A síndrome de emagrecimento progressivo (SEP) é responsável por elevada morbidade e mortalidade de calitriquídeos mantidos em cativeiro em diferentes instituições. Essa síndrome representa um desafio aos médicos veterinários por suas características ainda pouco esclarecidas e são poucos os estudos multidisciplinares que visam à avaliação dos diferentes sistemas, como os órgãos linfo-hematopoiéticos. O objetivo foi caracterizar a evolução e duração da SEP, associando os dados clínicos, laboratoriais e anatomopatológicos dos órgãos linfo-hematopoiéticos de saguis naturalmente acometidos por SEP no cativeiro. Foram analisadas as fichas clínicas, necroscópicas e os resultados das amostras de sangue e urina de 47 saguis doentes, Callithrix spp., machos e fêmeas, que foram a óbito devido a SEP e eram provenientes de dois criadouros diferentes do estado de São Paulo. Os fragmentos dos órgãos linfo-hematopoiéticos, intestino delgado e do fígado foram processados e avaliados. Os resultados caracterizaram que a SEP acomete calitriquídeos de espécies diferentes, adultos, sem predisposição sexual, mantidos sob condições estáveis de manejo por em média 42 meses e a duração clínica varia de 41 dias a 1 ano e 7 meses. As características clínicas na fase inicial foram predominantemente sinais gastrintestinais e na fase terminal, sinais gastrintestinais e extra-intestinais. A anemia macrocítica normo ou hipocrômica com policromasia, esferocitose, presença de corpúsculos de Heinz e hemoglobinúria foi a alteração hematológica mais frequente. As lesões dos órgãos linfo-hematopoiéticos foram características de anemia hemolítica ou foram inespecíficas e reacionais caracterizadas por hiperplasia ou depleção das células da medula óssea, baço e linfonodo e lesões degenerativas no fígado. Na SEP, a associação clínica, laboratorial e anatomopatológica possibilitou a caracterização da evolução e duração clínica, da anemia e das alterações dos órgãos linfo-hematopoiéticos, cujas lesões foram consideradas secundárias à desnutrição crônica e progressiva decorrente da severa enterite atrófica. / Wasting marmoset syndrome (WMS) causes high morbidity and mortality of marmosets and tamarins kept in captivity in different colonies. WMS challenges the veterinarian due to its unclear and not established features and there are few multidisciplinary studies that carried out an evaluation of different systems, such the lymphohematopoietic system. The aim was described the duration and evolution of illness based on an association of clinical, laboratory and pathological aspects of WMS. Medical record, laboratory data and pathological findings were analyzed of 47 Callithrix spp., males and females, sick marmosets that died due to WMS in two different colonies in São Paulo state. Tissue samples of small intestine, lymphohematopoietc system and liver were histological processed and evaluated. The results showed that WMS affects adult marmosets of different species; there are no sex-related differences, and the marmosets are at least 42 months under similar general management at colony. The clinical duration of WMS is from 41 days to 1 year and 7 months. The clinical features were gastrointestinal symptoms in the beginning and extra-gastrointestinal and gastrointestinal signs in the end. Normochromic or hypochromic macrocytic anemia with polychromasia, spherocytes, Heinz bodies, and hemoglobinuria is the common hematological result. The lymphohematopoietic system lesions were the common findings of hemolytic anemia or unspecific and reacting features such as hyperplasia or depletion of cell numbers of bone marrow, spleen and lymph node, and degenerative lesions of liver. The clinical, laboratory and pathological association allowed the characterization of evolution and duration of the WMS, the anemia and the lesions of lymphohematopoietic organs which lesions were considered secondary to chronic and progressive malnutrition as a result of severe atrophic.

Made available in DSpace on 2017-07-21T18:53:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Janio Santos.pdf: 2918457 bytes, checksum: 102357b433cd6ca1bff688e4810640bc (MD5) Previous issue date: 2016-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Rooibos (Aspalathus linearis) is a leguminous shrub of African origin, which attention has been dedicated to its most important technological product: Aqueous extract (tea).Rooibos tea has a complex chemical composition with various quantities phenolic compoundsin addition to high levels of aspalathin, a dihydrochalcone found only in rooibos. Therefore, the objective of this study is to evaluate the effects of time and temperature of extraction the phenolic compounds and functional in vitro properties of aqueous extracts of fermented organic Aspalathus linearis. Initially been prepared by an aqueous 22 extracts seven experiment design red rooibos for evaluation of the linear and combined effects of temperature and extraction time. By means of spectrophotometric methods primarily extracts were evaluated for the effect of time and temperature of extraction the content of phenolic compounds, flavonoids, flavonols, hydrolyzable condensed tannins and ortho-phenolic antioxidant activity against the DPPH and ABTS radical, reducing capability iron and reducing total capacity. Posteriorly it was performed for identification and quantification phenolic compounds 19 by high-performance liquid chromatography. The third step was to evaluate the inhibitory activity of α-amylase and α-glucosidase in vitro and hemolytic profile of aqueous extracts of rooibos red in human erythrocytes. The principal component analysis (PCA) was used to associate the chemical composition, antioxidant activity, reducing capacity, and inhibition of enzymes (α-amylase and α-glucosidase). In a general way the extract that was subjected to the extraction process in the higher temperature of the design (85 °C) showed the highest levels of total phenolics, flavonoids, flavonols, hydrolyzable condensed tannins and ortho-phenolic and antioxidant activity against the DPPH and ABTS, as the reducing capacity of iron and reducing total capacity, with little influence of time.The antioxidant activity and reducing capacity of rooibos extracts were shown to be correlated with the content of phenolic compounds, flavonoids, flavonols and ortho-diphenols. The quercetin contents, isoquercitrin, and rutin and were correlated with ABTS, DPPH, FRAP and total capacity reduction.Thus, we can say that such compounds are in vitro directly linked functionality presented by the aqueous extract of rooibos. In relation the antimicrobial activity of the extracts at concentrations from 7.81 to 1000 mg L-1 were not been effective in inhibiting the growth of tested microorganisms.As regards the inhibitory activity of α-amylase and α-glucosidase in general, all analyzed samples showed similar values extract to inhibit 50% of enzyme activity (IC50).The tea extract at 80 °C for 10 min was used for hemolysis test in which it was observed that there was beneficial interaction with the erythrocytes, reducing the occurrence of erythrocyte hemolysis in the cell.Is possible to observe a decrease in haemolytic activity with increased concentration of rooibos extract, this characteristic indicates that inhibition of plasma hemoglobin release is dependent on the concentration of rooibos extract contained in the medium. However, overall, the extraction temperature is the mainpositive factor that influences these variables in organic red rooibos. / Rooibos (Aspalathus linearis) é um arbusto leguminoso de origem africana, cuja atenção tem sido voltada ao seu produtotecnológico mais importante: Extrato aquoso (chá).O chá de rooibos apresenta uma composição química complexa com quantidades de vários compostos fenólicos, além de níveis elevados de aspalatina, uma dihidrocalcona encontrada apenas em rooibos. De tal modo o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do tempo e temperatura na extração dos compostos fenólicos e propriedades funcionais in vitro de extratos aquosos de Aspalathus linearis orgânicofermentado. Inicialmente foram preparados por meio de um delineamento de experimento 22 sete extratos aquosos de rooibos vermelho para avaliação dos efeitos lineares e combinados da temperatura e tempo de extração. Por meio de métodos espectrofotométricos primeiramente os extratos foram avaliados quanto ao efeito do tempo e da temperatura de extração no teor de compostos fenólicos totais, flavonoides, flavonóis, taninos condensados hidrolisáveis e orto-difenólicos, atividade antioxidante frente aos radicais DPPH e ABTS, capacidade redutora do ferro e capacidade redutora total. Posteriormente à identificação e quantificação de 19 compostos fenólicos foram realizadas por meio de cromatografia liquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (LC-ESI-MS/MS). O terceiro passo foi avaliar atividade inibitória das enzimas α-amilase e α-glucosidasein vitro e o perfil hemolítico dos extratos aquosos de rooibos vermelho em eritrócitos humanos. A análise de componentes principais (PCA) foi usada para associar a composição química, atividade antioxidante, capacidade redutora, e inibição das enzimas (α-amilase e α-glucosidase). De modo geral o extrato que foi submetido ao processo de extração na maior temperatura do delineamento (85 °C) apresentou os maiores teores de compostos fenólicos totais, flavonoidestotai, flavonóis totais, taninos condensados hidrolisáveis e orto-difenólicose na atividade antioxidante frente aos radicais DPPH e ABTS, como na capacidade redutora do ferro e capacidade redutora total, com pouca influência do tempo. A atividade antioxidante e capacidade redutora dos extratos de rooibos mostraram-se correlacionadas com o teor de compostos fenólicos totais, flavonoides, flavonóis e orto-difenólicos.Os teores de quercetina, isoquercitrina, e rutina e foram correlacionados com ABTS, FRAP e capacidade redutora total. Assim, é possível afirmar que tais compostos quantificados estão diretamente ligados às funcionalidades in vitro apresentadas pelo extrato aquoso de rooibos. Em relação a atividade antimicrobiana, os extratos nas concentrações de 7,81 a 1000 µg mL-1 não foram eficazes em inibir o crescimento dos micro-organismos testados.No que diz respeito à atividade inibitória das enzimas α-amilase e α-glucosidase, todas as amostras analisadas mostraram valores similares de extrato para inibir 50% da atividade enzimática (CI50). O chá extraído a 80°C por 10 min foi usado para o teste de hemólise no qual foi constatado que ocorreu uma interação benéfica com os eritrócitos, diminuindo a ocorrência de hemólise nas células eritrocitárias. Observa-se uma diminuição da atividade hemolítica com o aumento da concentração do extrato de rooibos, tal característica aponta que a inibição da liberação de hemoglobina no plasma é dependente da concentração de extrato de rooibos contido no meio. Conclui-se de modo global, que a temperatura de extração é o fator de maior influência positiva nessas variáveis em rooibos fermentado orgânico.

A síndrome de emagrecimento progressivo (SEP) é responsável por elevada morbidade e mortalidade de calitriquídeos mantidos em cativeiro em diferentes instituições. Essa síndrome representa um desafio aos médicos veterinários por suas características ainda pouco esclarecidas e são poucos os estudos multidisciplinares que visam à avaliação dos diferentes sistemas, como os órgãos linfo-hematopoiéticos. O objetivo foi caracterizar a evolução e duração da SEP, associando os dados clínicos, laboratoriais e anatomopatológicos dos órgãos linfo-hematopoiéticos de saguis naturalmente acometidos por SEP no cativeiro. Foram analisadas as fichas clínicas, necroscópicas e os resultados das amostras de sangue e urina de 47 saguis doentes, Callithrix spp., machos e fêmeas, que foram a óbito devido a SEP e eram provenientes de dois criadouros diferentes do estado de São Paulo. Os fragmentos dos órgãos linfo-hematopoiéticos, intestino delgado e do fígado foram processados e avaliados. Os resultados caracterizaram que a SEP acomete calitriquídeos de espécies diferentes, adultos, sem predisposição sexual, mantidos sob condições estáveis de manejo por em média 42 meses e a duração clínica varia de 41 dias a 1 ano e 7 meses. As características clínicas na fase inicial foram predominantemente sinais gastrintestinais e na fase terminal, sinais gastrintestinais e extra-intestinais. A anemia macrocítica normo ou hipocrômica com policromasia, esferocitose, presença de corpúsculos de Heinz e hemoglobinúria foi a alteração hematológica mais frequente. As lesões dos órgãos linfo-hematopoiéticos foram características de anemia hemolítica ou foram inespecíficas e reacionais caracterizadas por hiperplasia ou depleção das células da medula óssea, baço e linfonodo e lesões degenerativas no fígado. Na SEP, a associação clínica, laboratorial e anatomopatológica possibilitou a caracterização da evolução e duração clínica, da anemia e das alterações dos órgãos linfo-hematopoiéticos, cujas lesões foram consideradas secundárias à desnutrição crônica e progressiva decorrente da severa enterite atrófica. / Wasting marmoset syndrome (WMS) causes high morbidity and mortality of marmosets and tamarins kept in captivity in different colonies. WMS challenges the veterinarian due to its unclear and not established features and there are few multidisciplinary studies that carried out an evaluation of different systems, such the lymphohematopoietic system. The aim was described the duration and evolution of illness based on an association of clinical, laboratory and pathological aspects of WMS. Medical record, laboratory data and pathological findings were analyzed of 47 Callithrix spp., males and females, sick marmosets that died due to WMS in two different colonies in São Paulo state. Tissue samples of small intestine, lymphohematopoietc system and liver were histological processed and evaluated. The results showed that WMS affects adult marmosets of different species; there are no sex-related differences, and the marmosets are at least 42 months under similar general management at colony. The clinical duration of WMS is from 41 days to 1 year and 7 months. The clinical features were gastrointestinal symptoms in the beginning and extra-gastrointestinal and gastrointestinal signs in the end. Normochromic or hypochromic macrocytic anemia with polychromasia, spherocytes, Heinz bodies, and hemoglobinuria is the common hematological result. The lymphohematopoietic system lesions were the common findings of hemolytic anemia or unspecific and reacting features such as hyperplasia or depletion of cell numbers of bone marrow, spleen and lymph node, and degenerative lesions of liver. The clinical, laboratory and pathological association allowed the characterization of evolution and duration of the WMS, the anemia and the lesions of lymphohematopoietic organs which lesions were considered secondary to chronic and progressive malnutrition as a result of severe atrophic.

"February 2003." Addendum and corrigenda inserted at back Includes bibliographical references (leaves 249-272) Aims to identify and characterise potential virulence-associated factors from the locus of enterocyte effacement-negative shiga-toxigenic Escherichia coli O113:H21 strain 98NK2 which was responsible for an outbreak of haemolytic uremic syndrome. Particular attention was focused on putative virulence genes encoded on the megaplasmid of this strain.

"February 2003." / Addendum and corrigenda inserted at back / Includes bibliographical references (leaves 249-272) / xi, 272 leaves : ill. (some col.) ; 30 cm. / Title page, contents and abstract only. The complete thesis in print form is available from the University Library. / Aims to identify and characterise potential virulence-associated factors from the locus of enterocyte effacement-negative shiga-toxigenic Escherichia coli O113:H21 strain 98NK2 which was responsible for an outbreak of haemolytic uremic syndrome. Particular attention was focused on putative virulence genes encoded on the megaplasmid of this strain. / Thesis (Ph.D.)--University of Adelaide, School of Molecular and Biomedical Science, 2003

Made available in DSpace on 2014-09-09T12:22:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 69594.pdf: 1287197 bytes, checksum: 097f898f1364f075660a2a3257570c38 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Saúde da Mulher, da Criança e do Adolescente Fernandes Figueira. Departamento de Ensino. Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e da Mulher. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Objetivo: Identificar fatores de risco associados à necessidade de exsanguíneotransfusão (EXT) em gestações acometidas por doença hemolítica perinatal (DHPN) e avaliar a influência da terapêutica aplicada. Métodos: Foi realizado estudo de coorte e analisados 124 casos referentes a nascimentos de crianças com DHPN no período de abril de 2006 a junho de 2009, cujo parto ocorreu no Instituto Fernandes Figueira. Dados da história materna, pré-natal, parto e recém-nascido foram avaliados quanto a sua relação com a necessidade de transfusão intrauterina (TIU) e com o desfecho grave da doença, definido por EXT. Resultados: Paridade (RR:1,22; IC:1,00-1,49), história de filhos com doença (RR:3,21; IC:1,27-7,99) e hidropisia fetal (RR:1,86; IC:1,11-3,11) são fatores de risco importantes para a necessidade de TIU. Realização de TIU (RR:1,82; IC:1,12-2,97), parto normal (RR:0,53; IC:0,30-0,93), icterícia (RR:2,31; IC: 1,46-3,68), nível de hematócrito ao nascimento (RR:0,95; IC:0,93-0,98), bilirrubina total máxima durante a internação (RR:1,23; IC:1,16-1,31), tempo de fototerapia (RR:0,90; IC:0,85-0,95) e tempo total de internação (RR:097; IC:0,95-0,99), são variáveis que estabelecem relação independente e estatisticamente significativa com o desfecho de gravidade. A necessidade de EXT após TIU difere entre fetos menos graves (RR: 1,29; IC:0,94-1,77) e mais graves (RR: 1,61; IC:1,11-2,34). Conclusão: A identificação de fatores de risco é possível e importante para o cuidado do recém-nascido no período neonatal precoce acometido por DHPN. O impacto da terapêutica no desfecho neonatal varia de acordo com a gravidade no momento do diagnóstico. / Objective : To identify the major risk factors related to exchange transfusion (EXT) in pregnancies afflicted with hemolytic disease of the fetus and newborn (HDFN) and to evaluate the influence of applied therapy . Methods: A cohort study of 124 infants born with HDFN between A pril 2006 and June 2009 at the Fernandes Figuei ra National Institute . Data on maternal history, prenatal care, delivery and neonatal paramet ers were subjected to analysis to de termine their relationship with the need for i ntrauterine transfusion (IUT) du ring prenatal care and severe disease outcome, represented by EXT. Results: Parity (RR:1,22; C I :1,00 - 1,49) , obstetric history related to HDFN (RR:3,21; C I :1,27 - 7,99) and hydrops fetalis (RR:1,86; C I :1,11 - 3,11) are important risk factors related with the need for IUT. The need for IUT (RR:1,82; C I :1,12 - 2,97), vaginal delivery (RR:0,53; C I :0,30 - 0,93), jaundice (RR:2,31; C I : 1,46 - 3,68), hematocrit level at birth (RR:0,95; C I :0,93 - 0,98), peak serum bilirubin leve ls during hospitalization (RR:1,23; C I :1,16 - 1,31), duration of phototherapy (RR:0,90; CI:0,85 - 0,95) and total duration of hospital stay (RR:097; C I :0,95 - 0,99 ) were the variables found to establish an independent and statistically significant relationship w ith severe outcome. The need for EXT after IUT was different between fetus with less severe disease (RR: 1,29; C I :0,94 - 1,77) and more severe disease (RR: 1,61; C I :1,11 - 2,34). Conclusion: To identify risk factors is possible and important in early neonatal assistance of newborn afflicted with HDFN. The impact of therapy on the neonatal outcome depends on severity of the disease at the moment of diagnosis.

A mutagênese química utilizando o agente mutagênico N-ethyl-N-nitrosourea (ENU) seguida da observação do fenótipo deu origem a um mutante Anêmico. O tipo de herança é autossômica dominante, com morte intra útero dos mutantes homozigotos. O mapeamento genético foi feito utilizando-se marcadores microssatélites, sendo selecionados marcadores polimórficos entre as linhagens BALB/c e C57BL/6 envolvidas no mapeamento. Estabeleceu-se um painel de microssatélites distribuídos por todo o genoma do camundongo, que permitisse a localização do cromossomo portador da mutação. O gene mutante foi localizado no cromossomo 7 entre os marcadores D7Mit301 e D7Mit131 delimitando um intervalo entre 46,5cM e 51cM de 4,5cM. Através das análises fenotípicas do mutante Anêmico e estudo dos genes candidatos neste intervalo, foi selecionado o gene Hbb responsável pela síntese das globinas b-major e b-minor , sendo o gene que mais se identifica com as características do mutante, localizado a 50cM. A deficiência deste gene leva a uma das mais severas anemias humana, a b-Talassemia major. / Chemical mutagenesis, using the mutagenic agent N-ethyl-N-nitrosourea (ENU), and followed by observation of the phenotype, originated in an Anaemic mutant. The inheritance-type is dominant auto-somic, with intra-uterus death of the homozygotic mutants. Genetic mapping was undertaken by means of micro-satellite markers, polymorphic markers being selected from among the BALB/c and C57BL/6 lineages involved in the mapping itself. A panel was established of the micro-satellites distributed throughout the whole mouse genome, thereby permitting localization of the mutation bearing chromosome. The mutant gene was located in chromosome 7 between markers D7Mit301 and D7Mit131, these delimiting an interval between 46,5cM and 51cM of 4,5cM. Selection of the Hbb gene responsible for synthesis of the b-major and b-minor globins came about through phenotypic analysis of the Anaemic mutant and a study of candidate genes within this interval, the selected gene being that which was most identified with the mutants characteristics and located at 50cM. A deficiency in this gene leads to one of the most severe forms of human anaemia, b-Talhassemia major.

L’objectif de notre travail est de contribuer à l’amélioration de la sécurité transfusionnelle. Pour ce faire, nous sommes partis de notre expérience personnelle en banque de sang hospitalière. Le risque infectieux lié aux transfusions, inscrit dans l’esprit de chacun depuis l’affaire du « scandale du SIDA » en France, est aujourd’hui un des risques les mieux maîtrisés. Actuellement, les risques transfusionnels les plus importants sont essentiellement de type immunologique ou liés à des erreurs humaines. Nous avons donc mis en évidence trois axes de travail correspondant chacun à un type de réaction transfusionnelle spécifique choisis parmi ces deux derniers risques. Les données d’hémovigilance internationales publiées nous ont confortés dans l’idée que ces trois sujets représentent une part importante des réactions transfusionnelles notifiées ces dix dernières années. Nous avons choisi de travailler sur la prévention des réactions transfusionnelles hémolytiques de type ABO, des réactions transfusionnelles hémolytiques chez les patients atteints d’anémie hémolytique auto-immune et des réactions d’hyperkaliémie post-transfusionnelle.<p>Notre premier travail a consisté en la démonstration de la faisabilité d’une automatisation complète du contrôle ultime au lit du malade par vérification de la compatibilité entre le groupe ABO du patient et celui de la poche de sang à transfuser. Cet appareil utilise une nouvelle technique de détection d’hémagglutination entièrement conçue et validée au sein de notre laboratoire de recherche et brevetée par l’ULB.<p>La seconde partie du travail consiste en l’évaluation d’un nouvel algorithme de prise en charge transfusionnelle des patients atteints d’anémie hémolytique autoimmune en incluant la réalisation d’un génotypage érythrocytaire permettant ainsi, d’une part, d’éviter les réactions hémolytiques transfusionnelles et, d’autre part, d’éviter de nouvelles alloimmunisations chez ces patients.<p>Dans la dernière partie du travail, nous nous sommes intéressés aux effets des liquides de conservation des poches de sang sur le relargage de potassium à partir d’unités de globules rouges irradiées destinées aux patients immunodéprimés. Nous avons pu observer des différences entre les deux solutions de conservation que nous utilisons et nous avons pu ainsi émettre de nouvelles recommandations visant à prévenir ces hyperkaliémies transfusionnelles.<p> / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Hemolytic disease of fetus or newborn (HDFN) är en komplikation där foster eller nyföddas erytrocyter förstörs för tidigt. HDFN uppstår när det föreligger blodgruppsinkompatibilitet mellan moder och barnet. Komplikationerna/ symptomen kan variera allt från mildare symptom till fosterdöd. HDFN orsakas framförallt av antikropp D (RhD-immunisering) och på grund av detta utförs det typning av fetalt RhD i maternell plasma. Utöver RhD-immuniseringar kan svåra fall av HDFN ibland orsakas av andra blodgruppssystem som c (Rh) och K (Kell). Fetal RhD-typning görs idag som screening på alla RhD-negativa gravida mödrar och utförs i Stockholm och Lund. Metoden som används är baserad på realtids-PCR och har använts sedan 2009. Fetal typning av c och K görs när höga titrar av anti-c respektive anti-K påvisas i mammans plasma. För fetal typning av c och K skickas prover från Huddinge till Lund respektive Amsterdam. Motsvarande immunisering mot erytrocytantigen kan även bildas mot trombocytantigen främst Human Platelet Antigene (HPA-1a) som uttrycks hos fostret och leda till fetal neonatal alloimmun trombocytopeni (FNAIT). En next generation sequencing (NGS) baserad metod för genomisktypning av alla kliniskt relevanta blodgruppssystem finns idag på Karolinska universitetssjukhuset. Denna metod är dock inte anpassad för fetal blodgruppstypning där cell-fritt foster- DNA (cffDNA) analyseras. Syftet med det här projektet var att optimera designade oligonukleotider (oligos) anpassade för fetal blodgruppstypning med NGS-metodik. Design av oligos utfördes innan examensarbetet påbörjades. Dessa inkluderade primer- par som amplifierar upp alla blodgruppssystem som kan orsaka HDFN och FNAIT. Utöver det inkluderade designade oligos markörer som amelogenin-XY (Amel-XY) som är könsspecifika markörer och insertion/deletion markörer (Indel-markörer). Med Amel-XY markörerna kan könsspecifika Y-genen påvisas i provet, vilket kommer att fungera som en kontroll på att foster-DNA har analyserats (fungerar endast vid manligt foster). Designade Indel-markörer består av 2 - 3 bp insertioner/deletioner där olika markörerna används till att skilja DNA från foster och modern i framtiden. De designade oligonukleotiderna undersöktes för om de ger tillräckligt bra amplifiering av sökta sekvenser med NGS genom att analysera två slumpmässigt valda försöksprover (genomisk DNA 2 ng/ μL) från en man och en kvinna. Resultatet visade att tillräckligt bra amplifieringar/signaler erhålls från samtliga markörer som ingår i studien. Den totala signalen för samtliga markörer blev 114234 läsningar (”reads”) vilket gav ett medelvärde på 3939 läsningar. För att mäta amplifieringsförmågan hos varje enskild markör beräknades procent av medelvärdet på 3939 läsningar. En signal på 20 – 180 % av medelvärdet ansågs vara godkänt för varje markör. Alla undersökta primer-markörer uppvisade en signal på minst 45 % av medelvärdet vilket var godkänt (godkänt intervall 20 – 180 %). Efter optimering av oligos som ger tillräckligt bra amplifiering genotypades 32 slumpmässigt valda DNA prover från 21 män och 11 kvinnor med hjälp av NGS. Efter NGS-körning och analys av fastQ-filer med hjälp av mjukvaruprogrammet R erhölls resultat i form av signaler. Signaler för respektive markör över 50 läsningar ansågs vara en positiv signal det vill säga att den sökta genen har påvisats. Signal-värde under 50 innebar att det förekom bakgrundssignal då önskat signal-värde vid avsaknad av sökt gensekvens är 0 (åsatt gränsvärde &lt;1 % av högst uppmätta positiva signalen för varje markör). Samtliga undersökta markörer visade låg bakgrundssignal (&lt;1 % ). Bakgrundssignalen beräknades för att veta vilken tillförlitlig nivå varje markör ska ligga på för att kunna detektera känsligt foster-DNA i framtiden. Resultaten i denna studie visade att de optimerade oligos kan användas till genotypning av cffDNA i framtiden eftersom markörerna uppvisade låga bakgrundssignaler vilket indikerar att metoden är tillräckligt effektiv för att kunna detektera känsligt foster-DNA i framtiden.

Discussion of the hematologic complications of vaccination for severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (COVID-19) has primarily focused on the development of vaccine-associated immune thrombosis with thrombocytopenia (VITT). Other hematologic complications are uncommon. We report the case of a patient who developed immunoglobulin G (IgG)-mediated autoimmune hemolytic anemia (AIHA) after the Moderna COVID-19 messenger ribonucleic acid (mRNA) vaccine.