El caracol dulceacuícola Pomacea canaliculata es nativo de Sudamérica y, además de ser biológicamente muy interesante, presenta especial interés económico-sanitario por ser plaga en numerosos cultivos, especialmente arroz, y también presenta importancia epidemiológica porque es hospedador intermediario del nematode causante de la meningoencefalitis eosinofílica humana. Las hembras oviponen fuera del agua y estas puestas aéreas quedan expuestas a un ambiente agresivo de alta radiación solar, temperatura y depredadores terrestres. A pesar de ello, los huevos eclosionan normalmente, y contrariamente a lo esperable, se registran muy pocos casos de depredación en condiciones naturales, restringida solo a la “hormiga de fuego” (Solenopsis geminata). Este hecho llevó a suponer la existencia en el huevo de algún sistema de protección, relacionado con la coloración rosada muy llamativa que presenta, considerada de advertencia (aposemática), si bien al comienzo de esta tesis no existían antecedentes de la naturaleza de sus defensas. Los huevos de P. canaliculata están provistos de un fluido perivitelino (FPV) que es secretado por la glándula del albumen de la hembra. El FPV actúa como una fuente energética, estructural y supuestamente también de defensa para el embrión. Su composición bioquímica está dominada principalmente por hidratos de carbono, lípidos y por proteínas denominadas perivitelinas, en particular ovorrubina (OR) un inhibidor de proteasas, y las perivitelinas PV2 y PV3. La PV2 es una glicolipoproteína de 400 kDa y dos subunidades de 67 y 31 kDa. Hasta el momento de este estudio, la única función descripta para estas perivitelinas era la de proveer de nutrientes al embrión durante su desarrollo. En el presente trabajo se buscó ampliar el conocimiento de la biología reproductiva de este caracol, tratando de identificar cuál era la defensa del huevo tan llamativamente señalada, enfocando el estudio en la perivitelina PV2. En una primera etapa, se la caracterizó estructuralmente y luego se estudiaron las funciones que cumplía en los huevos de P. canaliculata. Finalmente, se analizó si el nivel de defensa bioquímica del huevo estaba relacionado con la intensidad de su color rojo, y si éste variaba a lo largo de la estación reproductiva y con respecto a la alimentación. Se comenzó el estudio analizando las características estructurales y la conformación que adopta en el espacio la PV2, empleando técnicas tales como: emisión de fluorescencia de Trp, dispersión de rayos X a bajo ángulo (SAXS), dicroísmo circular y microscopía electrónica. Los resultados mostraron que es una proteína globular y anisométrica de 44 x 130 Å. Los datos de SAXS permitieron lograr un modelo tridimensional de baja resolución de la proteína en solución que resultó coincidente con datos obtenidos mediante microscopía electrónica. Se demostró luego que PV2 es un octámero compacto y bien plegado, que forma cuatro heterodímeros de 98 kDa, cada uno estabilizado por puentes disulfuro intercatenarios. El oligómero presenta un punto isoeléctrico de 6,2. La subunidad menor de 31 kDa exhibe varias isoformas que podrían deberse a modificaciones postraduccionales. Mediante técnicas de biología molecular se secuenció la subunidad menor completa a partir de ADNc de la glándula del albumen. El análisis con herramientas bioinformáticas mostró que presenta homología con las lectinas del tipo taquilectina de otros invertebrados. Debido a que la estabilidad estructural de las proteínas es clave para interpretar su funcionamiento, se investigó el efecto de la temperatura, el pH y agentes químicos para inducir la desnaturalización de PV2. En esta partícula, el estudio de la termoestabilidad presenta un valor añadido porque los huevos deben soportar altas temperaturas y radiación solar directa. Los resultados mostraron que presenta una elevada termoestabilidad (hasta 60 ºC) y es estable en un amplio rango de pH (4-10), mientras que la estructura terciaria se pierde casi por completo a una concentración de 6 M urea. Se completaron los estudios de estabilidad evaluando la susceptibilidad a la proteólisis, el cual mostró que la subunidad menor es más resistente al ataque proteolítico inespecífico de proteinasa K, probablemente debido a que esté menos expuesta. Considerando su alta estabilidad frente al pH y para comprender la manera de incorporación de la proteína al predador que ingiriese los huevos, se estudió su resistencia a la digestión. Primeramente se usó un modelo de digestión in vitro que imita el paso de los alimentos a través del estómago y duodeno, evaluando la susceptibilidad de PV2 a la proteólisis gastrointestinal simulada. La perivitelina mostró ser resistente a la pepsinólisis y posterior tripsinólisis, tanto en condiciones nativas como disociantes, indicando que sería antinutritiva. La identificación de las defensas del embrión comenzó utilizando la fracción soluble completa de huevo para realizar bioensayos en ratones Balb-C (Mus musculus) y en renacuajos de rana toro (Lithobates catesbeianus). Sorpresivamente la inyección de pequeñas cantidades produjo la muerte de ambas especies, por ello, se analizó la toxicidad de cada uno de sus componentes. Se pudo demostrar que los extractos lipídicos no mostraron ningún tipo de afección, mientras que entre las fracciones proteicas, la PV2 resultó altamente tóxica, termolábil e inmunogénica tanto por administración intraperitoneal como por vía oral, confirmando la naturaleza proteica del tóxico. Dosis subletales de PV2 por vía i.p. provocan respuesta inmunogénica en ratones hacia/para ambas subunidades, mientras que la inmunización oral fue notablemente específica hacia la subunidad mayor de la PV2. La toxina en el modelo murino provocó sintomatología muy característica, que se inició con taquipnea, debilidad, abducción extrema de miembros posteriores y movimientos espásticos de la cola. Posteriormente los ratones mostraron paraplejía flácida con miembros posteriores completamente extendidos, mientras que los anteriores seguían siendo funcionales, llevando finalmente a la muerte en unas 30 h. El análisis histológico de los órganos extraídos de animales intoxicados mostró que la médula espinal es el único órgano blanco de la toxina. Además, los experimentos de electrofisiología en el músculo sartorio de la rana Leptodactylus ocellatus indicaron que ni la fracción soluble de huevos ni sus proteínas purificadas (OR, PV2 y PV3) afectaron la actividad eléctrica de las fibras musculares ni los elementos contráctiles, confirmando de esta manera que la afección era a nivel del sistema nervioso y no de las placas motoras. Por ello, se focalizó el estudio en la médula en las regiones cervical, torácica y lumbar. Mediante inmunohistoquímica contra una proteína de unión al Ca+2 (calbindina) se observó expresión muy localizada de la calbindina a nivel de las láminas II y III del asta dorsal de la sustancia gris de animales controles, a diferencia de los inoculados donde la inmunomarcación fue prácticamente negativa. Al mismo tiempo, la misma población neuronal donde se registró la reducción de expresión de calbindina (láminas II y III) mostró muerte celular apoptótica, revelada mediante la técnica TUNEL. Por último, se evaluó si la dieta y el esfuerzo reproductivo tenían algún efecto sobre la toxicidad, calidad de los huevos y coloración de advertencia. No se encontraron diferencias en la calidad, salvo una disminución significativa del peso promedio de las puestas en las hembras menos alimentadas. La concentración de las perivitelinas mayoritarias (OR, PV2) como la intensidad del color (medido por reflectancia) no mostraron cambios significativos. De la misma manera la inversión en galactógeno, principal reserva energética de los huevos, se mantuvo constante independientemente de la estación reproductiva o alimentación recibida. En síntesis, en este trabajo se reporta por primera vez la presencia de una neurotoxina de origen proteico en huevos, y la primera información de la presencia de una neurotoxina en moluscos de agua dulce, aportando además, las primeras aproximaciones de su mecanismo de acción. Asimismo, su organización estructural y estabilidad frente al pH y digestión gastrointestinal simulada indican que es una proteína antinutritiva (indigestible) que llegaría activa al intestino para su absorción. La presencia de anticuerpos circulantes luego de la administración oral confirmaría el ingreso biológicamente activo a la circulación del depredador. La toxicidad y color de los huevos no varían a lo largo de una estación reproductiva ni bajo diferentes condiciones tróficas de las hembras, en condiciones experimentales controladas. Teniendo en cuenta las nuevas funciones encontradas para PV2 como proteína neurotóxica y antinutritiva, y sumando a estas las características de OR, de otorgar coloración aposemática, ser antidigestiva (inhibidor de proteasas), antinutritiva, y de aportar moléculas antioxidantes y de fotoprotección al embrión en sus primeras etapas de desarrollo, creemos que estas perivitelinas actuarían en forma conjunta y sinérgica como parte de una compleja defensa para los embriones que impediría la adquisición de nutrientes e intoxicaría al depredador. La eficiencia de este mecanismo defensivo les permite además, sobrevivir bajo condiciones ambientales hostiles, un mecanismo complejo nunca antes descripto para el reino animal.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-07-09T13:57:35Z No. of bitstreams: 1 Tese - Sandra Lúcia Euzébio Ribeiro.pdf: 2096473 bytes, checksum: f91d4ac32c47ec6b75b46a090c06dd46 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T14:19:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Sandra Lúcia Euzébio Ribeiro.pdf: 2096473 bytes, checksum: f91d4ac32c47ec6b75b46a090c06dd46 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-07-09T14:22:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Sandra Lúcia Euzébio Ribeiro.pdf: 2096473 bytes, checksum: f91d4ac32c47ec6b75b46a090c06dd46 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-09T14:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Sandra Lúcia Euzébio Ribeiro.pdf: 2096473 bytes, checksum: f91d4ac32c47ec6b75b46a090c06dd46 (MD5) Previous issue date: 2014-09-02 / SUFRAMA - Superintendência da Zona Franca de Manaus / Antiphospholipid (aPL) antibodies may be detected during the course of many infections, but are usually transient. In leprosy, however, these antibodies are found to linger for longer periods. The aim of this study was to evaluate the persistence of anticardiolipin (aCL) and anti-β2 glycoprotein I (anti-β2GPI) antibodies in leprosy patients, and disclose epidemiologic, immunologic and clinical features associated with it. Thirty-eight APL antibody positive leprosy patients completed polychemotherapy and were followed for an average of 66,9 months, when a second sample was drawn for a new aPL testing. Enzima -linked immunosorbent assay (ELISA) was used to measure aCL and anti-β2GPI antibodies. Epidemiologic and clinical data were analyzed with logistic regression. Persistence of aPL antibodies was demonstrated in 32 out of 38 leprosy patients thoroughly treated and considered cured, studied after an average of 66,9 months of follow up. All of these sera were IgM isotype. Sixteen of these patients (50%) presented lepromatous clinical form. Reactional state was present in three patients (9,4%). Seventeen (53,1%) were in use of prednisone and/or thalidomide. Observed median values of aPL antibodies were rather high (64U/mL for aCL and 62U/mL for aβ2GP). Occurrence of vascular thrombosis, gestational morbidity, diabetes, tobacco use and alcoholism were not different in positive and negative aPL patients. Logistic regression showed significant association of aPL antibodies persistence and age (p=0,045, OR=0,91 e IC 95% 0,82 - 1,00), lepromatous clinical form (p=0,034; OR=0,02 e IC 95% = 0,0 - 0,76) and bacillary index (p=0,044; OR=2,74 e IC 95% = 1,03 – 7,33). aPL antibodies in leprosy patients do persist many years after treatment. Patients’ age, lepromatous clinical form and bacillary index were factors that influence persistence. No thromboembolic events were registred. / Anticorpos antifosfolipídeos (aFL) podem ser detectados no curso de diversas infecções, mas costumam ser transitórios. Entretanto, na hanseníase tem-se observado que esses autoanticorpos persistem por mais tempo. Os objetivos do presente estudo foram verificar a persistência de anticorpos anticardiolipina (aCL) e anti-β2glicoproteína  (anti-β2GP) em pacientes com hanseníase, e avaliar as características epidemiológicas, clínicas e imunológicas associadas. Trinta e oito pacientes com diagnóstico de hanseníase e positivos para anticorpos aFL completaram o tratamento de poliquimioterapia (PQT) e foram acompanhados por um tempo médio de 66,9 meses, quando coletou-se outra amostra para nova pesquisa da anticorpos aFL. A detecção de anticorpos aCL e anti-β2GP foi feita pela a técnica de ELISA. A análise dos dados epidemiológicos e clínicos foi feita por regressão logística binária multivariada. Persistência de anticorpos aFL foi demonstrada em 32 (84%) dos 38 pacientes com hanseníase, tratados com PQT e em alta do tratamento PQT, seguidos por um tempo médio de 66,9 meses. Todos os soros positivos eram do isotipo IgM, sendo que 16 desses pacientes (50%) apresentavam a forma virchowiana (VV). Episódios reacionais estavam presentes em três pacientes (9,4%). Dezessete (53,1%) continuavam usando medicação (prednisona e/ou talidomida). Os valores médios de IgM foram altos, 64U/mL para aCL e 62U/mL para anti-β2GP. Em relação às variáveis trombose vascular, morbidade gestacional, diabetes, tabagismo e etilismo não foram observadas diferenças significativas entre os pacientes positivos e negativos para aFL. Na regressão logística demonstrou-se significância estatística para as variáveis idade: (p=0,045, OR=0,91 e IC 95% 0,82-1,00), forma clínica VV (p=0,034; OR=0,02 e IC 95% = 0,0-0,76) e índice baciloscópico (p=0,044; OR=2,74 e IC 95% = 1,03 - 7,33). Portanto, anticorpos aFL na hanseníase, diferentemente de outras infecções, persistem anos após o tratamento em pacientes considerados “curados”. Essa persistência foi influenciada pela idade, forma clínica VV e índice baciloscópico. Não houve associação com fenômenos trombóticos.

O cloridrato de tramadol é um analgésico de ação central, análogo sintético da codeína e morfina, o qual vem sendo amplamente estudado em equinos, sendo avaliado sua farmacocinética e farmacodinâmica. Em humanos, há relato de que o tramadol é substrato para a Gp-P, o que pode ser fator limitante na absorção do tramadol. A Gp-P funciona como uma bomba de efluxo celular, de maneira que, transporta ativamente xenobióticos do meio intracelular para o extracelular, atuando como um mecanismo de proteção contra xenobióticos. O estudo teve como objetivo a detecção do Gene MDR1 a partir do cDNA, e avaliar as alterações fisiológicas e efeito analgésico do tramadol em equinos submetidos a inibição da Gp-P entérica pela ivermectina. Seis equinos, machos e fêmeas, pesando 448±68Kg, foram distribuídos em três grupos autocontrole, recebendo tramadol por sonda nasogástrica na dose 1 mg/kg (GT1), 4 mg/kg (GT4) e recebendo tramadol 1mg/kg associada a ivermectina 0,2mg/kg VO. Foram avaliados FC, f, motilidade intestinal, temperatura corpórea aos 30 min antes, imediatamente antes da administração de qualquer substância para determinação dos valores basais e aos 30min, 60 min, 90 min, 120 min e a cada 60 min até 360 min após o tratamento. A claudicação foi avaliada aos 30 min, 60 min e a cada 60 min até os 360 min. Os parâmetros hemogasométricos foram avaliados no momento 0, 60 min e 120 min. Para as variáveis paramétricas utilizou-se análise de variância (ANOVA) para amostras pareadas, com posterior teste de Dunnett. Para comparações entre os grupos, realizou-se análise de variância, seguido de teste de Tukey. Para a variável não-paramétrica, motilidade intestinal, utilizou-se teste de Wilcoxon para amostras pareadas. As diferenças foram consideradas significantes quando P<0,05. Não foram observadas diferenças na FC e na avaliação analgésica. Houve hipomotilidade no GT1 e GT4 apenas ao final das avaliações e aumento da f em todos os grupos. Houve aumento do HCO3+ e redução do K+ e Ca++. Conclui-se que a inibição da Gp-P entérica pela ivermectina não alterou os efeitos do tramadol nas doses estudadas, sugerindo que o mesmo não é substrato para Gp-P, mas estudos futuros devem ser realizados a fim de avaliar a interação da ivermectina como inibidor da Gp-P na farmacocinética do tramadol. / Tramadol hydrochloride is a centrally acting analgesic, synthetic analogue of codeine and morphine, which has been widely studied in horses, being evaluated its pharmacokinetics and pharmacodynamics. In humans, there is a report that tramadol is a substrate for P-gp, which can be a limiting factor in the absorption of tramadol. P-gp acts as an efflux pump cell, that actively transports xenobiotics from the intracellular to the extracellular environment, acting as a protective mechanism against xenobiotic. The study aimed the detection of MDR1 Gene from cDNA, and the evaluation of physiological parameters and analgesic effect of tramadol in horses submitted to inhibition of enteric P-gp by ivermectin. Six horses, control of themselves, male and female, weighing 448 ± 68kg, were distributed into three groups, receiving tramadol by nasogastric tube in dose of 1 mg/kg (GT1), 4 mg/kg (GT4) and tramadol 1 mg/kg associated with ivermectin 0.2 mg/kg orally. Were evaluated HR, RR, intestinal motility, body temperature 30 min before, and immediately before the administration of any substance for determination of baseline and posterior at 30 min, 60 min, 90 min, 120 min and every 60 min up to 360 min after treatment. The analgesic evaluation occurred at 30 min, 60 min and every 60 min to 360 min. Blood gas parameters were evaluated at 0, 60 min and 120 min. For parametric variables were used analysis of variance (ANOVA) for paired samples, followed by Dunnett's test. For comparisons between groups, ANOVA followed by Tukey test were used. The non-parametric variable, intestinal motility, we used the Wilcoxon test for paired samples. Differences were considered significant when P <0.05. Differences in HR and analgesic evaluation were not observed. Hypomotility occurs in GT1 and GT4 only at the end of evaluation and RR increased in all groups. There was an increase of HCO3- and reduction of K+ and Ca++. We conclude that inhibition of enteric P-gp by ivermectin did not alter the effects of tramadol in the studied doses, suggesting that tramadol it is not a substrate for P-gp, but future studies should be conducted to assess the interaction of ivermectin as inhibitor of P-gp on the pharmacokinetics of tramadol.

O cloridrato de tramadol é um analgésico de ação central, análogo sintético da codeína e morfina, o qual vem sendo amplamente estudado em equinos, sendo avaliado sua farmacocinética e farmacodinâmica. Em humanos, há relato de que o tramadol é substrato para a Gp-P, o que pode ser fator limitante na absorção do tramadol. A Gp-P funciona como uma bomba de efluxo celular, de maneira que, transporta ativamente xenobióticos do meio intracelular para o extracelular, atuando como um mecanismo de proteção contra xenobióticos. O estudo teve como objetivo a detecção do Gene MDR1 a partir do cDNA, e avaliar as alterações fisiológicas e efeito analgésico do tramadol em equinos submetidos a inibição da Gp-P entérica pela ivermectina. Seis equinos, machos e fêmeas, pesando 448±68Kg, foram distribuídos em três grupos autocontrole, recebendo tramadol por sonda nasogástrica na dose 1 mg/kg (GT1), 4 mg/kg (GT4) e recebendo tramadol 1mg/kg associada a ivermectina 0,2mg/kg VO. Foram avaliados FC, f, motilidade intestinal, temperatura corpórea aos 30 min antes, imediatamente antes da administração de qualquer substância para determinação dos valores basais e aos 30min, 60 min, 90 min, 120 min e a cada 60 min até 360 min após o tratamento. A claudicação foi avaliada aos 30 min, 60 min e a cada 60 min até os 360 min. Os parâmetros hemogasométricos foram avaliados no momento 0, 60 min e 120 min. Para as variáveis paramétricas utilizou-se análise de variância (ANOVA) para amostras pareadas, com posterior teste de Dunnett. Para comparações entre os grupos, realizou-se análise de variância, seguido de teste de Tukey. Para a variável não-paramétrica, motilidade intestinal, utilizou-se teste de Wilcoxon para amostras pareadas. As diferenças foram consideradas significantes quando P<0,05. Não foram observadas diferenças na FC e na avaliação analgésica. Houve hipomotilidade no GT1 e GT4 apenas ao final das avaliações e aumento da f em todos os grupos. Houve aumento do HCO3+ e redução do K+ e Ca++. Conclui-se que a inibição da Gp-P entérica pela ivermectina não alterou os efeitos do tramadol nas doses estudadas, sugerindo que o mesmo não é substrato para Gp-P, mas estudos futuros devem ser realizados a fim de avaliar a interação da ivermectina como inibidor da Gp-P na farmacocinética do tramadol. / Tramadol hydrochloride is a centrally acting analgesic, synthetic analogue of codeine and morphine, which has been widely studied in horses, being evaluated its pharmacokinetics and pharmacodynamics. In humans, there is a report that tramadol is a substrate for P-gp, which can be a limiting factor in the absorption of tramadol. P-gp acts as an efflux pump cell, that actively transports xenobiotics from the intracellular to the extracellular environment, acting as a protective mechanism against xenobiotic. The study aimed the detection of MDR1 Gene from cDNA, and the evaluation of physiological parameters and analgesic effect of tramadol in horses submitted to inhibition of enteric P-gp by ivermectin. Six horses, control of themselves, male and female, weighing 448 ± 68kg, were distributed into three groups, receiving tramadol by nasogastric tube in dose of 1 mg/kg (GT1), 4 mg/kg (GT4) and tramadol 1 mg/kg associated with ivermectin 0.2 mg/kg orally. Were evaluated HR, RR, intestinal motility, body temperature 30 min before, and immediately before the administration of any substance for determination of baseline and posterior at 30 min, 60 min, 90 min, 120 min and every 60 min up to 360 min after treatment. The analgesic evaluation occurred at 30 min, 60 min and every 60 min to 360 min. Blood gas parameters were evaluated at 0, 60 min and 120 min. For parametric variables were used analysis of variance (ANOVA) for paired samples, followed by Dunnett's test. For comparisons between groups, ANOVA followed by Tukey test were used. The non-parametric variable, intestinal motility, we used the Wilcoxon test for paired samples. Differences were considered significant when P <0.05. Differences in HR and analgesic evaluation were not observed. Hypomotility occurs in GT1 and GT4 only at the end of evaluation and RR increased in all groups. There was an increase of HCO3- and reduction of K+ and Ca++. We conclude that inhibition of enteric P-gp by ivermectin did not alter the effects of tramadol in the studied doses, suggesting that tramadol it is not a substrate for P-gp, but future studies should be conducted to assess the interaction of ivermectin as inhibitor of P-gp on the pharmacokinetics of tramadol.

O cloridrato de tramadol é um analgésico de ação central, análogo sintético da codeína e morfina, o qual vem sendo amplamente estudado em equinos, sendo avaliado sua farmacocinética e farmacodinâmica. Em humanos, há relato de que o tramadol é substrato para a Gp-P, o que pode ser fator limitante na absorção do tramadol. A Gp-P funciona como uma bomba de efluxo celular, de maneira que, transporta ativamente xenobióticos do meio intracelular para o extracelular, atuando como um mecanismo de proteção contra xenobióticos. O estudo teve como objetivo a detecção do Gene MDR1 a partir do cDNA, e avaliar as alterações fisiológicas e efeito analgésico do tramadol em equinos submetidos a inibição da Gp-P entérica pela ivermectina. Seis equinos, machos e fêmeas, pesando 448±68Kg, foram distribuídos em três grupos autocontrole, recebendo tramadol por sonda nasogástrica na dose 1 mg/kg (GT1), 4 mg/kg (GT4) e recebendo tramadol 1mg/kg associada a ivermectina 0,2mg/kg VO. Foram avaliados FC, f, motilidade intestinal, temperatura corpórea aos 30 min antes, imediatamente antes da administração de qualquer substância para determinação dos valores basais e aos 30min, 60 min, 90 min, 120 min e a cada 60 min até 360 min após o tratamento. A claudicação foi avaliada aos 30 min, 60 min e a cada 60 min até os 360 min. Os parâmetros hemogasométricos foram avaliados no momento 0, 60 min e 120 min. Para as variáveis paramétricas utilizou-se análise de variância (ANOVA) para amostras pareadas, com posterior teste de Dunnett. Para comparações entre os grupos, realizou-se análise de variância, seguido de teste de Tukey. Para a variável não-paramétrica, motilidade intestinal, utilizou-se teste de Wilcoxon para amostras pareadas. As diferenças foram consideradas significantes quando P<0,05. Não foram observadas diferenças na FC e na avaliação analgésica. Houve hipomotilidade no GT1 e GT4 apenas ao final das avaliações e aumento da f em todos os grupos. Houve aumento do HCO3+ e redução do K+ e Ca++. Conclui-se que a inibição da Gp-P entérica pela ivermectina não alterou os efeitos do tramadol nas doses estudadas, sugerindo que o mesmo não é substrato para Gp-P, mas estudos futuros devem ser realizados a fim de avaliar a interação da ivermectina como inibidor da Gp-P na farmacocinética do tramadol. / Tramadol hydrochloride is a centrally acting analgesic, synthetic analogue of codeine and morphine, which has been widely studied in horses, being evaluated its pharmacokinetics and pharmacodynamics. In humans, there is a report that tramadol is a substrate for P-gp, which can be a limiting factor in the absorption of tramadol. P-gp acts as an efflux pump cell, that actively transports xenobiotics from the intracellular to the extracellular environment, acting as a protective mechanism against xenobiotic. The study aimed the detection of MDR1 Gene from cDNA, and the evaluation of physiological parameters and analgesic effect of tramadol in horses submitted to inhibition of enteric P-gp by ivermectin. Six horses, control of themselves, male and female, weighing 448 ± 68kg, were distributed into three groups, receiving tramadol by nasogastric tube in dose of 1 mg/kg (GT1), 4 mg/kg (GT4) and tramadol 1 mg/kg associated with ivermectin 0.2 mg/kg orally. Were evaluated HR, RR, intestinal motility, body temperature 30 min before, and immediately before the administration of any substance for determination of baseline and posterior at 30 min, 60 min, 90 min, 120 min and every 60 min up to 360 min after treatment. The analgesic evaluation occurred at 30 min, 60 min and every 60 min to 360 min. Blood gas parameters were evaluated at 0, 60 min and 120 min. For parametric variables were used analysis of variance (ANOVA) for paired samples, followed by Dunnett's test. For comparisons between groups, ANOVA followed by Tukey test were used. The non-parametric variable, intestinal motility, we used the Wilcoxon test for paired samples. Differences were considered significant when P <0.05. Differences in HR and analgesic evaluation were not observed. Hypomotility occurs in GT1 and GT4 only at the end of evaluation and RR increased in all groups. There was an increase of HCO3- and reduction of K+ and Ca++. We conclude that inhibition of enteric P-gp by ivermectin did not alter the effects of tramadol in the studied doses, suggesting that tramadol it is not a substrate for P-gp, but future studies should be conducted to assess the interaction of ivermectin as inhibitor of P-gp on the pharmacokinetics of tramadol.

&#946;2-glicoproteina I (&#946;2GPI), uma proteína circulante produzida em fígado e intestino, foi estudada no fígado e íleo de ratos durante sepse controlada (S) ou translocação bacteriana (TB) com E. coli R-6. A sepse foi induzida por inoculação endovenosa de 109 UFC/mL/100g. A TB, pelo confinamento de 10 mL 1010 UFC/mL, no intestino. Grupos controle receberam veículo. Após 2h, os animais foram sacrificados. &#946;2GPI foi espressa nos tecidos de todos animais, em cortes fixados em metacarn e impregnados com parafina, após reação com anti-&#946;2GPI amplificada com Envision-AP. O fígado mostrou dois padrões citoplasmáticos distintos. Um padrão difuso, atribuído à síntese protéica, aumentado somente no grupo S e um padrão focal, invariável. No íleo, a mucosa foi negativa; a submucosa, o endotélio sangüíneo e linfático, positivos. Esta marcação aumentou somente no grupo TB. Os resultados sugerem a participação da &#946;2GPI na regulação local da resposta hepática e intestinal de fase aguda. / &#946;2-glycoprotein I is a circulating protein (&#946;2GPI) produced in liver and intestines. &#946;2GPI was studied in liver and ileum in rats under controlled sepsis (S) or bacterial translocation (BT) with E. coli R-6. Sepsis was induced by endovenous inoculation with 109 CFU/mU100g. BT was induced by confining 10 mL 1010 CFU/mL, to the intestine. Control groups received vehicle. After 2h, animals were sacrificed. Metacarn fixed, paraffin embedded tissue slices were reacted with monoclonal anti-&#946;2GPI, revealed with Envision-AP and hematoxylin counterstained. Ali animals stained for &#946;2GPI in the liver and ileum. Liver presented two distinct cytoplasm staining patterns. The diffuse pattern, ascribed to protein synthesis, increased in group S animals only. The spotted pattern was invariant. Ileum mucosa was negative, while submucosa, blood and Iymphatic endothelium were positive. The ileum staining increased after TB, only. Results underline the hypothesis for locally regulated liver and intestine contribution to acute phase response modulation.

&#946;2-glicoproteina I (&#946;2GPI), uma proteína circulante produzida em fígado e intestino, foi estudada no fígado e íleo de ratos durante sepse controlada (S) ou translocação bacteriana (TB) com E. coli R-6. A sepse foi induzida por inoculação endovenosa de 109 UFC/mL/100g. A TB, pelo confinamento de 10 mL 1010 UFC/mL, no intestino. Grupos controle receberam veículo. Após 2h, os animais foram sacrificados. &#946;2GPI foi espressa nos tecidos de todos animais, em cortes fixados em metacarn e impregnados com parafina, após reação com anti-&#946;2GPI amplificada com Envision-AP. O fígado mostrou dois padrões citoplasmáticos distintos. Um padrão difuso, atribuído à síntese protéica, aumentado somente no grupo S e um padrão focal, invariável. No íleo, a mucosa foi negativa; a submucosa, o endotélio sangüíneo e linfático, positivos. Esta marcação aumentou somente no grupo TB. Os resultados sugerem a participação da &#946;2GPI na regulação local da resposta hepática e intestinal de fase aguda. / &#946;2-glycoprotein I is a circulating protein (&#946;2GPI) produced in liver and intestines. &#946;2GPI was studied in liver and ileum in rats under controlled sepsis (S) or bacterial translocation (BT) with E. coli R-6. Sepsis was induced by endovenous inoculation with 109 CFU/mU100g. BT was induced by confining 10 mL 1010 CFU/mL, to the intestine. Control groups received vehicle. After 2h, animals were sacrificed. Metacarn fixed, paraffin embedded tissue slices were reacted with monoclonal anti-&#946;2GPI, revealed with Envision-AP and hematoxylin counterstained. Ali animals stained for &#946;2GPI in the liver and ileum. Liver presented two distinct cytoplasm staining patterns. The diffuse pattern, ascribed to protein synthesis, increased in group S animals only. The spotted pattern was invariant. Ileum mucosa was negative, while submucosa, blood and Iymphatic endothelium were positive. The ileum staining increased after TB, only. Results underline the hypothesis for locally regulated liver and intestine contribution to acute phase response modulation.

Para avaliar a influência dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) do CYP2B6, CYP3A5, GSTM1, GSTP1, GSTT1, PON1, NQO1 e MDR1 na resposta ao tratamento com R-CHOP e CHOP, 82 pacientes com Linfoma Difuso de Grandes Células B, sem evidências de infecção por HIV, foram selecionados nesse estudo. Amostras de sangue periférico foram coletadas para extração de DNA. Os SNPs foram analisados por PCR-RFLP. Em relação aos pacientes que apresentaram resposta completa (RC) ao tratamento (70%), 51% foram tratados com R-CHOP. Sobre o tratamento, 50% dos pacientes com RC apresentaram classificação de ECOG 0-1 (p=0,0193) e a maioria desses pacientes (41%) não apresentaram envolvimento extranodal (p=0,0377). Não houve associação entre os SNPs do CYP2B6, CYP3A5, GSTT1, NQO1 e MDR1 (C3435T) e as variáveis estudadas. Apenas CYP3A5 (sexo p=0,0519), GSTM1 (idade p=0,016; tratamento p=0,0372), GSTP1 (envolvimento extranodal p=0,0307), PON1 (sintomas B p=0,0201; Bulky p=0,0148) e MDR1 C1236T (sexo p=0,0316) mostraram associação. Em relação à sobrevida global, apenas tratamento (p=0,0129), IPI (p=0,000342), idade (p=0,0155), estadiamento (p=0,00281) e ECOG (p=0,00869) apresentaram resultados significantes. Quanto à sobrevida livre de doença (SLD), apenas idade (p=0,0292), estadiamento (p=0,0402) e ECOG (p=0,0142) apresentaram resultados significantes / To evaluated the influence of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of CYP2B6, CYP3A5, GSTM1, GSTP1, GSTT1, PON1, NQO1 and MDR1 in the treatment response with R-CHOP and CHOP, 82 patients with Diffuse Large B-cell Lymphoma, without evidence of HIV infection, were enrolled in this study. Peripheral blood samples were collected for DNA extraction. The SNPs were analyzed by PCR-RFLP. In relation the patients that showed complete response (CR) to the treatment (70%), 51% were treated with R-CHOP. About the treatment, 50% of the patients with CR showed ECOG classification of 0-1 and the most of these patients (41%) did not showed extranodal involvement (p=0,0377). There was no association between CYP2B6, CYP3A5, GSTT1, NQO1 and MDR1 (C3435T) SNPs and the variables studied. Only CYP3A5 (gender p=0,0519), GSTM1 (age p=0,016; treatment p=0,0372), GSTP1 (extranodal involvement p=0,0307), PON1 (B symptoms p=0,0201; Bulky p=0,0148) e MDR1 C1236T (gender p=0,0316) showed association. In relation to overall survival, only treatment (p=0,0129), IPI (p=0,000342), age (p=0,0155), stadiament (p=0,00281) and ECOG (p=0,00869) showed significant results. To disease-free survival, only age (p=0,0292), stadiament (p=0,0402) e ECOG (p=0,0142) showed significant results

Para avaliar a influência dos polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) do CYP2B6, CYP3A5, GSTM1, GSTP1, GSTT1, PON1, NQO1 e MDR1 na resposta ao tratamento com R-CHOP e CHOP, 82 pacientes com Linfoma Difuso de Grandes Células B, sem evidências de infecção por HIV, foram selecionados nesse estudo. Amostras de sangue periférico foram coletadas para extração de DNA. Os SNPs foram analisados por PCR-RFLP. Em relação aos pacientes que apresentaram resposta completa (RC) ao tratamento (70%), 51% foram tratados com R-CHOP. Sobre o tratamento, 50% dos pacientes com RC apresentaram classificação de ECOG 0-1 (p=0,0193) e a maioria desses pacientes (41%) não apresentaram envolvimento extranodal (p=0,0377). Não houve associação entre os SNPs do CYP2B6, CYP3A5, GSTT1, NQO1 e MDR1 (C3435T) e as variáveis estudadas. Apenas CYP3A5 (sexo p=0,0519), GSTM1 (idade p=0,016; tratamento p=0,0372), GSTP1 (envolvimento extranodal p=0,0307), PON1 (sintomas B p=0,0201; Bulky p=0,0148) e MDR1 C1236T (sexo p=0,0316) mostraram associação. Em relação à sobrevida global, apenas tratamento (p=0,0129), IPI (p=0,000342), idade (p=0,0155), estadiamento (p=0,00281) e ECOG (p=0,00869) apresentaram resultados significantes. Quanto à sobrevida livre de doença (SLD), apenas idade (p=0,0292), estadiamento (p=0,0402) e ECOG (p=0,0142) apresentaram resultados significantes / To evaluated the influence of single nucleotide polymorphisms (SNPs) of CYP2B6, CYP3A5, GSTM1, GSTP1, GSTT1, PON1, NQO1 and MDR1 in the treatment response with R-CHOP and CHOP, 82 patients with Diffuse Large B-cell Lymphoma, without evidence of HIV infection, were enrolled in this study. Peripheral blood samples were collected for DNA extraction. The SNPs were analyzed by PCR-RFLP. In relation the patients that showed complete response (CR) to the treatment (70%), 51% were treated with R-CHOP. About the treatment, 50% of the patients with CR showed ECOG classification of 0-1 and the most of these patients (41%) did not showed extranodal involvement (p=0,0377). There was no association between CYP2B6, CYP3A5, GSTT1, NQO1 and MDR1 (C3435T) SNPs and the variables studied. Only CYP3A5 (gender p=0,0519), GSTM1 (age p=0,016; treatment p=0,0372), GSTP1 (extranodal involvement p=0,0307), PON1 (B symptoms p=0,0201; Bulky p=0,0148) e MDR1 C1236T (gender p=0,0316) showed association. In relation to overall survival, only treatment (p=0,0129), IPI (p=0,000342), age (p=0,0155), stadiament (p=0,00281) and ECOG (p=0,00869) showed significant results. To disease-free survival, only age (p=0,0292), stadiament (p=0,0402) e ECOG (p=0,0142) showed significant results