RAMOS, Isadora Cavalcanti. Achados clínicos laboratoriais como auxiliares no diagnóstico de histoplasmose disseminada em pacientes febris com AIDS de hospital de referência do Ceará. 2008. 104 f. Dissertação (Mestrado em Saúde Pública)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-11-03T16:36:36Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_icramos.pdf: 529136 bytes, checksum: 3474fb48fc3a58f142a2333967ff1ad2 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-11-03T17:12:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_icramos.pdf: 529136 bytes, checksum: 3474fb48fc3a58f142a2333967ff1ad2 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-03T17:12:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_icramos.pdf: 529136 bytes, checksum: 3474fb48fc3a58f142a2333967ff1ad2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Disseminated histoplasmosis (DH) is a severe disease that delay in diagnosis and specific treatment is associated with a high mortality. Since the AIDS epidemic, cases of DH are frequently diagnosed in patients with HIV from Fortaleza, a city in Northeastern Brazil. A cross sectional study was conducted on AIDS patients with symptoms suggestive of HD at hospital admission to correlate clinics and laboratory findings with the definitive diagnostic of this mycose, in a reference hospital from January 2006 to January 2007. There were identified 48 DH from 136 subjects. Patients with DH had more temperature higher than 38,5°C, splenomegaly, hepatomegaly, multiple papular skin lesions and sibilant respiratory sound (p<0.05). The more frequent manifestations in other diseases were pleuritic pain and arthralgia (p<0.05). High levels of lactate dhydrogenase (LDH), aspartate aminotransferase (AST) and amylase as well as lower levels of hemoglobin (≤10 g/dl) and CD4 (≤ 75 cel/mm3) were more frequent in DH (p<0.05). Multivariate analysis showed that temperature higher than 38,5°C (adjusted OR, 5.9; p=0.007; 95% CI= 1,62-21,77), LDH level ≥ 5 times normal (adjusted OR, 4.3; p=0.007; 95% CI= 1,49-12,55), CD4 ≤ 75 cel/mm3 (adjusted OR, 4.9; p=0.004; 95% CI= 1,64-14,88), hepatomegaly (adjusted OR, 3.4, p=0.01; 95% CI= 1,33-8,55) and multiple papular skin lesions (adjusted OR, 5.8; p=0.01; 95% CI= 1,50-22,68) were independently associated like the diagnosis of HD. Pleuritic pain was associated negatively with HD diagnosis (adjusted OR 0.2, p=0.02; 95% CI= 0,06-0,78). Suspected DH patients without hepatomegaly and temperature < 38,5°C have negative predictive value for DH of 100%. Patients without elevated LDH have negative predictive value for HD of 74,3%. We can eliminate most DH in patients without hepatomegaly, temperature < 38,5°C and normal LDH. This study helped diagnosis of HD among suspected patients. / A histoplasmose disseminada (HD) é uma patologia grave cujo retardo na detecção e no início do tratamento associam-se a elevada mortalidade. Desde o advento da - aids, passou a ser freqüente a observação de casos dessa micose em pacientes atendidos em serviço de assistência a HIV de Fortaleza, Ceará. Esse estudo transversal foi conduzido em pacientes com aids com quadro clínico sugestivo de HD à admissão hospitalar e teve como objetivo identificar achados clínico-laboratoriais associados a essa micose em hospital de referência de Fortaleza, Ceará, de janeiro de 2006 a janeiro de 2007. Foram detectados 48 casos de HD, do total de 136 doentes. Indivíduos com HD apresentaram mais temperatura acima de 38,5°C, esplenomegalia, hepatomegalia, lesões de peles papulares múltiplas e sibilos à ausculta pulmonar (p<0,05). Foram manifestações mais freqüentes em outras doenças dor pleurítica e artralgia (p<0,05). Níveis elevados de desidrogenase lática (LDH), aspartato aminotrasferase (AST) e amilase, assim como baixos níveis de hemoglobina (≤10 g/dl) e CD4 (≤ 75 cel/mm3) foram mais freqüentes em HD (p<0,05). Análise multivariada demonstrou que temperatura acima de 38,5°C (OR ajustada= 5,9; p=0,007; IC 95%= 1,65-21,77), nível de LDH ≥ 5 vezes o normal (OR ajustada= 4,3; p=0,007; IC 95%= 1,49-12,55), CD4 ≤ 75 cel/mm3 (OR ajustada= 4,9; p=0,004; IC 95%= 1,64-14,88), hepatomegalia (OR ajustada= 3,4; p=0,01; IC 95%= 1,33-8,55) e lesões de pele papulares múltiplas (OR ajustada= 5,8; p=0,016; IC 95%= 1,50-22,68) foram fatores independentes associados com diagnóstico de HD. Dor pleurítica mostrou associação negativa com o diagnóstico de HD (OR ajustada= 0,2; p=0,02; IC 95%= 0,06-0,78). Pacientes sem hepatomegalia e temperatura abaixo de 38,5°C tiveram valor preditivo negativo para HD de 100%. Pacientes sem elevação de LDH tiveram valor preditivo negativo para HD de 74,3%. O diagnóstico de HD pode praticamente ser afastado se o paciente não apresentar hepatomegalia e altas temperaturas, assim como níveis de LDH normais.

MALAQUIAS, Ângela Donato Maia. Efeito inibitório in vitro de miltefosina frente à cepas de histoplasma capsulatum var. capsulatum e sporothrix spp. 2013. 88 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-12-08T14:21:57Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_âdmmalaquias.pdf: 1142026 bytes, checksum: ae8a52759fb515a2f09f79d7d4c3f6e0 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-12-08T14:22:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_âdmmalaquias.pdf: 1142026 bytes, checksum: ae8a52759fb515a2f09f79d7d4c3f6e0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-08T14:22:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_âdmmalaquias.pdf: 1142026 bytes, checksum: ae8a52759fb515a2f09f79d7d4c3f6e0 (MD5) Previous issue date: 2013 / istoplasma capsulatum var. capsulatum and Sporothrix spp. are dimorphic fungi, pathogenic, causing histoplasmosis and sporotrichosis, respectively, being able to affect humans and other animals. Although the commonly used antifungal therapy is effective for the treatment of such fungal infections, some drawbacks may be mentioned, as the need for treatment for prolonged periods, as well as by the high toxicity of amphotericin B. Moreover, refractory cases and recurrences have been described. This scenario has driven the search for new agents that have antifungal activity. Some studies have shown that certain drugs already used clinically in the treatment of non-fungal etiology diseases may have significant antifungal potential. The miltefosine, originally developed as anticancer agent and currently used in the treatment of leishmaniasis, has demonstrated a significant antifungal activity against various fungal pathogens. Based on the above, this study aimed to evaluate the antifungal activity in vitro of miltefosine against the dimorphic fungi H. capsulatum var. capsulatum and S schenckii complex species including S. brasiliensis, S. schenckii, S. globosa and S. mexican, by broth microdilution technique standard by CLSI. The results showed that miltefosine inhibitory effect in vitro against H. capsulatum var. capsulatum and Sporothrix spp. being able to inhibit the growth of all strains analyzed. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) values obtained ranged from 0.25 to 2 mg.L-1 for H. capsulatum var. capsulatum the filamentous phase and from 0.125 to 1 ug.mL-1 in the yeast phase. For Sporothrix spp. filamentous phase in the MIC range was from 0.25 to 2 mg.L-1. The Minimum Fungicidal Concentration (MFC) values were ≤ 4 mg L-1 for both species analyzed. Thus, the present study demonstrated for the first time the relevant antifungal activity of miltefosine against H. capsulatum var. capsulatum and Sporothrix spp. It is noteworthy that more studies are necessary to evaluate the applicability of miltefosine in vivo and validate its use as an alternative to support the treatment of patients with histoplasmosis and sporotrichosis. / Histoplasma capsulatum var. capsulatum e Sporothrix spp. são fungos dimórficos, patogênicos, causadores da histoplasmose e da esporotricose, respectivamente, sendo capazes de acometer o homem e outros animais. Embora a terapia antifúngica comumente utilizada seja eficiente para o tratamento dessas micoses, algumas desvantagens podem ser apontadas, como a necessidade de tratamento por tempo prolongado, bem como, a elevada toxicidade apresentada pela anfotericina B. Ademais, casos de refratariedade e recidivas já foram descritos. Esse cenário tem impulsionado a busca por novos agentes que apresentem atividade antifúngica. Alguns estudos tem demonstrado que determinadas drogas já empregadas clinicamente no tratamento de doenças de etiologia não-fúngica podem apresentar potencial antifúngica relevante. A miltefosina, originalmente desenvolvida como agente anticâncer e atualmente utilizada no tratamento da Leishmaniose, tem demonstrado uma importante atividade antifúngica contra diferentes patógenos fúngicos. Baseado no exposto, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a atividade antifúngica in vitro da miltefosina ante aos fungos dimorficos H. capsulatum var. capsulatum e as espécies do complexo S. schenckii, incluindo S. brasiliensis, S. schenckii, S. globosa e S. mexicana, por meio da técnica de microdiluição em caldo padronizada pelo CLSI. Os resultados obtidos mostraram que a miltefosina possui efeito inibitório in vitro frente H. capsulatum var. capsulatum e Sporothrix spp. sendo capaz de inibir o crescimento de todas as cepas analisadas. Os valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) obtidos variaram de 0,25 a 2 μg mL-1 para H. capsulatum var. capsulatum na fase filamentosa e de 0,125 a 1 μg mL-1 na fase leveduriforme. Para Sporothrix spp. na fase filamentosa o intervalo de CIM foi de 0,25 a 2 μg mL-1. Os valores de Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram ≤ 4 μg mL-1 para ambas as espécies analisadas. Assim, o presente estudo demonstrou pela primeira vez a relevante atividade antifúngica da miltefosina ante H. capsulatum var. capsulatum e Sporothrix spp. Vale ressaltar, que mais estudos ainda são necessários para avaliar a aplicabilidade da miltefosina in vivo e validar a sua utilização como uma alternativa para subsidiar o tratamento de pacientes com histoplasmose e esporotricose.

PEREIRA, Juliana Fernandes. Efeito in vitro do saquinavir isolado e em combinação com o itraconazol frente a cepas de histoplasma capsulatum var. capsulatum. 2012. 96 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-23T13:14:03Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_jfpereira.pdf: 994358 bytes, checksum: 841297998e1d9cd11701f0d79cbb1e7c (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-03-23T13:15:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_jfpereira.pdf: 994358 bytes, checksum: 841297998e1d9cd11701f0d79cbb1e7c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-23T13:15:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_jfpereira.pdf: 994358 bytes, checksum: 841297998e1d9cd11701f0d79cbb1e7c (MD5) Previous issue date: 2012 / Histoplasmosis is a systemic infectious disease caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum, which has three varieties: H. capsulatum var. capsulatum, H. capsulatum var. duboisii and H. capsulatum var. farciminosum. This fungus can occur in different clinical modalities and mimic other diseases, being primarily associated with frames of immunosuppression. Despite the existence of effective therapies for the treatment of this disease, there is a need to search for new therapeutic approaches for this mycosis. Studies have shown that after the introduction of highly active antiretroviral therapy, the mortality and morbidity due to a wide variety of opportunistic infections, including mycoses, have decreased among HIV-infected patients, which may show the impact of antiretroviral therapy in these opportunistic infections. Some studies have also shown that antiretroviral drugs in the class of protease inhibitors may affect the virulence of certain fungi. Thus, this study aimed to evaluate the in vitro inhibitory effect of protease inhibitor saquinavir (SQV), alone and in combination with antifungal agents: amphotericin B (AMB), fluconazole (FLU), itraconazole (ITC), voriconazole (VRC) and caspofungin (CAS) against the H. capsulatum. It was used 30 strains of H. capsulatum in the filamentous phase and 10 strains of H. capsulatum in the yeast phase to the test of the drugs isolated. To test the combination of SAQ with ITC, 30 strains in the filamentous phase and 20 strains in the yeast phase were used. The study was conducted by broth microdilution assay, described in document M27-A2, standardized by the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). The interaction of drugs was analyzed by calculating the Fractional Inhibitory Concentration Index (FICI), defined as the sum of relations between the minimum inhibitory concentration (CIM) of each drug in combination and CIM of the same drug alone, whereas values less than or equal to 0.5 suggestive synergism between the drugs. Regarding the results, SQV inhibited the growth of all strains of H. capsulatum, with CIMs ranging from 0.122 to 0.977 μg / mL for both phases. In relation to combination of SQV with antifungal agents tested, only the combination of SQV with the ITR showed synergism, with values of FICI less than 0.5, where there was a significant reduction of the CIMs of both drugs. The results suggest that SQV can act as an adjuvant therapy in vitro, increasing the inhibitory effect on fungal growth, being able to lower the CIM values of antifungal drugs. Given the above, additional studies to identify the mechanism of action of SQV against H. capsulatum are needed, as well as its interaction with the ITR antifungal. / A histoplasmose é uma doença infecciosa sistêmica, causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum o qual possui três variedades: H. capsulatum var. capsulatum, H. capsulatum var. duboisii e H. capsulatum var. farciminosum,, e pode se apresentar de diversas modalidades clínicas e mimetizar outras doenças, estando principalmente associada a quadros de imunossupressão. Apesar da existência de terapias eficazes para o tratamento da desta doença, existe a necessidade de uma busca por novas opções terapêuticas para essa micose. Estudos comprovaram que após a instituição da terapia antirretroviral altamente ativa a mortalidade e a morbidade em decorrência de uma ampla variedade de infecções oportunistas, inclusive fúngicas, têm diminuído entre os pacientes infectados pelo HIV. Alguns estudos também têm demonstrado que fármacos antirretrovirais da classe dos inibidores de proteases podem afetar a virulência de certos fungos. Assim, o presente estudo visou avaliar o efeito inibitório in vitro do inibidor de protease saquinavir (SQV) isolado e em combinação com os antifúngicos anfotericina B (AMB), fluconazol (FLU), itraconazol (ITC), voriconazol (VRC) e caspofungina (CAS) frente ao H. capsulatum. Foram utilizadas 30 cepas de H. capsulatum na fase filamentosa e 10 cepas de H. capsulatum na fase leveduriforme para o teste das drogas isoladas e 20 cepas de H. capsulatum na fase filamentosa e 10 na fase leveduriforme para o teste da combinação do SQV com o ITR. O estudo foi realizado por meio de ensaio de microdiluição em caldo, descrito no documento M27-A2, padronizado pelo Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). A interação das drogas foi analisada através do cálculo do Índice da Concentração Inibitória Fracionária (FICI), definido como a soma das relações entre a concentração inibitória mínima (CIM) de cada droga em combinação e a CIM da mesma droga isolada, considerando os valores menores ou iguais a 0,5 sugestivos de sinergismo entre as drogas. Com relação aos resultados, o SQV inibiu o crescimento de todas as cepas de H. capsulatum, com CIM variando de 0,122 a 0,977μg/mL para ambas as fases. E, em relação a combinação do SQV com os antifúngicos testados, somente a combinação do SQV com o ITR apresentou sinergismo, com valores de FICI menores que 0,5, onde observou-se uma redução significativa da CIM de ambas as drogas. Os resultados obtidos sugerem que o SQV pode agir como adjuvante terapêutico in vitro, incrementando o efeito inibitório sobre o crescimento fúngico, sendo capaz de diminuir os valores de CIM de drogas antifúngicas. Diante do exposto, estudos adicionais para identificar o mecanismo de ação do SQV frente ao H. capsulatum são necessários, bem como sua interação com o ITR.

LIMA, Rita Amanda Chaves de. Estudos dos fungos dimórficos Coccidioides posadasii e Histoplasma capsulatum var. capsulatum : caracterização laboratorial com ênfase no perfil de sensibilidade ao sesquiterpeno farnesol, in vitro. 2013. 115 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T12:57:33Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_raclima.pdf: 2195497 bytes, checksum: 24056eb6ed524c6317a8f30e993f565e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-10-26T13:29:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_raclima.pdf: 2195497 bytes, checksum: 24056eb6ed524c6317a8f30e993f565e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-26T13:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_raclima.pdf: 2195497 bytes, checksum: 24056eb6ed524c6317a8f30e993f565e (MD5) Previous issue date: 2013 / Dimorphic fungi Coccidioides spp. and Histoplasma capsulatum var. capsulatum are the causative agents of coccidioidomycosis and histoplasmosis, respectively, being able to affect humans and other animals. The population genetics of H. capsulatum var. capsulatum ha ve been characterized worldwide. However, there are few studies of g enetic variability for Coccidioides spp., especially in isolates from Brazil. In general, antifungal therapy is effective against these mycoses, although in chronic or disseminated cases , the treatment is often prolonged and difficult to tolerate. Moreover , recurrence and refractory cases have been reported. Recently, it was demonstrated that H. capsulatum is able t o form biofilm. Little is known about the role of this mechanism in the pathogenesis of histoplasmosis and no report on the antifungal susceptib ility of H. capsulatum in biofilm was described to date. In search for new compounds with antifungal activity, the sesquiterpene farnesol has gained prominence for their inhibitory effect on the growth of bacteria and fungi. Considering the above, this stu dy aimed to perform molecular characterization of Brazilian isolates of C. posadasii , as well as, to determine the in vitro effect of farnesol against dimorphic fungi C. posadasii and H . capsulatum var . capsulatum , assessing its effect on fungal growth, sensitivity to antifungal agents, cell permeability, production of ergosterol and in biofilm growth. Thus, strains of C. posadasii were evaluat ed using the techniques of RAPD, M13 - fingerprinting . M acrodilution method was used to determine the min imum inhibitory concentration ( MIC) of farnesol alone and in combination with antifungals . C. posadasii was also subjected to quantification of ergosterol after exposure to sub - inhibitory concentrations of farnesol. In addition , farnesol activity against C. posadasii was also evaluated in the presence of osmotic stress induced by the addition of NaCl to the culture medium during the susceptibility test. Finally, H. capsulatum strains were evaluated in filamentous and yeast phase by microdilution method with farnesol alone and in combination with antifungals. The antifungal susceptibility of these drugs was also evaluated against H. capsulatum in a biofilm. The results of RAPD and M13 - fingerprinting showed similar electrophoretic profiles, showing few polymorphism s among the isolates . F arnesol exhibited low MIC values , ranging from 0.0078 to 0.0616 μ M for C. posadasii and 0.0078 to 0.0312 μM for H. capsulatum . Combinati ons of farnesol with antifungal showed synergistic effects (FIC I ≤ 0.5) in both species Quantification of ergosterol showed that exposure to sub - inhibitory concentrations of farnesol decreased the amount of ergosterol extracted from fungal cells and MIC's lower been found to farnesol when the strains were subjected to osmotic stress, indicating that this compound acts on the membrane fungal . Combinations of farnesol with itraconazole and amphotericin B showed the highest reduction percentages of fungal growth in biofilm . In conclusion, farnesol drug showed promising r esults as antifungal agent against C. posadasii and H. capsulatum , presenting adjuvant action and increasing sensitivity to antifungal agents in vitro . Furthermore, this study contributes to the characterization of the sensitivity profile of the biofilm of H. capsulatum in vitro as well as for genetic characterization of isolates of C. posadasii from Brazil / Os fungos dimórficos Coccidioides spp. e Histoplasma capsulatum var. capsulatum, são os agentes causadores da coccidioidomicose e da histoplasmose, respectivamente, sendo capazes de acometer o homem e outros animais. A genética das populações H. capsulatum var. capsulatum têm sido caracterizadas mundialmente. Contudo, para Coccidioides spp. ainda há escassez de estudos de variabilidade genética, especialmente em isolados do Brasil. De modo geral, a terapia antifúngica contra essas micoses é efetiva, embora em quadros crônicos ou disseminados, o tratamento seja muitas vezes, prolongado e difícil de tolerar. Ademais, casos refratários e recidivos já foram descritos. Recentemente, foi demonstrada a capacidade de H. capsulatum de formar biofilme. Pouco se sabe sobre qual o papel desse mecanismo na patogênese da histoplasmose e nenhum relato sobre a sensibilidade à antifúngicos de H. capsulatum em biofilme, foi descrito até o momento. Na busca por novos compostos com atividade antifúngica, o sesquiterpeno farnesol tem se destacado por seu efeito inibitório sobre o crescimento de bactérias e fungos. Diante do exposto, este trabalho teve por objetivo realizar a caracterização molecular de isolados brasileiros de C. posadasii, bem como, determinar o efeito in vitro do farnesol ante aos fungos dimórficos C. posadasii e H. capsulatum var. capsulatum, avaliando sua atuação sobre o crescimento fúngico, sensibilidade aos antifúngicos, permeabilidade celular, produção de ergosterol e sobre o crescimento em biofilme. Para tanto, cepas de C. posadasii foram avaliadas por meio das técnicas de RAPD e M13-fingerprinting. O método de macrodiluição foi utilizado para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de farnesol isolado em combinações com antifúngicos. C. posadasii também foi submetido quantificação do ergosterol após a exposição concentrações sub-inibitórias de farnesol. Ademais, a atividade do farnesol ante C. posadasii também foi avaliada na presença de estresse osmótico, induzido por adição de NaCl ao meio de cultura, durante os ensaios de sensibilidade. Por fim, cepas de H. capsulatum foram avaliadas na fase filamentosa e na fase leveduriforme, pelo método de microdiluição com farnesol isolado e em combinação com antifúngicos. A sensibilidade antifúngica destas drogas também foi avaliada ante H. capsulatum sob a forma de biofilme. Os resultados de RAPD e M13-fingerprinting mostraram perfis eletroforéticos semelhantes, mostrando poucos polimorfismos entres os isolados. O farnesol exibiu valores de CIMs baixos, variando de 0,0078-0,0616 µM para C. posadasii e de 0,0078-0,0312 para H. capsulatum. As combinações de farnesol com antifúngicos mostraram efeitos sinérgicos (FICI ≤ 0,5) em ambas as espécies. A quantificação de ergosterol, mostrou que a exposição a concentrações sub-inibitórias de farnesol diminuiu a quantidade de ergosterol extraído das células fúngicas e CIM’s mais baixos foram encontrados para o farnesol quando as cepas foram submetidas a estresse osmótico, indicando que esse composto atua na membrana fúngica. As combinações de farnesol com itraconazol e com anfotericina B apresentaram as maiores porcentagens de redução do crescimento fúngico em biofilme. Em conclusão, o farnesol apresentou resultados promissores como agente antifúngico ante C. posadasii e H. capsulatum, apresentando também ação adjuvante aumentando a sensibilidade aos antifúngicos in vitro. Ademais, este estudo contribuiu para caracterização do perfil de sensibilidade do biofilme de H. capsulatum in vitro, bem como para caracterização genética dos isolados de C. posadasii do Brasil.

A histoplasmose, uma micose sistêmica, é um importante problema de saúde pública, de distribuição mundial e uma infecção muito comum em regiões endêmicas. A infecção é causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum varo capsulatum, que cresce como fungo filamentoso em solo, guano de morcegos e aves, ou como uma levedura parasitária intracelular. A ocorrência de morcegos é relatada em quase todo o mundo e estes contribuem para manutenção deste fungo na natureza. Na cidade de São Paulo, Brasil, morcegos ocorrem em todas as regiões e em várias situações: usando sótãos e forro de telhado como abrigos ou adentrando residências, entre outras. Entre agosto de 2003 a dezembro de 2008, foram encaminhados ao Setor de Micologia do Centro de Controle de Zoonoses da cidade de São Paulo 2427 morcegos. Amostras de fígado e baço desses morcegos foram removidos em condições estéreis e inoculados, ambos, em Agar infusão de cérebro e coração (BHI) e em Agar Sabouraud Dextrose, incubados a 25°C e 37°C. As colônias suspeitas foram reincubadas em Agar Mycosel e identificadas pela morfologia e pela reversão em ML-gema (Mueller Hinton Broth com L-cisteína e gema de ovo) a 37°C. O objetivo deste estudo foi estabelecer a prevalência do H. capsulatum em morcegos presentes na cidade de São Paulo e em outras cidades do Estado. Os 87 isolados de H. capsulatum (3,58%) foram todos de morcegos da família Molossidae, de hábito alimentar insetívoro, pertencentes a quatro gêneros e cinco espécies sendo 74 Molossus molossus, 10 Nyctinomops macrotis, 1 Tadarida brasiliensis, 1 Molossus rufus e 1 Eumops glaucinus. Para 3 espécies (Molossus rufus, Nyctinomops macrotis e Eumops glaucinus) trata-se do primeiro relato. Dos 2427 morcegos, 1728 morcegos eram procedentes da cidade de São Paulo (71,2%) e 699 morcegos eram originários de cidades do Estado de São Paulo (28,8%). Cinco cidades apresentaram espécimes positivos: 70 procedentes da cidade de São Paulo (80,5%) e 17 de outros municípios do Estado (19,5%): 4 de Jundiaí, 10 de Guarulhos, 2 de Osasco e 1 de Mogi Mirim. Para a análise das 61 amostras de fezes de morcegos recebidas, foram utilizadas as técnicas de inoculação em camundongo e semeadura em placa de Petri contendo meio de Agar Mycosel incubadas a 37°C. Uma amostra positiva para H. capsulatum foi isolada do Agar Mycosel. Os resultados mostram que o H.capsulatum esta presente na população de morcegos presentes em áreas urbanas do Estado de São Paulo. Este fato é importante, porque morcegos contaminados podem ser fonte de disseminação e risco para pessoas ou animais adquirirem a infecção. O conhecimento da história natural da histoplasmose em áreas urbanas pode ter um importante papel no estabelecimento de estratégias de prevenção. / Systemic histoplamosis is an important health problem worldwide and a very common infection in endemic areas. Its causative agent, the thermodimorphic fungus Histoplasma capsulatum varo capsulatum, grows in bat guano or bird droppings rich soils as filamentous fungi, or as parasitic intracellular yeast cells in hosts. Bats can be found in almost ali the world and contribute to the maintenance of this fungus in nature. In many cities in Brazil, bats are found in urban areas and in many situations: house basements and/or roofs, fallen in the soil or even inside the houses, among others. Between August 2003 and December 2008, 2,427 bats, 1,728 from São Paulo City (71.2%) and 699 from other cities from São Paulo State, were sent to the Micology Section of Centro de Controle de Zoonoses of São Paulo City. The purpose of this work was to establish the prevalence of H.capsulatum in bats of São Paulo City and other cities from São Paulo State. Samples of spleen and liver from the animais were removed in sterile conditions and inoculated in Brain Heart Infusion Agar and in Sabouraud Dextrose Agar, incubated at 25°C and 37°C. The suspicious colonies were inoculated in Mycosel Agar and were identified by the morphology, as well as by the temperature¬reversion after incubation in ML-egg yolk (Mueller Hinton Broth, with L-cysteine and hen egg yolk) at 37°C. Ali 87 positive samples (3.58%) were isolated from insectivorous bats from Molossidae family, belonging to four genus and five species: 74 samples were from the specie Molossus molossus, 10 from Nyctinomops macrotis, 1 from Molossus rufus, 1 from Tadarida brasiliensis, and 1 from Eumops glaucinus. For three of these species (Nyctinomops macrotis, Molossus rufus and Eumops glaucinus) this is the first report of H. capsulatum isolation. Seventy positive bats were from São Paulo (80.5%), ten from Guarulhos City, four from Jundiaí City, two from Os asco City and one from Mogi Mirim City. Sixty-one samples of feces were analised by mouse inoculation test and inoculation in Petri dishes containing Mycosel Agar. Our results showed that the H. capsulatum is present in bat populations Iiving in urban areas. This is an important fact since H. capsulatum contaminated bats can be a source of contamination for people or animais in contact with them. The knowledge of the natural history of histoplasmosis in urban areas may be important for the establishment of prevention strategies.

A histoplasmose, uma micose sistêmica, é um importante problema de saúde pública, de distribuição mundial e uma infecção muito comum em regiões endêmicas. A infecção é causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum varo capsulatum, que cresce como fungo filamentoso em solo, guano de morcegos e aves, ou como uma levedura parasitária intracelular. A ocorrência de morcegos é relatada em quase todo o mundo e estes contribuem para manutenção deste fungo na natureza. Na cidade de São Paulo, Brasil, morcegos ocorrem em todas as regiões e em várias situações: usando sótãos e forro de telhado como abrigos ou adentrando residências, entre outras. Entre agosto de 2003 a dezembro de 2008, foram encaminhados ao Setor de Micologia do Centro de Controle de Zoonoses da cidade de São Paulo 2427 morcegos. Amostras de fígado e baço desses morcegos foram removidos em condições estéreis e inoculados, ambos, em Agar infusão de cérebro e coração (BHI) e em Agar Sabouraud Dextrose, incubados a 25°C e 37°C. As colônias suspeitas foram reincubadas em Agar Mycosel e identificadas pela morfologia e pela reversão em ML-gema (Mueller Hinton Broth com L-cisteína e gema de ovo) a 37°C. O objetivo deste estudo foi estabelecer a prevalência do H. capsulatum em morcegos presentes na cidade de São Paulo e em outras cidades do Estado. Os 87 isolados de H. capsulatum (3,58%) foram todos de morcegos da família Molossidae, de hábito alimentar insetívoro, pertencentes a quatro gêneros e cinco espécies sendo 74 Molossus molossus, 10 Nyctinomops macrotis, 1 Tadarida brasiliensis, 1 Molossus rufus e 1 Eumops glaucinus. Para 3 espécies (Molossus rufus, Nyctinomops macrotis e Eumops glaucinus) trata-se do primeiro relato. Dos 2427 morcegos, 1728 morcegos eram procedentes da cidade de São Paulo (71,2%) e 699 morcegos eram originários de cidades do Estado de São Paulo (28,8%). Cinco cidades apresentaram espécimes positivos: 70 procedentes da cidade de São Paulo (80,5%) e 17 de outros municípios do Estado (19,5%): 4 de Jundiaí, 10 de Guarulhos, 2 de Osasco e 1 de Mogi Mirim. Para a análise das 61 amostras de fezes de morcegos recebidas, foram utilizadas as técnicas de inoculação em camundongo e semeadura em placa de Petri contendo meio de Agar Mycosel incubadas a 37°C. Uma amostra positiva para H. capsulatum foi isolada do Agar Mycosel. Os resultados mostram que o H.capsulatum esta presente na população de morcegos presentes em áreas urbanas do Estado de São Paulo. Este fato é importante, porque morcegos contaminados podem ser fonte de disseminação e risco para pessoas ou animais adquirirem a infecção. O conhecimento da história natural da histoplasmose em áreas urbanas pode ter um importante papel no estabelecimento de estratégias de prevenção. / Systemic histoplamosis is an important health problem worldwide and a very common infection in endemic areas. Its causative agent, the thermodimorphic fungus Histoplasma capsulatum varo capsulatum, grows in bat guano or bird droppings rich soils as filamentous fungi, or as parasitic intracellular yeast cells in hosts. Bats can be found in almost ali the world and contribute to the maintenance of this fungus in nature. In many cities in Brazil, bats are found in urban areas and in many situations: house basements and/or roofs, fallen in the soil or even inside the houses, among others. Between August 2003 and December 2008, 2,427 bats, 1,728 from São Paulo City (71.2%) and 699 from other cities from São Paulo State, were sent to the Micology Section of Centro de Controle de Zoonoses of São Paulo City. The purpose of this work was to establish the prevalence of H.capsulatum in bats of São Paulo City and other cities from São Paulo State. Samples of spleen and liver from the animais were removed in sterile conditions and inoculated in Brain Heart Infusion Agar and in Sabouraud Dextrose Agar, incubated at 25°C and 37°C. The suspicious colonies were inoculated in Mycosel Agar and were identified by the morphology, as well as by the temperature¬reversion after incubation in ML-egg yolk (Mueller Hinton Broth, with L-cysteine and hen egg yolk) at 37°C. Ali 87 positive samples (3.58%) were isolated from insectivorous bats from Molossidae family, belonging to four genus and five species: 74 samples were from the specie Molossus molossus, 10 from Nyctinomops macrotis, 1 from Molossus rufus, 1 from Tadarida brasiliensis, and 1 from Eumops glaucinus. For three of these species (Nyctinomops macrotis, Molossus rufus and Eumops glaucinus) this is the first report of H. capsulatum isolation. Seventy positive bats were from São Paulo (80.5%), ten from Guarulhos City, four from Jundiaí City, two from Os asco City and one from Mogi Mirim City. Sixty-one samples of feces were analised by mouse inoculation test and inoculation in Petri dishes containing Mycosel Agar. Our results showed that the H. capsulatum is present in bat populations Iiving in urban areas. This is an important fact since H. capsulatum contaminated bats can be a source of contamination for people or animais in contact with them. The knowledge of the natural history of histoplasmosis in urban areas may be important for the establishment of prevention strategies.

RIBEIRO, Joyce Fonteles. Histoplasma capsulatum var. capsulatum : taxa de conversão in vitro, detecção do gene ryp1 e estudo da diversidade genética de cepas brasileiras. 2012. 115 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-17T15:24:56Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_jfribeiro.pdf: 1426912 bytes, checksum: e111b9c14b7470ec8bd7984189fd837a (MD5) / Rejected by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com), reason: on 2013-05-17T15:34:11Z (GMT) / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-17T15:44:11Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_jfribeiro.pdf: 1426912 bytes, checksum: e111b9c14b7470ec8bd7984189fd837a (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-20T12:41:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_jfribeiro.pdf: 1426912 bytes, checksum: e111b9c14b7470ec8bd7984189fd837a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-20T12:41:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_jfribeiro.pdf: 1426912 bytes, checksum: e111b9c14b7470ec8bd7984189fd837a (MD5) Previous issue date: 2012 / Histoplasmosis, caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum, is the most prevalent systemic mycosis in the Americas and it is frequently observed in AIDS patients. Since the beginning of the HIV epidemic, there has been a significant increase in the number of histoplasmosis cases in the Ceará state, Northeast Brazil. The lack of epidemiological data of the genotypes circulating in the Northeast region shows the importance of more detailed studies on the molecular epidemiology of H. capsulatum in this region. Different molecular techniques have been used to better characterize the genetic profile of H. capsulatum strains. It is noteworthy that, most studies of H. capsulatum are performed in the yeast phase due to its parasitic characteristics. Thus, the use of laboratory techniques for in vitro conversion and maintenance is extremely important. Given the above, this study aimed to determine the in vitro conversion rate of H. capsulatum isolates in six different culture media, as well as to detect by PCR the presence of ryp1 gene, an important transcriptional regulator of the conversion from filamentous to yeast phase. In addition, it aimed to establish the molecular profile of H. capsulatum strains, from human and veterinary source, from Ceará and Southeast region of Brazil through RAPD-PCR assay and to assess the genetic diversity of the ITS1-5.8S-ITS2 region of these isolates compared with isolates from other countries, through the sequencing of nuclear ribosomal DNA. In the study of in vitro conversion, all tested media allowed the conversion, however, the Sabouraud agar media supplemented with 10% sheep blood showed the highest conversion capacity in relation to the other tested media. The ryp1 gene was detected in 18 H. capsulatum strains (from human and animal source) and in three tested clinical specimens (whole blood), not being detected, however, in isolates of Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii and Coccidioides posadasii. The analysis of the genetic variability of the H. capsulatum isolates, by RAPD-PCR assay, allowed the detection of two clusters circulating in the state of Ceará. The first cluster included strains from Southeast and Northeast regions of Brazil, being observed, within this cluster, the separation of isolates into three distinct subgroups (subgroups 1a, 1b and 1c). The second cluster included only strains from Northeast region of Brazil. There were no differences in clinical and epidemiological characteristics of individuals whose isolates belonged to different groups, obtained by RAPD-PCR. The sequencing of the ITS1-5, 8S-ITS2 region allowed the detection of two major clades. The clade 1 comprised the majority of the isolates tested, including strains from the Northeast, and included isolates from different geographical locations. The clade 2 was composed exclusively of isolates from the state of Rio de Janeiro. Therefore, it can be concluded that the Sabouraud agar supplemented with 10% sheep blood showed higher conversion capacity of H. capsulatum strains compared to the other tested media, and may be considered the medium of choice for converting of H. capsulatum strains. Furthermore, the ryp1 gene can be used to identify and detect H. capsulatum from clinical specimens, may be used for diagnosis of histoplasmosis. Finally, the H. capsulatum isolates from the state of Ceará can be grouped into two main clusters, detected by RAPD-PCR. In addition, phylogenetic analysis of the ITS1-5.8S-ITS2 region revealed that strains from the Northeast presented genetic differences compared with strains from other Brazilian regions, being grouped in a different cluster of them. / A histoplasmose, causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum, é a mais prevalente das micoses sistêmicas nas Américas, sendo frequentemente observada em pacientes com AIDS. Desde o início da epidemia de HIV, na década de 80, existe um aumento significativo no número de casos de histoplasmose no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil. A escassez de dados epidemiológicos dos genótipos que circulam na região Nordeste ressalta a importância de estudos mais detalhados sobre a epidemiologia molecular de H. capsulatum nessa região. Diferentes técnicas moleculares têm sido utilizadas para melhor caracterizar o padrão genético de cepas de H. capsulatum circulantes no mundo. Vale ressaltar que, grande parte dos estudos de H. capsulatum é realizada na sua fase leveduriforme, quando expressa as suas características parasitárias. Assim, o uso de técnicas laboratoriais para a conversão in vitro para a fase leveduriforme e sua manutenção é extremamente importante. Diante do exposto, o presente estudo objetivou averiguar a taxa de conversão in vitro dos isolados de H. capsulatum em seis meios de cultura diferentes, bem como detectar, através da técnica de PCR, a presença do gene ryp1, um importante regulador transcricional da conversão da fase filamentosa para leveduriforme. Além disso, visou conhecer o perfil molecular de cepas de H. capsulatum, de origem humana e veterinária, oriundas do Estado do Ceará e da região Sudeste do Brasil, através da técnica de RAPD-PCR e avaliar a diversidade genética da região ITS1-5.8S-ITS2 desses isolados comparados com isolados de outros países, através do sequenciamento do DNA ribossômico nuclear. No estudo de conversão in vitro, todos os meios testados foram capazes de possibilitar a conversão de fases, contudo, o meio ágar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro mostrou a maior capacidade de conversão em relação aos outros meios testados. O gene ryp1 foi detectado em 18 cepas de H. capsulatum (de origem humana e animal) e em três espécimes clínicos positivos para H. capsulatum (sangue total) testados, não sendo detectado, contudo, em isolados de Candida albicans, Paracoccidioides brasiliensis, Sporothrix schenckii e Coccidioides posadasii. A análise da variabilidade genética dos isolados de H. capsulatum, pela técnica de RAPD-PCR, permitiu a detecção de dois clusters que circulam no Estado do Ceará. O cluster 1 incluiu cepas das regiões Sudeste e Nordeste do Brasil, sendo observado dentro desse cluster a separação dos isolados em três subgrupos distintos (subgrupos 1a,1b e 1c). O cluster 2, por sua vez, incluiu somente cepas da região Nordeste do Brasil. Não foram observadas diferenças nas características clínicas e epidemiológicas dos indivíduos cujas cepas pertenciam aos diferentes agrupamentos, obtidos pela técnica de RAPD-PCR. O sequenciamento da região ITS1-5.8S-ITS2 possibilitou a detecção de dois clados principais. O clado 1 foi constituído da maioria das cepas analisadas, inclusive as cepas da região Nordeste e incluiu isolados de localizações geográficas distintas. O clado 2, por sua vez, foi constituído exclusivamente de isolados oriundos do Estado do Rio de Janeiro. Portanto, pode-se concluir que o ágar Sabouraud suplementado com 10% de sangue de carneiro apresentou maior capacidade de conversão das cepas de H. capsulatum em relação aos outros meios testados, podendo ser considerado o meio de escolha para conversão de cepas de H. capsulatum. Ademais, o gene ryp1 pode ser utilizado para identificar isolados de H. capsulatum, bem como, detectar a presença do fungo em amostras clínicas, podendo ser utilizado para diagnóstico de histoplasmose. Por fim, os isolados de H. capsulatum oriundos do Estado do Ceará podem ser agrupados em dois clusters principais, detectados através da técnica de RAPD-PCR. Além disso, a análise filogenética da região ITS1-5.8S-ITS2 revelou que as cepas da região Nordeste apresentaram diferenças genéticas quando comparadas com as cepas de outras regiões brasileiras, ficando agrupadas em um cluster diferente das mesmas.

MARQUES, Francisca Jakelyne de Farias. Efeito inibitório de drogas antituberculose frente à Histoplasma capsulatum var. capsulatum e Cryptococcus spp. : síntese de análogos químicos, atividade antifúngica in vitro e mecanismo de ação. 2013. 116 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:29:35Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-04-08T13:48:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-08T13:48:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_fjfmarques.pdf: 1708517 bytes, checksum: 5f8bebad58291a654fe5aa6509b143fb (MD5) Previous issue date: 2013

Made available in DSpace on 2014-12-22T16:33:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 claudia_pizzini_ipec_dout_2013.pdf: 1825173 bytes, checksum: 02ac3def251a87a7d621295df91231c8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A histoplasmose é uma infecção que apresenta amplo espectro clínico, variando desde forma leves, a graves e disseminadas. O diagnóstico da histoplasmose baseia-se nos aspectos clínicos, radiológicos e epidemiológicos. A confirmação se dá pelo isolamento e identificação do Histoplasma capsulatum através de procedimentos microbiológicos. Diferentes metodologias já foram descritas no diagnóstico sorológico da histoplasmose, porém limitações relacionadas a reações cruzadas e limiar de detecção das técnicas empregadas podem dificultar o diagnóstico. O antígeno M obtido do extrato antigênico histoplasmina é considerado um antígeno imunodominante para produção de anticorpos, sendo reconhecido em cerca de 90% dos soros dos pacientes com histoplasmose, sendo assim nosso grupo vem trabalhando a vários anos em estudos para um melhor conhecimento desta molécula e aplicação no diagnóstico.Um Modelo molecular do antigeno M foi desenvolvido através de sua sequência, tendo então confirmada sua natureza biológica como catalase, sendo observado também que esta molécula apresentava regiões comuns bem como especificas quando comparadas a catalases de organismos eucariotas. No presente estudo procuramos determinar a presença de possíveis epitopos antigênicos na proteína M empregando ferramentas proteômicas, para posterior emprego em ensaios imunoenzimáticos. Para tal foi utilizada a combinação da técnica de coimunoprecipitação com espectometria de massas e posteriormente a técnica de Spot synthesis Com o emprego do anticorpo monoclonal (mAb 1A7) produzido contra a proteína M recombinante foi possível detectar uma sequência que foi comum as duas metodologias empregadas (PTKIIPEELVPFTP). Esta sequência encontra-se localizada na região onde em estudos anteriores por análise in silico foi apontada como a região mais antigênica desta molécula. Foi realizada a síntese desta sequência, e diferentes desenhos foram utilizados, extensão de resíduos de lisina e adição da molécula de biotina em ambas as extremidades, carboxi e amino terminal, bem como a síntese da sequência sem adição de outras moléculas. Diferentes desenhos de ensaios imunoenzimáticos foram realizados, um ELISA empregando microesferas carboxiladas, ELISA indireto empregando placas de microtitulação revestidas com estreptoavidina e um ELISA sandwich. A sequência não apresentou resultados satisfatórios nos diferentes ensaios. Observamos que apenas no ensaio onde utilizamos o peptídeo ligado a molécula de biotina 1-a e 1-b, foi possível obter um poder discriminatório entre o grupos de pacientes com histoplasmose e o grupos de indivíduos hígidos, o ponto de corte foi obtido pela media das DOs das amostras de indivíduos hígidos mais duas vezes o desvio padrão, onde este teste apresentou uma boa sensibilidade(100 - 95%), porém a especificidade encontrada não foi satisfatória (27 - 20%). Estes resultados não foram concordantes com a análise feita in silico da sequência sintetizada. O antígeno M recombinante foi testado em um ELISA de captura de antígeno, onde os resultados preliminares apresentaram-se promissores necessitando de novos testes para avaliarmos parâmetros como sensibilidade e especificidade / Histoplasmosis is a worldwide distribution infection with several clinical spectrum, from as ymptomatic to severe and disseminated disease . The diagnosis of histoplasmosis is based on clinical, radiological and epidemiological findings. The laboratory diagnosis of histoplasmosis is based on fungus isolation by culture, direct examination in tissue or other clinical specimens. However, such procedures have limitations and are time - consuming . For these reasons serological tests play an important role on presumptive diagnosis . Although different methodologies have been described for serological diagno sis of histoplasmosis , cross - reactions and low sensitivity could difficult the final result. The M antigen is obtain by the antigenic extract histoplasmin and is considered as an immunodominant antigen recognized by 90% of sera from patients with histoplas mosis, For a better understanding of the molecule biological nature and its application in diagnosis methodologies our group has been working for several years. The molecular analysis of the M antigen was based on the sequence protein and confirmed as a ca talase. It was also observed that this molecule showed specific and common polypeptide regions when compared to catalases from others eukaryotic organisms. In this study we evaluated the possible presence of antigenic epitopes in the M protein sequence tha t could represent potential candidate as diagnostic markers for histoplasmosis. For this reason we used the combining co - immunoprecipitations and mass spectrometry and spot synthesis technique. The application of a monoclonal antibody against to the M anti gen (mAb 1A7) produced by our group allowed the detection of a same sequence in both employed methodologies ( PTKIIPEELVPFTP) . This was synthesized with different conformations, addition lysine residues and biotin molecules in both amino and carboxy term inal regions. Different immunoassays were performed, carboxylated microspheres, ELISA indireta with microplate coated with streptoavidin and ELISA sandwich . The sequence did not show good specificity and sensibility in different tests. A good discriminator y power was possible when the peptide biotin molecule bind (P1 - a and P1 - b) was used in serum samples from groups of histoplasmosis patients and healthy controls. This test showed a high sensitivity (100 - 95%), however the specificity was not satisfactory ( 27 - 20%) respectevily. The ELISA ́s cut - off points were established as the mean of absorbances plus two standard deviation of the healthy controls. The immunoassay ́s results were discordant when compared on in silico analysis using as antigen the synthesize d sequence. In another approach, the M antigen was tested in an antigen - capture enzyme - linked immunosorbent assay (ELISAs) and promising results were observed, but further studies must be done in order to evaluate parameters such as sensitivity and specifi city

FECHINE, Maria Auxiliadora Bezerra. Histoplasmose em indivíduos HIV positivos no estado do Ceará : estudo clínico epidemiológico e teste de sensibilidade antimicrobiana de cepas de Histoplasma capsulatum var. Capsulatum. 2011. 145 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T16:39:36Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T16:40:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T16:40:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_mabfechine.pdf: 2306536 bytes, checksum: 9a4341ab0036a97ed174ec65665bcd65 (MD5) Previous issue date: 2011 / Histoplasmosis, caused by the fungus Histoplasma capsulatum, is the most prevalent of the systemic mycoses and a marker disease for acquired immune deficiency syndrome (AIDS). A descriptive analysis was carried out of 254 cases of patients suffering from histoplasmosis and AIDS between 2006 and 2010 in the state of Ceará, northeastern Brazil, noting the epidemiological, clinical, laboratory and therapeutic aspects. Additionally, the in vitro sensitivity profile of strains of H. capsulatum in the filamentous and yeast phases was tested by the microdilution method against the antifungals amphotericin B, fluconazole, itraconazole, voriconazole and caspofungin and the combined antimicrobial sulfametoxazol-trimetoprim, according to protocol M-27A2 from the CLSI. The results were compared with those of strains obtained from southeastern Brazil. In 39.37% of the cases, histoplasmosis was the first event indicating AIDS and in 80.4% of the patients the CD4 cell count was under 100 cells/ml. The levels of lactate dehydrogenase were high in all the patients evaluated, with impaired hepatic and renal function evolving to death being observed in 41.7% of the cases. The in vitro sensitivity profile demonstrated there was no antifungal resistance in the strains analyzed and all the strains were sensitive to sulfametoxazol-trimetoprim. The MFC levels of caspofungin, itraconazole, voriconazole and sulfametoxazol-trimetoprim were higher for the strains from the Northeast than those from the Southeast. In recent years there has been a significant increase in the number of histoplasmosis cases in HIV-positive individuals in the state of Ceará, but the results showed no resistance among the strains of H. capsulatum tested. These showed sensitivity of sulfametoxazol-trimetoprim, but there was a difference in sensitivity between the strains from the northeastern and southeastern regions of Brazil / A histoplasmose, causada pelo fungo Histoplasma capsulatum, é a mais prevalente das micoses sistêmicas e doença marcadora da síndrome de imunodeficiência adquirida (AIDS). Foi realizada análise descritiva de 254 casos de histoplasmose em pacientes com AIDS, no período de 2006 a 2010, no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil, descrevendo os aspectos epidemiológicos, clínicos, laboratoriais e terapêuticos. Adicionalmente, buscou-se determinar o perfil de sensibilidade in vitro de cepas de H.capsulatum. O teste de sensibilidade in vitro foi realizado, pelo método da microdiluição, segundo protocolo M-27A2 do CLSI, em cepas de H. capsulatum nas fases filamentosa e leveduriforme, frente os antifúngicos anfotericina B, fluconazol, itraconazol, voriconazol e caspofungina, e o antimicrobiano sulfametoxazol-trimetoprim, comparando-se cepas obtidas dos casos do período analisado e cepas clínicas oriundas de pacientes do Sudeste do Brasil. Em 39,37% dos casos, a histoplasmose foi o primeiro evento definidor de SIDA e em 80,4% dos pacientes a contagem de células CD4 era menor do que 100 cells/ml. Os níveis de lactato desidrogenase estavam elevados em todos os pacientes avaliados, observando-se comprometimento da função hepática e renal, com evolução para óbito em 41,7% dos casos. O perfil de sensibilidade in vitro demonstrou que não há fenômeno de resistência antifúngica entre as cepas avaliadas, e todas as cepas foram sensíveis ao sulfametoxazol-trimetoprim. A CFM das drogas caspofungina, itraconazol, voriconazol e sulfametoxazol-trimetoprim foi mais elevada para as cepas oriundas do Nordeste em relação às cepas do Sudeste do Brasil. Existe aumento significativo no número de casos de histoplasmose em indivíduos HIV positivos no Estado do Ceará, Nordeste do Brasil, em relação a estudos anteriores, mas não há fenômeno de resistência entre as cepas de H. capsulatum, e estas demonstram sensibilidade ao sulfametoxazol-trimetoprim, com diferença no perfil de sensibilidade entre as cepas do Nordeste e Sudeste do Brasil.