Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aflatoxin B1 (AFB1) is one of the main mycotoxins that can be identified in foods, and has relevance for agricultural economics and public health because of its immunotoxic properties. A functional immune system is a basic requirement for a healthy life in modern animal production. The interaction involving nutrition and immunity is a strategic factor to obtain a high quality performance in the poultry industry. Immunomodulators such as β-glucans have an immunostimulating activity, which enables the host ability to resist opportunistic infections. To contribute to the elucidation of the mechanism of action of β-glucans in broiler chicken lymphocytes, the effects of the concentrations of 0.1, 1 and 10% of β-glucans derived from Saccharomyces cerevisiae were investigated in lymphocytes exposed to increasing concentrations of AFB1 (0, 0.1, 1, 10, 20 μg/ml). Lymphocytes were separated by Ficoll-Histopaque density and cultured in 96 well-plates containing AFB1 and/or β-glucans in a 5% CO2 atmosphere at 39°C. MTT, PicoGreen® and 2'-7'-dichlorofluorescein diacetate cytotoxicity tests were evaluated at 24, 48 and 72 h of incubation. The comet assay to elucidate the DNA damage was also performed. The percentage of viable cells decreased in the presence of 10 μg/ml AFB1 at 48 h (p < 0.05) and 10 and 20 μg/ml AFB1 at 72 h (p < 0.001 and p < 0.01, respectively), when compared to the control group (0 μg/ml). Furthermore, an increase in cell-free DNA in AFB1 concentrations > 1 μg/ml (p < 0.001) and the generation of ROS at 24 h were also observed. DNA damage increased approximately 2.3 fold in lymphocytes exposed to 20 μg/ml of AFB1 when compared to the control group. Conversely, β-glucans showed cytoprotective effects (p < 0.001), and the concentration of 1% reverted the AFB1-induced lymphocyte damage. β-glucans at 10% significantly increased (p < 0.001) the formation of reactive oxygen species (ROS), potentiating the AFB1-induced ROS formation. In conclusion, this study showed that AFB1 and β-glucans exert influence on lymphocyte oxidative metabolism and have dose-dependent potentiating effects. The results also showed genoprotective in vitro effect of β-glucans in poultry lymphocytes exposed to AFB1, being the concentration of 1% β-glucans able to maintain DNA integrity. / A aflatoxina B1 (AFB1) é uma das principais micotoxinas que podem ser identificadas em alimentos, possuindo relevância agroeconômica e para a saúde pública, por ser considerada imunotóxica. Um sistema imune funcional é um requisito básico para uma vida saudável na produção moderna de animais. A interação envolvendo nutrição e imunidade é um fator estratégico para obter um bom desempenho em frangos de corte. Devido as suas atividades imunomodulatórias, substâncias como as β-glucanas proporcionam ao hospedeiro uma maior capacidade de resistir a infecções oportunistas. Para melhor compreender o mecanismo de ação das β-glucanas, sobre os linfócitos de frangos de corte, investigou-se os efeitos das concentrações de 0.1, 1 e 10% de β-glucanas derivadas do fungo Saccharomyces cerevisiae em linfócitos expostos a crescentes concentrações de AFB1 (0, 0.1, 1, 10, 20 μg/ml). Os linfócitos foram separados através do reagente de densidade Ficoll-Histopaque e cultivados em placas de 96 poços, contendo as concentrações de AFB1 e/ou β-glucanas em atmosfera de 5% de CO2 a 39°C durante 24, 48 e 72 h. A citotoxicidade celular foi avaliada através dos testes MTT e PicoGreen®, e a formação de espécies reativas de oxigênio (EROS) através do ensaio 2′-7′- diacetato diclorofluoresceína. Também foi utilizado o teste cometa para elucidar os danos ao DNA. A viabilidade celular reduziu na presença de 10 μg/ml de AFB1 em 48 h (p < 0.05) e em 10 and 20 μg/ml de AFB1 (p < 0.01 e p < 0.001, respectivamente) em 72 h quando comparada ao grupo controle. Além disso, as concentrações de AFB1 > 1 μg/ml aumentaram significativamente (p < 0.001) a liberação de fita dupla de DNA (dsDNA) e a produção de EROS em 24 h. Os danos causados ao DNA foram confirmados através do momento cauda do cometa e aumentaram cerca de 2,3 vezes em linfócitos expostos a 20 μg/ml de AFB1 quando comparados ao grupo controle. Por outro lado, as β-glucanas exerceram efeitos citoprotetores (p < 0.001), sendo que a concentração de 1% foi capaz de reverter os danos genotóxicos causados pela ação da AFB1. Já a concentração de 10% de β-glucanas aumentou significativamente (p < 0.001) a formação de EROS, potencializando a ação da AFB1. Em conclusão, este estudou evidenciou que a AFB1 e as β-glucanas exercem influência sobre o metabolismo oxidativo dos linfócitos e possui efeito potencializador dose-dependente. Os resultados também evidenciaram o efeito genoprotetor in vitro de β-glucanas em linfócitos de frangos expostos a AFB1, sendo a concentração de β-glucanas a 1% capaz de manter a integridade do DNA.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KarinaMM_DISSERT.pdf: 2256022 bytes, checksum: e9ccee900e81515e9367adddbe68fd65 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The frequency of disseminated candidiasis caused by yeast has enhancing in intensive care unit. Despite the availability of new antifungal drugs, C. albicans sepsis mortality causes can be as high as 30-40%. So, it has been needed to looking for a new therapeutic medicament that helps in treatment and prevention of this infection. Previous data that demonstrated that particulated ?-glucan stimulates the immune system and experiments of this work were conducted to investigating if ?-glucan extracted from Saccharomices cerevisiae, could modified the evolution of mouse model C. albicans systemic infection. Balb/c mice with sepsis and ?-1,3 glucan treated or not were analyzed the influence of ?-1,3 glucan in survival of the animals, in the fungal burdens in kidney, in the production of urea and TNF even in the histopathology of kidney. The experiments shown that the infected animals a nd glucan treated had great survival (p<0,05), less unit form colony in kidney and normal levels of urea. In the kidney histopathology of not glucan treated animals it has seen more lesions when compared with treated animals. So we conclude that ?-1,3 glucan could stimulate the immune system against disseminated C. albicans / A frequ?ncia de candid?ase invasiva causada por leveduras tem aumentado nas unidades de terapia intensiva. Apesar dos importantes avan?os no desenvolvimento de agentes antif?ngicos, a sepse por Candida ssp tem inaceit?vel atribui??o a mortalidade de 40-50% de pessoas. Existe a necessidade de se identificar novos agentes terap?uticos que auxiliem no tratamento e preven??o dessa infec??o. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar se a ?-1,3 glucana particulada, extra?da do Saccharomyces cerevisiae, seria capaz de modificar a evolu??o da infec??o sist?mica por Candida albicans em modelo experimental. Camundongos Balb/c submetidos ? sepse e tratados ou n?o com ?-1,3 glucana particulada foram avaliados com rela??o ao tempo de sobrevida, quantifica??o das unidades formadoras de col?nia nos rins, dosagem de ur?ia e TNF s?ricos e an?lise histopatol?gica renal para avalia??o de infiltrado inflamat?rio e presen?a do fungo no tecido renal. Os resultados mostraram que os animais infectados por Candida albicans e tratados com glucana apresentaram uma maior sobrevida (p<0,05), uma menor quantidade de unidades formadoras de col?nia nos rins e valores de ur?ia normais. Na an?lise dos resultados da histopatologia foi observado um maior dano no tecido renal dos animais pertencentes ao grupo n?o tratado com glucana, diferentemente do observado nos animais tratados pela glucana os quais apresentaram pequeno dano renal. Assim, podemos concluir que a glucana foi capaz de estimular o sistema imune na defesa contra infec??o disseminada por C. albicans

O presente trabalho avaliou o comportamento de três híbridos de cana-de-açúcar, contrastantes quanto aos teores de hemicelulose e lignina, diante do pré-tratamento com ácido sulfúrico diluído e da subsequente conversão enzimática da glucana à glicose. Os híbridos 89, 140 e 321 (H89, H140 e H321) foram submetidos à diferentes condições de pré-tratamento ácido: 150 ºC; 13 g ácido sulfúrico/100 g material; e tempos de reação que variaram entre 20 e 90 min. Os rendimentos de sólidos residuais diminuíram progressivamente em função do aumento da severidade do pré-tratamento. O H89 apresentou rendimentos nitidamente menores, comparados ao dos híbridos H140 e H321; reflexo da maior solubilização de todos os três constituintes estruturais deste híbrido. A hemicelulose foi o componente da parede celular removido com maior eficiência pelo pré-tratamento ácido. Além disso, o pré-tratamento modificou a proporção molar dos constituintes iniciais da hemicelulose (xilose, ácido acético e arabinose), resultando em estruturas residuais menos ramificadas. Paralelamente, também foi observada uma pequena remoção de lignina (entre 21% e 31%, dependendo do híbrido) e de glucana (entre 4% e 15%, dependendo do híbrido) durante o pré-tratamento. Os carboidratos detectados nos hidrolisados ácidos dos híbridos foram predominantemente monoméricos quando os tempos de reação foram maiores do que 40 min. No entanto, os híbridos H140 e H321 se diferenciaram do H89, pois apresentaram oligossacarídeos (DP>=2) nos hidrolisados obtidos em tempos de reação entre 20 e 30 min. Os rendimentos de conversão enzimática da glucana contida nos sólidos pré-tratados aumentaram substancialmente após o pré-tratamento ácido (principalmente devido à remoção de hemicelulose). No entanto, as conversões máximas de glucana em glicose não ultrapassaram 65%. A deslignificação parcial das amostras pré-tratadas com ácido (90 min), empregando soluções de clorito de sódio/ácido acético, permitiu aumentar a conversão enzimática de glucanas até valores próximos a 100%. De forma geral, o pré-tratamento ácido e a subsequente deslignificação proporcionaram maiores ganhos de conversão enzimática àqueles híbridos inicialmente mais recalcitrantes (H321 e H140). Os rendimentos de pré-tratamento (ácido diluído e clorito-ácido) e da conversão enzimática demonstraram que a maior obtenção de glicose por área plantada (Kg/hectare) ou por material processado (Kg/ton material) seria alcançada com a utilização dos híbridos H89 e H321, respectivamente. A investigação das características microestruturais das paredes celulares dos híbridos permitiu compreender como as etapas de tratamento químico afetaram a conversão enzimática da glucana. O pré-tratamento ácido diminuiu substancialmente o volume total de poros dos três híbridos, enquanto a subsequente deslignificação não retornou a porosidade aos níveis originalmente detectados nas amostras não tratadas. Por outro lado, a área superficial acessível de glucana dos substratos apresentou relação direta com os rendimentos de conversão enzimática da glucana à glicose (R2=0,92). A compilação dos dados analíticos, aliada às determinações de glucana acessível, permitiu propor um parâmetro empírico (relação do teor de glucana com a soma de hemicelulose+lignina+extraíveis), útil para predizer os níveis de conversão enzimática de glucana nas amostras estudadas. / This study evaluated the performance of three sugarcane hybrids, contrasting for lignin and hemicellulose contents, under dilute sulfuric acid pretreatment and subsequent enzymatic conversion of glucan to glucose. The hybrids 89, 140 and 321 (H89, H140, and H321) were pretreated at different reaction conditions: 150 °C; 13 g sulfuric acid/100 g material; and reaction time ranging from 20 to 90 min. Residual solid yields gradually decreased according to increasing of pretreatment severity. H89 showed the lowest yields compared to the H140 and H321 hybrids, due to the highest solubilization of all the three structural components. Hemicellulose was the major cell wall component removed by the acid pretreatment. Furthermore, acid pretreatment modified the molar ratio of the initial hemicellulose constituents (xylose, arabinose and acetic acid), resulting in less branched structures. Lignin (between 21% and 31%, depending on the hybrid) and glucan (between 4% and 15%, depending on the hybrid) removal were also observed during the pretreatment. Carbohydrates in liquid hydrolysates were predominantly detected as monomers at reaction times greater than 40 min. However, H140 and H321 hybrids differed from H89, since they presented oligosaccharides (DP>=2) in the hydrolysates obtained at short reaction time (20 and 30 min). Enzymatic conversion of glucan from pretreated solids was substantially increased after the acid pretreatment (mainly due to the hemicellulose removal). Nevertheless, maximum conversion of glucan to glucose did not exceed 65%. Partial delignification of the acid pretreated samples (90 min), employing sodium chlorite/acetic acid solutions, increased the enzymatic conversion of glucan to values near to 100%. In general, acid pretreatment and subsequent delignification provided higher gains of enzymatic conversion to the hybrids originally more recalcitrant (H321 and H140). The pretreatment (dilute acid and chlorite-acid) and enzymatic conversion yields demonstrated that to obtain higher amounts of glucose, taking into account the planted area (Kg/ha) or raw material processed (Kg/ton), would be achieved by using H89 and H321 hybrids, respectively. Analysis of the micro-structural features of the hybrids allowed understanding the effect of the chemical treatment step in the enzymatic conversion of glucan. Acid pretreatment significantly decreased the total pores volume of these hybrids, while the subsequent delignification do not returned the porosity to the original levels detected in raw samples. On the other hand, the accessible surface area of glucan showed a direct correlation with the enzymatic conversion levels of glucan to glucose (the model including several substrates presented R2=0.92). The compilation of analytical data, combined with the accessible glucan, allowed proposing an empirical parameter (ratio of the glucan content with the sum of hemicellulose+lignin+extractives), that was useful for predicting the enzymatic conversion levels of glucan for all the evaluated samples.

O presente trabalho avaliou o comportamento de três híbridos de cana-de-açúcar, contrastantes quanto aos teores de hemicelulose e lignina, diante do pré-tratamento com ácido sulfúrico diluído e da subsequente conversão enzimática da glucana à glicose. Os híbridos 89, 140 e 321 (H89, H140 e H321) foram submetidos à diferentes condições de pré-tratamento ácido: 150 ºC; 13 g ácido sulfúrico/100 g material; e tempos de reação que variaram entre 20 e 90 min. Os rendimentos de sólidos residuais diminuíram progressivamente em função do aumento da severidade do pré-tratamento. O H89 apresentou rendimentos nitidamente menores, comparados ao dos híbridos H140 e H321; reflexo da maior solubilização de todos os três constituintes estruturais deste híbrido. A hemicelulose foi o componente da parede celular removido com maior eficiência pelo pré-tratamento ácido. Além disso, o pré-tratamento modificou a proporção molar dos constituintes iniciais da hemicelulose (xilose, ácido acético e arabinose), resultando em estruturas residuais menos ramificadas. Paralelamente, também foi observada uma pequena remoção de lignina (entre 21% e 31%, dependendo do híbrido) e de glucana (entre 4% e 15%, dependendo do híbrido) durante o pré-tratamento. Os carboidratos detectados nos hidrolisados ácidos dos híbridos foram predominantemente monoméricos quando os tempos de reação foram maiores do que 40 min. No entanto, os híbridos H140 e H321 se diferenciaram do H89, pois apresentaram oligossacarídeos (DP>=2) nos hidrolisados obtidos em tempos de reação entre 20 e 30 min. Os rendimentos de conversão enzimática da glucana contida nos sólidos pré-tratados aumentaram substancialmente após o pré-tratamento ácido (principalmente devido à remoção de hemicelulose). No entanto, as conversões máximas de glucana em glicose não ultrapassaram 65%. A deslignificação parcial das amostras pré-tratadas com ácido (90 min), empregando soluções de clorito de sódio/ácido acético, permitiu aumentar a conversão enzimática de glucanas até valores próximos a 100%. De forma geral, o pré-tratamento ácido e a subsequente deslignificação proporcionaram maiores ganhos de conversão enzimática àqueles híbridos inicialmente mais recalcitrantes (H321 e H140). Os rendimentos de pré-tratamento (ácido diluído e clorito-ácido) e da conversão enzimática demonstraram que a maior obtenção de glicose por área plantada (Kg/hectare) ou por material processado (Kg/ton material) seria alcançada com a utilização dos híbridos H89 e H321, respectivamente. A investigação das características microestruturais das paredes celulares dos híbridos permitiu compreender como as etapas de tratamento químico afetaram a conversão enzimática da glucana. O pré-tratamento ácido diminuiu substancialmente o volume total de poros dos três híbridos, enquanto a subsequente deslignificação não retornou a porosidade aos níveis originalmente detectados nas amostras não tratadas. Por outro lado, a área superficial acessível de glucana dos substratos apresentou relação direta com os rendimentos de conversão enzimática da glucana à glicose (R2=0,92). A compilação dos dados analíticos, aliada às determinações de glucana acessível, permitiu propor um parâmetro empírico (relação do teor de glucana com a soma de hemicelulose+lignina+extraíveis), útil para predizer os níveis de conversão enzimática de glucana nas amostras estudadas. / This study evaluated the performance of three sugarcane hybrids, contrasting for lignin and hemicellulose contents, under dilute sulfuric acid pretreatment and subsequent enzymatic conversion of glucan to glucose. The hybrids 89, 140 and 321 (H89, H140, and H321) were pretreated at different reaction conditions: 150 °C; 13 g sulfuric acid/100 g material; and reaction time ranging from 20 to 90 min. Residual solid yields gradually decreased according to increasing of pretreatment severity. H89 showed the lowest yields compared to the H140 and H321 hybrids, due to the highest solubilization of all the three structural components. Hemicellulose was the major cell wall component removed by the acid pretreatment. Furthermore, acid pretreatment modified the molar ratio of the initial hemicellulose constituents (xylose, arabinose and acetic acid), resulting in less branched structures. Lignin (between 21% and 31%, depending on the hybrid) and glucan (between 4% and 15%, depending on the hybrid) removal were also observed during the pretreatment. Carbohydrates in liquid hydrolysates were predominantly detected as monomers at reaction times greater than 40 min. However, H140 and H321 hybrids differed from H89, since they presented oligosaccharides (DP>=2) in the hydrolysates obtained at short reaction time (20 and 30 min). Enzymatic conversion of glucan from pretreated solids was substantially increased after the acid pretreatment (mainly due to the hemicellulose removal). Nevertheless, maximum conversion of glucan to glucose did not exceed 65%. Partial delignification of the acid pretreated samples (90 min), employing sodium chlorite/acetic acid solutions, increased the enzymatic conversion of glucan to values near to 100%. In general, acid pretreatment and subsequent delignification provided higher gains of enzymatic conversion to the hybrids originally more recalcitrant (H321 and H140). The pretreatment (dilute acid and chlorite-acid) and enzymatic conversion yields demonstrated that to obtain higher amounts of glucose, taking into account the planted area (Kg/ha) or raw material processed (Kg/ton), would be achieved by using H89 and H321 hybrids, respectively. Analysis of the micro-structural features of the hybrids allowed understanding the effect of the chemical treatment step in the enzymatic conversion of glucan. Acid pretreatment significantly decreased the total pores volume of these hybrids, while the subsequent delignification do not returned the porosity to the original levels detected in raw samples. On the other hand, the accessible surface area of glucan showed a direct correlation with the enzymatic conversion levels of glucan to glucose (the model including several substrates presented R2=0.92). The compilation of analytical data, combined with the accessible glucan, allowed proposing an empirical parameter (ratio of the glucan content with the sum of hemicellulose+lignin+extractives), that was useful for predicting the enzymatic conversion levels of glucan for all the evaluated samples.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Os cogumelos há muitos anos vêm sendo utilizados na alimentação por seus valores nutricionais e/ou como agente terapêutico. Um dos fungos mais estudados atualmente é o Agaricus blazei Murrill, popularmente conhecido como Cogumelo do Sol, em função dos efeitos benéficos que lhe é creditado na prevenção de câncer. O estudo analisou os efeitos da ingestão do A. blazei, no parênquima pulmonar de ratos Wistar submetidos a estímulo carcinógeno induzido pela nitrosamina 4-(metilnitrosamina)-1-(3-piridil)-1 butanona NNK, potente carcinogênico pulmonar sistêmico em roedores. Foi preparado extrato aquoso de A. blazei nas doses de 14,3 mg e 42,9 mg administrado por gavagem durante 22 semanas juntamente com a NNK administrada via subcutânea na dose de 1,5 mg de NNK/Kg de peso corporal do animal durante 20 semanas. Foram formados seis grupos experimentais: Grupo Controle (GC); Grupo Cogumelo do Sol nas doses de 14,3 mg e 42,9 mg por gavagem e injeção de óleo de milho subcutânea (CSOL 14,3 e CSOL 42,9); Grupo Nitrosamina (GN) com injeção de NNK subcutânea e salina por gavagem; Grupo Nitrosamina com Cogumelo do Sol nas doses de 14,3 e 42,9 mg (NSOL 14,3 e NSOL 42,9). Os animais foram submetidos à tomografia computadorizada (TC) para monitoramento do surgimento de possíveis tumores, foi analisado também peso corporal, consumo de ração ao longo de todo o experimento e realizada a composição centesimal do A. blazei Murrill. Ao final do experimento os animais foram mortos e foram analisados: hemograma completo, hepatograma, colesterol, triglicerídeo, análise macroscópica e microscópica do pulmão e a análise de curtose da curva do histograma fornecido pelo software BEBÚI utilizado no estudo através da imagem pulmonar da TC. Como conclusão foi verificado que a substância NNK na dose utilizada neste experimento não foi capaz de desenvolver uma neoplasia pulmonar nos animais estudados no período do experimento; no presente modelo experimental as diferenças encontradas nas análises histopatológicas e na análise da curtose mostram que a dose de cogumelo do sol de 14,3 mg se mostrou mais eficaz contra o surgimento de inflamação e opacidades pulmonares se comparada à dose de 42,9 mg. / The mushrooms have been used for many years as food for its nutritional value and/or as a therapeutic agent. One of the most studied fungus is currently the Agaricus blazei Murrill, popularly Known as Cogumelo do Sol, for its beneficial credited in the prevention of cancer. This study examined the effects of ingestion of A. blazei in the lung parenchyma of wistar rats subjected to stimulus-induced carcinogen 4 - (metilnitrosamina) -1 - (3-pyridyl) -1 butanone NNK, a potent systemic lung carcinogen in rodents. Was prepared aqueous extract of A. blazei in doses of 14,3 mg and 42,9 mg administered by gavage during 22 weeks together with NNK administered subcutaneously at a dose of 1,5 mg NNK/Kg body weight of the animal during 20 weeks. Were formed six groups: Control Group (CG); Mushroom Group at doses of 14,3 mg and 42,9 mg by gavage and injection of corn oil subcutaneously (CSOL 14.3 and 42.9); Group Nitrosamine (GN) with subcutaneous injection of NNK and saline by gavage; Group Nitrosamine + Mushroom at doses of 14,3 mg and 42,9 mg (NSOL 14.3 and NSOL 42.9). The animals were submitted to Computed Tomografy (CT) to monitor the possibility of development of lung tumors. Was also examined body weight and food intake throughout the experiment. At the end of 22 weeks, the experiment lasted for over four months for observation of development or growth of tumors via CT. After this period the animals were killed and analyzed: complete blood count, hepatogram, cholesterol, triglycerides, macroscopic and microscopic analysis of lung and kurtosis of the histogram curve supplied by the software used in the study called BEBÚI through the lung CT image. In conclusion it was found that NNK dose used on this study was not able to development a lung cancer in animals studied during the experiment. On this experimental model the differences found in histological analysis and the analysis of kurtosis shows that the dose of A. blazei of 14,3 mg was more effective against inflammation and the appearance of opacities compared to the dose of 42,9 mg.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-01-31T12:37:20Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2719783 bytes, checksum: 00456e5b8ca69f853baec641a28cd6f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-31T12:37:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2719783 bytes, checksum: 00456e5b8ca69f853baec641a28cd6f2 (MD5) Previous issue date: 2016-04-01 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The β-D-glucans are polysaccharides constituting the cell wall of yeasts such as Saccharomyces cerevisiae. Evidence shows polymers have several beneficial effects, mainly related to immunomodulation. However, their action on platelet and endothelial function is understudied. This study aimed to evaluate the effect of (1-3) (1-6) β-D-glucan extracted from S. cerevisiae and derivative carboxymethylated (CM-G) on vascular and platelet function in rats. The animals were treated orally with CM-G and BG-Sc at a dose of 20 mg/kg daily for eight days and the controls received saline as placebo. At end, were collected blood and thoracic aortic artery to study platelet activation and aggregation by light transmission, flow cytometry, vascular reactivity and cytokine assay. In vitro studies of platelet activation and aggregation induced by adenosine diphosphate (ADP) and collagen were conducted with CM-G at different concentrations (100 and 300 μg/mL). Significant reduction in IL-8 levels (4,18 ± 0,72 pg/mL) in the group treated with CM-G was also found when compared to control (22,7 ± 6,9 pg/mL) and the BG-Sc group (16,4 ± 2,4 pg/mL). The reactivity studies shows BG-Sc and CM-G had no influence on vascular response to phenylephrine (PHE) compared to the control. In the group treated with BG-SC, the response to vasorelaxantes agents such as acetylcholine (ACH; Emax = 90,2 ± 14,1%; pD2 = 6,36 ± 0,30 M) and sodium nitroprusside (SNP; Emax = 92,3 ± 2,4%; pD2 = 10,21 ± 0,10M) were impaired compared to controls (ACH: Emax = 100 ± 7,5%; pD2 = 8,17 ± 0,25 M; SNP: Emax = 100 ± 9,5%; pD2 = 11,18 ± 0,27 M). However, treatment with CM-G (max = 93,1 ± 2,7%; pD2 = 11,71 ± 0,07 M) increased the potency of NPS when compared with the control (Emax = 100 ± 9.5%; pD2 = 11.18 ± 0.27). In vitro studies of platelet aggregation by light transmission reveals CM-G inhibited the aggregation stimulated by ADP in doses of 100 and 300 mg/ml, reaching 25,7 ± 2,7% and 14,8 ± 3,2% of aggregation, respectively. When aggregation was induced by collagen, only the dose 300 mg/ml had inhibitory activity (33 ± 6,2%). The antiplatelet effect was similar to acetylsalicylic acid when the aggregation was generate by ADP. Aggregation inhibition was also demonstrated by flow cytometry, however was observed that CM-G had no effect on platelet activation. In treated animals, there was inhibition of platelet aggregation induced by ADP (45% ± 3,9 and 45 ± 6%, respectively). However, when induced by collagen, antiplatelet effect was observed only in animals receiving the BG-Sc (22,6 ± 7,7%). The treatment and in vitro aggregation assays suggest that CM-G appears to be more selective for ADP. The findings indicate the CM-G and BG-Sc feature antiplatelet effect and modulating vascular function. Thus, the use of these polysaccharides may be a possible tool for the prevention of cardiovascular diseases / As β-D-glucanas são polissacarídeos constituintes da parede celular de leveduras, como a Saccharomyces Cerevisae. Evidências mostram que esses polímeros possuem diversos efeitos benéficos, principalmente relacionados a imunomodulação. Entretanto, a sua ação sobre a função plaquetária e endotelial é pouco estudada. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito da (1-3) (1-6) β-d-glucana extraída de S. cerevisae e do seu derivado carboximetilado (CM-G) sobre a função vascular e plaquetária em ratos. Os animais foram tratados por via oral com CM-G e BG-Sc na dose de 20 mg/Kg, diariamente, durante oito dias, e os controles receberam solução salina como placebo. Ao final, foram coletados o sangue e a artéria aorta torácica para estudos de agregação e ativação plaquetária por transmissão luminosa, citometria de fluxo, reatividade vascular e dosagem de citocinas. Foram realizados estudos in vitro de agregação e ativação plaquetária induzida por adenosina difosfato (ADP) e colágeno com a CM-G em diferentes concentrações (100 e 300 μg/mL). Constatou-se redução significativa dos níveis de IL-8 (4,18±0,72 pg/mL) no grupo tratado com CM-G ao se comparar com o grupo controle (22,7±6,9 pg/mL) e com o grupo BG-Sc (16,4±2,4 pg/mL). Os estudos de reatividade mostraram que a BG-Sc e a CM-G não exerceram influência sobre a resposta vascular da fenilefrina (PHE) em relação ao controle. No grupo tratado com BG-SC, a resposta aos agentes vasorelaxantes acetilcolina (ACH; Emax = 90,2 ± 14,1%; pD2 = 6,36 ± 0,30 M) e nitroprussiato de sódio (NPS; Emax = 92,3± 2,4%; pD2 = 10,21 ± 0,10M) foram prejudicadas em relação aos controles (ACH: Emax = 100 ± 7,5%; pD2 = 8,17 ± 0,25 M; NPS: Emax = 100 ± 9,5%; pD2 = 11,18 ± 0,27 M). Porém, o tratamento com a CM-G (Emax = 93,1 ± 2,7 %; pD2 = 11,71 ± 0,07 M) aumentou a potência do NPS quando comparado com o controle (Emax = 100 ± 9,5%; pD2 = 11,18 ± 0,27 M). Os estudos de agregação plaquetária in vitro por transmissão luminosa revelam que a CM-G inibiu a agregação estimulada por ADP nas doses de 100 e 300 μg/mL, atingindo 25.7±2.7% e 14.8±3.2% de agregação, respectivamente. Quando a agregação foi induzida pelo colágeno, apenas a dose 300 μg/mL teve ação inibitória (33 ± 6,2%). O efeito antiagregante foi similar ao ácido acetilsalicílico quando a agregação foi induzida por ADP. Inibição da agregação também foi demonstrada na técnica de citometria de fluxo, porém observou-se que a CM-G não afetou a ativação plaquetária. Nos animais tratados, verificou-se inibição da agregação plaquetária induzida por ADP (45 ± 3.9% e 45 ± 6 %, respectivamente). Entretanto, quando induzido por colágeno, o efeito antiagregante foi visto apenas nos animais que receberam BG-Sc (22.6 ± 7.7%). O tratamento e os ensaios de agregação in vitro sugerem que a CM-G parece ser mais seletiva para o ADP. Os achados indicam que a CM-G e a BG-Sc apresentam efeito antiagregante e moduladora da função vascular. Assim, o uso desses polissacarídeos pode ser uma possível ferramenta para a prevenção de doenças cardiovasculares.

Made available in DSpace on 2015-03-03T14:03:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sarah_DVM_DISSERT_PARCIAL.pdf: 746876 bytes, checksum: f638a2adc04ebb6e7a39258725abbfde (MD5) Previous issue date: 2009-09-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Uma glucana insol?vel foi isolada de fermento biol?gico (Saccharomyces cerevisiae), o qual foi submetido a um tratamento com base e o res?duo acidificado. An?lises qu?micas e resson?ncia magn?tica nuclear (NMR) em uma e duas dimens?es (1D e 2D) mostraram que uma ?-(1 3) glucana linear foi purificada, a qual n?o estava contaminada com outros carboidratos, prote?nas ou compostos fen?licos. Os efeitos desta glucana na cicatriza??o de feridas foi avaliado em ?lceras venosas humanas por an?lise histopatol?gica ap?s 30 dias de tratamento. A ?-(1 3) glucana favoreceu a cicatriza??o das ?lceras, promovendo o aumento da hiperplasia epitelial, das c?lulas inflamat?rias, angiog?nese e prolifera??o fibrobl?stica. Este foi o primeiro estudo que investigou o efeito da ?-(1 3) glucana na cicatriza??o de ?lceras venosas em humanos. Os achados sugerem que a glucana ? um potente modificador da resposta biol?gica na cicatriza??o de feridas

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Os cogumelos há muitos anos vêm sendo utilizados na alimentação por seus valores nutricionais e/ou como agente terapêutico. Um dos fungos mais estudados atualmente é o Agaricus blazei Murrill, popularmente conhecido como Cogumelo do Sol, em função dos efeitos benéficos que lhe é creditado na prevenção de câncer. O estudo analisou os efeitos da ingestão do A. blazei, no parênquima pulmonar de ratos Wistar submetidos a estímulo carcinógeno induzido pela nitrosamina 4-(metilnitrosamina)-1-(3-piridil)-1 butanona NNK, potente carcinogênico pulmonar sistêmico em roedores. Foi preparado extrato aquoso de A. blazei nas doses de 14,3 mg e 42,9 mg administrado por gavagem durante 22 semanas juntamente com a NNK administrada via subcutânea na dose de 1,5 mg de NNK/Kg de peso corporal do animal durante 20 semanas. Foram formados seis grupos experimentais: Grupo Controle (GC); Grupo Cogumelo do Sol nas doses de 14,3 mg e 42,9 mg por gavagem e injeção de óleo de milho subcutânea (CSOL 14,3 e CSOL 42,9); Grupo Nitrosamina (GN) com injeção de NNK subcutânea e salina por gavagem; Grupo Nitrosamina com Cogumelo do Sol nas doses de 14,3 e 42,9 mg (NSOL 14,3 e NSOL 42,9). Os animais foram submetidos à tomografia computadorizada (TC) para monitoramento do surgimento de possíveis tumores, foi analisado também peso corporal, consumo de ração ao longo de todo o experimento e realizada a composição centesimal do A. blazei Murrill. Ao final do experimento os animais foram mortos e foram analisados: hemograma completo, hepatograma, colesterol, triglicerídeo, análise macroscópica e microscópica do pulmão e a análise de curtose da curva do histograma fornecido pelo software BEBÚI utilizado no estudo através da imagem pulmonar da TC. Como conclusão foi verificado que a substância NNK na dose utilizada neste experimento não foi capaz de desenvolver uma neoplasia pulmonar nos animais estudados no período do experimento; no presente modelo experimental as diferenças encontradas nas análises histopatológicas e na análise da curtose mostram que a dose de cogumelo do sol de 14,3 mg se mostrou mais eficaz contra o surgimento de inflamação e opacidades pulmonares se comparada à dose de 42,9 mg. / The mushrooms have been used for many years as food for its nutritional value and/or as a therapeutic agent. One of the most studied fungus is currently the Agaricus blazei Murrill, popularly Known as Cogumelo do Sol, for its beneficial credited in the prevention of cancer. This study examined the effects of ingestion of A. blazei in the lung parenchyma of wistar rats subjected to stimulus-induced carcinogen 4 - (metilnitrosamina) -1 - (3-pyridyl) -1 butanone NNK, a potent systemic lung carcinogen in rodents. Was prepared aqueous extract of A. blazei in doses of 14,3 mg and 42,9 mg administered by gavage during 22 weeks together with NNK administered subcutaneously at a dose of 1,5 mg NNK/Kg body weight of the animal during 20 weeks. Were formed six groups: Control Group (CG); Mushroom Group at doses of 14,3 mg and 42,9 mg by gavage and injection of corn oil subcutaneously (CSOL 14.3 and 42.9); Group Nitrosamine (GN) with subcutaneous injection of NNK and saline by gavage; Group Nitrosamine + Mushroom at doses of 14,3 mg and 42,9 mg (NSOL 14.3 and NSOL 42.9). The animals were submitted to Computed Tomografy (CT) to monitor the possibility of development of lung tumors. Was also examined body weight and food intake throughout the experiment. At the end of 22 weeks, the experiment lasted for over four months for observation of development or growth of tumors via CT. After this period the animals were killed and analyzed: complete blood count, hepatogram, cholesterol, triglycerides, macroscopic and microscopic analysis of lung and kurtosis of the histogram curve supplied by the software used in the study called BEBÚI through the lung CT image. In conclusion it was found that NNK dose used on this study was not able to development a lung cancer in animals studied during the experiment. On this experimental model the differences found in histological analysis and the analysis of kurtosis shows that the dose of A. blazei of 14,3 mg was more effective against inflammation and the appearance of opacities compared to the dose of 42,9 mg.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T21:05:14Z : No. of bitstreams: 1 vasconcelos_afd_dr_rcla.pdf: 873436 bytes, checksum: e2a838b6410dbd9cdc2bc380f1261e4e (MD5) / Exopolissacarídeos do tipo β-glucanas são polímeros produzidos por uma grande variedade de microrganismos e podem possuir diferentes propriedades físicas, químicas e aspectos estruturais. Esses biopolímeros apresentam atividades biológicas interessantes (antitumor, antiviral, anticoagulante) e aplicações comerciais como produtos em alimentos, cosméticos e farmacêuticos. Entretanto, para a aplicação dessas moléculas, é necessário primeiramente o conhecimento de suas estruturas químicas. Assim, o objetivo deste trabalho foi a produção, caracterização química de quatro exopolissacarideos (EPSGRAVIOLA, EPSMANGA, EPSPINHA e EPSLARANJA) de isolados de Botryosphaeria obtidos de frutas tropicais em decomposição e crescidos em sacarose como única fonte de carbono, determinando o melhor EPS para realizar testes de atividade anticoagulante. A homogeneidade de cada EPS foi determinada por cromatografia de filtração em gel, os quais eluíram como um único pico. Hidrólise ácida total e análise por HPAEC/PAD mostrou glucose como constituinte básico. Dados de metilação e RMN de 13C indicaram que os EPSMANGA, EPSPINHA e EPSLARANJA são glucanas lineares unidas por ligações do tipo β(1®6) e o EPSGRAVIOLA é uma glucana com ligações β(1®3) e com ramificações em C-6 de resíduos glucopiranosídicos. O espectro de FT-IR mostrou uma banda em 891 cm-1, e a espectroscopia de 13C NMR mostrou que todas as ligações eram do tipo β. Estudos realizados com o corante Vermelho Congo indicaram que os EPS possuem conformação em tripla hélice. O EPSLARANJA, uma b- D-(1®6)-glucana, foi submetido a sulfatação visando induzir a atividade anticoagulante e melhorar a solubilidade da molécula em solução, importante para a atividade biológica. Espectros de FT-IR mostraram bandas em 808 and 1252 cm-1, indicando a entrada dos grupos sulfato e as análises de RMN de 13C mostraram... / Exopolysaccharides (EPS) as β-glucans are polymers produced by a great variety of microorganisms and can possess different physical and chemical properties, and structural features. These biopolymers having interesting biological activities (antitumor, anti-viral, anticoagulant), and commercial applications in foods, cosmetics and pharmaceutical products. However, for the applications of these macromolecules, it is first necessary to understand their chemical structures. Therefore the goal of that study was the production, chemical characterization and biological activity of four exopolysaccharides (EPSGRAVIOLA, EPSMANGO, EPSPINHA and EPSORANGE) obtained from Botryosphaeria strains isolated from rotting tropical fruit grown on sucrose as carbon and the best EPS was used for the anticoagulant activity The homogeneity of each EPS was determined by gel filtration chromatography, which was eluted as a single peak. Total acid hydrolysis and HPAEC/PAD analysis of each EPS yielded only glucose. Data from methylation analysis and 13C NMR spectroscopy indicated that the EPSMANGO, EPSPINHA and EPSORANGE consisted of a linear chain of (1-6)- linked glucopyranosyl residues and EPSGRAVIOLA consisted of a main chain of glucopyranosyl (1-3) linkages substituted at O-6. FTIR spectra showed one band at 891 cm-1, and 13C NMR spectroscopy showed that all glucosidic linkages were of the β-configuration. Dye-inclusion studies with Congo Red indicated that each EPS existed in a triple-helix conformational state. The EPSORANGE, a β-(1®6)- D-glucan was submitted to a sulfation to induce anticoagulant activity and also to make this EPS more soluble, which is in favor to its biological action. The FT-IR spectrum showed bands at 808 and 1252 cm-1 indicating insertion of sulfonyl groups and the 13C NMR analysis showed that the sulfonyl groups were inserted mainly in C-4 of the b(1®6)-D-glucan... (Complete abstract click electronic access below)