Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-06-02T17:26:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Camila Fernanda Costa - 2013.pdf: 2572672 bytes, checksum: 54a6e93e72c746e4888a6f3583d4f3ac (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-06-02T17:49:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Camila Fernanda Costa - 2013.pdf: 2572672 bytes, checksum: 54a6e93e72c746e4888a6f3583d4f3ac (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-02T17:49:46Z (GMT). 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To implement conservation programs, breeding and enabling the commercial use of species, knowledge about the genetic variability, the spatial genetic structure, the reproductive system and gene flow in natural populations are needed. In this context, in the present study was performed the molecular characterization of the genetic variability in three stages of individuals (adults, juveniles and seedlings) and the assessment of genetic structure spatial (adults and juveniles), of the system of crossing and of the gene flow via pollen in a subpopulation of Hancornia speciosa located in the State Park of Serra de Jaragua, Jaragua-GO. To this end, 113 adults and 100 juveniles were sampled and georeferenced in an area of approximately 2.5ha. Of the total number of adults, 20 trees were selected matrices to obtain seedlings and formation of families of open pollination. Genomic DNA was obtained from the leaves of all individuals (adults, juveniles and seedlings) and was amplified with the use of seven microsatellite loci for obtaining of genotypes. The analyzes of genetic diversity, of spatial structure, rates of cross-fertilization and distance of dispersal of pollen were obtained from these genotypes. The total number of alleles at seven loci evaluated was 125, with an average of 17.8 alleles per locus. For adults the mean allele was 15.8, for the juveniles was 13.5and the seedlings were 11alleles. The average total values of heterozigosidade expected (He) and observed (Ho) were equal to 0.750 and 0.698, respectively. In adults He = 0.750 and Ho =0.714, in juveniles He =0.744 and Ho =0.679 and in seedlings He = 0. 712 and Ho =0. 763. These values indicate that the subpopulation evaluated presents high levels of genetic diversity. The fixation index(f) waspositive and significantforthe generations ofadults(0.052, p <0.05)andjuvenile(0.087, p <0.05), indicating the existence of inbreeding in this subpopulation. The analysis of spatial autocorrelation evidenced that kinship is weakly related to the geographical distance in in bothstagesof lifeevaluated (adults: b= -0.00223, R2 = 0. 000514, p < 0.05 and juveniles: b: - 0.00440, R2 = 0.00148489; p < 0.001).Concomitantly the values of Sp were low and the size of neighborhoods (Nb) were high for the two generations. This result shows that there is no restriction of gene flow via seed and corroborates the hypothesis that the dispersal by animals have high potential to disperse the seeds over long distances.The rates of crossfertilization multilocus (tm= 1.000) and single locus (ts = 0.972 a 1.29) were high and significantly different from zero in all families. The difference in the rate of the crossfertilization multilocus and single locus combined for all families analyzed (tm-ts = 0. 077) was also positive and significant, suggesting that 7% of crossings that occur in this population are between related individuals. The correlation of selfing negative(rs=-0.999), indicates absence of selfing and the correlation of paternity(rp=0.107) not significantly different from zero (SD = 0.135) shows that this subpopulation no full siblings. Every subpopulation resulting outcrossing and individuals are evaluated relatives at least to the 15 level of half-brothers. The paternity analysis assigned pollen donors to 75.2% (64) seedlings, and 24 (37.5%) assignments at a confidence level of 85%, 30 (46.8%) assignments at 95% probability assignments and 10(15.6%) at a confidence level of 99%.This low assignment can be explained by sampling: due to the size of the total area of the population and distribution in aggregate, many individuals may not have been sampled. Moreover, the loci battery used in this analysis could not demonstrated the optimal values for the combined exclusion. Although the maximum distance of pollination has been of 292m and covers the entire area evaluated, most events of pollination (77%) occurred at distances less than 200m. The flowering in mass, the distribution in aggregate and the floral structure are the main responsible for predominance of events of cross-pollination at short distances. / Hancornia speciosa (Apocynaceae) é uma espécie frutífera que apresenta distribuição ampla em áreas de fitofisionomia de Cerrado sentido restrito. Suas flores possuem um mecanismo de polinização complexo e único, adaptado á polinização por mariposas e borboletas. Seus frutos são dispersos por mamíferos de grande e médio porte. Possui alto potencial econômico e sua utilização tem sido realizada de forma exploratória. Para implementar programas de conservação e melhoramento, conhecimentos a cerca da variabilidade genética, da estrutura genética espacial, do sistema reprodutivo e do fluxo gênico nas populações naturais são necessários. Nesse contexto, no presente estudo foi realizada a caracterização molecular da variabilidade genética em três estágios de indivíduos (adultos, juvenis e plântulas) e a avaliação da estrutura genética espacial (adultos e juvenis), do sistema de cruzamento e do fluxo gênico via pólen em uma subpopulação de Hancornia speciosa localizada na região do Parque Estadual da Serra de Jaraguá, Jaraguá-GO. Para tanto, 113 indivíduos adultos e 100 juvenis foram amostrados e georeferenciados em uma área de aproximadamente 2,5 ha. Do total de adultos, 20 árvores matrizes foram selecionadas para obtenção de plântulas e formação das famílias de polinização aberta. O DNA genômico foi obtido a partir das folhas de todos os indivíduos (adultos, juvenis e plântulas) e foi amplificado com o uso de sete locos microssatélites para obtenção dos genótipos. As análises de diversidade genética, de estrutura espacial, taxas de fecundação cruzada e distância de dispersão de pólen foram obtidas a partir desses genótipos. O número total de alelos nos sete locos avaliados foi de 125, com média de 17,8 alelos por loco. Para os indivíduos adultos a média de alelos foi de 15,8, para os juvenis foi de 13,5 e nas plântulas foi de 11 alelos. Os valores totais médios de heterozigosidade esperada (He) e observada (Ho) foram iguais a 0, 750 e 0, 698. Nos adultos He = 0, 750 e Ho =0, 714, nos juvenis He =0, 744 e Ho =0, 679 e nas plântulas He = 0, 712 e Ho =0, 763. Esses valores indicam que a subpopulação avaliada apresenta altos níveis de diversidade genética. O índice de fixação (f) foi positivo e significativo para as gerações de indivíduos adultos (0, 052; p < 0, 05) e juvenis (0, 087; p < 0, 05), indicando a existência de endogamia nessa subpopulação. A análise de autocorrelação espacial evidenciou que o parentesco está fracamente relacionado com a distância geográfica em ambas as gerações de indivíduos avaliadas (adultos: b= -0, 00223, R2 = 0, 000514, p < 0,05 e juvenis: b: - 0, 00440, R2 = 0, 00148489; p < 0, 001). Concomitantemente os valores de Sp foram baixos e o tamanho das vizinhanças (Nb) foram altos para as duas gerações. Esse resultado mostra que não existe restrição ao fluxo gênico via semente e corrobora com a hipótese de que a dispersão por animais tem alto potencial para dispersar as sementes a longas distâncias. As taxas de cruzamento multiloco (tm = 1, 000) e uniloco (ts =0, 972 a 1, 29) foram altas e significativamente diferentes de zero em todas as famílias. A diferença da taxa de fecundação cruzada multiloco e uniloco combinada para todas as famílias analisadas (tm-ts = 0, 077) também foi positiva e significativa, sugerindo que 7% dos cruzamentos que ocorrem nessa população são entre indivíduos aparentados. A correlação de autofecundação negativa (rs = -0,999) indica ausência de autofecundação e a correlação de paternidade (rp= 0,107) não significativamente diferente de zero (SD = 0,135) mostra que 13 nessa subpopulação não existem irmãos completos. Toda a subpopulação é resultante de fecundação cruzada e os indivíduos avaliados são parentes no mínimo ao nível de meiosirmãos. A análise de paternidade atribuiu doadores de pólen para 75,2 % (64) plântulas, sendo 24 (37,5 %) atribuições ao nível de confiança de 85%, 30 (46,8%) atribuições ao nível de 95% de probabilidade e 10 atribuições, 15,6% ao nível de confiança de 99%. Essa baixa atribuição pode ser explicada pela amostragem: devido ao tamanho da área total da população e a distribuição em agregado, muitos indivíduos podem não ter sido amostrados. Além disso, a bateria de locos usada nessa análise não apresentou os valores considerados ótimos de probabilidade de exclusão combinada. Embora a distância máxima de polinização tenha sido de 292m e abrange toda a área avaliada, a maior parte dos eventos de polinização (77%) ocorreu a distâncias inferiores a 200m. A floração em massa, a distribuição em agregado e a estrutura floral são os principais responsáveis pelo predomínio de eventos de polinização cruzada a curtas distâncias.

This work describes the isolation of endophytic fungi from plant species Hancornia speciosa and led to the isolation of 14 pure strains. Of which 4 were selected for the chemical study. The chemical study allowed identied 12 substances isolated from fungi Phomopsis sp., Guignardia sp., Aspergillus niger e Aspergillus sp., grown in different culture medium. The crude extracts of fungus Phomopsis sp., grown in PDB medium led to isolation of five compounds, 5- methylmelein, nectriapyrone, succnic acid, 5-hydroxylmethylmelein and a diketopiperazine. Already when the same fungus was grown in ME medium, led to isolation of two compounds, tyrosol and tryptofol. The crude extract of Guignardia sp grown in ME medium led to isolation of compound salicylic acid, which has a plant for ecological importance.The crude extract of Aspergillus niger, grown in PDB medium led to isolation of compounds pyrophen and nigragillin. Already when the same fungus was grown in ME medium, led to isolation of compound itaconic acid. And of crude extract of Aspergillus sp., grown in ME medium was identification of their major compound kojic acid, which was quantified by HPLC in the crude extract (0.7 mg/g of crude extract). O crude extract was tested for its antioxidant activity with DPPH, NO. and H2O2, and exhibited significantly potent inhibition of NO (IC50 de 150 μg/mL) production, showed taht this fungi it owns big biotchenology potential. The structures of these substances were established by spectroscopic methods, including the application of bidimensional NMR techniques, mass spectrum and comparison with published data. / Este trabalho descreve o isolamento de fungos endofíticos da espécie vegetal Hancornia speciosa, o qual conduziu a 14 linhagens puras, dos quais quatro foram selecionados para o estudo químico. O estudo químico possibilitou foi identicar 12 substâncias, isoladas dos fungos Phomopsis sp., Guignardia sp., Aspergillus níger e Aspergillus sp., cultivados em diferentes meios de culturas. O extrato bruto do fungo Phomopsis sp cultivado no meio liquido PBD levou ao isolamento de cinco compostos, 5- metilmeleína, nectapirona, ácido succínico, 5-hidroxilmetilmeleína e uma dicetopiperazina. Já o mesmo fungo quando cultivado no meio líquido-ME, levou ao isolamento de dois compostos, tirosol e triptofol. O estudo do extrato bruto de Guignardia sp., cultivado no meio liquido ME conduziu ao isolamento do composto ácido salicílico, o qual tem um importancia ecológica para planta. O extrato bruto do fungo Aspergillus niger cultivado no meio liquido PBD levou ao isolamento dos compostos pirofen e nigragillin. Já o mesmo fungo quando cultivado em extrato de malte, levou ao isolamento do ácido itacônico. E do extrato bruto do fungo Aspergillus sp., cultivado no meio liquido PBD foi identificada a substância majoritária ácido kójico, a qual foi quantificada por CLAE no extrato bruto (0,7g/ g de extrato bruto). O extrato desse fungo foi testado quanto a sua atividade antioxidante com DPPH, NO. , e H2O2, e mostrou uma forte atividade de inibição da produção de NO (IC50 de 150 μg/mL), indicando que este fungo possui grande potencial biotecnológico. As estruturas das substâncias foram determinadas por métodos espectrométricos, incluindo RMN bi-dimensional, espectros de massas e comparação com a literatura.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This work describes the development and application of analytical methods to establish parameters to the quality control of fruit and trunk latex of H. speciosa using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with diode array detect and evaporative light scattering detector (ELSD). As a first step chromatographic profile analytical method was developed and validated for the analysis of authentic sample of trunk latex of H. speciosa, and then the optimized method was used for the analysis of commercial samples of trunk latex sold in open markets from Sergipe, Brazil. The visual comparison of the chromatographic profiles of different samples of trunk latex allowed checking the authenticity and dissimilarities of chemical profiles of these samples. Seven chemical markers were purified by semi-preparative HPLC-DAD from the trunk latex of H. speciosa, the characterization by 1H, 13C NMR allowed the identification of the following substances cyclohexylethanoid glucoside cornoside, cyclohexylethanoid glucoside dihydrocornoside and (7,8)-treo-4,7,9,9 -tetrahydroxy-3,3 -dimethoxy-8-O-4 -neolignan-7-O-β-D-glucopyranoside. As a second step of our work chromatographic method for qualitative analysis of chemical markers lupeol, α-amyrin, β-amyrin e 3- β-O-acyl lupeol esters in the fruit latex of H. speciosa and in the mangaba commercial pulp was developed, the optimized method showed itself appropriate to the identification of such substances with adequate separation. In the end one analytical method for the quantification of the lupeol ester content in fruit latex and commercial pulp was developed and validated using the HPLC-DAD-ELSD. In the validation study were evaluated the figures of merit selectivity, linearity, limit of quantification and detection, precision, accuracy, stability and robustness according to the standards described in RE nº 899/03 (ANVISA). The quantification of lupeol ester by both detectors was significantly similar (259.44 μg/mg DAD and 269.58 μg/mg ELSD) with one coefficient of variation of 2.7%. This paper presents a contribution to the quality control of H. speciosa samples. / O presente trabalho apresenta o desenvolvimento e aplicação de métodos analíticos para o controle de qualidade do látex do fruto e do caule de H. speciosa Gomes utilizando cromatografia líquida de alta eficiência com os detectores de arranjo de diodos e evaporativo por espalhamento de luz (HPLC-DAD-ELSD). No primeiro momento, um método analítico para a obtenção do perfil cromatográfico foi desenvolvido e validado para a análise de uma amostra autêntica do látex do caule de H. speciosa; em seguida foi utilizado o método otimizado para a análise de amostras do látex do caule comercializadas em feiras livres do Estado de Sergipe. A comparação visual dos perfis cromatográficos das diferentes amostras do látex do caule permitiu averiguar a autenticidade e as dissimilaridades dos perfis químicos dessas amostras. Utilizando uma coluna semi-preparativa, sete marcadores químicos foram purificados a partir do látex do caule de H. speciosa; a caracterização por RMN 1H, 13C possibilitou a identificação das seguintes substâncias: ciclohexiletanóide glicosilado cornosídeo, ciclohexiletanóide glicosilado dihidrocornosídeo e (7,8)-treo-4,7,9,9 -tetrahidroxi-3,3 -dimetoxi- 8-O-4 -neolignana-7-O-β-D-glicopiranosídeo. No segundo momento, um método cromatográfico para análise qualitativa dos marcadores químicos lupeol, α-amirina, β-amirina e ésteres 3- β-O-acil lupeol no látex dos frutos de H. speciosa e em polpa comercial de mangaba foi desenvolvido. Por fim, um método analítico para a quantificação do teor de ésteres de lupeol em látex dos frutos de H. speciosa e em polpa comercial foi desenvolvido e validado utilizando HPLC-DAD-ELSD. No estudo da validação foram avaliadas as figuras de mérito seletividade, linearidade, limite de quantificação e detecção, precisão, exatidão, estabilidade e robustez conforme as normas descritas na RE nº 899/03 (ANVISA). A quantificação do teor de ésteres de lupeol por ambos os detectores se mostraram significativamente similares (259,44 μg/mg para o DAD e 269,58 μg/mg para o ELSD) com coeficiente de variação de 2,7 %. Este trabalho apresenta uma contribuição ao controle de qualidade de amostras de H. speciosa.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / One of the challenges in the conservation of genetic resources is the identification of areas for collection, maintenance and preservation of seeds, especially recalcitrant, for in situ and ex situ conservation. Thus, through four articles is intended to identify areas with potential naturally occuring mangaba using modeling techniques by Maxent software using environmental variables, as well as to characterize the morpho-genetic diversity using local and scientific knowledge by the analysis of fruits, and conservation of seeds in order to guarantee the viability in the storage. It is observed distribution of populations intensively on the coast, with higher occurrence in the municipalities of Greater Aracaju and Japoatã, Pacatuba, Nossa Senhora das Dores, Malhador, Estancia, Arauá and Itabaianinha. To evaluate the traditional knowledge of the catchers of mangabas inserted into remaining forests, five associations were selected (Baixa Grande, Pontal, Porteiras, Riboleirinha and Manuel Dias). It was observed that the classification of fruit occurs according to color and there are differences among the collection locations for morphometric and physical- chemical (pH, titratable acidity, soluble solids) traits. Baixa Grande seeds (Pirambu-SE) were stored at 10 ° C in polyethylene glycol 6000 to -0.8 MPa and it was observed that viability can be maintained until the third month. Four natural population (111 individuals) were evaluated by of molecular markers ISSR. The population of Baixa Grande presented the highest number of observed and effective alleles (1.99 and 1.61). The number of polymorphic loci was 71 (95% Polymorphism). The differences in morphological characteristics of mangaba can be used for selection of genotypes. The information resulting from this research are subsidies for management and conservation aiming to increase the diversity of mangaba in the state of Sergipe. / Um dos desafios na conservação dos recursos genéticos é a identificação de áreas para coleta, manutenção e preservação de sementes, especialmente as recalcitrantes, visando à conservação in situ e ex situ. Assim, por meio de quatro artigos, se propõe identificar regiões com potencial ocorrência natural de mangaba por meio de técnicas de modelagem pelo programa Maxent empregando variáveis ambientais, bem como caracterizar a diversidade morfo-genética empregando o conhecimento local e científico por meio da análise de frutos, e conservar as sementes de forma a garantir a viabilidade no armazenamento. Observa-se a distribuição das populações mais intensamente no litoral, com maior ocorrência nos municípios da Grande Aracaju e Japoatã, Pacatuba, Nossa Senhora das Dores, Malhador, Estância, Arauá e Itabaianinha. Para avaliar o conhecimento das catadoras de mangabas inseridas em remanescentes florestais, foram selecionadas cinco associações (Baixa Grande, Pontal, Porteiras, Riboleirinha e Manuel Dias). Observou-se que a classificação dos frutos ocorre de acordo com cor e diferenças entre as localidades de coleta para características morfométricas e físico-químico (pH, acidez titulável, sólidos solúveis). Sementes de mangaba de Baixa Grande (Pirambu-SE) foram armazenadas à 10ºC em polietilenoglicol 6000 à -0,8 MPa e constatou-se que a viabilidade pode ser mantida até o 3° mês. Quatro populações naturais de mangaba (111 indivíduos) foram avaliadas por meio de marcadores moleculares ISSR. A população de Baixa Grande foi a que apresentou maior número de alelos observados e efetivos (1,99 e 1,61). O número de locos polimórficos foi de 71 (95% de polimorfismo). As diferenças observadas nas características morfológicas de mangaba podem ser utilizadas para a seleção de genótipos. As informações resultantes desta pesquisa são subsídios para manejo e conservação visando ampliar a diversidade de mangaba no estado de Sergipe.