glândulas uterinas, o grupo superovulado apresentou maior quantidade em relação aos grupos controle e estimulado (P<0,05). A correlação entre o mRNA do sistema VEGF-A, a concentração de progesterona plasmática (P4) e o número de glândulas uterinas foi positiva para o Flt-1 com o KDR (r=0,60 p=0,0045) e para P4 com as glândulas uterinas (r=0.74 p=0,0078). Assim, podemos inferir que o tratamento com eCG não aumenta a expressão do sistema VEGF-A no útero no dia 6 após a ovulação, mas tem influência no aumento da quantidade de glândulas uterinas. / Hormonal protocols are widely employed in Brazil in the field of animal reproduction improving the herds qualitative and quantitatively. Protocols for timulation of the dominant follicle and superovulation, which use the application of follicle-stimulating hormone (FSH) and/or equine chorionic gonadotropin (eCG) are efficient methods to increase pregnancy rates and the number of genetically superior descendents, respectively. In this context, the uterus plays an essential role in mammals reproduction and is probably a target of hormonal protocols. Many factors regulate its development, such as angiogenesis, intrinsec to feminine genital organs, implantation and placental development as well as progesterone (P4) actions. The Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF-A) is a protein that plays a dynamic role in regulating the vascular endothelial growth, angiogenesis and vascular permeability. Among the factors that increase its expression, the ovarian steroid hormones, prostaglandins, FSH and eCG are of importance. In general, these actions are related and directed to prepare the uterine environment for a future pregnancy. Thus, the objective of this study is to analyze the expression of VEGF-A system (VEGF-A and its receptors FLT-1 and KDR) in bovine uterus after treatment with different doses of eCG and to quantify the uterine glands in the uterus of different groups. For this purpose, animals were divided into three groups: control, stimulated and superovulated, which underwent estrous synchronization and received 400 IU (stimulated group), 2000 IU (superovulated group) or no eCG (control group). On day 6 post ovulation animals were slaughtered and samples collected and then assigned to immunohistochemistry (IHC) and qPCR. For quantification of the uterine glands the morphometric method of counting was used. VEGF-A system was localized through IHC in different cellular types, as the uterine and glandular epithelia, showing no qualitative differences in relation to site of expression and intensity of the positive signal among the groups. Messenger RNA expression of VEGF-A system was not significantly different (P> 0.05) either. Regarding the counting of uterine glands, the superovulated group showed increased number compared to stimulated and control groups (P <0.05). The correlation among the mRNA of VEGF-A system, plasma progesterone concentrations and the number of uterine glands was positive when Flt-1 and the KDR (r = 0.60 p = 0.0045) were correlated and also when P4 and the uterine glands (r = 0.74 p = 0.0078) were correlated. Thus, we can infer that treatment with eCG did not increase the expression of VEGF-A system in the uterus on day 6 post ovulation, but influences the number of uterine glands.

Avaliamos o perfil dos portadores de Mucoceles bucais e estudamos microscopicamente suas características para correlacioná-las com as possíveis etiopatogenias, especialmente as obstruções ductais promovidas por proliferações epiteliais hiperplásicas e neoplásicas como o papiloma intraductal, Papiloma Ductal Invertido e Sialadenoma Papilífero. Realizamos o levantamento das informações registradas de 987 casos clínicos e suas respectivas peças cirúrgicas foram re-analisadas microscopicamente em cortes teciduais corados em HE. Os dados foram registrados e tabulados para comparações e correlações. A faixa etária mais comprometida foi a segunda e terceira décadas (399 e 345 casos) e o local mais afetado foi o lábio inferior (707 casos). A distribuição entre os gêneros foi praticamente igual. Em 262 casos os pacientes relacionaram a lesão com o traumatismo prévio. Dos 987 casos, 77 (7,8%) foram diagnosticados como Cisto de Retenção Mucosa e (910) como cisto por extrasamento mucoso. Os Cistos de Retenção Mucosa aconteceram predominantemente pacientes acima da quinta década de vida. Algumas situações simultâneas foram identificadas com frequência nas glândulas salivares associadas às Mucoceles, como a Sialadenite Crônica Inespecífica, Sialadenite Crônica Esclerosente ou Tumor de Kuttner, Oncocitose e Sialolitíase. Foram diagnosticados ainda, 21 Papilomas Intraductais, 6 Papilomas Ductais Invertidos e 3 Sialadenomas Papilíferos, além de 27 Proliferações Epiteliais Intraductais de diagnóstico não determinado. Concluímos que: a) além dos traumatismos, na etiopatogenia das Mucoceles bucais deve-se considerar a presença dos Papilomas Ductais como uma importante possibilidade a ser analisada especificamente nas observações microscópicas das peças cirúrgicas enviadas para análise histopatológica, considerando-se a sua natureza neoplásica. b) a Sialolitíase e a Oncocitose devem ser consideradas como causas obstrutivas ductais de Mucoceles bucais em suas análises clínicas e microscópicas. c) as causas obstrutivas parciais e totais podem estar associadas à etiopatogenia das Mucoceles bucais do tipo Cisto por Extravasamento Mucoso, especialmente quando ocorrem próximo ou no interior do corpo glandular. A retenção de muco pode promover a ruptura dos delicados ductos proximais e dos ácinos, promovendo o derramamento de muco no tecido conjuntivo do estroma glandular, iniciando-se o processo no interior da mesma. Quando mais próximas da mucosa bucal, as causas obstrutivas podem não romper o ducto pela sua estrutura epitelial e conjuntiva ser mais espessa e resistente, gerando Cistos de Retenção Mucosa com revestimento epitelial. / This study evaluated the profile of individuals with oral Mucoceles and investigated their microscopic characteristics with a view to correlate them to the possible etiopathogenesis, especially ductal obstructions caused by hyperplastic and neoplastic epithelial proliferations such as Intraductal Papilloma, Inverted Ductal Papilloma and Sialoadenoma Papilliferum. The study surveyed the records of 987 clinical cases and respective specimens, which were microscopically reanalyzed on tissue sections stained with hematoxylin and eosin. Data were recorded and tabulated for comparisons and correlations. The most affected age range was the second and third decades of life (399 and 345 cases), and the lower lip was the most affected site (707 cases). The distribution between genders was nearly equal. In 262 cases the patients related the lesion to a previous trauma. Among the 987 cases, 77 (7.8%) were diagnosed as mucus retention cyst and (910) as mucus extravasation cyst. The Mucus Retention Cysts affected mainly patients above the fifth decade of life. Simultaneous disorders were often identified in salivary glands associated to the Mucoceles, such as Nonspecific Chronic Sialadenitis, Chronic Sclerosing Sialadenitis or Kuttner Tumor, Oncocytosis and Sialolithiasis. There were also diagnoses of 21 Intraductal Papillomas, 6 Inverted Ductal Papillomas and 3 cases of Sialoadenoma papilliferum, besides 27 Intraductal Epithelial Proliferations of undetermined diagnosis. It was concluded that: a) in addition to trauma, the etiopathogenesis of oral Mucoceles should consider the presence of Ductal Papillomas as an important possibility to be specifically analyzed on the microscopic analysis of specimens submitted to histopathological analysis, considering its neoplastic nature. b) Sialolithiasis and Oncocytosis should be considered as causes of ductal obstruction of oral Mucoceles in the clinical and microscopic analyses. c) the partial and total causes of obstruction may be associated to the etiopathogenesis of oral Mucoceles involving Mucus Extravasation Cysts, especially when they occur close to or inside the gland body. The mucus retention may cause the rupture of fragile proximal ducts and acini, causing the outflow of mucus in the connective tissue of the gland stroma, giving rise to the process inside it. When closer to the oral mucosa, the obstructive causes may not disrupt the duct because its epithelial and connective structure is thicker and more resistant, giving rise to Mucus Retention Cysts with epithelial lining.

Neste trabalho, estão descritos os métodos de seleção, calibração e de determinação dos fatores de correção, as características físicas dos dosímetros termoluminescentes, o procedimento de cálculo para converter a leitura do dosímetro em dose absorvida e a metodologia para se determinar a dose de entrada. Foram investigadas a praticidade e a utilidade das medidas de dose de entrada com os dosímetros termoluminescentes, bem como a exatidão e a reprodutibilidade no fornecimento da dose diária. As medidas de dose de entrada foram realizadas em cinco pacientes com diagnóstico de câncer de mama tratadas com um feixe de fótons de 6 MV. Não foram detectados grandes desvios entre a dose medida e a dose esperada (os valores concordaram em ± 5%), devido à excelente estabilidade do equipamento de tratamento, ao sistema automático de verificação e à boa exatidão no ajuste diário do tratamento. Uma boa precisão pode ser alcançada quando os fatores de correção para cada parâmetro de influência na resposta do dosímetro são cuidadosamente determinados e aplicados para converter o sinal termoluminescente em dose absorvida. O estudo demonstrou a viabilidade do uso dos dosímetros termoluminescentes para a dosimetria in vivo e sua utilidade como parte de um programa de garantia de qualidade em um serviço de radioterapia. / Selection, calibration procedure to convert TLD signal into absorbed dose and physical characteristics at the thermoluminescent dosimeters, as well as the determination of correction factors and the methodology to determine expected entrance dose, are described in this work. Practical aspects and the utility of entrance dose measures with thermoluminescent dosimeters were investigated, as well as the exactness and the reproducibility of the daily dose release. The entrance dose measures were performed in five patients with diagnosis of breast cancer treated with a 6 MV photon beam. The measured dose and the expected dose values agreed in ± 5%, due to excellent treatment equipment stability, to automatic verification system and the good exactness in the daily treatment adjustment. Good precision can be achieved when the correction factors for each parameter of influence in the dosimeter response are carefully determined and applied to convert the thermoluminescent signal into absorbed dose. The study demonstrates the viability of thermoluminescent dosimeters use for in vivo dosimetry and its utility as part of a quality assurance program in a radiation therapy service.

A família Passifloraceae é conhecida mundialmente por suas flores exuberantes, frutos comestíveis e pelo uso na medicina. Composta por duas tribos, com apenas Passifloreae ocorrendo abundantemente no Brasil, principalmente espécies pertencentes ao gênero Passiflora. Este gênero compreende quatro subgêneros, Astrophea, Decaloba, Deidamioides e Passiflora. Destes Decaloba e Passiflora são grupos monofiléticos e os mais numerosos em espécies. É ainda o gênero que mais apresenta diversidade morfológica das folhas e estípulas. Apesar do elevado número de espécies, os estudos sobre anatomia foliar em Passifloraceae ainda são escassos, embora muitas revisões taxonômicas utilizem amplamente a morfologia foliar para classificar as espécies. Dessa forma este trabalho teve como objetivo auxiliar na identificação das espécies e contribuir com futuros estudos filogenéticos, a partir das descrições morfológicas e anatômicas das folhas de Passiflora. Técnicas usuais de anatomia vegetal foram utilizadas para análise em microscopia óptica. Como principais resultados foram descritos caracteres anatômicos que corroboram a classificação infrasubgenérica já existente, além de acrescentar características particulares ao nível de espécie. O padrão de venação mostrou-se o caráter anatômico bastante seguro. Dentre as superseções analisadas, a superseção Dacaloba mostrou-se mais sólida quanto aos caracteres anatômicos estudados. No entanto, na superseção Stipulata, outro grupo com boa representação, as características anatômicas não foram constantes entre as espécies / Passifloraceae family is worldwide known for its exuberant flowers, edible fruits and for their use in medicine. Composed of two tribes, with only Passifloreae largely distributed in Brazil, especially species belonging to the genera Passiflora. This genera comprises four subgenera, .Astrophea, Decaloba, Deidamioides and Passiflora. Within these, Decaloba and Passiflora are monophyletic groups and the most representative in number of species. Besides, these are the subgenera with the greatest morphological diversity in leaves and stipules. Even with the large number of species, the studies about leaf anatomy in Passifloraceae are still scarce. Several taxonomic reviews widely use leaf morphology to classify the species and group them in taxa. Thus, this study aimed to support the species identification and contribute with future phylogenetic studies, based on the morphological and anatomical descriptions of Passiflora leaves. Usual techniques of plant anatomy laboratory were used in optical microscopy. As main results, the anatomical characters described corroborated the infrasugnenera classification already existent, besides adding particular characteristics to the level of species. The venation pattern demonstrated to be a safe anatomical character. Within the analyzed supersections, the supersection Decaloba was found to be solid regarding to the anatomical characters studied. Although, in Stipulata supersection, another group with good representation, the anatomical characteristics were not persistent within the species

O embrião equino apresenta um desenvolvimento dinâmico por um longo período entre a fertilização, sua entrada no útero, fixação e posterior invasão trofoblástica após o 36º dia da gestação. Durante todo este período o concepto é sustentado pelo histotrofo endometrial. Estas características dos equídeos favorecem o seu uso com modelo experimental in vivo para estudos nos desenvolvimentos e interações fetal e maternal. Os estudos em endométrio equino tiveram foco em eventos fisiológicos nas diferentes fases do ciclo estral, enquanto os estudos aos primeiros momentos da gestação são escassos. O entendimento do processo de remodelação e morfofisiologia do endométrio após a entrada do embrião no útero não é completamente entendido. O objetivo deste trabalho foi estudar a morfofisiologia endometrial da gestação na égua envolvendo os períodos pós-fixação e peri-implantação, por histologia e microscopia eletrônica de varredura. A característica mais marcante da transformação ou adaptação endometrial à gestação foi o quase total desaparecimento das células ciliadas na superfície epitelial em ambos cornos uterinos. A capacidade de secreção das células microvilosas também passou por mudanças com o avanço gestacional. Muitas células secretórias ingurgitadas e protusas formam a maioria da população do epitélio, onde o histotrofo se acumula, e apresentaram erosões em sua superfície, provavelmente pela secreção apócrina de vesículas. A superfície epitelial apresentou pleomorfismo celular e pseudoestratificação, promovida por intensa hiperplasia celular, acompanhada de adensamento das glândulas endometriais, desde o 21º dia da gestação diminuído após o 36º dia. Linfócitos, provavelmente uNK, foram encontrados no epitélio luminal do endométrio já aos 21 dias de gestação em ambos cornos, gravídico e não gravídico. Foi evidenciado o septamento no epitélio luminal, com sulcos formados aos 35 e 36 dias, tornando-se mais profundos aos 42 dias de gestação. Toda esta evolução e adaptação contínua aconteceram principalmente no corno gravídico acompanhados em menor intensidade pelo corno não gravídico. / The equine embryo plays a dynamic development for a long period between fertilization, its entry into the uterus, fixes and subsequent trophoblastic invasion after day 36 of gestation. Throughout this period, the conceptus is supported by endometrial histotrophe. These equids characteristics favor their use as an in vivo experimental model for studying the changes and interactions in fetal and maternal development. Studies in equine endometrium were focused on physiological events in the different phases of the estrous cycle, while studies in early moments of pregnancy are scant. The process of endometrial remodeling and morphophysiology after the maternal recognition of pregnancy is not completely understood. The objective of this work was to study the endometrial morphophysiology in the mare comprising post-fixation and peri-implantation periods, by histology and scanning electron microscopy. The most striking feature of endometrial transformation or adaptation to pregnancy was the almost total ciliated cells disappearance of the epithelial surface in both uterine horns. In addition, the secretory capacity of microvillus cells underwent changes with gestational age. Many engorged and protruded secretory cells were the majority epithelium population where histotroph accumulates, and showed erosions on its surface, probably by apocrine vesicle secretion. The epithelial surface also showed cellular pleomorphic and pseudostratified epithelium as a result of intense cell hyperplasia. It was accompanied by thickening of the endometrial glands from day 21 of gestation, then decreasing after the 36th day. Lymphocytes, probably uNK, were found in the luminal epithelium of the endometrium since 21st day of gestation in both pregnant and not pregnant horns. Septation was evidenced in the luminal epithelium, with sulci formed at 35 days, becoming deeper at 42 days of pregnancy. All this continued evolution and adaptation occurred mainly in the gravid horn accompanied in less intensity by non-gravid horn.

Among vertebrates, oviparity, a condition in which young at least partially develop outside the mother's body and are supported by yolk, is the ancestral state to viviparity, the reproductive mode in which embryos are fully developed at birth. Viviparity in reptiles is found only in the squamates. Among the more than 100 origins of viviparity in squamates, many have occurred fairly recently and as a result some species contain populations of both reproductive modes, i.e., are reproductively bimodal. The evolution of viviparity is associated with many changes including an increase in oviductal egg retention times, a decrease in thickness of the eggshell and a decrease in secretion of the uterine shell glands that are responsible for eggshell secretion. The uterine morphology of the oviparous Saproscincus mustelinus and the reproductively bimodal Saiphos equalis were compared to study the uterine shell gland cycle.

Orientador: Cristiane Yume Koga Ito / Coorientadora: Marcia Hiromi Tanaka / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Bruno Mello de Matos / Banca: Soraya Carvalho da Costa / Banca: Daniel Freitas Alves Pereira / Resumo: A Fibrose Cística (FC) é uma doença genética de elevada prevalência global e que causa função anormal das glândulas exócrinas. As alterações nas funções das glândulas salivares podem impactar a saúde bucal que por sua vez podem influenciar a saúde geral. A boca pode representar um reservatório microbiano de potenciais patógenos e colonizadores das vias aéreas, causando infecções crônicas pulmonares. O objetivo deste estudo foi avaliar os impactos da FC na cavidade bucal, saliva e microbioma bucal. Foram incluídos no estudo 50 pacientes com diagnóstico de FC com idades de 3 a 20 anos, divididos em 2 grupos de acordo com o grau de severidade da doença determinado pelo escore de Shwachman-Kulczycki: G1 (baixa severidade) e G2 (alta severidade). Foi também incluído grupo controle pareado ao grupo de estudo quanto ao gênero e idade (G3, n=50). A presença de lesões de cárie foi avaliada. O impacto da FC sobre a saúde bucal foi avaliado por questionário preenchido pelos pais ou responsáveis. Amostra de saliva estimulada foi coletada de todos os pacientes. O microbioma bucal foi avaliado por Human Oral Microbe Identification using Next Generation Sequencing (HOMINGS) e metodologias de cultivo, para análise da microbiota potencialmente oportunista e cariogênica. Realizou-se ainda a análise proteômica da saliva e quantificação de imunoglobulinas salivares. Os resultados foram analisados e, de acordo com a distribuição dos dados e avaliação desejada, foram aplicados os testes estatístic... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract : Cystic Fibrosis (CF) is a genetic disease with high global prevalence that causes abnormal function of the exocrine glands. The functional alterations of salivary glands and saliva can impact the oral health and influence general health. Oral cavity may represent a microbial reservoir of potential pathogens that can colonize the airways and cause chronic pulmonary infections. The aim of this study is to evaluate the impact of cystic fibrosis on the oral cavity, saliva and oral microbiome. Fifty CF patients aged from 3 to 20 years were divided into two groups according to the disease severity determined by the Shwachman-Kulczycki score: G1 (low severity) and G2 (high severity). Also, age and gender paired control group was included in the study (G3, n = 50). The occurrence of caries was evaluated. The impact of CF on oral health was evaluated by a questionnaire filled by parents or responsible person. Stimulated whole saliva (WS) samples were collected from all patients. The oral microbiome was analyzed by Human Oral Microbe Identification using Next Generation Sequencing (HOMINGS) and by microbiological culture methodologies to evaluate the potential opportunistic and cariogenic microbiota. The proteomic analysis of saliva and quantification of salivary immunoglobulins were carried out. Statistical analysis was performed according to the normality of the data at a significance level of 5%. The applied questionnaire pointed out that oral health did not impact systemic health negatively, according to the parents in all groups. The groups of patients with CF had lower rates of dmft, DMFT, salivary flow rate and initial pH in comparison to the control group. The counts of staphylococcal and yeast from CF groups were significant higher than the controls. All fungal isolates were susceptible to the antifungal agents. Higher incidence of bacterial resistance was ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Tracheobronchial submucosal glands (SMGs) develop from clusters of epithelial progenitor cells basally orientated within the surface airway epithelium called primordial glandular placodes (PGPs). Signal transduction events that coordinate the transitional process from PGPs into fully developed SMGs consisting of intricately branched networks of tubular secretary structures are still poorly understood. Wnt/β-catenin dependent induction of lymphoid enhancing factor-1 (Lef-1) expression in PGP progenitor/stem cells is required for SMG formation and maturation in the airway. In an effort to better understand the regulatory mechanisms that control Lef-1 during airway SMG development, I have studied its transcriptional regulation. I discovered that Sox2 expression is predominantly confined to the surface airway epithelium (SAE) and is repressed as Lef-1 is induced within PGPs. Deletion of Sox2 in polarized primary airway epithelia significantly enhances Lef-1 mRNA expression. Consequently, my hypothesis is that Sox2 functions as a negative regulator of Lef-1 expression in the SAE. I demonstrated that Sox2 modulates the expression of Lef-1 both independent and dependent on Wnt/β-catenin signaling. I discovered that a Sox2-binding site located in the Wnt Responsive Element (WRE) region of the 2.5Kb Lef-1 promoter is required for Sox2-mediated inhibition of β-catenin-dependent Lef-1 promoter transcription. It is important to understand the biology of SMG development because SMGs are the major mucus-producing structures in the proximal airway and are important in regulating the innate immunity of the lung in response to various neural signals. SMG ducts have also been proposed as a potential protective niche for slowly cycling progenitor cells (SCPCs). Hence, aberrant SMG function is thought to aggravate the pathoprogression of lung disease. Cystic fibrosis (CF) is a disease caused by a defect in the gene that encodes a chloride ion channel called cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR). The absence of CFTR in serous cells within SMG ducts contributes to defective airway secretion, which alters the microenvironment within SMGs. I hypothesized that the glandular SCPC niche may be dysfunctional in CF. I reported that the neural peptide, calcitonin gene-related peptide (CGRP) activates CFTR-dependent SMG secretions and that this signaling pathway is hyperactivated in CF human, pig, ferret, and mouse SMGs. CFTR-deficient mice failed to maintain glandular SCPCs following airway injury, suggesting that the glandular SCPC niche may be dysfunctional in CF. CGRP levels increase following airway injury and function as an injury-inducible mitogen that stimulates progenitor cell proliferation. However, components of the receptor for CGRP (RAMP1 and CLR) were expressed in a very small subset of SCPCs, suggesting that CGRP indirectly stimulates SCPC proliferation through paracrine mechanisms. This discovery may have important implications for injury/repair mechanisms in the CF airway.

The aim of this thesis was to characterize the expression of the peptides ghrelin and obestatin, as well as other neuroendocrine markers in human normal tissues, in invasive breast cancer and a wide panel of neuroendocrine tumors (NETs). In normal tissues the expression of ghrelin and obestatin was mainly localized to the gastric mucosa, and in lesser extent in the remaining gastrointestinal tract, endocrine pancreas and mammary glands. Double immunofluorescence studies demonstrated that ghrelin and obestatin were co-localized in the same cells displaying the same cytoplasmic distribution. In normal breast tissue, ghrelin, obestatin, adrenomedullin, apelin and vesicular monoamine transporter 2 were specifically demonstrated in the luminal epithelial cells. Consecutive sections indicated that mammary epithelial cells could express several of these peptides. Secretogranin II and III were also detected in breast tissue, but their presence was restricted to the outer layer of myoepithelial cells, whereas chromogranin B immunoreactivity was found in both the epithelial and myoepithelial cells. Ghrelin and obestatin immunoreactivity was seen in invasive breast cancer, where the expression could be correlated to factors associated with prognosis. Furthermore, multivariate analysis indicated that ghrelin expression was a possible independent prognostic factor for prolonged recurrence-free and breast cancer-specific survival. In a panel of NETs and endocrine-related disorders it was revealed that ghrelin and obestatin immunoreactivity was primarily found in tumors originating from the respective normal tissues. The two proteins were detected in only a few cases and only occasional tumor cells were immunoreactive. In conclusion, ghrelin and obestatin are localized in the gastrointestinal tract, endocrine pancreas and mammary glands. This thesis has contributed to our understanding of the distribution of ghrelin and obestatin in both normal tissue and tumor cells. A potential role of ghrelin as a prognostic factor in invasive breast cancer has been identified and should be further explored.