Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Enología / Los polifenoles son compuestos generados a partir del metabolismo secundario de las plantas que presentan entre otras, actividad antibacteriana. Entre los polifenoles se encuentra el ácido gálico (no flavonoide) y la catequina (flavonoide). Helicobacter pylori es una bacteria Gram negativa, de forma bacilar espiralada, microaerofílica, flagelada, neutrófila, que habita en la capa mucosa que recubre el epitelio del estómago humano. Se estima que el 50% de la población mundial está infectada con la bacteria, alcanzando un 73% de prevalencia en la población en Chile. Ésta está relacionada con enfermedades como gastritis, úlceras y es un factor de alto riesgo para adquirir cáncer gástrico. Las terapias de erradicación de H. pylori consisten en el uso de antibióticos que no siempre son exitosas. Por esta razón, es necesario investigar tratamientos alternativos contra la infección por H. pylori. Diversas investigaciones muestran que constituyentes de Vitis vinifera y del vino tendrían efecto sobre la bacteria. El propósito de este trabajo fue estudiar el efecto antibacteriano del ácido gálico y de la catequina sobre Helicobacter pylori y Escherichia coli, como microorganismo control dados los diversos estudios que afirman que los polifenoles presentes en el vino tendrían efecto anti-Escherichia coli. La metodología consistió en cultivar las bacterias en medio líquido o en medio sólido, suplementados con rangos de dosis de ácido gálico y/o catequina. La actividad antibacteriana de los polifenoles en medio líquido se evaluó midiendo la DO600 de los cultivos y contabilizando las CFU/mL. Además, se midió el diámetro del halo de inhibición del crecimiento de las bacterias en medios sólidos, suplementados con los polifenoles en forma individual o en conjunto. También se evaluó la cinética de inhibición por parte de estos compuestos sobre el crecimiento bacteriano. Los resultados indican que tanto ácido gálico como catequina presentan actividad bactericida sobre ambas bacterias, siendo más efectivo el ácido gálico (el cual inhibe el crecimiento con concentraciones, dosis y tiempos de exposición menores que la catequina). La bacteria más sensible a los dos polifenoles es H. pylori. El efecto sinérgico resultó ser variable, relacionado fuertemente con las dosis de ácido gálico y catequina. / The purpose of this work was to study the antibacterial effect of gallic acid and catechin on H. pylori using E. coli as a control microorganism because various studies suggest that wine polyphenols show anti-Escherichia coli effects. The methodology consisted in growing bacteria in liquid (Trypticase soy broth or Luria Bertani) or agar (Trypticase soy agar or Luria Bertani agar) media. The culture media were supplemented with increasing doses of gallic acid and/or catechin, to generate the various conditions. In liquid medium, OD600 and CFU/mL were scored. In addition, diameters of the halo of growth inhibition produced by the two compounds either individually or together were also measured. Finally, both compounds were also determined kinetics of inhibition of bacterial growth. The results indicate that both polyphenols have antibacterial activity on both bacteria and that gallic acid is more effective, because inhibits growth at concentrations, doses and times less than catechin. H. pylori was most sensitive bacteria to both polyphenols and the synergistic effect between both polyphenols was observed but it was strongly depend upon doses of gallic acid and catechin.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:49:33Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_jg_me_botfm.pdf: 1162046 bytes, checksum: 81511cad148a738a034b784dbc6eec91 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer gástrico é o quarto tipo mais comum e o segundo em mortalidade. Apesar da diminuição do número de casos nos últimos tempos ainda é um grande problema mundial. E mais, sua associação com o Helicobacter pylori (HP) está cada vez mais preocupante, devido à alta prevalência de cepas patogênicas dessa bactéria. Além disso, mutações em genes que agem no ciclo celular podem levar ao câncer. O gene que codifica a proteína p53 é responsável pelo reparo de lesões no DNA durante o ciclo celular funcionando como um regulador transcricional. Quando o reparo não é viável a proteína p53 induz a entrada da célula danificada em apoptose. Mutações mais freqüentes ocorrem nos exons 5, 6, 7 8 e 9. No atual trabalho investigou-se a possível associação da mutação no gene p53, correlação com presença da cepa patogênica CagA+ e estadiamento do tumor. Foram estudadas 55 amostras de câncer gástrico extraídas por biópsia durante gastrectomia. PCR foi utilizada para os exons 5 ao 9, análise de mutação por sequenciamento automático e dados clínicos foram coletados incluindo infecção por Helicobacter pylori/CagA+. Trinta e dois casos apresentaram mutações em p53 sendo que 6 deles apresentaram mutação em mais de um exon. 53% apresentaram-se infectados por HP CagA+. 87% dos pacientes estavam em estadiamento avançado do tumor (II, III e IV) e 80% eram do tipo intestinal. Quanto a correlação de p53 e cagA+ a casuística é relativamente pequena, e assim a correlação de p53 e cagA não foi vista. Os resultados confirmam a relevância das mutações em p53 e da presença da cepa patogênica CagA nos casos de câncer gástrico, contudo estudos devem ser realizados com um maior número amostral. Neste caso, o uso da p53 mutada pode ser utilizada em diagnóstico indicando, assim um melhor tratamento, desde que há casos em que sua alteração impõe resistência... / The gastric cancer is the fourth most common type and the second in mortality. Despite the decrease in the number of cases in recent times is still a major problem worldwide. Moreover, its association with Helicobacter pylori (HP) is increasingly worrying, because of the high prevalence of pathogenic strains of this bacterium. Furthermore, mutations in genes that act in the cell cycle can lead to cancer. The gene encoding the p53 protein is responsible for repair of lesions in DNA during cell cycle working as a transcriptional regulator. When the repair is not viable in the p53 protein induces the entry of the cell into apoptosis damaged. Change frequently occur in exons 5, 6, 7 8 and 9. In the current work investigated is the possible association of the mutation in the p53 gene, correlation with the presence of pathogenic strain CagA + and staging of the tumor. We studied 55 samples of gastric cancer extracted by biopsy taken during gastrectomy. PCR was used to the exons 5 to 9, analysis of mutation by sequencing automatic and clinical data were collected including infection by Helicobacter pylori / CagA +. Thirty-two patients had mutations in p53 is that 6 of them had more than one mutation in exon. 53% showed up infected HP CagA +. 87% of the patients were in advanced staging of the tumor (II, III and IV) and 80% were of the intestinal type. As the correlation of p53 and cagA + the casuistic is relatively small, and thus the relationship of p53 and cagA was not seen. The results confirm the relevance of mutations in p53 in the presence of pathogenic strain CagA in cases of gastric cancer, but studies must be conducted with greater sample. In this case, the use of p53 mutant can be used in diagnosis indicating thus a better treatment, since there are cases where its amendment requires resistance to certain types of treatment, regardless of the presence of H pylori... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Emanuel Carrilho / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Banca: Paulo Inácio da Costa / Resumo: Helicobacter pylori é o principal agente etiológico causador da gastrite crônica, úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico. Concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem modificar os fatores de virulência da bactéria e, consequentemente, a relação micro-organismo/hospedeiro, podendo alterar a progressão da infecção. Este estudo avaliou fatores de virulência de H. pylori cultivados em ½ e ¼ da concentração inibitória mínima de amoxicilina que poderiam alterar a liberação de citocinas, indução de óxido nítrico e apoptose em macrófagos RAW 264.7 infectados. A análise proteômica foi realizada por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas diferencialmente expressas através da digestão por tripsina e espectrometria de massas A indução de óxido nítrico foi analisada através do reagente de Griess, as citocinas (interleucina - 1 beta, interleucina - 6, interleucina - 10, interleucina - 12, fator de necrose tumoral alfa e fator transformador de crescimento - beta) por ensaio imunoenzimático e apoptose por citometria, após 24 horas de infecção. Nossos resultados demonstraram que H. pylori previamente mantidos em sub-CIMs de amoxicilina apresentaram maior expressão de proteínas de choque térmico, enolase, argininosuccinato sintase, superóxido dismutase, ATP alfa sintase e proteína ativadora de neutrófilo, proteínas capazes de aumentar a indução de NO, IL - 1 β e IL - 12 e apoptose em relação à macrófagos infectados com H. pylori sem tratamento. Estes resultados sugerem que a amoxicilina em concentrações subinibitórias pode estimular a resposta imune no hospedeiro através da indução de alguns fator ... / Abstract: The infection caused by Helicobacter pylori is considered a major etiology agent in chronic gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma and gastric lymphomas. Sub-inhibitory concentrations of antibiotics have been shown to change virulent expression of microorganisms, which may change the progression of infection. This study assessed virulence factors of H. pylori after contact with ½ and ¼ the minimal inhibitory concentration of amoxicillin subinhibitory concentrations of amoxicillin that could modify the induction of cytokines, nitric oxide and apoptosis by infect RAW 264.7 macrophage-like cells. The proteomic analysis was realized by two dimensional electrophoresis and proteins differential expressions were characterized by tryptic digestion and mass spectroscopy. The induction of nitric oxide was assayed by Griess reagent, cytokines (interleukin - 1 beta, interleukin - 6, interleukin - 10, interleukin - 12, tumor necrosis factor alpha and transforming growth factor - beta) by Enzyme-Liked Immunoabsorbent Assay and apoptosis by annexin V - fluorescein isothiocyanate after 24 hours. Our results demonstrated that H. pylori previously maintained in sub - MICs of amoxicillin showed higher expression of virulence factors such as heat shock proteins, enolase, argininosuccinate synthetase, superoxide dismutase, ATP synthase alpha and neutrophil-activating protein inducing more oxide nitric, interleukin - 1β and interleukin - 12 and increased apoptosis than macrophages infected with H. pylori without treatment. These results suggest that amoxicillin, at sub-inhibitory concentrations, could contribute to the stimulation of immune response in the ... / Doutor

Resumo: O Helicobacter pylori é uma bactéria de distribuição mundial e estima-se que 50% ou mais da população mundial já está infectada por este microrganismo, sendo uma das infecções mais comuns do mundo. A infecção pelo H. pylori está associada a maioria dos casos de gastrite crônica, úlceras (gástrica e duodenal) e câncer gástrico, sendo crescente o número de novas cepas resistentes. Em terapêutica, cada fármaco produz uma série de efeitos, sendo usualmente, apenas um associado ao objetivo primário da farmacoterapia e todos os efeitos secundários referidos como indesejáveis. Para compostos contendo nitrogrupos, um destes efeitos indesejáveis é a mutagenicidade, a qual está relacionada com a gênese de metaplasias, carcinomas e na promoção do surgimento de cepas bacterianas resistentes incluindo de H. pylori. Dentre tais compostos encontram-se os derivados nitroimidazólicos (metronidazol e secnidazol), antimicrobianos de amplo espectro, muito utilizados no mercado brasileiro inclusive para o tratamento dessas infecções. Sendo assim, o desenvolvimento de novos fármacos por meio de síntese orgânica, modificando a estrutura molecular dos mesmos com base em alvos celulares específicos, pode resultar na: melhora das propriedades farmacológicas e redução da toxicidade dos novos compostos. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi obter derivados de metronidazol, secnidazol e tiouréia, com atividade contra o Helicobacter pylori. Para tanto foram sintetizados os compostos: monosuccinato de metronidazol, (S1) ácido 4-[1-metil-2-(2-metil-5-nitro-imidazoil)etóxi]-4-oxobutanóico; (S2) ácido {2-[1-metil-2-(2-metil-5-nitro-imidazoil)etóxi]-2-oxoetóxi} acético; (S3) ácido 5-[1-metil-2-(2-metil-5-nitro-imidazoil)etóxi]-5-oxopentanóico; e (MST) ácido 4-[(aminocarbonotioil)amino]-4-oxobutanóico. Os resultados dos ensaios "in vivo" ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Helicobacter pylori is a bacteria of world distribution and it is considered that 50% or more of the world population it is already infected by this microrganism, being one of the infections more common of the world. The H. pylori infection is associated with most of the cases of chronic gastritis, gastric ulcers, duodenal ulcers and gastric cancer, being growing the number of new resistant strain. In therapeutics, each drug produces a series of effects, being usually, just an associate to the primary objective of the phamacotherapy and all the secondary effects referred as undesirable. To nitrogroups componds, one of these effects is the mutagenicity, which is related with genesis of the metaplasias, carcinomas and in the promotion of the appearance of resistant bacterial strain including H. pylori. Between such compounds are the nitroimidazoles (metronidazole and secnidazole), antimicrobial of wide spectrum, broadly used in the Brazilian market for the treatment of those infections. Being like this, the development of new antimicrobial agents by means of organic synthesis, modifying the molecular structure of the same ones with base in specific cellular target, can result in the: improvement of the pharmacology properties and toxicity reduction of the new compounds. In that sense, the objective of this study went obtain compounds starting from metronidazole, secnidazole and thiouréia, with activity against the Helicobacter pylori. For so much the compositions were synthesized: metronidazole monossuccinate, (S1) 4-[1-methyl-2-(2-methyl-5-nitro-1H-imidazol-1-yl)ethoxy]-4-oxobutanoic acid; (S2) {2-[1-methyl-2-(2-methyl-5-nitro-1H-imidazol-1-yl)ethoxy]-2-oxoethoxy}acetic acid; (S3) 5-[1-methyl-2-(2-methyl-5-nitro-1H-imidazol-1-yl)ethoxy]-5-oxopentanoic acid; and (MST) acid 4-[(aminocarbonotioil)amino]-4-oxobutanóico. The results of the "in vivo" assay ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Chung Man Chin / Coorientador: Taís Maria Bauab / Banca: Adelia Emilia de Almeida / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Antonio Gilberto Ferreira / Banca: Carlos Henrique Gomes Martins / Doutor

A metaplasia intestinal gástrica (MIG) é considerada como lesão precursora para o câncer gástrico, mas isto não tem levado a um controle maior dos portadores. Estudamos uma população dispéptica adulta e detectamos a prevalência de MIG. Vários marcadores têm sido testados para indicar qual paciente portador de metaplasia intestinal deva ser acompanhado com exames periódicos. Um destes marcadores é a pesquisa da proteína de membrana CD44v6 em lesões pré-malignas. Objetivo: estudar a expressão da CD44v6 em pacientes dispépticos com Helicobacter pylori (H. pylori) e metaplasia intestinal gástrica. Local: Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Pacientes: 642 pacientes dispépticos dos quais foram estudados 56 pacientes com MIG e comparados com outros dois grupos, um de pacientes com H. pylori e outro, sem H. pylori e sem MIG. Métodos: estudo da MIG com colorações HE (hematoxilina-eosina), PAS/AB (periodic acid-Schiff/ Alcian blue), HID (high iron diamine) e, para estudar a expressão da CD44v6, empregou-se a imuno-histoquímica. Resultados: De 642 pessoas avaliadas, 424 eram portadoras de Helicobacter pylori e 218 não. Das portadoras, 77 tinham MIG (18,2%) e das não portadoras, 15 (6,9%). Das pessoas com MIG, estudamos 56 casos, sendo MIG do tipo I em 55% (31/56) dos casos, 22% (12/56) do tipo II e 23% (13/56) do tipo III. A MIG teve igual proporção entre os sexos, foi mais frequente no antro, o tipo de MIG não teve relação com a extensão da metaplasia e não houve aumento proporcional com a idade. Na nossa população de estudo, a MIG foi de baixa frequência relativa (14,4%). Quanto à CD44v6, todos os nossos casos foram negativos para esta proteína. Conclusões: 1) Os nossos casos foram todos negativos para CD44v6 e não vemos utilidade de utilizar este marcador no nosso meio no rastreamento de pacientes com metaplasia intestinal gástrica que mereceriam um acompanhamento subsequente. 2) Biópsias do antro e da incisura detectaram quase a totalidade (93%) dos casos de metaplasia intestinal gástrica nos nossos casos e isto pode ser uma indicação para a prática clínica. 3) A distribuição da metaplasia intestinal gástrica entre os sexos seguiu a proporção no grupo estudado, concluindo-se que não há diferença entre os sexos. 4) Não encontramos alteração da freqüência da metaplasia intestinal gástrica conforme a idade. 5) O achado de borda em escova ou células de Paneth não exclui que naquela lâmina haja glândulas metaplásicas do tipo incompleto. 6) Não houve relação entre o local da metaplasia intestinal gástrica e seu tipo. 7) Não houve relação entre extensão e tipo de metaplasia intestinal gástrica. 8) A população estudada tem baixa prevalência de metaplasia intestinal gástrica. / The gastric intestinal metaplasia (GIM) is considered a premalignant lesion for gastric cancer, but this has not led to greater control of the carriers. We studied a dyspeptic adult population and detected the prevalence of GIM. Several markers have been tested to indicate which patients with intestinal metaplasia should be followed with periodic examinations. One of these markers is the membrane protein CD44v6. Objective: To study the expression of CD44v6 in dyspeptic patients with Helicobacter pylori (H. pylori) and gastric intestinal metaplasia. Location: Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil. Patients: 642 dyspeptic patients of which 56 patients with GIM and compared with two other groups, one of patients with H. pylori and another without H. pylori. Methods: A study of GIM with HE staining (hematoxylin-eosin), PAS / AB (periodic acid-Schiff / Alcian blue), HID (high iron diamine). We used immunohistochemistry (IHC) to study the expression of CD44v6. Results: Of 642 patients evaluated, 424 were carriers of Helicobacter pylori and 218 did not. The carriers had 77 MIG (18.2%) and noncarriers, 15 (6.9%). Of those GIM 56 study cases, GIM type I by 55% (31/56) cases, 22% (12/56) Type II and 23% (13/56) of Type III. GIM had equal sex ratio, was more frequent in the antrum, the type of GIM was not related to the extent of metaplasia and there was no proportional increase with age. In our study population, the GIM has low relative frequency (14.4%). As to CD44v6, all our cases were negative for this protein. Conclusions: 1 ) Our cases were all negative for CD44v6 and we do not see the usefulness of using this marker in screening patients with gastric intestinal metaplasia that merit a subsequent follow-up. 2) Biopsies of the antrum and incisura detected almost all (93 %) cases of gastric intestinal metaplasia in our cases and this can be an indication for clinical practice. 3) The distribution of gastric intestinal metaplasia between the sexes followed the proportion in the group studied, and so there is no difference between the sexes. 4) No change was found in the frequency of gastric intestinal metaplasia according to age. 5) The finding of brush border and Paneth cells does not preclude that metaplastic glands is not of the incomplete type. 6) There was no relationship between the location of gastric intestinal metaplasia and its type. 7) There was no relationship between the extent and type of gastric intestinal metaplasia. 8) The population has a low prevalence of gastric intestinal metaplasia.

Fundamentos: a rosácea é uma dermatose freqüente que possui multiplicidade de fatores envolvidos no seu desencadeamento. Na literatura recente, há autores que apontam o Helicobacter pylori como um possível agente etiológico da doença. Porém os poucos estudos publicados sobre o assunto que utilizaram pacientes controles não encontraram evidências de que esta associação seja importante. No Brasil, não há trabalhos publicados quanto à exposição ao Helicobacter pylori em pacientes com rosácea, e mesmo o perfil geral dos pacientes com rosácea, no país, é pouco conhecido. Objetivos: o principal objetivo do estudo foi avaliar se a exposição ao Helicobacter pylori constitui um fator de risco para o desenvolvimento da rosácea. Os outros objetivos do trabalho foram: avaliar uma possível diferença da presença de distúrbios dispépticos entre casos de rosácea e controles, analisar se a exposição ao Helicobacter pylori ocorre homogeneamente nos diferentes estágios evolutivos da rosácea, e descrever o perfil clínico-epidemiológico dos pacientes com rosácea. Metodologia: foi realizado um estudo caso-controle no Serviço de Dermatologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre I Universidade Federal do Rio Grande do Sul e no Laboratório Faillace (Porto Alegre, RS), no período entre 15 de abril de 1996 e 18 de maio de 1998. Os casos de rosácea (n=62) foram definidos de acordo com o critério clínico de Marks ( 1992) e classificados de acordo com os critérios de Plewig e Kligman (1993). Em situações de dúvidas clínicas, foram realizadas biópsias cutâneas, e a histopatologia foi utilizada para definir os diagnósticos. Os pacientes controles (n=124) foram selecionados entre pacientes não portadores de rosácea, atendidos no mesmo Serviço. Houve pareamento para idade, sexo e raça e apenas pacientes acima de 18 anos foram incluídos. As variáveis aferidas em ambos os grupos foram renda familiar mensal, grau de escolaridade, uso prévio de medicamentos sistêmicos, presença de distúrbios dispépticos e sorologia (IgG por enzimaimunoensaio) para Helicobacter pylori. Foram realizadas análise de risco bivariada e análise estatística estratificada. Resultados: houve uma fraca associação entre a exposição ao Helicobacter pylori e a rosácea (OR= 1,41 p=0,367), porém a análise estratificada demonstrou que o uso de medicamentos prévios e a renda familiar mensal inferior a 10 salários mínimos agiram de modo a modificar a relação entre o fator em estudo e o desfecho. No estrato em que essas variáveis modificadoras de efeito não interferiram, verificou-se uma forte associação entre a bactéria e a dermatose (OR=8,0 p""0,023). Não ocorreram diferenças importantes entre casos e controles quanto à presença de distúrbios dispépticos; também não ocorreram diferenças importantes quanto à freqüência de reagência sorológica ao Helicobacter pylori entre os diferentes estágios evolutivos da rosácea. O perfil dos pacientes com rosácea da amostra mostrou-se semelhante aos já descritos na literatura mundial. Conclusão: a freqüência da sorologia reagente para Helicobacter pylori em casos e em controles demonstrou não existir uma forte associação de risco entre o bacilo e a dermatose, exceto quando as variáveis modificadoras de efeito são removidas. Portanto, a principal conclusão do estudo é que, provavelmente, o Helicobacter pylori constitua um fator de risco para a rosácea em determinados grupos de indivíduos. / Background: rosacea is a frequent dermatosis triggered by multiple factors. In recent literature there are authors who indicate Helicobacter pylori as a possible etiological agent of the disease. However, the few studies published on this subject using control patients did not find evidence that this association is important. In Brazil, no studies have been published regarding exposure to Helicobacter pylori in patients with rosacea, and even the general profile of the patients with rosacea in the country is little known. Objectives: the main objective of the study was to assess whether the exposure to Helicobacter pylori constitutes a risk factor for the development of rosacea. The other objectives ofthe study were: to assess a possible difference in the presence of dyspeptic disorders between cases of rosacea and the controls; to analyze whether exposure to Helicobacter pylori occurs homogeneously in the different stages of evolution of rosacea, and; to describe the clinical-epidemiological profile o f rosacea patients. Methodology: a case-control study was perfomed at the Dermatology Service of Hospital de Clínicas de Porto Alegre I Universidade Federal do Rio Grande do Sul, and at Laboratório Faillace (Porto Alegre, RS), in the period from April 15, 1996 to May 18, 1998. The rosacea cases (n=62) were defined according to the clinicai criterion of Marks (1992) and classified according to the criteria ofPlewig and Kligman (1 993). In situations of clinicai doubt, skin biopsies were perfomed, and the histopathology was used to define the diagnoses. The control patients (n= l24) were selected among patients who did not have rosacea, seen at the same Service. Matching was perfomed for age, sex and race, and only patients over 18 years of age were included. The variables measured in both groups were monthly family income, schooling, previous use of systemic medications, presence of dyspeptic disorders and serology (lgG by enzyme immunoassay) for Helicobacter pylori. Bivariate risk analysis and stratified statistical analysis were perfomed. Results: a weak association was found between exposure to Helicobacter pylori and rosacea (OR= l ,41 p=0,367), but stratified analysis showed that the use of previous medications and family in come below 1 O rninimum wages modified the relationship between the factor studied and outcome. In the stratum where these effect-modifying variables did not interfere, a strong association was found between the bacteria nad dermatosis (OR=8,0 p=0,023). No significant ditferences were found as to frequency of serological reaction to Helicobacter pylori among the different evolutionary stages of rosacea. The profile ofthe rosacea patients in the sample proved similar to those already described in world literature. Conclusion: the frequency of serology reagent for Helicobacter pylori in cases and controls showed that there is not strong risk association between the bacillus and dermatosis, except when the effect-modifying variables are removed. Thus, the main conclusion o f the study is that, probably Helicobacter pylori constitues a risk factor for rosacea in certain groups o f individuais.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O papel carcinogÃnico de Helicobacter pylori està relacionado à sua capacidade de promover a inflamaÃÃo e, como conseqÃÃncia, a metilaÃÃo do DNA, caracterÃstica epigenÃtica frequentemente associada à carcinogÃnese gÃstrica. Por sua vez, o processo inflamatÃrio pode ser modulado pela presenÃa de alguns dos polimorfismos presentes em genes de interleucinas, bem como pelo genÃtipo bacteriano. Assim, os objetivos desse estudo foram: a) associar o perfil genotÃpico de virulÃncia de H. pylori (quanto aos genes cagA, cagE, vacA e virB11) e o perfil genotÃpico dos polimorfismos de interleucinas prÃ-inflamatÃrias, IL1β -511 C/T, IL1RN, IL6 -174 G/C e TNF -308 G/A com a metilaÃÃo de promotores gÃnicos de CDKN2A, MLH1 e COX-2; b) verificar a associaÃÃo dos polimorfismos da IL6 -174 G/C e TNF -308 G/A com genÃtipo bacteriano no desenvolvimento do cÃncer gÃstrico, considerando os aspectos clinico-patolÃgicos. Para isso, foi extraÃdo DNA a partir de 125 amostras tumorais, coletadas de pacientes submetidos à gastrectomia em hospitais de Fortaleza â Cearà â Brasil. A genotipagem dos polimorfismos foi feita por PCR-RFLP e a anÃlise de metilaÃÃo, por MS-PCR. Os genes de virulÃncia de H. pylori foram analisados por PCR. Em algumas anÃlises, os genÃtipos bacterianos foram agrupados de acordo com os alelos de vacA e a integridade de cag-PAI. Neste estudo, foi verificado que nos tumores da cÃrdia a metilaÃÃo na regiÃo promotora de COX-2 estava associada ao alelo IL1RN*2 (p= 0,015), e o genÃtipo IL-1B -511 T + IL1RN*2 se mostrou importante para a metilaÃÃo desse gene (p=0,013), principalmente na presenÃa de cepas de H. pylori cagA+ (p=0,026) e vacA s1 (p=0,025). A combinaÃÃo genotÃpica IL6 CC+TNFGG parece estar envolvida na nÃo-metilaÃÃo dos promotores dos genes CDKN2A (p=0,046) e MLH1 (p=0,031), mesmo na presenÃa da infecÃÃo por cepa H. pylori cagA+. Considerando os aspectos clinico-patÃlogicos, uma correlaÃÃo positiva foi encontrada entre o gÃnero masculino e pacientes da faixa etÃria >65 anos (r=0,198; p=0,037), na qual esse gÃnero foi predominante (77,5%; p= 0.022). AlÃm disso, tambÃm foi encontrada correlaÃÃo positiva entre o gÃnero feminino e a faixa etÃria de 55-64 (r=+0,217; p=0,021). Quanto ao subtipo histolÃgico, foi visto que tumores difusos estavam correlacionados a pacientes mais jovens (15-44 anos, r=+0,207; p=0,033), enquanto o subtipo intestinal, a pacientes de mais idade (> 65 anos, r=+0,296; p=0,017). Tumores do subtipo difuso foram correlacionados com o gÃnero feminino e aqueles do subtipo intestinal, com o gÃnero masculino (r=+0,226; p=0,019). Quanto aos polimorfismos de interleucinas, o alelo C do polimorfismo IL6 -174G/C foi correlacionado negativamente com pacientes de menor faixa etÃria (r=â0,193; p=0,041), sendo o que pacientes com genÃtipo CC de IL6 foi associado com a infecÃÃo por cepas virulentas (grupo 1c) (r=+0,225; p=0,017); enquanto que pacientes portadores do genÃtipo heterozigoto IL6 -174 GC, com cepas virulentas (grupo 1c) (r=â0,215; p=0,023) e de menor virulÃncia (grupo 2c) (r=+0,204; p=0,031). Os achados desse estudo contribuem com o estabelecimento de um perfil genotÃpico envolvido na metilaÃÃo de alguns genes, no qual pacientes com genÃtipo mais inflamatÃrio e infectados por cepas de H. pylori mais virulentas estÃo associadas a uma maior taxa de metilaÃÃo de alguns genes envolvidos na carcinogÃnese gÃstrica, podendo tambÃm variar de acordo com a localizaÃÃo e o subtipo do tumor. Esse estudo, portanto, oferece uma contribuiÃÃo relevante no que diz respeito à associaÃÃo da cepa de H. pylori com polimorfismos de interleucinas, no qual cepas de maior virulÃncia parecem estar relacionadas com a infecÃÃo de pacientes com genÃtipos menos inflamatÃrios, sendo o contrÃrio tambÃm verdadeiro. / The carcinogenic role of Helicobacter pylori is related to its ability to promote inflammation and, consequently, DNA methylation, epigenetic trait often associated with gastric carcinogenesis. In turn, the inflammation can be modulated by the presence of polymorphisms in some interleukin genes, as well as the bacterial genotype. The objectives of this study were: a) link the genotypic profile of H. pylori virulence (cagA, cagE, vacA and virB11 genes) and genotypic profile of pro-inflammatory interleukins polymorphisms, IL1β -511 C/T, IL1RN, IL6 -174 G/C and TNF-308 G/A with gene promoter methylation of CDKN2A, MLH1, and COX-2 b) verify the association of polymorphisms of IL6 -174 G/C and TNF -308 G/A with bacterial genotype in the gastric cancer development, considering the clinical and pathological aspects. For this, DNA was extracted from 125 tumor samples, collected from patients who underwent gastrectomy at hospitals in Fortaleza â Cearà â Brazil. Polymorphisms genotyping were identified by PCR-RFLP and methylation analysis by MS-PCR. Virulence genes of H. pylori were analyzed by PCR. In some analyzes, the bacterial genotypes were grouped according to the alleles of vacA and integrity of cag-PAI. In this study, we observed that in cardia tumors the methylation of COX-2 promoter region was associated with IL1RN*2 allele (p=0.015), and genotype IL-1B -511T+IL1RN*2 was important to methylation of this gene (p=0.013), especially in the presence of H. pylori cagA+strains (p=0.020) and vacA s1 (p=0.032). The genotype combination IL6 CC+TNFGG seems to be involved in non-methylation of promoters of genes CDKN2A (p=0.046) and MLH1 (p=0.031), even in the presence of infection by strain H. pylori cagA+. Considering the clinical and pathological aspects, a positive correlation was found between males and patients aged >65 years (r=0.198, p=0.037), in which this gender was predominant (77.5%, p=0.022) . In addition, positive correlation was found between female and patients aged 55-64 years (r=+0.217, p=0.021). Regarding the histologic subtype, we found that diffuse tumors were correlated with younger patients (15-44 years, r=+0.207, p=0.033), while the intestinal subtype, with the older patients (>65 years, r=+ 0.296, p=0.017). Tumors of the diffuse subtype were correlated with female gender and those of the intestinal subtype, with males (r=+0.226, p=0.019). Regarding polymorphisms of interleukins, the C allele of IL6 polymorphism -174G/C was negatively correlated with the younger group (r=-0.193, p=0.041), and the patients with CC genotype of IL6 was associated with infection by virulent strains (group 1c) (r=+0.225, p=0.017), whereas patients with the genotype IL6 -174 GC, with virulent strains (group 1c) (r=-0.215, p=0.023) and less virulent (group 2c) (r=+0.204, p=0.031). Our findings contribute to the establishment of a genotypic profile involved in methylation of some genes in which patients with genotype more inflammatory and infected with strains of H. pylori more virulent are associated with a higher rate of methylation of some genes involved in gastric carcinogenesis and may also vary according to location and tumor subtype. This study thus provides an important contribution with regard to the association of the strain of H. pylori polymorphisms interleukins, in which most virulent strains appear to be related to infection of patients with inflammatory genotypes less, and the converse is also true.

Resumo não disponível.

Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T02:57:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pacheco_AllineRoberta_M.pdf: 1095930 bytes, checksum: a6051845b7780b11eec360d1641c464c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Helicobacter pylori é um bacilo Gram-negativo, espiralado, microaerófilo, e flagelado, incluído na família Helicobacteraceae. Essa bactéria infecta cronicamente a mucosa gastroduodenal de uma grande parcela da população mundial. A infecção por H. pylori está associada ao desenvolvimento de diversas doenças gastroduodenais em humanos, entre elas a gastrite, a úlcera péptica (PUD) e seus subtipos, úlcera gástrica (GU) e duodenal (DU), e o adenocarcinoma gástrico. Embora a porcentagem de infectados seja alta, podendo chegar a 90% nos países em desenvolvimento como o Brasil, somente uma pequena parcela dos indivíduos infectados desenvolve patologias graves. O desenvolvimento de doenças gástricas em indivíduos infectados por H. pylori parece ser o resultado da interação entre características do hospedeiro, influências ambientais e fatores de virulência produzidos pela bactéria. Muitos fatores de virulência prováveis, que contribuem para a patogênese, tem sido identificados em H. pylori, dentre os quais temos os genes da Ilha de Patogenicidade cag (PAIcag), e genes da zona de plasticidade de H. pylori. Embora sabe-se que muitos dos fatores de virulência descritos (cagA, cagE, vacA) estejam associados, universalmente, a um aumento no risco de desenvolvimento de quadros clínicos graves como úlcera péptica e câncer gástrico, nenhum deles pôde ser ligado a uma doença específica causada pela infecção persistente por H. pylori, e portanto ainda não foi descrito um gene marcador universal para uma doença resultante da infecção por essa bactéria. Dados da literatura mostram uma associação entre o gene cagT da PAIcag e o desenvolvimento de PUD. Um trabalho recente descreveu o locus dupA e sua associação com o desenvolvimento de DU, e dupA foi sugerido como marcador universal para DU. Neste trabalho, investigou-se a presença dos genes virB11 e cagT, localizados na PAIcag, e dos genes jhp917 e jhp918, integrantes do locus dupA encontrado zona de plasticidade de H.pylori, em isolados brasileiros dessa bactéria. Além disso, investigou-se uma possível associação entre tais genes e algumas doenças decorrentes da infecção por H. pylori, tais como a gastrite, PUD, GU, DU e a doença do refluxo gastroesofágico (GERD), na tentativa de encontrar um gene marcador para alguma dessas doenças. Nossos resultados mostram que o gene cagT foi associado com PUD; o gene virB11 foi detectado em quase todas as amostras; o locus dupA não foi associado a DU ou nenhuma outra doença gastroduodenal. Dessa forma, nossos resultados sugerem que o gene cagT pode ser usado como marcador para o desenvolvimento de PUD no Estado de São Paulo, Brasil; o gene virB11 pode representar um gene de virulência essencial para a patogênese da infecção causada por H. pylori no desenvolvimento de gastrite, PUD e GERD; o locus dupA não é um marcador universal para o desenvolvimento de DU / Abstract: Helicobacter pylori is a Gram-negative, spiral-shaped, flagellated, micro-aerophilic bacterium, included in the Helicobacteraceae family, which infects the human stomach cronically. H. pylori infection has a worldwide distribution and is associated with the development of several gastroduodenal diseases, such as gastritis, peptic ulcer disease (PUD) and its subtypes, gastric ulcer (GU) and duodenal ulcer (DU), and gastric adenocarcinomas. The number of infected individuals are high but only a minority of them will develop serious gastroduodenal diseases. Disease outcome depends on many factors, including host physiology, environmental influences and bacterial genotype. Although a number of putative virulence factors had been reported (cagA, cagE and vacA) for H. pylori, their presence has tipically been associated with an increased risk of both gastric cancer and peptic ulcer disease, and none can be clearly linked to one specific H. pylori related-disease. So the identification of a disease-specific H. pylori virulence factors predictive of the outcome of infection remains unachieved. Several of the H. pylori putative virulence genes that may play a role in its pathogenicity have been identified, many of them located in the cag pathogenicity island (PAIcag) and in the plasticity zone of the H. pylori genome. Data from the literature shows an association between cagT and PUD development, as well as dupA and DU. The latter has been suggested as an universal marker for the development of duodenal ulcers. In this work, we investigated the presence of virB11 and cagT, located in the left half of PAIcag, and the genes jhp917-jhp918, components of the dupA locus, which is located in the plasticity zone region of H. pylori, in brazilian isolates. In addition, we investigated a possible association between these genes and some H. pylori relateddiseases, such as gastritis, PUD, GU, DU and gastroesophageal-reflux (GERD), in an attempt to find a gene marker for a clinical outcome resulted from H. pylori infection. The cagT gene was associated with PUD; virB11 gene was detected in nearly all the samples; dupA locus was not associated with development of DU neither any gastroduodenal disease. In this way, our results suggest that cagT can be used as a marker for the developmentof PUD in State of São Paulo, Brazil; virB11 can be an essential virulence gene for H. pylori pathogenesis on the development of gastritis, PUD and GERD; dupA locus is not an universal marker for the development of DU / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador : Sandra Cecilia Botelho Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-01T03:10:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Menoni_SilviaMendoncaFerreira_M.pdf: 21358610 bytes, checksum: 91199fa109a7df3793cf28393427c6a8 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O Helicobacter pylori (H. pylori) causa infecção muito comum no mundo inteiro e atualmente é considerada a segunda infecção de maior prevalência no homem acometendo pessoas de todas as idades. Estudos epidemiológicos indicam que o H. pylori está relacionado com o nível sócio-econômico e com os hábitos alimentares e constitui um fator ambiental adquirido, importante na patogenia de várias afecções do aparelho digestivo. Em algumas destas patologias, a relação etiológica foi suficientemente comprovada, em outras, é duvidosa ou se baseia em estudos preliminares. Os fatores de patogenicidade do H. pylori estão relacionados: com suas características, e com o meio em que ele se encontra. A capacidade do H. pylori de "não se deixar envolver" com a resposta imunológica do hospedeiro, de resistir à fagocitose, de produzir enzimas (urease, catalase, superóxido dismutase entre outras), favorece a cronicidade da infecção (no estômago) durante longos períodos, eventualmente durante toda a vida. O diagnóstico da infecção pelo Helicobacter pylori pode ser estabelecido utilizando-se vários testes, que diferem entre si em relação à sua especificidade, sensibilidade,caráter invasivo e custo. A detecção do DNA do H. pylori pela PCR (Reação em Cadeia da polimerase) é específica e sensível e pode servir como uma poderosa ferramenta para o diagnóstico da infecção causada por essa bactéria. O diagnóstico de variações em regiões funcionalmente relevantes no genoma do H. pylori tem sido usado como marcador genético em numerosos estudos clínicos para diferenciar as linhagens e associá-Ias à patogênese bacteriana. O presente trabalho teve como objetivo a padronização da técnica "PCR", com a utilização de "primers" que flanqueiam a região conservada do Helicobacter pylori (ureaseC), para a detecção do H.pylori a partir de biópsias endoscópicas, e aplicação do método em 141 pacientes, em seguimento no Gastrocentro-FCM-Unicamp, com suspeita da infecção. Também padronizamos a genotipagem do H. pylori com o auxilio de duas enzimas de restrição aplicadas ao produto da "PCR" em 60 pacientes que apresentaram PCR + para o H. pylori. Os resultados obtidos pela "PCR" foram comparados com os resultados obtidos pela Histologia nas biópsias fixadas e pelo teste rápido da uréase, nas biópsias a fresco. Para a genotipagem 60 pacientes foram avaliados. Entre os 141 pacientes estudados, obtivemos os seguintes resultados: das 59 amostras de biópsias endoscópicas gástricas fixadas em parafina, 12 amplificaram pela PCR (20,3%). Das 82 amostras de biópsias gástricas a fresco todas amplificaram, sendo que 64 amostras foram positivas e 18 amostras foram negativas. Em relação a genotipagem, os padrões encontrados foram comparados com a utilização do programa computacional BioCap 1 D: foram encontrados 11 padrões com a enzima HhaI e 12 padrões com a enzima MboI. Pelo número pequeno de amostras estudadas, não foi possível uma correlação estatisticamente significante entre genótipos específicos e padrões de patologias digestivas / Abstract: The Helicobacter pylori (H. pylori) causes a very common infection all over the world and is currently considered the second infection of larger prevalence in man, attacking people of alI ages. Epidemic studies indicate that the fi. py/ori is related with the socioeconomic leveI and dietary habits, constituting an nnportant acquired environmental factor in the pathogenesis of several diseases of the digestive system. In some of these patients the etiologic relationship was sufficiently proven; in others, it is doubtful or based on prelllninarystudies. The pathogenicity factors of the H. pylori are related to its characteristics and to the environment where it is found. The capacity of the fi. py/ori of not becoming involved with the immunologic answer of the host, of resisting phagocytosis and of producing enzymes (urease, catalase and superoxide dismutase, among others) favors chronic infections (in the stomach) during long periods, eventually during a lifetnne. The diagnosis of infection by the Helicobacter pylori can be established by means of several tests that differ from each other in relation to specificity, sensitivity, invasive character and cost. Detection of the H. pylori DNA by PCR (Polymerase Chain Reaction) is specific and sensitive and can be a powerful tool for diagnosis of the infection caused by this bacterium. The diagnosis of variations in functionalIy important areas of the H. pylori genome has been used as a genetic marker in numerous clinical studies to differentiate lineages and to associate them to bacterial pathogenesis. The present work had as objective the standardization of the PCR technique, with primers flanking the conserved area of the Helicobacter pylori (urease C) for detection of H. pylori, beginning with endoscopic biopsies and application of the method to 141 patients who were being followed at Gastrocentro-FCM-Unicamp as potential infection hosts. We also standardized H. pylori genotyping, aided by two restriction enzymes applied to the product of PCR in 60 patients that presented PCR + for H. pylori. The results obtained by PCR were compared with the results obtained by histology from the fastened biopsies and for the fast urease test, in fresh biopsies. Sixty patients were appraised for genotyping purposes. Among the 141 studied patients we obtained the following results: of the 59 samples of gastric endoscopic biopsies fastened in paraffin, 12 were amplified by PCR (20.3%). Of the 82 samples of fresh gastric biopsies all were positive for PCR (100%). In relation to genotyping, patterns were compared by means of BioCap lD computer program: 11 patterns with the enzyme HhaI and 12 patterns with the enzyme MboI were found. On account of the small number of studied samples, it was not possible to find a significant statistic correlation among specific and standard genotypes of digestive pathologies / Mestrado / Mestre em Farmacologia