Neste trabalho duas espécies de grãos, de kefir e do tibet, popularmente conhecidas e utilizadas para fermentar o leite, foram estudados neste trabalho, no que se refere aos produtos formados durante a fermentação. O grão de kefir é uma associação simbiótica de microganismo pertencente a diversas espécies incluindo no geral bactérias ácidas láticas (Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc), leveduras (Saccharomyces cereviseae) e bactérias ácidas acéticas (Acetobacter). O grão de tibet é, também composto por uma associação simbiótica de leveduras e bactéria ácida lática. No entanto, grãos de kefir e tibet são muitos similares em quantidade microbiológica, procedimento de cultivo, muito similar em estrutura e produtos de fermentação, mas diferem em aspecto visual. A voltametria cíclica e cromatografia líquida de alta eficiência, em fase reversa (HPLC) com detecção no UV em 210nm operando no modo de eluição isocrático, foram aplicadas para determinar ácidos orgânicos em leite fermentados pelos grãos kefir e do Tibet e em amostra de iogurte comercial. Em ambos os métodos utilizados os resultados obtidos mostraram a presença de ácidos orgânicos em leite e no leite fermentado pelos grãos kefir e do Tibet e em amostra comercial de iogurte. Essas matrizes mostraram eletroatividade em ultramicroeletrodo de ouro. E nas análises por HPLC foi comprovado a presença de ácidos orgânicos e em grandes quantidades para cinco ácidos dos oito presentes nas amostras. Neste trabalho, foi efetuada a determinação de 8 ácidos orgânicos. Nas amostras citadas foram identificados os ácidos lático, oxálico, pirúvico, acético, úrico, cítrico, succínico e fórmico. Esta identificação foi feita por comparação entre os tempos de retenção dos compostos nas amostras de leite fermentado com os tempos de retenção dos padrões dos ácidos injetados individualmente para a técnica de HPLC. E quanto a aplicação da voltametria na análise de leite fermentado, o grão de Tibet demonstrou maior resposta analítica entre corrente e concentração, comparado ao grão de kefir e amostra comercial de iogurte. Fazendo uma análise comparativa das duas técnicas a HPLC tornou-se mais adequada devido a maior seletividade. / The products formed during the milk fermentation using the kefir and tibet grains (popularly known species) were studied in this work. The kefir grain is a symbiotic association of microorganisms that includes several species of lactic acid bacteria (Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc), yeasts (Saccharomyces cereviseae) and acetic acid bacteria (Acetobacter). The tibet grain is also composed by a symbiotic association of yeasts and lactic acid bacteria. In spite of, the kefir and tibet grains are very similar in microbiologic components, cultivation procedure, structure and fermentation products, they differ in visual aspect. For the determination of the organic acids contained in fermented milk by the kefir or tibet grains and in a sample of commercial yogurt, the cyclic voltammetry and high performance liquid chromatography (HPLC) in reverse phase techniques were applied, the later was operated in isocratic elution mode with detection in the UV (210nm) region. In both techniques used, the obtained results showed the presence of organic acids in milk and in the fermented milk by the grains kefir and tibet and in the sample of commercial yogurt. Those matrixes showed electroactivity on a gold ultramicroelectrode and their analyses using HPLC was also possible. Thus, the presence of organic acids in great amounts for five acids of the eight presents in the samples was confirmed. In this work, the detection of 8 organic acids was carried out. In the mentioned samples were identified the lactic, oxalic, pyruvic, acetic, uric, citric, succinic and formic acids. This identification was performed by comparison among the retention times of the compounds in the samples of fermented milk with the retention times of the patterns of the acids, injected individually for the HPLC technique. Nevertheless, in the voltammetry application for the analysis of the fermented milk, the tibet grain demonstrated larger analytical signals (current – concentration relationship), compared to the kefir grain and the commercial sample of yogurt. Making a comparative analysis of the two techniques, HPLC became more appropriate due its larger selectivity.

A deposição de aflatoxinas em peixes é residual e cumulativa, além de causar efeitos adversos no peso, tamanho, consumo de ração e sobrevivência, demarcando amplas diferenças quanto à sensibilidade e metabolismo entre as espécies. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a transferência de aflatoxinas da ração para matrinxã (Brycon cephalus) e a influência sobre parâmetros biométricos, bioquímicos e histopatológicos. As aflatoxinas foram incorporadas na ração pelo método de imersão em metanol, obtendo-se os seguintes tratamentos: A. Controle - ração sem toxina; B. Ração + 10 &micro;g Aflatoxina B1/kg; C. Ração + 20 &micro;g Aflatoxina B1/kg e D. Ração + 50 &micro;g Aflatoxina B1/kg. As aflatoxinas foram quantificadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) no fígado e músculo de matrinxã. Para avaliação do desempenho produtivo foram mensurados o peso, comprimento, taxa de sobrevivência e consumo diário de ração. Para avaliação bioquímica e histopatológica foram realizadas coletas de sangue por punção da veia caudal para determinação das atividades séricas de aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcalina (FA), proteínas totais (PT), albumina (ALB) e globulina (GLOB). Para observação histológica foram coletados fragmentos de fígado, que foram processados para posterior inclusão em parafina e coloração de hematoxilina e eosina. Os peixes expostos aos tratamentos B, C e D apresentaram menor peso e comprimento (P<0,05) quando comparados com o tratamento controle, sendo os matrinxãs do tratamento C os mais afetados. O consumo de ração e a sobrevivência apresentaram diferenças a partir do dia 150 no tratamento D. Foi observado o acúmulo de AFB1 no fígado em função do aumento da concentração da toxina na ração. No tratamento D, foram observados resíduos a partir do dia 30, com valores entre 0,17 e 0,62 mg AFB1/kg. AST, FA, PT, ALB e GLOB, apresentaram alterações muito discretas, o que dificultou a identificação de danos hepáticos ou afecções à funcionalidade do fígado. A exposição à AFB1 causou degeneração gordurosa moderada e severa, degeneração hidrópica, morte celular ou células em processo de morte e desorganização do arranjo cordonal. Conclui-se que matrinxã sob condições experimentais não representa risco à saúde do consumidor, no entanto, é uma espécie sensível aos efeitos adversos das aflatoxinas. / The deposition of aflatoxins in fish is residual and cumulative, besides causing adverse nonlethal effects on weight, size, feed consumption and survival, establishing wide differences in sensitivity and metabolism among species. The present work aims to evaluate the transfer of aflatoxins from the feed to matrinxã (Brycon cephalus) and the influence on biometric, biochemical and histopathological parameters. The aflatoxins were incorporated into the feed by the method of immersion in methanol, obtaining the following treatments: A. Control - feed without toxin; B. Feed + 10 &micro;g AFB1/kg; C. Feed + 20 &micro;g AFB1/kg and D. Feed + 50 &micro;g AFB1/kg. Aflatoxins were quantified by high performance liquid chromatography (HPLC) in the liver and muscle of matrinxã. performance based on weight, length, survival rate and daily feed intake was evaluated. Blood samples were collected to determine the serum activity of aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (AP), total proteins (PT), albumin (ALB) and globulin (GLOB). For histological observation, liver fragments were collected and processed in paraffin followed by hematoxylin and eosin staining. The fish exposed to treatments B, C and D presented lower weight and length (P<0.05) when compared with the control treatment, and the matrinxãs of treatment C were the most affected. Feed intake and survival showed differences from day 150 in treatment D. AFB1 accumulation was observed in the liver as the toxin concentration in the diet increased. In treatment D, residues were observed from day 30 with values between 0.17 and 0.62 mg AFB1/kg. AST, AF, PT, ALB and GLOB presented very discrete alterations, making it difficult to identify liver damage or liver function disorders. Exposure to AFB1 caused moderate and severe fatty degeneration, hydropic degeneration, cell death or cells in the process of death and disorganization of the cordial arrangement. Concludes that matrinxã under experimental conditions does not pose a risk to consumer health, however, is a susceptible species to the adverse effects of aflatoxins.

Com a intenção de estabelecer métodos físico-químicos como uma alternativa ao bioensaio in vivo para determinação de atividade biológica, o conteúdo de hFSH, hTSH e hLH de diferentes preparações, nativas e recombinantes, foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e comparado ao dado obtido pelo clássico bioensaio in vivo em camundongos ou ratos (BA). Para estes hormônios foi encontrada uma relação linear entre os dois métodos: hFSH BAUI = 0,9925 RP-HPLCUI - 1,3165, r = 0,9371, p < 0,001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0,9790 RP-HPLC&mu;g - 0,052, r = 0,8725 , p < 0,001, n = 14; hLH BAUI = 0,8771 RP-HPLCUI + 12,41; r = 0,9786, p < 0,01, n = 5. Para outras nove preparações de hFSH e onze preparações de hTSH foi determinada a diferença média (d) entre a bioatividade predita pela RP-HPLC através destas equações e da média das bioatividades obtidas com os dois métodos. Para o hLH não foi possível determinar esta diferença em virtude das poucas amostras disponíveis. No caso do hFSH, d ± DP = -2,11 ± 3,49 % sendo a precisão de 1,16% e no caso do hTSH, d ± DP = -2,01 ± 5,56 % com precisão de 1,68%. Amostras parcialmente alteradas apresentaram diferentes graus de atividade de hFSH, hTSH e hLH que puderam ser preditas por RP-HPLC com uma aceitável concordância com os bioensaios in vivo. Estes resultados demonstraram que o emprego de um ensaio físico-químico sem o uso de animais, tal como a RP-HPLC, é uma alternativa viável ao uso do bioensaio in vivo para a determinação da potência de hFSH e hTSH, reduzindo assim o número de animais em geral utilizados para assegurar a qualidade e eficácia de um produto farmacêutico. / With the intention of setting up physico-chemical methods as an alternative to in vivo bioassay for determining biological activity, the hFSH, hTSH and hLH content of native and recombinant preparations was determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and compared with the data obtained by the classical mouse or rat in vivo bioassays (BA). A linear relationship between the two methods was found for these hormones: hFSH BAIU = 0.9925 RP-HPLCIU 1.3165, r = 0.9371, p < 0.001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0.9790 RP-HPLC&mu;g - 0.052, r = 0.8725, p < 0.001, n = 14; hLH BAIU = 0.8771 RP-HPLCIU + 12.41, r = 0.9786, p < 0.01, n = 5. For nine other hFSH and eleven hTSH preparations, the mean difference (d) between the bioactivity predicted from RP-HPLC data via these equations and the mean of the bioactivities obtained with the two methods was as follows. For hLH this difference could not be estimated due to lack of different samples. In the case of hFSH, d ± SD = -2.11 ± 3.49% with a precision of 1.16% and in the case of hTSH, d ± SD = -2.01 ± 5.56 %, with precision of 1.68%. Partly-degraded hFSH, hTSH and hLH samples presented different activity degrees that could be predicted by RP-HPLC, with an acceptable agreement with the in vivo bioassays. These results demonstrate that the employment of a non-animal physico-chemical assay, such as RP-HPLC, is a viable alternative to the use of an in vivo bioassay for hFSH and hTSH potency determination, thus reducing the number of animals currently used for assuring quality and efficacy of a pharmaceutical product.

Com a intenção de estabelecer métodos físico-químicos como uma alternativa ao bioensaio in vivo para determinação de atividade biológica, o conteúdo de hFSH, hTSH e hLH de diferentes preparações, nativas e recombinantes, foi determinado por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) e comparado ao dado obtido pelo clássico bioensaio in vivo em camundongos ou ratos (BA). Para estes hormônios foi encontrada uma relação linear entre os dois métodos: hFSH BAUI = 0,9925 RP-HPLCUI - 1,3165, r = 0,9371, p < 0,001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0,9790 RP-HPLC&mu;g - 0,052, r = 0,8725 , p < 0,001, n = 14; hLH BAUI = 0,8771 RP-HPLCUI + 12,41; r = 0,9786, p < 0,01, n = 5. Para outras nove preparações de hFSH e onze preparações de hTSH foi determinada a diferença média (d) entre a bioatividade predita pela RP-HPLC através destas equações e da média das bioatividades obtidas com os dois métodos. Para o hLH não foi possível determinar esta diferença em virtude das poucas amostras disponíveis. No caso do hFSH, d ± DP = -2,11 ± 3,49 % sendo a precisão de 1,16% e no caso do hTSH, d ± DP = -2,01 ± 5,56 % com precisão de 1,68%. Amostras parcialmente alteradas apresentaram diferentes graus de atividade de hFSH, hTSH e hLH que puderam ser preditas por RP-HPLC com uma aceitável concordância com os bioensaios in vivo. Estes resultados demonstraram que o emprego de um ensaio físico-químico sem o uso de animais, tal como a RP-HPLC, é uma alternativa viável ao uso do bioensaio in vivo para a determinação da potência de hFSH e hTSH, reduzindo assim o número de animais em geral utilizados para assegurar a qualidade e eficácia de um produto farmacêutico. / With the intention of setting up physico-chemical methods as an alternative to in vivo bioassay for determining biological activity, the hFSH, hTSH and hLH content of native and recombinant preparations was determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) and compared with the data obtained by the classical mouse or rat in vivo bioassays (BA). A linear relationship between the two methods was found for these hormones: hFSH BAIU = 0.9925 RP-HPLCIU 1.3165, r = 0.9371, p < 0.001, n = 24; hTSH BA&mu;g = 0.9790 RP-HPLC&mu;g - 0.052, r = 0.8725, p < 0.001, n = 14; hLH BAIU = 0.8771 RP-HPLCIU + 12.41, r = 0.9786, p < 0.01, n = 5. For nine other hFSH and eleven hTSH preparations, the mean difference (d) between the bioactivity predicted from RP-HPLC data via these equations and the mean of the bioactivities obtained with the two methods was as follows. For hLH this difference could not be estimated due to lack of different samples. In the case of hFSH, d ± SD = -2.11 ± 3.49% with a precision of 1.16% and in the case of hTSH, d ± SD = -2.01 ± 5.56 %, with precision of 1.68%. Partly-degraded hFSH, hTSH and hLH samples presented different activity degrees that could be predicted by RP-HPLC, with an acceptable agreement with the in vivo bioassays. These results demonstrate that the employment of a non-animal physico-chemical assay, such as RP-HPLC, is a viable alternative to the use of an in vivo bioassay for hFSH and hTSH potency determination, thus reducing the number of animals currently used for assuring quality and efficacy of a pharmaceutical product.

Esponjas do gênero Dysidea (Ordem: Dictyoceratida) caracterizam-se por apresentarem grande diversidade de metabólitos secundários, muitos dos quais apresentam potentes atividades biológicas. Este trabalho descreve o estudo de duas amostras de esponjas da espécie Dysidea robusta, DR1 e DR2, coletadas no litoral da Bahia em 1999. Tal estudo consistiu no fracionamento das amostras, nas análises de seus extratos brutos por LC-MS e técnicas de RMN- mono e bidimensionais. Dentre os extratos de DR1, a fração DR1-EP-5A obtida do extrato éter de petróleo apresentou uma mistura de três ceramidas saturadas (22, 23 e 24). Já da amostra DR2, as frações do extrato aquoso DR2-AQ-6B e DR2-AQ-6D mostraram ser constituídas por derivados do ácido pirodisinóico (18, 19, 20 e 21). Com exceção do ácido pirodisinóico (18), os demais compostos isolados ainda não foram relatados na literatura. / Sponges of the genus Dysidea (Order: Dyctioceratida) are characterized as sources of several biologically active secondary metabolites. This work describes the study of two samples of D.robusta, DR1 and DR2, both collected at the Bahia state coastline, in 1999. The investigation aimed the crude extract fractionation and analysis by LC-MS and by 1D and 2D NMR techniques. Among the extracts DR1, the fraction DR1-EP-5A obtained from the petroleum ether extract showed a mixture of three saturated ceramides, represented by 22, 23 and 24. From the DR2 sample, the fractions obtained from the aqueous extract DR2-AQ-6B and -6D presented pirodisinoic acid derivates 18, 19, 20 and 21. Except for pyrodisinoic acid (18), all other isolated compounds haven´t been reported in the literature yet.

O objetivo principal deste trabalho foi avaliar o desempenho do biorreator anaeróbio horizontal de leito fixo (RAHLF) na degradação de aldicarbe em condições anaeróbias. Foram avaliados três níveis de oxidação: metanogênico, sulfetogênico e desnitrificante. Inicialmente foi desenvolvido o método de detecção de aldicarbe e metabólitos por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para amostras aquosas sem pré-tratamento. A validação por procedimentos estatísticos confirmou a viabilidade do mesmo. O efeito do aumento da concentração de aldicarbe no desempenho dos reatores foi avaliado pelo emprego das concentrações de 5, 10, 20, 30 e 40 mg/L de aldicarbe extraído do produto comercial. Os reatores foram submetidos ao tempo de detenção hidráulica de 24 horas. As melhores eficiências de remoção foram obtidas nas concentrações de 5 e 10 mg/L: 93,2 e 88,9% (metanogênico), 90,5 e 83,2% (sulfetogênico) e 88,0 e 94,3% (desnitrificante), respectivamente. De 20 a 40 mg/L, o aumento da concentração afluente de aldicarbe causou redução da eficiência de remoção em todos os níveis de oxidação avaliados. Os reatores metanogênico e sulfetogênico tiveram desempenho semelhante em todas as concentrações avaliadas, enquanto que o reator desnitrificante não foi adequado para concentrações superiores a 10 mg/L. Nos ensaios com reatores diferenciais na concentração de aldicarbe de 10 mg/L, verificou-se que, em condições metanogênicas, não houve influência significativa da resistência à transferência de massa externa e interna na velocidade global de conversão de aldicarbe. Nestas condições, os parâmetros cinéticos aparentes corresponderam aos parâmetros cinéticos intrínsecos. A constante cinética de 1ª ordem (k1), validada por meio do Teste F, foi de 1,46 \'+ OU -\' 0,09·\'10 POT.-5\'·L/mgSVT.h (r2=0,994 \'+ OU -\' 0,001). As análises de biologia molecular para o Domínio Bacteria constataram predominância de Chloroflexi e Epsilon proteobacterium. No Domínio Archaea houve predominância de Methanosaeta. / A bench-scale horizontal-flow anaerobic mmobilized biomass (HAIB) bioreactor was assayed aiming to verify its potential use for aldicarb degradation. Three levels of oxidation were evaluated: methanogenic, sulfidogenic and denitrifying conditions. An HPLC method for the determination of aldicarb, aldicarb sulfoxide and aldicarb sulfone in liquid samples without pretreatment was developed and validated. The effects of increasing aldicarb concentration were evaluated at 5, 10, 20, 30 and 40 mg/L, extracted from the commercial product. The bioreactors were operated at a constant hydraulic detention time of 24 hours and 30°C. The best-removal efficiencies were obtained at the concentrations of 5 and 10 mg/L: 93.2 and 88.9% (methanogenic), 90.5 and 83.2% (sulfidogenic) e 88.0 and 94.3% (denitrifying), respectively. From 20 to 40 mg/L, the increase at the concentration of aldicarb caused reduction in the efficiency of removal in all levels of oxidation evaluated. The methanogenic and sulfidogenic bioreactors had similar performance, while the denitrifying bioreactor was not appropriate for concentrations above 10 mg/L. In the assays with differential reactors at the aldicarb concentration of 10 mg/L, the external and internal mass transfer resistance did not affect the overall substrate utilization rates. Thus, in these conditions, the apparent kinetic parameters corresponded to the intrinsic kinetic parameters. The first order rate constant (k1), validated through F-test, was 1.46 \'+ OU -\' 0.09·\'10 POT.-5\'·L/mgSVT.h (r2=0.994 \'+ OU -\' 0.001). The analysis of molecular biology for the Bacteria Domain showed predominance of Chloroflexi and Epsilon proteobacterium. In the Archaea Domain the predominant microrganism was Methanosaeta.

Os praguicidas podem ser responsáveis por intoxicações exógenas intencionais ou não intencionais, tanto em seres humanos como em animais, em virtude de sua ampla toxicidade e fácil obtenção do produto, nem sempre por vias legais. O carbofurano é um praguicida carbamato amplamente utilizado no Brasil, como inseticida e nematicida, para o controle de pragas agrícolas; é comercializado na forma de grânulos, vulgarmente conhecido como &ldquo;chumbinho&rdquo;. Esse praguicida em animais superiores inibe a enzima acetilcolinesterase, promovendo efeitos tóxicos que podem levar a óbito. Considerando que o carbofurano poderia estar implicado com quadros intoxicações exógenas de animais, no presente estudo se propôs desenvolver e validar um método analítico para detectar e/ou quantificar esse praguicida e seu metabólito, 3-hiroxicarbofurano, em matrizes biológicas de diferentes espécies animais por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD), a fim de utilizá-lo no Laboratório de Diagnóstico Toxicológico (LADTOX) do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). Para desenvolver esse método foram utilizadas amostras biológicas proveniente de fragmentos de, no mínimo, seis animais diferentes, de espécies distintas (cão, gato, porco, boi, rato, camundongo e ave), isentas de suspeita de intoxicação. Realizou-se a fortificação dessas amostras biológicas, previamente homogeneizadas, com soluções contendo o praguicida e seu metabolito, 3-hidroxicarbofurano, em 6 níveis de fortificação que variaram de 6,25 a 100 &micro;g/mL. Avaliaram-se os seguintes parâmetros para validação do método: seletividade, efeito matriz, precisão, exatidão, curva de calibração e efeito residual, limite de detecção (LD) e limite inferior de quantificação (LIQ). Para estabelecer a seletividade do método, verificou-se as respostas de picos interferentes próximo ao tempo de retenção dos analitos, as quais foram inferiores a 20% da resposta do analito nas amostras do LIQ. Quanto ao efeito matriz, não houve interferência relevante entre as matrizes analisadas. Em relação a precisão e exatidão do método, foi possível observar que o coeficiente de variação (CV) e o erro padrão relativo (EPR) não excederam ao limite máximo de 15%. Considerando a curva de calibração, o coeficiente de correlação (r2) apresentou valores iguais ou superiores que 0,99 nas diferentes matrizes para o carbofurano, enquanto para o 3-hidroxicarbofurano duas matrizes (fígado e conteúdo estomacal) apresentaram o valor de 0,98 e as demais superior a 0,99. A extração líquido-líquido forneceu valores de recuperação entre 74,29 a 100,1% para o carbofurano e entre 64,72 a 100,61% para o 3-hidroxicarbofurano, sendo o LIQ de 6,25 &micro;g/mL. Conclui-se que o método se mostrou adequado para identificar e quantificar o carbofurano e seu metabólito em amostras biológicas, apresentando sensibilidade e seletividade adequadas, e os parâmetros de validação encontram-se de acordo com os limites sugeridos para validação de métodos bioanaliticos, sendo, assim, implantado no LADTOX / Pesticides are responsible for intentional or unintentional exogenous poisoning, in both humans and animals, because of their broad toxicity and prompt availability, not always legally. Carbofuran is a carbamate pesticide widely used in Brazil as an insecticide and nematicide for the control of agricultural pests. It is marketed in the form of beads, commonly known as &quot;pellet&quot;. This pesticide inhibits acetylcholinesterase enzyme on higher animals, promoting toxic effects, which can lead to death. Considering that carbofuran could be implicated in cases of exogenous poisoning of animals, in the present study we aimed to develop and validate an analytical method for detecting and/or quantifying this pesticide and its metabolite, 3-hiroxicarbofuran, in biological matrices of different animal species by high performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD) in order to use it in the Toxicology Diagnostics Laboratory (LADTOX) of the Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science (FMVZ), University of São Paulo (USP). To develop this method biological samples obtained from fragments of at least six different animals of different species (dog, cat, pig, ox, rat, mouse and bird), free from suspicion of poisoning. Biological samples were fortified with previously homogenized solutions containing the pesticide and its metabolite, 3-hidroxicarbofurano, in 6 fortification levels ranging from 6.25 to 100 &micro;g/mL We evaluated the following parameters for method validation: selectivity, matrix effects, precision, accuracy, calibration curve and residual effect, limit of detection (LOD) and lower limit of quantitation (LLQ). To establish selectivity of the method, we verified the responses of interfering peaks near the retention times of analytes, which were less than 20% of the analyte response in LLQ samples. As to matrix effects, there was no significant interference between the matrices analyzed. Regarding the precision and accuracy of the method, it was observed that the coefficient of variation (CV) and the relative standard error (RSE) did not exceed the ceiling of 15%. In regard to the calibration curve, the correlation coefficient (r2) presented values that equal or exceed 0.99 in different arrays to carbofuran, while for the 3-hidroxicarbofuran two arrays - liver and stomach contents - had a value of 0.98 while the remaining matrices 0,99. The liquid-liquid extraction recovery values varied between 74.29 to 100.1% for carbofuran and between 64.72 to 100.61% for 3-hidroxicarbofuran, and LOQ of 6.25 &micro;g/ml. We concluded that the method was adequate to identify and quantify carbofuran and its metabolite in biological samples, with adequate sensitivity and selectivity, and the validation parameters are in accordance to the suggested limits for validation of bioanalytical methods, and, thus implanted in LADTOX

Introdução e Objetivos: A circulação extracorpórea (CEC) pode alterar a cinética de fármacos, inclusive dos antibióticos. O objetivo deste estudo foi avaliar influência da CEC sobre a farmacocinética da cefuroxima e verificar se o esquema posológico proposto: 1, 5g em bolus, seguido por três bolus de 750 mg 6/6 horas por 24 horas, mantém concentrações plasmáticas adequadas em pacientes submetidos à revascularização do miocárdio (RM). Método: Foi realizado estudo prospectivo observacional com grupo controle comparando 10 pacientes submetidos à RM com CEC e 9 pacientes submetidos à RM sem CEC (Registro Clincal trials: NCT0122882). Amostras sanguineas foram coletadas sequencialmente após cada dose de antibiótico e analisadas por meio do método de cromatografia líquida de alta pressão (HPLC). Análise de variância (ANOVA) foi utilizada para a comparação das concentrações plasmáticas e Log-rank para comparar as curvas que avaliaram o tempo, após a administração da cefuroxima, para que fossem atingidas concentrações abaixo de 16 g/mL (quatro vezes a MIC- mínima inhibitory concentration); considerando p< 0,05. Resultados: A CEC com tempo médio de 59,7 min 21,1 minutos não alterou a farmacocinética ou as concentrações plasmáticas da cefuroxima. O clearance médio dp (mL/ Kg/ min) e a mediana da concentração mínima (mg/ dL) do grupo RM com CEC versus RM sem CEC foram 1,7 0,7 versus 1,6 0,6 (p= 0,67) e 6,1 versus 5,7 (p= 0,77), respectivamente. Ambos os grupos apresentaram diminuição nas concentrações plasmáticas influenciadas somente pelo tempo, após cada bolus de cefuroxima (p< 0,001). Concentrações acima de quatro vezes a MIC foram mantidas por três horas, por todos os pacientes, porém, após seis horas do primeiro bolus a probabilidade de manutenção das mesmas concentrações foi de 0,2 para o grupo RM com CEC e de 0,44 para o grupo RM sem CEC, p= 0,867. Após os demais bolus concentrações abaixo de 16 g/mL foram atingidas antes de três horas. Conclusão: A CEC não influenciou as concentrações plasmáticas ou a farmacocinética da cefuroxima. Os resultados da farmacocinética devem ser considerados para a escolha de um melhor esquema posológico / Background and Objectives: Cardiopulmonary bypass (CPB) can alter the kinetic of drugs, including antibiotics. The aim of this study was evaluation of the CPB influence on the plasma concentrations and pharmacokinetics of cefuroxime and assess whether the dosing regimen 1.5 g dose, followed by 750 mg 6/6h for 24h is adequate for antibiotic prophylaxis. Methods: A prospective controlled observational study compared 10 patients undergoing surgery with CPB and 9 submitted to off-pump surgery, (Clinical trials identifier: NCT0122882). After each cefuroxime dose, blood samples were sequentially collected and analyzed using high-efficiency chromatography (HPLC). Plasma concentrations were compared using variance analysis and log-rank test was employed to evaluate the differences between curves that quantified the fraction of patients with a remaining plasma concentration above 16 mg/L within 6 h after each bolus; considering P < 0.05 significant. Results: After each cefuroxime bolus, both groups presented a significant decrease in plasma concentration over time (p< 0.001). Mean CPB time of 59.7 ± 21.1 min did not change cefuroxime pharmacokinetics or plasma concentrations. The mean clearance ± SD (mL/kg/min) and median of minimum concentration (mg/dL) of the CPB group versus the off-pump group were 1.7 ± 0.7 versus 1.6 ± 0.6 (p= 0.67) and 6.1 versus 5.7 (p= 0.77), respectively. Up to 3 h, but not after 6 h, following the first bolus, all patients had plasma concentrations above 16 mg/L (CPB group= 0.2 and off-pump group= 0.44, p=0.867). After another bolus, concentrations below 16 mg/dL were reached before 3 h. Conclusions: CPB does not influence cefuroxime plasma concentration, but pharmacokinetic data should be considered when choosing intervals between doses

Os ovinos domésticos (Ovis aries) estão entre os primeiros animais domesticados para lã, leite, carne e pele. Novas biotecnologias de avaliação e manipulação do sêmen estão sendo estudadas para a elucidação de causas de infertilidade em machos. Sabe-se que danos causados na membrana espermática diminuem a qualidade seminal. Considerando que as membranas são compostas por uma bicamada de fosfolipídios e que a peroxidação lipídica é uma das principais causadoras de lesão celular, explica-se a importância de estudos sobre os lipídios constituintes do sêmen. A peroxidação lipídica é conseqüente da reação entre os lipídios e as espécies reativas de oxigênio que são fisiologicamente produzidas pelo metabolismo celular. Esse quadro pode ser diminuído pela presença de antioxidantes no sêmen, como a vitamina E. O sêmen foi coletado através da técnica da vagina artificial e após análise imediata e mediata, foi centrifugado para a obtenção de duas frações: plasma seminal e pellet de espermatozóide. Ambas tiveram seus lipídios extraídos por dois métodos diferentes e foram qualificados e quantificados pela especificidade e sensibilidade da Cromatografia Liquida de Alta Eficiência e assim pudemos escolher qual o melhor processo de extração. A análise estatística dos dados foi realizada através do programa SAS for Windows. O AG saturado predominante no espermatozóide é o mirístico e o AG insaturado predominante é o DHA, em ambas as extrações. No plasma seminal, nos dois métodos, o AG saturado que prevalece é o palmítico e o insaturado é o oléico. Dentre os métodos Folch (1957) modificados estudados, o que obtivemos melhores resultados na identificação e quantificação dos AG foi a extração 1. / The domestic sheep (Ovis Aries) is one of the first domesticated animals for wool, milk and meat production. The study of technologies for assessment and handling of semen are in course for the elucidation of male infertility causes. It is well known that damage to the sperm membrane decreases semen quality. Considering that the membranes are composed by a phospholipid bilayer, lipid peroxidation is a major cause of cell damage and explains the importance of studies on lipid components of semen. Lipid peroxidation is a consequence of the reaction between lipids and reactive oxygen species that are physiologically produced by cellular metabolism. This event may be reduced in the presence of antioxidants in semen, such as tocopherol. Semen was collected by artificial vagina and, after sperm evaluation, samples were centrifuged resulting in two fractions: seminal plasma and spermatozoa pellet. Both had their lipids extracted by two different methods and were qualified and quantified for the sensitivity and specificity to the high performance liquid chromatography in order to determine the most efficient extraction technique. Statistical analysis was performed using SAS software for Windows. The predominant saturated fatty acid in sperm is the myristic and the most abundant insaturated fatty acid in both extractions was DHA. In seminal plasma, in both methods, the prevailing fatty acid is the saturated palmitic and the unsaturated oleic. Among the methods evaluated, we obtained the best results of identification and quantification of fatty acids in extraction 1.

Os praguicidas podem ser responsáveis por intoxicações exógenas intencionais ou não intencionais, tanto em seres humanos como em animais, em virtude de sua ampla toxicidade e fácil obtenção do produto, nem sempre por vias legais. O carbofurano é um praguicida carbamato amplamente utilizado no Brasil, como inseticida e nematicida, para o controle de pragas agrícolas; é comercializado na forma de grânulos, vulgarmente conhecido como &ldquo;chumbinho&rdquo;. Esse praguicida em animais superiores inibe a enzima acetilcolinesterase, promovendo efeitos tóxicos que podem levar a óbito. Considerando que o carbofurano poderia estar implicado com quadros intoxicações exógenas de animais, no presente estudo se propôs desenvolver e validar um método analítico para detectar e/ou quantificar esse praguicida e seu metabólito, 3-hiroxicarbofurano, em matrizes biológicas de diferentes espécies animais por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD), a fim de utilizá-lo no Laboratório de Diagnóstico Toxicológico (LADTOX) do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). Para desenvolver esse método foram utilizadas amostras biológicas proveniente de fragmentos de, no mínimo, seis animais diferentes, de espécies distintas (cão, gato, porco, boi, rato, camundongo e ave), isentas de suspeita de intoxicação. Realizou-se a fortificação dessas amostras biológicas, previamente homogeneizadas, com soluções contendo o praguicida e seu metabolito, 3-hidroxicarbofurano, em 6 níveis de fortificação que variaram de 6,25 a 100 &micro;g/mL. Avaliaram-se os seguintes parâmetros para validação do método: seletividade, efeito matriz, precisão, exatidão, curva de calibração e efeito residual, limite de detecção (LD) e limite inferior de quantificação (LIQ). Para estabelecer a seletividade do método, verificou-se as respostas de picos interferentes próximo ao tempo de retenção dos analitos, as quais foram inferiores a 20% da resposta do analito nas amostras do LIQ. Quanto ao efeito matriz, não houve interferência relevante entre as matrizes analisadas. Em relação a precisão e exatidão do método, foi possível observar que o coeficiente de variação (CV) e o erro padrão relativo (EPR) não excederam ao limite máximo de 15%. Considerando a curva de calibração, o coeficiente de correlação (r2) apresentou valores iguais ou superiores que 0,99 nas diferentes matrizes para o carbofurano, enquanto para o 3-hidroxicarbofurano duas matrizes (fígado e conteúdo estomacal) apresentaram o valor de 0,98 e as demais superior a 0,99. A extração líquido-líquido forneceu valores de recuperação entre 74,29 a 100,1% para o carbofurano e entre 64,72 a 100,61% para o 3-hidroxicarbofurano, sendo o LIQ de 6,25 &micro;g/mL. Conclui-se que o método se mostrou adequado para identificar e quantificar o carbofurano e seu metabólito em amostras biológicas, apresentando sensibilidade e seletividade adequadas, e os parâmetros de validação encontram-se de acordo com os limites sugeridos para validação de métodos bioanaliticos, sendo, assim, implantado no LADTOX / Pesticides are responsible for intentional or unintentional exogenous poisoning, in both humans and animals, because of their broad toxicity and prompt availability, not always legally. Carbofuran is a carbamate pesticide widely used in Brazil as an insecticide and nematicide for the control of agricultural pests. It is marketed in the form of beads, commonly known as &quot;pellet&quot;. This pesticide inhibits acetylcholinesterase enzyme on higher animals, promoting toxic effects, which can lead to death. Considering that carbofuran could be implicated in cases of exogenous poisoning of animals, in the present study we aimed to develop and validate an analytical method for detecting and/or quantifying this pesticide and its metabolite, 3-hiroxicarbofuran, in biological matrices of different animal species by high performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD) in order to use it in the Toxicology Diagnostics Laboratory (LADTOX) of the Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science (FMVZ), University of São Paulo (USP). To develop this method biological samples obtained from fragments of at least six different animals of different species (dog, cat, pig, ox, rat, mouse and bird), free from suspicion of poisoning. Biological samples were fortified with previously homogenized solutions containing the pesticide and its metabolite, 3-hidroxicarbofurano, in 6 fortification levels ranging from 6.25 to 100 &micro;g/mL We evaluated the following parameters for method validation: selectivity, matrix effects, precision, accuracy, calibration curve and residual effect, limit of detection (LOD) and lower limit of quantitation (LLQ). To establish selectivity of the method, we verified the responses of interfering peaks near the retention times of analytes, which were less than 20% of the analyte response in LLQ samples. As to matrix effects, there was no significant interference between the matrices analyzed. Regarding the precision and accuracy of the method, it was observed that the coefficient of variation (CV) and the relative standard error (RSE) did not exceed the ceiling of 15%. In regard to the calibration curve, the correlation coefficient (r2) presented values that equal or exceed 0.99 in different arrays to carbofuran, while for the 3-hidroxicarbofuran two arrays - liver and stomach contents - had a value of 0.98 while the remaining matrices 0,99. The liquid-liquid extraction recovery values varied between 74.29 to 100.1% for carbofuran and between 64.72 to 100.61% for 3-hidroxicarbofuran, and LOQ of 6.25 &micro;g/ml. We concluded that the method was adequate to identify and quantify carbofuran and its metabolite in biological samples, with adequate sensitivity and selectivity, and the validation parameters are in accordance to the suggested limits for validation of bioanalytical methods, and, thus implanted in LADTOX