published_or_final_version / Microbiology / Master / Master of Medical Sciences

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2003. / Härtill 5 uppsatser.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-14Bitstream added on 2014-08-13T18:00:47Z : No. of bitstreams: 1 000753373.pdf: 543622 bytes, checksum: 568807a679f23679d4c54335db59a4d0 (MD5) / O reaparecimento de manifestações clínicas após tratamento eficaz, neste texto identificado como recaída, tem sido pouco avaliado. Assim, foram estudados os casos de recaída observados em 400 pacientes, 93 com a forma aguda/subaguda (FA) e 307 com a crônica (FC), que já tinham apresentado cura aparente, isto é, com cura clínica, normalização da velocidade de hemossedimentação e cura sorológica – caracterizada pela presença de teste negativo à imunodifusão dupla em gel de agar por dois anos. Vinte e um (5,2%) desses pacientes apresentaram recaídas da doença. Três (14,3%) eram do sexo feminino e 18 (85,7%) do masculino, com razão de masculinidade de 6:1. Dos 21 pacientes com recaída, 15 (4,8%) apresentavam a FC e 6 (6,4%) a FA (p>0,05). As reativações ocorreram de 46 a 296 meses após introdução do tratamento (Md=96) e de 4 a 267 meses (Md= 60) após sua suspensão. As formas clínicas não diferiram quanto aos tempos decorridos até a reativação. O diagnóstico sorológico de recaída pela IDD foi feito em apenas 45% dos casos, o que levou à avaliação de outros testes para esse fim. Assim, foi realizado o enzimaimunoensaio (ELISA) e o immunoblotting (IB). A sensibilidade da IDD e do ELISA / 0,710 foi 76,1% em amostras de soro obtidos no pré-tratamento (p=0,25). No diagnóstico de recaída, a sensibilidade da IDD foi menor que no pré-tratamento (80% vs 45%; p=0,017), enquanto o ELISA / 0,710 foi igual (80% vs 65%;p=0,125). A sensibilidade do IB para diagnóstico de recaída foi de 12,5% na identificação da gp70 e 43,8% na da gp43 (p<0,05). A avaliação da acurácia do teste ELISA revelou sensibilidade de 96%, especificidade de 95%, valor preditivo positivo de 95%, valor preditivo negativo de 96% e acurácia de 95,5% quando o cut-off utilizado foi a densidade óptica de 0,710, obtido em função da construção da receiver operator characteristc – ROC, para um intervalo de confiança ... / The reappearance of clinical manifestations after efficacious treatment, here identified as relapse, has been rarely evaluated. Thus, the cases of relapse observed in a cohort of 400 patients, 93 with acute/subacute form (AF) and 307 with chronic form (CF) were studied. They had already reached apparent cure, characterized as clinical cure, normalization of the erythrocyte sedimentation rate and serological cure, with a negative double agar gel immunodiffusion test (DID) for two years after antifungal discontinuation. Twenty-one (5.2%) of these patients had relapses. Three (14.3%) were female and 18 (85.7%) were male, with a male:female ratio of 6:1. Of the 21 relapsed patients, 15 (4.8%) presented the CF and 6 (6.4%) the AF (p>0.05). The relapse occurred 46-296 months after introduction of the treatment (Md=8 yrs) and from 4 to 267 months (Md=5 yrs) after withdrawal. Clinical forms did not differ regarding to the time elapsed until relapse. DID was positive in only 45% of the relapsed cases, which led to the evaluation of other tests to diagnose this condition. Thus, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was standardized and the cut off was determined using the curve receiver operator characteristic – ROC and confidence intervals of 95% and 99%, showing optical densities of 0.710 and 0.850, respectively. Then, serological evaluation was performed using ELISA/0.710 and ELISA/0.850, and immunoblotting identifying gp43 (IBgp43) and gp70 (IBgp70). ELISA 0.710 and DID showed the same sensitivity, 76.1%, in serum samples obtained before treatment (p=0.25). DID sensitivity was lower at relapse than before the initial treatment (45% vs 80%; p=0.017), whereas ELISA/0,710 was the same (65% vs 80%; p=0.125). IBgp70 showed a 12.5% and IBgp43 a 43.8% sensitivity for diagnosing relapse (p<0.05). ELISA/0.710 showed a 96% sensitivity, 95% specificity, 95% positive predictive value, 96% negative ...

The anterior cingulate cortex (ACC) is part of the cognitive and emotional brain circuitry that mediates social interaction. Imbalances between inhibitory, GABAergic neurons, and excitatory, glutamatergic neurons, in this region are essential to brain circuity during social responses and are thought to be involved with behaviors associated with autism spectrum disorder (ASD). Enriched cell populations of glutamatergic neurons, obtained through laser capture microdissection, were used for gene expression studies of GABAergic receptors (GABRA1, GABRA4, and GABBR1). Additionally, proteins that impact GABAergic synapses (Spinophilin, CPLX1, mTOR, IGF1R, PSD95, PARP1) were investigated using Western Blotting with punchdissected homogenate brain tissue from ACC and frontal cortical brain regions. No significant differences in gene expression nor protein were identified between ASD and control brain donors. Evidence of GABAergic synaptic pathology was not found; however, future studies of alternative GABAergic markers and increased study numbers are needed to confirm these findings in ASD human tissue.

Uma das causas da hipertensão está relacionada a alterações de núcleos autonômicos responsáveis pelo controle dos reflexos cardiovasculares, destacando-se o PVN, o NTS e o RVLM. A ANG II, atuando nestes núcleos, participa do controle da PA. Estudos in vitro, demonstraram uma via de sinalização da ANG II que envolve a ativação da PI3K e da Akt. Neste estudo avaliamos as diferenças na atividade da PI3K, através da quantificação da subunidade p85 (PI3K) e da p-Akt por meio de immunoblotting desses núcleos centrais de animais SHR, WKY e Wistar, além da interação da PI3K com os efeitos cardiovasculares da ANG II injetada no PVN de Wistar acordados. A expressão da p85 não diferiu entre os núcleos estudados. No entanto, a p-Akt estava 1,5x mais expressa no PVN de SHR. Ainda, o aumento da PAM promovido pela injeção de ANG II no PVN foi reduzido 5 min após a injeção do inibidor da PI3K, com recuperação da resposta 30 min mais tarde, sugerindo que a via da PI3K está mais ativa no PVN de animais SHR e que a interação das vias ANG II-PI3K está relacionada com a hipertensão. / One cause of the hypertension is associated to changes in autonomic nuclei that control the cardiovascular reflexes. Among these nuclei are PVN, NST and RVLM. The ANG II, acting in these nuclei, contributes to the control of the AP. In vitro studies had demonstrated a signaling pathway of the ANG II that involves the activation of PI3K and Akt. In the present study we evaluated the PI3K activity via expression of p85 (PI3K) and p-Akt, through the immunoblotting of these central nuclei of SHR, WKY and Wistar. Moreover, we evaluated the interaction of PI3K to the cardiovascular effects of ANG II injected into the PVN of awake Wistar. The p85 expression was not different at all autonomic nuclei studied. However, the p-Akt expression was 1.5x higher in the PVN of SHR. Besides, the increase in the MAP elicited by the injection of ANG II into the PVN was reduced 5 min after the blockade of the PI3K, and restored 30 min later, suggesting that PI3K pathway is more activate at the PVN level of SHR and that the interaction between ANG II-PI3K is related to hypertension.

O diagnóstico da infecção por ETEC é baseada na detecção dos seus principais fatores de virulência, as toxinas termo-lábil e termo-estável, através de métodos de biologia molecular ou imunossorológicos. A tecnologia de anticorpos recombinantes permite a obtenção de moléculas com baixo custo, afinidades e especificidades desejáveis, através da clonagem dos domínios variáveis das cadeias leve e pesada da imunoglobulina, fusionados a um ligante flexível que permite a correta interação entre os domínios e a preservação do sítio de ligação ao antígeno. Este estudo teve como objetivo a construção de um fragmento variável em cadeia única (scFv), a partir de hibridomas produtores de anticorpo monoclonal anti-LT, seguida da sua produção em células bacterianas. Um fragmento variável em cadeia única com 723 pb foi obtido, sendo expresso em cepa de Escherichia coli como uma proteína com peso molecular aparente de 30 kDa. Após purificação em cromatografia de afinidade a Ni2+ e renaturação, o scFvLT foi capaz de reconhecer a toxina LT por ELISA de captura e Immunodot, porém não foi capaz de reconhecer as subunidades da toxina LT, por Immunoblotting, nem de neutralizar sua atividade citopática em células adrenais Y1. / Heat-labile (LT) and heat-stable (ST) toxins are the main ETEC\'s virulence factors and infection diagnosis is based on their detection by molecular biology or immunoserological methods. The advances on antibody biotechnology provide alternatives to obtain low cost antibodies with desirable affinities and specificities by cloning immunoglobulin\'s heavy and light variable domains (HV and LV) as a single-chain fusion interspaced by a flexible linker, which allowing the correct interaction between the domains and preserving the antigen-binding site. In this study we aimed the construction of a scFv upon hybridoma cells that produce an anti-LT monoclonal antibody following its bacterial production. A single-chain fragment variable with 723 bp was obtained and expressed as a protein with apparent molecular weight of 30 kDa in Escherichia coli strain. The scFvLT recombinant antibody was submitted to metal affinity chromatography and refolding and was tested by immunoenzimatic assays. Refolded scFvLT was able to recognized LT toxin by capture ELISA and Immunodot. However, scFvLT wasnt able to recognize LT toxin subunits by Immunoblotting neither neutralize its activity in Y1 adrenal cells.

Thesis (M.S.)--West Virginia University, 2004 / Title from document title page. Document formatted into pages; contains ix, 49 p. : ill. (some col.). Includes abstract. Includes bibliographical references (p. 41-48).

Uma das causas da hipertensão está relacionada a alterações de núcleos autonômicos responsáveis pelo controle dos reflexos cardiovasculares, destacando-se o PVN, o NTS e o RVLM. A ANG II, atuando nestes núcleos, participa do controle da PA. Estudos in vitro, demonstraram uma via de sinalização da ANG II que envolve a ativação da PI3K e da Akt. Neste estudo avaliamos as diferenças na atividade da PI3K, através da quantificação da subunidade p85 (PI3K) e da p-Akt por meio de immunoblotting desses núcleos centrais de animais SHR, WKY e Wistar, além da interação da PI3K com os efeitos cardiovasculares da ANG II injetada no PVN de Wistar acordados. A expressão da p85 não diferiu entre os núcleos estudados. No entanto, a p-Akt estava 1,5x mais expressa no PVN de SHR. Ainda, o aumento da PAM promovido pela injeção de ANG II no PVN foi reduzido 5 min após a injeção do inibidor da PI3K, com recuperação da resposta 30 min mais tarde, sugerindo que a via da PI3K está mais ativa no PVN de animais SHR e que a interação das vias ANG II-PI3K está relacionada com a hipertensão. / One cause of the hypertension is associated to changes in autonomic nuclei that control the cardiovascular reflexes. Among these nuclei are PVN, NST and RVLM. The ANG II, acting in these nuclei, contributes to the control of the AP. In vitro studies had demonstrated a signaling pathway of the ANG II that involves the activation of PI3K and Akt. In the present study we evaluated the PI3K activity via expression of p85 (PI3K) and p-Akt, through the immunoblotting of these central nuclei of SHR, WKY and Wistar. Moreover, we evaluated the interaction of PI3K to the cardiovascular effects of ANG II injected into the PVN of awake Wistar. The p85 expression was not different at all autonomic nuclei studied. However, the p-Akt expression was 1.5x higher in the PVN of SHR. Besides, the increase in the MAP elicited by the injection of ANG II into the PVN was reduced 5 min after the blockade of the PI3K, and restored 30 min later, suggesting that PI3K pathway is more activate at the PVN level of SHR and that the interaction between ANG II-PI3K is related to hypertension.

O diagnóstico da infecção por ETEC é baseada na detecção dos seus principais fatores de virulência, as toxinas termo-lábil e termo-estável, através de métodos de biologia molecular ou imunossorológicos. A tecnologia de anticorpos recombinantes permite a obtenção de moléculas com baixo custo, afinidades e especificidades desejáveis, através da clonagem dos domínios variáveis das cadeias leve e pesada da imunoglobulina, fusionados a um ligante flexível que permite a correta interação entre os domínios e a preservação do sítio de ligação ao antígeno. Este estudo teve como objetivo a construção de um fragmento variável em cadeia única (scFv), a partir de hibridomas produtores de anticorpo monoclonal anti-LT, seguida da sua produção em células bacterianas. Um fragmento variável em cadeia única com 723 pb foi obtido, sendo expresso em cepa de Escherichia coli como uma proteína com peso molecular aparente de 30 kDa. Após purificação em cromatografia de afinidade a Ni2+ e renaturação, o scFvLT foi capaz de reconhecer a toxina LT por ELISA de captura e Immunodot, porém não foi capaz de reconhecer as subunidades da toxina LT, por Immunoblotting, nem de neutralizar sua atividade citopática em células adrenais Y1. / Heat-labile (LT) and heat-stable (ST) toxins are the main ETEC\'s virulence factors and infection diagnosis is based on their detection by molecular biology or immunoserological methods. The advances on antibody biotechnology provide alternatives to obtain low cost antibodies with desirable affinities and specificities by cloning immunoglobulin\'s heavy and light variable domains (HV and LV) as a single-chain fusion interspaced by a flexible linker, which allowing the correct interaction between the domains and preserving the antigen-binding site. In this study we aimed the construction of a scFv upon hybridoma cells that produce an anti-LT monoclonal antibody following its bacterial production. A single-chain fragment variable with 723 bp was obtained and expressed as a protein with apparent molecular weight of 30 kDa in Escherichia coli strain. The scFvLT recombinant antibody was submitted to metal affinity chromatography and refolding and was tested by immunoenzimatic assays. Refolded scFvLT was able to recognized LT toxin by capture ELISA and Immunodot. However, scFvLT wasnt able to recognize LT toxin subunits by Immunoblotting neither neutralize its activity in Y1 adrenal cells.

A diarréia por rotavírus tem sido umas das principais causas de mortalidade infantil. Pesquisas, que relatam a presença de IgA no leite e colostro humanos reativos com o rotavírus. Nosso objetivo foi avaliar a presença de anticorpos IgA anti-G3P[2] em amostras de leite e colostro e anti-G9P[8] em amostras de leite pela técnica de ELISA, verificar sua capacidade neutralizante e analisar a reatividade pelo Immunoblotting. Todas as amostras apresentaram anticorpos detectados pelo ELISA e neutralização do vírus G3P[2] e G9P[8]. Não foi observada correlação entre os títulos de ELISA e os neutralizantes para G3P[2], mas para o sorotipo G9P[8] foi possível estabelecer uma correlação significante. As amostras reconheceram frações do antígeno viral no ensaio de Immunoblotting, mas não foi possível estabelecer uma correlação entre altos títulos e alguma fração antigênica específica. Este trabalho fornece subsídios para avaliações das estratégias de vacinação. / The rotavirus diarrhea is one of the main causes of infant mortality. Studies have shown the presence of IgA in milk and colostrum reactive with human rotavirus. Our aim was to evaluate the presence of IgA anti-G3P[2] in milk and colostrum samples and anti-G9P[8] in milk ones, evaluate the IgA reactivity by ELISA and evaluate the IgA reactivity by immunoblotting. In addition, this work aimed to verify the neutralizing all titles of the samples. All of them had antibodies reactive with G3P[2] and G9P[8] and showed varied neutralization titles. There was a significant correlation between anti-G9P[8] IgA titers and the neutralizing ones, but the same was not observed for serotype G3P[2]. All samples recognized some viral antigenic fraction in immunoblotting test, but it was not possible establish a correlation between high antibodies levels and some specific antigenic fraction. This approach may be important for studies concerning vaccination strategies.